Гиперчувствительность животных к микробным антигенам воздушной среды закрытых помещений

Краснощекова, Юлия Викторовна

Диссертации по ветеринарии → Патология, онкология и морфология животных

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Гиперчувствительность животных к микробным антигенам воздушной среды закрытых помещений

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Краснощекова, Юлия Викторовна Ставрополь 2009 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 16.00.02

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Гиперчувствительность животных к микробным антигенам воздушной среды закрытых помещений

ци-з

На правах рукописи

Краснощекова Юлия Викторовна

ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ животных К МИКРОБНЫМ АНТИГЕНАМ ВОЗДУШНОЙ СРЕДЫ ЗАКРЫТЫХ ПОМЕЩЕНИЙ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных 16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ставрополь - 2009

003483298

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет»

Научный руководитель:

заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Дмитриев Анатолий Федорович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Лапина Татьяна Ивановна

кандидат ветеринарных наук Сурмило Алексей Петрович

Ведущая организация:

ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет»

Защита состоится « 2009 г. в /¿''часов на заседании

диссертационного совета Д 22^062.0/при ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет» по адресу: 355017, г. Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12, тел./факс: 8(8652) 28-67-38.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет».

Автореферат размещен на официальном сайте ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет» - http://www.stgau.ru «<££?» ¿сОАс^Л- 2009 г.

Автореферат разослан « 2009 г.

Ученый секретарь /пЛ^С&О^-

диссертационного совета (у^ Квочко А. Н.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Наряду с загрязнением окружающей среды промышленными предприятиями, сточными водами городов и населенных пунктов мощными источниками загрязнения биосферы стали крупные животноводческие фермы, комплексы и птицефабрики (Рыбаков Ю.А., 1997; Вершняк Т.В., Кузнецова C.B., Самуйленко С.А. и др., 2004; Дементьев Е.П., Казадаев В.А., 2004; Денисов A.A., 2005; Avram N.. 1999; Härtung J., 1999; Härtung J., Wathes C.M.,. 2001; OndrasovicovaO.,Ondrasovic M. et al., 2005).

Практика работы животноводческих ферм и птицеводческих предприятий свидетельствует о том, что при высокой степени загрязненности территорий и воздушной среды ферм биологическими и органическими отходами невозможно добиться полной реализации продуктивного и генетического потенциала сельскохозяйственных животных и птицы (Гущин В.Н. и др., ] 999; Лопата Ф.Ф., 2007; Seedorf J., Härtung J., 2002).

Значительная концентрация поголовья на ограниченных площадях, отсутствие активного моциона и ультрафиолетового облучения, низкий уровень санитарной культуры, несвоевременная организация и проведение ветеринарно-санитарных, профилактических и противоэпизоотических мероприятий'в ряде случаев способствуют формированию в воздушной среде популяции микроорганизмов, которые в результате многочисленных пассажей изменяют свои биологические свойства. В результате этого повышается их болезнетворное действие на животных, что обусловливает возникновение болезней в первую очередь у животных с ослабленной резистентностью (Мозжерин В.И., 2004; Петров А.М., 2004; Медведев А.П., Вербицкий A.A., Грибанова MB., 2006).

Большое значение при этом имеет иммунобиологическое состояние организма животного и совершенство его адаптивных механизмов, обеспечивающих необходимую функциональную перестройку и оптимальный режим функционирования. В этой связи микроорганизмы (в том числе и сапрофитные) и продукты их жизнедеятельности при значительной их концентрации в воздушной среде помещений представляют угрозу для животных и обслуживающего персонала, индуцируя возникновение сенсибилизации и повышенной чувствительности. Гиперчувствительность, и реакции клеточного иммунитета могут обусловливать различные патологические процессы, которыми иногда сопровождаются микробные инфекции (Воронин Е.С., Петров A.M. и др., 2002; Хаитов P.M., 2003; Воробьев АА., 2004; Москалев A.B., Сбойчаков В.Б., 2006).

В связи с этим особую остроту и актуальность приобретает проблема количественной и качественной оценки микробного фона воздушной среды закры-' тых помещений и его влияние на иммунобиологическое состояние организма.

Недооценка важности диагностики и коррекции нарушений функции иммунной системы может приводить к развитию иммунодефицитных состояний и обострению течения патологического процесса. Это обусловлено тем, что иммунная система наиболее чувствительна к воздействию различных неблагоприятных факторов (Федоров Ю.Н., Верховский O.A. и др., 1999; Смирнов B.C., Фрейдлин И.С., 2000; Воронин Е.С., Петров A.M. и др., 2002; Золотарева H.A., 2002; Хаитов P.M., 2006).

Целью наших исследований явилась микробиологическая оценка воздушной среды закрытых помещений и определение чувствительности организма животного к микробным антигенам биологического аэрозоля. ,,, Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить количественный и качественный состав биологического аэрозоля в животноводческих помещениях. ,. ¡,,.

2. Разработать способ определения чувствительности животного к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности.

3. Провести оценку чувствительности лабораторных и сельскохозяйственных животных к воздушной микрофлоре, накапливающейся в помещении.

Научная новизна. Разработано устройство «Прибор для улавливания микроорганизмов» (Патент на полезную модель № 37097 РФ, МГПС7 С 12 N 1/00) и способ определения чувствительности лошадей к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности (Решение Роспатента № 2008139718/15(051324) от 05.10.2009 о выдаче патента на изобретение по заявке от 06.10.2008). Впервые проведена оценка чувствительности лошадей к микробным антигенам воздушной среды помещения конюшни. Установлено, что микроорганизмы, независимо от их патогенности, а также продукты их жизнедеятельности, воздействуя на организм, вызывают иммунологическую перестройку с появлением особей, проявляющих гиперчувствительность к микробным антигенам.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработано, изготовлено и испытано устройство для улавливания микроорганизмов в воздушной среде. Устройство может использоваться для определения количественного и качественного состава микрофлоры воздушной среды помещений, а также при разработке санитарно-гигиенических требований и нормативов по бактериальной обсемененности воздуха помещений, в которых по условиям технологии требуется определенная степень чистоты, и при разработке мероприятий, направленных на своевременное обнаружение возбудителей болезней и оздоровление воздушной среды. Предложен способ определения чувствительности организма животного к микробным антигенам воздушной среды закрытых помещений, позволяющий выявлять особей с повышенной чувствительностью к антигенам микроорганизмов различных физиологических групп. Способ может использоваться для диагностики сенсибилизации при заболеваниях, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами.

Реализация результатов исследований. Основные результаты научных исследований вошли в отчеты по научно-исследовательской работе ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет» за 2004-2009 гг. Разработанный прибор для улавливания микроорганизмов экспонировался на IV Московском Международном салоне инноваций и инвестиций (2004), неделе высоких технологий (г. Санкт-Петербург, 2004), дне высоких технологий (г. Санкт-Петербург, 2005), Международной выставке-конгрессе «Высокие технолопш. Инновации. Инвестиции» (г. Санкт-Петербург, 2007).

Материалы исследований внедрены в ученый процесс при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по курсам кафедры эпизоотологии и микробиологии ФГОУ ВПО «Ставропольский ГАУ»: «Ветеринарная микробиология и иммунология», «Санитарная микробиология», по дисциплине «Теоретические основы биотехнологии», в научно-исследовательской работе лаборатории визуальной диагностики и патологии молодняка ГНУ «Северо-Кавказский зрнадьньш научно-исследовательский ветеринарный институт Российский ¡академии сельскохозяйственных наук», в бактериологическом отделе ГУКК «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», ГУРО «Ростовская областная ветеринарная лаборатория». .

Апробации работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены, одобрены на научных конференциях: IV Международной научной конференции «Биотехнология - охране окружающей среды», посвященной 295-летию М.В. Ломоносова, (Москва, 2006); 71-й ежегодной научной конференции молодых ученых и студентов (Ставрополь, 2007); ежегодной Международной научно-пракгаческой конференции «Состояние, перспективы, стратегия развития и научного,обеспечения овцеводства и козоводства РФ», (Ставрополь, 2007); IX Всероссийской научно-пракгаческой конференции «Ветеринарная медицина. Современны? проблемы и перспективы развития», (Саратов, 2009); XVII Московском Международном Ветеринарном Конгрессе (Москва, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 . научных работ, в том числе 2 из них в периодическом издании из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК Министерства образования ,и науки РФ. Получен патент на полезную модель «Прибор для улавливания микроорганизмов», решение о выдаче патента на изобретение «Способ определения чувствительности лошадей к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности». (1 Положения, выносимые на защиту:

1. Количественная и качественная оценка состава биологического аэрозоля возможна при использовании разработанного нами устройства, позволяющего осуществлять осаждение микроорганизмов в улавливающую жидкость конической емкости прибора и на бактериальный фильтр при выходе воздушного потока.

2. Микрофлора воздушной среды закрытых помещений при значительной ее концентрации представляет определенную опасность для животных, поскольку она индуцирует повышенную чувствительность организма (гиперчувствительность) и обусловливает, возникновение иммунопатологических состояний (полиаллергий). ,п

3. Способ определения чувствительности лошадей к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежнодга позволяет проводить тестирование животных через различные временные интервалы, дифференцированно выявлять особей, с повышенной чувствительностью к нескольким антигенам. "-<>,,

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 118 страницах, содержит введение, аналитический обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложеййя; иллюстрирована 14 таблицами и 13 рисунками. Список использованной литературы включает 224 источника, в том числе 37 иностранных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Исследования по теме диссертационной работы выполнены в 2004— 2009 гг. на кафёдре эпизоотологии и микробиологии Ставропольского государственного аграрного университета, в лабораториях обмена веществ, биохимии и ичмуншчЫетики СНИИЖК, в СтаврЬпольской межобластной ветеринарной лабораторий!

Объектами исследования бЬтли микроорганизмы воздушной среды помещений конноспортивной школы университета и вивария кафедры, представленные различными физиологическими группами (Staphylococcus, Streptococcus, Micrococcus, Escherichia, Proteus, Serratia, Bacillus), в том числе микроскопические грибы (Aspergillus, Penicillium, Candida, Мйсог, Rhizopus, Cladosporium), лабораторные белые крысы линии «Wistar» в количестве 80 голов обоего пола, спортивные лошади тракеннинской, ахалтекинской, буденновской и кабардинской пород в количестве 14 голов. В опыте использовались здоровые животные.

В помещениях определяли общее количество микроорганизмов, содержащихся в 1 л воздуха (КОЕ) и качественный состав микрофлоры. Концентрацию микроорганизмов в воздухе закрытых помещений определяли с помощью разработанного нами прибора для улавливания микроорганизмов (RU 37097 U1, 10.04.04) и методических рекомендаций «Исследование микробной обсемененности воздуха животноводческих помещений» (Дмитриев А.Ф., Морозов В.Ю. Ставрополь: Агрус, 2005.28 е.).

Взятие усредненной пробы йоздуха осуществляли с помощью электроаспиратора в режиме 5 л/мин, по 3 мин в трех точках по диагонали и в двух точках по вертикали помещения. Утреннее взятие пробы воздуха осуществляли в 7 часов до раздачи корма и замены подстилки, вечернее - 17 часов при аналогичных условиях. Отбор проб проводили еженедельно в различные периоды года (зимний, весенний, летний и осенний) в течение двух лет. Пробы воздуха брали в одной повторности.

Микробиологические исследования проводили в соответствии с методическим пособием и рекомендациями (Скородумов Д.И., Субботин В.В. и др., 2005; Смирнова Л.И., Кондратьева М.А. и др., 2005). Идентификацию выделенных культур осуществляли в соответствии с требованиями, изложенными в «Кратком определителе бактерий Берджи» (1997).

Из наиболее Представительных культур микроорганизмов воздушной среды по методам, изложенным в справочных руководствах Пастера Е.У., Овода В.В. и др. (1989), Воронина Е.С., Петрова A.M. и др. (2002), Ашуро-вовой З.Д. (2005), нами были приготовлены корпускулярные (Streptococcus

fuecalis, Streptococcus faecium, Micrococcus luteus, Serratia marcescehs) и вб-дорасгворимые (Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli) антигены, стандартизированные по стандартным образцам мутности ГНЙИ-СиКМБП им. ДА. Тарасевича с концентрацией 1-1,3 млрд. микробных клеток в 1 мл. Для сравнения использовали разведенные в 40 раз стандартные водорастворимые антигены (Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Candida albicans), полученные из Казанского НИИ эпидемиологии и микробиологии.

Лабораторные крысы при достижении физиологической и пбловой зрелости (4 месяца) с массой самок 180-220 г, самцов 230-280 г по принципу аналогов были разделены на 4 группы: первые три - опытные, четвертая -контрольная.

Для определения чувствительности лабораторных животных к антигенам микроорганизмов, накапливающихся в помещении.; провели аэрозольное воздействие водорастворимыми антигенами воздушной среды вивария на опытные группы животных в настольном портативном боксе. Так, 1 группу животных (п=20) подвергли воздействию микст антигеном (Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus), 2 группу (n=20) - Staphylococcus aureus, 3 группу (n=20) - Streptococcus faecalis, 4 группа (n=20),' контрольная, воздействию не подвергалась. Распыление жидкого антигена в количестве 2 мл осуществляли при помощи металлического коаксиального распылителя, обеспечивавшего относительно равномерное дробление жидкости и перемещение аэрозоля в боксе. Размеры частиц создаваемого аэрозоля относились к среднедисперсным, не превышали 4-6 мкм. Экспозиция воздействия на животных опытных групп была равна 30 мин.

Состояние гиперчувствительности организма крыс к микробным антигенам воздушной среды вивария определяли до и на 30, 60 и 90-й дни после воздействия путем постановки реакции лейкоцитолиза (Сохин A.A.:, Черйу-шенко Е.Ф., 1984) в нашей модификации.

Чувствительность организма лошадей к антигенам микрофлоры воздуха помещения конноспортивной школы проводили в период с марта по апрель двукратно с интервалом в 2 недели путем постановки реакции лейкоцитолиза с использованием корпускулярных, водорастворимых и стандартных антигенов.-

Состояние факторов неспецифической защиты и иммунного статуса лабораторных животных и лошадей оценивали по показателям: бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, содержанию белка и его фракций, морфологическому составу крови, фагоцитарной активности и интенсивности нейтрофилов, количеству Т- и B-лимфоцитов, концентрации циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), общего lg Е в сыворотке крови.

Морфологический анализ крови, лейкоцитарную формулу определяли общепринятыми методиками с использованием микроскопа и камеры Горяе-ва. Концентрацию гемоглобина определяли гематиновым методом Сагш с помощью гемометра ГС-3. Определение фагоцитарной активности нейтрофилов проводили по Кост и Стенко (Кудрявцев A.A., Кудрявцева Л.А., 1974), в качестве объекта фагоцитоза использовали частицы латекса (D = 1,5

мкм). Лизоцимную активность сыворотки крови определяли фогонефело-метрическим методом по Дорофейчуку В.Г. (1968) с использованием суточной агаровой культуры Micrococcus lysodeicticus штамм 2665. Бактерицидную активность сыворотки крови определяли фотонефелометрическцм методом, описанным Смирновой О.В. и Кузьминой Т.А. (1966) в модификации Бухарина О.В. и Созыкина В. Л. (1979) с использованием суточной агаровой культуры Escherichia coli штамм 078.

Определение общего белка в сыворотке крови животных осуществляли рефрактометрическим методом в рефрактометре RL 140 (Poland), белковых фракций - нефеломеггрическим (турбидиметрическим) методом (Методические указания по применению унифицированных биохимических методов исследования 1фОви, мочи и молока в ветеринарных лабораториях. М., 1981.84 е.).

¡ Определение Т-лимфоцитов осуществляли методом спонтанного розетко-образования с эритроцитами барана (Е-РОК). Определение соотношения лимфоцитов с хелперной и супрессорной функциями проводили, ç теофиллиновом тееге. Определение B-лимфоцитов проводили методом ррзеткообразования с эритроцитами мыши в системе ЕАС (Фримеяь Х.М., 1987). Определение концентрации циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови проводили методом преципитации полиэтиленгликолем молекулярной массой 6000 (ПЭГбооо) (Digeon M. et al., 1977). Определение концентрации общего Ig Е в сыворотке крови проводили с помощью твердофазного ИФА («сэндвич») с использованием монорецепторных сывороток к Ig Е фирмы «Вектор Бест».

Статистическую обработку данных проводили с использованием алгоритмов статистического анализа, реализованных в Microsoft Excel 2007, программе Primer of Biostatistics (Version 4.03) с учетом рекомендаций по статистической обработке результатов биологических и медицинских исследований (Лебедева В.Л., 1997; ГлаНЦ С., 1998). : ; .. :

Графический материал результатов (графики, диаграммы) был получен с использованием программы Microsoft Excel 2007.

■ 'il;. ■ ' i-

■„■„im.-, 2.2. Результаты исследований

2;2.1. Бактериальная обсемененность воздушной среды закрытых

помещений

ЭДи,1фобиологический анализ биологического аэрозоля помещения конноспортивной школы и вивария кафедры показал, что количественный и видовой состав микроорганизмов в воздухе этих помещений подвержен изменчивости (табл.1, 2),

Качественный состав микрофлоры воздуха помещения конноспортивной школы характеризовался наличием Escherichia coli, Proteus,,mirabilis, Serratia marcescens, Bacillus sublilis, Bacillus cereus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus faecium, Streptococcus faecalis, Staphylococcus epi-dermidis, Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, в том числе микроскопических грибов - Pénicillium sp., Aspergillus flavus, Asp. fiimigatus. Asp. niger, Mucor racemosus, Rhizopus nigricans, Cladospor'mm sp.

Бактериальный фон биологического аэрозоля вивария представлен условно-патогенными микроорганизмами Escherichia coli, Proteus mirabilis, Serratia marcescens, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Streptococcus faecium, Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, в том числе микроскопическими грибами Pénicillium sp., Aspergillus flavus, Asp. fumigatus, Mucor racemosus, Rhizopus nigricans, Cladosporium sp.

Таблица 1

Общая бактериальная обсемёненность воздуха закрытых помещений (КОЕ/л, М±ш)

Время Время^^года суток Весна Лето Осень Зима

Конноспортивная школа

Утро 923,03±49,81 3693,00±164,03 2733,75±189,34 4575,00±177,03

Вечер 478,13±32,43 2673,00±178,80 2193,75±160,48 2753,75±112,61

Виварий

Утро 6193,75±482,04 10100,00±889,42 7375,00±574;38 9068,75±433,93

Вечер 3665,00±417,42 7300,00±314,53 3615,00±564,94 6550,00±492,44

Изменение общей бактериальной обсемененности воздушной среды помещения . конноспортивной школы (табл. 1) характеризовалось максимальным количеством микроорганизмов в зимнее время года (в утренние часы 4575,00-! 177,03 КОЕ/л, вечерние- 2753,75±112,61 КОЕ/л), минимальным -весеннее (в утренние часы 923,03*49.81 КОЕ/л, вечерние - 478,13±32,43 КОЕ/л). Обхцее количество микроскопических грибов также имело тенденцию к увеличению в зимний период и составило в весенний период 18,51± 1,09 КОЕ/л, летний - 27,77±0,74 КОЕ/л, осенний - 32,31±1,10 КОЕ/л,.и зимний -39,09±0,98 КОЕ/л. Достоверные различия общей бактериальной обсемененности воздуха помещения конноспортивной школы установлены, между периодами года: весна - лето, весна — осень, весна — зима (р<0,00,1), лето -осень, лето - зима (р<0,01), осень - зима (р<0,001).

Общая бактериальная обсемененность воздуха помещения вивария в течение года за наблюдаемый период колебалась от 3615,00±564,94 (осень) до 10100,00±889,42 (лето) КОЕ/л воздуха. Максимальное количество микроорганизмов наблюдалось в летний период (в утренние часы 10100,00±889,42 КОЕ/л и вечерние - 7300,00±314,53 КОЕ/л). Достоверные различия общей бактериальной обсемененности воздуха помещения вивария установлены между периодами года: весна - лето, весна - зима, лето - осень (р<0,01), осень - зима (р<0,05).

В утреннее время в обоих помещениях наблюдалось увеличение количества микроорганизмов по сравнению с вечерним в 1,2-2 раза.

Таблица 2

Количество микроорганизмов различных физиологических групп в воздухе закрытых помещений (КОЕ/л, М±т)

-Время года Род м/о ------- Весна Лето Осень Зима..

Конноспортивная школа

Streptococcus 185Д5±15,67 916,05±99,71 756,63±71,56 1058,11±44,46

Staphylococcus 160,21±12,Ю 795,75±89,91 612,00±47,36 874,81±54,12

Bacillus 86,91±8,10 539,28±32,43 432,25±76,65 549,31 ±36,82

БГКП 45,85±2,66 421,43±26,82 342,02±41,08 271,51±17,63

Виварий

БГКП 916,33±104,35 1825,00±78,63 903,75±141,23 1637,50±123,11

Staphylococcus 289,25±47,47 614,13±63,27 309,38±53,07 595,38±76,24

Streptococcus 260,04±32,54 509,96±26,06 238.50±36,21 433,63±32,30

Bacillus 183,13±20,80 375,13±21,58 188,25±33,31 336,63±28,06

При анализе количественного состава микроорганизмов различных физиологических групп (табл. 2) установлено, что для микрофлоры воздуха помещения конноспортивной школы характерно преобладание бактерий родов Streptococcus и Staphylococcus в течение всего года. Максимальное их количество наблюдалось в зимнее время (1058,11±44,46 КОЕ/л и 874,81±54,12 KÖE/л соответственно), а бактерий группы кишечной палочки (БГКП) - в летнее (421,43±26,82 КОЕ/л). Минимальное количество микроорганизмов всех физиологических групп отмечено в весеннее время года.

В микрофлоре воздуха вивария преобладали бактерии группы кишечной палочки, наибольшее количество которых было зарегистрировано в летний период года (1825,00±78,63 КОЕ/л). В весеннее и осеннее время количество микроорганизмов различных физиологических групп в воздушной среде виййрия имело минимальное значение.

Преобладание в воздухе помещения конноспортивной школы кокковых форм микроорганизмов, а в виварии - бактерий группы кишечной палочки свидетельствовало об особенностях микрофлоры воздушной среды помещений для разных видов животных с различным поголовьем, условиями содержания и кормления.

2.2.2. Чувствительность животных к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности

Результаты исследований, приведенные в таблице 3, свидетельствуют, что показатели лейкоцитолиза на корпускулярные антигены у высокочувствительных животных находились в пределах 40,40-47,20%, а у низкочувствительных — 8,95-14,65%. На водорастворимые стандартные антигены значения показателей лейкоцитолиза у животных находились в тех же пределах. При определении чувствительности лошадей с использованием антигенов, приготовленных разными методами, достоверных различий показателей лейкоцитолиза не установлено.

Таблица 3

Показатели лейкоцитолиза и чувствительность лошадей к микробным антигенам (%, М±т, п=14)

Антиген Высокочувствительные Средне-чувствительные Hiüko-чувствительиые

Корпускулярные антигены микрофлоры воздуха

Streptococcus faecium 4-I.50J-2.4! v., 27,20±2,05 14,5&fcl,64

Streptococcus faecaiis 47,20±3,46|ii ' 26,43±1,03 J4,65±0,75

Micrococcus luteus - 26,35±3,02 9,03±2,48

Serratia marcescens 40,40 27,58+2,77 8,95±3.27

Водорастворимые шпигсиы микрофлоры воздуха

Streptococcus faecaiis 50,97±1,57 ; "29;48±1,89 18,25±0,85

Staphylococcus aureus 45,48±1,62 30,24±1,86 18,10±0,00

Escherichia coli 41,30 : 28,78±3,31 13,83±1,78

Водорастворимые стандартные антигены

Streptococcus faecaiis 44,80±1,74 27,92±2,34 12,60±0,00

Staphylococcus aureus 46,56*2,23 36,43±2,53 J4,10±l,50

Candida albicans 48,00±2,80 33,20±1,82 5,35±3,65

.В связи с этим мы объединили значения показателей лейкоцитолиза у лошадей на антигены, приготовленные разными методами (табл. 4), в результате чего установлено, что наибольшее количество животных проявляло высокую чувствительность к антигену Staphylococcus aureus, а наименьшее количество животных - к антигенам Escherichia coli к Serratia marcescens. Это объясняется тем,' что в воздухе помещения конноспортивной школы имело место преобладание кокковых форм микроорганизмов, что и послужило естественным стимулом сенсибилизации организма животных. По отношению к антигену Staphylococcus aureus показатель лейкоцитолиза у высокочувствительных животных составил 46,02±1,31%, ау низкочувствительных-15,43±1,59% (р<0,001).

Таблица 4

Показатель лейкоцитолиза и количество животных разной чувствительности к микробным антигенам (%, М±т, п=14)

Животные Высоко- Количество Низко- Количество

Антиген — чувствительные животных чувствительные животных

Streptococcus faecium 44,50±2,41 3 14,58±1,64 4 "

Streptococcus faecaiis., 47,66il,50 3 13,07±2,78 2

Staphylococcus aureus 46,02±l,3l 7 15,43±1,59 2

Micrococcus luteus - ' 0 9,03±2,48 7

Escherichia coli 41,30 1 13,83±1,78 4

Serratia marcescens 40,40 1 8,95±3,27 4

Candida albicans 48,00±2,80 2 5,35±3,65 2

M±m 44,65±1,31 - 11,46*1,41 -

Установлены достоверные различия показателя лейкоцитолиза у высокочувствительных (44,65±1,31%) и низкочувствительных (11,46 ±1,41%) животных (р<0,001).

Высокую чувствительность к одному антигену (Staphylococcus aureus, табл. 5) проявляли 3 животных (21%), к двум антигенам одновременно (Staphylococcus aureus, Candida albicans) - 1 (7%), к трем и более из испытанных антигенов {Streptococcus faecium, Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Serratia marcescens) - 4 (29%). Низкую чувствительность ко всем антигенам проявляли 6 животных (43%).

Таблица 5

Специфика реагирования лошадей на антигены микроорганизмов различной таксономической принадлежности и концентрация общего Ig Е (М±т, МЕ/мл)

Животные Распределение животных по характеру реагирования на антигены (количество) Показатель лейкоцитолиза по группе, %(М±ш)

один IgE два IgE три IgE

Гиперчувсгвительные 3 378,80±64,40 1 586,52 4 507,79±32,15* 45,93±0,84**

Низкочувсгвительные 6 294,66*41,12 6 294,66141,12 6 294,66±41,\2 13,50±0,97

Примечание: * р<0,01, ** р<0,001 по сравнению с низкочувствительными животными

Результаты определения чувствительности спортивных лошадей к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности с использованием реакции лейкоцитолиза совпадают с данными по содержанию в сыворотке крови иммуноглобулина Е, который является маркером сенсибилизации. Так, концентрация Ig Е у животных, гиперчувствительных к трем и более антигенам, составила 507,79±32,15 МЕ/мл, а у низкочувствительных животных - 294,66±41,12 МЕ/мл (р<0,01), в то же время показатель лейкоцитолиза у животных, гиперчувствительных к трем и более антигенам, составил 46,18±0,95%, а у низкочувствительных животных - 13,84±1,10% (р<0,001).

Максимальное значение показателя лейкоцитолиза у лабораторных крыс (табл. 6) всех опытных групп по отношению к контрольной установлено на 30-й день после воздействия. Показатель лейкоцитолиза на микст антиген у животных первой группы увеличился в 3,1 раза (р<0,001)', на антиген Staphylococcus aureus у животных второй группы в 2,7 раза (р<0,001) и на антиген Streptococcus faecalis у животных третьей группы -1,9 раз по отношению к контролю. Однако у животных первой группы, подвергшихся воздействию микст антигеном, отмечался более высокий процент цитолиза лейкоцитов на этот антиген в течение всего времени наблюдения по сравнению с животными, на которых воздействовали этими же антигенами, но по отдельности.

Таблица 6

Показатель лейкоцитолиза у лабораторных животных (%, М±ш)

Время исследования, дни Группа животных (п-5) Показатель лейкоцитолиза. %

1 10,21±1,28

До воздействия 2 16,82±1,69

3 14,86±1,61

4 14,70±2,75

1 57,08±5,03***

30 2 49,49±6,12**

3 34,68±6,92

4 38,49±3,77

1 38,99±1,20**'

60 2 33,89±4,09

3 ■ 25.8 Н4,89

4 21,78±3,78

1 " 1 22,66:7.78

90 2 18,84±7,88

3 19,38±4,47

4 15,42±0,99

Примечание: 1 группа-крысы, сенсибилизированные микст антигеном {Staphylococcus aureus и Streptococcus faecalis'y,

2 группа - крысы, сенсибилизированные антигеном Staphylococcus aureus;

3 группа - крысы, сенсибилизированные антигеном Streptococcus faecatis\

4 группа - контроль;

** р<0,01, *** р<0,001 в сравнении с контрольной группой.

При определении чувствительности организма к микробным антигенам интактных животных (контрольная группа) статистически значимых различий по показателю лейкоцитолиза в процессе наблюдения не выявлено.

2.2.3. Зависимость между гиперчувствительностью и естественной резистентностью организма

Сенсибилизация организма микробными антигенами воздушной среды отражается и на показателях естественной резистентности животных.

Результаты исследований (рис. 1) свидетельствуют о том, что к 30-му дню после сенсибилизации у всех опытных групп лабораторных крыс в 2 раза увеличена бактерицидная активность сыворотки крови (р<0,001) по сравнению с контрольным значением. К 90-му дню только у животных первой группы различия по бактерицидной активности сыворотки крови были статистически достоверны (р50,05). Бактерицидная активность сыворотки крови животных контрольной группы в течение всего периода исследования также характеризовалась повышением, к 30-му дню наблюдения она составила 35,50±2,66%, а к 60 и 90-му дням увеличение по сравнению с фоновым значением составило на 12,0% (р<0,001).

-"'V— группа 1 - группа 2 группа 3 ■"Щ—контроль 10 о

до воздействия 30 60 90

После воздействия, дни

Рис. 1. Динамика изменения бактерицидной активности сыворотки крови лабораторных животных (%)

Лизсщимная активность сыворотки крови крыс опытных и контрольной групп характеризовалась колебанием значения, к 30-му дню отмечено минимальное значение показателя у всех опытных групп, тогда как к 60-му дню - максимальное для первой (28,44±3,90%) и третьей (31,92±4,09%) опытных и контрольной (24,49±4,66%) групп. Различия значений между группами статистически недостоверно.

««-^г-группа 3 контроль

; 10

до воздействия 30 60 90

После воздействия, дни

Рис. 2. Динамика изменения фагоцитарной активности нейтрофилов крови лабораторных животных (%)

Изменение фагоцитарной активности нейтрофилов крови (рис. 2) у лабораторных крыс в течение времени исследования носило волнообразный характер, причем у всех групп. Достоверность различия значений опытных групп по отношению к контрольной установлена во всех периодах исследования.

14 12 10 8 Б 4 2

—V группа 1

.....группа 2

--¿¡-'- группа 3 НИ"" контроль

до воздействия 30 60 90

После воздействия, дни

Рис. 3. Динамика изменения циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови лабораторных животных (у. е.)

Согласно полученным данным (рис. 3), средние значения концентрации ЦИК в сыворотке крови лабораторных животных всех опытных групп в течение всего времени наблюдения после антигенного воздействия имели достоверное увеличение но сравнению с контролем, а к 60-му дню отмечено максимальное их значение и превышение уровня контрольной группы животных в 2,8-3,4 раза (р<0,001). Поскольку формирование ЦИК является обязательным компонентом нормального иммунного ответа, то данное обстоятельство, как можно предположить, с одной стороны, является свидетельством повышенной антигенной нагрузки на иммунную систему животных опытных групп, подвергшихся сенсибилизации микробными антигенами, а с другой - говорит об активации иммунокомпетентиой системы.

4,5 4 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0

до воздействия

"группа 1 ; группа 2 * группа 3 £ контроль

После воздействия, дни

Рис. 4. Динамика изменения концентрации общего Е в сыворотке крови лабораторных животных (МЕ/мл)

Концентрация общего Ig Е (рис. 4) в сыворотке крови крыс опытных групп на 30-й день после воздействия характеризовалась максимальным значением, так у первой группы животных она увеличилась в 11,2 раза (р<0,001), второй - 11,1 раза (р<0,001), третьей - 10,5 раз (р<0,001) и в последующие дни наблюдения она имела тенденцию к снижению. Достоверность различия концентрации у опытных групп животных по сравнению с контрольной отмечалась на протяжении всего периода исследования, что свидетельствовало об активации гуморальной системы иммунитета, поскольку иммуноглобулины этого изотила участвуют в сенсибилизации клеток слизистых оболочек, в частности носовой полости, бронхов и конъюнктивы при проникновении генетически чужеродных субстанций, в качестве которых в нашем случае выступали микробные антигены при аэрогенно индуцированной сенсибилизации (Хаитов Р.М, и др., 1995; Новиков Д.К., 2005; Воробьев А.А. и др., 2006).

Обращает на себя внимание некоторое повышение концентрации общего Ig Е в сыворотке крови крыс контрольной группы в течение исследования (фоновое значение составило 0,40±0,06 МЕ/мл, к концу наблюдения -0,65±0,17 МЕ/мл). Это позволяет полагать, что Ig Е-ответ является постоянно функционирующей системой организма, которая активизируется в ходе индивидуального развития (Воробьев А.А. и др., 2006; Хаитов P.M., 2006).

Значения количества эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов у лошадей, проявляющих гиперчувствительность к одному, одновременно трем микробным антигенам, и у низкочувствительных особей находились на одном уровне. Картина крови у животных с высокой чувствительностью к антигенам характеризовалась увеличением абсолютного количества базофи-лов, эозинофилов, юных и палочкоядерных форм нейтрофилов, лимфоцитов по сравнению с животными, показатель лейкоцитолиза которых не превышал 20%. Достоверное увеличение количества сегментоядерных. нейтрофилов (р<0,05) отмечено у лошадей, имеющих гиперчувствительность к одному антигену (3,36±0,44х109/л) по отношению к животным с низкой чувствительностью (1,82±0,42><109/л).

Анализ показателей иммунной системы лошадей (табл. 7) свидетельствовал о том, что абсолютное количество В-лимфоцитов у животных, гиперчувствительных одновременно к нескольким антигенам, больше по сравнению с животными, имеющими низкую иммунологическую реакцию на микробные антигены (0,76±0,26х109/л и 0,54±0,11* 109/л соответственно), в то же время функциональная оценка В-лимфоцитов (табл. 5) выявила достоверное различие в концентрации общего Ig Е сыворотки крови между этими животными (507,79±32,15 МЕ/мл и 294,66±41,12 МЕ/мл соответственно, р<0,01). Количественная оценка Т-лимфоцитов не установила существенных различий между животными.

Таблица 7

Показатели состояния иммунной системы лошадей (М±т)

Чувствительность к антигенам В- лимфоциты, х10'/л т- лимфоциты, х10'/л Т-хелперы, х105/л Т- супрессоры, хШ'/л ЦИК, у.е.

Высокая к одному 0,63±0,33 0,51 ±0,06 0,11 ±0,03 0,04±0,03 18,67±6,43

Высокая к трем 0,76±0,26 0,57±0,05 0,09±0,01 0,06±0,01 1 У.2.5.! 6,26

Низкая 0,54±0,П 0,48±0,08 0,07*0,01 0,06±0,01 29,78±7,70

При проведении корреляционного анализа между уровнем специфического ¡g Е, показателем лейкоцитолиза и различными показателями естественной резистентности, белковой и лейкоцитарной картины крови, иммунного статуса лабораторных крыс и спортивных лошадей установлена различная степень корреляции.

У лабораторных крыс опытных групп наиболее тесные прямые и обратные коррелятивные связи (от выраженной до функциональной) уровня специфического ^ Е и показателя лейкоцитолиза установлены на 30-й день после воздействия с показателями неспецифической защиты, белковой и лейкоцитарной картины крови, иммунного статуса. Так, показатель лейкоцитолиза имел положительную корреляционную связь с концентрацией íg Е (г = + 0,909, р<0,01), уровнем циркулирующих иммунных комплексов (г = + 0,795, р<0,01), фагоцитарной активностью нейтрофилов (г = + 0,877, р<0,05), фагоцитарной интенсивностью (г = + 0,938, р<0,01), фагоцитарным числом (г = + 0,971, р<Ю,01), бактерицидной активностью сыворотки крови (г = + 0,946, р<0,05), абсолютным количеством эозннофилов (г = + 0,549, р<0,01) и палочкоядерных нейтрофилов крови (г = + 0,836, р<0,01). Отрицательная корреляционная связь показателя лейкоцитолиза установлена с количеством лейкоцитов крови (г = - 0,946, р<0,001), общим белком сыворотки крови (г = - 0,524, р<0,05), лизоцимной активностью сыворотки крови (г = - 0,817, р<0,0.5), абсолютным количеством сегментоядерных нейтрофилов (г = - 0,795, р<0,05), лимфоцитов (г = - 0,873, р<0,01), моноцитов (г = - 0,755, р<0,01), Т-лимфоцитов (г = - 0,956, р<0,01), включая субпопуляцию Т-супрессоров (г = - 0,786, р<0,01).

Аналогичная связь показателя лейкоцитолиза установлена и у лошадей.,

В то же время концентрация общего Е в сыворотке крови крыс опытных групп имела положительную корреляционную связь с уровнем циркулирующих иммунных комплексов (г = + 0,917, р<0,01), фагоцитарной активностью нейтрофилов (г = + 0,975, р<0,001), фагоцитарной интенсивностью (г = + 0,993, р<0,01), фагоцитарным числом (г = + 0,896, р<0,01), бактерицидной активностью сыворотки крови (г = + 0,994, р<0,05), абсолютным количеством эозинофилов (г = + 0,843, р<0,01) и палочкоядерных нейтрофилов крови (г = + 0,962, р<0,01). Отрицательная корреляционная связь концентрации общего Е установлена с количеством лейкоцитов крови (г = -0,773, р<0,001), лизоцимной активностью сыворотки крови (г - - 0,860,

р<0,05), абсолютным количеством сегментоядерных нейтрофилов (г = - 0,974, р<0,01), лимфоцитов (г = — 0,605, р<0,05), моноцитов (г = - 0,950, р<0,01), Т-лимфоцитов (г = — 0,758, р<0,01), включая субпопуляцию Т-супрессоров (г = - 0,786, р<0,01).

Аналогичная связь специфического ^ Е в сьшоротке крови лошадей установлена с показателями морфологического состава крови, естественной резистентности и иммунного статуса.

2.2.4. Совершенствование методики определения гиперчувствительности организма

Способ определения чувствительности животных к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности включает проведение реакции лейкоцитолиза крови с использованием антигена, подсчет количества лейкоцитов в камере Горяева до и после инкубации и последующее определение чувствительности организма по показателю лейкоцитолиза. При этом при постановке реакции вначале в пробы вносят раствор ацидин-пепсина, подсчет количества лейкоцитов до инкубации проводят только в контрольной пробе, а показатель лейкоцитолиза (ПЛЦ) определяют после инкубации опытной и контрольной проб по формуле: ПЛЦ = ——-х 100% с последующим

Лконтроль

вычетом процента спонтанного лейкоцитолиза (СЛЦ) в контрольной пробе „„,, Л к, до плкубалии - Л к.после инкубации ,„.„.

СЛЦ =----------х 100%, при итоговом значении

Л к.до инкубации

ПЛЦ до 20% чувствительность организма считают низкой, 20-40% - средней, 40% и более - высокой.

Предлагаемый способ по сравнению с прототипом и другими известными способами имеет следующие преимущества: повышена достоверность анализа за счет внесения в инкубационную среду раствора ацидин-пепсина, избирательное действие которого на поврежденные лейкоциты обеспечивает разницу при их подсчете, и учета процента спонтанного лизиса лейкоцитов в контрольной пробе индивидуально у каждого животного; позволяет повторно проводить тестирование чувствительности организма через различные интервалы времени и дифференцированно определять чувствительность животного сразу к нескольким микробным антигенам, что невозможно при постановке внутрикожной пробы; прост в исполнении, нетрудоемок, позволяет сократить время анализа по сравнению с известными; безвреден для животных и исполнителей; экономит дорогостоящие реактивы и препараты.

3. ВЫВОДЫ

ной обсемененности воздушной среды путем высева улавливающей жидкости на питательную среду; концентрации микроорганизмов на фильтре и определения Коли-индекса воздуха; путем прямого счета микроорганизмов на поверхности фильтра под микроскопом.

2. Микрофлора воздушной среды закрытых помещений характеризуется выраженной изменчивостью количественного и качественного состава Так, общая бактериальная обсемененность воздуха помещения конноспортивной школы имела максимальные показатели в зимнее время года (в утренние часы 4575,00*177,03 КОЕ/л, вечерние - 2753,75*112,61 КОЕ/л) и минимальные показатели в весеннее время (в утренние часы 923,03±49,81 КОЕ/л, вечерние - 478,13±32,43 КОЕ/л). Максимальное количество микроорганизмов в воздухе вивария отмечалось в летний период (в утренние часы 10100,00*889,42 КОЕ/л, вечерние - 7300,(№±314,53 КОЕ/л), минимальное - в весенний (в утренние часы 6193,75*482,04.КОЕ/л, вечерние -3665,00*417,42 КОЕ/л).

3. Бактериальная обсемененность воздушной среды помещений конноспортивной школы и вивария характеризовалась широким распространением и постоянной циркуляцией в воздухе условно-патогенной микрофлоры (Escherichia coli, Proteus mirabilis, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Serratia marcescetis, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus faecium, Streptococcus fae-calis, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus), в том числе микроскопических грибов (Pénicillium sp., Aspergillus fiavus, Asp. fumigatus, Asp. niger, Mucor racemosus, Rhizopus nigricans, Cladosporium sp).

4. Для микрофлоры воздуха помещения конноспортивной школы характерно преобладание кокковых форм микроорганизмов. Так, среднегодовая доля микроорганизмов рода Streptococcus составила 36,5% (728,98*67,25 КОЕ/л), Staphylococcus - 31,0% (610,69*56,84 КОЕ/л), Bacillus - 20,0% (401,94*40,08 КОЕ/л), БГКП - 12,5% (270,26*28,04 КОЕ/л), микроскопических грибов рода Pénicillium - 32,0% (9,83*0,54 КОЕ/л), Aspergillus -28,0% (8,47*0,58 КОШ), Mucor - 18,0% (5,13*0,31 КОЕ/л), Rhizopus -12,0% (3,26*0,24 КОЕ/л) и Cladosporium - 10,0% (2,73*0,26 КОЕ/л). А для микрофлоры воздуха вивария характерно преобладание бактерий группы кишечной палочки, среднегодовая доля которых составила 55,0% (1320,65*92,34 КОЕ/л), микроорганизмов рода Staphylococcus - 19,0% (452,03*39,95 КОЕ/л), Streptococcus - 15,0% (360,53±25,61 КОЕ/л), Bacillus - 11,0% (270,78*19,94 КОЕ/л), микроскопических грибов рода Pénicillium - 26,0% (3,61*0,16 КОЕ/л), Aspergillus - 19,0% (2,65*0,33 КОЕ/л), Мисог - 34,0% (4,76*0,36 КОЕ/л), Rhizopus - 11,0% (1,49*0,12 КОЕ/л) и Cladosporium - 10,0% (1,40*0,15 КОЕ/л).

дов микроорганизмов. Из общего числа обследованных лошадей высокую чувствительность к одному антигену (Staphylococcus aureus) проявляли 3 особи (21%), к двум антигенам одновременно (.Staphylococcus aureus. Candida albicans) - 1 (7%), к трем и более из испытанных антигенов (Streptococcus faecium, Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Serratia marcescens) - 4 (29%). Низкую чувствительность ко всем антигенам проявляли .6 животных (43%). Среднее значение показателя лейкоцитолиза у лошадей, гиперчувствительных к одному антигену, составило 44,10±3,38%, к двум антигенам одновременно - 45,95+0,75%, к трем антигенам - 46,18+0,95%. У животных с низкой чувствительностью ко всем, антигенам показатель лейкоцитолиза составил 13,50+0,97%.

6. Индуцированное воздействие на лабораторных крыс антигенами,: полученными из основных представителей флоры воздушной среды вивария, обусловливало у них сенсибилизацию и повышенную чувствительность. Феномен повышенной чувствительности проявлялся усилением реакции лейкоцитолиза, увеличением уровня общего Ig Е и циркулирующих иммунных комплексов.

7. У крыс, сенсибилизированных антигенами микроорганизмов различной таксономической принадлежности, и лошадей установлена высокая положительная корреляционная связь показателя лейкоцитолиза с концентрацией Ig Е, причем коррелятивные связи показателя лейкоцитолиза и специфического Ig Е с показателями естественной резистентности, белковой и лейкоцитарной картины крови, иммунного статуса идентичны, что подтверждает отрицательную роль сенсибилизации микробными антигенами воздушной среды на иммунобиологический статус организма животных и возможность использования реакции лейкоцитолиза для диагностики повышенной иммунологической реактивности организма (гиперчувствительности).

8. Способ определения чувствительности животных к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности включает постановку реакции лейкоцитолиза крови с использованием антигена, подсчет количества лейкоцитов в камере Горяева до и после инкубации и последующее определение чувствительности организма по показателю лейкоцитолиза, причем при постановке реакции вначале в пробы вносят' раствор ацидин-пепсина, подсчег количества лейкоцитов до инкубации проводят только в контрольной пробе, а показатель лейкоцитолиза (ПЛЦ) определяют после инкубации

опытной и контрольной проб по формуле: ПЛЦ = ЛконтР°ль ~ Ло'",г'.х ю'о% с

Л контроль . . I1

последующим вычетом процента спонтанного лейкоцитолиза (СЛЦ) в

с. Л к. до инкубации - Л к.гюсле инкубации ,„„>j,

контрольной пробе СЛЦ =-------х 100%, при

Л к.до инкубации . ,

итоговом значении ПЛЦ до 20% чувствительность организма считают низкой, 20-40% - средней, 40% и более - высокой. -.ч

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Прибор для улавливания микроорганизмов (Пат. 37097 РФ, МГТС7 С 12 N 1/00 / А.Ф. Дмитриев, В.Ю. Морозов, Ю.В. Краснощекова).

2. Способ определения чувствительности лошадей к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности (Решение Роспатента № 3008139718/15(051324) от 05.10.2009 о выдаче патента на изобретение по заявке от 06.10.2008 / А.Ф. Дмитриев, Ю.В. Краснощекова, В.Ю. Морозов).

3. Разработанные нами прибор для улавливания микроорганизмов и способ определения чувствительности животных к микробным антигенам могут использоваться при изучении бактериальной обсемененности воздушной среды животноводческих помещений и определении чувствительности животных к антигенам микроорганизмов различных физиологических групп.

5. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Дмитриев, А. Ф. Прибор для улавливания микроорганизмов: информ. листок № 63-026-04 / А. Ф. Дмитриев, В. Ю. Морозов, Ю. В. Краснощекова / ЦНТИ. - Ставрополь, 2004. - 3 с.

2. Краснощекова, Ю. В. Совершенствование методики определения микробной обсемененности воздуха в животноводческих помещениях7'Ю. В. Краснощекова, А. Ф. Дмитриев // Доклады Московского общества испытателей природы : материалы IV Междунар. науч. конф. «-Биотехнология - охране окружающей среды», посвящ. 295-летию М. В. Ломоносова (Москва, 18-20 ноября 2006 г.) / МГУ. -М.: Графикон, 2006. - Т. 39. - С. 227-228.

3. Дмитриев, А. Ф. Контроль бактериальной обсемененности воздуха животноводческих помещений / А. Ф. Дмитриев, В. Ю. Морозов, Ю. В. Краснощекова // Био. - 2006. -№ 11. - С. 15-16.

4. Краснощекова, Ю. В. Способы определения чувствительности организма к антигенам / Ю. В. Краснощекова // Состояние, перспективы, стратегия развития и научного обеспечения овцеводства и козоводства Российской Федерации : материалы Междунар. науч.-практ. конф. (Ставрополь, 23-25 мая 2007 г.) / РАСХН ГНУ СНИИЖК. - Ставрополь, 2007. - Ч. 3. - С. 72-76.

5. Краснощекова, Ю. В. Определение повышенной чувствительности организма к антигенам биологического аэрозоля / Ю. В. Краснощекова, А. Ф. Дмитриев // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных : материалы 71-й науч. конф. (Ставрополь, 17-19 апреля 2007 г.) / СтГАУ. - Ставрополь : Агрус, 2007. - С. 37-40.

6. Краснощекова, Ю. В. Бактериальная обсемененность воздушной среды помещения конноспортивной школы / Ю. В. Краснощекова, А. Ф. Дмитриев И Ветеринария Кубани. - 2008. - № 6. - С. 26-28.

7. Краснощекова, Ю. В. Методика определения чувствительности организма животного к микробным антигенам / Ю. В. Краснощекова, А. Ф. Дмитриев // Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития : материалы IX Всерос. науч.-практ. конф. (Саратов, 12 марта 2009 г.) I СГАУ. - Саратов : Щ Наука, 2009. - С. 235-239.

8. Краснощекова,* Ю. В. Гиперчувствительность спортивных лошадей к микробным антигенам воздушной среды / Ю. В. Краснощекова // Тр. XVII Московского Международного Ветеринарного Конгресса (Москва, 25-27 апреля 2009 г.). - М, 2009. - С. 355-358.

9. Краснощекова, Ю. В. Чувствительность животных к микробным антигенам / Ю. В. Краснощекова, А. Ф. Дмитриев // Вет. медицина. - 2009. -№ 1-2. - С. 29-30. ; ? , ,

10. Краснощекова, Ю. В. Функциональная значимость биологического'аэрозоля в индукции гиперчувствительности организма животных / Ю. В.' Краснощекова, А. Ф. Дмитриев // Вет. медицина. - 2009. -№ 3. - С. 24-27Г

11. Пат. 37097 Российская Федерация, МПК1 С 12 N 1/00. Прибор для улавливания микроорганизмов / А. Ф. Дмитриев, В. Ю. Морозов', Ю. В. Краснощекова; заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО Ставропольский гос. аграр. ун-т. -№ 2003134772/20; заявл. 01.12.03; опубл. 10.04.04, Б юл. № 10 (IV ч).-С. 690.

12. Решение Роспатента №2008139718/15(051324) от 05.10.2009 о выдаче патента на изобретение «Способ определения чувствительности лошадей к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности» по заявке от 06.10.2008 / А. Ф. Дмитриев, Ю. В. Краснощекова, В. Ю. Морозов.

Подписано в печать 18.11.2009 Формат 60x84 1/16 Уся.печ.л. 1,34 Уч.-изд. л. 1,32

Бумага офсетная Тираж 120 экз. Заказ 389

Отпечатано в Издательско-полиграфическом комплексе Ставропольского государственного университета. 355009, Ставрополь, ул.Пушкина, 1.

Оглавление диссертации Краснощекова, Юлия Викторовна :: 2009 :: Ставрополь

1. Введение.

Актуальность темы.

2. Аналитический обзор литературы.

2.1. Функциональная значимость микроорганизмов воздушной среды закрытых помещений и их влияние на иммунобиологический статус животных.

2.2. Гиперчувствительность как одна из форм иммунного реагирования. Условия формирования гиперчувствительности по замедленному и немедленному типу.

2.3. Оценка функциональной активности клеток, позволяющая выявить иммунологическую несостоятельность организма.

3. Собственные исследования.

3.1. Материалы и методы исследований.

3.2. Результаты исследований.

3.2.1. Бактериальная обсемененность воздушной среды закрытых помещений.

3.2.2. Чувствительность животных к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности.

3.2.3. Зависимость между гиперчувствительностью и естественной резистентностью организма.

3.2.4. Совершенствование методики определения гиперчувствительности организма.

4. Обсуждение результатов.

4.1. Особенности реагирования животных на микробные антигены воздушной среды помещения.

5. Выводы.

6. Практические предложения.

Введение диссертации по теме "Патология, онкология и морфология животных", Краснощекова, Юлия Викторовна, автореферат

Наряду с загрязнением окружающей среды промышленными предприятиями, сточными водами городов и населенных пунктов мощными источниками загрязнения биосферы стали крупные животноводческие фермы, комплексы и птицефабрики (Рыбаков Ю. А., 1997; Вершняк Т. В., Кузнецова С. В., Самуйленко С. А. и др., 2004; Дементьев Е. П., Казадаев В.

A., 2004; Денисов А. А., 2005; Avram N., 1999; Hartung J., 1999; Hartung J., Wathes C.M., 2001; Ondrasovicova O., Ondrasovic M. et al., 2005).

B. Н. и др., 1999; Лопата Ф. Ф., 2007; Seedorf J., Hartung J., 2002).

Значительная концентрация поголовья на ограниченных площадях, отсутствие активного моциона и ультрафиолетового облучения, низкий уровень санитарной культуры, несвоевременная организация и проведение ветеринарно-санитарных, профилактических и противоэпизоотических мероприятий в ряде случаев способствуют формированию в воздушной среде популяции микроорганизмов, которые в результате многочисленных пассажей изменяют свои биологические свойства. В результате этого повышается их болезнетворное действие на животных, что обусловливает возникновение болезней в первую очередь у животных с ослабленной резистентностью (Мозжерин В. И., 2004; Петров А. М., 2004; Медведев А. П., Вербицкий А. А., Грибанова М. В., 2006).

Большое значение при этом имеет иммунобиологическое состояние организма животного и совершенство его адаптивных механизмов, обеспечивающих необходимую функциональную перестройку и оптимальный режим функционирования. В этой связи микроорганизмы (в том числе и сапрофитные) и продукты их жизнедеятельности при значительной их концентрации в воздушной среде помещений представляют угрозу для животных и обслуживающего персонала, индуцируя возникновение сенсибилизации и повышенной чувствительности. Гиперчувствительность и реакции клеточного иммунитета могут обусловливать различные патологические процессы, которыми иногда сопровождаются микробные инфекции (Воронин Е. С., Петров А. М. и др., 2002; Хаитов Р. М., 2003; Воробьев А. А., 2004; Москалев А. В., Сбойчаков В. Б., 2006).

В связи с этим особую остроту и актуальность приобретает проблема количественной и качественной оценки микробного фона воздушной среды закрытых помещений и его влияние на иммунобиологическое состояние организма.

Недооценка важности диагностики и коррекции нарушений функции иммунной системы может приводить к развитию иммунодефицитных состояний и обострению течения патологического процесса. Это обусловлено тем, что иммунная система наиболее чувствительна к воздействию различных неблагоприятных факторов (Федоров Ю. Н., Верховский О. А. и др., 1999; Смирнов В. С., Фрейдлин И. С., 2000; Воронин Е. С., Петров А. М. и др., 2002; Золотарева Н. А., 2002; Хаитов Р. М., 2006).

Целью наших исследований явилась микробиологическая оценка воздушной среды закрытых помещений и определение чувствительности организма животного к микробным антигенам биологического аэрозоля. Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить количественный и качественный состав биологического аэрозоля в животноводческих помещениях.

Научная новизна. Разработано устройство «Прибор для улавливания микроорганизмов» (Патент на полезную модель № 37097 РФ, МПК7 С 12 N 1/00) и способ определения чувствительности лошадей к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности (Решение Роспатента № 2008139718/15(051324) от 05.10.2009 о выдаче патента на изобретение по заявке от 06.10.2008). Впервые проведена оценка чувствительности лошадей к микробным антигенам воздушной среды помещения конюшни. Установлено, что микроорганизмы, независимо от их патогенности, а также продукты их жизнедеятельности, воздействуя на организм, вызывают иммунологическую перестройку с появлением особей, проявляющих гиперчувствительность к микробным антигенам.

Реализация результатов исследований. Основные результаты научных исследований вошли в отчеты по научно-исследовательской работе ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет» за 2004-2009 гг. Разработанный прибор для улавливания микроорганизмов экспонировался на IV Московском Международном салоне инноваций и инвестиций (2004), неделе высоких технологий (г. Санкт-Петербург, 2004), дне высоких технологий (г. Санкт-Петербург, 2005), Международной выставке-конгрессе «Высокие технологии. Инновации. Инвестиции» (г. Санкт-Петербург, 2007).

Материалы исследований внедрены в учебный процесс при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по курсам кафедры эпизоотологии и микробиологии ФГОУ ВПО «Ставропольский ГАУ»: «Ветеринарная микробиология и иммунология», «Санитарная микробиология», по дисциплине «Теоретические основы биотехнологии», в научно-исследовательской работе лаборатории визуальной диагностики и патологии молодняка ГНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук», в бактериологическом отделе ГУКК «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», ГУРО «Ростовская областная ветеринарная лаборатория». Положения, выносимые на защиту:

2. Микрофлора воздушной среды закрытых помещений при значительной ее концентрации представляет определенную опасность для животных, поскольку она индуцирует повышенную чувствительность организма (гиперчувствительность) и обусловливает возникновение иммунопатологических состояний (полиаллергий).

3. Способ определения чувствительности лошадей к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности позволяет проводить тестирование животных через различные временные интервалы, дифференцированно выявлять особей с повышенной чувствительностью к нескольким антигенам. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены, одобрены на научных конференциях: IV Международной научной конференции «Биотехнология - охране окружающей среды», посвященной 295-летию М. В. Ломоносова, (Москва, 2006); 71-й ежегодной научной конференции молодых ученых и студентов (Ставрополь, 2007); ежегодной Международной научно-практической конференции «Состояние, перспективы, стратегия развития и научного обеспечения овцеводства и козоводства РФ», (Ставрополь, 2007); IX Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития», (Саратов, 2009); XVII Московском Международном Ветеринарном Конгрессе (Москва, 2009).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 2 из них в периодическом издании из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК Министерства образования и науки РФ. Получен патент на полезную модель «Прибор для улавливания микроорганизмов», решение о выдаче патента на изобретение «Способ определения чувствительности лошадей к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности».

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 118 страницах, содержит введение, аналитический обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложения, иллюстрирована 14 таблицами и 13 рисунками. Список использованной литературы включает 224 источника, в том числе 37 иностранных.

Заключение диссертационного исследования на тему "Гиперчувствительность животных к микробным антигенам воздушной среды закрытых помещений"

5. ВЫВОДЫ

1. Принцип индикации микрофлоры воздуха основан на улавливании биологического аэрозоля в емкость с улавливающей жидкостью, отделении аэрозольных частиц от газовой фазы и последующей концентрации их в улавливающей жидкости, либо на поверхности фильтра. Конструктивные особенности прибора позволяют проводить: определение общей микробной обсемененности воздушной среды путем высева улавливающей жидкости на питательную среду; концентрации микроорганизмов на фильтре и определения Коли-индекса воздуха; путем прямого счета микроорганизмов на поверхности фильтра под микроскопом.

2. Микрофлора воздушной среды закрытых помещений характеризуется / выраженной изменчивостью количественного и качественного состава.

Так, общая бактериальная обсемененность воздуха помещения конноспортивной школы имела максимальные показатели в зимнее время года (в утренние часы 4575,00±177,03 КОЕ/л, вечерние - 2753,75±112,61 КОЕ/л) и минимальные показатели в весеннее время (в утренние часы 923,03±49,81 КОЕ/л, вечерние - 478,13±32,43 КОЕ/л). Максимальное количество микроорганизмов в воздухе вивария отмечалось в летний период (в утренние часы 10100,00±889,42 КОЕ/л, вечерние -7300,00±314,53 КОЕ/л), минимальное — в весенний (в утренние часы 6193,75±482,04 КОЕ/л, вечерние - 3665,00±417,42 КОЕ/л).

3. Бактериальная обсемененность воздушной среды помещений конноспортивной школы и вивария характеризовалась широким распространением и постоянной циркуляцией в воздухе условно-патогенной микрофлоры {Escherichia coli, Proteus mirabilis, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Serratia marcescens, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus faecium, Streptococcus faecalis, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus), в том числе микроскопических грибов (Penicillium sp., Aspergillus flavus, Asp. fumigatus, Asp. niger, Mucor racemosus, Rhizopus nigricans, Cladosporium sp.).

4. Для микрофлоры воздуха помещения конноспортивной школы характерно преобладание кокковых форм микроорганизмов. Так, среднегодовая доля микроорганизмов рода Streptococcus составила 36,5% (728,98±67,25 КОЕ/л), Staphylococcus - 31,0% (610,69±56,84 КОЕ/л), Bacillus - 20,0% (401,94±40,08 КОЕ/л), БГКП - 12,5% (270,26±28,04 КОЕ/л), микроскопических грибов рода Penicillium - 32,0% (9,83±0,54 КОЕ/л), Aspergillus - 28,0% (8,47±0,58 КОЕ/л), Мисог - 18,0% (5,13±0,31 КОЕ/л), Rhizopus - 12,0% (3,26±0,24 КОЕ/л) и Cladosporium - 10,0% (2,73±0,26 КОЕ/л). А для микрофлоры воздуха вивария характерно преобладание бактерий группы кишечной палочки, среднегодовая доля которых составила 55,0% (1320,65±92,34 КОЕ/л), микроорганизмов рода Staphylococcus - 19,0% (452,03±39,95 КОЕ/л), Streptococcus - 15,0% (360,53±25,61 КОЕ/л), Bacillus - 11,0% (270,78±19,94 КОЕ/л), микроскопических грибов рода Penicillium — 26,0% (3,61±0,16 КОЕ/л), Aspergillus - 19,0% (2,65±0,33 КОЕ/л), Мисог - 34,0% (4,76±0,36 КОЕ/л), Rhizopus - 11,0% (1,49±0,12 КОЕ/л) и Cladosporium - 10,0% (1,40±0,15 КОЕ/л).

5. Микрофлора воздуха, накапливающаяся в закрытом помещении, обусловливает иммунобиологическую перестройку организма животного с появлением особей, проявляющих повышенную чувствительность к антигенам микроорганизмов различных физиологических групп. Выявлены особи, проявляющие гиперчувствительность к антигенам нескольких видов микроорганизмов. Из общего числа обследованных лошадей высокую чувствительность к одному антигену (Staphylococcus aureus) проявляли 3 особи (21%), к двум антигенам одновременно (Staphylococcus aureus, Candida albicans) — 1 (7%), к трем и более из испытанных антигенов (Streptococcus faecium, Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Serratia marcescens) — 4 (29%).

Низкую чувствительность ко всем антигенам проявляли 6 животных (43%). Среднее значение показателя лейкоцитолиза у лошадей, гиперчувствительных к одному антигену, составило 44,10±3,38%, к двум антигенам одновременно - 45,95±0,75%, к трем антигенам - 46,18±0,95%. У животных с низкой чувствительностью ко всем антигенам показатель лейкоцитолиза составил 13,50±0,97%.

6. Индуцированное воздействие на лабораторных крыс антигенами, полученными из основных представителей флоры воздушной среды вивария, обусловливало у них сенсибилизацию и повышенную чувствительность. Феномен повышенной чувствительности проявлялся усилением реакции лейкоцитолиза, увеличением уровня общего Ig Е и циркулирующих иммунных комплексов.

• иммунологической реактивности организма (гиперчувствительности).

8. Способ определения чувствительности животных к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности включает постановку-реакции лейкоцитолиза крови с использованием антигена, подсчет количества лейкоцитов в камере Горяева до и после инкубации и последующее определение чувствительности организма по показателю лейкоцитолиза, причем при постановке реакции вначале в пробы вносят раствор ацидин-пепсина, подсчет количества лейкоцитов до инкубации проводят только в контрольной пробе, а показатель лейкоцитолиза (ПЛЦ) определяют после инкубации опытной и контрольной проб по формуле: т-ттттт JI контроль-Л опыт , г.г.

ПЛЦ =---х 100% с последующим вычетом процента

Лконтроль спонтанного лейкоцитолиза (СЛЦ) в контрольной пробе „„„ Л к. до инкубации-Л к.после инкубации ,

СЛЦ =-----х 100%, при итоговом значении

Л к.до инкубации

ПЛЦ до 20% чувствительность организма считают низкой, 20-40% — средней, 40% и более - высокой.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Прибор для улавливания микроорганизмов (Пат. 37097 РФ, МГЖ7 С 12 N 1/00 / А. Ф. Дмитриев, В. Ю. Морозов, Ю. В. Краснощекова). Способ определения чувствительности лошадей к антигенам микроорганизмов различной таксономической принадлежности (Решение Роспатента № 2008139718/15(051324) от 05.10.2009 о выдаче патента на изобретение по заявке от 06.10.2008 / А. Ф. Дмитриев, Ю. В. Краснощекова, В. Ю. Морозов).

Разработанные нами прибор для улавливания микроорганизмов и способ определения чувствительности животных к микробным антигенам могут использоваться при изучении бактериальной обсемененности воздушной среды животноводческих помещений и определении чувствительности животных к антигенам микроорганизмов различных физиологических групп.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Высокая бактериальная обсемененность воздушной среды и других объектов животноводческих помещений способствует формированию популяций микроорганизмов, которые в результате многочисленных пассажей изменяют свои биологические свойства, значительно повышая их вирулентность, вследствие чего существенно изменилась не только структура инфекционных заболеваний, но и роль различных серогрупп и серовариантов микроорганизмов в их возникновении и развитии. В результате наблюдается тенденция ко все более широкому распространению болезней, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами.

Наличие санитарно-показательных бактерий в воздухе закрытых животноводческих и птицеводческих помещений свидетельствует о санитарно-эпизоотологическом и эпидемиологическом неблагополучии. Циркуляция условно-патогенной микрофлоры в закрытом помещении может предопределить патологию смешанного течения одного возбудителя инфекционного заболевания с другими.

Для обеспечения стабильного ветеринарного благополучия животноводства и птицеводства и охраны здоровья населения требуется применение комплекса мер борьбы и профилактики инфекционных болезней. Эти меры предусматривают проведение эффективных и экологически безопасных ветеринарно-санитарных мероприятий, направленных на разрыв эпизоотической цепи или максимальное снижение возбудителя во внешней среде. Принцип профилактики заболеваний, обусловленных условно-патогенной микрофлорой, должен основываться на знании допустимого количества и свойств этой микрофлоры в окружающей среде.

Своевременная индикация микроорганизмов в организме животных и основных элементах внешней среды, количественная и качественная оценка популяций позволят предвидеть возможность возникновения, развития и распространения болезней. Изучение и систематический контроль бактериальной обсемененности воздушной среды, снижение пороговой численности микроорганизмов являются необходимым условием эффективной организации ветеринарно-санитарных мероприятий на I животноводческих фермах, способствуя повышению сохранности поголовья.

Постоянный контакт дыхательных путей организма животного с внешней средой обусловливает присутствие на слизистых оболочках патогенной и условно-патогенной флоры. Многие виды сапрофитных микробов, поселяясь в верхних и нижних дыхательных путях и не вызывая резкой реакции со стороны средств гуморальной и клеточной защиты, длительно сохраняются в организме, вызывая его сенсибилизацию, на фоне которой возникает повышенная чувствительность к отдельным из них, и обусловливая различные патологические осложнения.

Сенсибилизация к микробным антигенам воздушной среды закрытых помещений может быть индуктором патологического процесса минимум 2 путями. Во-первых, аллергия к микробным антигенам может сопровождаться аутоиммунными реакциями как за счет сенсибилизации к антигенным детерминантам, общим для микробов и нормальной ткани, так и в связи с образованием комплексных антигенов нормальной ткани и микроба. Во-вторых, взаимодействие сенсибилизированных лейкоцитов с микробными антигенами может вызывать выработку лимфокинов, которые привлекают другие лейкоциты в очаг реакции, то есть индуцируют воспалительный процесс.

Развитие инфекции на слизистой оболочке дыхательных путей сопровождается поступлением в кровь чужеродных белков, обладающих антигенными свойствами. Их патогенетической основой является микробный токсикоз, токсемия и антигенная стимуляция. Под влиянием чрезмерной антигенной стимуляции в сочетании с иммунной недостаточностью и действием родственных бактериальным антигенам тканевых аутоантигенов или аутоиммунных реакций по принципу мимикрии возникает сложный комплекс взаимодействия их с развитием полиорганной патологии морфофункциональных изменений в организме: дистрофических и воспалительных изменений в органах пищеварения и дыхания (пневмоэнтериты), мочеполовой системы, в паренхиматозных органах и в иммунной системе с усилением апоптоза и снижением митотической активности иммунокомпетентных и других пролиферирующих клеток. При этом клиника заболевания зависит от сенсибилизации, свойств возбудителя и иммунологической реактивности организма.

Решающее значение для перехода микробной инфекции в инфекционное заболевание в организме имеет состояние реактивности клеток и тканей, определяющих реакцию целого организма. Все клетки организма независимо от того, какую они выполняют функцию, проявляют способность к активной реакции на любой антиген, вступивший с ними во взаимодействие. Причем степень и характер этой реакции клеток на один и тот же антиген зависят от многих причин. Один и тот же микробный антиген в одном и том же количестве в зависимости от условий может вызывать диаметрально противоположные по характеру реакции организма — иммунитет (иммунная реакция) или инфекционную аллергию (аллергическая реакция). Таким образом, специфическая реактивность является частным выражением иммунологической реактивности и проявляется в реакциях организма в ответ на строго определенные раздражения антигенного характера; она связана с соответствующей биологической перестройкой организма в результате повторного введения антигена.

В развитии специфического иммунного ответа на действие инфекта ведущее значение имеет функциональное состояние иммунокомпетентных клеток. Для его определения существует группа методов, в основе которых лежит изучение физиологически обусловленного изменения функционального состояния клеток при контакте их с чужеродными микроорганизмами, веществами, клетками.

Особую актуальность для оценки функциональной активности иммунокомпетентных клеток приобретают методы диагностики специфической сенсибилизации организма in vitro. Особое значение эти методы приобретают тогда, когда кожные реакции замедленного типа трудно учитываются из-за проявления реакций немедленного типа или при изучении клеточной гиперчувствительности к таким антигенам, которые нельзя ввести под кожу. Преимущество пробирочных методов заключается в том, что они позволяют в достаточно контролируемых условиях количественно изучать специфическое взаимодействие иммунокомпетентных клеток с аллергенами.

Существующие специфические методы аллергодиагностики направленные на: выявление свободных антител в сыворотке крови и секретах (РА, РИГА (РПГА), РН, РП, РСК, РИФ (метод Кунса), PACT, ИФА, хемилюминесцентный анализ, непрямой тест дегрануляции базофилов по Шелли и тучных клеток по Шварцу); обнаружение антител, связанных с лейкоцитами (базофилами, нейтрофилами, тромбоцитами и др.) (прямой тест дегрануляции базофилов крови по Шелли, реакция повреждения нейтрофилов крови (ППН-тест по В. А. Фрадкину), НСТ-тест, реакция агломерации лейкоцитов, реакция альтерации лейкоцитов, реакция лейкоцитолиза); определение лимфоцитов, сенсибилизированных к аллергену (PTMJI (РТММ), РБТЛ) — при своей достаточно высокой информативности и специфичности обладают методической сложностью, технической трудоемкостью, необходимостью наличия специальных стандартных аллергенов и реактивов, сложных питательных сред и других компонентов, необходимостью стерильной работы и отсутствием стандартизированной технологии проведения исследований, длительностью учета реакции по времени.

Современные иммуногенетические методы (многоцветная лазерная флюоцитометрия, real time PCR, дот-блот анализ) еще далеки от практического .применения и внедрения в ежедневную аллергологическую практику. В связи с этим существует необходимость продолжения исследований с целью совершенствования существующих и разработки новых объективных высокопроизводимых средств и способов для диагностики и лечения патологии иммунной системы.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1. Материалы и методы исследований

Исследования по теме диссертационной работы выполнены в 20042009 гг. на кафедре эпизоотологии и микробиологии Ставропольского государственного аграрного университета, в лабораториях обмена веществ, биохимии и иммуногенетики СНИИЖК, в Ставропольской межобластной ветеринарной лаборатории.

Объектами исследования были микроорганизмы воздушной среды помещений конноспортивной школы университета и вивария кафедры, представленные различными физиологическими группами {Staphylococcus, Streptococcus, Micrococcus, Escherichia, Proteus, Serratia, Bacillus), в том числе микроскопические грибы {Aspergillus, Penicillium, Candida, Mucor, Rhizopus, Cladosporium), лабораторные белые крысы линии «Wistar», спортивные лошади. В опыте использовались здоровые животные.

В исследовании было использовано 80 крыс обоего пола, 14 лошадей тракеннинской, ахалтекинской, буденновской и кабардинской пород.

В помещениях определяли общее количество микроорганизмов, содержащихся в 1 л воздуха (КОЕ) и качественный состав микрофлоры.

Из наиболее представительных культур микроорганизмов воздушной среды по методам, изложенным в справочных руководствах Пастера Е. У., Овода В. В. и др. (1989), Воронина Е. С., Петрова А. М. и др. (2002), Ашурововой 3. Д. (2005), нами были приготовлены корпускулярные {Streptococcus faecalis, Streptococcus faecium, Micrococcus luteus, Serratia marcescens) и водорастворимые {Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli) антигены, стандартизированные по стандартным образцам мутности ГНИИСиКМБП им. JI. А. Тарасевича с концентрацией 1-1,3 млрд. микробных клеток в 1 мл. Для сравнения использовали разведенные в 40 раз стандартные водорастворимые антигены {Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Candida albicans), полученные из Казанского НИИ эпидемиологии и микробиологии.

Лабораторные крысы при достижении физиологической и половой зрелости (4 месяца) с массой самок 180-220 г, самцов 230-280 г по принципу аналогов были разделены на 4 группы: первые три - опытные, четвертая — контрольная.

Для определения чувствительности лабораторных животных к антигенам микроорганизмов, накапливающейся в помещении, провели аэрозольное воздействие водорастворимыми антигенами воздушной среды вивария на опытные группы животных в настольном портативном боксе. Так, 1 группу животных (п=20) подвергли воздействию микст антигеном {Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus), 2 группу (n=20) — Staphylococcus aureus, 3 группу (n=20) — Streptococcus faecalis, 4 группа (n=20), контрольная, воздействию не подвергалась. Распыление жидкого антигена в количестве 2 мл осуществляли при помощи металлического коаксиального распылителя, обеспечивавшего относительно равномерное дробление жидкости и перемещение аэрозоля в боксе. Размеры частиц создаваемого аэрозоля относились к среднедисперсным, не превышали 4-6 мкм. Экспозиция воздействия на животных опытных групп была равна 30 мин.

Состояние гиперчувствительности организма крыс к микробным антигенам воздушной среды вивария определяли до и на 30, 60 и 90-й дни после воздействия путем постановки реакции лейкоцитолиза (Сохин А. А., Чернушенко Е. Ф., 1984) в нашей модификации.

Чувствительность организма лошадей к антигенам микрофлоры воздуха помещения конноспортивной школы проводили в период с марта по апрель двукратно с интервалом в 2 недели путем постановки реакции лейкоцитолиза -с использованием корпускулярных, водорастворимых и стандартных антигенов.

Состояние факторов неспецифической защиты и иммунного статуса лабораторных животных и лошадей оценивали по показателям: бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, содержанию белка и его фракций, морфологическому составу крови, фагоцитарной активности и интенсивности нейтрофилов, количеству Т- и В-лимфоцитов, концентрации циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), общего Ig Е в сыворотке крови.

Микробиологическая оценка воздушной среды закрытых помещений

Концентрацию микроорганизмов в воздухе закрытых помещений определяли с помощью разработанного нами прибора для улавливания микроорганизмов (RU 37097 U1, 10.04.04) и методических рекомендаций «Исследование микробной обсемененности воздуха животноводческих помещений» (Дмитриев А. Ф., Морозов В. Ю. Ставрополь: Агрус, 2005. 28 е.). Принцип индикации основан на улавливании микроорганизмов в емкость с улавливающей жидкостью, отделении аэрозольных частиц от газовой фазы и последующей концентрации их в улавливающей жидкости либо на поверхности фильтра (рис. 1-6). В приборе создается замкнутая для микроорганизмов, но воздухопроводная камера.

Прибор для улавливания микроорганизмов состоит из емкости 1 (рис. 1), выполненной в виде цилиндра, переходящего в конус, в нижней части которого находится улавливающая жидкость 2, а в верхней части под сеткой 3 устанавливается фильтр 4, и с помощью уплотнительного резинового кольца 5 прижимается крышкой 6. В средней части циклона имеется жиклер 7, расположенный под острым углом к его вертикальной оси (например, под углом 45°), причем ось жиклера 7 в горизонтальной плоскости А не пересекает ось симметрии и расположена касательно его вертикальной оси, с дополнительной насадкой 8, выполненной в виде конуса снабженного фильтром 9, который устанавливается с помощью уплотнительного резинового кольца 10 и прижимается крышкой 11, причем дополнительная насадка 8 с фильтром 9 установлены перед жиклером 7.

Рис. 1. Схема прибора для улавливания микроорганизмов

Рис. 3. Прибор для улавливания микроорганизмов, соединенный с электроаспиратором

Прибор для улавливания микроорганизмов работает следующим образом (рис. 4): для проведения исследований емкость 1 прибора заполняют улавливающей жидкостью 2 до уровня жиклера 7. Фильтр 4 устанавливают только в верхней части прибора под сеткой 3 с помощью уплотнительного резинового кольца 5 и прижимают крышкой 6.

Рис. 4. Подготовка прибора к работе

Включение электроаспиратора (рис. 3) в режиме 3 л/мин создает разряжение воздуха в емкости 1, что и обеспечивает поступление в нее исследуемого воздуха через жиклер 7. Воздух, проходя через отверстие жиклера 7, попадает в улавливающую жидкость 2, затем поднимается вверх по емкости 1 в виде циклона и через фильтр 4 отсасывается наружу.

Взвешенные частицы и микроорганизмы задерживаются в улавливающей жидкости 2 и оседают на внутренней поверхности емкости 1 улавливателя. Микроорганизмы, не отделившиеся от воздуха, задерживаются фильтром 4 и концентрируются на его поверхности непосредственно в улавливателе. После взятия определенного количества воздуха ставится дополнительная насадка 8 с фильтром 9, который прижимается крышкой 1 I с уплотнительной резинкой 10, что обеспечивает чистоту опыта. Прибор переворачивают, вследствие чего внутренняя поверхность емкости 1 отмывается улавливающей жидкостью 2, после чего, производят фильтрацию улавливающей жидкости 2 через фильтр 4 путем откачивания улавливающей жидкости 2 электроаспиратором в режиме 5 л/мин. В результате фильтрации улавливающей жидкости 2 микрофлора концентрируется на поверхности фильтра 4 с мелкопористой сеткой 3. В условиях лаборатории производят окрашивание фильтра 4 и прямой подсчет микроорганизмов с помощью микроскопа (рис. 6).

Рис. 5. Наложение фильтра на поверхность плотной питательной среды (среда Эндо) для проращивания и определения Коли-индекса воздуха

Рис, 6. Прямой подсчет микроорганизмов на поверхности фильтра после предварительного окрашивания и обесцвечивания фильтра

Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:

• данный прибор позволяет проводить исследования без использования стерильного бокса;

• устройство обладает повышенной эффективностью улавливания микроорганизмов, так как позволяет осуществлять двойную фильтрацию воздуха: на входе через жидкость и на выходе через фильтр;

• предлагаемый улавливатель легко стерилизуется всеми общепринятыми способами;

• прибор дешев и прост в изготовлении и эксплуатации.

Взятие пробы воздуха с помощью прибора для улавливания микроорганизмов обеспечивает высокое качество улавливания за счет: ударного действия воздушной струи в жидкость; осаждения микроорганизмов в конической емкости под действием гравитации; использования бактериального фильтра. Состав задерживаемых микроорганизмов определяется характеристикой фильтров, используемых в улавливателе.

Конструктивные особенности улавливателя позволяют проводить различные варианты анализа воздуха:

• определение общего количества микроорганизмов путем высева улавливающей жидкости на питательную среду;

• прямой счет микроорганизмов на поверхности мембранного фильтра;

• определение санитарно-показательных микроорганизмов (Коли-индекса воздуха, количество гемолитических кокков и др.).

При определении количества микроорганизмов путем высева улавливающей жидкости учитывали только жизнеспособные клетки микроорганизмов, т. е. те из них, которые способны размножаться на данной среде и в определенных условиях их культивирования. Этот метод позволяет учесть не только численность микроорганизмов в определенном объеме воздуха, но и оценить их разнообразие по морфологии колоний. Точность метода зависит от числа подсчитанных колоний, а не от числа повторов.

Взятие усредненной пробы воздуха осуществляли с помощью электроаспиратора в режиме 5 л/мин, по 3 мин в трех точках по диагонали и в двух точках по вертикали помещения. Утреннее взятие пробы воздуха осуществляли в 7 часов до раздачи корма и замены подстилки, вечернее — 17 часов при аналогичных условиях. Отбор проб проводили еженедельно в различные периоды года (зимний, весенний, летний и осенний) в течение двух лет. Пробы воздуха брали в одной повторности.

Микробиологические исследования проводили в соответствии с методическим пособием и рекомендациями (Скородумов Д. И., Субботин В. В. и др., 2005; Смирнова JI. И., Кондратьева М. А. и др., 2005).

Для исследования на аэробную и факультативно-анаэробную микрофлору готовили серию десятикратных разведений (конечное разведение 10"9). Диагностическими считали разведения 10"3, 10"4, 10"5, 10"6,

7 8

10" , 10' . Полученные разведения засевали на следующие плотные питательные среды: 5% кровяной мясо-петонный агар, солевой агар, сахарный агар, среду Эндо, Левина, мясо-петонный агар, среду Сабуро, картофельный агар. Посевы инкубировали в термостате при 37°С 24 часа для бактериальной флоры, при 28°С 6-9 дней - для микобиоты.

Идентификацию выделенных культур осуществляли в соответствии с требованиями, изложенными в «Кратком определителе бактерий Берджи» (1997).

Дифференциацию видов бактерий проводили по морфологическим, тинкториальным, культуральным и биохимическим свойствам. Морфологические свойства выделенных культур изучали в мазках, окрашенных по Граму, подвижность определяли в полужидком агаре (0,250,3% концентрации). Изучение культуральных и биохимических свойств проводили, используя питательные среды с углеводами и многоатомными спиртами (среды Гисса), а также пластины биохимической, дифференцирующей энтеробактерии (ПБДЭ), пластины биохимической, дифференцирующей стафилококки (ПБДС), тест-системы СТРЕПТОтест-16 (Lachema, Чехия).

Чувствительность выделенных микроорганизмов к антибиотикам определяли качественным методом диффузии в агар (метод стандартных бумажных дисков) (Скориков А. В. и др., 2005). В работе были использованы диски со следующими антибиотиками: ципрофлоксацин, энрофлоксацин, гентамицин, канамицин, неомицин, ампициллин, бензилпенициллин, тетрациклин, эритромицин, рифампицин, полимиксин.

Методика приготовления корпускулярных и водорастворимых антигенов

1. Приготовление корпускулярных бактериальных антигенов

Чистые суточные бактериальные культуры, выращенные на скошенном мясопептонном агаре (МПА), отмывали от компонентов питательной среды центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 мин и суспендированием в стерильном физиологическом растворе. Процедуру отмывки бактериальных клеток повторяли 3-4 раза.

Чистоту полученной бактериальной суспензии проверяли, исследуя под микроскопом морфологические и тинкториальные свойства бактерий в приготовленных из суспензии и окрашенных по методу Грамма мазках.

Центрифугат разводился до нужной концентрации с использованием стандартных образцов мутности. Далее бактериальная суспензия подвергалась инактивации в водяной бане при температуре 70°С в течение 30 мин. Для' проверки стерильности, одну-две капли инактивированного антигена засевали в пробирку с 3-5 мл мясопептонного бульона (МПБ), инкубировали в термостате при 37°С в течение суток. При отсутствии помутнения бульона и осадка приготовленную суспензию считали стерильной.

2. Приготовление водорастворимых бактериальных антигенов

Приготовление бактериальной суспензии необходимой концентрации аналогично п. 1. Далее она подвергалась ультразвуковой дезинтеграции при 22кГц в течение 60 мин, поддерживая температуру +2+5°С. Использовали аппарат типа УТП-ЗМ (ультразвуковой терапевтический переносной аппарат).

Неразрушенные клетки и субклеточные субстанции осаждали центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 мин. Надосадок использовался в качестве антигена.

Стерильность полученных антигенов проверяли аналогичным образом. Методика постановки реакции лейкоцитолиза

Для определения антигенного воздействия микрофлоры воздуха на организм животных ставили реакцию лейкоцитолиза (Сохин А. А., Чернушенко Е. Ф., 1984) в собственной модификации с целью повышения достоверности определения чувствительности животных и увеличения количества анализируемых антигенов микроорганизмов различной таксономической принадлежности. Проводили реакцию лейкоцитолиза с лейкоцитами крови с использованием антигена, подсчет количества лейкоцитов в камере Горяева до и после инкубации и последующее определение чувствительности организма по показателю лейкоцитолиза. При этом при постановке реакции вначале в пробы вносили раствор ацидин-пепсина, подсчет количества лейкоцитов до инкубации проводили только в контрольной пробе, а показатель лейкоцитолиза (ПЛЦ) определяли после инкубации опытной и контрольной проб по формуле: тттт JI контроль - JI опыт

ПЛЦ =---х100% с последующим вычетом процента

JI контроль спонтанного лейкоцитолиза (СЛЦ) в контрольной пробе тттт JI к. до инкубации -Лк.после инкубации т-тп-гт

СЛЦ =-----х100%, при итоговом значении ПЛЦ

Лк.до инкубации до 20% чувствительность организма считали низкой, 20-40% — средней, 40% и более — высокой.

Гематологический (морфологический) анализ крови

Морфологический анализ крови, лейкоцитарную формулу определяли общепринятыми методиками с использованием микроскопа и камеры Горяева. Концентрацию гемоглобина определяли гематиновым методом Сали с помощью гемометра ГС-3 (Кудрявцев А. А., Кудрявцева Л. А., 1974). Показатели неспецифической защиты организма

Определение фагоцитарной активности нейтрофилов ' проводили по Кост и Стенко (Кудрявцев А. А., Кудрявцева Л. А., 1974), в качестве объекта фагоцитоза использовали частицы латекса (D = 1,5 мкм). Учет результатов реакции осуществляли путем подсчета фагоцитированных частиц в 100 нейтрофильных клетках, с выведением основных (фагоцитарная активность и интенсивность) и расчетным путем дополнительных (фагоцитарное число) показателей.

Определение общего белка в сыворотке крови животных осуществляли рефрактометрическим методом в рефрактометре RL 140 (Poland), белковых фракций - нефелометрическим (турбидиметрическим) методом

Методические указания по применению унифицированных биохимических методов исследования крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях. М., 1981. 84 е.).

Лизоцимную активность сыворотки крови определяли фотонефелометрическим методом по Дорофейчуку В. Г. (1968) с использованием суточной агаровой культуры Micrococcus lysodeicticus штамм 2665. Бактерицидную активность сыворотки крови определяли фотонефелометрическим методом, описанным Смирновой О. В. и Кузьминой Т. А. (1966) в модификации Бухарина О. В. и Созыкина В. Л. (1979) с использованием суточной агаровой культуры Escherichia coli штамм 078. Оценка иммунного статуса животных

Определение Т-лимфоцитов осуществляли методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК). Определение соотношения лимфоцитов с хелперной и супрессорной функциями проводили в теофиллиновом тесте. Определение В-лимфоцитов проводили методом розеткообразования с эритроцитами мыши в системе ЕАС (Фримель X. М., 1987).

Определение концентрации циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови проводили методом преципитации полиэтиленгликолем молекулярной массой 6000 (ПЭГ6ооо) (Digeon М. et al., 1977).

Определение концентрации общего Ig Е в сыворотке крови проводили с помощью твердофазного ИФА («сэндвич») с использованием монорецепторных сывороток к Ig Е фирмы «Вектор Бест».

Графический материал результатов (графики, диаграммы) был получен с использованием программы Microsoft Excel 2007.

3.2. Результаты исследований 3.2.1. Бактериальная обсемененность воздушной среды закрытых помещений

Микробиологический анализ биологического аэрозоля помещения конноспортивной школы и вивария кафедры показал, что количественный и видовой состав микроорганизмов в воздухе этих помещений подвержен изменчивости.

Качественный состав микрофлоры воздуха помещения конноспортивной школы характеризовался наличием Escherichia coli, Proteus mirabilis, Serratia marcescens, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus faecium, Streptococcus faecalis, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, в том числе микроскопических грибов - Penicillium sp., Aspergillus flavus, Asp. fumigatus, Asp. niger, Mucor racemosus, Rhizopus nigricans, Cladosporium sp.

Бактериальный фон биологического аэрозоля вивария был представлен условно-патогенными микроорганизмами Escherichia coli, Proteus mirabilis, Serratia marcescens, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Streptococcus faecium, Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Micrococcus luteus, в том числе микроскопическими грибами Penicillium sp., Aspergillus flavus, Asp. fumigatus, Mucor racemosus, Rhizopus nigricans, Cladosporium sp.

Динамика изменения общей бактериальной обсемененности воздушной среды помещений конноспортивной школы и вивария представлена в таблице 1.

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2009 года, Краснощекова, Юлия Викторовна

1. ЬА. с. 1076090 СССР, МПК3 А 61 В 10/00. Способ определения миграционной способности лейкоцитов периферической крови / И. Б. Каргина, С. Н. Москвина, В. Я. Арион (СССР). № 3443674/28-13 ; заявл. 21.05.82 ; опубл. 28.02.84, Бюл. № 8. - С. 18.

2. А. с. 1143399 СССР, МПК4 А 61 В 10/00. Способ дифференциальной диагностики постинфекционной и поствакцинальной аллергии на туберкулин / В. М. Борис (СССР). № 3320477/28-13 ; заявл. 08.05.81 ; опубл. 07.03.85, Бюл. № 9. - С. 20.

3. А. с. 1165365 СССР, МПК4 А 61 В 10/00. Способ дифференциальной диагностики пищевой аллергии / В. Г. Дорофейчук, Н. М. Рощина, Е. В. Салина, Н. Е. Сазанова, О. В. Бугрова (СССР). № 3555940 ; заявл. 11.01.1983 ; опубл. 07.07.85, Бюл. № 25. - С. 27.

4. А. с. 1197640 СССР, МПК4 А 61 В 10/00. Способ диагностики аллергии / А. Г. Чучалин, Ю. К. Новиков, Н. А. Бражникова, Л. Г. Коркина, В. К. Трескунов (СССР). № 3611709/28-14 ; заявл. 27.06.83 ; опубл. 15.12.85, Бюл. №46.-С. 19.

5. А. с. 1423113 СССР, МПК4 А 61 В 10/00. Способ диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / А. Л. Лазовская, Н. А. Мякин (СССР). № 3793769/30-15 ; заявл. 14.06.84 ; опубл. 15.09.88, Бюл. № 34. - С. 24.

6. А. с. 1464089 СССР, МПК4 G 01 N 33/53. Способ проведения иммуноанализа / А. П. Савицкий, Д. Б. Папковский, И. В. Березин, Г. В. Пономарев (СССР). № 4201377/28-14 ; заявл. 25.02.87 ; опубл. 07.03.89, Бюл. №9.-С. 194.

7. А. с. 1532875 СССР, МПК4 G 01 N 33/53. Способ определения сенсибилизации организма бактериальными аллергенами / Н. И. Якуба (СССР). № 4357184/28-14 ; заявл. 04.01.88 ; опубл. 30.12.89, Бюл. № 48. - С. 227.

8. А. с. 1534401 СССР, МПК5 G 01 N 33/53. Способ определения состояния иммунитета при дифтерийной инфекции / Н. Н. Басова, О. И. Ивченко, Г. И. Коростылева (СССР). № 4005445 ; заявл. 03.01.86 ; опубл. 07.01.90, Бюл. № 1.-С. 180.

9. А. с. 1569705 СССР, МПК5 G 01 N 33/48. Способ определения сенсибилизации к аллергенам / Г. Б. Афонина, В. Г. Бордонос, Ю. И. Губский, Л. И. Скрипка (СССР). № 4318304/28-14 ; заявл. 20.10.87 ; опубл. 07.06.90, Бюл. № 21. - С. 184.

10. А. с. 1635141 СССР, МПК5 G 01 N 33/53. Способ оценки функциональногосостояния лимфоцитов / Л. П. Жовниренко, А. Г. Гачечиладзе (СССР). -№ 4391290/14 ; заявл. 11.02.88, опубл. 15.03.91, Бюл. № Ю.-С. 151.

11. А. с. 1640652 СССР, МПК5 G 01 N 33/53. Способ определения микробной резистентности организма / В. П. Рочев, Н. И. Аверьянова, А. А. Гаслова (СССР). -№ 4366629/14 ; заявл. 22.01.88 ; опубл. 07.04.91, Бюл. № 13. С. 184.

12. А. с. 1803873 СССР, МПК5 G 01 N 33/53. Способ диагностики аллергии / И. М. Воронцов, Е. С. Нишева, М. А. Кириллов (СССР). № 4929008/14 ; заявл. 04.04.91 ; опубл. 23.03.93, Бюл. № 11. - С. 135.

13. А. с. 2005121866/15 РФ, МПК7 G 01 N 33/53. Способ диагностики аллергии / Н. В. Минаева, Е. Г. Фурман, И. П. Корюкина, И. И. Львова, Ю. А. Верхоланцев, М. Ю. Новиков (РФ). -№ 2005121866/15 ; заявл. 11.07.05 ; опубл. 20.01.07, Бюл. № 2 (I ч). С. 113.

14. А. с. 2006112783/13 РФ, МПК7 А 61 К 39/35, 39/04. Способ диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / В. А. Сысоев, В. Г. Луницын (РФ). № 2006112783/13 ; заявл. 17.04.06 ; опубл. 27.10.07, Бюл. № 30 (I ч). - С. 46.

15. Авербах, М. М. Повышенная чувствительность замедленного типа и инфекционный процесс / М. М. Авербах, В. Я. Гергерт, В. И. Литвинов. — М. : Медицина, 1974. 248 с.

16. Адо, А. Д. Общая аллергология / А. Д. Адо. Изд. 2-е, перераб. и доп. -М. : Медицина, 1978. - 464 с.

17. Адо, В. А. Аллергия / В. А. Адо. -М. : Знание, 1985. 160 с.

18. Адо, В. А. Поллинозы (Повышенная чувствительность к пыльце растений) / В. А. Адо, Н. Г. Астафьева. М. : Знание, 1991.-224 с.

19. Аллергия к стафилококкам / под ред. Н. Д. Беклемишева. Алма-Ата : Наука, 1984.- 176 с.

20. Аллергология: словарь-справочник / Н. М. Бережная, JI. П. Бобкова, И. А. Петровская, С. И. Ялкут. Киев : Наукова Думка, 1986. — 448 с.

21. Аралов, Н, Р. Морфологические маркеры экологического риска формирования хронических обструктивных заболеваний легких / Н. Р. Аралов // Иммунология. 2005. - № 2. - С. 120-121.

22. Барамова, Ш. А. Изучение реактивности организма сайги с помощью кожной пробы / Ш. А. Барамова // Современные проблемы эпизоотологии / Ин-т эксперим. ветеринарии Сибири и Дал. Востока. Новосибирск, 2004.-С. 39-48.

23. Беклемишев, Н. Д. Аллергия к микробам в клинике и эксперименте / Н. Д. Беклемишев, Г. С. Суходоева. М. : Медицина, 1979. — 264 с.

24. Беклемишев, Н. Д. Иммунопатология и иммунорегуляция (при инфекциях, инвазиях и аллергиях) / Н. Д. Беклемишев. М. : Медицина, 1986. - 256 с.

25. Беклемишев, Н. Д. Поллинозы / Н. Д. Беклемишев, Р. К. Ермекова, В. С. Мошкевич. -М. : Медицина, 1985. 240 с.

26. Бернет, Ф. Клеточная иммунология / Ф. Бернет ; пер. с англ. М. : Мир, 1971.-537 с.

27. Бухарин, О. В. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий / О. В. Бухарин // ЖМЭИ. 1994. - № 4. - С. 4-13.

28. Бухарин, О. В. Фотонефелометрический метод определения бактерицидной активности сыворотки' крови / О. В. Бухарин, В. JI. Созыкин // Сб. науч. тр. / Оренбург, мед. ин-т. Оренбург, 1979. - С. 4345.

29. Верещагин,Д. Чистый воздух — здоровые животные. Контроль качества воздуха на ферме / Д. Верещагин // Молоко и корма. Менеджмент. 2006. -№ 1.-С. 18-20.

30. Влияние антигенов на неспецифическую реактивность организма / под ред. Ю. Ф. Федорова. Томск : Изд-во Том. ун-та, 1978. - 224 с.

31. Влияние экологических факторов на организм животных / И. М. Донник, И. А. Шкуратова, А. Д. Шушарин, Н. А. Верещак, Я. Б. Бейкин // Ветеринария. 2007. - № 6. - С. 38-42.

32. Вознесенский, Н. К. Хемилюминесценция нейтрофилов в аллергодиагностике / Н. К. Вознесенский, Н. С. Манеркина // Клин. лаб. диагн. 2000. - № 8. - С. 18-20.

33. Воробьев, А. А. Медицинская и санитарная микробиология: учеб. пособие / А. А. Воробьев, Ю. С. Кривошеин, В. П. Широбоков. М. : Академия, 2003.-464 с.

34. Высоцкий, А. Э. Ветеринарно-санитарные аспекты борьбы с инфекционными болезнями животных / А. Э. Высоцкий // Вет. медицина Беларуси. 2006. - № 2. - С. 2-4.

35. Галактионов, В. Г. Графические модели в иммунологии / В. Г. Галактионов. -М. : Медицина, 1986. -240 с.

36. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. М. : Практика, 1998.-459 с.

37. Грачева, Т. А. Оценка сенсибилизации лабораторных животных, иммунизированных туляремийной вакциной, методом регистрации хемилюминесценции лейкоцитов / Т. А. Грачева, Б. А. Рудой, В. П. Рассанов // Иммунология. 2006. - № 1. - С. 41-42.

38. Григорьева, М. П. Разработка микрометода культивирования клеток крови человека / М. П. Григорьева, И. И. Копелян // Бюлл. экспер. биол. 1972. -Вып. 74, №8.-С. 119-122.

39. Гущин, В. Н. Загрязнение воздушной среды ферм крупного рогатого скота / В. Н. Гущин, Н. Н. Потемкина, В. М. Анашин // Ветеринария. 1999. - № 12.-С. 45-49.

40. Дементьев, Е. П. Экологические проблемы в животноводстве / Е. П. Дементьев, В. А. Казадаев // Резервы повышения эффективности агропромышленного производства / Башк. науч.-исслед. ин-т сел. хоз-ва. -Уфа, 2004.-С. 383-386.

41. Денисов, В. Н. Агармиграционный тест для исследования фактора, ингибирующего подвижность лейкоцитов / В. Н. Денисов // Лаб. дело. -1981. — № 6. — С. 359-362.

42. Дмитриев, А. Ф. Санитарно-микробиологическая оценка воздушной среды животноводческих помещений : учеб. пособие / А. Ф. Дмитриев. -Целиноград : ЦСХИ, 1986. 58 с.

43. Дмитриев, А. Ф. Исследование микробной обсемененности воздуха животноводческих помещений : метод, рекомендации / А. Ф. Дмитриев, В. Ю. Морозов. Ставрополь : АГРУС, 2005. - 28 с.

44. Дмитриев, А. Ф. Прибор для улавливания микроорганизмов : информ. листок № 63-026-04 / А. Ф. Дмитриев, В. Ю. Морозов, Ю. В. Краснощекова / ЦНТИ. Ставрополь, 2004. - 3 с.

45. Дорофейчук, В. Г. Определение активности лизоцима нефелометрическим методом / В. Г. Дорофейчук // Лаб. дело. 1968. - № 1. - С. 28-30.

46. Дуева, JI. А. Сенсибилизация к промышленным химическим аллергенам при бронхиальной астме у детей в условиях загрязнения окружающей среды / JI. А. Дуева, Ю. JI. Мизерницкий // Медицина труда и промышленная экология. 1997. - № 2. - С. 41^4.

47. Золотарева, Н. А. Иммунодефициты, профилактика и борьба с ними / Н. А. Золотарева // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях / Всерос. науч.-исслед. вет. ин-т патологии, фармакологии и терапии. Воронеж, 2002. — С. 271-274.

48. Иммунная альтерация лейкоцитов / А. А. Воробьев, С. С. Афанасьев, Г. Т. Патрикеев и др. // ЖМЭИ. 1978. - № 12. - С. 21-28.

49. Иммунодефицитные состояния / под ред. В. С. Смирнова, И. С. Фрейдлин. СПб. : Фолиант, 2000. - 568 с.

50. Иммунологическая реактивность у сельскохозяйственных животных и возможности ее использования в селекции на повышение устойчивости к заболеваниям / Ю. В. Силин, Г. Н. Сердюк, Т. П. Сторожилова, А. М.

51. Андреев, 3. А. Махария, А. В. Казаков // Современные методы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных / Всерос. науч.-исслед. ин-т генетики и разведения с.-х. животных. — СПб., 2001. — С. 195-197.

52. Иммунологические методы / под ред. X. Фримеля ; пер. с нем. А. П. Тарасова. М. : Медицина, 1987. - 472 с.

53. Иммунология / Е. С. Воронин, А. М. Петров, М. М. Серых, Д. А. Девришов ; под ред. Е. С. Воронина. М. : Колос-Пресс, 2002. - 408 с.

54. Иммунология и аллергология. Цветной атлас: учеб. пособие / под ред. А. А. Воробьева, А. С. Быкова, А. В. Караулова. М. : Практ. мед., 2006. -288 с.

55. Иммунопатология и аллергология. Алгоритмы диагностики и лечения / под ред. акад. РАМН проф. Р. М. Хаитова. М. : ГЭОТАР-МЕД, 2003. -112 с.

56. Иммуноферментный анализ / под ред. Т. Т. Нго, Г. Ленхоффа.; Пер. с англ. под ред. А. М. Егорова. М. : Мир, 1988. - 444 с.

57. Ишимова, Л. М. Проблемы иммунологической реактивности и аллергии / Л. М. Ишимова. -М. : Медицина, 1971. 146 с.

58. Каштанов, А. В. Проблемы и перспективы изучения функционирования микробных сообществ животноводческих помещений / А. В. Каштанов // Сб. науч. тр. / Всерос. науч.-исслед. ин-т вет. санитарии, гигиены и экологии. М., 2003. - Т. 115. - С. 63-67.

59. Кисленко, В. Н. Ветеринарная микробиология и иммунология. Часть 2. Иммунология / В. Н. Кисленко, Н. М. Колычев. М. : КолосС, 2007. - 224 с.

60. Китаев, М. И. Иммуноаллергические реакции лейкоцитов при туберкулезе / М. И. Китаев. Фрунзе : Илим, 1978. - 249 с.

61. Клещи домашней пыли и плесневые грибы источник бытовых аллергенов / Т. М. Желтикова, А. Д. Петрова-Никитина, А. Б. Антропова, Е. Н. Биланенко, В. J1. Мокеева, JI. Н. Чекунова // ЖМЭИ. - 2001. - № 6. -С. 94-99.

62. Клиническая иммунология и аллергология / под ред. Г. Лолора-мл., Т. Фишера, Д. Адельмана; пер. с англ. М. В. Пащенко, Н. Б. Гамалея; под ред. Е. Н. Образцовой, В. М. Нечушкиной, A. G. Апт. М. : Практика, 2000. - 806 с.

63. Когосова, Л. С. Применение реакции бласттрансформации лимфоцитов для выявления аллергии замедленного типа у больных туберкулезом / Л. С. Когосова, Е. Ф. Чернушенко // Пробл. туб. 1970. - № 4. - С. 75-78.

64. Кудрявцев, А. А. Клиническая гематология животных / А. А. Кудрявцев, Л. А. Кудрявцева. М. : Колос, 1974. - 399 с.

65. Кульберг, А. Я. Молекулярная иммунология / А. Я. Кульберг. М. : Высшая школа, 1985. - 287 с.

66. Лебедева, В. Л. Применение методов вариационной статистики в ветеринарии / В. Л. Лебедева // Вестник ветеринарии. 1997. - № 1. - С. 10-17.

67. Литвин, В. Ю. Эколого-эпидемиологические аспекты случайного паразитизма некоторых патогенных бактерий / В. Ю. Литвин // ЖМЭИ. — 1986.-№ 1.-С. 85-91.

68. Логинов, С. И. Иммунные комплексы у животных и человека: норма и патология / С. И. Логинов, П. Н. Смирнов, А. Н. Трунов. Новосибирск, 1999.-144 с.

69. Лопата, Ф. Ф. Санитарно-бактериологическая оценка органических отходов животноводческих предприятий / Ф. Ф. Лопата // Ветеринария. -2007. -№ Ю.-С. 38-41.

70. Ляшенко, В. А. Механизмы активации иммунокомпетентных клеток / В.

71. A. Ляшенко, В. А. Дроженников, И. М, Молотковская. М. : Медицина, 1988.-240 с.

72. Мавзютов, А. Р. «Острова» патогенности условно-патогенных энтеробактерий / А. Р. Мавзютов, С. В. Фиалкина, В. М. Бондаренко // ЖМЭИ. 2002. - № 6. - С. 5-9.

73. Мартынов, А. И. Исследование возможности прогнозирования величины риска развития иммунодефицитных состояний у сотрудников, работающих в условиях профессиональной вредности / А. И. Мартынов, 3.

74. B. Зеленова // Иммунология. 2003. - № 3. - С. 173-177.

75. Медведев, А. П. Условно-патогенные микробы и их роль в инфекционной патологии животных / А. П. Медведев, А. А. Вербицкий, М. В. Грибанова // Вет. медицина Беларуси. — 2006. № 1. — С. 12-13.

76. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология : учебник / под ред. А. А. Воробьева. — М. : Медицинское информационное агентство, 2004.-691 с.

77. Медуницин, Н. В. Повышенная чувствительность замедленного типа (клеточные и молекулярные основы) / Н. В. Медуницин. М. : Медицина, 1983.- 160 с.

78. Медуницын, Н. В. Аллергическая альтерация лейкоцитов у больных поллинозами / Н. В. Медуницын, В. Б. Гервазиева // Бюлл. экспер. биол. — 1967.-№6.-С. 77.

79. Методические указания по применению унифицированных биохимических методов исследований крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях. М. : МСХ СССР, 1981. - С. 3-13.

80. Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных / Д. И. Скородумов, В. В. Субботин, М. А. Сидоров, Т. С. Костенко. — М. : ИзографЪ, 2005. 656 с.

81. Микробная обсемененность животноводческих помещений и молочной железы коров на МТФ учебно-опытного хозяйства УГСХА / Ю. Б.

82. Никулыиина, М. А. Багманов, Е. В. Горбунова, А. А. Агаев // Современное развитие АПК : региональный опыт, проблемы, перспективы / Ульян, гос. с.-х. акад. Ульяновск, 2005. - Ч. 4-5. - С. 284-286.

83. Митерева, Д. Е. Использование аэросила в качестве носителя специфического аллергена в хемилюминесцентном анализе / Д. Е. Митерева, В. Е. Агафонов // ЖМЭИ. 2003. - № 6. - С. 67-69.

84. Михайлов, И. Ф. Флюоресцирующие антитела и методы их применения / И. Ф. Михайлов. М. : Медицина, 1968. - 188 с.

85. Мозжерин, В. И. Санитарно-гигиенические условия содержания животных на уровень новых задач / В. И. Мозжерин // Резервы повышения эффективности агропромышленного производства / Башк. науч.-исслед. ин-т сел. хоз-ва. - Уфа, 2004. - С. 386-389.

86. Молекулярные механизмы взаимоотношений организма и патогенных энтеробактерий / М. М. Туйгунов, 3. Г. Габидуллин, А. В. Зурочка, О. В. Бухарин // ЖМЭИ. 2003. - № 4. - С. 23-27.

87. Молекулярные механизмы персистирующей инфекции / О. В. Бойко, А. А. Терентьев, А. А. Николаев, А. М. Чомаев. — Астрахань : Астраханский университет, 2006. 127 с.

88. Морозов, В. Ю. Индикация микрофлоры воздуха закрытых помещений и ее влияние на чувствительность организма: автореф. дис. . канд. ветеринар, наук : (16.00.03) / Морозов Виталий Юрьевич. Ставрополь,2005.-23 с.

89. Москалев, А. В. Инфекционная иммунология : учеб. пособие / А. В. Москалев, В. Б. Сбойчаков; под ред. Ю. В. Лобзина. СПб. : Фолиант,2006.-175 с.

90. Нелимфоидные механизмы иммунопатологии / А. М. Земсков, В. М. Земсков, В. А. Караулов и др.. М. : Гэотар-Медиа, 2007. - 450 с.

91. Новиков, Д. К. Клеточные'методы иммунодиагностики / Д. К. Новиков, В. И. Новикова. Минск : Беларусь, 1979. - 222 с.

92. Новиков, Д. К. Клиническая аллергология : справ, пособие / Д. К. Новиков. — Минск : Выш. шк., 1991. 511 с.

93. Новиков, Д. К. Медицинская иммунология : учеб. пособие / Д. К. Новиков. — Минск : Выш. шк., 2005. 301 с.

94. Новиков, Д. К. Справочник по клинической иммунологии и аллергологии / Д. К. Новиков. — Минск : Беларусь, 1987. 223 с.

95. Новые методы иммуноанализа / пер. с англ. ; под ред. А. М. Егорова. -М. : Мир, 1991.-280 с.

96. Новый метод (бласттрансформация лимфоцитов) выявления аллергии замедленного типа при заболевании сердечно-сосудистой системы / Г. Е. Перчикова, А. В. Виноградов, С. П. Абугаева, И. Н. Шабанова // Кардиология. 1968. - № 3. - С. 149-156.

97. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам : рекомендации / А.В. Скориков и др. — Краснодар, 2005. — 26 с.

98. Определитель бактерий Берджи в 2 т. / под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Смита, Дж. Стейли, С. Уильямса. 9 изд. - М. : Мир, 1997. - 800 с.

99. Основы инфекционной иммунологии / В. В. Макаров, А. А. Гусев, Е. В. Гусева, О. Н. Сухарев. Владимир ; Москва : Фолиант, 2000. - 176 с.

100. Оценка клеточного иммунитета в скрининговом тесте клеточной миграции / О. Ф. Белая, И. Е. Герасимова, В. А. Малов и др. // Клинич. лаб. диагностика. 2001. - № 9. - С. 29-30.

101. Оценка ^специфического клеточного иммунитета с помощью современной модификации реакции торможения миграции лейкоцитов / А. В. Симонова, Т. В. Латышева, Е. А. Чирвон и др. // Иммунология. -2006.-№5.-С. 304-307.

102. Павлова, И. Б. Существование и развитие популяций патогенных бактерий в окружающей среде / И. Б. Павлова // Сб. науч. тр. / Всерос. науч.-исслед. ин-т вет. санитарии, гигиены и экологии. — М., 2005. — Т. 117.-С. 361-378.

103. Пат. 2061241 Российская Федерация, МПК6 G 01 N 33/53. Способ определения специфической сенсибилизации лимфоцитов / Роберт А. Левин, Стефан С. Вордло (US). № 4743719/14 ; заявл. 18.04.90 ; опубл. 27.05.96, Бюл. № 15. -С. 270.

104. Н. Лазуков. -№ 2002120835/15 ; заявл. 30.07.02 ; опубл. 27.01.04, Бюл. № 3 (III ч). С. 794.

105. Пат. 2314826 Российская Федерация, МПК7 А 61 К 39/35, 39/04. Способдиагностики туберкулеза крупного рогатого скота / В. А. Сысоев, В. Г.

106. Луницын ; заявитель и патентообладатель Всерос. науч.-исслед. ин-т пантового оленеводства. № 2006112783/13 ; заявл. 17.04.06 ; опубл. 20.01.08, Бюл. № 2 (III ч). - С. 607.

107. Пат. 2315315 Российская Федерация, МПК5 G 01 N 33/53, 33/60. Способ ранней диагностики туберкулезной инфекции у детей / Л. И. Веремеевич,

108. A. В. Лысов, Ю. И. Пацула, М. А. Плеханова, Н. В. Соботюк ; заявитель и патентообладатель Омская гос. мед. акад. — № 2005110511/15 ; заявл. 11.04.05 ; опубл. 20.01.08, Бюл. № 2 (III ч). С. 847.

109. Пат. 2324942 Российская Федерация, МПК5 G 01 N 33/52. Способ определения индивидуальной чувствительности человека к продуктам питания / В. М. Розенталь, В. Э. Новиков ; заявитель и патентообладатель

110. B. М. Розенталь. № 2005136456/15 ; заявл. 24.11.05 ; опубл. 20.05.08, Бюл. № 14 (IV ч). - С. 789-790.

111. Патогенетическое и клинико-диагностическое значение изменения миграционной активности лейкоцитов у больных шигеллезами и сальмонеллезами / О. Ф. Белая, В. JI. Черкасов, А. Б. Жумабекова, Ю. А. Белая // Микробиология. 1996. - № 4. - С. 34-37.

112. Петков, Г. Хигиенна оценка на замърсяването на въздуха в свинеферма през различии часове на денонощието / Г. Петков // Животн. Науки. -2005. Т. 42, № 4. - С. 104-111.

113. Петров, Р. В. Иммунология / Р. В. Петров. М. : Медицина, 1987. - 264 с.

114. Петрунов, Б. Современные направления исследований по созданию методов специфической диагностики аллергических заболеваний in vitro / Б. Петрунов // ЖМЭИ. 2008. - № 3. - С. 100-107.

115. Прикладная иммунология / под ред. А. А. Сохина, Е. Ф. Чернушенко. — К. : Здоров'я, 1984. 320 с.

116. Принципы диагностики аллергических заболеваний / Т. Г. Федоскова и др. // Consilium medicum. 2002. - № 4. - С. 13-19.

117. Пыцкий, В. И. Аллергические заболевания / В. И. Пыцкий, Н. В. Адрианова, А. В. Артомасова. М. : Триада-Х, 1999. - С. 102-112.

118. Пыцкий, В. И. Аллергические заболевания / В. И. Пыцкий, Н. В. Адрианова, А. В. Артомасова. 2-е изд., перераб. и доп. - М. : Медицина, 1991.-368 с.

119. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Миел ; пер. с англ. -М. : Мир, 2000. 592 с.

120. Руденко, Л. Л. Аллергия : учеб.-метод. пособие / Л. Л. Руденко, М. А. Макарук. Витебск, 2003. - 27 с.

121. Свирщевская, Е. В. Клинические и экспериментальные аспекты патогенеза аллергических 'реакций на условно-патогенный гриб Aspergillus fumigatus / Е. В. Свирщевская // Иммунология. — 2003. — № 3. — С.188-192.

122. Симбирцев, А. С. Клиническое применение препаратов цитокинов / А. С. Симбирцев // Иммунология. 2004. - № 4. - С. 247-251.

123. Скепьян, Н. А. Аллергические болезни: дифференциальный диагноз, лечение / Н. А. Скепьян. — Минск : Беларусь, 2000. 286 с.

124. Смирнова, JI. И. Современные методы лабораторной диагностики стрептококковых инфекций животных : метод, пособие / JI. И. Смирнова, М. А. Кондратьева, Е. Ю. Антопен. СПб. : СПбГАВМ, 2005. - 32 с.

125. Смирнова, О. В. Определение бактерицидной активности сыворотки крови методом фотонефелометрии / О. В. Смирнова, Т. А. Кузьмина // ЖМЭИ. 1966. -№ 4. - С. 8-11.

126. Сомов, Г. Г1. Особенности экологии внеорганизменных популяций патогенных бактерий и их отражение в эпидемиологии инфекций / Г. П. Сомов // ЖМЭИ. 1997. - № 5. - С. 7-11.

127. Сысоев, В. А. Диагностика и специфическая профилактика туберкулеза животных / В. А. Сысоев // Сб. науч. тр. / Всерос. науч.-исслед. ин-т пантового оленеводства. — Барнаул, 2005. — Т. 2. — С. 182—186.

128. Титова, С. М. Проблемы аллергологии / С. М. Титова. — М. : Медицина, 1971.-226 с.

129. Толяронок, Г. Е. Чувствительность возбудителей бактериальных инфекций животных к антибиотикам и обоснованность их комбинированного применения / Г. Е. Толяронок, Ю. Г. Лях // Вет. медицина Беларуси. 2003. — № 4-5. - С. 14-18.

130. Устарханов, П. Д. Морфофункциональные основы иммунитета, иммунопатологии и иммунокоррекции / П. Д. Устарханов, О. Ю. Юсупов, С. 111. Кабардиев. Махачкала, 2008. - 440 с.

131. Федоров, Ю. Н. Иммунодефицита у животных: характеристика,Iдиагностика и коррекция / 10. Н. Федоров, О. А. Верховский, М. А. Костына // Состояние, проблемы и перспективы развития ветеринарной науки России. -М., 1999. Т. 2. - С. 138-141.

132. Федоров, Ю. II. Основы иммунологии и иммунопатологии собак / Ю. Н. Федоров, О. А. Верховский, И. В. Слугин. М. : ИНФОРМ-12, 2000. -248 с.

133. Федорова, М. П. Динамика микробной контаминации свинарников-маточников в условиях Якутии / М. П. Федорова // Сельское хозяйство Сибири на рубеже веков : итоги и перспективы развития / Сиб. отд-е РАСХН. Новосибирск, 2001. - С. 139-140.

134. Фрадкин, В. А. Аллергодиагностика in vitro / В. А. Фрадкин. — М. : Медицина, 1975. 141 с.

135. Фрадкин, В. А. Диагностика аллергии реакциями нейтрофилов крови / В. А. Фрадкин. М. : Медицина, 1985. - 176 с.

136. Фрадкин, В. А. Реакция нейтрофилов крови как показатель инфекционной и лекарственной аллергии / В. А. Фрадкин // Сов. мед. — 1962.-№9.-С. 41-47.

137. Фриденштейн, А. Я. Клеточные основы иммунитета / А. Я.

138. Фриденштейн, И. JI. Чертков. М. : Медицина, 1969. - 256 с.

139. Хаитов, Р. М. Иммунология: учебник для вузов с компакт-диском / Р. М. Хаитов. М. : Гэотар-Медиа, 2006. - 320 с.

140. Хаитов, Р. М. Иммуномодуля юры: механизм действия и клиническое применение / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин // Иммунология. 2003. — № 4.-С. 196-203.

141. Хаитов, Р. М. Экологическая иммунология / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин, X. И. Истамов. М. : ВНИРО, 1995. - 219 с.

142. Циркулирующие иммунные комплексы на поздних стадиях сахарного диабета / М. Р. Овсепян, А. С. Бояджян, А. А. Мамиконян, А. А. Геворкян // Иммунология. 2004. - № 6. - С. 375-377.

143. Чернушенко, Е. Ф. Иммунологические исследования в клинике / Е. Ф. Чернушенко, JI. С. Когосова. Киев : Здоров'я, 1978. - 159 с.

144. Шкиль, Н. А. Экология условно-патогенной микрофлоры, циркулирующей в популяции животных / Н. А. Шкиль, Н. Н. Шкиль, М. Н. Шадрина // Сиб. всстн. с.-х. науки. 2003. - № 3. - С. 163-164.

145. Avram, N. Ecotoxicologic impact of the domestic animal / N. Avram // Studies and researches in veterinary medicine. Bucharest, 1999. - Vol. 7. — P. 81-90.

146. Bach, F. Lymphocyte interaction, a apotential histocompatibility test in vitro / F. Bach, 1С. I-Iirschorn // Exptl. Cell. Res. 1963. - Vol. 32. - P. 592.

147. Boyden, S. V. The adsorption of proteins in erythrocytes treated with tannic acid and subsequent hemagglutination by antiprotein sera / S. V. Boyden//J. Exp. Med. 1951.- Vol. 93.-P. 107.

148. Comparison of the type and number of microorganisms and concentration of endotoxin in the air of freedyards in the Southern High Plains / C. W.

149. Purdy, D. С. Straus, D. B. Parker, S. C. Wilson, R. N. Clark // American Journal of Veterinary Research. 2004. - Vol. 65, № 1. - P. 45-52.

150. David, J. Macrophage migration / J. David // Fed. Proc. 1968. - Vol. 27, № l.-P. 6.

151. David, J. Suppression of delayed hypersensitivity in vitro by inhibition of protein synthesis / J. David // J. Exp. Med. 1965. - Vol. 122, № 6. - P. 1125.

152. Digeon M., Lavel M., Riza J., Bach J. F. // J. Immunol. Meth. 1977. -Vol. 16.-№2.-P. 165-183.

153. George, M. In vitro cell migration as a model for delayed hypersensitivity / M. George, J. Vaughan // Proc. Soc. exp. Boil. N. - Y., 1962. - Vol. Ill, №2.-P. 514.

154. Gordon, J. Detection of «non-precipitating» antibodies in sera of individuals to ragweed pollen by an in vitro method / J. Gordon, B. Rose, A. H. Sehon// J. Exp. Med. 1958. - Vol. 108.-P. 37.

155. Hartung, J. Airborne emissions from animal production and its impact on environment and men / J. Hartung // Arb.-Papier / Kuratorium Techn. Bauwesen in Landwirtsh. Munster-Hiltrup, 1999. - № 270. - S. 183-196.

156. Hartung, J. Livestock farming and the environment / J. Hartung, С. M. Wathes. Braunschweig, 2001. - 56 p.

157. Henszel, L. Preliminary study on the occurrence of allergenic mites in dwellings and farming buildings in the Western Pomerania / L. Henszel, W. Kuzna-Grygiel // Advances in agr. Sciences / Agr. Univ. of Szczecin. — Szczecin, 2006. № 10. - P. 33-38.

158. Hughes, N. Tuberculin sensitive lymphocytes in human peripheral blood following Mantoux test / N. Hughes // Austral. J. Exp. Boil. Med. Sci. — 1968.-Vol. 46, № 5. P. 619-629.

159. Ishizaka, K. Mechanisms of reaginic hypersensitivity and immunotherapy //K. Ishizaka, T. Ishizaka//Lung. 1978.-Vol. 155, № 1.-P. 3-22.

160. Jacobson, L. Controlling dust, gases and odors for a health environment for animal and humans / L. Jacobson // Livestock Waste Management conference, 19-20 January, 1993. St. Paul ; Minnesota ; USA. - P. 110— 114.

161. Johansson, S. In vitro diagnoses of atopic allergy. Ill Quantitative estimation of circulation Ig E antibodies by radioallergosorbent test / S. Johansson, H. Bennich, T. Berg // Int. Arch. Allergy. 1971. - Vol. 41. - P. 443-451.

162. Larski, Z. Some new data concerning mechanisms of immunity / Z. Larski // Med. weter. 2005. - Vol. 61, № 8. - P. 843-846.

163. Mackie, R. I. Biochemical identification and biological origin of key odor components in livestock waste / R. I. Mackie, P. G. Stroot, V. H. Varel // J. of Anim. Sci. 199S. - Vol. 76, № 5. - P. 1331-1342.

164. Macrophage migraiion inhibitory factor plays a critical role in mediating protection against the hclminthes parasite taenia crassiceps / M. Rodrhguez-Sosa, L. E. Rosas, J. R. David et al. // Infect. And Immun. 2003. - Vol. 71, №3.-P. 1247-1254.

165. MIF-like activity in non-stimulated and virus infected cell cultures / E. W. Brown, N. M. Burdash, J. P. Manos, R. C. Duncan // Ann. Clin. Lab. Sci. -1978.-Vol. 8, № 5.- P. 419-424.

166. Nowell, P. Phytohemagglutinin: an initiator of mitoses in cultures of normal human leucocytes / P. Nowell // Cancer Res. 1960. - Vol. 20. - P. 462-470.

167. Peripheral blood leukocytes from multiple sclerosis patients are coated with factors inhibiting their chemotaxis in the presence of myelin basic protein / В. V. Pinegin, E. G. Ollcov, M. Z. Saidov et al. // Immunol. Lett. -1993.-Vol. 38. -P. 131-136.

168. Ribikauskas, V. Atviro ir uzdaro lipo galviju tvartu oro uzterstumas amoniaku ir mikrobnis / V. Ribikauskas, G. Vaicionis // Gyvulininkyste. — Baisogala, 2003. № 42. - S. 130-138.

169. Ribikauskas, V. Galviju tvartu ivairiu technologiniu zonu aplinkos uzterstumas amoniaku ir mikroorganizmais / V. Ribikauskas, G. Vaicionis // Gyvulininkyste. Vilnius, 2001. 38. - P. 104-110.

170. Rosenberg, S. Inhibition of leukocyte migration. An evaluation of this in vitro assay of delayed hypersensitivity in man to a soluble antigen / S. Rosenberg, J. David // J. Immunol. 1970. - Vol. 105, № 6. - P. 1447.

171. Schwartz, G. In vitro prevention of direct mast cell disruption by specific antibody / G. Schwartz, N. Vardinon // Internat. Arch. Allergy a. Appl. Immunol. 1966. - Vol. 30. - P. 67.

172. Seedorf, J. Staube and microorganismen in der Tierhaltung / J. Seedorf, J. Hartung. Munster : ! .andwirtschaftsverlag, 2002. — 166 p.

173. Shelley, W. The basophil leucocytes as an index of immediate hypersensitivity / W. Shelley // Trans, physic. Philadelphia. 1962. - Vol. 32. — P. 15.

174. Temporal and spatial distributions of aerial contaminants in an enclosed pig building in winter / K.-Y. Kim, H.-J. Ко, K.-J. Lee, J.-B. Park, C.-N. Kim // Environ. Res. 2005. - Vol. 99, №2.-P. 150-157.

175. Werret, D. G. Allergy profiles from bloodstains / D. G. Werret, L. A. King // Clinical allergy. 1976. - Vol. 6, № 1. - P. 75-77.

176. Zucker, B.-A. Airborne gramnegative bacterial flora in animal houses / B.-A. Zuckcr, S. Trojan, W. Muller // J. Vet. Med. 2000. - Vol. 47. - P. 37-46.

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Гиперчувствительность животных к микробным антигенам воздушной среды закрытых помещений

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Гиперчувствительность животных к микробным антигенам воздушной среды закрытых помещений

Оглавление диссертации Краснощекова, Юлия Викторовна :: 2009 :: Ставрополь

Введение диссертации по теме "Патология, онкология и морфология животных", Краснощекова, Юлия Викторовна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Гиперчувствительность животных к микробным антигенам воздушной среды закрытых помещений"

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2009 года, Краснощекова, Юлия Викторовна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций