Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Разработка и изучение эффективности препаратов из крови животных для повышения резистентности новорожденных телят и поросят

На правах рукописи

и1-»"

ШУЛЬГА НИКОЛАИ НИКОЛАЕВИЧ

РАЗРАБОТКА И ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ ИЗ КРОВИ ЖИВОТНЫХ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

2 6 НОЯ 2009

Екатеринбург - 2009

003484613

Работа выполнена в лаборатории иммунологии ГУ Дальневосточный зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук (ГУ ДальЗНИВИ)

Научный консультант: доктор биологических наук

Горковенко Наталья Евгеньевна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Ощепков Владимир Григорьевич

доктор ветеринарных наук, профессор Шкпль Николай Алексеевич

доктор ветеринарных наук Шушарнн Александр Данилович

Ведущая организация: ГНУ Научно-исследовательский

ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ РАСХН, г. Нижний Новгород

Защита состоится « X г. в часов на заседании

диссертационного совета Д 006.099.01 при Уральском научно-

исследовательском ветеринарном институте РАСХН по адресу:

620142 г. Екатеринбург, ул. Белинского, 112а,

тел./факс (343) 257-64-82, 257-82-63,

адрес сайта института: http://www.urnivi.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уральского научно-исследовательского ветеринарного института РАСХН

Автореферат разослан « » /^МУ/и 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат ветеринарных наук

Печура Е.В.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Получение и выращивание молодняка, особенно в условиях крупных ферм требует соблюдения определенных технологических условий, основными из которых являются - сбалансированное полноценное кормление, защита от болезней, искусственная регуляция численности. Однако практика ведения продуктивного животноводства показывает, что даже при строгом соблюдении всех условий регистрируется стабильно высокая заболеваемость молодняка желудочно-кишечными и респираторными инфекциями. При этом ведущее значение в настоящее время имеют не классические, а факторные инфекции, вызываемые широко распространенными в природе условно патогенными бактериями (УПБ). В числе выделяемых УПБ ведущее место занимают многочисленные представители семейства Enterobacteriaceae, неферментирующие бактерии рода Pseudomonas и Acinetobacter, грамположительная кокковая микрофлора и их ассоциации [Джупина С.И., 2001; Шахов А.Г., 2002; Бедоева З.М. и др. 2006; Золотухин С.Н., Пульчеровская Л.П., Каврук J1.C., 2006; Красиков А.П., 2007; Макаров Ю.А., Горковенко Н.Е., 2008; Олейник A.B., 2009].

Чтобы противостоять многим этиологическим агентам, новорожденные поросята и телята должны обладать достаточным потенциалом резистентности, который реализуется в высоком уровне иммунного статуса. Рост и развитие новорожденных поросят и телят осложнен тем, что они практически лишены собственной гуморальной иммунной защиты. Поэтому вся нагрузка ложится на неспецифические факторы и колостральный иммунитет. От уровня иммунной защиты зависит их реакция на стрессовые факторы и тяжесть проявления желудочно-кишечных и респираторных болезней [Костына М.А., 1999; Храмцов В.В. и др. 2006; Федоров Ю.Н. и др., 2006; Карпуть И.М. и др., 2006; Ануфриев П.А., 2006; Паршин П.А. и Паршина В.И. 2006; Мотова E.H., 2008; Петрянкин Ф.П., 2008].

Проблеме желудочно-кишечной патологии новорожденных телят и поросят посвящены работы отечественных авторов [Шахов А.Г., 2002;

Гаффаров Х.З. и др. 2002; Овод A.C., 2002; Терехов В.Н., 2002; Хусаинов В.Р., 2005; Ануфриев А.И., и др. 2006; Ануфриев П.А., 2006; Красочко П.А., Ляман A.M., 2006; Мусаева М.Н., 2008; Макаров Ю.А., Горковенко Н.Е.и др. 2008]. Однако многие вопросы борьбы с этими заболеваниями не решены в полной мере и проводимые мероприятия по профилактике не достигают еще необходимого положительного эффекта

Успех борьбы с заболеваниями молодняка во многом определяется эффективностью применяемых химиотерапевтических средств. Однако в последнее время традиционно применяемые антибактериальные препараты часто оказываются неэффективными, поскольку возбудители проявляют к ним резистентность, массовое их применение способствует селекционированию устойчивых штаммов, распространению полирезистентности у микроорганизмов, негативно влияет на иммунный статус животных. Это диктует необходимость разработки альтернативных экологически безопасных препаратов, обладающих не только высокой лечебной эффективностью, но и выраженным профилактическим действием.

Все выше перечисленное явилось основанием для создания новых сывороточных препаратов и обоснования их применения для профилактики и лечения иммунодефицитов и связанных с ними заболеваний новорожденных телят и поросят.

Цель и задачи исследования. Цель исследований состояла в разработке препаратов из крови животных и научно обоснованных схем их применения для коррекции иммунного статуса и профилактики массовых болезней новорожденных животных, вызываемых условно патогенной микрофлорой. Для достижения намеченной цели были определены следующие задачи: - теоретически обосновать и разработать новые сывороточные препараты с последующей экспериментальной и клинической оценкой их фармакологических свойств и эффективности для профилактики иммунодефицитов и массовых желудочно-кишечных расстройств у

новорожденных телят и поросят, вызываемых условно патогенной микрофлорой;

- изучить особенности динамики иммунных белков в сыворотках крови и молозива коров и свиноматок в зависимости от их физиологического состояния;

- изучить особенности динамики иммуноглобулинов в сыворотках крови новорожденных телят и поросят и на этой основе разработать простой и доступный способ оценки иммунного статуса новорожденных поросят и телят в условиях производства;

- изучить влияние разработанных препаратов из крови свиней и крупного рогатого скота на неспецифическую резистентность новорожденных поросят и телят;

- оценить в производственном эксперименте их лечебную и профилактическую эффективность.

Научная новизна работы. Разработан новый сывороточный препарат -концентрированная сыворотка крови (КСК), получаемый методом медленного замораживания и размораживания, превосходящий по содержанию иммуноглобулинов другие аналогичные препараты в 2-3 раза и содержащий в своем составе антитела к условно патогенным бактериям, вызывающим массовые желудочно-кишечные заболевания у молодняка крупного рогатого скота и свиней.

Научно обоснована и экспериментально доказана перспективность перорального применения концентрированной сыворотки крови новорожденным поросятам и телятам с учетом естественного механизма абсорбции иммунных белков.

Разработана методика выявления гипоиммупоглобулинемии у новорожденных телят и поросят по показателю общего белка в сыворотке крови, на основе использования прямой зависимости уровней иммуноглобулинов в сыворотках крови новорожденных животных от количества общего белка в них.

Уточнена динамика иммуноглобулинов в сыворотках крови стельных коров и супоросных свиноматок до и после отела и опороса.

Прослежена динамика иммунных белков в сыворотке крови коров в течение всего периода стельности.

Установлена этиологическая структура массовых желудочно-кишечных заболеваний у молодняка крупного рогатого скота и свиней бактериального происхождения.

Новизна выполненных исследований подтверждена тремя патентами на изобретения: «Способ оценки уровня естественной резистентности организма животных в ранний постнатальный период» (патент на изобретение Российской Федерации № 2260185); «Способ получения концентрированной сыворотки крови» (патент на изобретение Российской Федерации № 2125454); «Способ повышения резистентности организма новорожденных поросят» (патент на изобретение Российской Федерации № 2142805).

Теоретическая и практическая значимость работы. Выявленные в результате исследований закономерности изменения содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови беременных животных и рожденного от них приплода расширяют научные представления по ряду вопросов физиологии и биохимии. С учетом выявленных закономерностей предложен способ оценки уровня естественной резистентности организма животных в ранний постнатальный период.

В результате проведенных исследований животноводству предложена концентрированная сыворотка крови (КСК), обладающая выраженной лечебной и профилактической эффективностью, прошедшая широкое производственное испытание и предназначенная для коррекции иммунного статуса, профилактики и лечения острых кишечных расстройств у новорожденных телят и поросят.

Разработан стандарт ДальЗНИВИ «Сыворотка крови концентрированная (КСК)», регламентирующий технологический процесс производства, показатели качества и методы их контроля. Разработаны методические рекомендации, «Изготовление и применение концентрированной сыворотки

крови животных», которые утверждены Ученым советом ДальЗНИВИ (протокол № 2 от 25.03.05). Разработаны и утверждены Ученым советом ДальЗНИВИ (протокол № 3 от 03.07.2008) рекомендации «Смешанные кишечные инфекции новорожденных телят». Разработаны и утверждены Ученым советом ДальЗНИВИ (протокол № 3 от 06.03.2009) методические рекомендации «Руководство по изготовлению и применению концентрированной сыворотки крови крупного рогатого скота», и одобрены решением подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 1 от 30 марта 2009). Разработаны и утверждены Ученым советом ДальЗНИВИ (протокол № 3 от 06.03.2009) методические рекомендации «Методические рекомендации по изготовлению и применению препарата из крови свиней», и одобрены решением подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 1 от 30 марта 2009).

Основные положения, выносимые на защиту:

- данные по динамике иммуноглобулинов в сыворотках крови и молозива, животных в разные периоды беременности, до и после рождения приплода;

- характеристика белкового состава сывороток крови поросят и телят в ранний постнатальный период;

- этиология массовых желудочно-кишечных заболеваний, вызываемых условно патогенными бактериями;

- результаты экспериментальных исследований по профилактике иммунодефицитов и желудочно-кишечных заболеваний, вызываемых условно патогенной микрофлорой, у новорожденных поросят и телят концентрированными сыворотками крови (КСК).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на краевом совещании ветеринарных врачей (г. Хабаровск, 1994); областном совещании ветеринарных врачей (г. Благовещенск, 1995);

областном совещании свиноводов (г. Благовещенск, 1995); научной сессии Дальневосточного отделения РАСХН, посвященной 60-летию Дальневосточного зонального научно-исследовательского ветеринарного института (г. Благовещенск, 1995); научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарии» (г. Новосибирск, 1997); научно-практической конференции «Актуальные вопросы профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных животных», посвященной 50-летию Калининградской научно-исследовательской ветеринарной станции (г. Калининград, 1998); международной научной конференции «Болезни животных Дальнего Востока», ДальГАУ (г. Благовещенск, 1999); совещании сотрудников ДальЗНИВИ и работников Госветслужбы по проблемам диагностики и лечения (г. Благовещенск, 2005); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ (г. Краснодар, 2006); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных», посвященной 100-летию академика ВАСХНИЛ Я.Р. Коваленко (г. Москва, 2006); межведомственной научно-практической конференции «Современные проблемы исследований в биологии», (Благовещенск, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 29 научных работ, из них 10 в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ (ж. «Вестник РАСХН» - 3; ж. «Молочное и мясное скотоводство» - 2, ж. «Доклады РАСХН» - 1, ж. «Свиноводство» - 2, ж. «Ветеринария» - 2) и три патента РФ на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 274 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их анализа, заключения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы, включающего 291 наименований отечественных и 211 иностранных авторов, и приложения.

Работа содержит 25 таблиц и 11 рисунков. В приложении представлены документы внедрения результатов исследования.

Автор выражает искреннюю признательность и благодарность академику РАСХН, доктору ветеринарных наук, профессору Ю.А. Макарову за всестороннюю помощь и поддержку в работе, а также коллективу ДальЗНИВИ за методическую и практическую помощь в проведении исследований.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы н методы

2.1.1 Общий объем проведенной работы. Работа выполнена в лаборатории иммунологии ГУ Дальневосточный зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук. (ГУ ДальЗНИВИ) и на базе животноводческих хозяйств Дальневосточного региона (Амурской области, Хабаровского и Приморского краев) в течение 1993-2007, гг. в рамках государственных НТП «Ветеринарная медицина» 1991-1995 гг., 2001-2005 гг., 2006-2010 гг. (№ гос.рег. 019.10.050208, 01.2.003.06839, 01.2.007.00089).

В опытах использовали биологический материал от 1388 новорожденных поросят, 80 свиноматок, 345 телят и 80 коров. Всего исследовано 1200 проб сывороток крови свиноматок и 2080 проб сывороток крови коров, 640 проб сывороток молозива коров и 640 проб сывороток молозива свиноматок.

Производственные испытания концентрированной сыворотки крови проведены в трех хозяйствах Амурской области и Приморского края. В производственных испытаниях КСК использовано 600 новорожденных поросят и 205 новорожденных телят.

2.1.2 Материалы исследования. Материалом для гематологического, биохимического и иммунологического исследований служила кровь и её сыворотка, а так же сыворотка молозива.

От поросят и телят с диарейным синдромом для бактериологического исследования отбирали пробы фекалий непосредственно из прямой кишки стерильной ректальной петлей, помещали в транспортную среду и немедленно доставляли для исследования в лабораторию.

Состав и свойства разработанных сывороточных препаратов. Концентрированная сыворотка крови животных (КСК), является биопрепаратом, получаемым по криотехнологии, содержащим антитела в повышенной концентрации (в сравнении с АИС концентрация в КСК выше в 2,5-3 раза). КСК содержит иммунные компоненты против всех патогенов, персистирующих в популяции животных конкретных ферм, кроме того, КСК содержит все биологически активные вещества, присутствующие в нормальной сыворотке крови взрослых здоровых животных.

КСК получают из крови взрослых здоровых животных, предварительно проверенных на инфекционные и кровопаразитарные болезни в зависимости от эпизоотической ситуации в хозяйстве.

Дозировка перорально: - поросятам 5 мл два раза в сутки в течение 2-х первых суток жизни; телятам 50 мл два раза в сутки в течение 2-х первых суток жизни.

2.1.3 Методы исследования. Выполнены следующие исследования:

Гематологические исследования. В пробах крови поросят и телят подсчитывали общее количество эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, выводили лейкоцитарную формулу по общепринятым методикам.

Биохимические исследования сыворотки крови включали определение общего белка рефрактометрически, иммуноглобулинов с помощью цинк-сульфатного теста [Блинов Н.И., 1982], белковых фракций (включая глобулины си, а2, (3, уь у2) электрофорезом в геле агарозы [В.М. Чекишев, 1977].

Биохимические исследования сыворотки молозива включали определение общего белка рефрактометрическим методом и белковых фракций, включая

иммуноглобулины основных классов с помощью электрофореза в геле агарозы.

Иммунологические исследования сыворотки крови включали определение фагоцитарной активности нейтрофилов и бактерицидной активность сыворотки крови [Смирнов П.Н. с соавт.,1989], циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) по методике П.М. Барановского и B.C. Данилишиной (1983).

Бактериологические исследования. Выделение бактерий из биологического материала и изучение их культурально-морфологических и биохимических свойств проводили общепринятыми методами бактериологического исследования. Посев исследуемого материала проводили из разведений на плотные питательные среды (Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит агар, энтерококк агар, солевой агар, агар с сорбитолом, иерсиниозная среда). Идентификацию выделенных микроорганизмов до вида проводили с использованием 23 биохимических тестов и «Определителя бактерий Берджи» (М.,2001), «Определителя зоопатогенных микроорганизмов» [М.А. Сидоров с соавт., 1995]. Изучение патогенности выделенных культур бактерий проводили с помощью биологической пробы на белых беспородных мышах. Для определения чувствительности выделенных культур к антибиотикам использовали метод диффузии в агар (МУК 4.2.1890-04).

Для изучения динамики иммуноглобулинов в сыворотках крови свиноматок исследования проводили ежедневно за неделю до опороса, через 40 мин. после опороса и через каждые 24 часа в течение недели после него.

Для изучения динамики иммуноглобулинов в сыворотках крови коров, исследования проводили по месяцам, в течение всего периода стельности, по неделям в последний месяц стельности, по суткам в последнюю неделю стельности, в первые минуты после отела и по суткам в течение недели после отела.

Параллельно исследовали динамику иммуноглобулинов в сыворотке молозива. Для получения сыворотки молозиво нагревали до 38°С в водяной бане и добавляли равный объем 0,1 Н раствора соляной кислоты и 1 каплю насыщенного раствора пепсина на 5 мл смеси. После центрифугирования в сыворотке молозива определяли содержание общего белка, белковых фракций, иммуноглобулинов основных классов.

Научно-производственные эксперименты для изучения белкового состава сывороток крови новорожденных поросят до и после приема молозива и у поросят с признаками желудочно-кишечных расстройств были сформированы три группы животных, первая группа - 10, вторая группа - 50, третья группа - 250 поросят. В сыворотках крови 2-3-суточных поросят определяли содержание белка и белковых фракций. Наблюдение за животными велось в течение 35 суток (до отъема). В течение этого периода учитывались все случаи заболевания и гибели поросят. У животных этих групп изучали зависимость уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови от уровня общего белка, а также зависимость сохранности поросят от уровня общего белка и иммуноглобулинов.

Научно-производственный эксперимент по изучению белкового состава сыворотки крови телят до и после приема молозива и у телят с признаками расстройства деятельности желудочно-кишечного тракта, по принципу аналогов были сформированы три группы телят по 40 животных в каждой. Первая - новорожденных животных, не получавших молозива матерей при рождении. Вторая - новорожденных телят получавших молозиво матерей с признаками расстройства пищеварения. Третья - клинически здоровых новорожденных животных получавших молозиво матерей. В крови телят определяли содержание гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, выводили лейкоформулу, в сыворотке крови определяли количество общего белка и белковых фракций.

Для изучения влияния на организм новорожденных поросят иммунных препаратов, полученных из крови взрослых клинически здоровых животных,

были сформированы по принципу аналогов 6 групп по 100 новорожденных поросят в каждой. В первые двое суток жизни поросятам 1 группы применяли концентрированную сыворотку крови свиней перорально в дозе 5 мл два раза в сутки; 2 и 3 групп аллогенную иммунную сыворотку крови перорально и внутримышечно в дозе 5 мл два раза в сутки; 4 и 5 групп неспецифический гамма-глобулин, в дозе 1 мл два раза в сутки перорально и внутримышечно. Шестой группе поросят указанные выше препараты не применялись, она служила контролем. Через две недели в 16-суточном возрасте у поросят всех шести групп исследовали сыворотку крови на содержание общего белка и белковых фракций, определяли фагоцитарную активность нейтрофилов и бактерицидную активность сыворотки крови.

Для изучения влияния концентрированной сыворотки крови (КСК) на организм новорожденных телят, было сформировано по принципу аналогов 7 групп по 15 животных в каждой. Одна группа телят служила контролем, остальным животным сразу после рождения применяли КСК перорально в дозах 20, 50, 100 мл в смеси с молозивом и самостоятельно 2 раза в сутки в течение 2-х суток подряд. Через две недели после применение КСК у телят всех групп (включая контрольную) брали кровь и определяли содержание в ней эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов и лейкоформулу. В сыворотке крови определяли общий белок, белковые фракции, фагоцитарную активность нейтрофилов и бактерицидную активность сыворотки крови.

Наблюдение за животными контрольной и опытных групп вели в течение 2-х месяцев, учитывали все случаи заболевания, характер течения болезни, продолжительность лечения и исход.

Антитела в концентрированных сыворотках крови к бактериальным антигенам выявляли с помощью РА на стекле, к вирусным антигенам с помощью РТГА и РНГА. Согласно наставлений к наборам диагностикумов.

Математическая обработка цифровых данных включала определение средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (т). Проверку принятой гипотезы осуществляли через степень различия между

изучаемыми объектами с помощью критерия Стьюдента (I). Взаимное влияние различных факторов определяли через коэффициенты корреляции.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1 Изучение белкового состава сывороток крови и молозива свиноматок до и после опороса

В результате проведенных исследований установлено, что за неделю до опороса уровень иммуноглобулинов составил 28,2+0,9 % от общего количества белка и, постепенно уменьшаясь, достигал минимума через 40 мин. после опороса (22,4±1,1 %). Снижение уровня иммуноглобулинов в течение 6 суток перед опоросом составило 20,1 %. Восстановление количественных показателей уровня иммуноглобулинов началось сразу же после опороса.

Параллельно с изучением содержания ^ в сыворотке крови супоросных свиноматок, исследовали молозиво. Установлено, что наибольшее количество иммуноглобулинов в молозиве содержится в период опороса. Содержание иммуноглобулинов в молозиве в период опороса в процентном отношении к уровню общего белка в сыворотке молозива составило 59,4±2,0 %. Через 24 часа после опороса уровень иммуноглобулинов составлял 49,7+1,3 %, а через 48 часов - 41,0+1,0 %. Начиная с 48 часов после опороса и до 168 часов уровень иммуноглобулинов в сыворотке молозива практически не изменялся.

Проведенные экспериментальные исследования на группе супоросных свиноматок позволили в динамике установить закономерность снижения уровня иммуноглобулинов в крови супоросных животных и их переход в молозиво. При этом установлено, что минимальный уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови свиноматок по времени соответствует их максимальному уровню в сыворотке молозива. Установлена обратная корреляционная зависимость (г = - 0,97) уровней иммунных белков в сыворотках крови и молозива. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке молозива зависит от концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови

свиноматок, что полностью соответствует современным представлениям о происхождении иммуноглобулинов молозива [Попович Д., 1972; Рахманкулова Л.Д., 1975; Пивовар Л.М., 1986; Холод В.М., Князева Л.А., 1989; Урбан В.П., Рудаков В.В., Карпенко Л.Ю., 1990; Nordbing F., Olson В., 1958; Halliday R., 1965; Szehy A., 1979]. Вышеуказанная зависимость графически отражена на рисунке 1.

А содержание иммуноглобулинов в крови • содержание иммуноглобулинов в молозиве

Рисунок 1- Динамика уровней иммуноглобулинов в крови и молозиве свиноматок до и после опороса в % от содержания общего белка. Примечание: о. - опорос.

Рассматривая механизм передачи иммуноглобулинов матери потомству, как единый генетически обусловленный процесс, мы предполагаем, что начало периода относительной стабилизации количества иммуноглобулинов в сыворотке крови свиноматок во времени соответствуют прекращению процесса абсорбции белков тонким отделом кишечника новорожденных поросят.

Данное предположение подтверждается динамикой уровня иммуноглобулинов в молозиве свиноматок и периодом стабилизации количества иммуноглобулинов в молозиве, который определяется в пределах 48 часов после опороса. Учитывая временной период абсорбции иммуноглобулинов кишечником новорожденных поросят, пероральное

применение иммунных средств с целью коррекции уровня колострального иммунитета целесообразно проводить в первые двое суток жизни животных.

2.2.2 Изучение белкового состава сывороток крови и молозива коров до и после отела

Динамика иммунных белков в сыворотке крови коров изучалась с первого по девятый месяцы стельности. В последний месяц - каждую неделю и в последнюю неделю по суткам, затем в первые минуты после отела и по суткам в течение недели после него.

Содержание иммуноглобулинов в сыворотках крови стельных коров подвержено колебанию по месяцам (рис. 2). Наиболее существенное снижение уровня иммуноглобулинов в крови коров наблюдалось за двое суток до отела на 20,6 % и первые минуты после него - 32,1 %, в сравнении с уровнем иммунных белков в крови за 4 недели до отела. В целом снижение уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови стельных коров от начала стельности до отела составило 33,4 %.

Самый низкий уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови коров наблюдался в первые минуты после отела, затем уровень постепенно повышался и к третьим суткам стабилизировался. Рост содержания иммунных белков к третьим суткам составил 36,7 %. В дальнейшем до 7 суток уровень иммуноглобулинов в крови отелившихся коров существенно (достоверно) не изменялся и соответствовал среднему уровню антител в крови коров в среднем по ферме.

60 50 40 ^ 30 20 10 0

месяцы недели сутки отел сутки

—♦— 1д в крови -о- 1д в молозиве

Рисунок 2 - Динамика иммуноглобулинов в сыворотках крови и молозива коров до и после отела в % от уровня общего белка.

Максимальное количество иммуноглобулинов в сыворотке молозива содержалось в молозиве первого удоя, общее количество гамма-глобулинов превышало половину всех белков сыворотки молозива. Затем постепенно содержание иммуноглобулинов в сыворотке молозива понижалось и стабилизировалось к третьим суткам после отела. Общее снижение уровня иммунных белков в сыворотке молозива к третьим суткам составило 33,2 % (рис. 2).

В результате проведенных исследований установлена обратная зависимость с высокой степенью корреляции (г= - 0,92) уровня содержания иммуноглобулинов в сыворотке молозива от уровня иммунных белков в сыворотке крови коров.

Минимальное содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови соответствовало максимальному их содержанию в сыворотке молозива.

Установлено временное соответствие периодов стабилизации иммуноглобулинов в сыворотках крови и молозива к третьим суткам после отела, что соответствует по времени прекращению абсорбции иммуноглобулинов тонким отделом кишечника новорожденных телят и косвенно подтверждает мнение многих исследователей о завершении

246 8| 32 11 765432 1||1 234567

действия уникального механизма абсорбции иммуноглобулинов из молозива матерей к первым 48-72 часам жизни новорожденных телят.

2.2.3 Белковый состав сывороток крови новорожденных поросят

Изучение белкового состава сыворотки крови у новорожденных поросят мы провели до и после приема молозива, а также у поросят с признаками диареи. С этой целью были сформированы три группы животных: первая - 10 новорожденных поросят, не получавших молозива матери при рождении; вторая - 50 новорожденных с признаками диареи, получавших молозиво; третья - 250 клинически здоровых новорожденных поросят после приема молозива матери.

В сыворотке крови новорожденных поросят, не получавших молозиво

матерей при рождении, иммуноглобулины не обнаружены (табл. 1).В группе

клинически здоровых поросят, получавших молозиво матери в первые часы

жизни, содержание иммуноглобулинов в в сыворотке крови через 48 часов

составило 23,9+0,3 г/л, что значительно превышало уровень у поросят во

второй группе с признаками диареи -4,5±0,1 г/л (табл. 1).

Таблица 1 - Содержание общего белка и белковых фракций в сыворотке крови новорожденных поросят

Показатели 1 группа 2 группа 3 группа

Количество животных 10 50 250

Общий белок, г/л 35,8±1,3** 40,9±1,0** 65,4±1,2

Альбумины, г/л 10,1±0,1 16,8±0,9 20,9+0,9

Глобулины, г/л СС1 8,6+0,2 6,6±0,1 6,8±0,7

а2 8,7±0,Г 6,8+0,2 7,2±0,1

Р 8,4±0,3* 6,2±0,4 7,2±0,5

У.(0,) — 3,7±0,Г* 17,0±0,3

У2(02) — 0,8±0,Г* 6,9+0,2

2 У,+72 — 4,5±0,Г* 23,9+0,3

%Ху,+72 — 11,0+0,2" 36,5±0,2

Примечания: - разница с 3-й группой достоверна (р<0,001);

* - разница с 3-й группой достоверна (р<0,05).

Резкое различие в содержании иммуноглобулинов в сыворотке крови больных и клинически здоровых поросят можно объяснить нарушением абсорбции поступивших с молозивом антител. Новорожденные поросята, в сыворотке крови которых наблюдается сниженный уровень иммуноглобулинов (до 4,5±0,1 г/л), чаще заболевали различными заболеваниями и в первую очередь гастроэнтеритами.

Таблица 2 - Зависимость содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови новорожденных поросят от уровня общего белка в ней

Показатели 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа 5 группа

Количество животных 10 24 125 194 125

Общий белок, г/л 30-40 40-50 50-60 60-70 70-80

Альбумины, г/л 12,8±0,7 16,8±0,5* 19,5±0,3*" 22,6+0,2*" 27,5±0,3*"

Глобулины, г/л а. 2,6±0,3 3,9+0,3" 4,3±0,2"' 4,7+0,2"* 4,3± 0,3*"

а2 3,9±0,7 4,7±0,4 5,3±0,4 5,8+0,3* 6,4± 0,3

Р 3,5±0,6 4,2±0,3*" 5,6±0,2*" 6,1±0,2*" 6,9± 0,3"*

7: (С,) 9,3±0,7 12,6±0,5*" 1б,8±0,4'" 20,4±0,3*" 23,7±0,5***

72 (02) 3,2+0,3 3,6+0,5 4,3+0,3" 5,3+0,2*" 6,3± 0,3*"

2 71+72 12,5±0,6 16,2±0,5*" 21,1 ±0,4*" 25,7±0,3*" 30,0±0,4*"

% 2 71+72 31,3±0,4 32,4±0,4 35,2±0,3'" 36,7±0,3*" 37,5±0,4'"

Примечания: "'-разница с 1-й группой достоверна (р<0,001); ** - разница с 1-й группой достоверна (р<0,01); - разница с 1 -й группой достоверна (р<0,05).

С целью выявления зависимости количества иммуноглобулинов в сыворотке крови от общего белка в ней нами был проведен опыт на 478 новорожденных поросятах. Для этого поросята были разделены на пять групп по содержанию общего белка в сыворотках крови.

В результате опыта установлено, что уровень р - и у - глобулинов в сыворотке крови находится в прямой зависимости от содержания общего белка в ней, при коэффициенте корреляции г=0,97.

19

Так, животные, в сыворотках, крови которых уровень общего белка не превышал 40 г/л, имели минимальное количество иммуноглобулинов (IgGi -9,3±0,7 г/л и IgG2 - 3,5±0,5 г/л) (табл. 2). Максимальное количество

иммуноглобулинов в сыворотках крови было у новорожденных поросят с уровнем общего белка до 80 г/л (IgGi - 23,7±0,5 г/л и IgG2 - 6,3±0,3 г/л).

У абсолютного большинства поросят содержание общего белка в сыворотках крови находилось в пределах 50-80 г/л. Уровень общего белка в сыворотках крови новорожденных поросят от 60 до 70 г/л мы определили как средний и приняли за точку отсчета при оценке напряженности колострального иммунитета. Содержание общего белка в сыворотке крови новорожденных поросят от 30 до 40 г/л соответствует состоянию гипогаммаглобулинемии тяжелой степени, от 40 до 50 г/л -гипогаммаглобулинемии средней степени, от 50 до 60 г/л -гипогаммаглобулинемии слабо выраженной и содержание общего белка от 60 до 80 г/л - нормогаммаглобулинемии. От общего числа исследованных поросят 33 % имели иммунодефицит различной степени тяжести.

Таблица 3 - Зависимость сохранности новорожденных поросят от содержания в сыворотке крови общего белка и иммуноглобулинов

Показатели 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа 5 группа

Количество животных 10 24 125 194 125

Сохранность, % 50 60 73 74 77

Общий белок, г/л 30-40 40-50 50-60 60-70 70-80

Глобулин у] (С,),г/л 9,3+0,7 12,6+0,5" 16,8+0,4*" 20,4+0,3"' 23,7+0,5"'

Глобулин У2 (С2), г/л 3,2+0,3 3,6+0,5' 4,3±0,3*' 5,3+0,2"* 6,3+0.3"'

2 71+72 12,5+0,6 16,2+0,5*** 21,1 ±0,4*** 25,7±0.3"' 30,0+0,4"'

% 17)^72 31,3+0,4 32,4±0,4* 35,2±0,3*** 36,7±0,3*" 37,5+0,4*"

Примечания: - разница с 1-й группой достоверна (р<0,001); - разница с 1-й группой достоверна (р<0,01); - разница с 1 -й группой достоверна (р<0,05).

В параллельно проведенных исследованиях нами также установлена прямая зависимость сохранности новорожденных поросят от уровня общего белка и иммуноглобулинов в сыворотке крови (табл. 3).

Животные с низким уровнем общего белка (30-40 г/л) и иммуноглобулинов С| и 02 (9,3+0,7 г/л и 3,2±0,3 г/л соответственно), имели самую низкую сохранность до отъема - 50 %. Наилучшую сохранность до отъема (77 %) имели поросята с содержанием общего белка в сыворотке крови 70-80 г/л и иммуноглобулинов и вг - 2,3±0,3 г/л и 6,3±0,3 г/л соответственно (табл. 3).

Нами установлено, что сохранность новорожденных поросят находится в прямой корреляционной зависимости от содержания общего белка в сыворотке крови (г=0,92) и иммуноглобулинов в ней (г=0,93).

С повышением уровня общего белка в сыворотках крови новорожденных поросят, происходит статистически достоверное повышение содержания всех белковых фракций, но наиболее выраженное |5 - и у -глобулинов, в которых концентрируется основная масса антител. Высокое содержание пассивно приобретенных с молозивом антител с относительно одинаковыми показателями клеточных факторов защиты, которые генетически предопределены, обеспечивает адекватную резистентность новорожденных животных в ранний постнатальный период. Поэтому уровень общего белка в сыворотке крови может служить показателем уровня колострального иммунитета, позволяющего прогнозировать целесообразность применения животным иммунных средств.

2.2.4 Белковый состав сывороток крови новорожденных телят

С целью изучения белкового состава сывороток крови новорожденных телят были сформированы три группы новорожденных животных по принципу аналогов: первая — 40 новорожденных телят, не получавших молозива матерей при рождении; вторая - 40 новорожденных телят с признаками диареи, получавших молозиво матерей; третья - 40 клинически здоровых новорожденных телят, получавших молозиво матерей.

В сыворотке крови новорожденных телят, не получавших молозиво матерей при рождении, иммуноглобулины в крови не обнаружены (табл. 4). В группе клинически здоровых телят, получавших молозиво матерей в первые часы жизни, содержание иммуноглобулинов группы в в сыворотке крови через 48 часов составило 21,2 г/л (32,9±0,4 %).Что значительно превышает уровень у телят второй группы с признаками диареи 14,3±0,3 (25,8±0,8 %).

Таблица 4 - Содержание общего белка и белковых фракций в сыворотке крови новорожденных телят

Показатели 1 группа 2 группа 3 группа

Общий белок, г/л 36,1±0,8*" 54,5±0,7*** 69,3±1,0

Альбумины, г/л 15,4+0,8 17,2+0,5 24,5±0,7

Глобулины, г/л а, 6,8±0,5*" 7,7±0,7* 8,2±0,2

а2 6,7±0,б"* 6,9±0,6*" 7,4±0,6

Р 7,2±0,6*" 7,6+0,8" 8,0+0,8

У. (0,) — 10,1±0,2*** 15,0±0,7

У2(02) — 4,2±0,б" 6,2±0,8

2 у 1+уг — 14,3±0,3*** 21,2±0,6

%2у|+72 — 25,8±0,8*" 32,9±0,4

Примечания: - разница с 3-й группой достоверна (р<0,001);

- разница с 3-й группой достоверна (р<0,01);

- разница с 3-й группой достоверна (р<0,05).

Значительные различия в содержании иммуноглобулинов в сыворотках крови больных и клинически здоровых телят можно объяснить нарушением абсорбции иммуноглобулинов молозива в кишечнике новорожденных животных.

Новорожденные телята, в сыворотке крови которых уровень иммуноглобулинов 14,3±0,3 г/л и ниже чаще заболевали различными заболеваниями и в первую очередь расстройством деятельности желудочно-кишечного тракта.

С целью выявления зависимости количества иммуноглобулинов в сыворотке крови от общего белка в ней был проведен опыт на 120

новорожденных телятах. Для этого телята были разделены на четыре группы в зависимости от содержания общего белка в сыворотке крови.

В результате эксперимента было установлено, что уровень (3 и у-глобулинов в сыворотке крови новорожденных телят находится в прямой зависимости от содержания общего белка в ней (г=0,97). Телята, в сыворотке крови которых уровень общего белка 50 г/л и менее, имели минимальное количество иммуноглобулинов 14,3+0,2 (табл. 5). Максимальное количество иммунных белков в сыворотке крови было у телят с уровнем общего белка до 80 г/л.

Содержание общего белка в сыворотке крови новорожденных телят от 40-50 г/л соответствует состоянию гипогаммаглобулинемия выраженной, от 50 до 60 г/л гипогаммаглобулинемии слабо выраженной и содержание общего белка от 60 до 80 г/л - нормогаммаглобулинемии. В результате исследования у 50 % новорожденных телят наблюдался иммунодефицит различной степени тяжести.

Таблица 5 - Зависимость содержания иммуноглобулинов в крови новорожденных телят от уровня общего белка в ней (М±ш)

Показатели 1 группа 2 группа 3 группа 4 фуппа

Общий белок, г/л 40-50 50-60 60-70 70-80

Альбумины, г/л 14,2+0,5 18,0±0,6 19,9+0,3 22,5±0,7

Глобулины, г/л а. 6,7±0,7 7,5±0,5 7,5±0,8 8,2±0,2

а2 6,9±0,6 7,7±0,6 7,3±0,2 8,4±0,6

Р 6,1 ±0,8 7,2±0,б" 8,9±0,2" 9,0+0,8"*

Yi (G,) 10,1 ±0,2 11,3±0,3" 12,1 ±0,6" 15,0+0,7*"

Y2(G2) 4,2±0,2 5,0+0,5 5,1±0,1" 6,2±0,3**

£у1+у2 14,3 ±0,2 16,3+0,4" 17,2+0,6" 21,2+0,6"*

%£у,+у2 25,8±0,7 27,4±0,8 28,4±0,3" 32,9±0,4*"

Примечания: разница с 1 -й группой достоверна (р<0,001);

разница с 1-й группой достоверна (р<0,01).

В параллельно проведенных исследованиях нами также установлена прямая зависимость сохранности новорожденных телят от уровня общего белка и иммуноглобулинов в сыворотке крови (табл. 6). Телята с содержанием общего белка в крови 40-50 г/л и иммуноглобулинов 14,3±0,2 г/л имели самую низкую сохранность до двухмесячного возраста (60 %).

Лучшую сохранность до 60 суток имели телята с содержанием общего белка в сыворотке крови от 60 до 80 г/л и иммуноглобулинов от 17,2±0,6 г/л до 21,2±0,6 г/л. Установлено, что сохранность новорожденных телят коррелирует с уровнем содержания общего белка (г=0,93) и иммуноглобулинов (г=0,92) в сыворотке крови.

Таблица 6 - Сохранности новорожденных телят в зависимости от содержания в сыворотке крови общего белка и иммуноглобулинов.

Показатели 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа

Общий белок, г/л 40-50 50-60 60-70 70-80

Глобулины У, (бО, г/л 10,1 ±0,2 11,3+0,3** 12,1 ±0,6" 15,0±0,7*"

Глобулины 72 (02), г/л 4,2±0,2 5,0±0,5 5,1±0,1** 6,2±0,3"

£У1+У2 14,3±0,2 16,3±0,4" 17,2±0,б" 21,2±0,6***

% 2 7,+у2 25,8±0,7 27,4±0,8 28,4±0,3" 32,9±0,4***

Сохранност ь,% 60 80 100 100

Примечания: разница с 1-й группой достоверна (р<0,001); разница с 1-й группой достоверна (р<0,01).

Исследование сыворотки крови новорожденных телят показало, что содержание белковых фракций находится в прямой зависимости от содержания общего белка в ней. С повышением уровня общего белка в сыворотке крови новорожденных телят, происходит статистически достоверное повышение уровня всех белковых фракций, но наиболее выраженное р - и у - глобулинов, в которых концентрируется основная масса антител.

Высокое содержание пассивно приобретенных антител при относительно одинаковых показателях клеточных факторов защиты, которые генетически предопределены, обеспечивает адекватную резистентность животных в ранний постнатальный период их жизни. Поэтому уровень общего белка в сыворотках крови новорожденных телят может служить показателем уровня колострального иммунитета, позволяющего прогнозировать заболеваемость животных и целесообразность применения иммунных средств.

2.2.5 Спектр бактериальных патогенов, выделенных от больных животных

Бактериологические исследования фекалий от телят и поросят с диарейным синдромом проводились нами в периоды наибольшей заболеваемости и гибели новорожденных телят и поросят - весной, зимой и осенью. Проведенными исследованиями установлено, что расстройства пищеварительной системы бактериального происхождения имеют сложную этиологическую структуру.

В основном из фекалий больных телят и поросят выделяли грамотрицательные бактерии семейства Enterobacteriaceae. Из них чаще всего выделяли Escherichia coli - 78,3 % исследованных проб. 43,1 % выделенных E.coli принадлежали к энтеропатогенным серотипам - 02, 04, 08, 026, 035,055, 0101, 0117, 0139, 0142. На втором месте по частоте выделения стоят бактерии рода Citrobacter (37,4 %) и Proteus (36,2 %); на третьем -бактерии рода Enterobacter (18,1 %) и Klebsiella (14,4 %). Представители родов Edwardsiella, Hafiiia, Yersinia, Serratia выделены из 7,1 % проб, бактерии рода Morganella - из 1,2 % проб.

Грампозитивная факультативно анаэробная микрофлора энтеробиоценоза больных телят представлена следующими видами бактерий. Более чем из половины исследованных проб фекалий выделены бактерии

рода Streptococcus (21,9 %), Staphiloccocus (27,4 %) и Enterococcus (25,7 %). Анаэробные бактерии рода Clostridium выделены из 25 % проб.

В большинстве случаев (62,6 %) от больных телят и поросят выделялись ассоциации энтеробактерий и бактерий других семейств, включающих от 2 до 5 видов. В монокультуре в 37,4 % случаев выделяли энтеробактерии.

Чаще всего (53,3 %) из фекалий больных телят и поросят выделялись ассоциации из двух видов энтеробактерий, несколько реже из трех и четырех видов (24,4 и 20,1 % соответственно). В одном случае (2,2 %) была выделена ассоциация из пяти видов энтеробактерий.

Результаты проведенных исследований подтверждают полиэтиологичность желудочно-кишечных инфекций телят и поросят, что играет существенную роль при выборе средств и методов их лечения.

2.2.6 Технология изготовления концентрированных сывороточных препаратов

В основе технологии изготовления КСК лежит принцип максимального приближения её к производственным условиям, а именно запатентованная технология включает в себя использование морозильных камер с программированным снижением температуры, что в условиях фермы сделать крайне затруднительно. Поэтому нами разработана технология замораживания сывороток в бытовых холодильных камерах. Холодильные камеры необходимо настраивать таким образом, чтобы постоянная температура в них была в пределах -4 —6°С. В таких условиях сыворотки охлаждаются и замерзают в пределах 18-24 часов. При этом растворитель (вода) замерзает в виде крупных кристаллов, а сывороточные компоненты находятся между ними незакристаллизированными и легко отделяются при концентрировании от кристаллов воды.

2.2.7 Специфические антитела, содержащиеся в концентрированной сыворотке крови (КСК)

Принцип получения концентрированных сывороток основан на том, что КСК изготавливается из крови доноров отдельно взятой фермы и предназначается для использования молодняку этой же фермы.

При изучении бактериальных антигенов в сыворотках крови (КСК) обнаружены антитела к Esherichia coli в титре 1:32 трех вариантов изолированных от животных ферм, поставлявших кровь для изготовления концентрированных сывороток. Обнаружены антитела к Salmonella enteritidis в титре 1:16, что свидетельствует о наличии патогенных сальмонелл в хозяйствах. Обнаружены антитела к Proteus vulgaris в титре 1:32 и Proteus mirabilis в титре 1:32, а также к Citrobacter diversus в титре 1:32 и Klebsiella pneumoniae в титре 1:16.

Выявление антител в КСК к группе бактерий, относящихся к условно патогенным, свидетельствует об этиологической роли микрофлоры, окружающей новорожденный организм. УПБ являются мощным стимулятором иммунной системы, однако у новорожденных животных с иммунодефицитами развиваются патологические изменения в организме, а возможно и длительное бактерионосительство, что подтверждается наличием специфических антител у взрослых доноров крови.

2.2.8 Профилактика иммунодефицитов новорожденных поросят концентрированной сывороткой крови свиней (КСК)

Для проведения экспериментальных исследований с концентрированной сывороткой крови свиней (КСК) было сформировано шесть групп новорожденных поросят по 100 животных в каждой по принципу аналогов, одна из которых являлась контрольной.

Первой группе новорожденных поросят перорально применялась КСК, второй - АИСС перорально, третьей - АИСС внутримышечно, четвертой группе поросят - неспецифический гамма-глобулин перорально, пятой -

неспецифический гамма-глобулин внутримышечно, шестая группа поросят служила контролем, ей вышеперечисленные препараты не применялись.

По истечении 2 недель после применения КСК, АИСС и неспецифического гамма-глобулина у животных всех шести групп была взята кровь и проведено её исследование по следующим показателям: бактерицидная активность сыворотки крови; фагоцитарная активность нейтрофилов; общий белок и белковые фракции, включая иммуноглобулины. За поросятами велось наблюдение до 35-суточного возраста (до отъема), в этот период фиксировались все случаи заболеваний и гибели животных.

В результате исследования установлено, что новорожденные поросята, получавшие препараты крови, имели более высокие показатели естественной резистентности организма по сравнению с контрольными животными (табл. 7). Животные, которым перорально применяли КСК, имели самый высокий показатель уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови и, как следствие, наилучшую сохранность до отъема. Суммарное количество иммуноглобулинов в сыворотке крови у поросят первой группы составило -38,4±0,7 г/л, второй - 36,1±0,9 г/л (р<0,05), третьей - 31,5+1,2 г/л (р<0,001), четвертой - 33,6±0,9 г/л (р<0,001), пятой - 26,8±0,8 г/л (р<0,001). Наименьший уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови оказался у животных контрольной группы - 25,9±0,6 г/л (р<0,001). Разница в содержании иммуноглобулинов между первой и шестой - 12,5±0,1 г/л, между второй и шестой 10,2±0,1 г/л, между третьей и шестой - 5,6±0,3 г/л, между четвертой и шестой - 7,7+0,1 г/л и между пятой и шестой - 0,9±0,1 г/л (табл.

7)-

Приведенное выше суммарное количество иммуноглобулинов в сыворотках крови у поросят опытных и контрольной групп свидетельствует о том, что применение препаратов крови новорожденным поросятам приводит к увеличению уровня иммуноглобулинов в крови животных. Особенно значительный их рост отмечается при пероральном применении (табл. 7).

У поросят после применения КСК содержание общего белка было на 19,2 г/л больше, чем у поросят контрольной группы, на 14,8 г/л больше по сравнению с поросятами пятой группы, на 6,0 г/л - с поросятами четвертой группы, на 9,0 г/л - с третьей и на 2,2 г/л - со второй группой животных (табл. 7).

Под действием КСК повышалась бактерицидная активность сыворотки крови. Так, у новорожденных поросят первой группы она составила 31,6 %, что на 11,1 % выше, чем у поросят контрольной группы (р<0,001). При сравнении этого показателя у животных с пероральным и парентеральным применением АИСС, - КСК также оказалась более эффективной. Так, бактерицидная активность сыворотки крови поросят третьей группы была на 7,2 % , а второй на 4,2 % ниже, чем у поросят первой группы (р<0,01) (табл. 7).

КСК также способствовала активации клеточных факторов иммунитета у новорожденных поросят, после применения, которой фагоцитарная активность нейтрофилов оказалась наиболее высокой (60,4 %), что на 9,6 % больше, чем у поросят контрольной группы (р<0,001).

В результате перорального применения АИСС фагоцитарная активность нейтрофилов составляла 56,7 %, что на 3,7 % меньше, чем у поросят первой группы, а при внутримышечном применении - на 7,1 %. В результате перорального применения неспецифического гамма-глобулина фагоцитарная активность нейтрофилов составляла 54,2 %, что на 6,2 % меньше, чем у поросят первой группы, а при внутримышечном применении -на 8,3 % (р<0,01) (табл. 7).

Применение концентрированной сыворотки крови активирует как гуморальные, так и клеточные факторы иммунитета, оказывает как местное, так и общее воздействие на организм, блокирует развитие условно-патогенной микрофлоры, начиная с просвета кишечника новорожденных животных. Это, по-видимому, является основным фактором снижения заболеваемости поросят гастроэнтеритами в постнатальный период развития

организма и увеличения сохранности, животных до отъема по сравнению с контролем.

Применение АИСС и неспецифического гамма-глобулина также способствовало увеличению уровня естественной резистентности организма и повышению сохранности животных, особенно при пероральном способе введения препаратов. Так, пероральное применение АИСС способствовало увеличению сохранности поросят на 15 % по сравнению с контрольной группой, а пероральное применение неспецифического гамма-глобулина - на 10%.

Хотя применение АИСС и неспецифического гамма-глобулина способствовало увеличению естественной резистентности организма поросят, все же их эффективность была ниже, чем у КСК. Поэтому именно концентрированная сыворотка крови свиней из всех препаратов крови была принята для внедрения в производство.

Таблица 7 - Сравнительная эффективность применения иммунных препаратов новорожденным поросятам

Препараты

Изучаемые КСК АИСС Неспец, у -глобулин Контроль

показатели перораль перораль внутримы перораль внутримы

но но шечно но шечно

Гр уппы поросят

1 2 3 4 5 6

Сохранность, % 80 75 68 70 63 60

Бактерицидная 31,6± 27,4± 24,4+ 25,1+ 23,3± 20,5±

активность 0,7 0,5*** 0,6*** 0,8*** 0,6*** 0,4***

сыворотки

крови,%

Фагоцитарная

активность 60,4± 56,7± 53,3± 54,2± 52,1± 50,8±

нейтрофилов, % 0,1 д 2*** 0,1*** 0.4*** 0,1*** 0,9***

Общий белок 81,6± 79,4± 72,6± 75,6± 66,8± 62,4+

сыворотки крови, г/л 0,1 0,6*** 0,1*** 0,2*** 0,6*** 0,9***

Альбумины, г/л 28,2± 28,1± 25,3± 26,6± 26,4± 25,2±

0,2 0 2*** 0,8*** 0,3*** 0,1*** 0,6***

Глоб СИ 9,0±0,9 9,1 ±0,8 9,4±0,2 9,6±0,7 8,6±0,4 7,1±0,1 *

а-г 8,0+0,7 8,1+0,6 7,4+0.2 7,5+0,4 6.0±0,9 6,2±0,6 *

Р 9,1 ±0,8 9,3±0,7 7,7±0,9 ** 7,9±0,7 * 6,4±0,3 *** 5,3+0,1 ***

П(0,) 18,7± 0,7 17,1± 0,7 16,4± 0.8* 16,8+ 0.6* 14,4± 0.8*** 13,3+ 0.1***

У2(02) 8,6±0,2 7,7±0,7 6,4+0,9 * 6,9±0,7 * 5,0±0,2 *** 5,3+0,6 ***

У1+72 27,3± 0,7 24,8± 0.7** 22,8+ 0.8*** 23,7± 0.6*** 19,4± 0.2*** 18,8+ 0.1***

У1+Т2+Р 38,4+ 0,7 36.1± 0.9* 31,5+ 1 2*** 33,6± 0,9*** 26.8± 0.8*** 25,9+ 0.6***

Примечания: *** - разница с 1 группой достоверна (р<0,001); ** - разница с 1 группой достоверна (р<0,01); * - разница с 1 группой достоверна (р<0,05).

При этом в условиях свинокомплекса «Краснополянский» Амурской области, КСК способствовала увеличению сохранности поросят не менее чем на 20 %.

Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что пероральное применение концентрированной сыворотки крови свиней, способствует повышению уровня пассивного иммунитета, снижению заболеваемости и повышению сохранности животных.

2.2.9 Профилактика иммунодефицитов новорожденных телят концентрированной сывороткой крови крупного рогатого скота (КСК)

При изучении влияния КСК на организм новорожденных поросят в сравнении с другими иммунными препаратами она показала наилучший результат, поэтому мы провели эксперименты по изучению влияния КСК на организм новорожденных телят.

Эксперимент проведен на семи группах новорожденных телят (п=15), сформированных по принципу аналогов. Телятам выпаивали КСК в смеси с молозивом и без него 2 раза в сутки в течение 2 первых суток жизни животных в дозах 20, 50 и 100 мл.

Первая группа новорожденных телят служила контролем. Второй группе выпаивали КСК в смеси с молозивом в дозе 20 мл. Третьей группе

новорожденных животных выпаивали КСК в дозе 20 мл без молозива. Четвертой группе выпаивали КСК в смеси с молозивом в дозе 50 мл. Пятой группе выпаивали КСК в дозе 50 мл без молозива. Шестой группе новорожденных телят выпаивали 100 мл КСК в смеси с молозивом. Седьмой группе животных выпаивали 100 мл КСК без молозива.

В результате проведенных исследований по применению КСК в смеси с

молозивом или самостоятельно не зарегистрировано существенных различий

в воздействии препарата на иммунный статус телят. Поэтому КСК с

одинаковым результатом можно применять в смеси с молозивом или

самостоятельно, выпаивая дозу препарата перед кормлением телят молозивом

(табл. 8). Существенные различия в данных получены при использовании

КСК в зависимости от дозы, а именно 20,-50,-100 мл, при этом все

полученные данные сравнивались с контролем и между собой (табл. 8).

Таблица 8 - Содержание белка и белковых фракций в сыворотке крови новорожденных телят в зависимости от дозы КСК

Группа телят Общий белок, г/л Альбумины, г/л Глобулины, г/л 2у,+72 %

СХ| 0(2 Р VI 72

1 Контроль 51,4±0,9 17,8+0,5 7,5±0,4 7,9±0,7 7,5±0,8 7,2±0,4 3,4±0,1 10,6±0,6 20,6±0,5

2 КСК(20 мл, с/м) 52,0+0,7 18,5±0,6 6,1 ±0,4 6,6±0,2 6,9±0,2 9,9±0,3 4,0+0,1 13,9±0,3" 26,7±0,7*"

3 КСК (20 мл, б/м) 51,6+0,6 18,6±0,4 6,3±0,2 6,1 ±0,5 7,4±0,4 9,7±0,3 3,5+0,1 13,2±0,7" 25,6±0,5*"

4 КСК (50 мл, с/м) 52,5±0,8 18,0±0,6 6,8±0,2 6,3±0,3 6,7±0,6 9,9+0,1 4,8+0,2 14,7±0,4*" 28,0±0,б"*

5 КСК (50 мл. б/м) 54,1 ±0,6 19,7±0,5 6,4±0,1 6,4±0,2 6,4±0,3 12,3±0,4 2,9±0,1 15,2±0,2*" 28,1±0,7"*

6 КСК (100 мл, с/м) 55,2±0,4 19,4±0,7 6,1 ±0,4 6,7±0,2 6,3±0,1 12,2±0,4 4,5+0,1 16,7+0,2*** 30,3±0,7*"

7 КСК 100 мл. б/м) 56,9±0,3 21,9±0,8 6,5±0,3 6,3±0,2 6,5+0,4 12,9+0,5 4,8±0,3 17,7±0,6*" 30,1±0,4***

Примечания: - различия с 1 группой достоверны (р<0,001); - различия с 1 группой

достоверны (р<0,01); с/м - с молозивом; б/м - без молозива.

Установлено, что с повышением дозы КСК количество иммуноглобулинов в сыворотке крови новорожденных телят увеличивается,

при этом статистически достоверный рост показателей наблюдается при дозе КСК 20 мл и выше. Наиболее высокое содержание иммуноглобулинов в сыворотках крови новорожденных телят наблюдалось при выпаивании животным КСК в дозе 100 мл. Так общее количество гамма-глобулинов в контрольной группе телят на 7,1 г/л (9,5 %) меньше чем у телят 7 группы, разница составила 67 % от соответствующего показателя контрольной группы, а с телятами пятой группы 43,4 %, телятами второй группы 31,1 %.

Под влиянием КСК изменилась клиническая картина крови и показатели, характеризующие иммунный статус новорожденных телят (табл. 9).

Так, количество эритроцитов и гемоглобина в крови новорожденных телят возрастало с дозы КСК в 20 мл, а лейкоцитов с 50 мл. Бактерицидная активность сыворотки крови возросла под действием КСК с дозы 50 мл, а фагоцитарная активность нейтрофилов с 20 мл.

Таблица 9 - Клинические показатели крови и иммунной реактивности телят в зависимости от дозы КСК

Группа телят Эритроци ты, 10 12/л Лейкоцит ы, 10 9/л Гемоглобин, г/л БАСК, % ФА, % ЦИК, усл. ед.

1 Контроль 5,5±0,02 7,1 ±0,03 90,0±0,02 24.1±1,1 39,5±0,4 0,7+0,1

2 КСК 20 мл, с/м 5,7±0,01"' 7,1 ±0,01 90,0+0,02 26,5±0,8 45,9±0,4*" 0,9±0,1

3 КСК 20 мл, б/м 5,7+0,02"* 7,0±0,03 95,0±0,06*" 25,3±1,2 45,3 ±0,5*" 1,о±о,Г

4 КСК 50 мл, с/м 6,5+0,03'" 7,3±0,04"* 104,0±0,02*" 29,2±1,Г* 51,1 ±0.6*" 3,7±0,6*"

5 КСК 50 мл, б/м 6,4±0,06-" 7,4±0,05*" 104,0±0,04"* 29,6±1,3" 50,5±0,3*" 3,2±0,4*"

6 КСК 100 мл, с/м 6,6±0,04*" 7,5±0,03"* 105,0±0,04'" 31,5±0,7*" 51,7±0,5*" 3,2+0,3*"

7 КСК 100 мл, б/м 6,7±0,05*" 7,7±0,04"' 107,0±0,05*" 32,6±1,2*" 52,4±0,6*" 3,8±0,7*"

Примечания: - разница с 1 группой достоверна (р<0,001); - разница с 1 группой достоверна (р<0,01); - разница с 1 группой достоверна (р<0,5).

Разница показателей между 1 и 4 группой телят в бактерицидной активности сыворотки крови составила 5,1 %, рост составил 21

%.Фагоцитарная активность нейтрофилов увеличилась на 11,6 %, рост составил 29 %. На фоне общего низкого количества циркулирующих иммунных комплексов в сыворотках новорожденных телят, рост показателей начался с дозы КСК в 20 мл препарата.

3 ВЫВОДЫ

1. Теоретически обоснованы и разработаны препараты из крови животных и способы их применения для профилактики иммунодефицитов и массовых желудочно-кишечных расстройств у новорожденных телят и поросят, вызываемых условно патогенной микрофлорой - концентрированная сыворотка крови (КСК) крупного рогатого скота и КСК свиней.

2. Уровень иммунных белков в сыворотках крови коров и свиноматок достоверно снижается за неделю до отела и опороса, что обусловлено селективным их переносом в молочную железу. Наименьшая концентрация иммуноглобулинов в сыворотках крови коров и свиноматок наблюдается в первые часы после родов (22,1±0,6 %; 22,4±1,1 %) и восстанавливается до исходного значения через 48 часов после них (34,9±0,8 %; 28,2±0,9 %).

3. Уровень иммунных белков в сыворотках молозива коров и свиноматок максимален в первые часы после родов (54,2±2,2 %; 59,4±2,0 %). Затем концентрация иммуноглобулинов в молозиве снижается и стабилизируется к 48 часам после отела и опороса (36,2±1,2 %; 41,0±1,0 %).

4. Установлена обратная зависимость концентрации иммунных белков в сыворотках молозива от концентрации иммуноглобулинов в сыворотках крови коров и свиноматок.

5. У 33 % новорожденных поросят и 50 % новорожденных телят наблюдаются вторичные иммунодефицита различной степени тяжести, выражающиеся в гипоглобулинемии.

6. Причиной массовых желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят и поросят в 62,6 % случаев являются ассоциации условно патогенных бактерий.

7. Установлена прямая зависимость уровней иммуноглобулинов от содержания общего белка в сыворотках крови новорожденных животных. Используя выявленную закономерность можно диагностировать иммунодефицита у новорожденных животных по содержанию общего белка в сыворотках крови.

8. Новорожденные телята и поросята с содержанием общего белка в сыворотках крови 50 г/л и менее имеют в крови количество иммуноглобулинов равное 12,5±0,6 г/л и 16,2±0,5 г/л соответственно, что ниже нормы, необходимой для поддержания нормального уровня резистентности. У таких животных чаще регистрируют желудочно-кишечные заболевания, вызываемые ассоциациями условно патогенных бактерий.

9. Концентрированная сыворотка крови свиней (КСК) обладает профилактической и лечебной эффективностью, позволяет увеличить сохранность новорожденных поросят на 20 %. Пероральный способ введения сывороточных препаратов новорожденным поросятам в первые 48 часов жизни обеспечивает локальную и системную защиту и является наиболее эффективным.

10.Концентрированная сыворотка крови крупного рогатого скота (КСК) обладает профилактической и лечебной эффективностью в дозе 50 мл перорально два раза в сутки в течение 2 первых суток жизни телят. Применение КСК способствует повышению резистентности организма, снижению заболеваемости и 100 % сохранности новорожденных телят.

11 .Концентрированная сыворотка крови животных содержит иммунные компоненты против патогенных и условно патогенных бактерий, персистирующих в популяции животных конкретных ферм, являющихся причиной желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят и поросят.

4 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Научные разработки и положения диссертационной работы

использованы для разработки 10 методических рекомендаций:

1. Рекомендации по ранней диагностике иммунодефицитов новорожденных поросят (Ученый совет ДальЗНИВИ, 1996 г.);

2. Схема применения КСК для профилактики и лечения иммунодефицитов

новорожденных поросят (Ученый совет ДальЗНИВИ, 1996 г.);

3. Изготовление и применение концентрированной сыворотки крови

животных (Ученый совет ДальЗНИВИ, 2005 г.);

4. Методические рекомендации по оценке и коррекции неспецифической резистентности животных (Секция «Патология, фармакология и терапия» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2005)

5. Методические рекомендации по оценке и коррекции иммунного статуса животных (Секция «Патология, фармакология и терапия» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2005)

6. Методика повышения уровня естественной резистентности молодняка крупного рогатого скота (Ученый совет ДальЗНИВИ, 2005 г.);

7. Стандарт ГУ «ДальЗНИВИ» СТО ДальЗНИВИ 06684427-2007 Сыворотка крови концентрированная «КСК». Правила изготовления, контроля качества и применения (Ученый совет ДальЗНИВИ, 2007 г.);

8. Смешанные кишечные инфекции новорожденных телят (Ученый совет ДальЗНИВИ, 2008 г.);

9. Методические рекомендации по изготовлению и применению препарата из крови свиней (Подсекция «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2009 г.);

10.Руководство по изготовлению и применению концентрированной сыворотки крови крупного рогатого скота (Подсекция «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2009 г.).

5. СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

Патенты:

1. Способ получения концентрированной сыворотки крови : пат. 2125454 Рос. Федерация : МПК 6 А 61 К 35/16, 39/00 / соавт. Т.В. Евсеенко ; заявитель и патентообладатель Дальневост. зон. науч.-исслед. ветеринар, ин-т ; № 96120788/13 ; заявл. 18.10.96 ; опубл. 27.01.99, Бюл. №3.-4 с.

2. Способ повышения резистентности новорожденных поросят : пат. 2142805 Рос. Федерация, МПК 6 А 61 К 35/14 / соавт. Т.В. Евсеенко ; заявитель и патентообладатель Дальневост. зон. науч.-исслед. ветеринар, ин-т ; № 98116395/13; заявл. 31.08.98 ; опубл. 20.12.99, Бюл. № 35 - 5 с.

3. Способ оценки уровня естественной резистентности организма животных в ранний постнатальньш период : пат. 2260185 Рос. Федерация : МПК 7 G 01 № 33/48 / H.H. Шульга ; заявитель и патентообладатель Дальневост. зон. науч.-исслед. ветеринар, ин-т ; № 2004101581/15 ; заявл. 19.01.2004 ; опубл. 10.09.2005, Бюл. № 25. - 3 с.

Статьи в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК

Минобразования РФ для публикации основных результатов диссертации

4. Динамика иммуноглобулинов в крови стельных коров / соавт. Т.А. Сокольникова, В.Н. Шульга // Вестник РАСХН. - 2004. - № 5. - С. 48-49.

5. Динамика иммуноглобулинов в крови и молозиве коров после отела / соавт. Т.А. Сокольникова, В.Н. Шульга // Молочное и мясное скотоводство. - 2005. - № 1. - С. 24.

6. Динамика иммуноглобулинов в крови и молозиве свиноматок / соавт. Т.А. Сокольникова // Вестник РАСХН. - 2005. - № 4. - С. 58-59.

7. Влияние уровня колострального иммунитета на сохранность новорожденных телят // Доклады РАСХН. - 2005. - № 4. - С. 41-43.

8. Сохранность новорожденных поросят // Свиноводство. - 2005. -№ 3. - С. 28-29.

■ 9. Динамика иммуноглобулинов в сыворотках крови и молозива коров // Ветеринария. - 2006. - № 1. - С. 45-47.

10. Повышение иммунного статуса телят // Молочное и мясное скотоводство. - 2006. - № 3. - С. 23-24.

11. Ситуация по колибактериозу телят в Амурской области // соавт. Н.В. Яковлева // Ветеринария. - 2006. - № 7. - С. 21-23.

12. Сывороточный препарат нового поколения КСК // Вестник РАСХН. -2007.-№ 1.-С. 85-86.

13. Выживаемость новорожденных поросят // Свиноводство. - 2009. - № 1. -С. 25-27.

Статьи в бюллетенях научных исследований и сборниках научных

трудов

14. Некоторые факторы, влияющие на уровень колострального иммунитета новорожденных поросят // Науч.-техн. бюл. / РАСХН, Дальневост. отд-ние, ДальЗНИВИ. - Новосибирск, 1992. - Вып. 1 : Инфекционная патология сельскохозяйственных животных и пчел на Дальнем Востоке, лечение и профилактика. - С. 18-23.

15. Профилактика желудочно-кишечных заболеваний поросят с использованием концентрированной сыворотки крови свиней и пробиотиков / соавт. А.Ю. Бекетова // Проблемы ветеринарного обеспечения животноводства Дальнего Востока : тез. докл. науч. сес. / РАСХН, Дальневост. отд-ние, ДальЗНИВИ. - Благовещенск, 1995. - С. 42-43.

16. Содержание иммуноглобулинов в крови и молозиве свиноматок до и после опороса // Проблемы ветеринарного обеспечения животноводства : тез. докл. науч. сес. / РАСХН, Дальневост. отд-ние, ДальЗНИВИ. -Благовещенск, 1995. - С. 43-44.

17. Повышение резистентности поросят в ранний постнатальный период : дис.... канд. ветеринар, наук : 16.00.03 / Шульга Николай Николаевич ; [ЯГСХА]. - Якутск, 1997. - 17 с.

18. Применение аллогенной сыворотки крови в мясном скотоводстве : информ. листок № 12-2000 / соавт.: Н.М. Городович, П.Я. Диких, Н.В. Яковлева, А.И. Калинин ; Амур. ЦНТИ. - Благовещенск, 2000. - 2 с.

19. Факторы выживаемости новорожденных поросят / соавт. М.А. Петрухин // Болезни сельскохозяйственных животных и меры борьбы с ними на Дальнем Востоке и Забайкалье : сб. науч. тр. / ДальГАУ. - Благовещенск, 1996.-С. 114-119.

20. Концентрированная сыворотка крови - резерв повышения сохранности телят и поросят // Сборник научных трудов, посвященный 70-летию ДальЗНИВИ. - Благовещенск, 2005. - С. 111-113.

21. Оценка напряженности колострального иммунитета у новорожденных телят и поросят // Сборник научных трудов, посвященный 70-летию ДальЗНИВИ. - Благовещенск, 2005. - С. 113-115.

22. Коррекция иммунного статуса новорожденных поросят концентрированной сывороткой крови свиней (КСК) // Научные основы профилактики и лечения болезней животных : сб. науч. тр. ведущих ученых России, СНГ и др. стран / Мин-во сел. хоз-ва РФ [и др.]. -Екатеринбург, 2005. - С. 582-589.

23. Профилактика болезней молодняка препаратами из сыворотки крови / соавт. Н.В. Яковлева // Практик. - 2006. - № 3. - С. 50-51.

24. Метод оздоровления // Ветеринарная жизнь. - 2007. - № 2. - С. 15.

25. Формирование колострального иммунитета у новорожденных поросят // Бюл. науч. исслед. / РАСХН, ДальЗНИВИ. - Благовещенск, 2008. - Вып. 14. : Болезни животных и пчел на Дальнем Востоке, лечение и профилактика. - С. 13-19.

26. Кишечные инфекции новорожденных телят бактериальной этиологии / соавт.: Ю.А. Макаров, Н.Е. Горковенко, В.А. Серебрякова, А.М. Кузьменко // Бюл. науч. исслед. / РАСХН, ДальЗНИВИ. - Благовещенск, 2008. - Вып. 14.: Болезни животных и пчел на Дальнем Востоке, лечение и профилактика. - С. 3-12.

Работы, опубликованные в материалах региональных,

общероссийских и международных научных конференций

27. Эффективность применения пробиотических препаратов для лечения желудочно-кишечных заболеваний свиней / соавт.: Н.С. Кухаренко, Т.И. Тимофеева, Л.Х. Сирабидзе // Достижения науки - в сельскохозяйственное производство : материалы науч-практ. конф. / УНПК ДальГАУ. -Благовещенск - Ивановка, 1994. - С. 48.

28. Выживаемость новорожденных поросят в условиях комплекса / соавт. М.А. Петрухин // Актуальные вопросы ветеринарии : тез. докл. 1-й науч.-практ. конф. фак. ветеринар, медицины НГАУ. - Новосибирск, 1997. - С. 57-58.

29. Применение концентрированной сыворотки крови свиней для профилактики иммунодефицитов новорожденных поросят // Актуальные вопросы профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных и домашних животных : материалы науч.-произв. конф., посвящ. 50-летию Калинингр. НИВС. - Калининград, 1998. - С. 212-213.

30. Применение концентрированной сыворотки крови свиней для профилактики иммунодефицитов новорожденных поросят И Болезни животных Дальнего Востока : материалы междунар. науч. конф. / ДальГАУ. - Благовещенск, 1999. - С. 127-129.

31. Влияние концентрированной сыворотки крови крупного рогатого скота на уровень резистентности телят // Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных : материалы междунар. науч.-практ. конф. / РАСХН, ВИЭВ. - М., 2006. - С. 419-422.

32. Повышение резистентности телят // Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях : материалы междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 60-летию ГНУ Краснодар. НИВИ. - Краснодар, 2006. - С. 434-436.

На правах рукописи

ШУЛЬГА НИКОЛАЙ НИКОЛАЕВИЧ

РАЗРАБОТКА И ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ ИЗ КРОВИ ЖИВОТНЫХ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Подписано в печать 26.10.2009г. Формат 60x84 1/16 Усл. печ.л. 1,0. Бумага для множительных аппаратов. Печать офсетная. Гарнитура Times New Roman. Объём 1 п.л. Заказ № 453.5Тираж 100 экз.

Отпечатано в типографии ООО «Таймер» 620219, Екатеринбург, ул. Луначарского, 136

1.1 Актуальность проблемы. Получение и выращивание молодняка, особенно в условиях крупных ферм требует соблюдения определенных технологических условий, основными из которых являются - сбалансированное полноценное кормление, защита от болезней, искусственная регуляция численности. Однако практика ведения продуктивного животноводства показывает, что даже при строгом соблюдении всех условий регистрируется стабильно высокая заболеваемость молодняка желудочно-кишечными и респираторными инфекциями. При этом ведущее значение в настоящее время имеют не классические, а факторные инфекции, вызываемые широко распространенными в природе условно патогенными бактериями (Уlib). В числе выделяемых УПБ ведущее место занимают многочисленные представители семейства Enterobac-teriaceae, неферментирующие бактерии рода Pseudomonas и Acinetobacter, грамположительная кокковая микрофлора и их ассоциации [Джупина С.И., 2001; Шахов А.Г., 2002; Бедоева З.М. и др. 2006; Золотухин С.Н., Пульчеров-ская Л.П., Каврук Л.С., 2006; Красиков А.П., 2007; Макаров Ю.А., Горковенко Н.Е., 2008; Олейник А.В., 2009].

Чтобы противостоять многим этиологическим агентам, новорожденные поросята и телята должны обладать достаточным потенциалом резистентности, который реализуется в высоком уровне иммунного статуса. Рост и развитие новорожденных поросят и телят осложнен тем, что они практически лишены собственной гуморальной иммунной защиты. Поэтому вся нагрузка ложится на неспецифические факторы и колостральный иммунитет. От уровня иммунной защиты зависит их реакция на стрессовые факторы и тяжесть проявления желудочно-кишечных и респираторных болезней [Костына М.А., 1999; Храмцов В .В. и др. 2006; Федоров Ю.Н. и др., 2006; Карпуть И-.М. и др., 2006; Ануфриев П.А., 2006; Паршин П.А. и Паршина В.И. 2006; Мотова Е.Н., 2008; Петрянкин Ф.П., 2008]. Проблеме желудочно-кишечной патологии новорожденных телят и поросят посвящено ряд работ отечественных авторов [Шахов А.Г., 2002;

Гаффаров Х.З. и др. 2002; Овод А.С., 2002; Терехов В.Н., 2002; Хусаинов В.Р., 2005; Ануфриев А.И., и др. 2006; Ануфриев П.А., 2006; Красочко П.А., Ляман A.M., 2006; Мусаева М.Н., 2008]. Однако многие вопросы борьбы с этими заболеваниями не решены в полной мере и проводимые мероприятия по профилактике не достигают еще необходимого положительного эффекта.

Успех борьбы с заболеваниями молодняка во многом определяется эффективностью применяемых химиотерапевтических средств. Однако в последнее время традиционно применяемые антибактериальные препараты часто оказываются неэффективными, поскольку возбудители проявляют к ним резистентность, массовое их применение способствует селекционированию устойчивых штаммов, распространению полирезистентности у микроорганизмов, негативно влияет на иммунный статус животных. Это диктует необходимость разработки альтернативных экологически безопасных препаратов, обладающих не только высокой лечебной эффективностью, но и выраженным профилактическим действием.

Все выше перечисленное явилось основанием для создания новых сывороточных препаратов и обоснования их применения для профилактики и лечения иммунодефицитов и связанных с ними заболеваний новорожденных телят и поросят.

1.2 Цель и задачи исследования. Цель исследований состояла в разработке препаратов из крови животных и научно обоснованных схем их применения для коррекции иммунного статуса и профилактики массовых болезней новорожденных животных, вызываемых условно патогенной микрофлорой.

Для достижения намеченной цели были определены следующие задачи: ' - теоретически обосновать и разработать новые сывороточные препараты с последующей экспериментальной и клинической оценкой их фармако-токсикологических свойств и эффективности для профилактики иммунодефицитов и массовых желудочно-кишечных расстройств у новорожденных телят и поросят, вызываемых условно патогенной микрофлорой;

- изучить особенности динамики иммунных белков в сыворотках крови и молозива коров и свиноматок в зависимости от их физиологического состояния;

- изучить особенности динамики иммуноглобулинов в сыворотках крови новорожденных телят и поросят и на этой основе разработать простой и доступный способ оценки иммунного статуса новорожденных поросят и телят в условиях производства;

- изучить влияние разработанных препаратов из крови свиней и крупного рогатого скота на неспецифическую резистентность новорожденных поросят и телят;

- оценить в производственном эксперименте их лечебную и профилактическую эффективность.

1.3 Научная новизна работы. Разработан новый сывороточный препарат - концентрированная сыворотка крови (КСК), получаемый методом медленного замораживания и размораживания, превосходящий по содержанию иммуноглобулинов другие аналогичные препараты в 2-3 раза и содержащий в своем составе антитела к условно патогенным бактериям, вызывающим массовые желудочно-кишечные заболевания у молодняка крупного рогатого скота и свиней.

Научно обоснована и экспериментально доказана перспективность перо-рального применения концентрированной сыворотки крови новорожденным поросятам и телятам с учетом естественного механизма абсорбции иммунных белков.

Разработана методика выявления гипоиммуноглобулинемии у новорожденных телят и поросят по показателю общего белка в сыворотке крови, на основе использования прямой зависимости уровней иммуноглобулинов в сыворотках крови новорожденных животных от количества общего белка в них.

Уточнена динамика иммуноглобулинов в сыворотках крови стельных коров и супоросных свиноматок до и после отела и опороса.

Прослежена динамика иммунных белков в сыворотке крови коров в течение всего периода стельности.

Установлена этиологическая структура массовых желудочно-кишечных заболеваний у молодняка крупного рогатого скота и свиней бактериального происхождения.

Новизна выполненных исследований подтверждена тремя патентами на изобретения: «Способ оценки уровня естественной резистентности организма животных в ранний постнатальный период» (патент на изобретение Российской Федерации № 2260185); «Способ получения концентрированной сыворотки крови» (патент на изобретение Российской Федерации № 2125454); «Способ повышения резистентности организма новорожденных поросят» (патент на изобретение Российской Федерации № 2142805).

1.4 Теоретическая и практическая значимость работы. Выявленные в результате исследований закономерности изменения содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови беременных животных и рожденного от них приплода расширяют научные представления по ряду вопросов физиологии и биохимии. С учетом выявленных закономерностей предложен способ оценки уровня естественной резистентности организма животных в ранний постнатальный период.

В результате проведенных исследований животноводству предложена концентрированная сыворотка крови (КСК), обладающая выраженной лечебной и- профилактической эффективностью, прошедшая широкое производственное испытание и предназначенная для коррекции-иммунного статуса, профилактики и лечения острых кишечных расстройств у новорожденных телят и поросят.

Разработан стандарт ДальЗНИВИ «Сыворотка крови концентрированная (КСК)», регламентирующий технологический процесс производства, показатели качества и методы их контроля. Разработаны методические рекомендации, «Изготовление и применение концентрированной сыворотки крови животных», которые утверждены Ученым советом ДальЗНИВИ (протокол № 2 от 25.03.05).

Материалы исследований вошли в методические рекомендации по оценке и коррекции неспецифической резистентности животных (Секция «Патология, фармакология и терапия» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2005), методические рекомендации по оценке и коррекции иммунного статуса животных (Секция «Патология, фармакология и терапия» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2005). Разработаны и утверждены Ученым советом ДальЗ-НИВИ (протокол № 3 от 03.07.2008) рекомендации «Смешанные кишечные инфекции новорожденных телят». Разработаны и утверждены Ученым советом ДальЗНИВИ (протокол № 3 от 06.03.2009) методические рекомендации «Руководство по изготовлению и применению концентрированной сыворотки крови крупного рогатого скота», и одобрены решением подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 1 от 30 марта 2009). Разработаны и утверждены Ученым советом ДальЗНИВИ (протокол № 3 от 06.03.2009) методические рекомендации «Методические рекомендации по изготовлению и применению препарата из крови свиней», и одобрены решением подсекции «Инфекционная, патология.животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 1 от 30 марта 2009).

1.5 Основные положения, выносимые на защиту:

- данные по динамике иммуноглобулинов в сыворотках крови и молозива животных в разные периоды беременности, до и после рождения приплода;

- характеристика белкового состава сывороток крови поросят и телят в ранний постнатальный период;

- этиология массовых желудочно-кишечных заболеваний, вызываемых, у словно патогенными бактериями;,

- результаты, экспериментальных исследований по» профилактике иммунодефицитов и желудочно-кишечных заболеваний, вызываемых условно патогенной микрофлорой, у новорожденных поросят и телят концентрированными сыворотками крови (КСК).

1.6 Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на краевом совещании ветеринарных врачей (г. Хабаровск, 1994); областном совещании ветеринарных врачей (г. Благовещенск, 1995); областном совещании свиноводов (г. Благовещенск, 1995); научной сессии Дальневосточного отделения РАСХН, посвященной 60-летию Дальневосточного зонального научно-исследовательского ветеринарного института (г. Благовещенск, 1995); научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарии» (г. Новосибирск, 1997); научно-практической конференции «Актуальные вопросы профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных животных», посвященной 50-летию Калининградской научно-исследовательской ветеринарной станции (г. Калининград, 1998); международной научной конференции «Болезни животных Дальнего Востока», Даль-ГАУ (г. Благовещенск, 1999); совещании сотрудников ДальЗНИВИ и работников Госветслужбы по проблемам диагностики и лечения (г. Благовещенск, 2005); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях» посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ (г. Краснодар, 2006); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных», посвященной 100-летию академика ВАСХ-НИЛ Я.Р. Коваленко (г. Москва, 2006); межведомственной научно-практической конференции «Современные проблемы исследований в биологии», (Благовещенск, 2009).

1.7 Публикации. По материалам диссертации опубликовано 29 научных работ, из них 10 в, рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ (ж. «Вестник РАСХН»- - 3; ж. «Молочное и мясное скотоводство» - 2, ж. «Доклады РАСХН» - 1, ж. «Свиноводство» — 2, ж; «Ветеринария» — 2) и три патента РФ на изобретение.

1.8 Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их анализа, заключения, выводов, практических предложений и списка использованной литературы, включающего 291 наименований отечественных и 211 иностранных авторов.

Работа содержит 24 таблиц и 10 рисунка. В приложении представлены документы внедрения результатов исследования.

Автор выражает искреннюю признательность и благодарность академику РАСХН, доктору ветеринарных наук, профессору Ю.А. Макарову за всестороннюю помощь и поддержку в работе, а также коллективу ДальЗНИВИ за методическую и практическую помощь в проведении исследований.

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

5 ВЫВОДЫ

1. Теоретически обоснованы и разработаны препараты из крови животных и способы их применения для профилактики иммунодефицитов и массовых желудочно-кишечных расстройств у новорожденных телят и поросят, вызываемых условно патогенной микрофлорой - концентрированная сыворотка крови (КСК) крупного рогатого скота и КСК свиней.

2. Уровень иммунных белков в сыворотках крови коров и свиноматок достоверно снижается за неделю до отела и опороса, что обусловлено селективным их переносом в молочную железу. Наименьшая концентрация иммуноглобулинов в сыворотках крови коров и свиноматок наблюдается в первые часы после родов (22,1+0,6 % и 22,4±1,1 % соответственно) и восстанавливается до исходного значения через 48 часов после них (34,9±0,8 % и 28,2+0,9 % соответственно).

3. Уровень иммунных белков в сыворотках молозива коров и свиноматок максимален в первые часы после родов (54,2+2,2 % и 59,4+2,0 % соответственно). Затем концентрация иммуноглобулинов^ в молозиве снижается и стабилизируется к 48 часам после отела и опороса (36,2+1,2 % и 41,0+1,0 % соответственно).

4. Установлена обратная зависимость концентрации иммунных белков в сыворотках молозива от концентрации иммуноглобулинов в сыворотках крови коров и свиноматок.

5. У 33 % новорожденных поросят и 50 %. новорожденных телят наблюдаются вторичные иммунодефициты различной степени тяжести, выражающиеся^ гипоглобулинемии.

6/ Причиной массовых желудочно-кишечных заболеваний? новорожденных телят и поросят в. 62,6' % случаев;являются, ассоциации; условно патогенных бактерий. , \

7. Установлена прямая зависимость уровней иммуноглобулинов от содержания-общего белка в сыворотках крови новорожденных животных. Используя, выявленную закономерность можно диагностировать иммунодефицита у новорожденных животных по содержанию общего белка в сыворотках крови.

8. Новорожденные телята и поросята с содержанием общего белка в сыворотках крови 50 г/л и менее имеют в крови количество иммуноглобулинов равное 12,5±0,6 г/л и 16,2±0,5 г/л соответственно, что ниже нормы, необходимой для поддержания нормального уровня резистентности. У таких животных чаще регистрируют желудочно-кишечные заболевания, вызываемые ассоциациями условно патогенных бактерий.

9. Концентрированная сыворотка крови свиней (КСК) обладает профилактической и лечебной эффективностью, позволяет увеличить сохранность новорожденных поросят на 20 %. Пероральный способ введения сывороточных препаратов новорожденным поросятам в первые 48 часов жизни обеспечивает локальную и системную защиту и является наиболее эффективным.

10. Концентрированная сыворотка крови крупного рогатого скота (КСК) обладает профилактической и лечебной эффективностью в дозе 50 мл перорально два раза в сутки влечение 2 первых суток жизни телят. Применение КСК способствует повышению резистентности организма, снижению заболеваемости и 100 % сохранности новорожденных телят.

11. Концентрированная сыворотка крови животных содержит иммунные компоненты против патогенных и условно патогенных бактерий, перси-стирующих в популяции животных конкретных ферм, являющихся причиной желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят и поросят.

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Научные разработки и положения диссертационной работы использованы для разработки 10 методических рекомендаций:

1. Рекомендации по ранней диагностике иммунодефицитов новорожденных поросят (Ученый совет ДальЗНИВИ, 1996 г.);

2. Схема применения КСК для профилактики и лечения иммунодефицитов новорожденных поросят (Ученый совет ДальЗНИВИ, 1996 г.);

3. Изготовление и применение концентрированной сыворотки крови животных (Ученый совет ДальЗНИВИ, 2005 г.);

4. Методические рекомендации по оценке и коррекции неспецифической резистентности животных (Секция «Патология, фармакология и терапия» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2005)

5. Методические рекомендации по оценке и коррекции иммунного статуса животных (Секция «Патология, фармакология и терапия» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2005)

6. Методика повышения уровня естественной резистентности молодняка крупного рогатого скота (Ученый совет ДальЗНИВИ, 2005 г.);

7. Стандарт ГУ «ДальЗНИВИ» СТО ДальЗНИВИ 06684427-2007 Сыворотка крови концентрированная «КСК». Правила изготовления, контроля качества и применения (Ученый совет ДальЗНИВИ, 2007 г.);

8. Смешанные кишечные инфекции новорожденных телят (Ученый совет ДальЗНИВИ, 2008 г.);

9. Методические рекомендации- по изготовлению и применению препарата из крови свиней (Подсекция «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2009 г.);

10. Руководство по изготовлению и применению концентрированной сыворотки крови крупного рогатого скота (Подсекция «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» Отделения ветеринарной медицины РАСХН, 2009 г.).

4 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Материалы наших исследований и обзор литературных данных свидетельствуют о том, что новорожденным телятам и поросятам свойственна иммунная недостаточность, определяемая как возрастной иммунодефицит.

У новорожденных животных иммунная система не достигает своего окончательного физиологического развития и характеризуется низкой функциональной активностью клеточного и неполноценного гуморального иммунитета. Состояние гуморального иммунитета у новорожденных телят и поросят по сравнению с взрослыми животными характеризуется в 2-3 раза меньшим количеством В-клеток и отсутствием или чрезвычайно низким уровнем иммуноглобулинов в сыворотке крови.

Компенсация возрастной иммунной недостаточности у новорожденных телят и поросят происходит за счет секретов молочной железы коров и свиноматок. В молозиве первых дней лактации в большом количестве содержатся клеточные и гуморальные факторы иммунитета, имеющие огромное значение в создании колостральной защиты у новорожденных животных. По содержанию гуморальных иммунных факторов молозиво в течение 4 суток после отела и опороса не одинаково. В течение первых часов после отела и опороса и первые сутки после них оно наиболее богато белками, среди которых больше половины приходится на иммуноглобулины.

Иммуноглобулины молозива опоросившихся свиноматок и отелившихся коров по своему происхождению являются иммуноглобулинами сыворотки крови, которые минуя секреторные клетки молочной железы по межклеточному пространству попадают в молозиво, что подтверждается нашими исследованиями по изучению динамики уровней иммуноглобулинов в сыворотках крови супоросных свиноматок и стельных коров. Так, за неделю до опороса и отела мы регистрировали резкое снижение уровней иммуноглобулинов в сыворотках крови свиноматок и коров по отношению к общему белку. При этом максимальное количество иммуноглобулинов в молозиве по времени совпадало с периодом опороса и отела и первых суток после него. После отела и опороса, в течение двух суток, количество иммуноглобулинов в сыворотках крови коров и свиноматок постепенно увеличивалось, а в молозиве соответственно уменьшалось. Затем через двое суток и до семи концентрация иммуноглобулинов в сыворотках крови и молозива практически не изменялась. Начало относительной стабилизации уровней иммуноглобулинов в крови и молозиве, по нашему мнению соответствовало по времени прекращению абсорбции белков тонким отделом кишечника новорожденных поросят и телят.

Исходя из этого, нами было сделано заключение о возможности перорального применения препаратов крови в течение первых двух суток жизни телят и поросят для иммунокоррекции.

С приемом молозива у поросят и телят происходит компенсация возрастной иммунной недостаточности, сопровождающаяся значительным увеличением в крови общего белка и иммуноглобулинов.

При недостаточном содержании в молозиве лейкоцитов и иммуноглобулинов у телят и поросят раннего возраста нарушается формирование колострального иммунитета, что приводит к усугублению возрастного иммунного дефицита. Недостаточно надежная иммунная защита пищеварительной системы от различных вредных факторов эндо- и экзогенного происхождения, особенно при нарушении ферментации молозива, сопровождается острыми желудочно-кишечными расстройствами.

При изучении сельскохозяйственных животных с молозивным типом передачи антител потомкам установлена тенденция снижения уровня иммуноглобулинов в крови у самок перед родами. Снижение уровня иммунных белков в крови перед родами является общей биологической закономерностью, присущей сельскохозяйственным животным с молозивным типом передачи антител потомкам. Она может быть сформулирована, как общебиологическая закономерность - снижения уровня иммуноглобулинов в крови перед родами у сельскохозяйственных животных с молозивным типом передачи антител потомкам.

Максимальное количество иммунных белков в сыворотке молозива коров и свиноматок регистрировалось в первые часы после родов (54,2±2,2%;59,4±2,0%). Затем во времени количество их постепенно снижалось в течение первых двух суток после родов. Далее наступал период относительной стабилизации уровня иммуноглобулинов в молозиве, начиная с третьих суток после родов до седьмых. В течение недели уровень иммунных белков в сыворотке молозива коров снижался на 31,9 %, а у свиноматок на 38,7 %. Максимальное содержание иммуноглобулинов в молозиве парнокопытных сельскохозяйственных животных не случайно и отражает общебиологическую закономерность - максимального содержания иммунных белков в молозиве у сельскохозяйственных животных с молозивным типом передачи антител потомкам в первые часы после родов.

В результате анализа полученных экспериментальных данных, характеризующих динамику уровней иммуноглобулинов в крови и молозиве коров и свиноматок, установлена обратная зависимость уровней иммунных белков сыворотки молозива от уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови. Данная зависимость имеет очень высокий коэффициент корреляции. Сила связи между показателями очень высокая (г = - 0,92), поэтому она также может рассматриваться, как общебиологическая закономерность — обратной зависимости уровня иммуноглобулинов молозива от уровня иммунных белков сыворотки крови у сельскохозяйственных животных с молозивным типом передачи антител потомкам после родов-.

Относительная стабилизация-уровней иммуноглобулинов- в сыворотках молозива и крови у коров и свиноматок к третьим суткам после родов несомненно, обусловлена биологическими причинами, отражающими утрату способности тонкого отдела кишечника новорожденных телят и поросят к абсорбции иммуноглобулинов путем пиноцитоза, и транспортировки их в кровь без предварительного расщепления на пептиды и аминокислоты. Тем самым подтверждается гипотеза об абсорбции иммунных белков кишечником новорожденных сельскохозяйственных животных с молозивным типом передачи антител потомкам только в первые дни их жизни.

При проведении опыта по определению зависимости количественного содержания белковых фракций в сыворотке крови от общего белка у новорожденных поросят установлено, что уровень Р - и у - глобулинов находится в прямой зависимости от содержания общего белка в ней (г=0,97). Так животные, в сыворотке крови которых установлено содержание общего белка до 40 г/л, имели минимальное количество иммуноглобулинов класса G, а именно -IgG] - 9,3±0,7 г/л и IgG2 - 3,5±0,5 г/л. Максимальное количество иммуноглобулинов в сыворотке крови (IgGj - 25,4±0,9 г/л и IgG2 - 8,0±0,4 г/л) было у новорожденных поросят с уровнем общего белка 80 г/л. Высокая разница в содержании общего белка сыворотки крови между описанными группами была характерна только для 3,2% новорожденных поросят. Абсолютное большинство животных имели в крови от 50 до 80 г/л общего белка, причем в основном отмечали уровень от 60 до 70 г/л. Этот уровень общего белка мы определили как средний и приняли за точку отсчета при оценке напряженности колострального иммунитета.

Согласно нашим исследованиям, содержание общего белка в сыворотке крови новорожденных поросят от 30 до 40 г/л соответствует гипогаммаглобулинемии тяжелой степени, от 40 до 50 - средней, от 50 до 60 — слабо выраженной гипогаммаглобулинемии, и от 60 до 80 г/л — нормогаммаглобулине-мии.

В параллельно проведенных исследованиях нами также установлена прямая зависимость сохранности новорожденных поросят от уровня общего белка (г=0,92) и иммуноглобулинов в сыворотке их крови (r=f0,93). Так, животные с уровнем общего белка 30-40 г/л и иммуноглобулинов Gi 9,3±0,7 г/л и G2 3,2±0,3 г/л, имели сохранность до отъема 58 %. Сохранность до отъема 77 % имели поросята с содержанием в сыворотке крови общего белка 70-80 г/л и иммуноглобулинов Gi 23,7±0,3 г/л и G2 6,3+0,3 г/л.

196

Новорожденные телята в сыворотке крови которых установлено содержание общего белка до 50 г/л имели минимальное количество иммуноглобулинов класса G, а именно - IgGj - 1 ОД±0,2 г/л и IgG2 - 4,2±0,2 г/л. Максимальный уровень иммуноглобулинных белков в сыворотке крови (IgGi — 15,0±0,7 г/л и IgGi - 6,2±0,3 г/л), был у новорожденных телят с содержанием общего белка в сыворотках крови до 80 г/л. В соответствии с данными наших исследований содержание общего белка в сыворотках крови новорожденных телят от 40-50 г/л соответствует состоянию гипогаммаглобулинемии ярко выраженной, от 50 до 60 г/л гипогаммаглобулинемии слабо выраженной и содержание общего белка от 60 до 80 г/л - нормогаммаглобулинемии.

Нами также установлена прямая зависимость сохранности новорожденных телят от уровня общего белка (г =0,93) и иммунных белков (г =0,92), содержащихся в сыворотке их крови. Так, телят с уровнем общего белка 4050 г/л и иммуноглобулинов G] - 10,1±0,2 г/л и G2 - 4,2±0,2 г/л имели сохранность до 2- месячного возраста 60 %. Сохранность до 2~ месяцев 100 % имели телята с содержанием в. сыворотках крови общего белка 60-80 г/л и иммуноглобулинов Gi - 15,0±0,7 г/л и G2 - 6,2±0,3 г/л.

Для упрощения диагностики иммунодефицитов периода новорожден-ности животных в производственных условиях, где крайне затруднительно количественное определение иммуноглобулинов основных классов, нами предложен рефрактометрический метод. Рефрактометрический способ определения общего белка в сыворотках крови новорожденных животных, позволяет быстро и довольно достоверно диагностировать иммунодефициты молодняка. А уровень общего белка в 50 г/л, как пограничное значение, соответствующее- наличию - выраженного молозивного иммунодефицита телят и поросят, исключает путаницу при постановке диагноза.

Нами установлено, что массовые желудочно-кишечные болезни новорожденных телят обусловлены различными этиологическими агентами и протекают чаще всего в форме смешанных кишечных инфекций. При этом этиологическая структура заболеваний, как и факторы, предрасполагающие и способствующие их возникновению и развитию, различны.

В большинстве случаев (56,6 %) от больных телят и поросят выделялись ассоциации энтеробактерий и бактерий других семейств, включающих от 2 до 5 видов. Ассоциации микроорганизмов особенно опасны для новорожденных телят и поросят, что связано с незавершенностью иммунного созревания и пониженной степенью иммунного ответа у молодняка в постнатальный период. Энтериты смешанной этиологии у новорожденных стали самыми распространенными болезнями. Основной причиной возникновения смешанных инфекций молодняка в хозяйствах является условно патогенная и патогенная микрофлора различных родов и видов.

Животные, в сыворотке крови которых содержание общего белка составляет менее 50 г/л, имеют иммунодефицит и без соответствующей серопрофилактики предрасположены к различным заболеваниям, особенно желудочно-кишечным. Иммунный дефицит стадии новорожденности, который усугубляется при недостаточном поступлении из молозива гуморальных факторов иммунитета, мы профилактировали путем перорального применения неспецифического гамма-глобулина. Вследствие высокой проницаемости слизистой оболочки тонкого отдела кишечника новорожденных поросят для иммуноглобулинов этот путь наиболее эффективен и физиологически целесообразен при применении препарата. Этот способ позволяет в первые двое суток не только абсорбироваться кишечником и поступать в кровь иммуноглобулинам в неизменном виде, но и создает определенную защиту пищеварительной системы, что обеспечивает устойчивость поросят к острым желудочно-кишечным заболеваниям. Данный способ применения препарата способствовал сокращению заболеваемости поросят гастроэнтеритами и способствовал увеличению сохранности животных на 10 % по сравнению с контрольными группами.

По нашим данным внутримышечное применение неспецифического гамма-глобулина оказывает стимулирующий эффект на организм новорожденных поросят не только за счет специфических антител к возможным антигенам, но и как компонент неспецифической протеинотерапии. Стимуляции формирования местного иммунитета при этом не происходит. Поросята, которым внутримышечно применяли неспецифический гамма-глобулин, как и контрольные животные, также были подвержены острым желудочно-кишечным расстройствам. Однако наблюдается некоторое увеличение сохранности животных на 3 % в течение срока наблюдения (до 35-суточного возраста). Поэтому парентерально препарат целесообразно применять в те сроки, когда слизистая оболочка тонкого отдела кишечника поросят становится непроницаемой для иммуноглобулинов, то есть животным старше 2-суточного возраста.

Более эффективной в наших исследованиях при коррекции иммунодефицитов новорожденных животных оказалась аллогенная иммунная сыворотка крови свиней (АИСС), при пероральном применении которой наблюдалось резкое возрастание показателей естественной резистентности организма, и повышался уровень колострального иммунитета. Авторы данного препарата не предусматривали ее перорального применения. Однако именно пероральное применение АИСС новорожденным поросятам в первые часы жизни способствовало резкому снижению заболеваемости животных и повышению сохранности поросят на 15 % по сравнению с животными контрольной группы.

Внутримышечное применение аллогенной иммунной сыворотки крови свиней также оказывало иммунокомпенсирующий эффект на организм новорожденных животных, но на фоне отсутствия местного воздействия на микрофлору в просвете кишечника она была значительно ниже, чем при пероральном способе введения препарата.

Известно, что слизистые оболочки, заселенные множеством микроорганизмов, являются местом хрупкого равновесия между местной бактериальной флорой и защитными силами организма. При сниженной общей и особенно местной иммунной защиты равновесие нарушается, что способствует развитию очага инфекции в слизистой оболочке.

Слизистые оболочки обладают несколькими последовательно включающимися защитными системами. На первом этапе происходит иммунное исключение (мукоцилиарная защита), которое ограничивает заселение, сдерживает проникновение и препятствует фиксации патогенного возбудителя на слизистой благодаря секрету, обладающему противомикробным действием. С помощью этого секрета антигены транспортируются за пределы организма.

Если первоначальные механизмы защиты не сработали, и патоген проник сквозь эпителиальный барьер, включается вторая линия защиты организма — иммунный клиренс (очищение), механизмы которого обезвреживают, инактивируют, деструктуируют и удаляют живой или мертвый антигенный материал. Иммунный клиренс представлен специфическими и неспецифическими механизмами защиты.

Важным фактором неспецифической мукозальной иммунной защиты является адгезия, посредством которой организм контролирует численность бактерий. Механизмы адгезии весьма разнообразны и включают как неспецифические, так и специфические взаимодействия.

Важная роль в неспецифической защите слизистых оболочек принадлежит лизоциму. Этот фермент, присутствующий во многих клетках, тканях, секреторных жидкостях организма. Например, в мокроте, слюне, сыворотке крови, лейкоцитах, способствуют уничтожению микроорганизмов, ограничивая их количество.

Патогены, прошедшие через мукоцилиарную защиту и нейтрализованные неспецифическими факторами слизистых оболочек, активируют Т-< и В-лимфоциты, приводя к выработке антител, индуцируя развитие специфического иммунного ответа.

После стимуляции антигеном в фолликулах, значительно удаленных от поверхности слизистой, образуются зародышевые центры, в, которых происходит развитие локальных иммунных реакций и начальное формирование клонов антиген-специфических лимфоцитов. Окончательное созревание Т- и В-активированных лимфоцитов происходит после их перемещения в эффек-торные зоны слизистой оболочки, представляющие собой скопление лимфо-идных клеток в слое рыхлой соединительной ткани. Именно здесь развиваются клеточные и гуморальные иммунные реакции, а также другие антиген-специфические процессы.

В эффекторных зонах мукозальной иммунной системы также происходит трансформация В-лимфоцитов в IgA-продуцирующие плазматические клетки. IgA является доминирующим иммуноглобулином секретов организма (слюны, пищеварительного сока, выделений носовой полости).

Выделение слизистых оболочек организма в обособленную иммунную систему, подвигло ученых на разработку средств специфической профилактики болезней слизистых, что явилось основанием для нас, приступить к изучению перорального применения концентрированных сывороток крови крупного рогатого скота и свиней.

На примере использования для профилактики иммунодефицитов у новорожденных поросят вышеописанных средств крови животных (гамма-глобулины, АИСС) мы подтвердили преимущество перорального способа введения препаратов по сравнению с внутримышечным, в первые часы жизни поросят. Данный способ применения позволяет наиболее полно использовать физиологически обусловленный путь поступления иммуноглобулинов крови свиноматок в организм новорожденных поросят через абсорбцию антител тонким отделом кишечника. Сочетание местного воздействия на микрофлору в желудочно-кишечном тракте и общего на весь организм в целом позволяет профилактировать заболеваемость и гибель новорожденных поросят на-10-15 %. Пероральное* применение препаратов наиболее эффективно впервые 48 часов жизни поросят. По истечении этого срока целесообразно внутримышечное введение как аллогенной иммунной сыворотки крови свиней, так и неспецифического гамма-глобулина.

Однако несмотря на определенный профилактический и лечебный эффект, данные препараты имеют ряд существенных недостатков. Неспецифический гамма-глобулин содержит антитела к условно патогенной микрофлоре (УПМ), персистирующей среди животных-доноров биофабриках и не содержит антител к УПМ той фермы, где его применяют. Способ введения данного препарата, согласно наставлению по его применению, только парентеральный, что по нашим данным для поросят до 2-суточного возраста не всегда целесообразно. Сывороточные препараты при парентеральном введении стимулируют систему иммунитета и общую резистентность организма, но не обеспечивают локальной защиты кишечника от условно патогенной и патогенной микрофлоры, а также продуктов их метаболизма. Технология изготовления аллогенной иммунной сыворотки крови свиней предусматривает использование крови местных убойных животных. АИСС имеет специфические антитела против микрофлоры конкретной свинофермы, хотя содержание антител в единице объема сыворотки не велико. Применение в раннем пост-натальном возрасте, дополнительно к материнским иммуноглобулинам, препаратов аллогенных сывороток из местного сырья — реальная возможность продлить период пассивной противоинфекционной защиты у иммунно незрелых особей.

Пока новорожденные поросята находятся в той же среде, что и свиноматка, молозивные антитела выполняют функцию противоинфекционной защиты. Здесь уместно подчеркнуть, что в отличие от молозива с его персональным происхождением и назначением, аллогенные сыворотки крови позволяют передавать каждому отдельному новорожденному не индивидуальный (материнский), а коллективный (групповой) иммунитет. С этой точки зрения препараты из аллогенных сывороток представляют уникальные коллекции индивидуальных иммуноглобулиновых клонов, однако авторы АИСС не предусматривают ее перорального применения, что существенно отражается на эффективности.ее применения.

Аллогенные сыворотки от представительного контингента взрослых животных фермы, в частности КСК, содержат специфические антитела не только к различным антигенам, но и антитела одного и того же класса, но разной аффинности. Благодаря этому различные способности антител к нейтрализации, опсонизации, активации системы комплемента и другие, обычно разброшенные во времени у одного индивидуума, сближаются в коллективном иммуноглобулиновом субстрате. Иными словами, при использовании КСК становится реальным подбор наиболее адекватного по месту и времени, гармонизирующего с конкретной антигенной ситуацией, типов иммуногло-булиновых молекул.

Уникальный комплекс антител различных иммуноглобулиновых классов в разной степени зрелости к различным возбудителям, воплощенный в препаратах КСК, можно рассматривать как продукт коллективного динамического донора - несопоставимое с простым конгломератом объединенных стандартных сывороток. Учитывая; что в формировании каждой серии препарата участвует значительное количество доноров, любые из возможных сочетаний антител встречаются многократной В,результате при объединении донорских сывороток значительно возрастает количество, как разновидностей антител, так и их молекулярных вариантов. При этом обеспечивается присутствие в КСК антител, которые по разным причинам синтезируется в конкретных условиях лишь у отдельных животных. Именно поэтому защита от инфекций с помощью КСК оказывается эффективной.

Простота технологии производства КСК позволяет неотступно следовать за изменениями эпизоотической ситуации на ферме, сокращая до минимума промежуток между сбором сырья для очередных серий препаратов.

Повышение концентрации антител в единице объема в 2-3 раза, а при последующих замораживаниях в 4-6 раз, возможно при использовании бытовых холодильников, что существенно упрощает процесс получения КСК. Выпаивание КСК можно проводить с использованием автоматических поилок для искусственного выпаивания молозива, при этом затраты труда сво-' , 203 дятся до минимума. Концентрированная сыворотка крови свиней может быть получена и использована, как в условиях крупного свиноводческого комплекса, так и в условиях фермерского хозяйства, ввиду простоты получения и несложного метода введения.

По своему физиологическому воздействию на организм новорожденных поросят концентрированная сыворотка крови свиней значительно превосходит неспецифические гамма-глобулины за счет наличия в достаточном количестве антител против условно патогенной микрофлоры каждого конкретного свинарника, так как производится из местного сырья.

Концентрированная сыворотка крови свиней по биологическому воздействию на организм новорожденных поросят превосходит аллогенную иммунную сыворотку крови свиней за счет повышения концентрации антител в единице объема препарата, отсутствия стресса и использования естественного механизма абсорбции иммуноглобулинов тонким отделом кишечника новорожденных поросят.

Среди представительного контингента доноров КСК всегда есть особи, которые на момент получения от них крови переживают анамнестическую иммунную реакцию на повторную встречу с возбудителем, а, следовательно, имеют особенно высокие титры соответствующих антител [Кветков В.П., 1992]. Препараты КСК направлены на профилактику и терапию не только известных, но и недосягаемых для стандартных препаратов, неизвестных или не диагностируемых инфекций, возбудители которых еще не идентифицированы, но которые не только существуют, но и преобладают над известными инфекциями. Отсутствие каких-либо сведений о многих патогенных и условно патогенных вирусах не мешают КСК защищать новорожденных поросят от соответствующих инфекций.

Установлено, что в сыворотках крови (КСК) содержатся антитела в титре 1:32 к Esherichia coli трех серовариантов, изолированных от молодняка животных тех же ферм, из крови взрослых доноров которых были изготовлены концентрированные сыворотки. Обнаружены антитела к Salmonella enteritidis в титре 1:16, что свидетельствует о наличии патогенных сальмонелл в хозяйствах. Обнаружены антитела к Proteus vulgaris в титре 1:32 и Proteus mi-rabilis в титре 1:32, а также к Citrobacter dliversus в титре 1:32 и Klebsiella pneumoniae в титре 1:16. Выявление антител в КСК к группе условно патогенных бактерий, свидетельствует о патогенной роли окружающей новорожденный организм микрофлоры. На фоне мощной стимуляции иммунной системы развиваются патологические изменения в организме, а может быть и длительное бактерионосительство, что подтверждается наличием специфических антител у взрослых доноров крови. В концентрированной сыворотке крови крупного рогатого скота выявлены антитела к вирусам парагриппа - 3 в титре 1:16 и инфекционного ринотрахеита в титре 1:8.

Аллогенные иммунные препараты, в частности КСК, способны «успевать» не только за сменой видового состава бактерий и вирусов, но и за любыми изменениями самих возбудителей, включая обретение ими новых генетических характеристик. Они меняют свой состав с изменением экологии и эпизоотологии местности получения. Данные препараты содержат иммуноглобулины различных классов не только в наиболее полном наборе, но и в том естественном состоянии, в котором они циркулируют в крови и в котором представляют наиболее стабильную, устойчивую нативную белковую смесь.

При введении КСК, наряду со специфическими антителами к энзоотическим антителам, реципиенты получают иммуноактивные факторы комплемента, комплекс бактерицидных веществ крови, а также обладающие ценными биологическими свойствами нативные гомологические протеины, минеральные соли и микроэлементы. Все эти факторы могут в ответственных для новорожденных поросят ситуациях замещать соответствующие дефекты сложного состава их внутренней среды, переживающей у новорожденных животных, особенно ранимый, период формирования. Неизбежное при промышленной концентрации животных массовое инфицирование новорожденных поросят и телят энзоотическими вирусами и бактериями ускоряет расходование колостральных антител, сокращает период естественной защищенности потомства. Кроме того, на фоне начавшегося синтеза антител в организме новорожденных животных, возможна неспецифическая стимуляция их продукции сывороточными препаратами, обеспечивающая формирование специфической гуморальной защиты. Наконец, эти препараты рассчитаны на экстренное профилактическое и терапевтическое действие на вирусные и бактериальные инфекции - за счет вводимых антител. Благодаря перораль-ному применению концентрированная сыворотка крови проявляет описанную выше способность уже в просвете кишечника, а повышенное содержание иммуноглобулинов в ней усиливает этот эффект.

Результаты исследований, выполненных в производственных условиях с препаратами крови животных, позволяют сделать вывод, что концентрированная сыворотка крови свиней обладает наибольшей эффективностью по сравнению с другими препаратами крови использованными в наших опытах. Однако, следует отметить, что при пероральном применении АИСС и неспецифического гамма-глобулина разрыв в профилактической эффективности между ними и КСК сокращается и они по биологическому воздействию на организм новорожденных животных приближаются к концентрированной сыворотке крови свиней.

Применение КСК новорожденным поросятам позволяет профилактиро-вать развитие иммунодефицитов, способствует повышению естественной резистентности организма, что в свою очередь отражается на уровне колострального иммунитета. Использование КСК можно характеризовать как фактор, влияющий на уровень колострального иммунитета в целях его повышения и, как следствие, снижение заболеваемости новорожденных поросят и значительное повышение их сохранности (на 20 %). Результаты опытов полностью подтвердились при внедрении концентрированной сыворотки в производство в условиях свинокомплекса «Краснополянский» Амурской области (акт внедрения прилагается).

Новорожденным телятам КСК применялась без сравнения с АИСС и неспецифическим гамма-глобулином, поскольку показала свое полное превосходство над ними в опытах с поросятами. Применение КСК крупного рогатого скота новорожденным телятам позволяет профилактировать, и лечить иммунодефицита, способствует повышению резистентности организма, профилактировать развитие колострального иммунодефицита, заболеваемости и гибели животных. Применение КСК крупного рогатого скота можно характеризовать как фактор, влияющий на напряженность колострального иммунитета в сторону её увеличения и как следствие снижение заболеваемости новорожденных телят и значительное повышение их сохранности (на 40 %). Результаты экспериментов полностью подтвердились при проведении производственного испытания в условиях молочно-товарных ферм ОПХ ВНИИсои, Амурской области (акт производственного испытания прилагается).

Мы не противопоставляем сывороточные препараты друг другу, особенно КСК и АИСС, а напротив считаем, что возможности их далеко не исчерпаны. Нами продолжены исследования по совершенствованию технологии получения препаратов данного класса и рекомендуется для практического применения КСК, обладающая всеми достоинствами АИСС, но превосходящая ее по активности.

Концентрирование аллогенных сывороток крови в 2,5-3,0 раза и перо-ральный способ применения КСК значительно расширили возможности иммунопрофилактики и терапии неонатальных болезней поросят и телят, позволили снизить заболеваемость новорожденных животных гастроэнтеритами, а так же значительно повысить их сохранность.