Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Иммуноморфогенез у утят, перорально вакцинированных против сальмонеллеза, и влияние на него алюмо-калиевых квасцов

о ОД

' ' '' 'ШП'ШХЖАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

УДК <436.597:612.171:615.37/-.619.98:579.842.14с

ГОРБУНОВ Александр Андреевич

ИММУНОМОРФОГЕНЕЗ У УТЯТ, ПЕРОРАЛЬНО ВАКЦИНИРОВАННЫХ ПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА, И ВЛИЯИИЕ НА НЕГО АЛЮМО-КАЛИЕВЫХ КВАСЦОВ

16.00.02-патологня, онкология и морф «логия животных

Автореферат ;ц|ссерг1ацни на соискание ученой степени кандидата ветеринарных паук

Витебск 1996

Рабо' \ выполнена в Витебской государственной ака демии ветеринарной медицины.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук,

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор А.И.Крааутешсо доктор ветеринарных наук, профессор В.В.Магссимови'г

Оппонирующая организация -Санкт-Петербургская государственная акздшш ветеринарией медицины

Защита состоится " 1 £ "■ у уч^-чл.ч ._ 1996 года

в УУ^часов на заседании Совета по защите диссертаций Д 05.33.01 в Витебской госуд^рстссиисП академии иетсрилзр-тН щнщшы но адресу: 210602, г.Витебск, ул. Доватора 7/11, государственная академия ветеринарной медицины;

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Витебской государственной академии ветеринарной медицины.

Автореферат разослан "__С_" ^хх-СхОо_1996 года

профессор, академик М.С.Жаков

Ученый секретарь Совета по защите диссертаций, кандидат ветеринарных наук, доцент И.З.Севрюк

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы диссертации. Изучением эпизоотологии, патогенеза, иммуноморфогенеза и профилактики сальмснеялеза млевопитавщда и птиц занимались многие исследователи (С.И.За-гаевскнй, 1977; И.М.Кзрпуть и соавт., 1979; М.С.йгков, Л.П.Вель,1980; В.С.Прудников,1980,1988,1991; М.С.Жаксв, B.C. Прудников, В.В.Вгнтеев, 1SS2; В.В.Максимович, 1982,1990; A.M. Ахмедов, 1983; Н.Г.Толкач, В.В, .Вантеез, В.М.Р.аков,1985; С.°Г. Пак, М.X.Гурьянов, М. А.Пальцев, '088; Б.Л.Чзркассккй и соавт. ,199.1; Б.Ю. Шустер, 1994). Но, несмотря на это, до сих пор закономерности иимуноморфологической перестройки з организме животных при вакцинации их против сальмонёллеза выяснены не полностью, не предложены достаточно надежные . зтоды эго про- • филахтшса. Ватакми моментами в эффективности иммунизации являются правильный выбор дозы вакцины, место и метод ее введения. Малые дсеы биопрепарата или, наоборот, очень болыж? поту? не обеспечить долитого иммунного ответа, :u:So вызвать ото угнетение за счет перераадражения иммунксй спстеш антигенной информацией ( Л.И.Краскопрезина, 1974; И.А.Болотников, 1982; В.С.Шуднкков, 1985 и др.).

Сггянигацкя крупных ок-циалигирозаяных хозяйств и прокыз-леюнк 1»мплексов, гдо все оскозкиэ рабочие процессы мехени-акрогакц, потребовало разработок ногой вжг:х-.:_эт;1гЕ0дите:аней техника и технологии массовых обработок -тарных, з том числе вагцинации.

Большое значение в борьбе с сальмонелл-ззами животных отводится пероралыюй иммунизации, как одному из наиболее перспективных групповых методов специфической профилактики данной болезни ( А.А.Воробьев, В.И.Осипов, 1971; Г.Ф.Корсмыслоз, 1983; С.Н.Кузьмин и сог_т., 1885; И.Бартнинскас и др., 1987; В.Ю.Шустер, 1988; B.C.Прудников,1991 и др.). Немаловажное значение в иммунной аалдате млекопита^яих и птщ от садьмонел-леза, наряду со специфическими препаратами, играют иммуностимуляторы.

Механизмы иммунной защиты у птиц не совершенны. Чаще всего иммунодефицитные состояния возникают у молодой птицы, что предопределено особенностью развития иммунной системы птиц в онтогенезе ( Н.Д.Призабайло.'1851: Т.Л.Сухинина, 1SS2; В.М.Апатенко,1592).

Поэтому, изыскали? новых препаратов, обладающих имыунос-тамувируедиа действием и не оказывающих побочного влияния на организм животных, имеет больше практическое значение. Одним из таких неспецкфических ишуностнтмуляторов являются алю-1Юг калиевые квасцы. Ряд работ посвящен изучению влияния али-ио-казкевых квасцов на иммунные механизмы макроорганчзма ( Н.М.Никифорова,1973; А.Е.Вершигора,1930). Однако исследований, посвявднных влиянию их на морфологическое проявление иммунологических процессов, мало. Нет работ, касающихся влияния препарата на иммуноморфогенез у утят, перорально ва'ащниро-ванных против сшгьшнеллеза, поэтому целесообразны дальнейшие исследования в этом направлении.

Связь pago: ; с крупными научными програ\мами, темами. Настоящие исследования являются разделом Республиканской подпрограммы "Ветеринария" и составной частью научно-исследовательской работы кафедры патологической анатомии и гистологии: "Иммуноморфогенез у кивотных при вакцинациях, инфекционных, шшазионных заболеваниях и их ассоциациях" (нонер госре-гистрзщш Оí83.0072792).

Цель и задачи исследования. Целью напей работы было изучение кмшуноусрфогенега у утят, перорально иммунизированных сухой кивой вакциной против сальмонеллеза водоплавзлцих птиц, и влияние на него ашомо-калиевых квасцов. Для"этого нами поставлена задача изучить:

-иммукомэрфологао вакцинного процесса у утят при перо-ралыгай иммунизации их сухой живой вакциной против сальмонеллеза водоплавающих птиц;

-влияние алюмо-калиевых квасцов' на иммуноморфогенез у утят, перорально вакцинированных сухой живой вакциной против сальмонеллеза водоллаващих птиц.

Научная новизна подученных результатов. Нами впервые изучено влияние алюмо-калиевых квасцов на иммуноморфогенез утят, перорально вакцинированных против сальмонеллеза, и показана высокая эффективность данного препарата как иммуностимулятора.

Расширено представление о взаимосвязи всех звеньев иммунной системы птиц в борьбе с сальмонеллезным антигеном и о целесообразности применения алюмо-калиевых квасцов для активизации ишукоморфогенеза.

Практическая значимость полученных результатов. Выявлен-нал немч возможность добавления 10%-ного раствора алшо-иали-едик квасцов непосредственно в сухую хивую вакцину против сальшноллеза водоядаваящих птиц позволяет повысить эффективность проводимой вакцинации против этой болезни за счет выработки у утят бод«е каяряженпого иммунитета. Расширено преДс-тачлениз о взгдг/осзяаи все:; ззетаев иммунной систем птиц в заедете от сальменоллезкого антигена и о целесообразности применения алиго-калиегж квасцс-з для стимуляции кнмукоморфогэ-аеоэ.

Производствелнш опыт, проведенный па п-тицефабргссэ нл.Засдонова йгозпенского района, подтвердил полученные 31«-. пэриченталь'иые данные.

Экономическая значимость порученных результатов. Поп ейские утятам сухой гшаой вакцины просив сал5х.-унвлжвга вздспла-ваюцих пткц с добавлением в нее 10%-него растгера алямо-кали-евкх квасцоз способствует повышению сохранности поголовья, стимуляции роста и развития птицы, создашзо иммунитета высокой напряженности, что дает возможность использовать алэ-мо-калиевые квасцы при вакцинации утя > против сальмонедлеза. Сухая живая вакцина против саяьмонеллеза водоплавакщих птщ с добавлением в нее в качестве иммуностимулятора 10%-ного раствора алюмо-калиевых квасцов может быть использевана в качестве комерческого продукта. Экономическая эффективность на оубль затрат проведенных ветеринарных мероприятий составила 2,80 рубля (в ценах 1992 года).

Основные изложения диссертации, выносимые на защиту:

-стимулирующее влияние алюмо-калиевых квасцов на развитие иымуноморфогенеза у утят при пероральной вакцинации сухой живой вакциной против сальмонеллеза водоплавающих птиц.

-схема пероральной иммунизации утят против сааьмонедаееа о одновременным применением иммуностимулятора 10%-ного раствора алюмо-калиевых квасцов, разработанная на основании изученного щшуноморфогенеза.

Личный вклад соискателя. Экспериментальные и теоретические исследования по теме диссертации проведены лично соискателем под руководством доктора ветеринарных наук, профессора, академика М.С.Еакова. Общее содержите белка и классы шыу-Еогхобулшюв в сыворотке крова изучали совместно о ассистентом кафедры нормальной и патологической физиологии Н.С.Ыотуе-ко.

Апробация результатов диссертации. Результаты исследований дагояены и обсузвдены на итоговых научный конференциях профессорско-преподавательского состава Витебской государственной академии ветеринарной медицины (1992,1993,1995,Ви-Всеросийска! научно-методической конференции по пата-евусции сельскохозяйственных кивотных (1993, Воронен), рос-публзз-акской научно-практической конферэнции по жзшотководс-тву и ветеринарной медицина (1994, Витебск), Мззздународноы симпозиуме: "Проблемы моделирования патологических процессов у человека и животных; имыунодефициты, их диагностика и коррекция" (1994, Санкт-Петег "5ург).

Опубликованность результатов Основные положения диссертации Опубликованы в семи научных работах.

Структура и объем диссертации. Диссертация объемом 143 страницы машинописного текста состоит из следующих разделов: введение, общая характеристика работы, основная часть, включающая четыре главы ( обзор литературы; экспериментальная часть и методика исследований; проведенные теоретические и экспериментальные исследования; анализ и обобщение результатов исследования), выводы, список использованных источников, приложения.

Список литературы включает 305 источников, в том числа 49 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 15 рисунками и 24 таблицами.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ Экспериментальная часть и методика иссдедоззшгй.

Работа по изучению ншуноморфогенеза у утят, перора^ьно вшданироваяных прохиз сальмснеллеза, а также влияние некоторых кшу1гастк.!уляторов на развитие постзакциналымх кшуно-иорфоло ячесгаи реа^и проводилась в 1989-1993 гг. в лаборатории патологической анатомии и гистологии Витебского ветеринарного института, а также на птицефабр-ке иы.Заслошва Яиозненского района Витебской области.

В соответствии с поставленными задачами экспериментальные исследования проводились в двух сериях опытов. В первой серии-па 26 утятах 1-дневного возраста порода Кросса "Темп-1" изучали влияние различных гамуносткмуялторсз на напряженность иммунитета у утят, перораяьно вакцинировании против садьио-недл«за сухой живой вакциной. С этой цег-а еся птица била разделена на 8 групп, в кадцой по 4-5 утят, подебраюшх по принципу аналогов.

Утята 1 группы служили контролем. Уж 2 группы кмкунизи-ровали сухой дивой вакциной против салъмеаэлдвэа зодоплагаэ-едх птиц, изготовленной Алма-Лтжской био^абрикой. Вакштну выпаиваю! двукратно с интервалом 2 дня в количестве- первый раз одну дозу, второй раз две дозы вакцины, предварительно растворив их в 10 мл воды. Утятам 3-8 групп вместе с в&'сцкной выпаивали иммуностимуляторы, в том числе: птице 3 группы-натрия тиосульфат в дозр 0,1 г на голову при первой и 0,2 г при второй иммунизации; утятам 4 группы-декарис соответственно в дозах 1 и 2 мг на голову; птице 5 г;уппы-10%-ный раствор алю-мо-калиевых квасцов соответственно в дозах 0,1 и 0,2 мл на голову; птице 6 группы 10%-ный раствор гвдроксала в дозе 0,1 мл на голову при первой вакцинации и 0,2 мл при второй; птице 7 группы В-акгивин в дозах соответственно 0,5 и 1,0 мг на го-

лову; утятам 8 групп, 2%-нкй раствор пектина в дозе 0,2 мл на голову при первой и 0,4 мл при второй вакцинации (как инакти-ватор соляной кислоты).

На 8 день после второй вакцинации с целью определения напряженности иммунитета всех утят экспериментально заражали суточной агаровой культурой сальмонелл-( Б. 1урМпнгг1ит), Ёталы 271, в дозе 35 млрд м.т. на голову. Заражение птицы проводили вкутризобно. После заражения за утятами вели клиническое наблюдение, определяли прирост живой массы и в случае их падежа проводили патоморфологическое исследоват'че трупов утят. Указанная доза возбудителя является летальной для утят двухнедельного возраста, она была установлена наш экспериментальным путем. От всех павших утят патматериал исследовали бактериология.¿ки в лаборатории кафедры микробиологии.

Для изучения влияния 10%-ного раствора алимо-калиевых квасцов на выживаемость вакцинного итамма сальмонелл при растворении в нем сухой живой вакцины против сальмонеллеаа водоплазаюодх птиц проводили посев вакцинного штамма сальмонелл на ыясопептонный агар (МПА), который в дальнейшем помещали на сутки в термостат при температуре +37°С. Посевы вакцинного штамма сальмонелл на МПА осуществляли через 3, 6 и 12 часов после растворения вакцин;! в 10%-ном растворе асомо-калиевых квасцов.. Отрицательного воздействия препарата на сальмонеллы не отмечено.

После посева, о целью исключения повышения вирулентных свойств вакцины, применяемой совместно с квасцами, был сделан смыв суточной культуры Б. 1урЫшиг1шп к произведено заражение ею белых мышей в дозе 0,35 млрд микробных тел на голову с последующим наблюдением за ними в течение 7 дней.

Полученные результаты исследований позволили нам провести вторую серию опы?' в по изучению влияния алюмо-калиевых . квасцов на иммуноморфогенез водоплавающих птиц при вакцинации их против сальмонеллеза

Для этого было отобрано 68 утят 3-дневного возраста с относительно равной живой массой, разделенных на 4 группы пс 17 утят в' каждой.

Утята 1 группы служили контролем.

Утят 2 груши перорально иммунизировали сухой яивой вакциной против сальмонеллеза водоплавающих птиц. Вакцину выпаивали дву1фатно с гатервалом 2 дня в дозах, предусмотренных наставлением по ее применению (первый раз одну дозу, второй раз две довы вакцины, предварительно растворив их в 10 мл воды).

Птицу 3 группы перорально иммунизировали той же вакциной, предварительно разбавив ее 10%-ным раствором алх»:о-калиевых квасцов. Вакдаиу применяли в дозах предусмотренных наставлением по ее лрнм^кетга.

Еммушюаця» утят 4-ой гг; ¡:-ы проводили по той же схеме, что и птицу 3 группа, но для изучения роли клеточных механизмов защиты организма птиц от сальмонеллеаной инфекции у них в суточном возрасте (за день до иммунизации) удаляли тимус.

На 3 день после 1-ой, 3 и 7 день после 2-ей вакцинации по 4 утенка из каздой группы умерщвляли для иммуиоыорфологичер-;сого згаучеккия органов иммунной систем, серологических исследований крови и ее сыворотки. В сыворотке крови изучали содержание общего белка и белковых фракций, с помощью РА определяли ти'.'ры специфических противосальмонеллезных 5ггл>:ткни-нов. Для изучения иммуноморфологических реакций в фиксирующие жидкости (жид кость Карпу а, 10%-нык раствор обычного и нейтрального формалина, 10%-ный раствор азотнокислого серебра и 8Фэтиловый спирт) от всех утят брали кусочки тимуса, бурсы Фабриция, селезенки, стенки тонкого и толстого кишечника, слепокишечных миндалин, сердца, печени и почек.

Для проверки напряженности иммунитета на 8 день посла 2-ой вакцинации оставшихся утят всех групп (по 4-5 голов в каидой) экспериментально заражали суточной культурой ЗЛурЫ-шиг1ии шт.271, в дозе 35 млрд м.т. на голову. Заражение утят проводили внутризобно. После заражения за птицей было установлено наблюдение.

Содержание гемоглобина в периферической крови утят определяли гемометром ГС-3, количество эритроцитов и лейкоцитоз подсчитывали в счетной камере Горяева. Мазки крови готовили на тонких предметных стеклах, высушивали на воздухе и фиксировали в метиловом спирте. Для выведения лейкограммы мавки

ь

окрашивали ааур-зозином по методу Романовского-Гкмеы, в них подсчитьшали 100 клеток.

Т- и В-лимфоциты в периферической крови определяли но величине и характеру ядра и цитоплазмы (И.УиЗапоУ1с е.а., 1972). Огфаску рибонуклеиновой кислоты в лимфоцитах проводили по методу Брава в модификации М.С.Какова и И.М.Карпутя (1967).

Фагоцитарнув активность псевдозозккофилов определяли по методу Д.И.Иванова и Б.А.Чухловина (1967). • Завершенный фагоцитоз учитывали по методу О.Г.Алексеевой и А.Г.Вол:гавон (1956). При этом вь.~зодили следующие показатели:

процент фагоцитоза- процент фагоцитироваздак псевдоэозн-нофшюв из общего числа подсчитанных;

фагоцитарный индекс- среднее число фагоцитированных >лк-робов на один подсчитанный псевдоэозинофил;

фагоцитарное число- среднее число фагоцитированных микробов на один активный псевдоэозинофял;

процент переваривания- отношение числа убитых микробов к общему числу фагоцитированных микробов;

ш;декс переваривания- среднее число убитых микробов на один подсчитанный псевдоэозинофил;

Общее содержание белка в сыворотке крови устанавливали рефрактометром Количество белков, соответствующее коэф-

фициенту преломления сыворотки, находили по таблице Рексса. Разделение и количествен}: -е определение фракций белка сыворотки крови проводили по методу Б.Д.Сурикова в модификации В.В.Пилько (1971), по Н.В.Пясик, М.В.Литвиненко и др. (1964,1974),.а такгсе методом диск-электрофореза в подиах-риламидном геле (В.М.Холод, Г.Ф.Ермолаев, 1988). Общее количество иммуноглобулинов в сыворотке крови определяли по методу Ю.Н.Федорова и др.(1985). Титр сальмонеллезных антител определяли в реакции агглютинации со стандартным сальмонеллез-иым антигеном.

Аскорбиновую кислоту в тканях выявляли по методу Жира и Леблона (Г.И.Роскин, Л.Б.Левинсон, 1957) с докраской препаратов гематоксилин-эозином, гликоген- по методу Шабадаша (1947), активность щелочной и кислой фосфатазы выявляли по методу Го-мори (О.В.Волкова, Ю.Х.Елецкий, 1982), антителосодержащие

у

плазматические клетки- по непрямому методу Кугюа (1955, 1971) в модификации S.Marie (1962).

Для изучения общих структурных изменений гкстолохлические срезы окразивали гематоксилин-эозином, для дкфферекциров!а иммунокомпетеитньк клеток в органах иммунной системы- по мз-тоду Браээ. Фиксированный материал подвергали уплотнения путем заливки в парафин по общепринятой методике (Г.А.Керку-лоз,1969).

Для сбг,кткзного суждения о характере изменений клеточных популяций в ткмусе, Фабрициэвой lypce, селезенке, сдепокйаот-mmдалияах, з стенке тонкого и толстого кквзчника определяли ецсэргалкэ Т- и В-ликфоцитоз, подсчитывали сб~ээ количество клеточных элементов, определяла содержание ти$о- и шкзаиейяззтев, козрельа и зрелых плагмоцитов, митозоз, выявляли соотнесения первичных и вторичных -люфоидных фоягккулоа, a Tasse степень выраженности макро- и 'ыкярофагалъной реакция.

Подсчет клеточных элементов провсд?та з БО полях зрения микроскопа (окуляр 5, бияокуляр 1,25, обэьектиз 100). Цифровой материал обработан статистически. .,

.. _ Для электронной микроскопия материал (кусочкп ккзэчвика, делгзевкя, тамуса) фиксировали ЗК-тм рсотзорсм гшяаральде-гида, с дофиксацией 2*-кый еодвш раст-Ьорсч vwm, ' заливку и уплотнение проводили в зпан-араядстгай снаси. Готовили срезы на ультра»,откротсмэ Л.Ш1-3, окрашивали 'их ур.?лилацетатш и цитратом свинца. Ультраструктуры изугалп в электронноа микроскопе as-100.

Производственной опыт 'по оценке экономической гффекиш-ности вакцинации утят прот!з сааьмонеллеза с применением ЮХ-ного раствора ачомо-калкевьк кззецов был проведен на птицефабрике им. Заслонсва Лиознексксго района Витебской области. С этой цеяьв было использовано 5700 утят 3-х дневного .'возраста, разделенных на 3 группы nb 1900 голоз в каждой. Птице 1-ой группы выпаивали сухую, лосвуо вакцину против саль-монеллеза водоплаваюгзк птиц совместно' с алюмо-калиевыми квасцами в 1ОХ-ной концентрации в дозе и по схеме» указанным в наставлении по применении вакцины. Утят 2-ой группы иммунизировали той же вакциной, но без добавления к,<муиостимулято-

хи

ра. йнтактная птица о-ей группы служила контролем.

При расчете экономической эффективности этого метода вакцинации использовали методические указания "Определение экономической эффективности ветеринарных мероприятий", разработанные М.А.Антшовым и В.М.Жаковьи (1989).

Экспериментальная часть.

Иммуноморфология вакцинного процесса у утят при перораль-лой иммунизации их против садьмон^ллеза. При двукра^.юй перо-ральиой иммунизации утят сухой живой вакциной против сальмо-неллеза водоплавающих птиц, в организме их развизалась иммунная перестройка, которая проявлялась увеличением числа г.сев-дозозинофилов и тромбоцитов в крови и повышением титра проти-Еосалъмонеллезных агглютининов в .^ывороткэ крови. одновременно в псевдозозинофилах иммунной птицы ¿татистически достоверно увеличивалось количество гликогена и возрастала юс фагоцитарная активность.

Наиболее выраженные кммуноморфологическке изменения отмечались в собственной пластинке слизистой оболочки толстого кишечника, где число клеток плазмоцитарного ряда увеличвва-лось по сравнению с контролем в 8 раз, а содержанке клеток, синтезирущих аягигага, в 4 рзза.

В ©абрициовой бурсе утят количество илазмобдастов увеличивалось по сг'вненш о контролем в 3 раза, а число антитело-образующих плазматических клеток почти в 5 раз.

В селезенка иммунных утят возрастало количество вторичных лимфэвдньгх фолликулов, имеющих хорошо вцратанные реактивные центры. По периферии ликвидных фолликулов наблюдалась значительная пролиферация В-лимфоцитов с активно;"! щелочной фосфа-тазой, а вокруг Центральных артерий основную массу составляли Т-клетки с высокой активностью кислой фосфатазы. При люминесцентной микроскопии ь красной пульпе селезенки у утят, ДЗро-рально вакцинированных против сальмонеллеза, во все сроки им-муиизации достоверно увеличивалось содержанке антителообра^у-однх плазматических клеток.

При экспериментальном заражении утят суточной культурой

Ii

сальмонелл в контрольной группе пало 4 утеша из 5, в группе иммунных утят-1. При патсшзгоанатоютшском вскрытии у них обнаруживались патоморфологические изменения, характерные для септической формы сальмонеллеза.

Влияние адэыо-калиевых квасцов на ишуноморфогенез у утят, перорадьно вакцинированных против сальмонеллеза. Проведенные нами редварителькые исследования (1-ая серия сжсз) показали, что пероракьнсе применение утятам раннего возраста различных ггммуностимуяятороз (натрия тиосульфата, декариса, аломо-кизиезых квасцов, гидрсксала, В-активина, пектина- как кяакт'шатора соляной кислоты) совместно с сухой нивой вдкци-кой протиз салшонеллеза водошшешцих птиц о: бывает ртгт-ккй ;«.?{уност:агул1фух5щй эффект. При этом, наиболее эффектив-га.г<я оказались алют-калиевыз квасцы в 10%-ней концентрации. Псзтсму во 2-ой серии опытов т использовали юг-ный раствор асомо-калневых квасцов.

При пзуче-гая! периферической iqxsn утят, пероральпо Егкцн-т^оваших против сальмонеллеза сот^ст.ю о алюмо-калиевыми icac?;aj.r.i, во гсэ сроки югмунизащи з 2 раза увеличивалось количество лейкоцитов и в 1,5 раза псеыпйлзсь их ¿агоцетзрн&я активность по ерззкшгшэ с ;п.!мунизг;г»гай одней ескцшэй (без . добавления' тгмукост:аг/лятсра).

При биохимическом иссдедозалин а сгзорогкз ¡фопн утят, перорачьпо вакцинированных против садьнокеллева и подугззглк гтюмэ-катаевые квасцы, на 3 де:п> после 1-ой пшунизЕцип статистически достоверно возрастало число иммуноглобулинов кяас-са М, а после повторной иммунизации G и Л. • . ¡йй,(укоиорфаюгические процессы у утпт " в ответ за перо-ральноэ введение вгводсы с ашга-кадиевнии квасцами ьнявля-лись преимущественно в слизистой оболочке тонкого кзгаочннка на месте перехода в толстый. При а\ж, наиболее выраженными они были на 3 и 7 день после второй вакцинации и характеризовались увеличением в слизистой оболочке кизечника в 4 раза количества плазматических клеток, повышением содержания Т- и В-лимфоцитов, вторичных лимфоидных фолликулов, активизацией микро- и иакрофагашюй реакций по сравнению с птицей, закци-

Хй

иировшшой бео кммун стимулятора. К этому времени в слеяоки-пзчных миндалинах иммунных утят, получавших алюмо-калиевые квасны, количество антителосодержащих клеток возрастало в 15 раз по сравнению с контрольной и в 2 раза по сравнению с птицей, вакцинированной без иммуностимулятора.

.В Фабрициевой бурсе утят, вакцинированных против сальмо-келлеза с добавлением алшо-калиевых квасцов особенно на 3 и 7 день после 2-ой вакцинации в 1,5 -2 раза увеличивалось количество плазмобластов, и более чем в 6 раз содержание зрелых плазмоцитов. При этом, в ¡тетках мозгового слоя ; чыфоидных фолликулов наблюдалась высокая активность щелочной фосфатазы.

В тимусб утят в ответ на перораяьное введение вакцшш совместно с квасцами, наблюдалось значительное расширение мозгового и о, .сение коркового вещества долек. Вместе с тем, в корковом веществе усиливалась блаоттрансформация Т-клеток и повышалась активность кислой фосфатазк. а в мозговом веществе увеличивалось количество и размеры телец Тассаля. .

В селезенке утят, перорально вакцинированных против саль-ыонедлеаа с применением алшо-калиевых квасцов, уже после 1-ой иммунизации в отдельных фолликулах просматривались реак-тиышэ центры. лктиЕизироваякоь микро- и макрофагяяьная реакции. Увеличивалось количество Т-лимфоцитов, с высокой активностью кислой фосфатазы. При этом, со вое сроки вакцинации содержание плазмобластов увеличивалось в 3-4 раза по сравнению с птицей, иммунизированной одной вакциной.

При элекгрониомшроскопическом исследовании в органах иммунитета утят, получавших пакцику, разбавленную в 10%-ном растворе алшо-калиевых квасцов, выявлялось' больсоэ количество макрофагов с крупными фагасома\ш и лизосомачи, екачителыю увеличивалось количество зрелых плазматических клеток, канальцы эндоплазма'веской сети которых были расширены й заполнены белковым содержимым.

При проверке напг ¡ценности иммунитета все утята, иммунизированные вакциной с алшо-калиевыми квасцами, противостояли заражению их культурой сальмонелл, тогда как у птиц, вакцга I-рованных без иммуностимулятора, отмечалось угнетение и один утенок пал.

/

ю

Влиглие алюка-кзлкевнх квасцов ка кммуноморфогенеа у утят, перорадьно вакцинированных против сальмонеллеза после тимзктомии. Для определения влияния алюмо-калиевых квасцов на клеточные механизмы иммунитета была роведека иммунизация утят протга сальмонеллеза после их тимзктомии. Вакцинация птиц проводилась пероральио совместно с аотмо-калиевкми квасцами в дозе-и по схеме согласно наставлению.

Результаты исследований показали, что в периферической крог.и тмызктомирозанных утят во все сроки иммунизации в - 1,5 раза умэньсалссь по сравнении с птицей, сохранившей тимуо, №ЗКч**стео гейкгчхатоз и в 2 раза содержание тромбоцитов.. В сыворотке крови тя.гак?омировачных утят почти в 2 раза уменьшалось, по сравнении с вакцинированной и сохранившей ткмуй птицей, содержанке специфических иммуноглобулинов, резко сни-яаяся фагоцитарный индекс и процент фагоцитоза, при этом фэ-гогдтарное число и.процент переваривания существенно не игые-к.гэ;сь.

При * монологическом исследовании в собственной пластинке слизистой оболочки тонкого и толстого кишечника тимэктомиро-ваяных утят отмечалось достоверное уменьшение по сралкешю с нетимэктомированной птицей числа лимфобт-стсз, значительно снижалась миро- и макрофагальнач реакции, уменьшалось чисто и размеры лимфоидных фолликулов с реактивными центрами.

В бурсе тимзктомкрованных утят, вакцинированных против сальмонеллеза и ползавших иммуностимулятор, уже на 3 день после 2-ой вакцинации уменьшалось ксячество плазмобластов и почти в 4 раза снижалось содержание зрелых плазмоцитов, а в лимфоидных фолликулах происходило резкое опустошение юс клеточными элементами и наблюдалось стирание границ мезду корковым и мозговым слоями.

В селезенке тимэктомированных утят, пероральио вакцинированных против сальмонеллеза с алюмо-калиевыми квасцами, достоверно снижалось, по сравнению с птицей, не получавшей иммуностимулятор, число лимфобластов, значительно уменьшалось содержание Т-лимфоцитов с низкой активностью в них кислой фосфат азы.

При проверки напряженности иммунитета методом экспериыен-

тального заражения у тимзкт омированных утят, перорально иммунизированных сухой живой вакциной против сальмонеллеза водоплавающих птиц и получавших иммуностимулятор, сохранность поголовья составила 60%, а у нетимзктомированных- 100%. При вскрытии трупов'. павиих утят были обнаружены патологоанатоми-ческие изменения, характерные для острого течения сальмонел-лова. При бактериологическом исследовании внделен Еозбуднтель сальмонеллеза.

Анализируя результаты исследований, ¡дано считать, что применение алдао-калиевых квасцов совместно с вакциной при пе-роральной иммунизации утят против сальмопеллеза способствует активизации кшуноморфологических реакцй в организме пищ и созданию более напряженного иммунитета против сальмонеллеза по сравнении с вакцинацией без кьаукосткмулитора. Удаление тимуса у утят суточного возраста за день до иммунизации их против сальмонеллеза ведет к ослабления шмукоморфологичесгак рсаздй и созданию иммунитета слабой напряженности, что свидетельствует о существенном значении клеточных механизмов защити при сапьмонеллезе.

Производственные испытания предложенного нами метода вакцинации утят против сальмонеллеэа с добавлением аламо-калне-еьех квасцов дали положительные результаты. Экономическая эффективность при этом, в ценах 1392 года, составила 2,80 рубля на рубль затрат.

Заключение

Проведенные нами исследования показали, что при перораль-ной иммунизации утят сухой живой вакциной против садьыонелле-аа, разбавленной в 10%-ном растворе алдао-калиевых квасцов, по сравнению иммунизаций вакциной без них, в пищеварительном тракте, буосе Фабрициуса, тимусе и селезенке развиваются еы-ракенные иммуноморфологические реакции, вырабатывается местный и общий иммунитет более высокой напряженности. Основой его формирования является первоначальная активизация клеточных механизмов защиты и лишь на 3 и 7 день после второй иммунизации усиливаются гуморальные факторы иммунитета.

1о

выводы.

1. Пероральная иммунизация трехдневных утят сухой зжвой вакциной против сальмонеллеза водоплавающих птиц, растворенной в 10%-ном растворе аломо-калиевых квасцов, вызывает, по сравнению с иммунизацией вакциной без азомо-калиевых квасцов, более шненсивные: «икро-. и макрофггалькуа и плазмоцкгаряуа реакции, увеличение количества вторичши лимфондкых фолликулов и здтите-осодеряащих плазмоцитов в лимфоидной ткана пищеварительного триста, плазмоцитар1.уто реакцию и увеличение размеров и числа вторичных лкмфоидкых фолликулов, антителообра-эутода илазиоцитоз в фабрициевой бурсе и-селезенке, Т-бласт-трансформацкэ и увеличение количества телец Гассаля в тимусе..

2. В крови утят, перорально ггшунизириванных вакциной совместно с ажв- 1салиевыми квасцами, увеличивается количество и фагоцитарная активность псевдозозинофилоз, накапливается в ша и макрофагах гаюрбиновая кислота и гликоген, возрастает титры противосальмонеллезных антител, содержание иммуноглобулинов 6, А и М.

3. Ь'лкро- и макрофагальная и плазмоцнтарнзя реакции в лш^.-гдеой ткани пищеварительного тракта, в фабрициевой бурее-и сс;.езенке, развивЕкзиеся под влиянием вакцины ц авзмо-каги-евых квасцов, отражают общую иммунную перестройку организма утят и кррелкруют с усилением фагоцитарной активности пезвдо-эозинофялов, увеличением в крови количества иммуноглобулинов А, 6, М и антител, благодаря чему формируется против сальмонеллеза иммунитет высокой напряженности.

4. Пероральная иммунизация сухой шизой вакциной против сальмонеллеза водоплавающих птиц, растЕореняоз"! в 102-ном растворе алюмо-калиевых квасцоз, обеспечивает формирование в организме утят иммунитета более высокой напряженности по сравнению с введением одной вакцины.

5. У тимэктомированных в раннем возрасте утят формируется иммунитет недостаточной напряженности, что обуславливает 100%-ную смертельность птица, экспериментально зараженной возбудителем сальмонеллеза.

G. Экономическая эффективность при кспояьсовашш в производственном огг'те предложенного нами способа пероральной вакцинации утят сухой живой вакциной против сальионеллеза водоплавающих птиц,растворенной в lOZ-ном растворе аяшо-калиевых квасцов, выше, чем при иммунизации одной вакциной.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРВДЛШЕИИЯ

В птицеводческих хозяйствах и птицефабриках, неблагополучных по сальмонеллезу, для специфической профилактики данного заболевания у утят и повышения напряженности иммунитета рекомендуем разбавлять сухую живую вакцину против сальюнел-леза водоплавающих птиц 10%-ным раствором аламо-калиевых гшасцов. Выпаиг .ть вакцину следует согласно наставлении по ее применению.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ Ш ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. гаков U.C., Прудников B.C., Горбунов A.A. Влияние имг муностимуляторов на кммуноморфогенез у утят, пзроралыга вакцинированных против сальмонеллеза // Вопросы теории и практики в ветеринарии и аоотехнии: Сб. науч. тр. Витебского вет-шгституга.- Витебск, 1S92.-T.29.-C.25-26.

2. Еаков Ы.С., Горбунов A.A.-Влияние ал^мо-калиевых квасцов на ишуношрфогенез у утят, перорально вакцинированных против сальыоиеллеза // Диагностика, патогенез, патоморфоло-гия и профилактика болезней с.-х.кнв. : Материалы Всерос-сийск.науч.-метод.конф. по патанатомии с.-х. ¡вш.- Вороне», 1993.- С.80.

3. Горбунов A.A. Применение алюмо-калиевых квасцов для стимуляции иымуномг-фэгенева у утят, вакцинированных • против сальионеллеза // Инф. лист.- Витебск: ЦНГИ, 1993.- N20-93.-4 о.

4. Каков М.С., Горбунов A.A. Влияние иммуностимуляторов на иымуноморфогенез у утят, перорально вакцинированных протг -сальмонеллеаа // Ученые записки Витебского ордена "Знак почета" ветеринарного института имени Октябрьской революции.- Ви-

тебск, .1993.- Т.80.- С.69-72.

б. Еакоз U.C., Горбунов A.A. Влияние агшо-казшешх квао-цов на иммуЕоыорфсгекез у утя* // Технология получения и ш-радаванка здорового шлодйяка овгьаюу чзяАственшд гзпзотаи н ръйопосадочного натернаяа: Тез. дока. Ресз. науч.- приет. койй,- LSiHCît, 1223,- С. 134.

6. Еадав М.С., Горбунов A.A. ïûsiуксисрфогекоэ у утзг, па-рср&зго гадащхпсжши протез саялгоаеллоаа и вдкякяа па нэго гаасцрэ // Мгтэряаш Ргспубд. sayn.-гт,-.?.эт. г»зф. : '»жгозедсму а вэтеркшрпса игдяцши.-. Ей-, тебе:«, 1G94.-C.67.

7. йакса U.C., Ьрудикмсо В.О., Гсрбупов A.A. Стпуудяц:!я ге^'пеморфогепеза у жагопшх язрерая&по ЕгщцстроаэнЕа против сальмонэлдэвг» // HpcOxctst ггдэлгрезйэз Г0?а~0пкэс5ся. процессов у чэлозека я яшзотдм шс д^тнестиа п гягррищвя.-УлзяунЬрсяный екмпевиуа.- С.-Петербург. îCOd.- с..¿5.

РЕЗЮМЕ

Горбунов Александр Андреевич

Иммуноморфогенез у утят,пероральио вакцинированных против сальмонеллеза, и влияние на него алюмо-калиевых квасцов.

Ключевые слова: иммуноморфогенез, алюмо-калиевыа кваоцц, сальмонеллез, вакцина, плазматические клетки, а:титела, лимфоциты, микро- и макрофаги, иммуностимуляторы, утята, перо-ральнал иммунизация.

Объектом исследования были утята от одного- и до двадца-твдневного возраста, интактныэ и вакцинированные против сальмонеллеза, боз применения и о применением 10%-кого раствора алюмо-калиевых квасцов, тшэктоьшрсЕа:тые и экспергаея-тально зараженные сальмоноллесом.

Нами поставлены опыты для изучения ишунокорфогенега у утят, пероральио вакцшшрозаккы.; сухой гашой вакциной против сальмонеллеза водоплавасгда птиц, растворенной в 10%-нем рдотЕоре аиомо-калиэвых квасцов. Пооледние использовались в качестве аааг/ностшулятора. Реализация поставленной цели осуществлялась пу?ем ишуноморфологических исследований органов иммунной системы 104 иммунных утят с помогаю светового и электронного микроскопов и специальных методик окраски клеток и тканей. При проведении производственного опыта по оценке экономической значимости вакцинации утят против сальмонеллеза с применением 10%-ного раствора алюмо-калиевых квасцов было использовано 5700 голов птиц .

Научная новизна исследований заключается в том, что нами впервые изучено влияние алюмо-калиевых квасцов на иммуноморфогенез у утят, пероральио вакцинированных против сальмонеллеза, и показана высокая эффективность данного препарата как ■иммуностм 'лятора.

Полученные результаты исследований используются в учебном процессе, а также в научных исследованиях при изучении иммуноморфогенеэа у птиц. Алюмо-калиевые квасцы можно применять в птицеводстве для стимиуляции и коррекции иммунных реакций у утят при вакцинации их против сальмонеллеза.

рэешэ

Гарбуноу Алякоандр Дндрзев1ч

1мунашрфагенез у кзчалят пераральиа вакцынавспых супраць садмкшвлазу 1 уплну на яго алша-кал1явых квасцоу

Клавдии оловн: шупашрфагенеэ,- ш~я-'а-кгшшгт гааоцы, сшаыэнэгеэ, вищшге, плагилтычпая гадок!, «щ1цэлы, л!и-5аш-ты, м1кра- 1 макра^аг!, 1иупасткмулятары, качаняты, яоргр^ль-ная 1мун1вгцуя.

Аб о:;тсМ дзоледазання бт! ки шлята ад адпаго 1 да дсац-цац1дзенкага у сросту, 1нта:стннл 1 вакцакаваяш супраць саль-мзкелозу, без прынянония 1 а прыкякэкнеу 10%-нага раствору алжа-яад1пгнх кэзсцоу, фмггоэараЕапкя 1 зкспэримантальпз зарагашя садьиапедбзвм.

НсМ1 зроблены дсоледы для вывучзнкя 1нукам2рфагенеза у качаддт, пс-р?ральнз вавдкаазаянх оухой' зшеой вешр-гкзй оуяргя?» саламанелеза ведаляаукых птушвк, рэотвсраяай у 10%-нем раст-' веры алгма-кал1яЕых квасцоу, апозк1я вктсярыстоувызазпся у якасц1 1нунаотымулятарз. Рэйл1эация пгятаулепай ьеэты ажыццяу-лядзея пляхам 1мукампрфалаг1чЕ2я даолелавазкяу органзу пмун-ная "Лоъэт 104 5 лунки качанят з дапЕЖ^зй еззтазега 1 элегарониага м!крас1х:аау 1 специгшсвс афарбаукх кле-

так 1 ткааак. При празядзэнн! гсхзогвдга дсоледу па ацэшш экзнач1чнай эначнасц! вакцанада! качаяя1? суЩШ5> сальмзкелегз з убыванием 10%-нага раствору яшма-ica.ilявах квасцоу было ец-карысгавана 5700 галоу птувак.

Навуковая навязка даследаваннау закгсчаецда у тш, пто нам! упершыкю вывучаны уплыу алн;ма-кал 1 яек квасцоу на 1иупа-марфатенез у кзчанпт, пераральна вакцьгаазаных супраць сальма-нелезу 1 паказана высокая зфектыунасць гзтага прзпарату як 1мунастшулятара.

Атрымэдыя вын1к1 даслэдаваняя выкарыстаувываэдца у иаву-чальным працэое, а таксама у навуксдаых даследзваннях пры вы-вучзнн1 1мунамарфагенеза у птушак. Алюма-кал1ЯЕьи квасцы мож-на ужываць у птушкагадоул1 для стымуляцш 1 карэкцьа ¿муяных рэакцый у качанят пры вакцынацы1 гх супраць сальманелезу.

SUMMARY

Gorbunov Alexsndr Andreevioh

immunomorphogenesi s in Ducklings Orally Vacoinated Against Salmons11osis and the Influence of Aluminium-potassium Sulfate on it.

Key words: immunomorphogenesis, aluminium-potaa,c turn sulfate, vacoine plasmatic calls, antibodies, lymphocytes, micro-macrophages, irnmunostimulant, ducklings, oral immunisation.

The subject of investigation were 1-20 days old ducklings, intact and vacoinated against salmonellosis with and without application of aluminium-potassium sulfate 10% solution, tiroualess and experimentally infected by salmonellosis.

The experiments were carried out to study immunogenesis in ducklings orally vacoinated try dry live vaccine against water fowl salmonellosis, diluted in 10% solution of aluminium-potassium sulfate. The latter being used as immunostimu-lant. To reach the. aim the immuno-morphological investigations of irarame system organs in 104 immune ducklings with the help of light and electronic microscopes .and special dying technics for cells and tissues were undertaken.

Jn industrial experiments, for economic evaluation of duckling vaccination against salmonellosis with the application of tQ% solution of aluminium-potassium sulfate 5700 birds were used.

Scientific innovation of our investigation is that for the first time the influence of aluminium-potassium sulfate on immunœnorphoger'^sis in ducklings orally vaccinated against salmonellosis in fowls has been studied and high efficiency of this preparation iranunostimulant has been shown.

The obtained results are used for academic purposes as well as in scientific researches investigating immunomorpbo-genesis in poultry. Aluminium-potassium sulfate may be used in poultrybreeding for stimulation and correction of immune reactions in ducklings being vacoinated against salmonellosis.