Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Иммуноморфология у поросят-сосунов в норме и при экспериментальной колидиарее



министерство сельского хозяйства рсфср

воронежский государственный аграрный

университет

На правах рукописи

МАСЬЯНОВ Юрий Николаевич

УДК 619:616.34-008.314.4-053.2:636.4

ИММУНОМОРФОЛОГИЯ У ПОРОСЯТ-СОСУНОВ В НОРМЕ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ КОЛИДИАРЕЕ

16.00.02 — патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации наЧонскание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Воронеж — 1992

Работа выполнена в лаборатории гистохимии Всесоюзного научно-исследовательского ветеринарного института'патологии, фармакологии и терапии

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Сулейманов С.М.

Официальные оппоненты; доктор ветеринарных наук, профессор ШОВ А.Г., кандидат ветеринарных наук, доцент ГЛАДКОВ Б.А.

Ведущее предприятие: Витебский ветеринарный институт

Защита диссертации состоится " ^и ^¿/¿¿<-^>-'¿^1992 г. в /А?"~часов на заседании специализированного совета К 120.64.03 по аащите диссертаций на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук при Воронежском государственном'аграрном университете (394012 г. Воронеа, ул. Ломоносова, 114-а, ветклюшка ВГАУ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке агроунивер-ситета'по адресу: 394012 г. Воронеж, ул. Мичурина, I.

Автореферат разослан " 92 г.

Ученый секретарь специализированного 'совета

Н.А.Чаллыгина

<"" i ■ ' - а -

' ' 'j .

; ОЕШ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

~ Актуальность темы. Увеличение производства овйнинн непосредственно связано с сохранностью молодняка, особенно в условиях промышленной технологии ведения отрасли. Однако, концентрация поросят в крупных промышленных комплексах сопряжена с высокой заболеваемостью их желудочно-кишечными инфекциями с первых дней. Одной .из 'Горл проявления такого рода заболеваний является колидиарея, которая считается г лболее распространенной формой заболевания поросят и наносит огромный экономический ущерб во всем мире (Беляков И.М., 1979; Шишков В.П. с соавт, ,198е).

Колидиарея - как особая форма колибакториоза вызываемся энтеротоксигенными Е. , в патогенезе которой ведущая роль

принадлежит адгезивннм антигенам и холероподобному, тормодабиль-ному токсину (Вертиев Ю.В1( 1984t Гайлонская H.H. с соавт., 1985; Езепчук Ю.В., 1965; Овод В.В.-, 1982; Полоцкий Ю.Е. с соавт. ,1977, 1980} Полякова О.А» с соавт.,1963; Флуер Ф.С. с соавт. ,197С; с соавт. ,1964;

1972; Afot-t^-л ¿f.Zt., Sofia, W.tf,, 1985 и др.) и широко рас-, пространна в странах с высокой культурой ведения животноводства - Англии, Австралии, Германии, США, Франции, Швеции, Японии, а также у нас в стране (Ананьев П.К. с соавт. ,1574; ..равно? В.Н., 1984; Волынец Л.К4, БалиЦкий' Ю.Г. ,1991; Ефремов M.IlJ, 1982; Кабшпсов Ю.С. .ICSI; Полякова O.A." с соавт. ,1983; Урбан В.П.,1904 и др.).

Анализ литературы показывает, что особенности'этиологии, патогенеза, клинические и морфологические изменения диарей изучены достаточно хорошо, разрабатываются п испыгиваются различные типы-вакцин, рассчитанные на пассивная (колостральную) профилактику подобных заболеваний у молодняка. Однако, кгаяеч-ный колибактериоз пока остается серьезной проблемой для свиноводства.

В последнее десятилетие появляется все больше сооСшений об эффективности пероральноЗ иммунизация самих новорожденных при различных кишечных инфекциях, в том числе колибш?теряозч (Ее ер Я., Хубриг Т. ,1976; Попов В. И. ,1984; Ла-^'ег ff., с соавт. ,1976; A?i'A<x£e. I., с соавт. ,1903; Von ЯлугА.ъ со-шзт. ,1980).

В этой связи, практически отсутствуют данные по иммуно-мор!'ологии, в способности поросят к раннему активному иммунному функционированию, а такхе при экспериментальной колидиарее в условиях развития организма, что позволило бы в дальнейшем более'эффективно использовать средства иммунной профилактики.

Указан1юе обстоятельства и определили' направление .настоящей работы.

Цель работы. С помощью иммунохимических, иммуномор1юлоги- ■ ческих, гистохимических и электронномикроскопических методов исследований ставится цель изучить особенности иммунной перестройки у- поросят в 'райнем постнатальном онтогенезе и при экспериментальной колидиарее с первых дней и до месячного возраста.

Задачи исследований:

1. Изучение морфо^ункциональной характеристики всасывания молозива в тонком отделе кишечника у новорожденных поросят.

2. Определение иммунохкмичоского и иммуномор^олОгического станса у клинически здоровых поросят в возрасте 1,3,6,10,14, 21 и 30 дней.

3. Установление степени выраженности иммунохимических и ем-муноморфологических изменений у поросят при экспериментальном колибактериозе.

Научная новизна. Получены новые иммунохимические, ишуно-морфологические и гистохимические данные в сравнительной динамике местного и системного иммунитета, в норме и при эксперименте .ьно воспроизведенной колидиарее у поросят до 30-дневного возраста. Впервые для определения абсолютных значений концентраций иммуноглобулинов в. секрете и соскобе, предложена методика по переводу относительных значений на постоянные величины (в кишечнике - на см^), позволяют^ получить сравнимые результаты в возрастной динамике секреторных антител. Впервые у поросят на электрокномикроскопическом уровне были описаны особенности ультраструктуры межэпителиалышх лимфоцитов, лимфоцитов эпителиального пласта с признаками плазмокле точной ди][фе-ренцировки, а такке и некоторые морфофункциональные особенности кммуногашетентпых клеток тонкого отдела кивочнпка. . Разработан новый метод в получении препаратов для приготовления срезов с розеткообразующих клеток три изучении

их в электронном микроскопе, позволивший целенаправленно рассматривать ультраструктуру Е-роэетк^образуюшлх клеток.

Практическая цешюстъ. Полученные результаты с использованием совремшшх методов исследования по иммунобиохимии, иммуно-. морфологии, гистохимии и ультрамикроскопии позволяют расширить представления о норме, а также о кишечной патологии в сравнительной динамике иммунных механизмов, происходящих как в органах локального, так и системного иммунитета, в условиях становления и развития организма новорожденных и в дальнейшем более эффективно использовать средства иммунной профилактики.

Внедрение: - •

■I. Выпушен рекламный информлисток "шетодика определения абсолютных значений иммуноглобулинов в секрете и соскобе кишечника", ЦНТИ, Воронен, 1991 ,-4с..

2. Разработан метод "Получение препаратов и приготовление срезов с розеткообразуюших клеток для электронной микроскопии", который используется в НИР ЕНШЗИПФиТ, ЦНИЛ Воронежского гоалед-института и Еоронекского госагроуниверситета.

Апробация работы. Основные положения диссертации долоне-нн на XI Всесоюзной конференции по. патологической анатомии (Харьков,1990) и Всесоюзной научно-технической конференции "Профилактика и лечение болезней молодняка сельскохозяйственных аи-вотных" (Воронеж, 1991).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 печатных работ. ^

Обгем и структура диссертации. .Диссертация изложена на 210 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, вывода, прэдлоиения и список литературы.

Работа иллюстрирована 102 фотографиями; 10 таблицами, 7 граТ-качи. Список литературы вютлает 257 работ (129 отечественных и 128 зарубежных).

На загнту выносятся следующие по. згения:

1. Морфологические пспеглы всасывания молозива в тонком кишечнике у поворот "онннх поросят.

2. Пммунохпмические, ишукомор£ологические а гистохимические изменения в сравнительной динамике у поросят в норме и при

экспериментальной колидиарее.

3. Ультрамикгоскопические особенности клеток эпителиального пласта и тонкого отдела кишечника у поросят-

сосунов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ДОСЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал и метода исследования

Материалом для исследования служили поросята-сосуны в 1,3, 6,10,14,21 и 20-дневном возрасте', взятые в контрольную группу. Колидиарею воспроизводили на поросятах-сосунах,.взятых от трех отделенных в станках свиноматок, энтеротоксигешшм штаммом . Е. со & - 0149;К91:КЕ8, полученным из ВГНК11 ветпрепаратов с паспортными данными. Дляетого всем опытным поросятам (21 голова) до сосания молозива (по схеме, выработанной в предварительных опытах) перорально было введено в дозе 2 млрд.м.т./мл ЭТЕК, и в среднем через'45 минут поросят подсаживали к соскам свиноматки. В дальнейшем для поддержания штамма и иммуногенеза, а гаа-с с целью выяснения роли прерывания стимуляции в ркшечнике, поросятам вновь вводили культуру Е. в соответствующие возрастные периода - в 3,6,10 и последний раз, в 14 дней, в дозах - , 0,5-1 млрд.м.т./мл. ■ . •

Убой как клинически здоровых, так и заре&ешшх поросят производили в одни сроки, минимум по 3 животных в каждом возрасте. Кроме того, били убиты поросята в обеих группах в возрасте от трех до двенадцати часов для изучения процесса всасывания молозива в тонком кишечнике. В обшей сложности был взят материал от 27 здоровых и 30 зарпкенннх поросят.

Животных убивали декапитацией. Сразу брали кровь на сыворотку для определения Игб, ИгМ и ИгА методом ПЩ по Маастг (1965). (Белок-антиген иммуноглобулинов классов Игб и ИгИ свиней для получения кроличьих антисквороток любезно предоставлен лабораторией ветеринарной иммунологии ВНИЕИШ и Т зав.д.б,н. Беляев'В.И.).

• Для определения абсолютных концентраций Игб, Яг!Л и у -глобулинов в секрете и со скобе кишечника нами разработана методика, позволяющая находить аосолотннс и* значения из расчета на единиу плошадя кишечника <см ) и вычисляли но формуле:

х = -a-j[ , где х - значение в мг/мкг/cvr; а - результат РИД в мг/мл; п - обпэе разведение в мл (включая объем физрастворам-объема соекоба); плошадь соскоба в см2.

Для морфологических исследований кусочки органов - тонкий кишечник -(12-перстная, тошая, подвздошная), селезенка и брш'.ееч-нне лимфоузлы иссекали приблизительно из одних и тех ие участков, фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, формол-каль-циевой смеси, жидкости Карнуа, а такАе го методу Sa/tie -/fatSe-(IS62) и замораживали над жидким азотом дня проведения гистоэн-зпмологическях реакций. Кусочки фиксированного материала паиь вэлп в парафин для приготовления серийных срезов. Срезы из замороженной ткани готовили на крлостатв при i - 20°С. îinccamra .• материала для электронномикросколических исследований проводили в растворе глютарового альдегида на 0 114 H S- коллндя-новом буфере lia холоде с постфиксацпей S 1$-ном растворе тетра-окиси осмия на том же буфере. Материал обезвоживали в спиртах и заключали в Эпон-812. Срезы готовили на ультромакротоме '^КВ-380С", контрастировал!! цитратом свшща и уранилацетатом и просматривали в электронном микроскопе " ВУ - 500.

Ддя идентификации Т-лшфоцитов на субклеточном уровне нами бил разработан метод получения препаратов для приготовления ультратонких срезов с розеткообразуюших клеток, при адаптации методов розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) и последующей фиксацией по методике для электронной микроскопии (5М-Е-РОК).

Для изучения обшей мор1оструктурн и подсчета количества менэпптелиалышх лимфоцитов (ЮЛ) срезы окршашзали гематоксилином и эозином.

Для определения числам клеток, содеркагда -у- глобулины ис-пользовачи прямой вариант метода Кунса(с соответствующими конт-ролямп) и исследовали в микроскопе "Летлам И-3", а определение РНК-содергкостх клеток, в том числе плазматических, срезы окра-сивали по Ергае.

В криостатных срезах фолликулов подвздошной кишки, селслон-ке и брыжеечных лимфоузлах - методом азосочетэпия чп &?рстоггу выявляли активность форлентов кислой я полочной фосфатаз (KÏ, ПЭ).

Количество ЮЛ определяли в пересчете на I0C0 ядер яитерт-

цитов.

Для подсчета количества клеток с У- глое„ линами на едини-' р w

цу площади vw.r) использовали окулярную измерительную сетку с известной ююшадъю ячеек. Процентное соотношение подсчитывали из расчета на ICO светящихся клеток.

Количество измерений, необходимых для объективного опреде-леьия исходной величины, устанавливали по фор^ле:

д/г . 4££11££гШ_ (Азтандклэв Г.Г. с соазт. ,IS8I). Доверительный интервал средних вели-шн - 0,95.

Бсс цифровые данные обрабатывались методом вариационной статистики на ЭШ "Электроника" ЛЗ-28.

2.2. Морфология всасывания в тонком кишечнике у новорожденных поросят ■

Процесс всасыванля молозива у новорожденных поросят начинался с момента его поступления в кишечник и морфологически характеризовался наличием сильно вакуолизированного эпителия с первых часов и до 3-х суток в тощей и подвздошной кишке. При световой микроскопии выявлялись даа вида вакуолей. Одни окрашивались интенсивно эозином, другие но воспринимали краситель и создавали эффект "пустоты". Б 12-перстной кишке в 1-й 3-дневном возрасте вакуоли но обнаруживались, а энтероциты имел1! ха-ракчерное строение, В последующие сроки ваг.уолизировашшй эпителий исчезал и уъ;е на 6-й день ни в одном из участков тонкого кишечника, ни в норле, ни у зараженных поросят, вакуоли не обнаруживались,

Электронномикроскопически подтверждалось наличие с первых часов . до 3-х суток различных вакуолей. При этом, различались вакуоли: темные - электрошюплотине; евзтлые - содержащие нек-нуи белковую сеточку умеренной электронной плотности; светлые-ке содержание электрогаюплотчых вешеств и смешаюпе - имевшие в центральной части лишщше, а по периферии болковые компвнен-ты. В 12-перстной ките в первые часы встречались вакуоли разлитой электронной плотности, от мелких, находящихся вблизи с апикальной1 мембраной, до (Голее крупных, занимавших порой 1/31/2 энтероцита.

Темные вакуоли локализовались преимущественно в переднем отделе - в эпителия тощей кишки. При полном насыщении клеток моло зивом энтеродиты выглядели в виде "баллонов", а ядра смещались в сторону. В тощей кишке встречались светлые вакуоля, но,главам образом, они обнаруживались в дистальном отделе тонко о кишечника. Такое их распределение, по-видимому, связано т сепаративными процессами, происходящими с молозивом Е!;утри желудка и кишечника, при этом сывороточная часть молозива проходила дальше, к дистатьному отделу тонкого кишечника. Поэтому темные вакуоли, вероятно, представляют собой комплекс компанентов еше нерасщепленного молозива, а в концевых отделах - в подвздошной кишке, сывороточной его частью, содержащих много белков и в том числе, иммуноглобулинов.

Крупные вакуоли, независимо от пх типа, образовывались путем слияния из более мелких, появляющихся в энтероцкте в результате массовых эндоцитозных инвагинаций. Б первые часы происходил более интенсивный процесс образования эндоцитозных инвагинаций в результате (формирования массовых'везикул, создававших в клетке картину"хаоса" Инвагинаты,отпочковываясь, формировали более крупные вакуоля, внутри которы> находились миели-новые структуры и вещества белковой и липидной природы.

В первые часы хизни в тощей и подвздошной кишке имелось наличие более крупных инвагинаций, достигающих в глубину - длины от одной до 2-х микроворсикок, при массовом формировании средних и мелких, величиной от 1/2 до 1/3 микроворсинки. В ширину крупные инвагинации захватывали площадь от 1 до 3-4-х микроворсинок. Однако, в 12 -перстной кишке уже с первых часов крупные инвагинации отсутствовали.

С первых суток величина инвагинаций заметно уменьшалась. В этот период в тощей кишке они практически отсут твовали, тогда как в подвздошной кишке - только в 3-х дневном возрасте.

Б фор-шрующихся инвагинациях, с самого начала, заметно нахождение веществ белповол природы в виде нежной, структурированной сеточки. В дальнейшем они найвгдалис! в спусЯ строме ворсинок и внутри сосудов. Помимо белков,в строме обяпрунивалясь также и лнпядные капли, транспортирующиеся, главным ебразои, ю мегэпителиалышм пространствуя.

На Б-й день знтероцитн освобождались от га.чуолей г иива-

гинаций, приобретали равномерную цитоплазму и четко расположенное ядро.

У безмолозивных поросят во всех перечисленных структурах вакуоли и вещества белковой и липидной природы отсутствовали.

Таким образам, с первых часов и до 3-х суток, независимо от заражения поросят, ели процессы непрерывного всасывания питательных веществ и белков посредством пиноцнтоза, в том числе иммуноглобулинов молозива, главным образом, в тощей и подвздошной кишке. Причем для этого периода характерно всасывание иммуноглобулинов в неизмененном виде, чему свидетельствует морфологическая картина везикулярного всасывания. Судя по величине инвагинаций, процесс всасывания у поросят наиболее интенсивен в :ервые 24 часа жизни.

2.3. й.с.1уномор(То5ункциональные изменения у клинически здоровых поросят до месячного возраста,

2,3.1. Иммуноглобулины в тощ:см кишечнике

С поступлением молозива в тонкий кишечник содержание иммуноглобулинов в нем возрастает и концентрация их в сскрето и соскобе в различных участках существенно колебалась от значений цшие I мг/см^ до близких по содержанию в молозиве.

На 6-е сутки значения стабилизировались, что связано, в перьую очередь, с резким снижением иммуноглобулинов в молоке свиноматок и составляло для Иг!.!, Пгб п / - глобулинов соответственно - 23,56+4,21; 135,70+11,76; 599,30+40,0 мкг/см2. На 10-й день наблюдалось незначительное снижение М1 я Игб, при атом значения у - глобулинов возрастало в 1,62 раза до - • 977,20+54,0 мкг/см2. На 14-й день происходило достоверное сни- ' кение ИгМ до - 15,36+1,40; Иг6 до - 99,80+3,19 и у - глобули-, г нов до - .777,50^87,0 мкг/см^. Однако, с этого момента .у поросят начинался, синтез собственных антител плазмоцитеми ¿ям^лг^-¿оы^-ысх.. тонкого кишечника, в результате чего, на 21-е сутки наблюдалось увеличение концентрации ИгМ, Игб и з'-"глобулинов соответственно в 1,13; 1,69 и 1,39 раза, а на 30-е. сут-рц соответствовало в абсолютна .с значениях - 23,99+0,83; 201,41+ .3,52 к 1397,40+109,0 мкг/см2.

Увеличение концентрации у- глобулинов на 10 день мы связываем с периодами полураспада иммунн-х белков (в основном с ИгА), когда 10-й день явился пиком, обратным полураспаду, учитывая то, что в это время ИгА в молоке свиноматок становится преобладающим классом иммуноглобулинов.

2.3.2.'Иммуноглобулины в сыворотке крови

Поступившие с молозивом иммуноглобулины, в первые дни, благодаря процессу пиноцитоза из тонкого отдела кишечника через лимфатическую систему интенсивно всасывались в кровь.

Уже в первые сутки уровень Игб и ИгМ в сыворотке крови новорожденных достигал своих максимальных значений - 24,37+1,44 и 4,20+0,67.мг/мл.

Затем наблюдался процесс естественного снижения уровня всех классов иммуноглобулинов, Игб и ИШ уже с первых, а ИгА с третьих суток, что с'вязано с катаболизмом и выведением их .з организма.

На 3-й день значения Игб и ИгМ снижались незначительно до - 20,40+0,10 :г 4,10+0,47 мг/мл, тогда как концентрация ИгА, наоборот, возрастала в 1,52 раза до - 7,67+1,20 мг/мл. Подъем концентрс-дли ИгА на 3-и сутки мы связываем с продолжающимся еще процессом Всасывания иммуноглобулинов в тошном кишечнике, учитывая то, что, по литературным данным, к 3-му дню резко снижается в молоке свиноматок доля Игб и ИгМ, а содержание ИгА составляет от 50* и более ( /Гпае /?£.,1983; Кадыров С.0,1965; Фесенко И.Д. ,1988),'что было подтверждено нами морфологически.

На 6,10,1<4 и-21 сутки при общей тенденции снижения всех классов иммуноглобулинов происходила увеличение к кандому сроку проценг'ого содержания Игб в структуре иммунных белков главтгл образом, за счет исчезновения ИгА и снихешг уровня ИгМ.

Однако, с 21->: на 30-о сутки наблюдалось относительное увеличение ИгМ по сравнению с Игб, при абсолютном незначительном ого снижении, что, вероятно, связано с собственны:.!- синтезом иммуноглобулинов в организме (в селезенке) и соответственно составило л* я Игб и МгК - 9,16+0,62; 0,92+0,06 ;ИгА<0,4 мг/мл и 7,91+1,24; 0,86+0,02; < 0,4 мг/мл, .и подтверждено морфологически.

■2.3.3, {.^.эпителиальные лимфоциты

Ме&эпителиалыше лимТоцитн (МЭЛ) в тонко:.: отделе кишечника легко раьличглись на световом уровне по интенсивно окрашенно--му ядру, характерному вокруг'него, светлому ободку, и находились на разном уровне от ядра энтероцитов.

Б клшечнаке однодневных поросят встречались единичные ЦЭЛ, либо они полиостью отсутствовали, в целых ворсинка!:.

У 3-днеылх поросят количество МЗЛ заметно увеличивалось в 12-перстной, тощей и подвздошной кишке соответственно до -96,60+6,80; '67,£0+5,30 2 45,79+3,25 клеток. '.

Однако, на G-ii депь наблюдалось их достоверное снижение, в среднем в 1,3; I,S и 1,6 раза, при этом в 12-пьрстной кишке количество ЦсЛ вдвое превышало значения в тощей и подвздошной кишке.

С ростом и развитием поросят, на 1С день, происходит не- ' значительное увеличение Ш1 во всех отделах тонкого кишечника, тогда кал на 14-е гутой происходило уке достоверное их увеличение и составляло - 126,54x8,04; 55,32+8,93 и 59,73+9,92 клеток.

На 21-е сутки заметен более интенсивный подъем в тошей кишке, а уровень КЬЛ возрастал соответственно в 1,46; 2,16 и ■ 1,49 раза. •

У месячных поросят количество МЗЛ достигло максимальных абсолютных значений в течение всей возрастной динамики - 397,23+ 40,70; 337,97+39,60 и 218,30+33,20 клеток, что связано с усилением иммунокомпетецции кишечника к этому сроку.

Б целгл, в течение всей динемики, на долго МЗЛ приходилось в 12-персткоП кишке - от'41.,66^ до 55,352, в тошей - от 22,9Cfê до 35,45* и в подвздошной -' от 20,26/i до 27,62?! клеток.

2.3.4. Йййуноглобулинсодеркащие клетки

У клинически здоровых поросят с 14-дневного возраста общее количество у- глобулинсодер:ащих клеток с какдаы сроком возрастало во всех отделал тонкого'кишечника. Причем, их количество в тощей кишке бь'ло втрое больше, чем в 12-перстной и вдвое, чем в подвздошной кишке - 68,69+2,22; 266,55+12,42 и 185,68+8,57 меток на I мм2.

Ка 21-й день количество клеток достоверно увеличивалось в

12-перстной, тогсей и подвздошной киске и составлю - 134,34+ 36,19; 390,46+21,02 и 563,93+56,59 клеток на 1 ил2, а на 30-й день достигло максимальных абсолютных значений во всех отделах тонкого кишечника - 169,13120,18; 566,93+65,60 и 751,76+67,23 клеток на I мм 2.

Отдельные у- глобулинсодерхащиэ клерки встречались в СТрОМв ВОрсИНОК, НО, ГЛРВНЫМ обрРЗСМ, В ¿о-г^уо ъ л- ,

между криптами, а также их иокно было обнаружить и в куполе ЛИМ^ОйДНЫХ 'Т'оллихулов, при полном отсутствии в других структура* фолликулов.

Светящиеся клетки в ¿"¡¿узг*а. представлены, в

основном, незрелыми и зрелыми формами плазматических мете , что подтверждалось па световом и, особенно, электрогшомикроско-пическом уровне. Первые плазматические метки на световом уровне у клинически здоровых Поросят обнаруживались ь кишечнике в 14-дневном возрасте.

Б регионарных брыжеечных лимфоузлах % - глобулпксодержа-шие клетки строго выявлялись в мякотннх (мозговых) тяжах и практически отсутствовали в корковом веществе. Общее их количество в мякотннх тяжах на 14-й день составило - 457,04+30,96 клеток на I мм".

На 21-й день их колччество- достоверно увеличивалось ь 1,45 раза до 623,15+25,44 клеток на I мм2, а на 30-е сутки наблюдалось уже значительное увеличение в 2,33 раза до -1548,64+73,53 клеток на I мм". На световом уровне они представлены, в основном, лимфоцитами и в меньшей степени плазматическими клетками.

В селезенке на 14-й День насчитывалось - 6,53+1,01 кле-

О

ток на I мм . В их структуре основную массу занимали В-лш'Го-цита - ВЗ,33+2,40?, зятем плагмобластн - 10,67+2,19? И плазматические клетки - 5,67+1,67$,

На 21-й день наблюдалось резкое и достоверное увеличение общего количества клеток до - 49,44+1,98 на I мл". При этом плазматические клетки увеличивались в 2,59 раза до - 14,67+ 0,77?, существенно снижалась доля плаэяобластов в 2,1 раза до-5,1+0,97?, а В-лтм'оциты снижались до - 80,22+1,74?.

На 30-е сутки общее количество -глобулинсодержащях клеток возрастало до - 60,55+1,52 на I юл2, пла^модиты узеличи-

лись и 1,47 раза до - 21,56+3,49$, при атом практически исчезали плазмобласты, а В-лимфоцити снижались до - 78,22+3,47$, что связано с прогрессирукждаи процессами клеточной днфферен-цировки.

Таким образом, с ростом и развитием поросят происходило и развитие иммунной системы, связанной с увеличением ц диффе-рещнровкой игдау нокомпетентных клеток как в органах локального, так и системного иммунитета.

2.3.5. Активность кислой и щелочной фосфатаз

Кислая ф'осфятаза Ш>). В подвздошной кишке в первые сутки № была наиболее активна в ретикулярных волокнах, окружающих фолликулы и выявлялась в виде ячеистой сеточки вокруг плотно расположенных друг к друху лимфоцитов и несколько четче в единичных клетках, равномерно распределенных по всему фолликулу-ретикулярннх клетках. С 10-дневного возраста интенсивность фермента в этих клетках несколько увеличивалось, а на 21-е сутки и 30-е сутки зачетно увеличивался объем самих фолликулов и пло.ности клеток с возрастающей активностью КФ.

В брыжеечных лимфоузлах. КЬ выявлялась в мякотных тяжах и • более интенсивно в ядрах и волокнах ретикулярных клеток. В корковом веществе активность фермента шла не высокой,' в виде ячеистой сеточки вокруг плотно расположенных лимфоцитов и более интенсивно в ретикулярных клетках. С 14-го дня отмечалась активизация КФ в ретикулярных клетках мозгового вещества, в в корковом проявлялась в ретикулярных клетках центра самих лим-фоидных фолликулов.

В селезенке наибольшая активность Ю? наблюдалась в красной пульпе, а в белой - фолликулах, выявлялась ойабо, в виде ячеистой сеточки .вокруг лимфопдных клеток. С ростал и развитием поросят в селезенке увеличивались "безактивные" зоны на месте увеличения объема лшроидинх фолликулов. Однако, с 14-дневного возраста К2 начинала выявляться в ретикулярных клетках внутри фолликулов, интенсивность которой на 21-е и 30-е сутки увеличивалась.

11;едочрвя ЕосАатаза (ИЗ). В фолликулах подвздошной кишки наибольшая интенсивность Щ5 наблюдалась в первые сутки и, осо-

бенно, была велика в его куполе. Кроме того, выявлялась в ретикулярных волокнах вокруг фолликулов. Б дальнейшем происходило просветление фолликулов и на 21 и 30-е сутки фермент полностью исчезает из их центров и располагается только в окружающих ретикулярных волокнах.

В брыжеечных лимфоузлах ДО интенсивна в корковом векествь по ходу ретикулярных волокон и, особенно а^тппна в первичных лимфоидннх 'фолликулах. В мозговом вегсестве четко выявляется в расположенных тш лгафоцитах. С развитием лимфоузлов, на 10-й день и в последующие сроки происходило увеличение размеров фолликулов и освобождение их центров от 11:1. При этом он.ч концентрировалась в клетках, расположенных по периферии фолликулов.-На ЗС-е сутки наблюдалась незначительная активизация и в центрах самих фолликулов.

В селезенке в 1-п 3-дневном возрасте 11$ выявлялась в виде муфт, в клетках периартериальной зоны .фолликулов, а тале а днффузно разбросашшх в красно"; пульпе лимфоидннх и ретикулярных клетках. С ростом и развитием поросят, на 10-е и 14-е сут- • кп в более зрелых фолликулах иерипртериачыше муфты исчезали. На 21-е и 30-е сутки ЩЗ исчезала из центров лолликулов и концентрировалась по периферии,в клетках маргинальной зоны.

2.4. Воспроизведение колидиареи у поросят-сосунов

После перорального введения поросятам культуры Е. -0149:К91:КБВ первые симптомы диареи появлялись уже через 5-6 часов в виде жидких испрэх нений желтовато мутного цвета. В течение первых суток наблюдалось угнетение, поросята были меное активными, скучивались, на 2-3 сутки общее состояние восстановилось.

При отсутствии признаков воспаления в слизистых оболочкгх и внутренних органах во все исследуемые сроки основные изменения наблюдались в желудочно-кишечном тракте. Лолудок был за-, полнен свернувшимся молозивом и умеренным количеством слизи. В Тонком кишечнике находилось большое количество аадкостм нолто-ватого цвета, в толстом отделе кишечника, в большинстве случаев, содержимое было жида™, зеленовато-желтого цвета. Кроме

того, во всех случаях, характерным являлось наличке выпотевшего фибрина по ходу сосудов брыжейки тонкого кишечника. На вскрытии, в последующие сроки, наблюдались аналогичные изменения.

В завершении эксперимента не отмечалось заметного отставания переболевших поросят в росте и развитии.

ЬлектронномикросКопическя в тонком кишечнике в пбрвые дни на поверхности слизистой оболочки обнаруживались адгезировашше Е. Cc¿¿ , а идентичные по морфологии микробы были найдены и позже у 21-дневного поросенка в слое слизистых наложений.

2.5. йлиуншор.|юфункдионалыше изменения у поросят-сосунов при экспериментальной колидиарее

2.5.1. Иммуноглобулины в тонком кишечнике

До 14-дневного возраста у зараженных поросят не отмечалось каких-либо изменений в динамике сёкреторннх иммуноглобулинов По сравнению с нормой. Единственную разницу представлял здесь изначально более высокий фоновый их уровень содержания у последних, что связано не только с концентрацией, но и количеством лактирующего свиноматками молока.

К 14-му дню концентрация иммуноглобулинов снижалась: ИгМ до - 18,44+2,98; Игб - 132,51+9,11 и f - глобулины до - 958,401 130,0 мкг/см *

В результате стимуляции в кишечнике и активизации в нем синтеза антител плазмоцитами ¿ат'па. ^суу^сх- , на 21-й день был очевидным подъем концентрации HrtI в 1,7 раза до -3I,I7¿3,59 мкг/см2, что значительно было выше соответствующего в норме - в 1,13 раза. Повышение уровня Игб и 3х - глобулинов было соответственно в 1,39 и 1,32 раза.

Однако, на 30-й день в условиях прерывания стимуляции достоверно снижался уровень КгО и Ilrtl в 2,0 и 2,2 раза и незначительно ~ глобулинов соответственно до - 15,37+1,55; 95,68+ 10,86 и 1164,40+95,0 мкг/см2.

2.5.2. Шмуноглобулины в сыворотке крови

При колидиарее отмечалась схожая динамика иммуноглобулинов в сравнении с нормой, направленная на их снижение к месячному

возрасту. Таюе, г.ж и у клинически здоровых поросят, к 3-му дню концентрация ИгА достигала своего максимума, возрастала с 4,83+0,57 до 8,53+0,13 мг/мл, что било связано с продолжавшимся процессом всасывания иммуноглобулинов в эти сроки. Сравниваемые абсолютные значения иммуноглобулинов до 21-дпзвного возраста достоверно не различались. Однако, при колидиарее на 21-е и 30-е сутки характерным было уа.е достоверное, более резкое падание ЛхМ по сравнению с-норлой, соответственно - 0,92+0,06; С,77+0,035 мг/мл и 0,86+0,02; 0,76+0,023 мг/мл, а на 30-е сутки и Игб - 7,91+1,24; 6,90+1,44 мг/мл, что, на нащ взгляд, связано с меньшим ростом, чем в ноше ;вдвое) иммукоглобулинсекретирую-ших клеток в селезенке переболевших поросят.

Увеличение процентного содержания ИгМ по отношению к Игб с 21-х на 30-ё сутки связано, вероятно, с началом синтеза собственных белков этого класса в организме (селеьо.чке), что подтверждалось морфологически;

2.5.3. Цеыэпителиальные лимфоциты

В результате антигенного воздействия увеличение количества МЭЛ наблюдалось у::Р с первых дней.

На 6-й день эти значения были выше по сравнению с контролем в 12-порстнол, тошей и подвздошной кишке соответственно в. 1,42; 1,09 и 1,51 раза. На 10-е сутки достоверно выше, чем в норле в 1,48; 1,68 и 2,6 раза, а абсолютное их количество было несколько больше, чем у контрольных поросят в 14-дневном возрасте.

На 14-й день значения МЭЛ опережали те ко в норме, соответственно уже р - 1,71; 2,43 и 2,73 разя, а абсолютное их количество заметно превышало таковые на 21-й день у контрольных < поросят. ^

Максимальных значений во всех отделах тонкого кишечника МЭЛ достигают на 21 сутки и превышали соответствующие на 30-й день в норме - 346,78+50,53; 319,10+55,30 и 281,00+10,94 клеток.

Однако, в у товиях прерывания стимуляции стремительный рост МЭЛ заканчивался их снижением на 30-е сутки соответственно до 240,18*13,98; 186,93+9,79 и 193^44+49,03 клеток, что было достоверно ниже ооответствуюшдос в.норма.

- г? -

Б структуре МЗЛ процентное соотношение смещалось из 12-пе.стной кишки в сторону тощей и подвздошной и составило соответственно от - 36,62$ до 46,61;?; 23,33? - 33,70?! и 21,73?-31,75?, что стало заметно вше, чем в норле и связано с основ-нши изменениями здесь при колидиарее.

2.5.4. Иммуноглобулинсодеркашце клетки

В условиях антигенного воздействия в тонком кишечнике первые плазматические клетки обнаруживались уже в 10-дневном воз- • расте.

На 14-й день общее количество у - глобулинсодрекащих клеток было выше по сравнению с нормой в 12-перстной, тощей и подвздошной кишке соответственно в 1,34; 1,55 и 1,12 раза и составило - 119,06115,83; 412,39+16,32 и 207,12+7,65 на I мм2.

На 21-е сутки в условиях прерывания стимуляции, прекращенной в 14 дней, отмечалось резкое их снижение до - 57,79+13,66; 308,21+59,10 и 406,931113,СО на I мм2.

К месячному возрасту происходило увеличение ^ - глобулин-содогкаиих клеток, хотя их значения оставались шс.о, чем в норме - 120,24+38,25; 373,03143,06 и 77I.56iG7.73 на I мм2.

В мекотных тяжах брыжеечных лимфоузлов отмечалась аналогичная картина усиленного иммунного ответа, а на фоне прерывания стимуляции изменения были подобные тем, которые происходи з в кишечнике. Так, количество/'- глобулинсодеркашх клеток на 14, 21 и 30-й дни изменялись соответственно - 1417,78+40,0; 1096,89^ Г09.78 и 1326,1218,9 клеток, на I мм2.

Б селезенке на 14-е сутки общее количество К - глобулин-содержаидх клеток увеличивалось в 3,4 раза - 29,07+5,74 на I ш2 а соотношение В-лкм^оцктов, плазмобластов и плазмоцитов было- -¿9,51+0,81?; 5,37+0,29? и 5,1211,09?.

Б последующие сроки происходило увеличение как обкего количества клеток, так и субпопуляций плаамсцитов, однако на 21-й день их било меньше, чем в норле в 1,61 раза, а на 30-е сутки-в 1.,77 раза, что связано с угнетением процессов клеточной диф-Зеренциговки в органах системного иммунитета при этой патологии. '

2.5.5. Активность кисло!! и щелочкой фосфатаз

Кислая фос*атаза. При колидиарее не было установлено каких-либо заметных отличий активности КФ от таковых в норле. Они имели место только в возрастной динамика и совпадали с контрольными.

Шалочнря <1>осФптаза. Вши обнаружены 'существенные качественные изменения активности ЩЗ при антигенном'воздействии:

- в фолликулах подвздошной кишки они проявлялись активизацией в центрах отдельных фолликулов пейеровых бляшек с 14-дневного возраста;

- в брыжеечных лимфоузлах активизацией 11$ в центрах лим-фоидных фолликулов с 14-дневного возраста;

- в селевенке проявлялись исчезновением Щ5-позитивных пе-риартериальных муфт у поросят в одно- и 3-дковном Еозрасте и заметным отставанием в развитии отдельных лшфондшх фолликулов в более позднем возрасте с периартериалыюй активностью 11$.

2.6. Электронномшсроскопические исследования иммунокомпетентннх клеток

Описаны ультраструктурные особенности межэпителиальных лимфоцитов в тонком кишечнике поросят, а также обнаружены и описаны' лимфоциты с признаками плазмсжлеточной дифферевдировки.

■В ръер-исс. отмечаются структурные особенности

.Т-линфоцитов, идентифицированных с помощью сМ-Е-РОК, особенности клеток в ходе плазглоклеточной дифферещировки, а также разрушение плазмоцитов, как наиболее эффективный способ секреции иммуноглобулинов. Кроме того, прослеж вается.возможность образования плазматических клеток из ретикулярных, особенно в условиях антигенного воздействия.

. 3. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В ходе исследования прослеживается смен пассивного коло стрального иммунитета на активизацию собственной, в первую очередь, локальной системы защиты, в условиях становления и развитая организма новорожденных и на фоке антигенного воздействия.

При втом отмечается взаимосвязь происходящих в организме процессов, направленных на созревание и способность к иммунному ответу уже в первые недели жизни новорожденных. При эшери-хиозах эту (функцию выполняет система локального иммунитета, действующая практически независимо от системного. Приобретение органами и клетками в ходе развития иммунной компетенции четко выражено на характере локального и системного гуморалыгго иммунного ответа, а именно'во.взаимосвязи и корреляции со стороны концентрации иммуноглобулинов и количества иммуноглобулинсодер-жащих клеток, а в системе локального иммунитета еще и содерка-нием межэпителиальных лимфоцитов. Особенно наглядно эти взаимосвязи прослеживаются на примере прерывания антигенного воздействия в кишечнике."

4. вывода

1. У новорожденных поросят с первых часов и до 3-х суток после рождения в тонкой отделе кишечника при осуществлении всасывания молозива и вместе с ним материнских факторов защиты-иммуноглобулинов в неизменном виде, морфологически наблюдается образование на апикальной мембране энтероцитов ворсинок, множества различных по величине эндоцптозных инвагинаций и соответственно форлирование в цитоплазме эпителия многочисленных вакуолей, содержащих вещества белковой, липидной и смешанной природы и проявляющихся в виде темных, темно-светлых и светлых'образований. Темные вакуоли преимущественно выявляются в проксимальном, светлые - в дистальком отделе тонкого кишечника. Но времени,пик указанных структурных изменений в энтероцитах тонкого кишечника щлходится на первые 24 часа кизни поросенка, а прекращен ие пи-ноцитоза, с последующим исчезновс ;шем характерных вакуолей, на 3-4 сутки от проксимальных к дистольнш участкам тонкого кишечника.

2. Максимальная концентрация иммуноглобулинов в секрете и соскобе слизистой оболочки тонкого кишечника поросят обнаруживается с поступлением молозива, а на 6-е сутки снижается и достигает абсолютных значений - 24+4 мкг/см2 для ИгМ, 136+12 мкг/ см2 для Игб и 599+40 мкг/см2 для^- глобулинов. В. дальнейшем содержание всех классов иммуноглобулинов к 14:-м суткам такхе

снижается, а через 1-2 недели, на 30-е сутки, вновь восстанавливается за счет активизации собственной - локальной системы гуморального иммунитета кишечника поросят и достоверно возрастает в абсолютных значениях для 11гМ - 24+0,9 мкг/см^, для Иг 6201+3,5 мкг/см2 и у - глобулинов - 13£'7+1С9 мкг/см~.

. 3. Концентрация иммуноглобулинов в сыворотке крови в первые хе сутки низни у новорожденных поросят достигает своих максимальных значений - 24+1 мгЛ'л для Игб, 4+1 мг/мл для ИгМ и 5+2 мг/мл для ИгА, что.в общей структуре иммуноглобулинов соответственно составляет - 72,5; 12,5 и 15/$. Начиная с 3-х суток ц до 30-дневного возраста у клинически здоровых поросят в сыворотке крови происходит неуклонное снижение Игб и ИгМ. Увеличение ае ИгА па 3-й сутан в 1,5 раза связано с продолжающимся процессом всасывания их в тонком кишечнике.

4. .'.^эпителиальные лимфоциты в тонком • отделе кишечника легко выделяются от знтероцптов по интенсивно окрашенному ядру округлой iop.ni и характерному вокруг него светлому ободку. Количество их на 1000 знтероцптов у 3-дневных поросят в 12-перст-ной' кишке составляет - 97+7, в тошей - 06+5 и подвздошной -46+3 клеток. С ростом и развитием тонкого кишечника у поросят

в послед; -;шие сроки кизни, а тагае в связи с'усилением иммунологической компетенции кишечника отмечается и соответствующее увеличение количества МЭЛ, которое достигает максимальных абсолютных значений к месячному возрасту и составляет - 397+41, 338+40 и 218+33 клеток в соответствующих, отделах тонкого кишечника.

5. На 14,21 и 30 дни аизни у клинически здоровых поросят " с кикцим сроком во всех отделах тонкого кишечника резко возрастает общее количество тдмуноглобулинсодер-хашдх меток. Так, они в 12-перстьо." шпике от 89+2 возрастают до 169+20, в тощей - от 267+12 до 567+66 и в подвздошной - от 166+9 до 752+67 кл/мм2.

Б мякотных тягсах регионарных лимфатических узлов кишечни-- ка обшее количество юмуноглобулинсодерааилх клеток с 457+31 кл/мм2 в 14-й день возрастает до 1549+74 кл/мм2 на 30-е сутки у клинически здоровых поросят, а в селезенке соответственно -от 9+1 до 61+2 кл/км2. Б структура селезенки основную массу занимают В-лимфоциты (83-7ЕЙ), затем плазмобитсти (10-1$) и плаз-моциты (.5-22%).

6. У клинически здоровых поросят в тонком кишечнике,'регионарных лимфоузлах и селезенке' ак: .вность ферментов кислой щелочной фосфатаз проявляется в динамике своего развития, в . том числе в отдельных клетках и структурах.. С возрастом, на 14-30 сутки, заметно увеличивается активность кислой фосфатазы в ретикулярных клетках центра лимфоидных фолликулов, а активность щелочной фосфатазы снижается и исчезает в фолликулах пейе-ровых бляшек.

7. Пероральное введение оптимальных доз (2 млрд.м.т.) энте-тотоксигенного штамма Е. eo€i - 0149:К91:КББ в желудочно-кишеч-1шй тракт новорожденным поросятам до получения ими первой порции молозива матери вызывает характерные клинш;омор1'ологические признаки колидиереи, которые проявляются в виде угнетения общего состояния, появления диареи и адгезированных микробов на слизистых оболочках тощей клики.

8. При воспроизведении колидиареи у новорожденных поросят существенно' не изменяется характер процесса всасывания молозива в тонком кишечнике, который тс^же осуществляется в первые трое сутс_. жизни с соответствующими морфологическими признаками.

9. Антигенное воздействие усиливает иммунные процессы, направленные на выработку собственных антител в стенке тонкого кишечника. Независимо от ведущей роли ПгА в местном .тамунитете,• синтез иммунных белков начинается с достоверного повышения ИгМ на 21 сутки. При этом обшие тенденции в динамике иммуноглобулинов при колидиарее сохраняются как в норме, концентрация их к 14-му дню неизменно снижается, подтверждая процесс полураспада

и перераспределения их в кишечном тракте, так и в условиях продолжающейся антигенной стимуляции и активизации в нем синтеза собственных антител плазмоцитами.на 21-й день возрастает концентрация KrtI в 1,7 раза, Игб и у- глобулинов соответственно в 1,6 и 1,4 раза. Однако в отличии от норлы при колидиарее на 30-Й день в условиях прерывания стимуляции достоверно снижается уровень ИгМ и Игб в 2,2 и 2 раза и незначительно^ - -глобулинов соответственно до - 15+2, S6+II и 1164+95 мкг/см2.

10. Игменение динамики сывороточных иммуноглобулинов при колидиарее происходит также, как в норле. Так, все классы иммуноглобулинов в первые же трое суток достигают своих максимальных значений, начиная с 2-х суток неуклонно снижаются ¡значения

Игб и ИгГ.1. Концентрация ИгА на 3-ц сутки такие, к ait и в норме, возрастает до 8,5+0,13 мг/глл, что-подтверждает продолжающийся процесс всасывания иммуноглобулинов из тонкого кишечника. При колидиарее характерна.) прязнякои является дос хзверное снижение абсолютных значений ИгМ на 21-е и 30-е су. ки по сравнению с нормой.

11. При колидиарее поросят сушествешше изменения отмечаются в динамике межэпителиальных лимфоцитов. Количество ЦЭЛ в 12-перстной, тощей и подвздошной кишке поросят при колидиарее на 3-й день составляло ниже нормы соответственно в I,46;1,13 и 1,3 раза, которое в дальнейшем подвергается резкому подъему.

Б ответ на постоянное .антигенное воздействие происходит

прогрессирующее увеличение МЬЛ до 21-х суток во всех отделах тошсого кишечника и достоверно превышают таковые в норле, а на 30-е сутки стремительный рост М5Л закапчивается их снижением в 12-перстной кишке с 347+51-до 240+14; в тощей - с 319+55 до 107+10 и в подввдошной - с 281+11 до 198+49 клеток, что связано с прерыванием антигенной стимуляции на 14-е сутки.

12. В органах локального иммунитета, в отделах тонкого кишечника и' регионарных лимфоузлах, на 14-й день при колидиарее отмечается значительное увеличение количества иммуноглобулинсо-дер:;ащнх клеток с их снижением на 21-е сутки, что связано с относительно длительным сроком прерывания стимуляции (7 дней) в кишечнике. При этом количество клеток становится меньше, чем в норле. На 30-е сутки происходит как бы наверстывание контрольного уровня, но тем не менее, количество иммуноглобулинсодержа-щих клеток все ;»е остается ниже, чем у здоровых поросят.

В селезенке на 14-й день при колидиарее наблюдается значительное увеличение (втрое) общего количества иммуноглобулинсо-держашдх клеток при равном соотношении В-лимфоцитов, плазмоблас-тов и плазмоцитов. Однако, на 21- и 30-е сутки все значения су- -щественно отстают от соответствующих в норле. Проявляются'признаки сучрессии и задержки ч селезенке клеточной дифференцировка, в результате чего число плазматических клеток при патологии становится ниже в среднем в 1,5-2-раза а процент плазмо-бластов на 30-е сутки, наоборот остается выше.

13. При колидиарее на 14-30 сутки отаечается проявление активности ИД' в'центрах лимфоидных фолликулов пейеровнх бляшек к

лимфоуз; эв. £то связано с активизацией энзима в клетках центра, но не просто появлением в них бластных форм, имеющим место так*е' в норле, а особш образом связанной с'антигенным воздействием.

В селезенке отличительной особенностью при колидиарее является не выборочное, а полное отсутствие в периартериальной области у 1-6-дневных поросят активности во всех лимфоидных фолликулах.

14. На электронномикроскопическом уровне в лимфоцитах эпи-. телиаляного пласта наблюдаются процессы функциональной активности, проявляющейся ь цитоплазме синтезом мембранных структур, а также появлением митоза клеток, что, вероятно, связано с приобретением ЛШ иммунной компетенции. Е собственном слое слизистой оболочки тонкого кишечника для Е-розеткообразующих лимфоцитов в целом характерно- крупное ядро с локализованным хроматином вдоль ядерной, мембраны, узкое перинуклеарное пространство. Цитоплазма клеток образует отростки различной величины, имеется наличие митохондрий, единичных лизосом, коротких канальцев гранулярной и аграаулярной ЭПС в виде свет.:ых пузырьков. Цитоплазма также богата полисомами, имеется наличие комплекса Гольдаи, а так^е ДОВОЛЬНО крупных осмиофилышх гранул. В ^т'кг. /о^-^-ссбС , кроме того, идут активные процессы плазмоклеточной дифференци-ровки как в результате бласттрансфорлации В-лимфоцитов, так и образование плазматических клеток из ретикулярных". Зрелые плаз-моциты разрушаются, высвобождая при этом большое количество им-муно;лобулиноЕ.

5. ПГАКТ1Г1Е^К11Е ПРЕДЛОЖЕНИЯ

I. В естественных и экспериментальных условиях для оценки гуморального иммунитета, напряженности иммуногенеза и контроля, аа нил, необходимо использование инфориативных иммунохлмических, нммуноморТ.олоыческих, гистохимических и электронномикроскопичес-ких методов исследования;

а) Для оценки функционального состояния системы локального иммунитета в кисечни"е желательно:

- определение абсолютных количеств иммуноглобулинов (их классов) в секрете и соскобе в различных его отделах, выраженных в иг (мкг) на единиц' шгашади (мы""), что позволяет получать.

сравнимые значения как в возрастной, так и сравнительной динамике;

- подсчитывание количества МЭЛ на 1СС0 ядер энтероцитов с > учетом колебаний их значений в разных отделах желудочно-кишечного тракта;

- определение количества иммуноглобулпн'содержаящх клеток на I мм с учетом колебаний их значений в разных отделах желудочно-кишечного тракта и одновременного подсчета последних в мякотных тяжах регионарных лимфоузлов, подтверждокжтх соответствующую динамику, в кишечнике.

б) ¡Ш оценки фушсционольного состояния системною гуморального иммунитета необходимо иммунохимическое определение абсолютного и относительного уровня различных классов иммуноглобулинов в сыворотке крови животных, а морфологически - учитывать в селезенке на I мм2 общее количество ит/глуног.чобулянсодерттих клеток, а также относительное содержание их субпопуляций - В-. ' лимфоцитов, плазмобласТов и плазматических клеток; гистохими-чески желательно выявлять активность ферлентов КФ и Щ2 в различных структурных элементах лимфоиднн>: органе и особенно в их ■ фолликулах, а электронномиг.роскопически - следить за процессом клеточной дифференцировкз иммунокомпетентннх клеток и их морфг-функционолым.'и особенностями.

2. Учитывать сроки и продолжительность напряженности локального, гуморального иммунитета (в среднем 5 дней) при возможных иммунизациях новорожденных поросят с учетом способности их к раннему, активному иммунному функционировании, & вместе с тем, разработке пролпнгируюи'ИХ средств и применения с первых дней имму но с тимулято ро в.

3. Выпущен рекламный ян^орллисток "Методика о'пределения ' абсолютных значений иммуноглобулинов в секрете и соскобо кишечника". -Воронеж, ЦНТИ, 1951 г. .

4. Разработан метод"Полученио препаратов и приготовление срезов с розеткообразугощих клеток для электронной микроскопии", который пригоден для использования в научно-исследовательской работе а учебном процесса.

6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

' I. Масьянов Ю.Н. Динамика иммуноглобулинов в сыворотке крови - поросят в норме и при экспериментальном колибактериозе// Профилактика и лечение болезней молодняка сельскохозяйственных животных: Тезисы докл. Есесоюзн. науч.-технич.конферен. (9-10 октября 1991 г., г.Воронек) - t.I., 1991.- С. 47-48.

2. Масьянов Ю.Н, Моргунова Б.И., Сулейманов С.М.¡Алтухов Н.М, Морфологичоские особенности всасывания в тонком кишечнике у поросят в раннем постнатальном онтогенезе//Профилактика и лечение болезней молодняка сельскохозяйственных животных: Тезисы докл. Всесоюзн.науч.-технич. конферен. (9-10 октября 1991 г., г.Воронен)- М.,1991,- С.4&-49.

3. Масьянов D.H., Сулейманов С.М..Алтухов Н.М. Иммуномор-фология тонкого отдела кишечника у поросят в норме и при коли-Днарее//Профилактика и лечение болезней молодняка сельскохозяйственных кивотных: Тезисы докл. Всесоюзн.науч.-технич.конферен. (9-10 октября 1991 г., г.Воронеж)- И,,1991.- С.49-50.

4. Масьянов Ю.Н., Сулейманов С.М. Методика определения абсолютных значений иммуноглобулинов в секрете и соскобе кишеч-нйка//Рекламный информлнсток, ЦНТИ, Воронеж.- 1991,- 4 с.

.. п

Формат бумаги 00x84 1/16 Объем 1 п.л. Тираж 140 экз. Запал 470ф-О2г.

Типография 'Транспорт" Управления печати и массовой информации Воронежского облисполкома