Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Тесты, критерии и методы ускоренной санитарно-бактериологической оценки репродукторных помещений животноводческих ферм и пути оптимизации в них микробиоценоза

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

ВСЕРОССИЙСКИЙ ОРДЕНА ДРУЖШ НАРОДОВ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ САНИТАРИИ, ШГИЕ11Ы И ЭКОЛОГИИ

РГ6 од

На правах рукописи

3

КАВРУК ЛЕОНИД СЕРГЕЕВИЧ

УДК 619:576.8+576.858+576.81-097.3

ТЕСТЫ .КЖГЕНМ И МЕТОД! УСКОРЕННОЙ САНИТАРНО-ЕАКТЕРИ0Л01ЖЕСК0Й ОЦЕНКИ РЕПРОДУКТОРШХ ПОМЕЩЕНИЙ ЖИВОТНОВОДЧЕСКИХ ФЕРМ И ПУТИ ОПТИМИЗАЦИИ В НИХ МИКРОБИОЦЕНОЗА

16.00.03 - Ветеринарная микробиология .вирусология, эпизоотология.микология и иммунология

ДИССЕРТАЦИЯ в форме научного доклада на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Москва - 1994

Работа выполнена в Московской ветеринарной академия им. к.И Скрябина и во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии.гигиены и экологии (ВНИИВСГЭ)

Научный консультант - доктор ветеринарных наук, академик РАСХН,профессор

~ЯИШ B.C. |

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,профессор КАРТАШОВА B.U. (ВНИИВСГЭ); доктор ветеринарных наук ШЕПЩЕИЧ ЭЛ. (ВИЗВ им. Я.Р.Коваленко доктор медицинских наук БАТУРО A.Q. (НИИВС им. И.И.Ыечншсова)

Ведущая организация - Всероссийский научно-исследовательски институт контроля,стандартизации в сертификации ветеринарных препаратов

Защита состоится " К¿Pf/.Л 1994 г. в /<?,&* чао. на заседании специализировашого совета Д.020.50.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной санита-гия.гигиены и экологии (I23G22, Москва,Звенигородское шоссе,д.5)

С диссертацией а форме научного доклада можно ознакомиться р библиотеке Всероссийского научш-исследовательского института рятвринарной санитария.гигиены и экологии.

Диссертация в форме научного доклада разослана "jf" 09 Д994

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

Л.П.Шменова

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТУ

I.I. Актуальность темы. Одной из причин снижения поголовья юта и производства мяса, молока и другой продукции животноводства i многих хозяйствах Яэссии является низкая сохранность молодняка i-за высокой заболеваемости и падежа новорожденных телят и пороет—сосунов от различных болезней и в первую очередь желудочно-ки-¡чных,которые имеют повсеместное распространение и наносят значимыми ущерб, особенно крупным животноводческим фермам и промш-знннм комплексам.

Многочисленные данные отечественных и зарубежных исследовате-зй (И.И.Архангельский,Н.В.Баданин,1960;В.И.Проданов,Р.Д.Ильинс-ш, 1964; О.С.Андреева, 1966; А.И.Улевдеев, 1968;Э.А.Светоч, 1969, Э72;Я.В.Коляхов и др.,1970;С.С.1^гельсон,1974;В.И.Леш>ков,В.А. знькова,1974;В.В.НаколБСкиа,1978;В.Н.Сюр11н,Н.В.!Сомит,1978;М.А. адоров,1980;Г.Ф.Короыыслов и др.,1960;В.В.Себряков,1980,1991;В.11. рбан.И.Л .Наймаяов, 1984 ¡В.Г.Скиоифий ,А.В.1Ьнтарь, 1986;П.11.Досто-вскнйД987;А.Н.Воронов,1989;Е.С.Воронин и др. ,1989;1.3.Гафаров, Э93;В.В.1уненков и др.,1993;ф.1утира,И.иарек и др.,1961; с.с.Gay, ^4iJ^.S»3kaH965,»9tOjR.Heindoa?f,1966s<}.Saiat-Aubert,l,.H.Va-ett,1966;H.W.Moon,1969;Р.Р1аЫс,1972|К.Е1м,1973 jM.Yoeta,1977;G. ала, 1983 iD.H.Snodgreea, 1983 !■*• Jeetin.P.Madec, 1986; J. D.Mackirmon, 989;W.Hall ,1989;J.Bouda, 1990 ) свидетельствуют о том,что в пре-бладашцеы большинстве случаев массовые желудочно-кишечные заболе-ания новорожденного молодняка имеют авфвкпронную лрироду, лротека-т в виде энзоотических вспышек и довольно часто в форме смешаи-ой яя^екции.обуслоалешюй 2-3 и более возбудителями болезни ,отно-ящимся к разнообразным группам микроорганизмов (бактериям,вирусам, яостридиям перфрийгенс.дрожжеподобным грибам рода Candida и пр).

Особое место в этиологии диарейных заболеваний новорожденных явотных занимает тах называемая "стойловая" условно-патогенная шкрофлора (представители родов EBcherichia.Cltrobexter.Proteue, ilebaiella.Peeudomonae.Clootrldiuai и др.) .которая В отлячив от юзбудитвлей "классических" инфекндй (сальмонеллеза.лептосгироза, пцура,чумы свиней и пр.) ежедневно поступает с экскрементами кли-шчески здорового маточного поголовья (животных-бактерионосите-юй) ,а при возникновении первых случаев болезни - с фекалиями бо-1ьного молодняка в репродукторныо помещения молочных и свиновод-шских ферм .где рождаются животные и проводится их выращивание в

z

перше надели жизни.

Возникновению заболеваний способствуют различные факторы,cbj заянне с несоблвдением технологических и ветеринарно-санитарных i бований воспроизводства стада .режимов содержания и кормления мол< няка.которые снижают иммунную резистентность новорожденных живот] и активизируют проявление патогенных свойств условно-патогенной i крофлоры.

Несмотря на обилие литературных данных,подтвервданцих значе] многих бактериальных агентов в этиологии диарейных заболеваний мс лодняка.роль некоторых представителей условно-патогенной микрофж ры,в частности Бнтеробактерий родов Edwardsiella,«organella, Prov: dfeacia,Yersinia, остается недостаточно изученной,как а место их i общей структуре возбудителей этих заболеваний. Остается открытым также и вопрос,насколько часто указанные бактерия встречаются в я вотноводчэских хозяйствах нашей страны и дужноли принимать их вс внимание при саяит^рио-бактериологичеокой оценке помещений молоч! в свиноводческих ферм.

Для предотвращения накопления в репродукторных помещениях вс будетелей диарейных заболеваний в заражения ет родившихся живота большое значение имеет регулярный саштарш-бактериологичеокий кс троль (мониторинг) этих помещений,основанный на использовании yci репных .доступных широкой практике методов ивдпкадаи наиболее часп возбудителей кишечных шфевдяй. Разработка таких методов как в К] теряй оценки санитарного состояния помещений для выращивания nose рожденных животных дает возможность своевременно выявлять утрожас мую для их здоровья эпизоотическую сатуацдо и проводить в случае необходимости дополнительные ветеринарно-сэлитарные и протпвоэпи; отическае мероприятия,профплаетаруадие вспышку диарея.

Акгуалыюй задачей вроблеш снижения заболеваемости колодня» диареей является разработка путей направленного регулирования мя-кробиоцэшза, опособных создавать в окружающей среде безопасный д> здоровья животных уровень у ело вда-патогенной микрофлоры и тем cm устранять риск возникновения вспышки мвачвой инфекция.

1.2. Обоснование внбооа объектов исследования.Важнейшим riei экологической системы.определяющим физиологическое состояние жив ных,особен*» молодняка .является внешняя среда,атепень благотлуч] которой зависит от разных факторов,в т.ч. количественного уровня биологических особенностей микрофлоры.циркулирующей на ферме.

Сложившаяся в зоогигиенической практике оценка помещений жи: -гнокздческих ферм в период выращивания далодняка ш показателям

¡щего микробдаго числа и степени контаминации их теми или иными шитарда-показателышми микроорганизмами (бактериями группы кишеч-)й палочки,протеем,энтерококками,стафилококками .клостридаями пер-рингенс) не может быть объективной ухе по той причине,что предъяв-гсмые к этим микробам требования (В.И.Гец.1953; Г.П.Калина.Г.Н.Чй-X)вич, 1969; С.Я.Любашенко,1980) не соответствуют их биологическим юйствда. Указанное обстоятельство требует изыскания наглядных ма-^обных тестов и критерий санитарной оценки помещений животновод-' )ских ферм,способных объективно отражать и прогнозировать в них шзоотическую ситуацию.

Учитывая,что для новорожденного молодняка присущи инфекционные )болевания,свойственные особенностям иммуно-фяэкологического сос->яния организма первых дней и недель жизни,санитарно-бактериологи-зский контроль репродукторных помещений ферм и оценка в них эпизодической обстановки должна основываться на выявлении патогенных астерий .представляющих реальную опасность для здоровья животных шюго периода жизни.

Наши исследования по изучении видового состава условно-патоген->й микрофлоры репродукторных помещений свиноводческих и молочных эры показали,что на мвэгнх из них в период массовых желудочда-ки-эчных заболеваний молодняка наряду с известными возбудителями бо-эзни (эйтеробактериями родов Escherichia,Citrobacter,Proteus и р.) циркулируют патогенные штаммы Morganella morganii • Эти бак-эрии мы нередко выделяли также из внутренних органов и тканей по-абших от диарея поросят-сосунов и новорожденных телят. В связи с гоутствием в отечественной и зарубежной литературе сведений о ро-а морганелл в этиологии желудочно-кишечных заболеваний сельскохо-яйствекных животных возникла необходимость" глубокого изучения воСств указанных микроорганизмов,определения их этиологической ро-а в диарейшх заболеваниях поросят и телят и значения при санитар-э-бактериологической оценке репродукторных помещений животноводчес-нх фе!м,а также разработки диагностических средств и методов уско-энной индикации данных бактерий в разных объектах,что важно для совершенствования санитарного контроля окружающей среды,продукции ивотноводства и диагностики патологического материала.

I.3., Цель и задачи исследований. На основании вышеизложенного ель настоящей работы сводилась к выявлению доминирующих видов энте-обактерий,циркулирующих в репродукторных помещениях свиноводческих молочных ферм и способных вызывать диарейные заболевания у поро-

сят-сосунов и новоровдонных телят; изучению их биологических свойс1 разработке тестов,критерий и методов ускоренной санитарно-бактерио логической оценки этих помещений в период выращивания молодняка дл. характеристики и прогнозирования эпизоотической обстановки,а также изыскании путей направленного регулирования в них микробиоценоза.

Дня достижения указанной цели были поставлены следующие задач!

1.3.1« Провести исследования по изучению видового состава ус-ловко-патогенной микрофлоры (представителей разных родов и видов а мейства Enterobacteriaceae ) в родильных отделениях И лрофилакто] ях молочных и сзинарнлках-маточниках свиноводческих ферм и комплексов различных регионов страны при наличии и отсутствии массовых дан ройных заболеваний новорогзденных телят и шрооят-сосудав.

1.3.2. Установить доминирующие виды и серов^рианты энтеробакт< рий,циркулирующих, в репродукторных помещениях ферм,я уровень конта-манации ими этих помещений при разной эпизоотической обстановке с учетом конкретных условий получения,содержания,кормления телят и п< росят.ветеринарно-санитарных и других мероприятий.

1.3.3. Изучить морфологические,культуральные,ферментативные,aj тигенные и патогенные свойства штаммов энтеробактерий, выделенных и; репродукторннх помещений молочных и свиноводческих ферм,а также патологического материала от больных к погибших телят и поросят в результате желудочно-кишечных заболеваний.

1.3.4. Определить роль малоизученных энтеробактерий вида Мог® nella morganii в этиология диарейных заболеваний телят и поросят в их значение в санитарной оценке животноводческих помещений.

1.3.5. Провести серологическое маркирование полевых штаммов мс ганвял,выделенных из помещений свиноводческих и молочных ферм,а тш же патологического материала, и установить доминирующие серогруппы этих бактерий.имеющие эпизоотологическое значение.

1.3.С. Дать обоснование микробным тестам.способным отражать ci пень санитарного благополучия репродукторных помещений свиноводческих в молочных ферм в период выращивания новорожденного молодняка,! определить критерии их санитарно-бахтериологической оценки.

1.3.7. Изыскать ускоренные серологические методы индикация sai генных энтеробактерий в охружаизей среде .отработать оптимальные peí мы изготовления новых диагностических средств (морганвллезннх аггл! титрующих серогрупповых сывороток,ашерихногянх и моргаяеллезных si тродатарнюс диагностихумов).используемых в этих методах,! апробировать их в лабораторных и производственных условиях.

1.3.8. Изготовить огштно-промшалеишт партии наборов морганел-лезннх агглютинирующих серогрулпозых сывороток и моргаяаллезных эритроцйтарных диагностикумов,провести их госприемку и производственные испытания ускоренного метода обнаружения эпизоотических штаммов морганелл в разных объектах.

1.3.9. Подготовить и утвердить НТД на промышленное изготовление наборов морганелл о злых диагностических препаратов для внедрения их в производство.

1.3.10. Дать теоретическое обоснование путей направленного регулирования микробиоценоза в репродукторных помещениях животноводческих ферм с целью неспецифической профилактики кишечных инфекций новорожденного молодняка.

Решение перечисленных задач и выполнение большого объема исследований оказалось возможным благодаря участию в работе по отдельным направлениям сотрудников лаборатории санитарной микробиологии ВДИИВСГЭ С.В.БритовойД.Б.Кононенко, а также технической помощи Е.А. Щувдубы,И.0.1Ъряевой,К.ВДер®модочк.которым приношу глубокую благодарность.

1.^. Научная новизна. Определены видовой состав и биологические свойства бактерий семейства Е^егоЪас1ег1асеае .циркулирующих в репродукторных помещениях свиноводческих и молочных ферм при разной эпизоотической обстановка (наличии и отсутствии массовых желудочно-кишечных заболеваний новорожденного молодняка).установлены эпизоото-логическая значимость и роль различных представителей данного семейства в этиологии диарейных заболеваний поросят и телят первых дней и Недель жизни,а также значение их в санитарно-бактериологической оценке указанных помещений.

Впервые в ветеринарии изучены распространенность энтеробакте-рий виде МогеапеНа пюгеапИ в животноводческих хозяйствах различных регионов страны; физиологические.антигенные«иммуногенныь,серологические и биологические свойства штаммов люрганелл, выделенных из окружающей среды,больных и погибших от диареи поросят-сосунов и новорожденных телят; в опытах экспериментального заражения телят и поросят доказана патогенность морганелл для этих видов животных; установлены доминирующие серогруппц морганелл,циркулирующие на животноводческих фермах,которые имеют эпизоотологичвекое и эпидемиологическое значение,при этом выявлены новые серогруппы данных бактерий .отличающиеся по антигенному строению и иммуногенным свойствам от известных серогрупл международной коллекции. Бактерии новой се-

рогруппы "13" использованы в качестве производственного штамма для изготовления наборов морганеллезных диагностических препаратов (ai глэттинарующих серогрупповых сывороток и эритроцитарннх диагностику мов)и защищены авторским свидетельством (A.c. № 1554360).

Дано экспериментальное и теоретическое обоснование микробных тестов и критерий санитарно-бактериологической оценки репродухтор-ных помещений свиноводческих и моечных ферм .позволяющих достаток объективно отражать и прогнозировать в них эпизоотическую ситуацот и сагитарное состояние в период выращивания новорожденного молодю ка.

Для получения активных морганеллезных диагностических npenapj тов,используемых при ускоренной индикации эпизоотических штаммов морганелл с помощью реакций нейтрализации антител и коагглютинацш определены оптимальная схема иммунизации кроликов к дозы антигено] при изготовлении нативных агглютинирующих серогрупповых сывороток а также оптимальные режимы приготовления сенситина и сенсибилизагр им формалинизированных эритроцитов барана при изготовлении эритроцитарных диаглостикумов.

Разработана технология промышленного изготовления наборов moj ганеллезных агглютинирующих серогрупповых сывороток и морганеллезных эритроцитарных диагностикумов,включающим по 8 типов препарато которая обеспечивает высокое их качество и продолжительный срок ствия.

Разработан более упрощенный способ постановки реакции коаггл! тинацви для обнаружения разных видов и сероваров патогенных энтер« бактерий в различных объектах (A.c. Л I4800I77).

Дано теоретическое обоснование требований к пробиотическим препаратам и режимам их применения в целях оптимизации микробиоценоза в репродукторных помещениях животноводческих ферм и снижения заболеваемости новорожденного молодняка кишечными инфекциями.

1.5. Практическая значимость и внедрение. Разработанный методический подход к санитарно-бактериологической оценке репродуктор 1шх помещений животноводческих ферм позволяет более достоверно отражать и прогнозировать в них эпизоотическую ситуацию и в случае необходимости проводить дополнительные ветеринарно-сакитарные и п. тивоэшизоотические мероприятия,предотвращающие вспышку кишечной и фекции у,новорожденных животных.

Полученные материалы по изучению биологических свойств энтер бщ-.терий вида КогеадеНа morcanii дают основание относить их j

[тогвшшм для сельскохозяйственных животных микроорганизмам,спосо-шм вызывать диарею,что следует учитывать ври лабораторной эксперте патологического материала,кормов и других объектов,а также при ¡пользовании средств терапии, и профилактики желудочно-кишечных задеваний поросят и телят,протекающих с участием этих бактерий.

Предложенные методы ускоренной индикации патогенных штаммов иерихий и морганелл в различных объектах с помощью реакций коаг-гаэтинации н нейтрализации антител повышают результативность иссле-эвания,доступны любым производственным диагностическим лаборатори-4,более производительны и экономичны в сравнении с бактериологи-еским методом обнаружения соответствующих бактерий.

Для снижения уровня контаминации животноводческих помещений еловш-датогекшми и патогенными микроорганизмами а заболеваемос-и молодняка кишечными инфекциями даю научное обоснование путей вправленного регулирования мякро биоценоза и требований к пробиоти-еским препаратам,создание и практическое использование которых юзволит существенно снизить заболеваемость новорожденных поросят [ телят и повысить их сохранность.

Результаты экспериментальных исследований по диссертационной работе вошли в II методических и нормативных документов,утвораден-шх IVB МСХ СССР.1УВ Госагропрома СССР.ГУВ Минсельхозпрода СССР, ЗАСХНШ1, директором ШИИВСГЭ.

1.6. Основные положения .выносимые на защиту диссертации: ■ материалы по определению биологических свойств различных представителей условно-патогенной микрофлоры репродукторных помещений животноводческих ферм при разной эпизоотической обстановке;

- обоснование непригодности санитарно-показатэльшх микроорганизмов для сгнитарно-бактериологической оценки помещений животноводческих ферм при выращивании молодняка;

- обоснование этиологической роли энтеробактерий вида Morganella morganü в диарвйных заболеваниях поросят-сосунов и новорожденных телят и их значения в санитарной оценке репродукторных помещений животноводческих ферм;

- обоснование микробных тестов,характеризующих эпизоотическую ситуацию и санитарное состояние в репродукторных помещениях животноводческих ферм в период выращивания молодняка,и критерий санитар-но-бактериологичеекой оценки этих помещений;

- материалы по разработке,испытанию и внедрению в производство наборов морганвллезннх диагностических препаратов для ускоренной

!

иадикации эпизоотических штаммов морганелл в объектах ветерина даго надзора;

- материалы по изысканшо,испытанию и внедрению в широкую лаборат нуго практику ускоренных методов обнаружения морганелл и энтеро тогенных эшерихий с адгезивными антигенами в окружающей среде, кормах и патологическом материале;

- теоретическое обоснование путей направленного регулирования ми робиоценоза в релродукторных помещениях животноводческих ферм требований к пробиотическим препаратам в целях профилактики ки шечных инфекций у новорожденного молодняка.

1.7. Апробаигя работы. Основные материалы диссертации доложе и обсуждены на 7 научной конференции по инфекционным и инвазионнь заболеваниям сельскохозяйственных животных (МВАД961).Всесоюзной научной конференции по болезням молодняка сельскохозяйственных жи вотных и птиц (Москва,1964),объединенном Пленуме ветеринарной сек ции Отделения животноводства ВАСХНИЛ по проблеме профилактики зас левакий молодняка сельскохозяйственных животных (Москва,1968).Шм нуме Отделения ветеринарии ВАСХНИЛ по проблеме иммунитета сельскс хозяйственных животных (Москва,1971).Всесоюзном научно-производст венном семинаре по проблеме колиоактериоза сельскохозяйственных I вотных (Тверь,1978),33-й ежегодной конференции Европейской Ассощ ции по животноводству (Санкт-Петербург,1982).Всесоюзной конфереш по проблемам эпизоотологии (Казань,1983).Всесоюзной конференции 1 эпизоотологии,эпидемиологии.средствам диагностики.терапии и спещ фической профилактики инфекционных болезней общих для человека и животных (Львов,1988).научно-практической конференции "Дрофилакт; ка и меры борьбы с инфекционными болезнями молодняка животных (М кваД993) .межлабораторюм совещании сотрудников ВНИИВСГЭ (7.04.Г

Опытно-промышленные партии наборов морганеллезных эритроцит! ных диагностикумов и нативных морганеллезных агглютинирующих сер групповых сывороток успешно прошли приемочные испытания и проиэв ственную апробацию (1990) в двух республиканских и пяти областны ветеринарных лабораториях. Наборы указанных препаратов демонстри вались в 1990 г. на ВДНХ СССР,за разработку и внедрение которых тор награжден серебряной медаль» выставки.

1.8. Публикация результатов исследований. Но томе диссертас опубликовано 24 работы (14 в соавторстве), в т.ч. I монография я авторских свидетельства,в большинстве которых автор являлся их с нетствсннцм исполнителем<

э

. 2. СОБСТБЕНШЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Работа по теме диссертации выполнялась согласно тематического лака НИР Московской ветеринарной академии им. К.И.Скрябина на каждое микробиологии (1961 - 1971 г.г.),а в период 1972 - 1993 г.г. I соответствии с отраслевой тематикой НИР ВНИИ ветеринарной санита-ии,гигиены и экологии по научно-технической проблеме 0.51.09,задавши 06.02 (6.11.73.75; 8.1.76.79),08.08 (8.1а.81.83; 8.1ж.84.84; 1.1к.85.85; 8.1а.86.88), 08.07 (8.3.89.91), НТП 06.16.01 (8.11.91.95! 1 лаборатории санитарной микробиологии,а также на базе евиноводчес-шх и молочных ферм обычных (тра/иционных) хозяйств и промышленных сивотноводческих комплексов Московской,Липецкой,Пензенской,Тверской, 'язанской,Тульской,Костромской.Самарской.Кемеровской областей и Кра-'.юдарского края России,Одесской и Винницкой областей Украины.

Материалом для изучения видового состава и количественного уро-)ня условно-патогенной микрофлоры помещений являлись сборные пробы юскобов с полов станков свинарников-маточников,родильных боксов и ищивидуалышх клеток профилактория молочных ферм, а также фекалии ишническа здоровых и больных диареей поросят-сосунов и коворовд( зых телят; внутренние органы и ткани трупов молодняка,погибшего от келудочно-кишечных заболеваний.

Для наделения разных видов энтеробактерий и их количественного Гчета использовали общепринятые микробиологические методы. Родовую I видовую идентификацию наделенных культур микроорганизмов проводи-ни согласно дифференциальной схемы Ф.Кауфмана (1954) .международной классификации бактерий семейства ЕгИ;егоЪа<^ег1асбае (1963) .руково -цству по систематике.бактерий Берги (1974,1984).используя 11-20 то-зтов.

Патогенные свойства культур энтеробактерий определяли в биопробе на белых мышах массой 13-16 г (внутрибршинаэе заражение в цозах 0,5-1,0 млрд микробных клеток), каждой культурой и дозой заражали по 3 мыши. У некоторых культур эшернхий патогенность изуч&та одновременно на белых мышах и куриных эмбрионах (заражение на хори-эналлантоисную оболочку в дозах 10-40 микробных клеток). Средним летальную дозу культур морганалл (ь^д) определяли по методу Рида и Менча.изложенному в "Методическом руководстве по лабораторной оценке качества бактерийных и вирусных препаратов" (1972).

Серологическое титрование культур эшерихий проводили в соот Еетствии с действующими в определенное время наставлениями по при нению поливалентных и моновалентных агглютинирующих О-колиснворот (1970,1974,1980) и эшерихиозных антиадгезивных агглютинирующих сы вороток (1989). Серологическую маркировку полевых штаммов моргане проводили с помощью экспериментально изготовленного к ним набора агглютинирующих 0-сывороток и антигенов ыорганелл 46 серологическ групп международной коллекции,полученной от проф. К.Раусса (медицинский университет им. Семмельвейса.Венгрия).

Гемолитические свойства культур эшерихий и морганелл изучали на ПОД с 5% дефибринированной кровью барана.

Бактериологическое исследование трупов новорожденных телят и поросят-сосунов.погибших от диареи.проводили согласно действующим в определенный период методическим указаниям по бактериологическо диагностике колибактериоза (эшерихиозк) животных (1974,1981,1991) и сальмонеллезов животных (1971,1990).

Сведения о других материалах и методах исследований, в т.ч. разработанных нами.приводятся в соответствующих разделах работы.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Материалы по изучению видового состава.количественног уровня и биологических свойств условно-патогенной микрофлоры репродукторкых помещений животноводческих ферм при разной эпизоотической обстановке

Изучение микрофлоры ре продукт о рны х помещений животноводчески ферм проводили на базб 56 хозяйств разных регионов России и Украи ны.в т.ч. 34 свиноводческих и 22 молочных ферм. Из общего числа у занных ферм 6 свиногодческих и 4 молочные фермы являлись благошь-лучкыми по массовым желудочно-кишечным заболеваниям поросят и телят,где заболеваемость животных в период обследования ферм не пре вышала 15-18% ; на остальных фермах диарея отмечалась у 35-100? новорожденных животных и большинство таких ферм было стационарно неблагополучными по данным заболеваниям.

Ери изучении видового состава услоьло-патогенной микрофлоры помещений проведено исследование 583 сборных проб соскобов с поло свинарников-маточников и фекалий поросят-сосунов и 232 проб соответствующих материалов с молочных ферм,взятых при разной эпизоотн ческой обстановке,в т.ч. 195 проб из шести свиноводческих и 38 пр

13 четырех молочных ферм в период отсутствия у молодняка массовых келудочно-кишечных заболеваний. Бактериологическому исследованию годввргнуто 15 трупов поросят и 22 трупа телят первых дней и недель кизни, погибших от диареи и принадлежащих обследованным хозяйствам. Родовую и видовую идентификацию проводили у 1593 культур микроорганизмов .выделенных из разных материалов. При определении патогенное-ги и вирулентности культур энтеробактерий использовано 1226 белых шшей и 50 куриных эмбрионов.

2.2.1.1. Микрофлора свинарников-маточников

Результаты исследований показали,что видовой состав условно-итогенной микрофлоры помещений свинарников-маточников в период отсутствия массовых диарейных заболеваний поросят-сосунов представши сравнительно небольшим числом видов энтеробактерий.некоторые из соторых встречаются лишь в отдэлышх хозяйствах и единичных случа-U. Постоянными представителями одкрофлоры во всех 6 благополучных юзяйствах являлись бактерии родов Escherichia (вид E.coli ) и roteua (виды р.vulgaris, P.mirabiliB ,на одной ферме еще и .myzofaciens ). Бактерии рода Citrobacter (виды c.freun-

ii . реже c.diveraus ) циркулировали не во всех хозяйствах и на-содки их в пробах исследуемого материала составляли от 10 до 32% ¡лучаев. На отдельных фермах в единичных пробах обнаруживали бактерии видов Enterobacter aerogenee, Providencia rettgeri, Morgenel-a morganii.Hafnia alvei, Pseudomonas aeruginosa.

При изучении антигенных свойств у 186 культур эшерихий,выделен -шх из помещений благополучных ферм.установлено,что преобладающее и количество (89£) не типировалось набором коммерческих агглютинирующих О-колисывороток. Типированные культуры относились к серогруп-ши 02.020.026.033,055.0111,0115,0138,0142,которые удавалось выделять из отдельных проб соскобов с полов и фекалий поросят. В 8-20,2 гроб материалов,взятых в 4-х хозяйствах и подвергнутых исследова-шю на наличие энтеропатогенных эшерихий, содержались бактерии с шгезившми антигенами К88 и К99.

Число Патогенных для белых мышей культур эшерихий,выделенных 13 проб материалов разных хозяйств .составляло 12-36?. В одном хо-1яйстве циркулировали ^-гемолитические штаммы эшерихий. Из числа !8 культур других видов энтеробактерий,относящихся к родам Цитро-¡актер.Протеус ,Морганелла,Энтеробактер,Провиденциа, II (ЗЭ£) облагали патогенностью,вызывая гибель мышей в дозах 0,5-1 млрд м.к.

Количественный уровень условно-патогенной микрофлоры свинарни ков-маточников изучали в четырех хозяйствах в разные сроки первого месяца выращивания поросят. В результате исследований установлено, что наибольшее количество лактозоположительных (преимущественно ро дов Знерихиа и Цитробактер) и лактозоотрицателышх (в основном род Протеус) энтеро'-штерий содержалось на поверхности полов станков в первые три недели жизни поросят,в последующие недели их число за метно снижалось. Аналогичная закономерность отмечалась при исследо вании фекалий клинически здоровых поросят-сосунов соответствующего возраста,хотя в разные сезоны года количественный уровень лактозоположительных энтеробактерий и других групп микроорганизмов имел отличия.которые могли быть обусловлены неодинаковыми составами рационов поросят в осенне-зимний и весенне-летний периоды года.

В разных хозяйствах степень контаминации полов микробами значительно варьировала. В частности,в одном хозяйстве в первую декаду выращивания поросят количество лактозоположительных энтеробакте рий составляло в I г соскобов с полов в среднем 16,3 'I08 м.к. (с колебаниями в разных станках от 4,7 дс 42,9 *10® м.к.), а средний показатель титра протея равнялся 1СГ5 (с колебаниями от 1£Г3 до Ю-6 ); в другом хозяйстве соответствующие показатели были 8,7 ■ I07 (с колебаниями в разных станках от I до 33 *Ю7) и 1СГ6 (с хо-

—Л 7

лебаниями от 10 до 10 ). Подобные различия в количественном уровне указанных бактерий отмечалась в остальных двух хозяйствах в разные сроки выращивания животных.

В период массовых желудочно-кишечных заболеваний поросят-сосу ьов видовой состав условно-патогенной микрофлоры помещений свинарников-маточников имел большее разнообразие на многих фермах (особенно в промышленных свиноводческих комплексах) и характеризовался тем,что помимо повсеместного циркулирования бактерий родов Escherichia (ВИД E.coli ) И Proteus (вида p.vulgarie, P.mirabi-lie ,на некоторых фермах еще и p.myxofaciens ) в 14 хозяйствах (из числа 28 обследованных) трех областей и одного края встречались бактерии вида liorganella morgan!i ,при этом находку их в про бах соскобов с полов и фекалий больных поросят составляли от 8 до 35%, а в одном хозяйстве - 71? случаев. Более редкими находками ' являлись бактерии видов Citrobacter freundii и Citrobacter diver-eu8 (на шести фермах), Providencia rettgeri (на пяти фермах), Haf-nie ¿lvni (на четырех формах), Enterobacter aerogenes (на трех фер мах), Yeroinia enterocolitica (на двух фермах), Klebsiella pneumoniae. Enterobacter cloacae (на одной ферме),которые содержались

9-22? проб материалов,взятых в хозяйствах,где циркулировали ука-анные виды микроорганизмов. Бактерии родов Salmonella и Kd-ardaiella не ¡зщщ обнаружены ни в одном случае.

При бактериологическом исследовании трупов 15 поросят-сосунов, огибших от диареи на фермах 8 хозяйств, в т.ч. трех,где отмечался ирусный трансмиссивный гастроэнтерит,нами были выделены из различ-ых внутренних органов и тканей животных чистые или смешанные куль-урн энтеробактерий видов Escherichia coli (в 14 случаях), Prote-в vulgaris ИЛИ Proteus mirabllis (в 10 случаях), Morganella organii (в 4 случаях), кокковые бактерии (в 2 случаях).

Изучение антигенных свойств культур эшерихий,выделенных из по-ещений неблагополучных свинарников-маточников,позволило установить, то степень контаминации последних патогенными для поросят серо-руппами данных бактерий была в 4-6 раз выше,чем в благополучных смещениях. Частота находок серотипированных культур эшерихий в робах исследуемых материалов составляла 33-78?. Большинство типи-ованных культур принадлежало к серогруппам 08,09,015,020,026,033, 1101,0117,0138,0139,0142,0147,0149. На крупных фермах и промышлен-нх комплексах циркулировали одновременно бактерии 3-5, а на отде-ъных фермах 6-7 серогрупп, при этом в разных хозяйствах 0-антиген-ый состав эшерихий имел отличия. На некоторых фермах встречались [реимущественно диссоциированные штаммы эшерихий,имеющие R.-форму, [то могло быть связано с изменчивостью бактерий в результате воз-;ействия на них антибактериальных препаратов,применяемых для лече-яя больных животных. При определении наличия адгезивных антигенов культур эшерихий,выделенных из помещений пяти хозяйств.установит ,что в 27-64? проб соскобов с полов и фекалий поросят содержась патогенные штаммы бактерий с антигенами К88.К99, значительно юже о F4I и 987Р, концентрация которых в пробах была в 2-3 раза ше по сравнению с их уровнем в пробах с благополучных ферм.

Изучение патогенных свойств у 176 культур разных видов энтеробактерий, выделенных из помещений,а также фекалий больных и внутренние органов погибших от диареи животных, в биопробе на белых мышах, юказало,что преобладающее их количество (74? культур рода Eache-•ichia, 73? - рода Citrobacter , 80? - рода Proteus , 89? - ро-ia Morganella , 75? - рода Providencia ) вызывало гибель мы-тй. Все культуры вида Hafnia alvei (4 штамма) не обладали пато-'еиностью для мышей.

Определение количественного уровня условно-патогенной микро-иоры в помещениях трех неблагополучных хозяйств позволило устано

вить тенденцию увеличения числа лактозоположительных энтеробактерий и титра нротея на поверхности полов свинарников-маточников в первые две декады выращивания поросят по сравнению с их уровнем на благополучных фермах,хотя степень контаминации помещений этими микроорганизмами была неодинаковой каю в разных станках одной фермы,так и в различных хозяйствах.

Результаты наших исследований по изучению количественного уровня условно-патогенной микрофлоры в помещениях свинарников-маточников позволяют заключить,что независимо от эпизоотической обстановки на ферме (отсутствия или наличия массовых диарейных заболеваний молодняка) в разных хозяйствах формируется свой уровень данной микрофлоры »который зависит от многих факторов, оказывающих влияние на количество микроорганизмов в кишечнике и экскрементах животных, а также от условий,способствующих или ограничивающих их накопление в выживание во внешней среде. Ввиду изложенного не представляется воз можность установить какие-либо нормативные количественные показатели микрофлоры поверхностей помещений,на основе которых можно было бы проводить их сянитарно-бактериологическую оценку в период выращивания поросят-сосунов.

2.2.1.2. Микрофлора родильных отделений в профилакториев молочных ферм

При отсутствии массовых желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят видовой состав условно-патогенной микрофлоры,циркулирующей в родильных отделениях в профилакториях молочных ферм, имел весьма ограниченное число представителей и уровень контаминации ими этих помещений отличался не только в различных хозяйствах,но и в разных родильных боксах и клетках для телят одной ферш. Так, если бактерии вида Escherichia coli содержалась во всех пробах соско-бов с поверхностей полов и стен родильных боксов (денников) и клеток профилакториев обследованных четырех хозяйств,то разные виды бактерий рода Proteus (в типичной роящейся или S -форме) приходилось обнаруживать на фермах этих же хозяйств лишь в 14-33$ проб. В единичных пробах,взятых из некоторых хозяйств,встречались бактерии ридов . Citrobacter divereus, Citrobacter freundii, Enterobacter r.loecae, «organella morgan!i, Pseudomonas aeruginosa.

Изучение антигенных и биологических свойств у 156 культур япе-рихкЯ.внлелешшх из помещений трех хозяйств,показало,что преоблада-№.<--« их количество (94£) не типировалось набором коммерческих агглг

минирующих О-коллсывороток; типированные культуры относились к серо-.■■руппам 09,035,0117. 19 культур (12%) содержали адгезивные антигены С99 или К88. Из числа 32 исследованных в биопробе на белых мышах судьтур 10 (31%) обладали патогенностью. Одновременно э изучение па-гогенности у 25 культур эшерихий (серологически тигшрованных и не гипированных) в опытах на белых ьшшах и куриных эмбрионах показало, что последние проявляли более высокую чувствительность к этим бактериям и гибель их вызывали 14 (56%) культур при заражении в дозах IG-30 м.к. Преобладание непатогеняых для мышей штаммов микроорганизме мы отмечали а у других видов энтеробакторий,циркулирующих в помещениях благополучных ферм. В частности,выделенные из проб разных хозяйств 2 культуры морганелл, 5 культур (из числа семи) прогея, 2 культуры (из числа трех) цнтробактер не вызывали гибели мышей при заражении их в дозе I млрд м.к. Обе культуры (2 штамма) морганелл не обладали гемолитическими свойствами.

При наличии массовых диарейных заболеваний новорожденных телят условно-патогенная микрофлора репродукторных помещений большинства обследованных хозяйств была более разнообразной по видовому составу в сравнении с благополучными фермами и это отличие наиболее заметно проявлялось на крупных фермах и молочных комплексах.

Постоянными представителями указанной микрофлоры во всех 18 неблагополучных хозяйствах, в т.ч. двух,где отмечался коронавирусный Энтерит телят,ЯВЛЯЛИСЬ бактерии 2ИД0В Escherichia coll, Proteus migaría, Proteus mlrabilia (в типичной роящейся или 5-форме), на двух фермах наряду о названными видами протея циркулировал еще вид Proteua myiofaciens . Частота находок вышеуказанных бактерий в пробах соскобов с полов и фекалиях телят была неодинаковой: если эшерихии содержались во всех пробах,то бактерии рода Протеус мы обнаруживали в 42-93$ проб и лишь в одном хозяйстве в 100% проб. Бактерии рода Цитробактвр (виды c.freundii и c.diversus ) встречались в 8 хозяйствах и находки их в пробах составляли 10-19% случаев, в одном хозяйстве данные бактерии содержались в 425? проб. Бактерии вида «organella morgan!i были обнаружены в 6 хозяйствах трех областей и одного края,где находки их в пробах исследуемых материалов составляли 9-24Í, а в одном хозяйстве - 1Ъ% случаев. В отдельных хозяйствах в единичных случаях обнаруживали бактерии видов Providencia rettgeri, Klebsiella pneumoniae, Yersinia enterocoliti-ca, Enterobacter aerogenea, Hafnia alvei, Poeudomonas aeruginosa.

При бактериологическом исследовании 22 трупов телят первых дней жизни,погибших.от желудочно-кишечных заболеваний в 10 хозяй-

ствах, в т.ч. одном молочном комплексе неблагополучном по коронави-руоному энтериту телят,из различных внутренних органов и тканей выделяли чистые культуры эшерихий или смешанные культуры этих и других видов микроорганизмов: Proteus mirabilis, Proteue vulgaria (Ь 13 случаях), Morganella morganii (в 7 случаях), Citrobacter freuadil (в 4 случаях), ciostridium perfringens и кокковые бактерии (по 2 случая), Salmonella typhiuurium (в I случае). У всех телят,погибших от смешанной инфекции,в патологическое материале содержались бактерии двух-трех вышеназванных видов.

Особенностью биологических свойств микрофлоры помещений неблагополучных хозяйств являлось преобладание в ее составе патогенных штаммов разных видов энтеробактерий. Так,во многих хозяйствах,и прежде всего на крупных фермах и молочных комплексах,частота находок патогенных для телят серэгрупд эшерихий в пробах исследуемых материалов составляла 38-96? случаев; воделеннке культур« относились к се-рогруппам 02,08,09,026,035,078,086,0101,0117,0119,0141,реже к другим. В каждом хозяйстве циркулировали бактерии нескольких серогрупп. На отдельных фермах обнаруживали большое число (32-44?) диссоциированных штаммов эшерихий.имеющих Я-форму в не поддающихся серотипи-рованию.

Проведенное на базе пяти хозяйств изучение распространенности эктеропатогенных эшерихий с адгезивными антигенами показало.что в период массовых желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят данные бактерии широко циркулируют в репродукторных помещениях и встречаются на всех фермах у многих больных животных. В частности, при исследовании 66 проб соскобов с полов,фекалий больных и внутренних органов 10 трупов телят.погибших от диареи в этих хозяйствах, культуры эшерихий с адгезивными антигенами К99,К88,реже Г41 были выделены из 32 (48?) проб разных материалов,причем нередко в одной и той же пробе содержались эшерихни с различными типами адгезивных антигенов.

Бри изучении 58 культур других видов энтеробактерий.выделенных из различных материалов с разных молочных ферм« в биопробе ш башх мышах установлено,что преобладающее большинство их (88? культур рода Proteua , 87? - рода Morganella , 75? - рода Citrobacter , 62? - рода Providencia ) вызывало гибель мышей»

На молочных фермах мы не проводили количественного определения условно-патогенных микроорганизмов,однако для решения вопроса,касающегося санитарно-бактериологической оценки помещений,нас интересовало,в какой степени влияют разные способы их уборки на количествен-

аый уровень знтеробактерий в клетках для выращивания телят.

В результате исследований,проведенных на базе одного хозяйства. установлено,что при сухой уборке полов в I г соскобов содеуха-юсь в средней 0,89 млн лактонеположительных знтеробактерий,тогда ¡сак при влажной уборкэ полов в пробах соскобов,взятых в соседних клетках того же самого помещения и в тот же период времени,количества этих бактерий достигало в среднем 87 «лн клеток „т.е. в 100 раз больше. Полученные данные указывает,что при наличии увлажненных экскрементов животных,содержащих значительное количество органических веществ,« температуре окружающей среди 18-22 а более градусов может происходить размножение разных видов бактерий группы кишечной палочки (представителей родов Эшеркхиа,Цатробактвр,Энтеробая-тер) на поверхности полов,что исключает возможность их использования для количественного учета при саштарно-бактериоло^ической оценке помещений,занятых животными.

2.2.2. Результаты исследований по изучении биологических свойств и экологии знтеробактерий вида

Morganella morganil

Частые находки энтеробактврий вида Morganella morganii в репродукторных помещениях молочных и свиноводческих ферм при наличии массовых желудочно-кишечных заболеваний новорожденного молодняка (соответственно в 33 и 505? обследованных хозяйств).как и нередкое обнаружение данных бактерий во внутренних органах и тканях то-ляг и поросят,погибших от диареи,послужили основанием для глубокого изучения различных свойств указанных микроорганизмов,определения их роли в этиологии названных заболеваний в значения в санвтар-но-бактсриологичеокой оценке животноводческих помещений. Решение этих вопросов определялось тем,что до ваших исследований в специальной Литературе отсутствовала сведения О РОЛ?. Morganella morga -nil (в прошлом Proteus morganii ) в патологии сельскохозяйственных видов животных. При выполнении настоящей работы нами было выделено из различных материалов и изучено 44 штамма морганолл .свойства которых приводятся ниже.

2.2.2.1. Морфологические .культурально-фермвнтативные, гемолитические и патогенные свойства морганелл

По морфологическим признакам все выделенные штаммы соответствовали ТИПИЧНЫМ свойствам бактерий семейства Enterobacteriaceae ,

ролу МоггапеИа ; 6 штаммов из числа 44 не обладали подвижносп Культуральные свойства штаммов также не отличалиоь от присущих дав ному виду признаков и характеризовались неприхотливостью к росту с обычных питательных средах (ША.ОДБ) при температуре от 18 до 48 0 Отличительной культуральвой особенностью мдогих штаммов являлась склонность к диссоциации культур через 12-16 мае хранения в полужг мои ША с образованием после их пересева на пластинчатый агар большого числа колоний Л-формы ,а также после многократных переоево! на скошенный МПА и агар Хоттингера. Наличие Л—формы мы отмечали I у 4-х свежевдделешшх штаммов морганелл при исследовании проб соо-кобов с полов помещений трех хозяйств.

Федаентативные свойства всех свежевыделенных штаммов соответствовали признакам эталонных штаммов моргакелл.за исключением тоге что два из них не изменяли мочевину,а два других сбраживали глпко: с образованием только кислоты. Гемолитическими свойствами обладай 38 (86?) штаммов. Из общего количества 44 выделенных штаммов (41 -из неблагополучных я 3-х - из благополучных по диарейным заболеваниям поросят и телят ферд) 39 (88?) обладали патогенюстью для белых мышей. 5 штаммов, в т.ч. все три,выделенные из помещений живо-ново дческих ферм в период отсутствия массовых диарейных заболеваний молодняка .не вызывали гибели мышей при заражении последних в дозе I млрд м.к. Вирулентность у патогенных штаммов (ЬДзд) существенно отличалась и варьировала в пределах 23-705 млн м.к.

2.2.2.2. Антигенные.им&уногенные н серологические свойства

Дня определения антигенной структуры и серологического марки рования штаммов морганелл применяли экспериментально изготовлении агглютинирующие О-сыворотки.которые получали путем 5 и 6 кратной иммунизации кроликов породы шиншила массой 2,5-3 кг О-антягеяаки полевых и эталонных штаммов морганелл,приготовленных по методу «.Кауфмана (1954). Для получения антигенов использовали предварительно клонированные суточные агароше культуры в типичной 5-фор ме. Антигены (отмытые и убитые нагреванием взвеси бактерий) вводи ли-внутривенно в нарастающих дозах (по резным схемам) о интервале 4-5 и 6-7 сут. Через 7-8 сут после последней инъекции антигена пр водили тотальное обескровливание кроликов. Сыворотки получали общепринятым методом,которые затем консервировали борной кислотой (7?) и хранили при 4 °С.

Нами было лроведено 4 цикла опытов по получению агглютинируй

рос О-сцвороток.в которых использовано 60 кроликов и антигены из [вух эталонных в 18 полевых штаммов морганелл.

Активность и специфичность полученных сывороток устанавливали 1 пробирочной РА с гомологичными и гетерологичными антигенами мор-'анелд (живыми и убитыми). Каждую сыворотку исследовали с антигена-га всех штампов .использованных для иммунизации кроликов, а также с штигенами других выделенных нами и эталонных штаммов 46 серогрупп.

Результаты Исследований показали,что почти вое штаммы проявля-ш выраженные имцуюгенные свойства и позволяли получать активные [в тиграх 1:800-1:3200) агглютинирующие 0-сыворотки при 5-кратной шмунизации кроликов с интервалом 4-5 сут в дозах 1,2,3,4 и 6 млвд |.к. Два штамма обладали меньшей имыу ноге иной активностью и после иодунизацаи кроликов полученные от последних сыворотки имели титр [•400. Нами во была установлена корреляция между вирулентностью ггаыма п его иммуногекностьв. При определении агглютинабелышх свойств штаммов морганелл живые убитые (прогреванием в водяной $аво при 100 °С в течение I ч) антигены агглютинировали в одинакова титрах сыворотки,что позволяет заключить об отсутствии у бак-герай вида ^organella isorsanii поверхностных К-антигенов.спо-¡обпих препятствовать О-агглотинацап яишх культур.

В результате изучения антигенной структуры полевых штаммов даргадеял о набором экспериментально полученных агглютипирующих )-сивороток установлено,что некоторые штаммы имели идентичные типы >«аитигего»,которые давалп перекрестную РА о соответствующими гош-гогнчшая! в готорологичннма сыворотками в одинаковых титрах (1:800-[:КОО)тпд основания чего от были отпооеш к одним и тем же серо-ррушша клаосифиввсдонноЗ антигенной схемы к.иаизв п s.voroa (1359,1237). Два штамма во принадлежала ни к одной из известных зорогрупп.что дало нам основания отизота их к шшм серогруппам, голошю обозкаченнн?.< коквраш выделенных штагаюв - "4" и "13".

Из общого хдалпчоства 40 полевых отекаэв.подвергнутцх: изучению (остальные 4 иколи Н-форлу и но подлэтш типнровашш), у 34 (85$) Зыла установлена серогрупдавая принадлежность .которая раопределя-оаоь следующим образом: 026 - 7 штаммов, 01-6 штаммов, 033,"13" -по 4 штамма, 016 - 3 штамма, 025,029,045,"4" - по 2 шташа, 049 -I штамм. 6 штаммов не отюоигаоь к известным,а также выявленным нами двум новым серогруппам морганелл,что свидетельствует о наличии в природе большего числа серогрупп этих бактерий,чем имеется в зуществующей классификационной антигенной охеме. Следует отметить, что из числа 34 типированных по О-антигену штаммов морганелл 21

(62?) относился к 4 серэгруплам (026,01,033,"13").одна вэ которых (01) имеет не только эпизоотологическое.но и эпидемиологическое зш чение, поскольку бактерии этой оерогрувш довольно часто обуодовли» ют заболевания у животных и лвдей.

2.2.2.3. Патогеиность *organeUa morganii ДЛЯ новорожденных телят и поросят

Для решения вопроса о латогенности морганелл для новорожденны: телят и поросят была проведена серия опытов по экспериментальному заражении этих видов животных 3 полевыми штаммами бактерий серогру 01 и 029,выделенных из помещений молочной и свиноводческой ферм,а также внутренних органов теленка,погибшего от диареи.

Телят опытных групп (10 гол.) заражали суспензиями суточных агаровых культур двух штаммов морганелл однократно в дозах 10 и 20 млрд м.к. в первый день жизни до приема молозива в после двукрагвэ го скармливания его. Каждый штамм я каждую дозу бактерий вводили двум телятам. Контролем являлись незараженные телята (6 гол.) соот ветствующего возраста того же хозяйства. Животных разных групп раз мещали в отдельных помещениях .исключая контакт между ними, а также с другими телятами фермы.

В опытах экспериментального заражения поросят были нспользова ны пометы 6 свиноматок в количестве 55 гол. (27 опытных в 28 контрольных) . Поросят каждого помета,имеющих нормальное развитие дели ли на 3 группы (по 2-3 гол. в каждой), из которых первые две заражали суспензиями разных штаммов морганелл; поросят третьей группы не заражали,оставляя в качаотве контроля. Заражение животных прово доли 3 штаммами бактерий per од однократно в дозах 2 в 5 млрд м.к. на второй день жизни в через 10-80 мин после рождения. В последней случае родившиеся от четырех свиноматок поросята находились вместе с матерями в имели доступ к сосанию молозива в первый чао жизни,тс гда как опытных поросят пятой свиноматки оразу после рождения изолировали от нее в лишь спустя 30-40 мин после заражения подсаживали к свиноматка. Опыты проводили в отдельных помещениях, взолирова! яых от свинарников-маточников. Фекалии заболевши диареей поросят в телят в трупы погибших после заражения животных подвергали бакт< ряологпческоыу исследована».

Результаты проведенных опытов показали,что возможность воспрс кэведения заболевания у телят в поросят и форма его проявления (л< ir.ce или тяжелое течение) зависят от времени заражения животных и

;озы бактерий. В тех случаях,когда культуру морганелл скармливали ■елятам и поросятам до приема молозива в дозах соответственно 20 и I млрд м.к., удавалось вызвать тяжело протекающую диарею со смерте [ьным исходом через 2-3 сут после заражения. Заболевание возникало ■ телят через 26-34 ч, а у поросят через 16-19 ч после введения су-пензий разных штамма в морганелл и сопровождалось профузным потом,угнетением,учащенным дыханием,адинамией,потерей аппетита,нарас-ающей слабостью. Оэсле лечения больных животных активными антибак-ериальными препаратами,симптоматическими и диетическими средства-и наступало их выздоровление.

При заражении телят (до приема молозива) дозой 10 млрд м.к. нарея проявлялась у трех (из числа четырех) животных через 32-42 ■. протекала в легкой форме без летального исхода. Наиболее легкое непродолжительное (7г-8 ч) течение болезни отмечалось у телят, ко-орых заражали после двукратного скармливания молозива; заболевание них прекращалось после применения одних диетических средств.

В опытах заражения поросят,не получавших молозиво, дозой 2 млрд .к.,а также при введении новорожденным поросятам,получавшим молози о, 5 илрд м.к. возникала легко протекающая и непродолжительная (в ечение 4-6 ч) диарея через 17-24 ч у большинства животных,которая рекращалась без применения медикаментних средств. Заражение 6 дру-IX поросят двухдневного, возраста суспензиями морганелл двух штаммов зрогрупп 01 и 029 В дозе 2 млрц м.к. не приводило к каким-либо из-знениям клинического состояния у всех животных в течение периода 1блвдений.

Среди поросят и телят контрольных групп желудочно-кишечных за-хдеваний практически не было,за исключением одного теленка и трех >росят,у которых на 3-4 день жизни отмечалась легкая форма диареи ?и сохранении аппетита и удовлетворительном общем состоянии.

У погибших после заражения не леченных животных (одного телен-» и двух поросят) отмечалась картина геморрагического гастроэнтери-I с наличием множественных точечных,полосчатых и пятнистых кровоиз-1яний на слизистой желудка,тонкого отдела кишечника,в меньшей сте-зни - в слепой кишке. Кроме того у теленка имелись кровоизлияния 1 эвдо- и эпикарде,под капсулой селезенки; брыжеечные лим$атичес-1е узлы увеличены.на разрезе розово-красного цвета.

При бактериологическом исследовании фекалий больных диареей те 1т и поросят,а также внутренних органов и тканей погибших животных ) всех случаях были выделены культуры морганелл идентичные исполь-

зованным для заражения (серогрупп 01 и 029).

Таким образом результаты наших опытов по экспериментальному si радению новорожденных телят и поросят полевыми штаммами Morganelli morgan!i , проведенными впервые в ветеринарии.свидетельствуют о патогенности этих бактерий для указанных видов животных я позволяю! относить их к числу возбудителей диарейных заболеваний молодняка.

2.2.2.4. Влияние экологических факторов на биологические свойства морганелл

Изучение выделенных штаммов морганелл показало.что в помещениях некоторых животноводческих ферм циркулировали штаммы с измененными культуральными ( R.-форма) .антигенными и биологическими свойствами .которые могли возникать под воздействием каких-либо физических, химических или других факторов окружающей среды. Лабильность биологических свойств у многих штаммов морганелл мы отмечали часто в условиях m vitro при длительном их хранении и многократных пересевах на питательные среды,что проявлялось диссоциацией культур (переходом от S- в ft-форму) с утратой исходных антигенных и патогенных свойств. С другой стороны,почти все штаммы,выделенные от больных и погибших от диареи животшх,обладали присущими для данного вида бактерий культуральными .ферментативными, антигенными п патогенными свойствами.

В € случаях нами были выделены из фекалий больных диареей телят и поросят,а также помещения свиноводческой фермы штаммы морганелл, содержащие в одной и той же популяция клона бактерий разные ti пы О-антигенов,выявляемые в достаточно высоких титрах специфически; агглютинирующих 0-сывороток (1:400 - 1:800). Подобное явление .отмеченное многими исследователями у разных видов энтеробактерий, связывают обычно с природной особенностью химического строения 0-анти-гена. Между тем, не отрицая данного мнения,нельзя исключить возможность образования комплексных О-антигенов в результате естественной трансформации антигенных субстанций от одних штаммов бактерий к другим при совместном обитании их в кишечнике животных. Такая изменчивость микробов была нами экспэриментально доказана в опытах "прямой" трансформации на модели Escherichia coli путем пас-

сажей непатогенных штаммов эшерихий (реципиентов) в фильтратах уби-тих автоклавироваяием бульонных культур патогенных штаммов эшерихи: серогрупп ОШ и 033 (доноров). При этом из числа трех использованных в качестве реципиентов штаммов эшерихяй лишь один обладал спо-

собностью воспринимать свойства других штаммов-доноров и приобретать после четвертого пассажа антигенную структуру двух разных се-рогрупп данного вида бактерий; и адУциро ванные антигенные свойства сохранялись у него в течение 12 мес и не могли быть сняты многократными пересевами культуры в опытах "обратшй" трансформации.

Изменчивость культурально-ферлентативних.антигенных и биологических свойств морганелл.по всей вероятности,связана с их структур-но-морфологичесхими особенностями,определяющими большую чувствительность этих бактерий к воздействию различных абиотических факторов, что проявляется сравнительно коротким сроком их выживания в разных объектах внешней среды. Так,по данным С.В.Брнтовой (1965), в сухом навозе и сухой почве срок выживания морганеял при температуре 4,18-22 и 30 °С составлял 24-38 сут, наименее короткое время они вшивали в сточных водах (7-10 сут) при всех температурных режимах. Эти исследования показывают,что названные бактерии в сравнении с представителями других родов и видов экгеробактерий обладают более низкой адаптацией х существованию во внешней среде и наиболее благоприятной нишей их обитания является организм животных,где она, находясь в симбиозе с другими видами кишечных бактерий,сохраняют присущие им признака и свойства.

2.2.3. Экспериментальное обоснование микробных тестов и критерий санитарно-бактериологической оценки репродукторных помещений животноводческих федо в период их эксплуатации

Выявленная нами корреляция степени благополучия эпизоотической обстановки в репродукторных помещениях свиноводческих я молочных феде с уровнем циркулирующих в них патогенных штаммов разных видов энтеробактерий дает основание считать,что оценка санитарного состояния этих помещений в период выращивания новорожденных телят я поросят-сосунов должна базироваться на тех микробных тестах .которые могут характеризовать как количественные,так я качественные изменения в составе микрофлоры окружающей среды. Критериями этой оценки должны быть показатели .указывающие на накопление опасной для здоровья животных микрофлоры до такого уровня,котоможет при наличии тех или иных способствующих факторов нарушить равновесие между макро- я микроорганизмами в сторону проявления их патогенных свойств и возникновения у животных вспышки болезни.

К числу достаточно объективных,по нашему мнению,тестов оценки репродукторных помещений животноводческих ферм следует отнести пос-

толню присутствующие в окружающей среде энтеропатогенные эшерихия с адгезившлш антигенами. Из представленных в разделе 2.2.1 данных видно,что при наличии у поросят и телят массовых желудочно-кишечных заболеваний,обусловленных разными видами патогенных бактерий,а также вирусами (возбудителями трансмиссивного гасгроантерита свиней, коронавируского энтерита телят), энтеропатогенные ашерихии с адгезивными антигенами К88.К99, реже Ш,967Р содержались в пробах сос-кобов с полов репродукторных помещений и фекалиях животных на свиноводческих фермах в 27-64$ случаев и на молочных фермах в 48$ случаев,тогда как в пробах соответствующих материалов.взятых в помещениях,где отсутствовали массовые диарейшв заболевания молодняка, указанные бактерия обнаруживали на свиноводческих фермах в 8-20$ случаев а на молочных фермах в 12$ случаев.

Полученные данные показали,что независимо от этиологической структуры возбудителей диарейных заболеваний новорожденных поросят и телят на неблагополучных фермах происходило увеличение уровня энтеро патогенных шерихнй с адгезивными антигенами в репродукторных помещениях в 3 с лишним раза по сравнению с их уровнем в помещениях благополучных ферм. На основания сопоставления числа находок вышеназванных бактерий в определенном количестве проб материалов из разных по эпизоотической обстановке помещений нами определены критерии их оценки,позволяющие подразделить эти помещения на 3 категории: благополучные .условно благе получше и неблагополучные. Показателями деления последних на разные категории являлось количество находок энтеропатогенных эшерихий с адгезивными антигенами в 10 сборных пробах соскобов с полов станков свинарника-маточника или клеток профилактория,взятых в одно и то же время в различных участках секции помещения. Ори отсутствии указанных бактерий во всех пробах или наличии их в одной пробе секцию относили к благополучной по санитар-но-эпизоотической обстановке, при обнаружении искомых бактерий в двух пробах - к условно благополучной,а в трех и более проб - к неблагополучной. Естественно,что такая оценка помещений приемлема для ферм свободных от "классических" инфекций новорожденного молодняка .где заболевания животных возникают за счет циркулирующих в них условно-патогенных микроорганизмов.

Для наибольшей эффективности лечебно-профилактических мероприятий в неблагополучных секциях профилактория и свинарника-маточника, в которых заболевания молодняка имеют нарастающую тенденцию,необходимо определение видового состава микробов,наделенных из фекалий больных,а при наличии падежа - из кишечника в вкуттоышх органов

погибших животных, с учетом их биологических свойств и чувствительности к антибактериальным препаратам,что важно для лабораторной диагностики в подбора оредств терапий, способных действовать на во эх возбудителей болезни.

Таким образом предложенные для мониторинга репродухторных помещений овияоводческях и молочных ферм теотн я критерии их оценки дают возможность уотаяонать качественный состав условно-патогенной микрофлоры ,циркулирующей в той или другой секции помещения, и выявит» сдвиг этой микрофлоры в сторону нарастания уровня патогенных штаммов, что имеет большое значение для своевременного принятия мер по предупреждению вспышки диареи у новорожденных животных в распространению инфекта в благополучные секции помещения.

2.2.4. Результаты исследований по разработке

диагностических средств в изысканию методов ускоренной

индикации патогенных »нтеробактерий в разных объектах

При изыскании ускоренных методов индикации патогенных энтеробактерий в окружающей ореде ваш выбор пал на реакцию нейтрализации антител (ГНАт).разработанную Ы.И.Леви в А.Г.Момот (1962) с целью диагностике возбудителя чумы человека, и реакцию коагглютикации (РКОА), предложенную о.КгсшгаИ (1973) для диагностики возбудителя пневмококковой инфекции лицей. Обе реакция в дальнейшем бшш успешно попользованы многими отечественными я зарубежными исследователями для диагностики возбудителей различных заболеваний ладей и животных, однако для индикации моргапелл н знтеропатогекшх ошерихий а адгезивными антигенами они не применялись. РНАт хорошо зарекомендовала себя в качестве ускоренного метода обнаружения в фекалиях людей и жнвот-нах некоторых патогенных серогруш адюрнхий, вызывающих колв-ин$ек-цию (Ы.А.Бабахова в соавт.,1965; М.И.Леви и соавт.,1966; М.А.Немвно-ва,1969), во данная реакция никем не попользовалась с целью индикация указанных бактерий в объектах внешней среда,в связи о чем предстояло шяснвть пригодность ее для исследования соскобов в смывов о помещений животноводческих фври. Ввиду отсутствия промшленяого производства эритроцнтарных яирихвоэия я моргаяеляезинх дяагиостику-мов,необходимых для РНАт, в валу задачу входило взготовать широкие наборы этих препаратов к различным овроцуипш «верахвй я иэрган&м, наиболее часто ягеываюирм диарею у яоворокдекных теля в поросят-сосунов, и определять свойства эритродатарнах диагвоотякушв.

2.2.4Л. Получение ашерихиозных и морганеллезных эритроцитарных диагностикумов доя ГНАт и результат« их лабораторного и производственного испытания

Диагностикумы получали из дефабринированной крови барана .которую консервировали формалином по методу <7.с.рее1еу ег в1. (1Э58). Для определения оптимальной экспозиции процесса форыашшзации эритроцитов и ее влияние на физико-химические свойства эритроцитов смесь последних с формалином выдергивали 2, 2,5; 3 и 3,5 ч.

В основу методики изготовления эдатроцитарных эшэрихаозных и морганеллезных даагностмсумов был положен метод Ы.А.Байаховой (1966) в модификации Ы.А.Немедавой (1969). О-антигеиы (седаитиш) эшерохий и ыорганалл готовили из предварительно клонированшх штаммов указанных бактерий различных серологических групп (отмытых взвесей бактерий в концентрации 25-30 млрд м .к ,/си3, подвергнутых прогреванию в водяной бане при 100 °С в течение 2 ч). Дня определения влияния рй бактериальной взвеси на степень экстрагирования аз нее 0-антигена термическую обработку взвесей бактерий проводили при разных показателях рН (7.0; 7,5; 8,0; 8,5). Сенсибилизацию формадинв-аированных эритроцитов О-антигенами осуществляли ори различном режиме: экспозиции 2 и 3 ч, температуре 37 й 45 °С. Оптимальную сенсибилизирующую дозу О-антигеаа устанавливали в опытах о разными разведениями севситиков по показателю наибольшей активности полученных диагностикумов в реакции непрямой гешптлютинаши (РНГД).

Активность диагностикумов определяли в РИГА по ыетоду Е.Ногег е* а1. (1956) .исйользуя набор гомологичных коммерческих аггаштинпру-вдах Огколисывброток Армавирской бнофаЗрики в набор експарамектаяь-но полученных морганеллезных агглютинирующих О-сывороток. Специфичность диагностикумов проверяли в перекрестной РИГА о готлогичшин и гетврологичными О-сыворотхами, а тайке в РНАт со одеоявд культур разных видов микробов. Предел чувствительности диагшстшсрсов устанавливали в РНАт в опытах со взвесями чистых культур гомологичных серогруцп эшерихий в морганадя в концентрациях от 100 ылы до 50 тыс м.к. и в опытах о фекалиями животных,искусственно зараженных тест-бактериями в тех ге концентрациях.

Результаты исследований показали,что экспозиция действия формалина .равная 3 ч, обеспечивает надежное консервирование эритроцитов барана и длительное (в течение трех и более лет) сохранение их фивико-химических свойств.

На моделях изготовления 5 типов зиерихнозных (01,0137,0141,

0147,0149) я 4-х типов коргаяеялезных (01,029,033,"13") эритроцитар-янх диагяостикумов установлено,что наиболее полная экстракция 0-ан-тигена из бактериальной взвеси происходила при показателях рН 8,08,5 «которые позволяли получать препараты в 2 раза активнее,чем при сенсибилизации эритроцитов сенситинами,приготовленными при рН 7,07,5. Активность диагностикумов,полученных в лабораторных условиях в небольших объемах при разных температурных режимах (37 и 45 °С), не отличалась. Более активные препараты удавалось получать при сенсибилизации эритроцитов сенситинами в течение 3 ч да сравнении с экспозицией 2 ч. Оптимальными сенсибилизирующими дозами сенситинов, получаемых из бактериальных взвесей в концентрации 25-30 млрд м.к./ см3,являлись их разведения 1:4-1:5 для изготовления эшерихиозных диагностикумов и 1:6-1:8 для морганеллезных диагаэстихумов.

Нами было изготовлено 6 лабораторных серий коли (эшерихиозных) диагностикумов к 25 патогенным серогруппам эшерихий (01,02,08,09, 015,020,026,033,035,041,055,078,086,0101,0111,0115,0117,0119,0137, 0138,0139,0141,0142,0147,0149) и 3 оерия морганеллезных диагностикумов к 10 серогруппам морганелл (01,016,025,026,029,033,045,049, "4","К") .свойства которых приводятся ниже.

Эситротаторные коли-диагностиктмы. Преобладающее количество диагностикумов имело высокую активность (1:12800-1:51200) и лишь •небольшая их часть обладала средней активностью (1:3200-1:6400), один диагностикум вмел более низкую активность - 1:1600.

При проверке специфичности диагностикумов установлено ,что многие из них давали одностороннюю реакцию с отдельными гетерологкчны-ми сыворотками в разных титрах,однако в перекрестной РИГА с этими сыворотками реакция была отрицательной в титрах от 1:800 и выше. Данное обстоятельство исключало яеспецифическую реакцию при постановке РНАт,в которой агглютинирующие сыворотки иопользуются в высоких титрах,превышающих в 32-128 раз неспепифичесжЯе показатели РИГА. Все 25 типов диагностикумов обладали специфичностью действия и выявляли эшеряхии только гомологичной серогрушш при исследовании Ъ РНАт микробных взвесей,содержащих микроорганизмы разных семейств, родов и видов,а также при исследовании проб соскобов о полов животноводческих помещений и фехаяий молодняка,в котодох присутствовала разнообразная микрофлора.

Предел чувствительности диагностикумов в опытах с частыми культурами эшерихий составлял у 6 препаратов 50-100 тыс м.к., у II -200 тыс-1,5 млн м.к. и у 8 - 3,1-12,5 млн м.к. В опытах с искусственно зараженными фекалиями животных показатели чувствительности у

части препаратов совпадали с результатами опытов с чистыми культу-раин тест-бактерий, у других диагностикумов они были в 2 раза ниже. У хранившиеся в течение 1,5-3,5 лет диагностикумов не изменялись физико-химические свойства эритроцитов и преобладающее их количество сохраняло исходную активность.

Црк испытании набора эритроянтарных коли-двагностикумов нами било исследовано 167 сборных проб соскобов с полов и смывов со отен ивдивидуаяьных клеток профилактория молочных ферм и станков свинарников-маточников из 7 хозяйств,в т.ч. 56 проб одновременно двумя методами: бактериологическим и в РНАт. Проведенные исследования показали, что все положительные результаты,полученные бактериологическим методом,подтверждались показателями РНАт, однако за счет последней число находок эшерихий патогенных серогрупп было на 4С,3$ больше, чей при использовании бактериологического метода (соответственно в 149 и 89 случаях),что можно объяснить высокой чувствительностью РНАт и ее возможностью обнаруживать искомые бактерии в пробах,где содержится их невысокая концентрация. Преимущество РНАт проявлялось также и в том,что она позволяла выявлять в нативном материале патогенные эшерихии и уровень их концентрации независимо от присутствия в нем органических веществ в посторонних микроорганизмов в течение 6-7 ч, тогда как срок обнаружения данных бактерий бактериологическим методом составлял 5-6 сут. К тому же при использовании последнего вс многих случаях вообще не удавалось пронести отвивку колоний эшерихий и серотипиэацию культур из-за ползучего роста протея в первичных культурах на селективных питательных средах,что снижало результативность бактериологического метода исследования.

Производственные испытания опытных серий наборов эритроцитар-•ных коли-даагностикумов и ускоренного метода обнаружения патогенных серогрупп эшерихий о помощью РНАт .проведенные в Тверской в Липецкой областных ветлабораториях и Кузнецкой межрайонной ветлаборато-рии Пензенской области .подтвердили высокую достоверность РНАт, ее преимущества перед бактериологическим методом диагностики названных бактерий при одновременном исследовании обоими методами соскобов и смывов из репродукторных помещений животноводческих ферм,кормов и патологического материала и доступность указанной реакции для производственных диагностических ветлабораторий.

Ыорганедлезные эритропитарные диагностикумы. Все типы диагностикумов обладала высокой активностью (1:25600-1:51200. один 1:12800) и специфичностью действия,реагируя в перекрестной РИГА в титрах от 1:800 и выше только с бактериями гомологичных серогрупп морганвлл.

Специфичность диагдастикумов проявлялась также в опыта* о чистыми я смешанными культурами разных видов грамотрицательных и грамположч-тельяых микроорганизмов,относящимся к различным семействам и родам.

Предел чувствительности диагдастикумов в опытах со взвесями чистых культур морганелл составлял у 6 препаратов 0,2-0,8 млн м.к., у 4-х - 1,55-3,1 млн м.к. Все приготовленные диаггостикумы сохраняли свои физико-химические свойства и достаточно высокую активность в. течение 3-х летнего периода хранения (срок наблюдения) и использования в работе,хотя у некоторых препаратов двух серий (соответственно у пяти и четырех) отмечалось снижение активности через 14-19 мес после изготовления в 2-4 раза до титров 1:12800.

Производственное испытание опытных (лабораторных) серий наборов морганеллезных эритроцигарных диагдастикумов и ускоренного серологического метода индикации патогенных серогрупп морганелл проводили на базе трех молочных и трех свиноводческих ферм,на которых брали материал и после его доставки в ветлабораторню подвергали исследованию бактериологическим методом и в РН&т,используя для последней смывы с первичных культур на агаре Плоски рева в чешках, получении е после посева материала и инкубирования чашек при 37 °С в течение 16-18 ч. Одновременному исследованию двумя методами было подвергнуто 64 пробы различных материалов: ооскобов с полов репро-духторных помещений,фекалий больных диареей уелят я поросят; внутренних органов животных,погибших от желудочно-кишечных заболеваний, кормов.

В результате исследований культуры морганелл удалось ввдолять бактериологическим методом в 12 случаях (18,7? проб), а с помощью РНА.т искомые бактерии разных серогрупп были обнаружены в 19 пробах (29,6?). Все положительные результата бактериологического исследования „ за исключением одного .совпадали с иоложитальными дакязатея®-мв.РНАт, .да за счет последней морганеллы были дополнительно выявлены, в 8 случаях (12,5? проб) „тогда как бактериологическим методом названные бактерия дополнительно выделены лишь яг одной зробн.вде содержались морганеллы,не относящиеся к еерогруплам,® отношения которых имелись моргаяеллезкые диагностические нрэиараты»

Производственная апробация ШАт подтвердила те же яреюцущества данной реакции .которые были установлены при испытании набора эритро-пзтаршгх коли-диагностикумов для ускоренной ивдикацяЕ яатогвшшх се-рогрукя эшерихий,несмотря на то,что общий срок обнаружения морга-неля з разных материалах составлял большее время (24-26 ч).

2.2.4.2. Результаты производственных испытаний опытно-промышленной партии морганеллезных диагностических препаратов и внедрения этих средств в практику

Для проведения широких производственных испытаний наборов морганеллезных агглютинирующих серогрупповых сывороток и эритроцитатных диагностикумов и ускоренного серологического метода индикации патогенных штаммов морганелл нам предстояло наработать большие объемы этих средств, в связи с чем были подготовлены,согласованы и утверждены в установленном порядке комплекты необходимой НТД на изготовление и контроль опытно-промышленных партий названных препаратов.

В 1989 г. на Грузинском биокомбинате были изготовлены (при непосредственном нашем участии) 2,3 дм3 (72 набора) морганеллезных агглютинирующих серогрупповых сывороток и 32 дм3 (160 наборов) морганеллезных эритропитарных диагностикумов к 8 серогруппам морганелл (01,016,026,029,033,045,049,"13").

Комиссионные приемочные испытания опытно-промышленных партий наборов морганеллезных диагностических препаратов,проведенные с участием представителей В1ЖИ ветпрепаратов,предприятия-изготовителя и авторов разработки,показали,что все типы морганеллезных агглютинирующих серогрупповых сывороток и морганеллезных эритроцитар-ных диагностикумов по своему качеству и свойствам отвечали требованиям ТУ 10.19.048-88 И ТУ 10.19.049-88.

Производственные испытания опытно-промышленных партий наборов морганеллезных агглютинирующих серогрупповых сывороток и эритроци-тарных диагностикумов,а также ускоренного серологического метода индикации морганелл проводились в соответствии с приказами ГУВ Л 33 от 5.04.90 г. и * 51 от 17.05.90 г. по программе .утвержденной ГУВ 14.05.90 г.,на базе двух республиканских (НПВ1 1Ъсагропрома РСФСР и Татарской) и пяти областных (Московской.Тамбовской,Рязанской,Липецкой,Волгоградской) ветлабораторий. В период испытания препаратов и ускоренного метода индикации морганелл одновременному исследованию в РНАт и бактериологическим методом было подвергнуто 104 трупа новорожденных телят и поросят-сосунов,погибших, от желудочно-кишечных заболеваний, 56 сборных проб фекалг.'а больных диареей животных, 24 пробы смывов с туш и оборудования ферм, 6 проб кормов, а также 12 зашифрованных проб фекалий поросят,часть из которых была искусственно заражена суспензиями разных серогрупп морганелл. Кроме того в республиканской НПВЛ комиссия ГУВ провела проверку свойств всех ти-

пов эритроцитарных моргаивллезных диагностикумов (активности,специфичности .предела чувствительности).

Результаты комиссионной проверки подтвердили высокую активность диагностикумов,специфичность их действия и большую чувствительность при выявлении морганелл в смешанных культурах микроорганизмов разных родов и видов. Итоги производственных испытаний ускоренного метода индикации моргаяелл показали совпадение результатов экспертиз при исследовании различных материалов двумя методами во всех лабораториях, за исключением Тамбовской,где находки морганвял в фекалиях больных телят и поросят отмечались только одним серологическим методом. Сделанная в заключениях из всех лабораторий и комиссией ГУБ оценка о высокой специфичности РНЛт, доступности ее для производственных ветлабораторий, большой производительности и экономичности в сравнении с бактериологическим методом диагностики морганелл послужила основанием рекомендовать данную реакцию для внедрения в широкую практику при наличии промышленного производства наборов морга-неллеэных диагностических препаратов.

На основании изложенного нами были разработаны (о учетом технологических особенностей получения исходных компонентов а процессов производства диагностикумов) комплекты НТД на промышленное из-готовленнэ наборов моргаиеляезных эритроцитарных диагностикумов я нативкых морганеляезных агглютинирующих серогрупповых сывороток,которые после согласования о заинтересованными организациями утверждены ЕУВ и дирекцией института» Приказом по ЕУВ Минсвльхоза СССР за * 72 от 17.12.91 г. наборы вышеназванных препаратов приняты к использованию в ветеринарной практике.

2.2.4.3. Взыскание .испытание и внедрение ускоренного метода индикащш энтеропатогенных эшерихий о адгезивными антигенами на ооюве использования реакции коагглютинадаи

Для решения вопроса о возможности использования реакции ко агглютинации (НСОА) о целью ускоренной индикации энтеропатогенных эшерихий в окружающей среде нам предстояло определить оптимальные режимы приготовления коагглютинирующих диагностикумов к разным типам адгезивных антигенов эшерихий,а также свойства этих диагностикумов (специфичность,предел чувствительности) после получения и в процессе их продолжительного хранения; установить пригодность РКОА для исследования натнвнэго материала (соскобов с полов помещений,фека-

лий животных) и смывов с культур бактерий на охотных селективных питательных средах,содержащих красители.

Дня приготовления эшерихиозных коагглютинирующих диагностикумов применяли коммерческий "Стафилококковый реагент, содержащий белок А, сухой".изготовленный предприятием по производству бактерийных препаратов Санкт-Петербургского НИИЭЫ им. Шстера. Сенсибилизацию стафилококкового реагента проводили коммерческими антиадгезив-шош агглютинирующими колясыворотками K88.K99.987E.F4I,А20,изготовленными во ВШИ прикладной микробиологии. На первоначальном этапе при получении коагглютинирующих диагностикумов использовали неразведанные и разведенные в 5,10,20 и 40 раз аятиадгезивяые сыворотки и разную экспозицию процесса сенсибилизации: 3,10,20,40 и 60 мин. Приготовленные диагностикумы консервировали раствором мертиолята.

Предел чувствительности диагностикумов устанавливали в ИСОА в опытах с чистыми культурами гомологичных штаммов тест-бактерий в концентрациях от I млрц до 2 млн м.к./см3, а также в опытах со смешанными культурами разных видов микроорганизмов,содержащих те se саше концентрации тест-бактерий. Ахтившсть препаратов определяли после приготовления диагностикумов,а затем через каждые 1-1,5 мое в течение 6 мес срока их хранения при температуре 4 °С. Специфичность диагностикумов проверяли в опытах с культурами бактерий разных семейств,родов и видов,а также со штаммами эшерихий.не содержащих и содержащих различные типы адгезивных антигенов.

В результате исследований установлено,что для получения активных коагглютинирующих диагностикумов необходимо использовать агглютинирующие сыворотки.содержащие иммуноглобулины класса G в титре не менее 1:128 (по показателям РИГА). Разведение агглютинирующих анти-едгезивных эшерихиозных сывороток 1:20 обеспечивало сохранение указанного уровня иммуноглобулинов класса О, что давало возможность получать активные диагностикумы к соответствующим сероварам бактерий с максимальным пределом чувствительности. Сенсибилизация стафилококкового реагента иммуноглобулинами специфических сывороток наступала уже через 3 мин после смешивания компонентов и выдерживания смеси при комнатной температуре (20-22 °С). Увеличение экспозиции процесса сенсибилизации не приводило к существенному повышению предела чувствительности коагглютинирующих диагностикумов. Приготовленные диагностикумы имели предел чувствительности 8-16 млн м.к./ ом3 в опытах с чистыми культурами гомологичных штаммов тест-бактерий; в опытах со смешанными культурами чувствительность диагностикумов уменьшалась в 2-4 раза.однако это обстоятельство не снижало

преимуществ РКОА в результативности индикации искомых бактерий по сравнений с бактериологическим методом их обнаружения. Все типы ди-вгностикумов обладала специфичностью и выявляли в смешанных культурах микроорганизмов разных семейств,родов и видов только эшерихии с гомологичными типами адгезивных антигенов. Предел чувствительности препаратов сохранялся в течение трех мес, после чего происходило его снижение.

При производственном испытании РКОА исследованию было подвергнуто 86 сборных проб соскобов с полов репродукторных помещений животноводческих ферм и фекалий новорожденных телят и лорооят-сооувов из четырех молочных и пяти свиноводческих ферм,а также 9 трупов телят, погибших от диареи. Исследованию в РКОА подлежали смывы с первичных культур энтеробактерий на плотных питательных средах (Эндо, 1ввина,Шгоскирева,Мииса,ША) .выделенные из разных материалов. Каждую пробу материала исследовали двумя методами: бактериологическим с серотипярованием по 10-12 культур эшерихий, выделенных из одной пробы, и в РКОА.

Результаты испытаний показали,что с помощью РКОА искомые бактерии удавалось выявлять ва 245? чаща,чем бактериологическим методом. Обнаружение звтеропатогенянх эшерихий с адгезивными антигенами К88, К99, роже 987Р и P4I бактериологическим методом почти всегда (за исключение» одного случая из числа 37) подтверждалось положительными показателями РКОА.

Для выяснения возможности использования в FKOA нативного материала ин исследовали 42 пробы фекалий клинически здоровых и больных диареей, телят и поросят, предварительно разведенных в забуференном физиологическом растворе (1:10-1:15) и профильтрованных через ватно-марлеввй фильтр. Эти исследования позволили установить,что нативный материал на »tote? быть пригоден для РКОА ввиду частых случаев неспе-цйфической реакции. В частности, из общего числа указанных проб в 13 случаях (31%) отмечалась положительная реакция яри смешивании фекалий животных как с коагглетивирущим" диагдастикумами (К88.К99), так и в контроле с несенсибилизированным стафилококковым реагентом.

Исходя из установленного факта,что при сенсибилизации стафилококкового реагента,содержащего белок А, адсорбция последним иммуноглобулинов класса & специфической агглютинирующей сыворотки наступает уже через 3 мин, мы разработали модификацию способа постановки FKOA (A.c. * I480I77 "Способ выявления антигена в биологическом материале") .исключающую необходимость предварительного изготовле-

шш ко агглютинирующих диагностикумов для данной реакции за счет одновременного смешивания трех компонентов: исследуемого материала, стафилококкового реагента и специфической агглютинирующей сыворотки.

Комиссионное испытание ускоренного метода индикации энтеропатогенных эшерихий с адгезивными антигенами в различных материалах о помощью известного и разработанного нами способа постановки НСОА подтвердило высокую чувствительность и специфичность этой реакции и ее преимущества перед бактериологическим методом обнаружения названных бактерий в результативности и времени исследования материала (18-20 ч вместо 3 сут).повышении производительности труда (в 8-10 раз) и снижении расхода дорогостоящих агглютинирующих сывороток (в 12-24 раза).

Представленные данные шаволяют заключить,что ЕКОА как наиболее простой по технике выполнения метод ускоренной индикации энте-ропатогенных ашерихий с адгезивными антигенами в окружающей среде может успешно использоваться для мониторинга репродукторных помещений животноводческих ферм с целью оценки их санитарного состояния и прогнозирования эпизоотической обстановки,а также для диагностики патологического материала на колибактериоз (эшерихиоз).

2.2.5. Теоретическое обоснование путей направленного регулирования мшсробиоценоза в репродукторных помещениях животноводческих ферм и требований к пробиотическим препаратам в целях профилактики диарейяых заболеваний новорожденного молодняка

Известно .что накопление в помещении потешдаальда патогенных для новорожденных животных микробов и попадание их в пищеварительный тракт приводит при наличия экзо- или эндогенных факторов, снижающих иммуно-физиологическую резистентность молодняка, к нарушению равновесия между «акро- и микроорганизмами и проявлению последними своей болезнетворности. Поэтому незыблемыми способами наспе-цафической профилактики массовых диарейяых заболеваний новорожденного молодняка являются все рекомендуемые в нормативных документах технологические,зоотехнические,зоогигиенические,ветеринарно-сани-тарные и общие противоэпизоотические мероприятия,направленные на создание оптимального санитарно-гигиенического режима при рождении и выращивании молодняке; комплектование секции репродукторного помещения однородной по возрасту я физиологическому статусу группой родившихся животных; обеспечение нормальной функции молочной желе-

зы коров я свиаомагок; пошлете естественной резистентности организма новорожденных животных за счет надлежащих условий их содержания и режима кормления; исключение воздействия стрессовых факторов. Однако реализация перечисленных мероприятий не исключает постоянное поступление в окружающую среду патогенных микроорганизмов с экскрементами клинически здоровых свиноматок и коров - бактерионосителей, через контаминированные корма и другие источники,а также с экскрементами больного диареей новорожденного молодняка при возникновении первых случаев болезни,что может приводить к быстрому их распространению в помещении и вовлечению в процесс биоценоза с преобладанием в нем патогенных штаммов энтеробактерий и других микробов.

Из изложенного следует,что предотвращение энзоотических вспышек диарейных заболеваний,вызываемых условно-патогенными бактериями,может быть достигнуто при условии создания и поддержания в первые недели жизни животных благоприятного для них биоценоза,преобладающими компонентами которого являются непатогенные микробы. Решить эту задачу »южно путем направленного регулирования микробиоценоза в репродукторных помещениях животноводческих ферм за счет использования экологически безопасных препаратов из микробов-антагонистов, которые не подменяют,а должны дополнять комплекс вышеуказанных мероприятий по профилактике кишечных инфекций молодняка. Пороральдае применение названных препаратов родившимся животным позволяет на только создавать в пищеварительном тракте благоприятный биоценоз, препятствующий интенсивному размножению патогенных микроорганизмов и возникновению диареи,но и значительно снижать уровень возбудителей болезни в помещениях,поскольку основным и наиболее массивным источником их контаминации являются больные животные.

Существующие в нашей стране для профилактики и лечения диарей-ных заболеваний молодняка пробиотические препараты,содержащие те или другие виды микробов-антагонистов (бифидумбактерин ветеринарный .лактовлт.стрептобифицид,бифацидобактерин.пропиацид, АЕК.ПАБК и пр.).имеют ряд недостатков,ограничивающий возможность их широкого применения (особенно на свиноводческих фермах) из-за необходимости многократного использования или получения желаемого эффекта при скармливании лишь больших доз,что намного удорожает курс обработки животного и создает технические неудобства обслуживающему персоналу. Эти обстоятельства задвигают необходимость изыскания более совершенных пробиотических средств,исключающих недостатки указанных препаратов, в связи о чем большую актуальность имеет поиск штаммов микробов-антагонистов с оптимальными свойствами. Такие штаммы дол-

хны отвечать следующим требованиям:

- активно продуцировать антимикробные вещества .обладающие широким спектром действия в отношении разных видов бактерий .наиболее часто вызывающих днарейные заболевания у новорожденных телят и поросят-сосунов;

- обладать способностью быстрого размшжения в кишечнике телят

и поросят и колонизацией в нем на срок не менее 7«~8 сут после однократного скармливания новорожденным животным;

- сохранять жизнеспособность в кислой среде в в субстратах,содержащих желчь;

- обеспечивать создание благоприятного микробиоценоза в кишечнике животных после 1-2-х кратного применения телятам и.2-3-х кратного скармливания поросятам в минимально действующих дозах на период наибольшей подверженности их к заболеванию (первые 2-3 недели жизни);

- создавать безопасный для здоровья телят и поросят уровень патогенных штаммов энтеробактерий в ропродуктордах помещениях молочных и свиноводческих ферм.

Таким образом неспецифическая профилактика диарейных заболеваний новорожденных телят и поросят-сосунов должна включать комплекс различных мероприятий,обеспечивающих высокую естественную резистентность родившихся животных к шфекту;. исключение действия неблагоприятных факторов окружающей среды .способствующих возникновению и развитию инфекционного процесса; снижение уровня условно-патогенных и патогенных микробов в помещениях при рождении и выращивании молодняка. Важное место в формировании на ферме благоприятного микробиоценоза принадлежит препаратам из микробов-антагонистов,широкое применение которых может значительно сократить заболевае&юсть и падеж молодняка от кишечных инфекций.

3. ВЫ В ОД Ц

3.1. Разработаны новое направление и методологическое ранение у окоренной санитарно-бактериологической оценки репродуктордах помещений свиноводческих и молочных ферм в период их аксолуатадаи .которые позволяют более достоверно контролировать и прогнозировать в них санатарво-эпиэоотическую обстановку и в случае необходимости своевременно проводить комплекс дополнительных вот<&ра каряо-санитар-ннх и других мероприятий,предотвращающих вспышку даарен у новорожденного молодняка.

Установлены этиологическая роль энтеробактерий вида Могвале!-

la norganü в диарейных заболеваниях новорожденных телят и поросят-сосунов и значение их в санитарной оценке репродукторных помещений животноводческих ферм; для Индикации эпизоотических штаммов данных бактерий разработаны наборы новых диагностических препаратов я предложен ускоренный серологический метод их обнаружения в различных объектах.

3.2. Изучены видовой состав и количественный уровень условно-патогенной микрофлоры, циркулирующей в репродукторных помещениях свиноводческих и молочтах ферм при отсутствии массовых желудочно-кишечных заболеваний поросят-сосунов и новорожденных телят. Установлено, что данная микрофлора представлена ограниченным числом видов семейства Enterobacteriaceae и количественный уровень ее в фекалиях молодняка и помещениях значительно варьирует как в пределах одной,так и на разных фермах, а также в различные сроки выращивания животных, что не позволяет установить какие-либо нормативные количественные показатели указанных микроорганизмов.

3.3. В благополучных по диарейным заболеваниям молодняка репродукторных помещениях свиноводческих и молочных ферм в составе условно-патогенной микрофлоры преобладают непатогенные штаммы бактерий. В частности,большинство выделенных из этих помещений культур разных видов энтеробактерий (61-75$) не обладало патогекностью для белых мышей, 88-94!? культур эшерихий не типировалось набором коммерческих агглютинирующих О-колиснвороток и 80-92$ культур - набором аятиадгезивных колисывороток.

3.4. При наличии массовых диарейных заболеваний поросят-сосунов и новорожденных телят условно-патогенная микрофлора репродукторных помещений свиноводческих и молочных ферм содержит большее разнообразие видов семейства Enterobacteriaceae особенно на крупных фермах и промышленных комплексах,среди которых эпизооголотаческое значение имеют представители родов Escherichia, Proteus, Morganella, Citrobacter . Количественный уровень указанной микрофлоры в разных хозяйствах и разные сроки выращивания молодняка существенно отличается я зависит от многих факторов,определяющих формирование биоценоза на каждой конкретной ферме.

3.5. На неблагополучных по диарейным заболеваниям молодняка животноводческих фермах микрофлора фекалий больных поросят и телят, а также помещений свинарников-маточников и профилакториев содержит преимущественно патогенные штаммы разных видов энтеробактерий независимо от этиологической структуры возбудителей болезни (только ба-

ктериальныа агенты или сошестно с вирусными агентами). Число патогенных для белых мышей культур разных видов знтеробактерий .выделенных из указанных объектах на свиноводческих фермах,составляло 7389? и на молочных фермах - 62-90?, количество культур эшерихий патогенных серогрупп - соответственно 33-78?, а культур эшерихий с адгезивными антигенами - соответственно 27-64? и 48?.

3.6. В опытах экспериментального заражения новорожденных поросят и телят полевыми штаммами иогвапеИа тогеааи установлена патогенное» этих бактерий для указанных видов животных, у которых они вызывают воспаление желудочно-кишечного тракта и септицемию.

3.7. Изучены морфологические.культуральные.ферментативные.антигенные .серологические , имму но генные, патогенные и гемолитические свойства 44 полевых штаммов КогеапеНа тогкапи «выделенных из разных материалов.а также место данных бактерий в биоценозе репро-дукторшх помещений свиюводческих и молочных ферм. Определен состав серологических групп морганелл,циркулирующих в животноводческих хозяйствах разных регионов страны, и выявлены их доминирующие серогрушш,имеющие эпизоотологическое и эпидемиологическое значение.

3.8. Даш экспериментальное обоснование непригодности санитар-но-показателышх микроорганизмов - бактерий группы кишечной палочки (включающей представителей различных родов в видов лахтозополо-жвтельных энтаробактерий). протея и показателя общего микробного числа .-«ля санатарно-бактериологическо й оценки поверхностей помещений животноводческих ферм в период выращивания молодняка.

3.9. Разработаны тесты и критерии санитарно-бактариологичеокой оценка репродукторннх помещений свиюводческих и молочных ферм,позволяющие объективно отражать в прогнозировать в них эпизоотическую обстановку при отсутствии "классических" инфекций молодняка.

В качестве микробных тестов,отражающих степень контаминации этих помещений патогенными штаммами разных видов энтеробактерий.предложены энтеропатогенные эшерихии с адгезивными антигенами К88.К99. 987Е.Г41, уровень которых в окружающей среде коррелирует с эпизоотической обстановкой на ферме.

3.10. Для ускоренной индикации энтеропатогенных эшерихий с адгезивными антигенами в репродукторных помещениях животноводческих ферм с целью их мониторинга и лабораторной диагностики колибактери-оза (эшерихяоза) рекомендована реакция коагглютинации (РКОА).имеющая большие преимущества перед бактериологическим методом обнаружения указанных бактерий в результативности,времени и экономичности исследования материала,а также в доступности для либнх производст-

венных диагностических ветлабораторий.

3.11. Разработан более простой способ постановки НСОА для об__ I

наружекия: энтеропатогенннх эшерихий с адгезивными- антигенами и других бактерий в смешанных культурах микробов,наделенных из различных материалов, который не требует изготовления коагглютинирующих диаг-ностикумов и по чувствительности не уступает известному способу постановки данной реакции.

3.12. Определены оптимальные режимы изготовления эритроцитар-ных антигенных зшерихиозных и морганеллезных диагностикумо в, пред назначенных для использования в реакции нейтрализации антител (РНАт), позволяющие получать высокоактивные препараты с длительным (свыше 3-х лет) сроком действия. В частности,предложены: формалиннзация эритроцитов барана при экспозиции 3 ч, экстрагирование О-антигена (сенситина) из бактериальной, взвеси в концентрации 25-30 млрд м.к./ см3 при рН 8,0-8,5; сенсибилизация эритроцитов при температуре 4547 °С в течение 3 ч сенситинамл эшерихий и морганелл,разведенными соответственно в 4-5 и 6-8 раз.

3.13. Для изготовления морганеллезных агглютинирующих серогруп-повЫх сывороток,используемых при серологической идентификации и ускоренной индикации эпизоотических штаммов морганелл в РНАт, разработана схема гипериммунизации кроликов О-антигенами этих бактерий,обеспечивающая получение активных (в титрах 1:800-1:3200) и специфичных препаратов. Данная схема включает 5-ти кратную иммунизацию кроликов термически обработанной (при 100 °С в течение 2,5 ч ) оуспен-зией отмытых клеток морганелл в нарастающих дозах (1,2,3,4,6 млрд м.к.) с интервалом 4-5 сут.

3.14. Выявленные при изготовлении опытно-промышленных партий наборов эритроцитарных морганеллезных диагностикуиов и наборов иор-ганеллезных агглютинирующих серогрупповых сывороток к 8 серогруппам морганелл (01,016,026,029,033,045,049,"13") особенности технологических процессов их производства,влияющие на качество препаратов, вошли в разработанную нормативно-техническую документацию на промышленное изготовление "Набора диагиостикумов морганеллезных эритро-цитарных" и "Набора нативных сывороток морганеллезных агглютинирующих серогруппових".

3.15. Дано теоретическое обоснование путей направленного регулирования микробиоценоза в помещениях свинарников-маточников и профилакториев молочных ферм,позволяющих повысить эффективность неспецифической профилактики кишечных инфекций поросят-сосунов и новоро-

еденных телят.обусловленных уеловно-патогеиными микроорганизмами. В решении этой задачи наряду с технологическими,зоотехническими,зоо-гигиегаческями.ветеринарно-сакитарными и общими противоэпизоотичес-кими мероприятиями вахюе место должны занимать про биотические препараты, способные создавать в кишечнике молодняка и окружающей среде благоприятный биоцеюз при наиболее экономичном и технически выполнимом режиме их применения. Для изыскания оптимально действующих пробиотических препаратов разработаны требования к штаммам микробов-антагонистов, использование которых может существенно сохратить заболеваемость и падеж молодняка от диареи.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРИЛОЖЕНИЯ

Материалы диссертации вошли в следующие предназначенные для практики документы:

4.1. Методика выделения некоторых групп микроорганизмов кишечной микрофлоры поросят. Одобрена отделением животноводства ВАСХШ1 25.06.65.

4.2. Временная инструкция о мероприятиях по борьбе о колибак-териозом молодняка сельскохозяйственных животных. Утверждена ГУВ МСХ СССР 8.12.76.

4.3. Методические указания по ускоренной индикации морганелл, сальмонелл и энтеропагогенных адерахий с адгезивными антигенами К8£ и К9Э 1 объектах внешней среды,кормах и патологическом материале при помощи реакции коагглютинации. Утверждены ГУВ ГЪсагропрома СССР 18.01.89.

4.4. Методические указания по бактериологичоской диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных,вызываемой патогенными энтеробактериями. Утверждены ГУВ Минсельхозпрода СССР 12.II.9:

4.5. Методические указания по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных. Утверждены IVB Минсельхозпрода СССР 12.12.91.

4.6. Инструкция по изготовлению и контролю набора сывороток нативных морганеллезных агглютинирующих серогрупшвых. Утверждена директором ВНИИВСГЭ 14.II.91.

4.7. ТУ 10.07.259-91. Набор сывороток нативных морганеллезных агглютинирующих серогрушовых, Утверждены ГУВ Минсельхозпрода CCCI 12.II.91; зарегистрирована в ХЪскомстаадартов Совмина СССР за £ 2477 от 26.12.91.

4.8. Наставление по применению набора сывороток нативных мор-

ганэллезных агглютинирующих серогдуппошх. Утверждено I7B Минсельхозпрода СССР 12.12.91.

4.9. Инструкция по изготовлению и контролю набора диагностику-мов моргаяеллезных эритроцитарных. Утверждена директором ВНИИВСГЭ 14.II.91.

4.10. ТУ 10.07.258-91. Набор диагностикумов морганаллезннх эритроцитарннх. Утвервдеш: ЕУВ Мичсельхозпрода СССР 12.11.91; зарегистрированы в 1Ъскомставдартов Совмина СССР за * 2478 от 26.12.91.

4.11. Наставление по применению набора диагностикумов морга-неллеэных эритроцитарннх. Утверждено ЕУВ Минсельхозпрода СССР 12.12.91.

5. СПИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАНИЯ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Коляков а.Е..Гитальсон С.С.,Каврук Л.С. Колибахтериоз телят // Монография. Мэсква, 1970, 223 с.

2. Каврук Л.С. Изучение видов и разновидностей a.coll .выделенных из кишечнтка клинически здоровых поросят-сосунов и больных неспецифическим энтеритом // Материалы 7 научн.коt4i.no ин$екц. и икваз. заболеваниям с.-х. животных. Тр. МВА,1961,с. 64-66.

3. Каврук Л.С. Материалы по изучению энтеропатогенных сероти-юв кишечной палочки,выделяемых из кишечника поросят // Материалы Всесоюзн. конф. ю болезням молодняка с.-х. животных и птиц. Москва. 1964, о. 144-145.

4. Коляков Я.Е. ,1Ъгольсон С.С. .Каврук Л.С. Методика бактериологической диагностики колибактериоза // Изд.МВА,Москва,1967, 12 с.

5. йтельсон С.С.,Каврук Л.С. Вопросы микробиологической диагностики колибактериоза телят // Профилактике заболеваний молодняка с.-х. животных. Материалы Всесоюзн. кояф.,Москва, 1968,о. 150-152.

6. Коляков Я.Е. .Каврук Л.С. Экспериментальное изменение антигенных свойств Escherichia coli //Тр.MBA,1970, Т.54, с,138-143.

7. Каврук Л.С. Килечная палочка // Ветерин. энциклопедия, 1972., т.З, с. 384-387.

S. Коляков Я.Е..Пивльсон С.С.,Каврук Л.С. Колибахтериоз молодняка // Ветеран, энциклопедия,1972, т.З, о. 494-499.

9. Коляков Я.Е. .Пмвльсон С .С.,Каврук Л.С. Основные вопроси иммуногенеза при коли-ни$вхцм1 телят // йжунитет о.-х. животных. Матера алы Всесовэк. кои$.,Иоскм, 1973, с. 217-221.

10. Яржх B.C. .Каврук Л.С. Матераажы по санжтарао-бахтерволо-гической характеристике помещений промшленного комплекса дая откорма крупяэго рогатого окота // Тр. ВНИИВС, 1974, т. 49» о. 3-И.

11. Каврук Л.С. Изучение патогенных свойств кишечной палочки в опытах на куриных эмбрионах и белых мышах // Тр.БНИИВС,1976,

т. 53, с. 3-6.

12. Каврук Л.С. Получение высокоактивных эритроцитарных коли-диагностикумов и их свойства в процессе длительного хранения // Гигиена и ветерин.-санит. требования к промышл. животн. комолексам. Тр. ВНИИВС.1979, с. 15-23.

13. Каврук Л.С. Ускоренное обнаружение энтеропатогенвдх серо-тиюв кишечной палочки в животноводческих помещениях с помощью реакции нейтрализации антител // Тр. БНИИВС,1979, т.63,0. 3-8.

14. Yarnykh V.S. .Dudnitelcy I.A..Kavruk L.S.,Zhogov I.P. Sanitary-bacteriological eetlmation of houses in industrial technology animal enterprises// Papers of the XÎX111 Annual Conference of

European Association of animal production. USSH,Leningrad,16-19 August 1982, p.1-8.

15. Каврук Л.С. Значение санитарно-бактериологического контроля репродукторных помещений в профилактике инфекционной диареи ш-ворожденных телят и поросят // Актуальные вопросы эпизоотологии. Тез. д-дов Всесоюзн.научн.кои^. по пробл. эпизоотолопш. Казань, 1983, с. 61.

16. Каврук Л.С.,Бритова C.B..Гиряева И.О. Характеристика лак-то зоотра дательных кишечных бактерий.выделенных в репродукторных отделениях животноводчески*, комплексов // Дезинсекция животн. помещений и ветер, санитаркяна транспорте. Тр. ВНИИаС,1983, т. 77,

с. 96-102. .

17. Каврук Л.С. Роль ^organella morgan!1 в этиологии инфекционной диареи молодняка // Ветеринария,IS86, * З.с. 56-58.

18. Каврук Л.С..Бритова C.B. Определение серогрупповой принадлежности штаммов M.morganii ]] Ветеринария,1987, Л 3, с.76-78.

19. Каврук Л.С. Ускоренное обнаружение ^organella nsorga -nil во внешней среде ,ко{ыах и в патологическом материале реакцией нейтрализации антител // Проблемы ветеринарной дезинсекции объектов животноводства. Тр. ВШИВС.1987, с. 16-20.

20. Каврук Л.С,,Бритова C.B. Смешанная кишечная инфекция молодняка сельскохозяйственных животных,протекающая с участием Morganella ¡sorganii // Эпизоотология,эпидемиология,средства диагностики,терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных. Материалы Всесоюзн. ко .Львов, 1988, 0; 343-344.

21. Каврук Л.С, .Кошненко А.Б. .Бритоьа C.B. Ускоренная ивди-