Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ГЛОБУЛИНОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ И ЛАКТОГЛОБУЛИНОВ МОЛОЗИВА ПРИ РАЗДЕЛЬНОМ И АССОЦИИРОВАННОМ ВВЕДЕНИИ КОЛИПАРАТИФОЗНЫХ АНТИГЕНОВ И РОЛЬ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ В ИММУНИТЕТЕ

ШёШб

1ШИСТБРСГГВ0 СЕШЖОГО ХОЗЯЙСТВА СССР

одвоския сЕльскотоаяастшнный №стит*г

* • ■■

-

■1 ■.

На Правах ¡ужцписш

Асця^нт, ; В'Т Р И К Виктор ' Впадиммрович

. №ИУНОД0Г11ЧЗСКАЯ АКТИВНОСТЬ ^ЛОДГЛИНОВ V ; сыворотки КРОВИ. И лактсглобулинов.молооива ■ ■ : : вщ разязльнсм й дотоциированпш^ вввдбнки, кошиарашюзных антигенов и роль МОЛОЧЙОЙ ■ ■ йммгйгевте ;

С Диссертация на йгееко« язю») -. ^ л

Специальность *16.00,03 -ввтершяаряея мвро-

ЙЯОЛОГ1Я, ВИРУСОЛОГИЯ, ЭПИЗООТОЛОГИЯ • МЯЖОЛОГНЯ

- : ; А В I Орк « Б Р А Т '/-.Г

дяосвртяцаа а» соискание у«»т>* втевваа

/^/юйцдоп^ммрвюршх яау*

Одесса:- 1976

/

, ЮШСТЕКГГВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР ОДЕССКИЙ СЕДЬСКОХОЭЯЯСТВЕННЫЙ ИНСТИТУТ

На правах хуиописа

Аспирант Б7 Р И К Виктор Владимирович

шютсшсгическая активность глобулинов сивомтки крови и ллктаглошинов молозива при раздбльнсм и а ссоширова ннш вшдбнии' ксдипаратифозных антигенов и роль молочной железы в иммунитете

( Дксавргадая ва ясском языке >

4

Сивииальносиь « хв.ОО.ОЭ - ветеринарная микробиология» вирусологм, эдиэ о отология и микология

автореферат

диссертации ее соискание .учепой степей кандидате ветеринарных паук

Одесса - 1976

Работа выполнена на кафедре микробиологии Одесского сельскохозяйственного института, в учебно-опытном хозяйстве ни.Трофимова Овидиодольского района ив колхозе " Знамя Ленина " Белгород-Днестровского района, Одесской области.

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор Шулшова.[

Официальные оппоненты:

Доктор ветеринарных наук, профессор И.А. Измайлов. Кандидат биологических наук Я.Е. Пушкаренко.

Ведущее предприятие - Украинский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии.

Автореферат разослан "2-Ч" ЗУ*"}^^ 1976 г. Защита диссертации состоится " ^ ■Й.^М'""'^ I976 гг

в 12 час. 30 мин. на заседании Ученого .Совета ветеринарного и зоотехнического факультетов Одесского1- сельскохозяйственного института. •

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института ( Одесса, Свердлова, $9 ).

Замечании и отзывы на автореферат в двух экземплярах, заверенные печать» учреждение, просим направлять по адресу: Одесса, ГСП-6Э5, ул. Чичикова, 13, сельскохозяйственный Институт, ученому секретарю Совета.

Ученый секретарь Совета доцент

М.Г, Цурщжов

ОШ ХАРАКТЕРИСТИКА РАВЛЫ

Актуальность темы

В проекте Центрального комитета КПиС к ХХУ съезду предусмотрено на 1У7Ь-19ЬО годы Обеспечить дальнейшее увеличение производства продуктов животноводства. Среднегодовое производство мяса в стране в десятой пятилетке должно оыть доведено не менее чем до 15,ь м_тн.тонн в убойном весе« а молока - до X млн.тонн.

иатсное значение в решении этих почетных задач тлеет проблема сохранности молодняка крупного рогатого скота, которая до настоящего времени остается актуальной. Значительный экономический ущерб народному хозяйству наносят заболевания новорожденных телят, осооенно желудочно-кишечные, в различных странах мира отход телят от этих заболеваний-составляет от 3,1 до 31%, а в СССР - 18-21 % { *).И.Архангельский, 19Ь9). Среди них наиболее онасними являются колибактериоз я паратиф.

В связи с переводом животноводства на промышленную основу к созданием крупных животноводческих комплексов с высокой кошевтрацией животных, большое значение приобретает специфическая профилактика к разработка надежных, экономически выгодных методов иммуназашш животных, ассоциированными вакцинами я глобуляновыми препаратами,.

вопрос о применении ассоциированной иммунизации в общем объёме противо »пи зоотп чески мероприятий емеет больщуи практическую целесообразность, так как раздельная вакцинация усложняет раооту ветеринарных специалистов, а подчас, из-за частого антигеиного раздражения, приводит к потере продуктивности сельскохозяйственных животных.

В настоящее время как у нас, так и за рубежом, накоплено достаточно данных о реле сообразном в вакцинация беременных животных, обуславливающей передачу колострального иммунитета новорожденным с первых дней жизни.

Особенно зарекомендовал себя внутрициетернальный метод иммунизация стельных,короэ, которни, по данным, V' РНегли^ ,

(1961), Il.il. Архангельского,, И,11. Бутко <1У6Ь), К.и.Шулюмовоп с соавт.(197*;} и др.позволяет достичь ^.элее высокого содержания антител в молозпве и в молоке.

чем оря других методах иммунизации, хотя яри этой роль молочное железы р иммунологическом ответе остается окончательно не решенной, недостаточно изучен внугрицистерняльныи способ иммунизации' коров ассоциироваянымя антигенами, особенно при колнпаратифозных инфекциях.

В связи с. яыюеиэдоженгшм целью ншх исследовании 0ило1

I, Изучить иицунологкческую активность глобулинов сыворотки крова н молозива (лактоглобулияов) при ас социированяои к раздельной подкожной и вкутрицистеряальвоа иммувизагога коров колипаратщюзными антигенами.

Изучить роль молочной желез и в иммунологическом

ответе.

а, получить колидаратифоэвыи лакто - и гамма - глобулин ж изучать йх превентивные свойства на 'белых мышах.

4. изучить фагоцитарную активность лейкоцитов и динамику накопления агглютининов в снворотке крови телят полученных от хоров иммунизированных подкожно к внутрицястернально.

5. Определить влияние «нуТрицистернальвой иммунизации на продуктивность коров.

МЕСТО ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ

- Экспериментальная часть работы выполнялась на ферме крупного рогатого скота учебно-опытного хозяйства им.Трофимова ОСХИ, в колхозе "Знамя Ленина" Белгород-Днестровского района. Одесской области и в лаборатории кафедры микробиологии Одесского сельскохозяйственного института о 1972 но 1975 год.

МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЙ-

Опыта проводились в летне-осенний период на коровах и телятах краевой степной породы. В опыте использовала коров 6-9 лактации. Отобранные по принципу аналогов животные подопытных я контрольных груда находились в одинаковых условиях кормления и содержания.

Контрольный в подопытные животные до постановки опытов подвергались диспансераза~ ти, при этом особое внимание обращалось на состояние молочной железы. Туберкулез у животных исключали комплексной туберкулинезацией, бруцеллез - с помощью серологических реакций (РА И РСК), скрытые маститы - при помощи бромтимоловой пробы.

Для иммунцэашш хоров в лаборатории кэКдры микробиологии из культур, полученных из ГНКИ ( е. «е.* серотип и/а я -

), изготавливали антигены I содержание 1и миллиардов микрооных тел е I мл) путём кипячения. Помимо этого била сделана попытка получить озвученные антигены. Опыты № озвучиванию микроорганизмов с помощьы ультразвуковых генераторов уаДО-1, УаГ-2,10 и 24-У Зги-н проводили в лаборатораях Одесского политехнического института и Одесского института инженеров морского флота.

нерву» серию опытов провели в учхозе им.Трофимова, для чего отоорали 1и подо 1штних групп коров \ по а в каждой ) и одну контрольную ( б голов ).

коров 1-1У групп имкунизировали коли антигеном, У-ЛИ - паратифозным антигеном, 1л-Х,- колипаратифозным антигеном \ ассо-циироэаяно ). Коров'контрольной группа в те же сроки и с тем же интервалом оОраоитнвали физрастворам I 3 подкожно и 3 внутри-цистернаяьно). Животных I, И, Ш» Д и УП групп иммунизировала анутрицистернально с 10-дневнда интервалом между введениями но следующей схеме :

I и У группы - в один сосок трижды по 10 мл. в каждый, п и Л группы - а два соска триады по 5 мл в каждый. Ш а Л1 группы - в четыре соска трюхы по 5 мл в каждый..

коров 1У и Я11 групп иммунизировали подкожно согласно существующего наставления. Ассоциированный коли парат »{о знци антиген вводили коровам ¿X группы внутрицистернально, коровам X группы -подкожно. . . •

последнее введение антигенов проводили не позже чем за 15 дней до отёла.

' 7 подопытных и контрольных коров исследовали сыворотки крови перед иммунизацией, на 10 день после первого, второго и третьего введения антигенов во ьремя.отёла, после отёла на 3, V в 1л день и через месяц.

кроме того, асследоваля сыворотку молозива и молока из долей вымени, в которае вводили антиген, а также аз тех'долей, в которые антиген не веод)ши. пробы брала в первый день посАе отёла к из I, а и И-его доения), затем па день и через месяц*

Динамику накопления агглютининов в сыворотке крови, молозива я молока изучали путем постановки реакции агглютинации с колиоакт риознкм н паратифозным антигенами классическим проои-

рочным методой.

Содержание общего белка в сыворотке крови определяли ори помощи рефактсыетра PU3-3 по методике С.К. ьасова iiSb3). Отдельные белковые фракции определяли злектрофоретическим методом, используя прибор 1ШЭФ-1 и бумагу для хроматографии марки "С. Окраску форе грамм производили бромфеноловцм синим по методике Н.Лазарева (1955). ^агоцитарнуп активность лейкоцитов крове и бактерицидную активность сыворотки молозива изучали по обще принятым методикам.

Из сыворотки молозива первого и второго доения, полученного от иммунных коров, готовили колипаратифозний лахто-глобулин солевым методом и изучали в нем содержание oüutero белка, белковой фракции и его превентивные свойства на белых мышах в сравнительном аспекте с колипаратифозным гамма-глобулином, подученным таким же методом, но из сыворотки крови.

Аминокислотный состав полученных глобулиновых препаратов изучали QO методике 1',С. Пасхиной (1964).

у телят, родившихся от иммунизированных подопытных и от контрольных коров, изучали динамику накопления агглютининов в сыворотке крови и фагоцитарную активность лейкоцитов крови по методике а.й, Никольского (1958) и А.С.Лабинского (1972). Телят исследовали до поения молозивом,'на.а, '}, iü, 21 и 30 день жизни, при этом учитывали рост и развитие их.

Вторую серии опытов проводили в колхозе "нЗне$мя Ленина" на семи яловых коровах. Трём коровам паратифозный антиген вводили внутрицистернально в один сосок по 10 мл трехкратно с интервалом в 10 дней. Одну корову аналогично в те же сроки и той же дозой иммунизировали подкожно. Трём коровам антиген не вводили, они служили.контролем.

Одну корову, иммунизированную внутрицистернально, и одну контрольную подвергали убою на 4 день, а остальных на 10 день после последнего введения антигена. У убитых животных брали кусочки паренхимы иммунизированных и неиммунизировшпшх долей выиеяи, надвыменнкх и предлопагочшис лимфатических узлов, а также селезёнки, слгншис жплез и кишечника. Из' отобранного материала изготавливали гистологические срезы и мазки-отпечатки.

Всего изготовлено и исследовано ь84 гистологических срезов и 397 мазко в-отпечатков, в которых ьшиашли с помощью непрямого метода луиса антиген и ангятеяоеодеряадае клетки. Для

этого готовили иммунную сыворотку кроликов, меченный гамма-глобулин против глобулинов кролика и растворимый антиген по Ьаувену. Лиофилизированные коныгачгрованнке антякроличий и антиончйи глиО/ланы получали из института эпидемиологии я микробиологии им.К.1*-.Гамалеи, для микроскопических исследования использовали люминесцентный микроскоп Ш1-2 с лампой ЛРШ-250 и светофильтрами БС 8-2, ФС I-I, СЗС 7-2, объективом и окулярами 5.6. i

Нуклеиновые кислоты в свежезамороженноЯ ткайи изучали методом ЬерталатТфп п Биикису, а в срезах» приготовленных из фиксированного материала по методике ЭЙнарсопа (IS5I) и по методике Ераше (1942). В качестве контроля серию гистологических срезов дополнительно подвергали обработке рибояуклеазой.

На 50 коровах (25 из них бшж контрольными) изучали влияние внутркцистернальной иммунизация на продуктивность. Учитывали продолжительность лактоиионного периода, удой молока о его жирность, ёмкость четвертей вимени с помощьп аппарата раздельного видоя, скорость молокоотдачя.

Всего под опытом находилось: коров - 62, телят - 23, кроликов - 10, морских свкяок - 12, мышей - 400, '

Полученный цифровой материал подвергали биометрической обработке по методикам И.П.Ашмарина, А.А.Воробьева (1У62), И.А.ОЙвина (1960)1

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПМлТОЧЕСМЯ ЦЕННОСТЬ

Проведен ними исследованиями установлена динамика распространения паратифозного антигена при внутрицистернальной яиму-ея задай.

С помощью непрямого метода Кунса выявлена синтезирующие антитела клетки и произведен их подсчет в паренхиме молочной железы, в лимфатических узлах, селезёнке и других органах. Изучены изменения происходите в содержании рибонуклеиновой кислоты в секрет арном эТтелия молочной железы и в лгофзяднои аппарате в период иммунизации животного.

Изучена возможность внутрицистернальной иммунизации коров ассоциированными антигенами,(колипаратифозннми) установлены преимущества этого способа по сравнения о подкожвдм и раздельным применением этих антигенов. Изучен вопрос о влиянии * внутршгл г термального способа иммунизации на морфологическое состояние вымени, на ёмкость выиени, а также в целом на молоч-

ную продуктавность. Из пола иммунной снворотки молозива долу-чев ассоциированный лактоглобулин, а из сыворотки крови - ко-ливаратифозный гаммаглойулиа и изучены их превентивные свойства, а также аминокислотный состав.

Объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, десяти глав, выводов, предложений производству, спискаиспольэованлой литература, включающего 377 наименований отечестьайнах и 115 зарубежных авторов в приложения. работа излозюна на 150 страницах машинописного текста ( не включая прилове яия), иллюстрирована 61 таблицами, 14 графиками, 3 диаграммами и 37 фотографиями.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТУ"

Вирулентные свойства культур и «i.

серотип 078 изучали на белых мышах по методике Кербера (1931) э модификации И.П.Ашмарина (1959). Результаты исследований Показали, что культур вирулентные { лз для «^•¿/¿v^j * »512600 щшрюбаых тел, а для культуры серотип 078

= 253900000 микробных тел).

Культура fit«'обладала большей токсичностью, чем культура свротип 078. " * -

Агтлютиногенные свойства, изученные на кроликах, "были более выраженными у антигенов, полученных из кульгуры <4. се рот ива 07Б, чем у антитело в, подученных из культуры

• Максимальный уягр агтлюгяяпвов в сыворотке крови кроликов, ишуиизарованных колибактараозныы антигеном, бал 1:2500, а паратифозны» антигеном - Ii2240.

При воздействии на колицаретифозные бактерии ультразвуком во взвесях оставалось от 2,9 до 31$ микробных клеток,сохраняющих казне способность« Озвученные культуры слабо воспринимали окраску со Грачу, плохо росли на твердых питательных средах, при атом снижалаоь их <Зиохикичаская активность. Более сильное дазвнтегрирущев воздействие на микроорганизма оказывает ультразвук низкочастотных генераторов, чем высокочастотных, причем паратифозные бактерии более устойчивы к ультразвуковым воздействиям, чем бактерии кишечной палочка.

Озвученные культуро сохраняли Н и 0 антигены, более активно вступали в реакцию агглютинации с «онорецепторяыми

и и И сывороткамй, чей кипяченный в формаланизированный антигена. Антигены из озвученных культур оказались почтя в два раза более агглютиногеиными, чем антигены, полученные термическим путем,

ДИНАМИКА НАКОПЛЕНИЯ АГТЛШШНОВ В СЫВОРСГГКЕ КРОВИ.

ИОЛОЗИЕА И МОЯОКА У ПОДОПЫТНШС И КОНТРОЛЬНЫХ КОРОВ

'Проведенные исследования показали* что в сыворотке крови не вакцинированных коров содержатся естественные антитела в титре от 1:40 до 1:256 к колиантигену я от 1:20 до 1:160 к сарата^оэвоку антигену. На протяжении сухостойного периода уровень естественных агглютининов в сыворотке крови был не постоянным. Во время отела я в последующие периоды титры этих антител снижались, через изсяц после отела они были почти в три раза ниже титров, установленных во время отела. Значительно выше титры противоколибактериозных С!: 520+82) и нротввопара-тифоэных (1:373±44> агглютининов содержались в сыворотке молозива первого удоя, в во еле душив периоды исследований титры агглютининов снижались, но даже спустя месяц после отела титр их составлял 1:90+1.7 к колябактерисякоеф я 1:26+5 я паратифозному антигену.

Лри раз дальней иммунизации коли- и паратифозным антигенами титры специфических антител как в сыворотке крови, так я в сыворотке молозива и молока увеличивались* Так, при применении холибактериозяого антигена в сыворотке крови стельных коров титр агглютининов составил 1:бгб±П после двукратной я 1:1560+ 124 после трехкратной иммунизации. Самые высокие титры антител были во время отела: в сыворотке крови 1:1730+54 я в сыворотке молозива 1:6266+548. В дальнейшем наблюдалось уменьшение титра антител я через месяц после отела титр их составлял 1:130+ 29 в сыворотке крови я почтя в два раза выше в сыворотке молока, Введение паратифозного антигена вызывало накопление антител,. максимальное количество которых наблюдалось во время отела ( в сыворотке крови 1:1160^69 я в сыворотке молозива 1:3940+329). В дальнейшие сроки исследований" титры антител снижались как я при применении колибактериоэного антигена.

Псдкошюе введение ассоциированного антигена способствовало образованию в накоплению в сыворотке крови агглютининов к

абеам антигенам, титры которых достигали максимальной величины во время отела ( к колибактериозному 1; 1633+176, к паратифозному I; 1360*32) н не отличались от такошх при иммунизации моноантиген&ми. Б дальнейшем содержание этих антител снега л ось а на 30-й день после отела их уровень составил к колибактериозному антигену 1:186±10 и к паратифозному 1:173+11,

В сыворотке молозива и молока коров, подкожно иммунизированных яолипаратифозным антигеном, специфические агглютинины накапливались по отношению к обеим антигенам,их наивысший татр был во время отела (1:6400+768 к колибактериозному а 1:4533+786 я варатифозному антигену). В дальнейшем содержание агглютининов снижалось.

Внутри цистерна л ьный способ иммунизации стельных коров ко-лидератифозными антигенами в период запуска приводил к более вы раже иному иммунологическому ответу. Тан, при внутри цистерна льном введении яолибактераозного антигена максимальный титр агглютининов в сыворотке крови по опытной группе составил 1;296в±175, в то время как при подкояноц применении антигена этот показатель был в 1,7, а в сыворотке молозива в 3,2 газа ниже.

Доела первого внутрициотераального введения паратифозного антигена титр антител по сравнению о исходным увеличился в 16, после второго в 40 и после третьего в 80 раз. Самым высоким ОН был во время отела (1:258(>¿283/, в последующем он снижался, но даже спустя месяц после отела его показатель был в 13 раз ваше исходного.

Ори изучения динамики титров агглютининов сыворотки молозива и молока от коров, иммунизированных ваутриодстернально паратифозным аитигеаом^ установлено следу ¡оде а. 'В сыворотка молозива первого удоя наблюдали максимальные титры антител, они колебались в пределах 1:18400^938. .в последующие дни лактации титр агглютининов силжалей, однако л на 30 день лактации молоко было еще достаточно иммунным, титр агглютининов в сыворотке молока был 1:340+25,

Таким образом, проведение наследования показали, что содержание.агглютининов в сыворотке молозива и молока было выше у коров, иммунизированных внутравдетернальао, чем подкожно.Причем, как правило, титр этих антител в крови был ниже их титре в сыворотке молозива.

и.

Шутрнцистерна льнов видение ассоциированного колипарати-фозного антигена приводило к нарастанию титров антител по отношению к обеим антигенам. Во время отела их показатели достегали макетам и составляли 1:3232^340 к кодибактериоэному, и 1:2656+239 к паратифозному антигену. После отела титры агглютининов снижались и к ЗУ дню соответственно составляли 1:373+ 22 и 1:306^47, Л на логичную картину нарастания титров агглютининов наблюдали в сыворотке молозива и молока от коров, иммунизированных ассоциированным антигеном. Титр! агглютининов в сыворотках молозива первого удоя были не ниже, чем у коров, иммунизированных 'колибактериозныы и паратифозным антигенами раздельно я составляли соответственно 1:21333+3486 и 1:17920+2092. В дальнейшем эти тят^н снижались и через месяц их показатели была соответственно 1:333+27 и Т: 366+46.

Таким образом, при ассоциированном введении антигенов организм равноценно отвечает выработкой .специфических агглютининов на каждый ввекенныя антиген. Титры антител при этом были не ниже, чем при раздельном введении антигенов.

ИССЛЕДОВАНИЕ БАКГЕРИОСТАТНЧЕст И БЛКТЕгИДОЦнЫХ УБО::СТВ СЫВОРОТКИ ШШЗИБА

Результаты исследований бактерицидной активности сыворотки молозива коров подопытных и контрольных групп приведены в таблицах 1,2, -

Таблица I

Напряженность бактерицидной активности сыворотки

молозива коров по отношению к ( в %)

метод иммунизации коров

¿ня контакта исследуемой сы ки с культурой Гу часа* 7 . , , 3 I , 4 ! я I ■ гЬ I т-А ,1,

Время контакта исследуемой с (¿ворот-Подкожно колиоактери-

оаным антигеном .61,9 69,,? 77,7 88,3 91,4 97,0, Внутриаястернально ко-

либзктериозиык аятк- ^ ^ 96(9 9^4 99^ ^^ Подкожно колипарати-

4-Озным-антигеном 66,7 71,2 83,6 88,3 95,1 97,8 Внутрипиатернально■

' кым ав" 88.3 93,6 ЮО.и 100,0 99,1 99,6

Неиммунярчроваяные 47,2 48,4 58,2 45,6 39,8 28,9

Таблица 2

Напряженность бактерицидной активности сыворотки молозива коров по отношении x ¿ai'. ( s %)

---,-----

Иетод иммунизации ! Время контактирования исследуемой коров ' сывормуи о культурой < в часах)

i 2 ! 4 1 8 Í ! 10 ! 12 1 24

Подкожно паратифозным антигеном 64,5 61,9 67,9 84,2 89,0 94,3

Ваутрицио териальн о паратифозным антигеном 92,6 97,0 100,0 98,9 99,0 99,3

Подкожно колипара-тифознам антигеном 57,0 63,7 67,9 82,9 90,2 94,8

Внутрицисте рнально колица ратифо з ным антигеном 93,9 97,2 90,8 100,0 100,0 100,0

Неиммунязиро ванные 36,6 47,8 63,7 45,6 31,4 22,1

Как видно из приведенных в таблицах 1,2 данных* иммунизация отельных коров повышала бактерицидную активность сыворотки молозива* Наиболее выраженное бакте рицвдвостыэ по отношении к полипаретифозным микроорганизмам обладали сыворотки молозива -коров» подвергнутых внутрицистернальноа'ишуниаашей асооциированными антигенами. При подкожной иммунизации коли-паратвфозным антигеном бактерицидная активность еыворэгок проявлялась после 24-часового контакта только у одного животного, у остальных — сыворотка молозива обладала лишь бактарио-статкческим действием.

■ При раздельной иммунизации коров колибактериозным и паратифозным антигенами более выраженной бактерицидной активностью Обладали сыворотки, полученные от животных иммунизированных' внутришотериально, чей при подкожном введении антигена. Во вовх случаях бактерицидная ахтивнооть проявлялась луча» по отношению к кишечной палочке, чем х паратифозному.микроорга- -

ЕВЗМУ, •

Анализ полученных результатов показал, что сыворотки моло-зева не иммунизированных коров обладали очень слабыми бактерицидными овойотвами, По отношению к коли- и паратифозным микроорганизмам они оказывали только ба ктервос та твс терский эффект

13.

я то лишь до 8-часового контакта с культурами в термостате £ табл.1 л 2).

ФАГОШАРШШ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОЩ КОРОВ, ШОГйИЭИРОИННШС МШО- И АССОЦИИРОВАННЫМ АНТИГЕНАМИ

Исследования пеказали, что у коров до ищу низа щи показатели фагоцитоза были но отношению к паратифозному микроорганизму в среднем но грушам интенсивность - 2,01 и активность 34.3S.

Иммунизация стельных коров способствовала активизация фагоцитоза. При подкожном введении паратифозного антигена показатели фагоцитоза интенсивно возрастали л достигали максимума во время отёла (интенсивность 8,32*0,34, а активность 7Э,3±1,9Ш.' При этом шуграцвстернальное введение паратифозного антигена вызывало более интенсивное увеличение фагоцитарных показателей { во время отёла интенсивность была 14,46± 1,27, активность 91,6±2,59 ,. ' ■

В последующие периоды исследования' фагоцитарные величины уменьшались, однако, даже спустя месяц после отела интенсивность фагоцитоза была выше, чем до имкуннз&цни на 19,3 %, а активность на 10,1 %.

Иммунизация коров ассоциированным колипа ре тифозным антигеном так же вызывала существеиное увеличение фагоцитарных показателей, которые достигали максимума во время отёла я составляли при подкожной иммунизации интенсивность 9,37+0,61, активность 80,€±2,13 %, при внутрицистереальной - интенсивность 15,18±Г,24, активность 95,5+2,1?

однако, различия между показателями у коров при раздельной и ассоциированной иммунизации не были установлены.'

' ИШУНОГИСТОЛ ОГИЧЕ СКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ЫОЛШШОЙ ЖЕЛЕЗЫ

— ПриТиоследовании t-^атериала, отобранного от контрольных животных, наблюдали, что молочная железа ялошх коров в не-лактарущий период представлена тканью, состоящей из большого количества альвеол,'^дз которых многие имеют неправильную форму, во многих местах выявляются запустевшие альвеолы. Рибонуклеиновая кислота в секретирующих клетках обнаруживалась в вида слабоокрашенного ободка, окйЯвляющего ядерную

структуру, В внтарстициальноИ ткани молочной железы в некоторых полях зрения гистологических срезов обнаруживались единичные плазматические клетки.

В мякотных шнурах надвыменных, предлопаточных и подчелюстных лимфатических узлов встречаются единичные или групповые кровеносные сосуда, вокруг которых расположены л им -фовдные клетки. По ходу синусов встречаются единичные зрелые и незрелые плазматические клетки, воспринимающие окраску специфическими красителями на нуклеиновые кислоты. При иммуно-гис«логических исследованиях молочной железы, лимфатических узлов и селезенки не выявлена клеток, содержащих паратифозный антиген и синтезирующих паратифозные антитела.

В гистосрезах, приготовленных из материала, полученного от животных убитых на четвертый день после третьего введения антигена, хак в альвеолах паренхимы иммунизированной доли вымени, так и в регионарных надвыменных лимфатических узлах выявлено скопление корпускулярного паратифозного антигена, микробные тела располагались в поле 3£вния-микроскопа одиночно и в виде скоплений. 11омимо корпускулярного антигена в гистологи чес них срезах отмечено большое количество антиген содержащих клеток в разрыхленных участках соединительной ткани иммунизированной четверти вымени, в регионарных лимфатических узлах в незначительное количество в селезенке. На 10-й день после третьей иммунизации в препаратах подсчитывали антиге«содержа вше клетки в 50 полях зрения микроскопа. Число теких кле ток в паренхиме иммунизированной четверти вымени принимали за 10015; тогда в регионаракх лимфатических узлах их сило 63,в селезенке - в коятррегяоядранх лт*фатвческих

узлах - 12,3!?. В не иммунизированных долях вымени антигеясо-даржаяше клетки не обнаружены.

Таким образом, основная масса антигена задерживается в паренхиме той доли вымени, в которую он был введен* Значитель ная часть его поступает в регионарные лимфатические узлы, и сравнительно небольшое количество обнаруживается в селезенке. В этот же период в паренхиме иммунизированной четверти молочной железы, в надвыменных лимфатических узлах отмечали явления пролиферации. ' ^

В мё «альвеолярных пространствах в прослойках соединитель

J.O.

ной ткани наблюдали скопление большого количества плазматических клеток ( до 30 и более в одном поле зрения микроскопа К имеющих специфическое свечение. Особенно много их в местах прохождения кровеносных сосудов. В мазках - отпечатках и гистологических срезах, окрашенных акрединовым оранжевым, наблюдали большое количество клеток с красно-кирпичной цитоплазмой, а при окраске галлопданан-хромовымд квасцами базофлльные структуры приобретала темно с инка цвет, которой отсутствовал в контрольных гистосрвзах, обработанных рибоауклеазой.

Ыаксймальное количество клеток, содержащих антитела, было в паренхиме иммунизированной доли вымени ( 762 в 50 волях зрения). Примерно в три раза меньшее число их отмечено в надвыменных регионарных лимфатических узлах ( 254 - ITS ) я значительно меньшее - в селезенке ( 39 ) я в не иммунизированных долях'вымени { 2-3),

Исследование секретирующих клеток молочной железы у иммунизированных животных ( как иммунизированной, так и неиммунизированных долей вымени, а также вымени подкожно иммунизированного животного ) выявило богатое содержание в них РНК.

Помимо этого были-проведены опыты по определению роля молочной железы в выработке специфических антител - агглютининов путем изучения динамики накопления агглютининов в оыворот-кв'молозива и молока, икмунизиЕуя коров в период запуска в одидили два соска,

Анализ полученных данных показал, что в сыворотке молозива иьедниэированных четвертей вымени титр агглютининов был s среднем более чем в 6 раз выше, чем в четвертях, в которые не вводили антиген.

Это также свидетельствует о том, что синтез специфических антител происходят непосредственно в молочной железе.

ДИНАМИКА ТИТРА СПЕЦИФИЧЕСКИХ АГГЛЮТИНИНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ГЕЛЯТ, КШДЕНШХ ОТ ИММУНИЗИРОВАННЫХ КОРОВ

Результаты исследований показали, что до поеная молозивом у всех телят, розданных как от иммунизированных,так и неиммунизированных коров г сыворотке крови не обнаруживаются специфические агглютинины. Они появлялись в сыворотке крови только после поеадя молозивом, титр котсрмх возрастал до

третьего дня жизни, а затем постепенно снижался. У телят,ро-ддшится от не вакцинированных (контрольных) коров, титры агглютининов в сыворотке жрош были очень низкими и не превышали 1:23+8 по отношении к колибантераозяому антигену и-1:16+3 по стношенив к парвтифозноцу антигену.

Исследования динамики титра антител в сыворотке крови телят, полученных от коров иммунизированных подкожно, показали, что максимальный уровень их наблюдался в тех случаях, когда матерей иммунизировали ассоциированным колипаратифозным антигеном ( титр противоколпбаитерпозкых агглютининов 1:1013+ 141, титр оротивопаратифозннх - 1:ВОО±94). У телят, родившихся от коров, иммунизированных раздельно коли- и паратифозным антигеном максимальный титр прот и во коли<За кте рио з яых антител • в сыворотке крови был 1:813+85, лротивопаретвфоэкых - 1:400+ 37. Начиная о 3-дневного и до 30-дневного воэраота, титр специфических агглютининов в сыворотке крови этих групп телят снижался*

Более высоким титр агглютининов был у телят, родившихся от коров, вакцинированных полипаратпфоэным антигеном внутри -цветариально. Самый высокий уровень агглютининов отмечен' у телят в 3-двевном возрасте ( вротивоколибактериозный 1;5466±1466, противопаратя4оз1шй - 1:400^387) в то время,как у телят, родннвихся от коров, иммунизированных коошбактериоз-ным антигеном, титр антител составлял I:5000^901, а у телят полученных от воров, иммунизированных паратифозным антигеном, 1:3306^583,

В дальнейшей наблюдали снижение титра агглютининов у телят этих групп. Однако, даже в 30-дневном возрасте у телят, родившихся от коров, ионизированных внутрициотарнально, титр агглютининов был почти в два раза выше, чем у телят.мате рей которых иммунизировали подкожно.

Биометрические ре с четы показали, .что уровень специфических антител в сыворотка крови телят пропорционально зависит от титра йоследних в сыворотке молозива матерей-кормилиц,причем, он, как правило, был выше у тех телят, которым выпаивали молоко с большим содержанием агглютининов { Р > 0,01 )>

1?.

МГОЩТАШЯ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОЕИ ТЕЛЯТ

Исследованил показали, что у новорожденны* телят до воеидя молозивом фагоштарная интенсивность и активность лейкоцитов была слабо выражена. У теля* всех групп интенсивность в среднем составляла 1,14, а активность - 20,ь%. После.поения телят молозивом активизировалась фагоцитарная активность лейкоцитов крова и к 7-дневному возрасту телят показатели фагоцитоза достигали максимума, а затем наблюдалось снижение их.

У телят, родившихся от невакцинированных коров, в недельном возрасте показатели фагоцитоза хотя и достигали максимума, но see же оставались довольно низкими.' Но отношении к воля-бактериозному антигену интенсивность была равна 2,43+0,08, а активность - 49,0+2,94-по отношении к паратифозному антигену соответственно 1,92+0,065 и 44,3+2,13.*/.

У телят, родившихся от коров, вакцинированных подкожно,показатели фагоцитоза до поения молозивом существенно не отличались от таковых у контрольных телят. После поения показатели фагоцитоза возрастали в несколько раз, особенно у телят, родившихся от коров, иммунизированных ассоциирование кодинарети- -фознод антигеном. Так, по отношению к колабакта раоз ному микроорганизму интенсивность фагоцитоза составляла 4,58±0,32, активность 81,3^2,21 а по отношению к паратифозному, соответственно - 3,86^0,22 и 73,6+1,44 %, в то время, как у телят, родившихся от коров, имлунизированвых раздельно колибактвриоз-ным антигеном, интенсивность была 4,3+0,075, активность 80,3+1,79 % и иммунизированных,паратифозным антигеном, соответственно, 3,62±0,069 и 69,3+3,21 %, В последующие периоды исследования наблюдалось снижение показателей фагоцитарной реакция у всех телят этих групп.

Аналогичную закономерность динамики показателей фагоците-, за наблюдали и у телят, родившихся от коров, имлунизиро ваннах внутри Астернально. Однако, после поеная таких телят молозивом интенсивность и активность фагоцитоза была вшпе, чем у телят, родившихся от коров, вакцинированных подложно.

Самые высокие показатели фагоцитоза выявлены у телят, полученных от коров иммунизированных ассоциированным колипа-ратифозным антигеном. В V-дневном возрасте показатели фагодате за у этих телят составляли: по отношению к колибактериозно-

му микроорганизму интенсивность бала 5,07+0,49, активность -88,0±1,69 %, по отношению к паратифозному микроорганизму -иатенсввность - 5,01+0,94, активность - 74,60+2,И %,

7 телят, родившихся от коров иммунизированных раздельно колибактеряозным антигеном, в этот период интенсивность была 4,74±0,1Э7, активность 8а,3+1,79 %, а при иммунизации коров паратифозным микроорганизмом показатели фагоцитоза у телят были, соответственно, 4,3+0,13 и 73,0+2,15

Таким обрезом, исследования показали, что до поения телят молозивом показатели фагоцитоза у них низкие. После выпойки молозива повышалась* фагоцитарная активность лейкоцитов крови, наиболее высокие уровень наблюдался в 7-дневном' возрасте, а затем снижался. Самая высокая фагоцитарная 'ая-тявность лейкоцитов отмечено у телят, родившихся от коров иммунизированных ассоциированным антигеном внутринистерналь-ннм методом.

ПОЛУЧЕНИЕ КСЛШАРАТШ03ЩД ГАШ-ГЛОБУЛИНОВ И ЛАКТОГЛОБУИШОВ И ИЗУЧЕНИЕ ИХ ПЕБЕЕНТКШЫХ СВОЙСТВ НА БЕЛЫХ ШИАХ

Из иммушшх сывороток молозива воров иммунизированных вяутрицистернально колипа ратиф-о э ным антигеном получили солевым методом Э серии протлвоколипаратафоэного лактоглобули-на. Электрофоретические исследования всех серий полученного препарата показали их высокую чистоту.

В опыте на белых мышах и морских сванках определена сте-Гальность и безвредность полученных серий препаратов. Реакцией агглютинацией установлена, что титр специфических коли-паратифозных агглютининов в полученном лзктоглобулине не существенно отличался от титра агглютининов исходной сыворотки молозива. Так, в препарате титр паратифозных агглютининов был 1:1720и, колибактериозлых - X:20300, а в сыворотке молозива соответственно 1:17920 и 1:21330.

При испытания бактерицидных свойств препарата выявлено,, что лактоглобулины всех трех серий оказывали бактерицидное действие на культуры серотип 078 и *-<г—-У.«;.^

уже после 2-3 часового контакта с микроорганизмами.

19.

Из гиперишгунной сыворотки крови крупного рогатого окота производства Витебской биофабрики мы приготовили также ооле-вым методом колипаратифозный гамма-глобулин. Полученный препарат содержал 10% белка, 0,85& поваренной соли, рН его 7,4, полученный препарат такие был безвредным и стерильным, а электрофоретические исследования показали его высокую чистоту. В полученном препарате титр яротивоколйбактераозных аг--Глютининов составлял 1:3660, а противодаретифозных - 1:2880.

Колипаратифозный гамма-глобулин также обладал хорошо выраженными бактерицидными свойствами. На колипаратифьзные микроорганизмы он оказывал бактерицидное действие уже после 3-5 часового контакта с микробной взвесью.

Полученные глобулиновые препараты подвергнуты гидролизу и о помощью хроматогракм проведено сравнение юс аминокислотного состава. Результат исследований показал, что белковая картина препаратов представлена 17 аминокислотами.

Сравнительное испытание превентивных свойств лактогдо-булшш и гамма-глобулина проводили на белых мышах. Результаты испытаний свидетельствуют, что гамма-глобулин, введенная за сутки до заражения заведомо летальными дозами культур

) предохранял от гибели в среднем 72,5 % мышей, при 100% гибели контрольных животных, а лактоглобулин -37,5 %. Средний срок жизни павших животных, обработанных лактоглобулином.составлял 8,6 дня, гамма-глобулином - 7,7 дня, а контрольных - 3,5 дня.

Таким образом, проведенные исследования показали, что из молозива коров телу низ в ро ванных колипаратифозными антигенами в период запуска, можно получить ассоциированный противо-бактериозный лактоглобулин, бактерицидные и превентивные свойства которого на уступают гамма-глобулину, выделенному из гипериммунной сыворотки крови,

ВЛИЯНИЕ НОТШШСТЕРЩЛЬНОЙ ШЫУНИЗАШИ НА ПРОДУКТИВНОСТЬ КОРОВ

Влияние вну т ри цлс те рнальи ой иммуйизапдк на продуктивность коров изучали на протяжении 1373 года, когда животные были . не иммунизировали,и после иммунизации в течение 1974 года,

Прове ценные исследования показали, что введение антигена в цистерну сосков не оказывало вредного влияния на молоч-

ну» железу и в иелоы на веоь организм. Средний живой вес коровы подопытной группы составил 511,4*2.5 кг, а контрольной -512,4*3,4 кг.

Ори изучении влияния внутрицистерналытй иммунизации на лактационный период и удой молока.было отпячено, что лактационный период до иммунизация был 293,4*3,3 дня, посла иммунизация - 305*3,3 дня. Средний' показатель длительности лактационного периода по контрольной группе в соответствующие периоды составил 305,7*1,9 и 306,5*3,7 дня.

На удой молока внутрида«термальная вжуяиэация не оказывала существенного влияния. Так, за 1973 год средняя молочная продуктивность в подопытной группе составила 3051*110 кг, а по контрольной - 3X86*132 кг молока. После иммунизации средняя продуктивность коров подопытной Г1уппы составила 355§tI63, а контрольной - 3515*202 кг молока. Не были запечены существенные различия при сопоставлении удоев за первые три месяца лактации у вэвммуяязирОБЗНКИх и иммунизированных коров,

Вну трицистернальная иммунизация не оказывала влияния и на содержание жира в молоке. Если средний показатель жира в молоке подопытных коров до иккуниэаиии составлял 3,86+O.CSEÍ, а после имг^гнизаши - 3,9*0,0£Й, то по контрольной группе в тот показатель соответственно был 3,82*0,045?! и 3,86*0,0357.

При с ре внении ёмкости выкенн до и после иммунизации существенных различий не установлено. Не замечены различая в ёмкости иммунизированной доли по сравнению с соседними ае-иммупизпрованными, не были отмечены различия в в скорости молокоотдачи,

Изучение последствий внутрицистернаяьной икдуяизации показало, что вахцинапия стельных коров не оказывала отрицательного влияния на беременность коров, рост и развитие плода а новоро«ленных телят.

Клинические наблюдения показали, что телята, родившиеся от коров иммунизированных колипадати^озным антигеном, не болели желудочно-кишечными заболеваниями. По этой группе была 100% сохраняемость телят в то время как в контрольной группе регистрировали заболевания телят а сохранность состарила 96^. В месячном роз росте средний адвоЯ вес подопытного теленка был 52,3|±0,67 кг., а контрольного - 48,5*1,05 (Р? 0,01).

ВЫВОДЫ

1. В сыворотке крови и молозива невмму ни з иро ьаиных коров содержатся естественные противокол дпаратвфозлые агглютинины, татр которых достигает максимума во время отёла я составляет в сыворотке молозива первого удоя 1:520*82 к антителу кишечной палочки и 1:Э73±44 к паратифозному антигену, а в сыворотке крови эта показатели примерно в два раза ниже.

2. При внутрицистернальном введений антигена он улавливается в корпускулярном состояния на четвертые сутки после иммунизации в паренхиме иммунной четверти вымени и в регионарных лимфатических узлах, в дисперсном состоянии он проникает в иммунокомпетентные органы ( селезенку, контррегвокар-ные лимфатические узлы) я вовлекает их в иммунологический ответ,

S. Синтез специфических антител происходит непосредственно в паренхиме молочной железы. Об атом свидетельствует то, что более 50f£ антителосодераащих клеток находится в паренхиме иммунизированной четверти шменк, а титр агглютининов в сыворотке молозива в иммунной доле вымени более чем в шесть раз выше, чей в не иммунизированной.

4. Иммуногенез у внутрицистернально иммунизированных ко-' ров сопровождается накоплением в лимфоцитах и секреторном эпителии молочной железы РНК, усилением фагоцитоза, развитием плазыоцитарной реакции в лиыфоидных органах я интерсти-цяальной ткани молочной железы, накоплением специфических агглютининов в сыворотке крови, молозива и молока,

5. Ассоциированное введение антигенов не вызывает конкуренции ме$ду антигенами, более того организм равноценно реагирует на каждый яэ яях выработкой специфических агглютининов. Фагоцитоз цо отношению к паратифозному микроорганизму при данной иммунизации не ниже, чем при моновалентном введении антигенов. .

6. Внутрицистарнальное введение ассоциированного антигена вызывает более интенсивное накопление противокодипара-ти$оэн£х агглютининов в сыворотке крови и молозиве (средний титр агглютининов составляет соответственно 1:3232« 1:21333 к антигену из кишечной палочки и 1:2653, 1:17920 к

паратифозному антиген^, чем при подкожной имгуниэаши этил, же антигеном (титры агглютининов были меньше в сыворотке крови в 1(9 раза, а в сыворотке молозива - в 3,3 раза по отношению к кишечному антигену и в 3,9 раза - к паратифозному антигену),

}. Ыехду титрами агглютининов в сыворотке крови и молозива имеется п ряыопр опориион ал ьнал зависвкость; чем ваше их уровень в сыворотке крови, тем выше и в молозиве, но во всех случаях, как правило, в сыворотке молозива содержится больше агглютининов, чем в сыворотке крови.

8. У коров, иммунизированных колипаратифозными антигенами, сыворотка молозива характеризуется хорошо выраженными бактерицидными свойствами. При этом у коров иммунизированных -внутри цп с термально сыворотка молозива по бактерицидным свойствам выше, чем у коров, вакцинированных подкожно. Самый высокий показатель средней напряженности бактерицидной актив. -ности был в сыворотке молозива коров, иммуниэирорэнных внутря-цистернельно ассоциированным антигеном, в то время как сыворотка молозива неиммунизированных коров обладала слабыми бактерицидными свойствами.

9. Фагоцитарная активность лейкоцитов по отношении к паратифозному микроорганизму у коров, тонизированных колипа^ ратидознымк антигенами, значительно усиливается после второй-иммунизации и достигает максимума во время отёла.

10. Внутри цистермальная ионизация коров гретыми антигенами не оказывает отрицательного действия на продолжительность лактоционного периода, на ёмкость вымени, на'скорость молокоотдачи, на процент жара в молоке и молочную продуктивность,

11. Естественные агглютинины в сыворотке кроЕИ телят, родившихся от не вакцинированных норов, появляются в небольших титрах после приёма молозива и 'удерживаются недолго; в трехнедельном возрасте они ужо не обнаруживаются. Показатели.

.фагоцитоза значительно нижа, чем у телят, родившихся от иммунизированных коров. "

12. У телят, родившихся от коров иммунизированных внутри-цистарнально ассоциированным колипаратиФоэним антигеном, титр« агглютининов быт ( к па 1атифозному ентггсну 1:4000

и к колибантериозноиу 1:5466) в то время, как у телят, полученных от коров имкунизировашшх аодкодао, этот показатель был в среднем более, чем в пять раз ниже,

13, Интенсивность опсоно-фагоцитарной реакции по .отношению к колипаратифозным микроорганизмам была выше у телят, родившихся от коров иммунизированных колипаратифозными антигенами внутрццистернальао, чем у телят, полученных от коров, иммунизированных подкожно.

14, Колоотральный иммунитет телят, родившихся от иммунизированных коров, в постна та ль ный период способствует лучшей сохранности их и позволяет получить дополнительные привесы в течение месяца в среднем 3,6 кг на каждом теленке.

15, Озвученная взвесь паратифозных бактерий была в реакции агглютинации с рецепторами О и Н более акт йен ой по сравнению с не сэ ну че иными антигенами.

16, Из молозива коров, иммунизированных колипаратифозным антигеном, возможно получить дактоглобулин, бактерицидные

я превентивные свойства которого не уступают гамма-глобуля-ау, выделенному из гипериммунной сыворотки крови.

СПИСОК опубликованных работ со теш диссертации

1. Содержание агглютининов в сыворотке крови, молозива и молока при цодкожном л внутрвцясторнальном введении антигенов. Исследования в области ветеринарии. Тр.Одесского сельскохозяйственного института, Одесса, 1975,

2. Изучение влияния ультразвука на микроорганизмы кишечно-паратифозной грушш. Исследования в области ветеринары Тр. Одесского СХИ, Одесса, 1975 ( в соавторстве).

3. Роль молочной жалеем в выработке иммунитете при внутри-цистарнальном введения антигена. Яурвал "Ветеринария", 1975, * 10.

4. К вопросу о молочной продуктявнооти коров, иммунизированных внутрицистервально. Сб.ОСХИ ( в печати).

Материалы диссертации доложены:

1. На научных конференциях Одесского сельскохозяйственного института в 1974, 1975 гг.

2. На научной конференции "Молодые ученые г.Одессы -сельскохозяйственно^ производству", Одесса,1974.

3. На научной.конференции Одесского научно-исслвдова-тельского института вирусологии и эпидемиологио, им. Н.И.Мечникова, Одессе, 1976.

34.02.76 г. формат 60 х 84'1/16 Обьеч 1,5 п.

Заказ У78С Тираж 250 экз. Гортипография Одесского мллолиграфи адата Ленина,. --"