Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Иммунологическая оценка эффективности противобруцеллезных вакцин

Г6 о

КАЗАНСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ имени Н.Э.БАУМАНА

! 8 MAP 139'»

На правах рукописи

ЛУКУЛЛ ИНА НА ЮМ АХНЕТОВНА

ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВОЕРУЦЕЛЛЕЗНЫХ ВАКЦШ

16.00.02- патология,онхология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Казань I9S4

Работа выполнена в лабораториях спецштаммов,бактерийных инфекций и патоиорфологнй Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института ( г. Казань)

Научные руководитбли:доктор ветеринарных наук,профессор Д.Ш.Еарипов

кандидат ветеринарных наук,старший научный сотрудник Б.А.Кириин

Официальные оппоненты : доктор ветеринарных наук,

профессор М.С.Ежхова

доктор ветеринарных наук Д..М.Алимов

Ведуцва учреждение; Саратовский зооветеринарный институт

Защита состоится " 1994 года в _ часов

на заседании специализированного 'совета Д-120.22.01 при Казанском ордена Ленина ветеринарном институте имени Н.Э.Баумана ( 420074, Казань , ветеринарный институт ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского ордена Ленина ветеринарного института имени Н.Э.Баумана.

Автореферат рааовлан " " 1994 года

Учения секретарь спвцнализированнаго совета , доцент В.Е.Чеботарев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Увеличение производства продуктов животноводства и рост поголовья скота неразрывно связаны с наличием животных, свободных от хронических инфекционных заболеваний,в том числе от бруцеллеза.

Несмотря на значительные успехи.достигнутые в профилактике и ликвидации бруцеллеза.эта инфекция продолжает представлять серьезную угрозу для животноводства.

В этой связи проблема изыскания высокоэффективних средств защити и рациональных способов их применения в борьбе о бруцеллезом является весьма актуальной.

В последнее время при оценке иммуногенных достоинств и реакто-генности вакцинных препаратов значительно возросла роль патоморфо-логических исследований органов и тканей вакцинированных животных. Свидетельством тому являются работы,посвященные изучение иммуномор-фологических изменений в органах при антигенной стииуляции (Г.3.Ид-рисов, 1964-1976; Г.З.Идрисов,К.М.Салмаков,1975; Н.И.Архипов и др., 1973.1980 ; С.И.Тухачинский,Ю.В.Тяготин,197б ; М.СДаков и др.,1977, 1960 ; А.И.Струков,1981; Л.И.Кундрвкова, 1982,1984 ; Л.А.Муковозова и др., 1983; Э.И.Алиев, 1986; Ф.И.Ибадуллаев и др.,1990; О.Т.Мулла-каев,1991 \<?.£.Ме№>г .1977

В настоящее время для специфической профилактихи бруцеллеза животных широко применяют вакцины из штаммов 19 и 82.Известно,что согласно существующему наставлении указанными вакцинами допускается прививать телят не ранее 4-5-иесячного возраста.По этой причина в животноводческих хозяйствах,где проводят профилактические прививки против бруцеллеза,остается не защищенным от указанной инфекции 2530$ животных.Не решен также вопрос о средствах специфической профилактики у самцов-производителей,так как живые бруцеллезные вакцина вызывают у них орхит.эпидидимит.Кроме того,вакцины из штаммов 82 и 19 обладают определенными сенсибилизирующими свойствами,которые наиболее сильно проявляются при повторных их применениях (П.Ф.Здродбв-:хий,1963; И.Д.Беклемишав,1968 ; К.В.Бунин,К.Г.Гапочко,1970; П.А.Вер-аилов» и др.,1974 ; А.А.Новицкий,1989;М.Х.Дутфуллин, 1992).

Во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте Б.А.Киршиным и др.разработана убитая вакцина из штамма ВНИВИ-Зб.Реэультаты исследований,проведенных на морских свинках и овцах, юказали.что препарат обладает доотеточной иммуногенностьв.Однако ммуноморфологическая оценха безвредности и эффективности вакцины »з штамма ВНИВИ-86 не проведена.

Как следует из вшеиз лаженного.изыскекие новых,менее реакто-генных вакцинных препаратов и наиболее рациональных схем реиммунизации является актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования. Цель исследования- дать иммуномор-фологическуп оценку безвредности,эффективности вакцины против бру-'целдеза из птамма ВНИВИ-8б,а также выяснить зависимость иммунологических изменений-и напряженности иммунитета у животных от способов реимиунизации протнвобруцеллезной вакциной из штамма 82.

¿ля реализации данной цели перед нами были поставлены следующие задачи:

1)изучить динамику и характер иммуноморфологических изменений в органах морских свинок.иммунизированных убитой вакциной против бруцеллеза из штамма ВНИВИ-86;

2)провести сравнительное иммуноморфосогичеокое изучение органов и количества Т- и В-диыфоцитов в крови у телок при подкожном

и внутрикожном способах их реиммунизации противобруцеллезной вакциной из втамма 82 ;

3)выяснить степень выраженности морфологических изменений в органах и тканях телок,зараженных вирулентной культурой бруцелл спустя 7 месяцев после реиммунизации вакциной из втамма 82 разными методами ;

4)провести иммуноморфологическуо оценку специфичности аллергической пробы у животных,иммунизированных противобруцеллезными вакцинами.

На защиту выносятся:

I.Экспериментальная щютивобруцеллезная вакцина из втамма ВНИВИ-86 является достаточно иммуногенным и умеренно реактогеншм ' прививочным препаратом.

2.Внутрккокний способ реиммунизации противобруцеллезной вакциной из штамма 62 по сравнении с подкожным создает у телок более сильно выраженные иммуноморфологические и менеее выраженные аллергические изменения в органах. /

3.Новый метод диагностики бруцеллеза,основанный на иопользо-ввнии аллергической пробы через 3 дня после иммунизации живыми противобруцеллезными вакцинами.

Научная новизна. Впервые установлены уровень иммуиогеиннх качеств и повреждающего действия вакцины из итамма бруцелл ВНИВИ-86, а также зависимость иммуноморфологических изменений органов и напряженности иммунитета у животных от способа реиммунизации протнвобруцеллезной вакциной из итамма 82.

Теоретическая и практическая ценность работы.Результаты проведенных исследований дапт основание заключить ,что вакцина из штамма ВНИВИ-86 обладает достаточными иммуногенными свойствами,вызывает выраженную иммуноморфологическуп перестройку организма иммунизированных животных,прячем вакцинный процесс проходит бзз каких-либо ослокноний.Следовательно, новая вакцина может использоваться для,-специфической профилактики бруцеллеза животных.Ревакцинация крупного рогатого скота против бруцеллеза вакциной из итамма 82 внутрикож-кым методом вызывает менее глубокие аллергические изменения,более эффективна,чем повторное введение этой вакцины подкожным методом.

Внедрение результатов исследований. Полученные данные вошли в:

1.Рекомендации по усовершенствованию ревакцинации крупного рогатого скота противобруцеллезной вакциной из итамма 82 (Утв.директором ВНУШИ C6.06.I99I г.).

2.Методические рекомендации "Усовершенствование методики-определения количества Т- и В-лимфоцитов в крови крупного рогатого ско-;а ( Утв.ГУВ Минсельхозпрода СССР 22 августа 1991 г.).

Результаты проведенных исследований,сформулированные в диссер-

•ации,внедрены в учебный процесс на кафедре пзтологической анатомии

в

ьазанского ветеринарного института,а также используюсл нэучно-иссле-юватольских работах ВНИЗЙ.

Апробация работ». Основные результаты исследований долохени :а республиканских научно-производственных конференциях при Казанком ордена Ленина ветеринарном институте имени Н.Э.Баумана (1990992 гг.),Всесоюзной научно-технической конференции "Современные ;роблемы иммунологии,биотехнологии, генной и клеточной шшзкерии в етеринарной медицине"(Москва,1990),Всероссийской нэучно-методичео-ой конференции "Диагностика,патогенез,патоморфолегия и профилакти-а болезней сельскохозяйственных животных"(Воронеж,1993 ),производ-твенном совещании сотрудников лаборатории отдела особо опасных ин-екций ВНИВИ (Казань, 199** ).

Публикация.По материалам диссертации опубликованы 12 научных рудов.в том числе 3 отчета,5 научных статей,2 рекомендации,I поло-ительное репение на выдачу патента и I удостоверение на рационали-аторское предложение.

О¿ген и структура диосортации.Диссертацня состоит из введения, вух глав обзора литературы,7 глав собственных исследования,выводов, редложений,списка использованной литературы (всего 368 источников, том чьело 78 иностранных) и приложений.Рзбота изложена на 190 стра-* щах машинописного текста и ir-чет 18 таблиц,^8 рисунков.В приложе-

нии представлено 4 документа.подтверждавших результаты отдельных этапов работы,их научнув и практическую ценность.

СОБСТВЕННЫЕ, ИССЩОВАНИЯ Мзтериалы и методы

Работу выполняли-в соответствии с Государственным планом научных исследований (номера Госрегистрации GI920008I73 и 02590044362) а 1986-1993 годах в лабораториях спецштаммов,бактерийных инфекций и патоморфодогкн Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института(г.Каз8нь),а такле в хозяйствах Республики Татарстан и Калмыцкой ССР).

Изучение иммунсгекных свойств и безвредности экспериментальной убитой противооруцеллезной вакцины из штамма ВНИВй-86 в сравнении с кивей вакциной против бруцеллеза из штамма 19 проводили морфологическими, лвминесцентными, серо логлческими(РА.РСК) и бактериологическими методами.В опытах использовали 235 морских свинок.Бактериологические исследования проводили совместно с ведущим и старшим научными сотрудниками В.Р.Матросовой и В.В.Маринковой.

Напряженность иммунитета определяли контрольным заражением вирулентным штаммом&t.a$oziui 54-М спустя 7,15,30,90 дней после прививки разними дозами (2,5 ¿10 ; 25 и 250 инфицирующих доз(ИД).Через 30 суток после заражения морских свинок убивали и из органов (10 объектов) проводили бактериологические-посевы на питательные средц(пе~ ченочно-пептонный глюкозо-глицериновый бульон и агар).После инкубировали в термостате при температуре 37-38° в течение 30 суток. Учет роста бактерий проводили на 6-10,15-20 и 30 дни после посева..

Вчделенние культуры от животных,иммунизированных противобруцел-лезными вакцинами,дифференцировали с помощью гипериммунной бруцеллезной S -сыворотки,а также по чувствительности к пенициллину.

Морфологическим исследованиям подвергали органы 61 морской свинки,в том числе:

а)21 морской свинки,иммунизированных вакциной из штамма ВНИВИ-86 в дозе 10 млрд.м.к. и убитых через 3,7,10,14,28,45 и 60 дней после вакцинации по 3 головы на каждый срок;

б)9 морских свинок,зараженных вирулентной культурой бруцелл в дозе 10 м.к. спустя 15 дней после иммунизации вакциной из штамма бруцелл ВНИВИ-86 и убитых через 30 дней;

в)6 морских свинок,зараженных вирулентной культурой бруцелл в дозе 10 м.к. без предварительной вакцинации;

г)6 морских свинок,зараженных вирулентной культурой бруцелл в

дозе 100 м.к. спустя 3 месяца после иммунизации вакциной из штамму бруцелл ВНИВИ-86 и убитых через 30 дней ;

д)10 морских свинок,зараженных вирулентной культурой бруцелл в дозе 100 м.к. спустя 3 месяца после иммунизации вакциной из штаь-ма бруцелл 19 и убитых через 30 дней ;

е)3 морских свинки,зараженных вирулентной культурой бруцелл в дозе 100 м.к. без предварительной вакцинации;

ж) б интактних морских свинок.

В опытах по изучении эффективности и безвредности противобру-целлезной вакцины из штамма 82 при различных способах ревакцинации использовали 36 телок,разделенных на следующие группы:

1)^ телки,реиммунизировашше вакциной из штамма 82 подкожно через 7,5 месяцев после первичного введения препарата согласно наставления по ее применению и убитых через 1,5 месяцов после ревакцинации;

2)'» телки,реиммунизированные вакциной из штамма 82 внутрикоетю через 7,5 месяцев после первичного введения препарата согласно наставления по ее применению и убг/гих через 1,5 месяца после ревакцинации ;

3)'( телки,ревакцинированние подкожно через 7,5 месяцев после первичной иммунизации и зараженных культурой вирулентного птамка &.ез1о1£сч через 7 месяцев после ревакцинации вакциной из штамма 82 ; '

телки,ревакцинированние внутрикожио через 7,5 месяцев после первичной иммунизации и зараженные через 7 месяцев после ревакцинации вакциной из птамма 82 ;

5)8 толок, иммунизировзнних вакцинами из штамма 82 и 19 (по Ц головы на каждую вакцину), нереагирующие аллергически на 3-й день после прививки ;

6)8 телок, иммунизированных огкии же вахцинамиСпо >> головы) у которых кожная аллергическая реакция на 3-й день была положительная ;

7)4 животных, зараженных вирулентной культурой бруцелл 5'* без предварительной иммунизации.

Доза вакцини при иммунизации и ревакцинации составила 70-100 млрд.м.к.,а доза заражения 160 млн.м.к.Культуру наносили на конъюнктиву по 0,1 мл в каждый глаз.Убой животных проводили на санитарной бойне Казанского мясокомбината,в совхозе "Балковский"Целинно-го района Калмыцкой ССР,а также в колхозе имени Шаймарданова Акта-ныаского района Республики Татарстан.

проведения иммуноморфологических исследований кусочки лимфатических узлов,;гимуса,селезенки,легких,печени,почек и миокарда

фиксировали в 10^-ном растворе нейтрального формалина,в жидкости Карнуа и спирт-формоле 9:1.Уплотнение материала проводили путей заливки в парафин,целоидин-парафин По общепринятой методике(М.И.Меркулов Д969).Для гистохимических исследований использовали свежезамороженные криостатные срезы.Гистосрезы окраиивали геметоксилин-оози-ном,по вак-Гизону,по Романовскому-Гимзе.Содержанке РНК определяли по Браше,глихоген-по Еабадащу.Кислые мукополисахариды выявляли окраской толуидиковим снним.Дифференциацив Т- и В лимфоцитов в гисто-срезах проводили путем определения активности -нафтилзстеразы по П.В.Пигаревскому,Г,Я.Зельцеру(1982) и активности щелочной фосфатаэц -азо^сочетанием (£. ^Ь-^<5-е,19бг).Для выявления бруцелл в лимфоидных органах и тканях гистосрезы окрашивали по модифицированному методу Циль-Нильсена ) и по Козловскому.

Антителообразующие клетки,бруцеллезный антиген и иммунные комплексы антиген-антитело в лимфоидных органах и тканях выявляли прямым и непрямым иммунофлусресцентными методами Кунса.Подсчет янтите-лообразувщих плазматических клеток в срезах лимфоузлов и селезенхи проводили в пересчете на 5 тысяч клеток препарата.Идентификации ан-тителообррзуюцих плазмоцитов осуществляли путем подсчета 100 светящихся клеток в каждом препарате.

Для подтверждения специфичности иммунофлуоресцентной реакции ставили соответствуют^ контроли.

Т-лккфоцити определяли методой спонтанного розеткообрззования с эритроцитами барана по2#^&а*г^Д(1972),В-лимфоцитц-реакциеЯ комплементарного розеткообразования с эритроцитами барана по Е.Ф.Чер-нуиенко, Л.С.Когосовой (1981).

Лейкоцитарнув взвесь для определения Т- и В-лимфоцитов получали согласно разработанной нами методической рекомендации "Усовер-иенствование методики определения количества Т- и В-лимфоцитов в крови крупного рогатого скота " С I9SI ).

В процессе отработки методики получения лейкоцитарной взвеси использовали кровь,полученную от 12 телок 18-19-месячного возраста, 4 из которых 7 месяцев назад били реиммунизированы вакциной из игвина 82 (1-ая группа), 4-заракены культурой вирулентного штамма 54 (2-ая группа), а 4-здоровые телки (3-я группа).

Аутоантителообразупкие клетки определяли методом Йерне в модификации Н.Н.Клемпарской (1972 ).

При разработке способа повышения достоверности результатов исследований по идентификации Т- и В-лимфоцитов использовали 65 голов крупного рогатого скота,привитых противобруцеллезными вакцинами.

Статистическую обработку цифровых данных проводили на программируемом микрокалькуляторе МК-56 с использованном методических рекомендаций ВАСХНИЛ (Р.Х.Тукгаитов 1988 ).

ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ УБИТОЙ ВАКЦИНУ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА КЗ ШТАММА ВНЙЭИ- 86

Морфологические изменения органов я тканей морских свинок.иммунизированных убитой вакциной против бруцеллеза из штамма ВНИВИ -86

В органах и тканях подопытных морских сеянок,иммунизированных убитой вакциной против бруцеллеза из штамма ВН'ЛВИ-35, наиболее хорошо вырахешше иммуноморфологическио к патогистологические изменения развивались на месте введения вакцины,а таккз в регионарных к месту введения препарата правых паховых лимфоузлах и селезенке.

Спустя 3 дня после иммунизации в тканях на насте зэсдекня гзк-цшш развился серозно-воспалительнкГ; отек рыхлой клетчатки с очаговым скопление» густо расположенных нейтрофклов,лимфоцитов :: гистиоцитов с высокой активностью - нафтилэсгеразы.Хоросо зыракешшо иммуноморфологические изменения обнаруживались через 7 суток после введения вакцина,которые к Ш-му див становились еще сильнее.В згот период в регионарном к месту введения антигена правом паховом лимфоузле и селезенке отмечались раскирение герминативных центров фолликулов,умеренная гиперплазия иякотных тякей лимфоузлов и ликвидной ткани периартеркалышх влагалищ селеаенки.В регионарном лимфоузле наряду с фолликулами с расииренными герминативными центрами встречались вновь формирующиеся вторичные фолликулы.Г.о».хапсулярныо синусы были сдавлены гиперплазированноЯ лимфоидноЯ тканья.Промежуточные и мозговые синусы лимфоузла,а также синуса селезенки бил;! расширены,содержали малые и средние лимфоциты,макрофаги и клетки плазмоцитарного ряда.Последние,кроме' того,обнаружу,вались л вдоль трабекул.Стенка мелких кровеносных сосудов бала в состоянии муко-ндного набухания.Красная пульпа селезенки уверенно депонировалась кровьи.Активность с*. -нафтилостеразы и щелочной фосфатазы как в регионарном лимфоузле,так и селезенке оставалась зисской.

Менее выраженные димфоидно-гиперпластическая.макрофзгальная и ляазмоклеточнзя реакции нзблрдзлись также в хоктррегконарких и отдаленных лимфоузлах»

В тимуое отмечались умеранная гиперплазия лимфовдкой тка».'/., а также слущиванио и распад эпителия; в отдельных тельцах Гассзля.

Изменения со стороны печени,почек,миокарда и надпочечников

характеризовались умеренным полнокровием сосудов,зернистой.дистрофией паренхиматозных элементов и очаговой пролиферацией лимфоидно-гистиоцитарных клеток.Б легких отмечалось лишь утолщение альвеолярных перегородок за счет пролиферации лимфоидных клеток.В периваску-лярной и перкбронхиальной ткани легких наблюдалось компактное скопление лимфоидной ткани,местами с образованием лимфоидных фолликулов.

На 23-е сутки после иммунизации лимфоидно-гиперпластическая и плазмоклеточная реакции:в лимфоузлах и селезенке подопытных животных были сходны с таковыми,отмеченными на 14-е сутки опыта.Разница заключалась в том,что среди клеточных элементов мякотных тяжей лим-фоузлов.в красной пульпе селезенки преобладающими были плазматические клетки.Основную массу последних составляли зрелые формы,.

Через 45 суток после введения вакцины из штамма бруцелл ВНИВИ-86 икмуиоморфодогические процессы в лимфоузлах и селезенке заметно з.ат/хали.К 60-му дни после иммунизации они приходили к морфофункци-ональному равновесно.

Контрольное заражение морских свинок вирулентной культурой бруцелл, проведенное через 15 дней и 3 месяца после иммунизации вакциной из штамма ВККВИ-86,привело к резкому усилению лимфоидно-гиперпласти-ческой,макрофагальной и гошзмоклеточкой реакций в органах.Резкое усиление названных реакций обнаруживалось также и в органах мор .ух свинок, подвергавзихся контрольному заражении после иммунизации вакциной из штамма 19.Однако у последних,в отличие от первых,в регионарном лимфоузле и селезенке определялись специфические эпителиовдно-кле-точные гранулеги.которие выделялись от окружающей ткани более бледным окрашиванием клеточных элементов.Местами эти гранулема подвергались фибротизации.При иммуиоф.-уоресцентном исследовании в цнтс- • плазме отдельных эпителиоидних клеток обнаруживалось свечение бруцеллезного антигена.

Лимфоидно-гиперпластическая и макрофагальная реакции в регионарном лимфоузле и селезенке у контрольных животных,зараженных вирулентной культурой бруцелл без предварительной вакцинации,проявлялись сильнее.Кроме того,в лимфоузлах и селезенке этих животных встречалось множество эпитеяиоидно-клеточкых гранулем с гигантскими клетками.При окрашивании по модифицированному методу Циль-Няльсона и по Козловскому в цитоплазме эпителиоидных клеток обнаруживались бруцед-лы.а при иммунофлуоресцентных исследованиях отмечалось специфическое свечение бруцелл.Вокруг эпктемоидно-клеточных гранулем отмечалось скопление лимфоцитов с повышенной активность» -нафтидэсте-разы.Местами встречались гранулемы,подвергающиеся некрозу.Последние

встречались в печени большинства животных.

Следовательно,убитая вакцина против бруцеллеза из штамма ВНЯЭИ-86 при иммунизации вызывает выраженные иммуноморфологичоские изменения в лимфоузлах,селезенке.а также паренхиматозных органах и создает напряженный иммунитет против экспериментального заражения вирулентной культурой бруцелл.

Динамика уровня содержания имкунокомпетентных клеток в крови и органах вакцинированных против бруцеллеза морских свинок

В результате проведенных исследований установили,что в крови интактных морских свинок Т-лимфоцити составляли 28,3£2,09,«,В-лимфоциты 18,'»-1,05$.У морских свинок, иммунизированных вакциной из штамма ВНИВИ-86, спустя 3 дня после вакцинации отмечали укеньиение, содержания Т-лимфоцитов (14,2-1,21$).Через 7 дней в процессе иммунного ответа относительное количество этих клеток повысилось до 35,8-1,75$ (Р<0,05) и оставалось на этом уровне в течение 21 дня. На 28,'45 и 60-е сутки число Т-лимфоцитов было примерно на уровне показателей у интактных животных.

Иммунизация вызвала тахже изменение количества В-лимфоцитоз в крови.В течение 3-45 суток установили достоверное повышение-этого показателя,пик которого отмечался кз 14 сутки опыта(27,б-1,84£). Затем происходило постепенное снижение числа этих клеток с нормализацией их содержания на 60-е сутки после иммунизации. 1

Таким образом,в первые дни иммунного ответа у морских свинок после введения убитой вакцины развивалось угнетение Т-с.'стсми иммунитета с последующей стимуляцией её на 7-28 сутки.В-сиотема активизировалась в течение 3-45 дней.

Спустя 3 суток после иммунизации количество антитслообрззуп-цих клеток в регионарном лимфоузле и селезенке повысилось к составило соответственно 79,3^4,34 и 69,2*5,39 (против 30,0*2,12 и 13,7 £1,6 в контроле),пик которого наблюдался спустя .10 дней после вве-цения вакцина и составил в лимфоузле 1'»3,2^2,13,п">солззенке-125,б -2,94.Через I') дней отмечалось снижение количества плазкоцитов.Од-¡шео и к концу срока исследования (60 суток) показатели опытных ^рупп были достоверно вниз,чем у контрольных животных.

Введение, вакцины из итамка ВНИВИ-65 оказало влияние нэ состав плазматических клеток.Установили достоверное увзличс-кке коли-¡ества зрелых плззмоцитов во все срохи исследовании.Максимальное соличество зрелых плвзмоцитов устанавливали на 60 сутхи(21,^0,^1.

против 6,0-0,45 в контроле).В селезенке количество зрелых плазмо-цкгов л 7-му дни опита увеличилось и составило 12,25^0,14% против 7,12^0,53 в контроле (Р<0,05).Но 10 и 14 сутки уровень зрелых плззкоцитов приблизился к уровню интактных морских свинок.В течение 21-60 дней количество этих клеток вновь повысилось.

При выявлении иммунных комплексов антиген-антитело установили,что^ач-'.ная; с 7-го дня после введения вакцины,в регионарном лимфоузле я селезенке в стенке мелких сосудов обнаруживалось свечение иммунных комплексов,интенсивность которых к 14 днв стала еще силь-нее(') креста).В интиме некоторых сосудов происходила пролиферация эндотелия.Иммунофлуоресцеицил иммуноглобулинов в стенке сосудов наб-лвдалась в течение всего срока исследования.Однако к 60 дню интенсивность свечения была слабой,

Исследования показали,что достоверное увеличение уровня бляш-кообразуищих клеток -происходило в крови в течение 3-14 суток,в лимфоузлах к се,пезе1!ке-3-21 суток,в печени-7-21 суток,в почках и дег-ких-7-1А суток после иммунизации.В другие сроки исследования,а именно па 28-60-е сутхи,показатели аутоантктелообразуввдх клеток существенно не обличались от таковых у интактных морских свинок.

Таким образом,вакцина из штамма ВНИВИ-86 способствует повышению уровня содержания Т- м В-лимфоцитов в крови,образованию в лим-Фоидных органах большого количества антителообразусщих кдетог.их созреванию и перехору в более зрелые формы.Уровень аутоантителообразув-цих клеток,которые образуется в результате вакцинации,довольно быстро нормализуется к концу вакцинного процесса.

Серологическая реакция и иммунитет у морских свинок, иммунизированных вакциной против бруцеллезе из штамма ВНИВИ - 8£>

Серологические исследования сывороток крови морских свинок, иммунизированных убитой вакциной против бруцеллеза из штамма ВНИЗИ-66,проведенные спустя 7,15,30,60 и 90 дней после прививки,показали, что агглткниви,выявляемые в РА с единым бруцеллезным антигеном обнаруживается в течение 7-60 суток с максимальным титром Ш80 на 30 день.Спустя 3 месяца после иммунизации животные реагировали отрицательно.

При исследований по РСК получена положительные результаты на 15 день после иммунизации в разведении савороток 1:5-1:10,затем они снюзалисъ и через три месяца после прививки угасали.

Проверка напряженности иммунитета у животных,иммунизированных вакцинами из штаммов ВНЙВЙ-86 и 19,показала,что устойчивость морских свинок обоих групп к бруцеллезной инфекции существенно на отличается друг от друга.Например,в группах, где животные били зара-яены 25-и Ю-кратными дозами вирулентного 54-И,пол-

ный иммунитет составил у иммунизированных штаммом ВНИВИ-86 23$ и ео^.а у привитых втаммом 19-225? и 82% соответственно.Анолагичная закономерность установлена и при других дозах заражения.

Следовательно,вакцина из итамма ВНИВИ-86 обладает достаточно высокой антигенно-иимуногенноЯ активностью.

РЕЗУЛЬТАТУ МОРФОЛОГИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВАКЦИНЫ ИЗ ШТАММА82 ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ РЕВАКЦИНАЦИИ

Патоморфологические изменения в органах и тканях телок,реиммунизировашшх вакциной из штамма 82 виутрикожным и подкожным методами

В результате проведенных исследований нами установлено,что у телоя,ревакцинированних как апутрихожныы.так и подкоаиим способами и убитых через 1,5 месяца после'реиимунизации,развивались принципиально сходные по характеру,но существенно отличающиеся по степени выраженности морфологические изменения.У животных,реиимунизирован-пых внутрикожно,в регионарном лимфоузле определялась выраженная гиперплазия лимфоидной ткани как коркового,так я мозгового слоев. Пакетные внури инфильтрировались большим количеством плазмоцидов. Подкапсулярные синусы на значительном протяжении были сдавлены ги-1ерплззиравзнной лимфоидной тконьо,местами,наоборот,расширены и со-церкалн небольшое количество макрофагов,малых и средних лимфоцитов. 3 промежуточных синусах имели место явления лимфоцитоза.В просгетэ умеренно распнрешшх мозговых синусов обнарукивались большое колн-шетво макрофагов и едшшчнио лимфоциты.Около ворот узла сткечал-:я повышенный распад лимфоцитов.Перивзскулярная ткань трабзкуд би-ю отечна и разволокнена,местами наблвдалась инфильтрация трабе-;уя нононуклеарными клетками.

В отдаленных лимфоузлах гиперпластичеоко-пролиферативныа 1роцесоы,явления лшфэцитолиза и изменение стенки сосудов были вы-тжекы слабее.

Реиммунизация телок виутрикожным способом приводила к разви-■ив в селезенке хорошо виражэнной лкмфоидно-гиперпластической ре-кции.По периферии гиперплазированной ткани периартериалышх гильз

определялись скопления зозинофилов.Венозные синусы,кроме эритроцитов, содержали большое количество мононуклеарных клеток и нейтрофи-' лоа.П» ходу трабекул и вдоль сосудов встречались скопления плазмо-цито».Ретикулярная основа селезенки была огрубевшая.

В печени,почках и миокарде обнаруживали умеренно выраженную зерни^туи дистрофию паренхиматозных элементов и очаговуо пролиферацию лимфоидно-гистиоцитарных клеток,В почках подопытных животных наблюдались пролиферация эндотелия капилляров сосудистых клубочков и скопление небольшого количества белкового субстрата в просвете капсулы Боумена-Шумлянского.В некоторых сосудистых клубочках стенки расвиренных капилляров выступали в виде проволочных петель.В пе-рибронхиальной ткани легких отмечалась гиперплазия лимфоидной тха-ли,местами с образованием крупных фолликулов с хоропо выраженными герминативными центрами.Местами происходило утолщение мсжальсео-■ лярных перегородок за счет инфильтрации их лимфоиднэ-гистиоцитар-ными клетками.

У телок,ревакциннрованных подкожным способом,в регионарных лимфоузлах фолликулы имели небольшие размеры,содержали преимущественно большие и-средние лимфоциты.Обращало на себя внимание разреженное расположение клеточных элементов в фолликулах и паракорти-кальной зоне узла.Между тем мякотпые тяжи были умеренно утолщены и инфильтрирована болыэим количеством плазноцитсв.В корковом веществе узла обнаруживалось значительное число синусов с явлениями лин-фоцитоза,Стенки артериол,венул и капилляров находились в состоянии мукоидного набухания,перивасхулярвая ткань была отенна и разволок-нена.В мозговом слое лимфоузла определялись участки вновь образованной соединительной ткани.

В отдаленных лимфоузлах выявлялись такого же характера изменения,что и в регионарных,но они были выражены слабее.

Гистоморфология селезенки у телок, реиммунизированных подкожным способом,» основном была сходной с таковой у ревакцинкрованных внутрикодно. Однако у первых по сравнению с вторым наблюдалась более сильная степень эозинофилии,кроме того,выявлялись явления мукоидного набухания стенок артериол.венул и капилляров.

Морфологические изменения в печени,почках,ниокарде в виде зернистой дистрофии паренхиматозных клеток и очаговой пролиферации ликфоидно-гистиоцигарных клеток у толок,реиммунизированных подкожно,также выступали сильнее,чем у телок,привитых внутрикокно.Кроме того,у них реактивного и воспалительного характера изменения обнаруживались » большинстве сосудистых клубочков почек.

Изменения надпочечников после введения вакцины были хорошо выражены,В них наблюдалось расширение коркового слоя за счет гиперплазии клеток пучковой зоны,которая содержала значительное число клеток с пенистой цитоплазмой и пикноморфным ядром.Последних было больае у животных,реиммунизированных подкожный методом.

В матке,яичнике и молочной железе всех подопытных телок существенных морфологических изменений не отмечалось.

Таким образом,при гистологическом исследовании органов реиммунизированных телок установлено,что вакцина из штамма 82 вызывает более выраженные лимфоидно-гиперпластические.макрофагальные и плаз-мооеточные реакции в лимфоузлах и селезенке,активацию элементов ре-тикуло-гистиоцитарной системы во внутренних органах при внутрикож-ном введении по сравнению с подкожным.У животных, ревакцинированных подкожным методом,в лимфоузлах и селезенке,кроме того,отмечались явления делимфотизации и фибротизации тканей.

Иммунофлуоресцентное исследование органов и тканей, определение уровня содержания инмунокомпетентних клеток в крови телок,реимиунизированных вакциной из отан-на В2 внутрикожным и подкожным нетодами

Результаты определения количества антителообразусанх клеток показали,что число этих клеток у телок.реиммунизированных внутрикожным методой,во всех исследованных лимфоузлах било больше,чем у животных,ревакцулшрованних подкожно.Так,в правом предлопаточнои лимфоузле телок.ракннунизировашшх внутрикожным способом,число ан~ тителообразуюадх клеток составило 44,5^2,б.При другом способе введения вакцины оно составило 38,С£2,9.В то же время в селезенке ки-ЕОТных.реЕЭКЦинированных внутрикокко.по сравнению с животными,привитыми подкожным способом,выявлялось иеньие количество антитегооб-разуЕЩих клеток ( 33,1^3,8 против 36,2^3,1 ).

Существенные различия,обусяоыешше способами реккмуннзашш телек,были выявлены и при определении состава антатегообразупщих клеток в регионарном лнпфоузле.У кпвстиих.ревакцшшровшшнх подкожным способом,в неи преобладали незрелые плазноцити и плазноблас-ти ( 40,2-3,1 и 26^2,5? против 32,7±2,4 н 2I.7-2.IJg у рзккнуиизи-рогзшшх впутрикошго).Однако количество зрелых плазмоцитов у последних было значительно больше (51,8*1,8$),чем у телок,реиммунизированных подкожно (39,4^2,9$).

Заражение реиммунизированных животных вирулентной культурой способствовало увеличению уровня содержания антителообразусщих плаз-

моцитов как в лимфоузлах,так и селезенке.Количество плазмоцитов во воох исследованных лимфоидных органах телок,реиммунизированных вакциной из штамма 82 подкожным методом,было выое.чем у животных,реиммунизированных внутрикокно.У телок,зараженных вирулентной культурой бруцелл без предварительной иммунизации,по сравнение с телками,зараженными через 7 месяцев после реиммунизации,наблюдалось повышенное содержание плазматических клеток в левом предлопаточном лимфоузле и селезенке.У них этот показатель составил в селезенке 63,0^3,3 , а в лимфоузле - 57,¡>¿0,9 .

Данные,полученные при изучения состава антителообраэуодих клеток телок, зараженных спустя 7 месяцев после реиммунизации, показа ли, что в регионарном лимфоузле зрелых плазмоцитов была больае у телок, реиммунизированных вакциной из штамма 82 внутрикожным методом (50,1 ¿1,55?) по сравнений с таковыми животных,ревакцинировзнных подкожно (36,4-1,8$).В подгруппе телок,зараженных вирулентной культурой Сруцеял без предварительной иммунизации,по сравнению с животными, зараиенными спустя 7 месяцев после реиммунизации,количество плаз-мобластов и незрелых плазмоцитов было значительно выше(33,1^3,5 и 43,5-2,9*),а зрелых плазмоцитов обнаруживалось наименьшее число (30,2 ± 1,7«.

При иммунофлуоресцвнтном исследовании свечение иммунных комплексов обнаруживалось в стенке сосудов лимфоузлов и селезенки,а также в почечных клубочках у большинства животных кап при подкожной,так и при внутрикогной реиммунизации.Однако оно выявлялось значительно чаще и было более интенсивным у телок,реиммунизированных подколным способом.Аналогичную зависимость интенсивности свечения стенки кровеносных.сосудов от способа реиммунизации наблюдали и у подвергнутых контрольному заражение животных.

. При ревакцинации телок вакциной из штамма 31 внутрикоетшм способом отмечалось повыиение количества бляшкообразувщих клеток в периферической хрови на 7 сутки после реиммунизации до 4,78-1,23 % (? < 0,05).Достоверное увеличение уровня этих клеток происходило в течение 30 суток.На 60-й день произошло резкое снижение их до 0,75^0,13^ против 0,5б±0,1б& в контроле и этот показатель оставался на том уровне до 90 суток(срок наблюдения).

У телок.реихмувизированных противойруцелдезкой вакциной подкожным методом,уровень бляшкообразувщих клеток был достоверно высо-кям в течение 7-60 суток,

Данные по определение количества Т- и В-лимфоцитов показали, что спустя 7 дней после реиммунизации телок подкожно,количество Т-

лимфоцитов несколько снизилось.В течение 15-60 суток уровень этих клеток достоверно повивался. ,с максимальным значением 53,0-2,% на 15 сутки.Отмечены также изменения в относительном содержании В-лим-фоцитов.В течение 7-15 дней уровень содержания этих клеток бы* несколько визе такового у неиривитых животных.

В крови телок,реиммунизированных вакциной из штамма 82 внутри-кожным методом,на 15 и 30 сутки наблодалось повышение относительного содержания Г-лимфоцитов.В остальные сроки их количество суяествек-но на изменилось.Уровень содержания В-лимфоцитов на 30 сутки после реиммунизации достоверно снизился (Р < 0,02)^а на 90-е сутки повысился до 45,0-2,3$ (против 25,С±0,82).

Таким образом,у телок,реиммунизированных вакциной из стамма 82 внутрикокным методом,количество зрелых плазмоцитов выявляется больше,чем у животных,реиммунизированных подкожно.В последнем случае эутоантителообраэусцие и Т-клетки сохранятся в крОЕн более длительно,чем при ревакцинации другим методом.

В процессе выполнения настояаей работы нами разработан способ получения лейкоцитарной взвеси при идентификации Т- и В-лимфо-цитов в крови у крупного рогатого скота.

Преимущество нового метода заклвчается в том,что он прост для выполнения,при этом используется легкодоступные и недорогостояпие препараты.Новый способ дает возможность получить из небольпого обь-ема крови достаточное количество лейкоцитарной взвеси,причем при использовании последнего,полученного предлагаемым и известным способами для определения количества Т- и В-лимфоцитов,у животных различных групп не отмечается достоверных различий между способами.

При определении количества Т- и В-лимфоцитов»в крови с последующей статистической обработкой результатов опытов по общепринятым алгоритма!! нами была установлена большая вариабельность полученных значений,что заметно сказывалось на снижении достоверности получаемых данных и,соответственно,на характеристике иммунологической перестройки организма.В сеязи с этим нами бил разработан способ,который дает возможность повысить достоверность результатов исследований.

Гистологическое к гистохимическое изучение напряженности иммунитета,создаваемого вакциной из штамма 82 при внутрикожкой и подкожной ревакцинации

При микроскопическом исследовании телок,ревакцинированных вакциной из штамма 82 внутрикожным методом с интервалом 7,5 месяцев и убитых через 7 месяцев после последнего введения вакцяни.ярко

- 1В -

выраженные иммуноморфологическке изменения наблюдались,в основном, в регионарном правом предлопаточном лимфоузле и селезенке.В них отмечались умеренная гиперплазия лимфоидной ткани коркового слоя при стертости рисунка фолликулярного строения.Вмеото фолликулов сохранились лишь небольшие скопления бластных клеток с разреженным расположением клеточных элементов.Мякотные шнуры были умеренно гипер-лдаэированн в содержали значительное количество зрелых плазмоцитов. Подкапсулярные синусы сдавлена гиперплазированной лимфоидной тканье, местами с распадом лимфоцитов и образованием скоплений хроматина. Промежуточные и мозговые синусы узла и венозные синусы селезенки несколько расширялись,местами содержали синусные макрофаги,единичные лимфоциты и плазмоциты,которые обнаруживались по ходу трабекул. Стенка артериол,вену л и капилляров была с явлениями мукоидного набухания.В мякотных шнурах лимфоузла и красной пульпе селезенки отмечалось значительное количество зрелых плазмоцитов,малых,средних лимфоцитов и нейтрофильных лейкоцитов.

Контррэгионарьных и отдаленных лимфоузлах лимфоидно-гиперплас-тическая.плазмоклеточная и макрофагальная реакции выражались слабее, чем в регионарных лимфоузлах.

В печени,почках,миокарде и надпочечниках обнаруживались пол-нохровие сосудов,зернистая дистрофия паренхиматозных элементов и очаговая пролиферация лимфолдно-гистиоцитарных клеток.В легких отмечались лиль скопления лимфоидных клеток в периброкхиальной и по-риааскулярыой ткани,местами в этих участках было заметно формирование новых герминативных центров .

У телок,реиммунизированных вакциной из штамма 82 подкормим методом,зараженных вирулентной культурой бруцелл через 7 месяцев после ревакцинации и убитых спустя один месяц после заражения, в правом предлопаточном лимфоузле фолликулы имели дрстаточно хороао выраженные герминативные центры,которые содержали значительное количество бластных клеток.Лимфоидная ткань мякотных тяжей была умеренно гипврплазг.роваиа, мякотные инуры содержали значительное количество плазмоцитов разной степени зрелости.Периваскулярная ткань трабекул била отечная,разволокнена,местами инфильтрирована эозино-филаки,лимфоидными клетками и единичными макрофагами.Местами в пе~ рифолликулярной зоне отмечалось разрастание соединительной ткани. Стенка артериол,венул,капилляров была с явлениями мукоиднога набухания.Местами обнаруживались небольшие очаговые скопления эпитоли-оидных клеток.

йммуноморфологическая реакция селезенки характеризовалась

расширением герминатмвных центров фолликулов,представленных в основном бластиыми клетками,фигурами митоза и единичными макрофагами.Лимфоидная ткань периартеркальных гильз была умеренно гилерпла-зирована.Ретикулярная основа органа была огрубевшей,эндотелий пени-циллярных артерий умеренно пролиферировзл.

В контррегионарьнои и отдаленных'лимфоузлах отмечались аналогичные изменения,но по выраженности они уступали регионарным.

В печени,почках и миокарде иммуноиорфологические изиенения у телок,реиммунизированных вакциной из штамма 82 подкожным методой и зараженных через 7 месяцев после повторного введения вакцины, выступали сильнее,чем у телок,ревакцинированкых внутрикожныи методой,в частности,зернистая дистрофия паренхиматозных клеток в них. Очаговые скопления лимфоидно-гистиоцитарных клеток в печени,почках и миокарде нередко имели значительные размеры и встречались часе.Последние отмечались также в перипаскулярной и перибронхиаль-ной ткани,а также в межальвеолярной перегородке легких.

У контрольных телек патоморфологические изменения проявлялись в форме острого или лодострого лимфаденита с образованием гранулем из ретикулярных и эпителиодных клеток.При зтом гравулема-тозные процессы у этих животных,характерные для естественного течения бруцеллеза,отмечались не только в регионарном к месту введения культуры бруцелл.но и отдаленных лимфоузлах.

Таким образом,результаты исследовании свидетельствуют о том,что вакцина из штамма 82 при ее введении внутрикожным и под-кожники методами вызывает Еираженнив иммуноиорфологические изменения з органах и тканях реиммунизированных животных и создает достаточно напряженный иммунитет против экспериментального заражения. Обобпая результаты получвтшх данных,ни счптаем,.что метод внутрикожного введения вакцины является более эффективным,чем подкожный.

¡2!МУИ0М0Р$0Л0ГЯЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СПЕЦИФИЧНОСТИ АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ПРОШ У ЯИВОТЫХ, ИММУНИЗИРОВАННЫХ ПРОТИВОБРИШЛЕЗШЙШ ВАКЦИНАМИ

Нами совместно с сотрудниками лаборатории бактерийных инфекций (К.М.Салкаков,М,Х.Лутфуллин ) был разработан новый способ диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота,сущность которого заклвчаотоя в том,что с цельп повышения эффективности способа,животных предварительно иммунизирует вакцинами из штаммов 82 или 19 и через 3-4 дня проводят аллергическое исследование.Для потвержде-

ния специфичности аллергической пробы с бруцеллином ВИЭВ при новом методе изучали пвтоматериал от телок,иммунизированных вакцинами из атаммсв 82 и 19,нереагирующих аллергически на 3-й день после пр1шивхи(1~ая группа), к телок,иммунизированных этими же вакцинами,у которых в этот срок кожная реакция была положительная (2-ая-группа).Убой подопытных животных проводили через 33 дня после иммунизации.

Патогистологические изменения органов телок первой группы, привитых вакцинами как из штамма 19,так и из штамма 82, были однотипны и наиболее ярко проявлялись в регионарном к месту введения вакцины- правом прсдлопаточном лимфоузле,а также э селезенке и слз-бее-в отделенных лимфоузлах и паренхиматозных органах.В лимфоузлах и селезенке этих животных отмечались расширение герминативных центров фолликулов за счет увеличения числа ретикулярных базофильных и персходиих к леток.а также фигур митоза.Мякотные тяжи лимфоузлов и линфошшая ткань периаргериальных гильз селезенки становились утояаенными,содержали значительное количество блвстов,зрелых я незрелых плазматических клеток с интенсивной пиронинофилией цитоплазмы.Наибольоее количество клегзк плазмоцитарного ряда обнаруживалось в мякотных сшурах.В някотных тяжах,чаще всего в паракортикальноп зоне,отмечалось увеличение числа оозннофилсв.Мозговые синусы лимфоузла и венозные синусы селезенки,расширялись,в них имелось значительное количество синусных макрофагов,лимфоцитов и единичных нейтрофилов.Стенка отдельных артериол.венул и капилляров регионарных лимфоузлов былм утолщены к однородны.В отдельных капиллярах эндотелий умеренно пролиферовал.Периваскулярная ткань,трабекул как в лимфоузлах,так и селезенке была разрыхлена и оточна.Кроме того,в регионарном лимфоузле у одного животного,иммунизированного вакциной из штамма 82 и у одного-вакциной из итамйа 19,развились специфические гранулемы из эпмтедиодных клеток.

Зернистую дистрофии паренхиматозных элементов обнаруживали в печени,почхах и миокарде.В этих органах отмечались полнохровие сосудов и очаговая пролиферация лимфоидно-гистиоцитарных клеток.

Следовательно,иммуноморфологические реакции у животных I-ой группы характеризовались выраженными лимфоидно-гиперпластичес-кой.макрофагольиой и пдазмоклеточной реакциями в лимфоузлах и селезенке,активизацией элементов ретикуло-гистиоцитарной системы в печен*,почках и в легких.При этом в общее картине морфологических сдвигов,обусловленных введением противобруцеллезных вакцин,можно различать специфические,неспецифические и аллергические изменения органов.

Специфические изменения выступали в;виде образования эритвли-надноклеточных гранулем. Неспецифические изменения,характеризова-(ись гиперплазией ликфоидной ткани, макрофагальной и плазмоклеточ-юй реакциями в лимфатических узлах и селезенке,активизацией ме-зенхимных элементов в паренхиматозных органах.

К изменениям аллергического характера мы относили гомогениза-шв стенки мелких сосудов органов,эозинофидип,отложение белкового 1ЙК-положительного вещества в регионарных лимфатических узлах, >тех и разрыхление периваскулярной соединительной ткани,инфильтра-1ив ее малыми и средними лимфоцитами и гистиоцитами.

У телок второй группы, в отличие от первой,дистрофические из-<енения в органах проявлялись сильнее, а зпителиоидно-клеточные гранулемы были более крупных размеров, и клеточные элементы их не-)едко подвергались некробиотическим изменениям.Описанные измене-1ИЯ", видимо, связаны с предварительной сенсибилизацией бруцеллами »тих животных" в естественных условиях. Результаты проведенных ио-¡ледований указывают на специфичность положительных аллергических ¡еакций,развившихся у телок через 3 дня после иммунизации противо-5руцеллезными вакцинами.

В U В О Д Н

1.Убитая экспериментальная вакцина против бруцеллеза из намка ВНИВИ-86 вызывает иммуноморфологическую перестройку организ-ia иммунизированных животных,проявляющуюся лимфоидно-гиперпласти-тской,макрофагальной и плазмокяеточной реакциями в лимфоузлах и ¡елезенке, а также активизацией клеток системы мононуклеарннх фа-'оцитов во внутренних органах.Эти изменения является обратимыми

i затухает спустя 60 дней после вакцинации.

2.Введение вакцины из штамма ВНИВИ-86 вызывает повышение гравня содержание Т- и В-лимфоцитов в периферической крови,макои-¡вльное увеличение количества которых наблвдаегся на 14-й день nocía вакцинации.Нормализация уровня содержания Т-клеток проивходит на :8-е сутки, а В-лимфоцитов на 60-е.

3.Убитая вакцина из втамма ВНИВИ-86 является безвредной,обедает умеренной реактогенностьо и высокой антигенно-кммуногенной игтивностьв.У привитых морских свинок формирутся иммунитет к 7

дав поолв вакцинацки и удерживается в течение 3-х месяцев на уров-ie 70,0-90,9Í из числа иммунизированных.

Количество ангителообраэуюиих клеток в регионарном к квоту введения вакцины лимфатическом узле и селезенке достоверно воврастает в течение 3-60 сутскСсрок наблюдения).Состав антнтелообраэую-нкх клеток при стом изменяется в зависимости от срока после иммунизации.По мере удлинения поствакцинального срока процентное содержание молодых плазмоцитов уменьшается,а зрелых увеличивается и на 60 сутки превышает уровень таковых у интактных животных в 3,5 раза.

5,Побочное действие вакцины из втамма ВНИВИ-86 проявляется по-выаенмем уровня содержания аутоантителообразувщмх клеток в периферической крови и лимфоидных органах,отложением иммунных комплексов внтигеы-антитело в стенках сосудов михроииркуляторноь- русла,которые не выходили за рамки допустимого предела для вакцинных препаратов. Содержание аутоантителообразусимх клеток нормализовалось в крови к 21-суткан,а в лимфоидннх органех-к 28-ому дно после иммунизации.

6.Вакцина из втамма бруцелл 82 при внутрикожной ревакцинации по сравнению с подкожной вызывает более выраженные лимфоидно-гиперплас-тическую.макрофагальную и пяазмоклеточнув реакции и выработку большего количества хлетох,синтезирующих специфические.антитела в лимфоузлах и селезекке.более сил^луо активацию клеток система мононук-леаркых фагоцитов во внутренних органах,меньшую степень выраженности аллергических изменений в них и создает более стойкий иммунитет против экспериментального заражения.

7.Установлено,что как применение внутрикожного способа введения живой проту.вобруцеллезной вакцины из штамма 82,так и использование для иммунизации убитой вакцины из штамма бруцелл ВНИВИ-86 приводят к снижению морфологических изменении аллергического характера в органах животних,создавая в то же время достаточно напряженный иммунитет.

8.У крупного рогатого скоте,отрицательно реагирующего аллергически не 3-й день после иммунизации вакцинами из штаммов 82 и 19, иммуиоморфологические изменения были характерны для вакцинного процесса и сопровождались выраженной лимфоидно-гиперпластическей.иак-рофагальной и плазмоклеточной реакциями в лимфоузлах и селезенке, активизацией клеток системы мононуклеарных фагоцитов в печени.поч-ках и легких.Введение противобруцеллезных вакцин телкам с положительной аллергической реакцией вызывает специфические и сильно проявляющиеся аллергические изменения в органах,характерные для инфекционного процесса.

. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЩОИЕНИЯ I.Результаты проведенных исследований и научные положения.

»формулированные в диссертации,используется при изысхании новых мкцикных препаратов против бруцоллеза в научных лабораториях ВНИВИ [г.Казань), а также при испытании вакцины из штамма бруцелл ВНКВИ-¡6 в экспериментальных и производственных условиях.

2.Для создания более напряженного иммунитета крупный рогвтый ¡кот,ранее привитый противобруцеллезными вакцинами,следует имиуни-шровать виутрикожным методом согласно рекомендации по усовероеы-¡твованио ревакцинации крупного рогатого скота противобруцеллеэ-юй вакциной из итаммв 82,утвержденной директором ВНИВИ 6 ипня 1991г.

3.Определение количества Т-и В-ламфоцнтов в крови крупного ро-■атого скота необходимо проводить согласно методических рекомен-аций "Усовершенствование методики определения количества Т- и В-иифоцитов в крови крупного рогатого скота",утвержденного ГУВ иксельхозпрода ССОР 22 августа 1991 г.

СПИСОК РАБСТ.ОПУБШОВАШШ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Лутфуллиы М.Х.,.1утфуллина Н.А.Иммунологическая перестройка ргакизма животных при различных способах введения живой противо-руцеллеэной вакцины из штамма 82 //Современные проблемы иимуноло-ии,биотехнологии,генной и клеточной инженерии в ветеринарной ме-ицине:Тез. докл.Всесосз.науч.-технич.конф.-М.^1990.-С.198-199.

2.Лутфуллин М.Х.,Алиев Э.И..Лутфуллина Н.А.,Хамзии К.А.Аллер-изация организма и иммукоморфологические изменения в органах и канях крупного рогатого скота.иммунизированного противобруцзллез-ой вакциной из стамиа 82 //Межвузовский сборник научных трудов Разработка эффективных методов диагностики особо опасных инфек-ионных болезней животных ).-Казань,1990.-С.50-53.

3.Лутфулдина Н.А.,Шарипов Д.Ш.Динамика бляшкообразувдих кле-ок в крови*морских свинок,иммунизированных убитой и живой ВЕГКЦИ-)ми//Республиканская научк.-производств.кокф.:Гез.докл.-Казань, 392.-С.З1».

4,Лутфулдина II.А.Содержанке Т- к В-лнмфоцитов в крови моро-свинок после введения вакцины ВНИВИ-86 //Респуолманокая ы»уч-5-производств»ко«ф.:Тез.докл. -Казань,I992.-C.35.

5.1утфулли«а Н.А.,Шарапов Д.О.,Лутфухма М.Х.Иммуыоморфолотам« оценка спвцкфкчнооти амергячеакой проба у животаых.тмму-ммрованных противобруцеллезными вакцинами //Воероооийская науч-)-методичеокая конференция по патологической анатомия сельако-»зяйетвениых животных :Твз.докл.-Воронеж,1993.-С.55.

б.Лутфуллхы М.Х.,Салмаков К.М.,Лутфуллина Н.А.Способ выявле-

ши бактеряокосятедьства при бруцелаеае крупного рогатого скоте Положительное ренмше ВНИИГПЭ и выдачу патента от 12 ноября 1991 г.

7.Лутфуддн« Н,Х..Свлмаксв K.M., Ту квантов Р.Х.,Дутфулдмка H.A. Саосеб по внаем* достоверною! результатов исследования при ндентмфккацим Г- ж В-лянфоцвтов.Удостоверение на рсцнопал»-í авторское предложение, * II от 16 «прей 1991 г.

Заказ !е 64. Подписано в печать 01.03.94, Формат 60 х 84- /16 Букага писчая. Печать офсетная. I п.л. Тиран 100 экз. Участок офсетной печати КВЙ. Казань-420074. Ветинститут.