Иммунобиологические свойства полевых изолятов аденовирусов кур, выделенных на территории Российской Федерации

Ельникова, Елена Владимировна

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Иммунобиологические свойства полевых изолятов аденовирусов кур, выделенных на территории Российской Федерации

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Ельникова, Елена Владимировна Владимир 2006 г.

Ученая степень: кандидата ветеринарных наук

ВАК РФ: 16.00.03

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Иммунобиологические свойства полевых изолятов аденовирусов кур, выделенных на территории Российской Федерации

л/ /о

На правах рукописи

ЕЛЬНИКОВА Елена Владимировна

□0305448Т

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПОЛЕВЫХ ИЗОЛЯТОВ АДЕНОВИРУСОВ КУР, ВЫДЕЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

16.00.03. "Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология"

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Владимир - 2006

003054487

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных», г. Владимир.

Научный руководитель кандидат ветеринарных наук,

старший научный сотрудник БОРИСОВ Владимир Владимирович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Андрей Иванович Дудников

(ФГУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир);

доктор биологических наук, профессор

Наталья Васильевна Фомина (МГАВМиБ, г. Москва).

Ведущая организация: ФГУ «Всероссийский государственный Центр

качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ», г. Москва).

Защита состоится «23» января 2007 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220.015.01 при ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» по адресу: 600901, г. Владимир, мрн Юрьевец, ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных».

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»

Автореферат разослан «22» декабря 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук,

старший научный сотрудник

Г.М. Семенова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Аденовирусы кур - многочисленная, но сравнительно мало изученная группа вирусов. Сообщения об их выделении поступают из многих стран всех континентов. В настоящее время представители этой группы вирусов объединены в 12 серологических вариантов (FAV 1-12) (R.L. Reece et al., 1986). Патогенность и этиологическая роль многих серотипов аденовирусов кур ещё не выяснена окончательно, однако известно, что отдельные серотипы являются возбудителями таких остропротекающих инфекционных болезней, как CELO-инфекция, гепатит с тельцами-включениями (ГТВ) и синдром гидроперикардита кур (СГПК) (В.А. Бакулин и соавт.,1998; Н.В. Фомина, 1995).

CELO-инфекция характеризуется гибелью развивающихся эмбрионов кур во время инкубации и цыплят в первые дни жизни. Заболевание вызывают аденовирусы кур серотипа FAV 1 (V.J. Yates et al., 1957).

Гепатит с тельцами-включениями - инфекционное заболевание молодняка кур, характеризующееся поражением печени, почек и высокой смертностью до 30% и более. Возбудителем ГТВ в естественных условиях чаще являются аденовирусы серотипов FAV 5 и FAV 8 (B.S. Bains et al., 1977; A.F. Green et al., 1976; В. Hussain et al., 1981; R.J.H. Wells et al., 1977).

Синдром гидроперикардита кур - вирусное заболевание кур всех возрастов, которое характеризуется скоплением жидкости соломенного цвета в околосердечной сумке, отёком лёгких, поражениями печени и почек, а в некоторых случаях анемией и гангренозным дерматитом и высокой летальностью среди молодняка кур (70-80%) (M.S. Jaffery et al., 1988).

С начала 90-х годов вспышки СГПК с высоким уровнем смертности (30-80%) регистрируются на территории Российской Федерации. Согласно данным сотрудников ФГУ «ВНИИЗЖ», поражения цыплят синдромом гидроперикардита преобладают в регионах Урала и Сибири, а также зарегистрировано несколько вспышек заболевания в птицехозяйствах Северного Кавказа, в республиках Карелия, Марий Эл, Кабардино-Балкария и Ингушетия (В.В. Борисов и соавт., 2003).

Ведущее место в борьбе с аденовирусной инфекцией птиц занимает вакцинопрофилактика (M. Afzal et al., 1990; I. Ahmad et al., 1991; V. Borisov et al., 2005; R. Kumar et al., 1997). Однако проводить специфическую профилактику

аденовирусной инфекции птиц очень трудно потому, что даже при моноинфекции возможно выделение нескольких различных серотипов аденовирусов, которые способны осложнять патологический процесс (РЖ \ЛЛп1егПе1с1 е1 а1., 1977; и.В. МсРеггап, 1991). Поэтому перед проведением специфической профилактики необходимо установить, аденовирусы каких именно серотипов РА\/, циркулирующих в хозяйстве, являются возбудителями инфекции.

В связи с этим изучение иммунобиологических свойств полевых изолятов аденовирусов птиц I группы, выделенных на территории РФ, является актуальным, так как дает возможность совершенствовать диагностику и дифференциацию различных серотипов, селекционировать производственные штаммы и создавать эффективные вакцины для специфической профилактики аденовирусной инфекции птиц.

Цель и задачи исследований. Основная цель данных исследований заключалась в изучении иммунобиологических свойств полевых изолятов аденовирусов птиц I группы, циркулирующих на территории РФ, и выборе изолята для депонирования в качестве производственного штамма при изготовлении инактивированной эмульгированной культуральной вакцины против аденовирусной инфекции птиц. Для достижения этих целей необходимо было решить следующие задачи:

- отработать метод получения первичной культуры клеток печени и почек эмбрионов кур;

- разработать методику выделения и культивирования полевых изолятов аденовирусов кур;

- изучить культуральные свойства полевых изолятов аденовирусов кур, циркулирующих на территории РФ;

- изучить патогенные свойства полученных изолятов аденовирусов кур для эмбрионов СПФ-кур, СПФ-цыплят и коммерческих цыплят;

- изучить стабильность инфекционных и антигенных свойств полученных изолятов аденовирусов кур при хранении;

- изготовить лабораторные образцы вакцин из изолятов, относящихся к различным серотипам аденовирусов кур, и изучить их антигенные свойства;

- изучить перекрёстную защиту между изолятами, относящимися к различным серотипам аденовирусов кур;

обосновать выбор изолята для депонирования в качестве производственного штамма при изготовлении инактивированной культуральной вакцины против аденовирусной инфекции птиц;

- изучить иммунобиологические и физические свойства экспериментальных образцов инактивированной культуральной вакцины против аденовирусной инфекции птиц в лабораторных условиях.

Научная новизна. Научная новизна работы состоит в том, что в результате проведённых исследований:

- впервые выделены и адаптированы к первичной культуре клеток печени эмбрионов кур шесть полевых изолятов аденовирусов птиц I группы, относящихся к серотипам РА\/ 1, РА\/ 2, FA\/ 4, РАУ 6 и циркулирующих на территории РФ;

изучены иммунобиологические свойства полученных изолятов аденовирусов птиц I группы;

- изучена перекрёстная защита между изолятами, относящимися к серотипам РА\/ 1, РАУ2, РАУ 4 и РАУб аденовирусов кур;

- обоснован выбор изолята «ПА-01» для депонирования в качестве производственного штамма при изготовлении инактивированной эмульгированной культуральной вакцины против СГПК;

- изготовлены экспериментальные образцы вакцины против СГПК инактивированной эмульгированной из культурального вируса «ПА-01» и изучены их иммунобиологические и физические свойства в лабораторных условиях.

- «Методика получения первично-трипсинизированных культур клеток печени и почек куриного эмбриона и использования их для выделения и титрования аденовирусов птиц» (2001 г.);

- «Методические указания по выделению, титрованию и идентификации аденовирусов птиц I группы» (2002 г.);

- «Методические указания по выявлению антигена аденовируса птиц 2 серотипа в непрямом жидкофазном блокирующем варианте ИФА» (2005 г.);

- «Методические указания по выявлению антигена аденовируса 1 серотипа в непрямом жидкофазном блокирующем варианте ИФА» (2005 г.).

С использованием данных методик выделены, адаптированы к первичной культуре клеток печени эмбрионов кур и охарактеризованы шесть полевых изолятов аденовирусов птиц I группы, циркулирующих на территории РФ: «Башкирский», «Равис-Сосновский», «ПА-01», «Тбилисский», «Кировоградский» и «ВД-20».

Штамм «ПА-01» депонирован во Всероссийской государственной коллекции культур микроорганизмов ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» в качестве основного компонента инактивированной культуральной вакцины против СГЛК и для получения специфического антигена при комплектовании диагностических иммуноферментных наборов (ноябрь 2006 г.).

Результаты научных исследований по изучению иммунобиологических свойств изолятов аденовирусов кур и испытанию опытных образцов вакцины против СГПК рекомендовано использовать при составлении НД на инактивированную культуральную вакцину против СГПК.

Основные положения, выносимые на защиту:

- оптимальные условия выделения и культивирования полевых изолятов аденовирусов птиц I группы;

- культуральные свойства полевых изолятов аденовирусов птиц I группы;

- патогенные свойства полевых изолятов аденовирусов птиц I группы;

- стабильность инфекционных и антигенных свойств изолятов аденовирусов кур при хранении;

антигенные свойства изолятов аденовирусов кур в составе инактивированных вакцин;

- перекрестная защита между изолятами различных серотипов аденовирусов птиц I группы;

- обоснование выбора изолята «ПА-01» для депонирования в качестве производственного штамма при изготовлении инактивированной эмульгированной культуральной вакцины против аденовирусной инфекции птиц;

- результаты комиссионных испытаний экспериментальных образцов вакцины против синдрома гидроперикардита кур инактивированной эмульгированной из культурального вируса «ПА-01».

Апробация работы. Основные материалы диссертации были доложены и опубликованы в материалах Международной научной конференции молодых ученых «Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных», г. Владимир (2004), на 1-ом Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству, г. Москва (2005), и на заседаниях учёного совета ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» в 2003 - 2005 гг.

Публикации научных исследований. По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 159 листах компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические предложения и приложения. Список литературы включает 232 источника, в том числе 33 работы на русском языке. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 13 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Вирусный материал. В исследованиях использовали изоляты аденовирусов кур, выделенные сотрудниками ФГУ «ВНИИЗЖ» из патологического материала в течение 2000-2003 гг.: «Башкирский», «Равис-Сосновский», «ПА-01», «Кировоградский», «Тбилисский» и «ВД-20», а также производственный штамм вируса СГПК «KP 95» и референтные штаммы FAV (1-12) аденовирусов птиц I группы фирмы «Spafas» (США).

Культура клеток. В работе использовали первичную культуру клеток печени 15-суточных эмбрионов СПФ-кур фирмы «Lohman Tierzucht» (Германия).

Подопытные животные. Экспериментальную работу проводили на клинически здоровых цыплятах кросса «Хайсекс коричневый», неиммунных к аденовирусам птиц I группы, полученных из хозяйств, благополучных по острым инфекционным заболеваниям, а также на СПФ-цыплятах 1-5-суточного возраста.

Определение инфекционной активности вируса. Инфекционную активность вируса в исследуемом материале определяли титрованием на первичной культуре клеток печени эмбрионов кур с использованием 48-луночных пластиковых планшетов для культивирования клеток фирмы «Corning» (Германия). Расчет титра проводили по методу Кербера и выражали в 1дТЦД50/см3.

Определение морфологического соответствия видовой принадлежности вируса. Морфологию выделенных изолятов изучали электронномикроскопическим методом после негативного контрастирования с использованием 4% раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты (ФВК), рН 6,8. Анализ препаратов проводили под электронным микроскопом JEM-100B (Япония) при инструментальном увеличении в 150000 раз. Исследования проводили совместно с д.б.н. А. П. Пономарёвым.

Молекулярно-биологические и серологические исследования. Для идентификации вируса, выделенного из патологического материала, использовали ПЦР и секвенирование амплифицированных фрагментов консервативной области гена гексона (В.А. Лобанов и соавт., 2000). Наличие специфических антител в сыворотках крови к серотипам FAV 1, FAV 2, FAV 4, FAV 6 аденовирусов птиц I группы определяли в непрямом варианте ИФА с использованием диагностических наборов производства ФГУ «ВНИИЗЖ». Определение активности и специфичности антигенов аденовирусов птиц I группы проводили в непрямом жидкофазном блокирующем варианте ИФА с набором гипериммунных сывороток кур, кролика или морской свинки к серотипам FAV 1, FAV 2, FAV 4, FAV 6 аденовирусов птиц I группы по методикам, утвержденным директором ФГУ «ВНИИЗЖ» (М.А. Волкова и соавт. 2001-2005 гг.).

Реакцию нейтрализации проводили микрометодом на первичной культуре клеток печени ЭК по стандартной методике с разведением вируса и постоянной дозой сыворотки. Для постановки реакции использовали гипериммунные сыворотки кроликов, полученные на каждый из изучаемых изолятов. Индекс нейтрализации (ИН) рассчитывали по формуле 1:

ИН = Tas»snI Tas*ss , где (1)

Tas-sn-титр вируса в присутствии нормальной сыворотки, Tas-ss- титр вируса в присутствии специфической сыворотки.

Данные этапы работы были выполнены совместно с сотрудниками лаборатории диагностики болезней птиц ФГУ «ВНИИЗЖ», за что им выражаем искреннюю благодарность.

Инактивация аденовируса. Инактивацию вирусной суспензии проводили 1,2 аминоэтилазиридином. В подогретую до 35 °С вирусную суспензию вносили 1,2 аминоэтилазиридином до конечной концентрации 0,3% и выдерживали при температуре 37 °С в течение 24 часов (Д.С. Сурнев, 2000).

Изготовление вакцин. Для приготовления опытных образцов инактивированной эмульгированной вакцины против аденовирусной инфекции птиц использовали очищенную культуральную вируссодержащую суспензию, а также масляный адъювант - Монтанид ИЗА 70 фирмы «Сеппик» (Франция). Вакцину с типом эмульсии вода-масло составляли в соотношении 30 частей антигена и 70 частей адъюванта (по весу). Эмульгирование проводили на лабораторном эмульсоре «Сильверсон» (Англия) в течение 6 мин при 6000 об/мин.

Изучение иммунобиологических свойств экспериментальной вакцины.

Проверку вакцины на стерильность проводили в соответствии с ГОСТом 28085-89 «Препараты биологические. Методы бактериологического контроля стерильности».

Полноту инактивации вируса и безвредность вакцины определяли методом введения средней пробы вакцины цыплятам. В течение 21 суток все цыплята должны оставаться живыми, без клинических признаков заболевания. При вскрытии вынужденно убитой птицы на месте введения вакцины не должно быть морфологических изменений в виде воспаления, очагов некроза и гранулём.

Антигенную активность вакцины оценивали по уровню прироста антител в сыворотках крови вакцинированных против СГПК птиц через 28 суток после иммунизации. Антитела к аденовирусу кур серотипа РА\/ 4 определяли в соответствии с наставлением по применению диагностического набора (производства ФГУ «ВНИИЗЖ») для выявления антител к аденовирусу птиц 4 серотипа I группы иммуноферментным методом.

Иммуногенная активность вакцины была оценена по результатам контрольного заражения птиц, привитых вакциной против синдрома гидроперикардита кур инактивированной эмульгированной из культурального

вируса через 28 суток после вакцинации вирулентным штаммом «КР 95» методом внутримышечной инъекции в область голени.

Статистическая обработка результатов. При анализе и обобщении результатов исследований использовали методы, описанные в руководстве по биометрии И.П. Ашмарина и А.А. Воробьёва (1962 г.), а также компьютерную пограмму Statistical Basic Statistic and Tables.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Подбор оптимальных условий выделения и культивирования полевых изолятов аденовирусов птиц. По данным литературы (Р.Н. Коровин и соавт.,1990; Р.В. Фомина, 1995; C.N. Burke et al., 1965), для выделения и адаптации полевых изолятов аденовирусов птиц I группы предлагается использовать клеточные культуры, наиболее продуктивной и чувствительной из которых является первичная культура клеток печени эмбрионов СПФ-кур. В связи с этим на первом этапе исследований необходимо было отработать оптимальные условия выделения, адаптации и культивирования аденовирусов кур в первичной культуре клеток печени ЭК. Было изучено влияние на репродукцию референтных штаммов FAV аденовирусов кур таких параметров, как вид поддерживающей среды, рН поддерживающей среды, посевная концентрация клеток, множественность заражения и время культивирования вируса.

В результате проведенных исследований были получены следующие результаты:

- для культивирования аденовирусов птиц I группы в качестве поддерживающей среды можно использовать среду 199 или ПСП с 2% фетальной сыворотки теленка и с рН 7,6-7,8;

- наиболее оптимальная посевная концентрация клеток для репродукции аденовирусов птиц I группы 800-900 тыс./см3, а оптимальная доза заражения 0,1 ТЦДк/кл.

- оптимальный срок культивирования аденовирусов птиц I группы 72-96 часов.

С использованием данных параметров выделены, адаптированы к первичной культуре клеток печени ЭК и охарактеризованы шесть полевых изолятов аденовирусов птиц I группы, циркулирующих на территории РФ.

Культуральные свойства полевых изолятов аденовирусов птиц I группы. Матрасы с хорошо сформированным монослоем клеток инфицировали 10% очищенной вируссодержащей суспензией печени, полученной от птиц, павших с признаками аденовирусной инфекции, в объёме 0,2 см3. Размножение вируса в культуре клеток определяли по характерному для аденовирусов птиц цитопатическому действию, проявляющемуся в виде дегенерации монослоя (7580%), округления, увеличения и склеивания клеток. Для освобождения вируса из клеток вируссодержащую культуральную жидкость подвергали многократному замораживанию-оттаиванию (2-3 раза). В случае отсутствия цитопатических изменений при выделении вируса из патологического материала проводили 2-3 «слепых» пассажа. Активность выделенных изолятов определяли методом титрования на культуре клеток печени ЭК.

Культуральные свойства выделенных изолятов изучали в сравнении с референтными штаммами аденовирусов кур аналогичных серотипов РАУ 1, РАУ2, РАУ 4 и РАУ 6.

Культуральные свойства выделенных изолятов представлены в таблице 1.

Таблица 1

Свойства полевых изолятов аденовирусов птиц I группы при культивировании в культуре клеток печени ЭК

(п = 3

Пассаж вируса Титр вируса, 1дТЦД50/см3

«Башкирский» «ПА-01» «Кировоградский» «Тбилисский» «Равис-Соснов-ский» «ВД-20»

1 - - - - - -

2 - - - - - -

3 - 2,33+0,18 2,12±0,22 2,15±0,22 - 3,32±0,14

4 3,03±0,14 3,61+0,22 3,04±0,28 3,62±0,22 2,30±0,08 4,13±0,22

5 4,52+0,28 6,55±0,70 6,12±0,14 5,61±0,32 4,02+0,22 6,15+0,14

6 6,63±0,52 8,52±0,13 7,53±0,43 7,25±0,41 6,14±0,16 6,75+0,22

7 6,61±0,31 9,00+0,38 8,51+0,13 8,74+0,31 5,90±0,22 8,62+0,36

8 6,04+0,16 8,75±0,31 8,08+0,31 7,81±0,08 4,51±0,28 7,53+0,43

9 5,80±0,08 9,02±0,25 7,90±0,08 8,63±0,36 3,58+0,31 7,25±0,43

10 6,02±0,14 9,33±0,25 8,72+0,31 8,54±0,13 3,03±0,28 6,81±0,32

Примечание: «-» слепой пассаж

Из данных, представленных в табл. 1, видно, что все изоляты аденовирусов адаптировались к первичной культуре клеток печени ЭК за 2-3 пассажа и к 6-7

пассажу достигали максимальных титров. Однако изоляты «Башкирский», «ПАСЯ», «Кировоградский» и «Тбилисский» стабильно сохраняли свойственный им уровень репродуктивной активности в течение 10 пассажей, тогда как активность изолятов «ВД-20» и «Равис-Сосновский» после 7 пассажа при дальнейшем пассировании снижалась от 2 до 31д.

Референтные штаммы ранее были адаптированы к культуре клеток, поэтому все они репродуцировались в первичной культуре клеток печени ЭК с первого пассажа, достигая максимальных титров к 6 пассажу и сохраняя свойственный им уровень репродуктивной активности при дальнейшем пассировании.

Оценка морфологического соответствия и видовой принадлежности выделенных изолятов. Очищенную и концентрированную культуральную жидкость, содержащую один из выделенных изолятов, исследовали под электронным микроскопом иЕМ-ЮОВ (Япония). При инструментальном увеличении в 150000 раз в поле зрения микроскопа наблюдали хорошо различимые вирусные частицы, которые состояли из сферического нуклеокапсида с икосаэдрической симметрией без суперкапсидной оболочки. Диаметр нуклеокапсида имел размер 60 - 75 нм. Структура этих частиц оказалась аналогична структуре вирионов аденовирусов птиц I группы.

Видовая принадлежность выделенных изолятов аденовируса была подтверждена с помощью ПЦР и секвенирования амплифицированных участков гена гексона. В результате сравнения нуклеотидной последовательности амплифицированных фрагментов гена гексона выделенных изолятов с последовательностями аналогичной области гена гексона двенадцати референтных штаммов аденовирусов птиц I группы «Spafas» (США) установили, что изолят «Башкирский» наиболее генетически близок к референтному штамму серотипа РАУ 1; изоляты «ПА-01», «Тбилисский» и «Кировоградский» - к штамму серотипа РА\/ 4; изолят «Равис-Сосновский» - к штамму серотипа РАУ 2, а изолят «ВД-20» - к штамму серотипа РА\/ 6.

Контроль выделенных изолятов аденовирусов птиц I группы на наличие контаминации. После каждой расплодки выделенных изолятов в первичной культуре клеток печени ЭК производили их контроль на отсутствие чужеродных вирусов, бактериальной, грибковой и микоплазменной контаминации. В результате установлено, что препараты изолятов «Башкирский», «Равис-

Сосновский», «ПА-01», «Кировоградский», «Тбилисский» и «ВД-20» не контаминированы вирусами ньюкаслской болезни птиц, инфекционного бронхита кур, инфекционной бурсальной болезни птиц, инфекционного ларинготрахеита, инфекционного энцефаломиелита птиц, лейкоза птиц, вируса гриппа А, пневмовирусом птиц, вирусом Болезни Марека, микоплазмами синовия и галлисептикум, а также бактериальной микрофлорой.

Патогенные свойства полевых изолятов аденовирусов птиц I группы. Целью наших дальнейших исследований было изучение патогенных свойств полученных изолятов аденовирусов кур в отношении эмбрионов СПФ-кур, СПФ-цыплят и коммерческих цыплят.

Патогенность для эмбрионов СПФ-кур. В опыте использовали 70 эмбрионов СПФ-кур 5-суточной инкубации и 70 эмбрионов после 10 суток инкубации, которые разделили на 12 опытных и две контрольных группы по 10 эмбрионов в каждой. Эмбрионы каждой опытной группы заражали одним из выделенных изолятов аденовируса кур двумя способами (в аллантоисную полость и в желточный мешок) в объёме 0,2 см3 с титром инфекционной активности 4,5±0,1 1дТЦД50/см3.

Проведенные исследования показали, что заражение СПФ-эмбрионов в аллантоисную полость изолятами «ПА-01», «Тбилисский», «Кировоградский» и «Равис-Сосновский» в течение трех последовательных пассажей привело к отсутствию накопления этих вирусов в аллантоисной жидкости. Изоляты «Башкирский» и «ВД-20» не вызывали видимых изменений у эмбрионов, но накапливались в аллантоисной жидкости в титрах, которые составили в Б-ИФА 1:1024 и 1:32, соответственно.

Однако все изучаемые изоляты хорошо репродуцировались в органах СПФ-эмбрионов (печень, почки, селезёнка) при заражении в желточный мешок, вызывая поражения внутренних органов и гибель эмбрионов от 80 до 100%. Полученные результаты представлены в таблице 2.

Действие аденовирусной инфекции проявлялось отставанием в росте и кровоизлияниями под кожей. У всех павших эмбрионов печень была увеличена, гиперемирована и имела мозаичный рисунок, почки увеличены в размере, светло-коричневого цвета. У эмбрионов, зараженных изолятами «ПА-01», «Тбилисский», «Кировоградский», были отмечены поражения сердца (гидроперикардит).

Таблица 2

Патологоанатомические изменения СПФ-эмбрионов кур при инфицировании в желточный мешок изолятами аденовирусов птиц I группы

Изолят Патологоанатомические изменения Гибель

Отставание в росте Кровоизлияния Гидроперикардит Гепатит Нефрит

«Башкирский» 10/10* 7/10 0/10 10/10 10/10 10/10

«Равис-Сосновский» 8/10 8/10 0/10 8/10 8/10 8/10

«ПА-01» 10/10 10/10 3/10 10/10 10/10 10/10

«Тбилисский» 10/10 10/10 2/10 10/10 10/10 10/10

«Кировоградский» 9/10 9/10 3/10 9/10 9/10 9/10

«ВД-20» 9/10 9/10 0/10 9/10 9/10 9/10

Контрольная группа 0/10 0/10 0/10 0/10 0/10 0/10

Примечание: «*» знаменатель - количество исследованных КЭ, числитель - КЭ с патологией.

Патогенность для СПФ-цыплят. Для изучения патогенных свойств полученных изолятов было проведено три последовательных пассажа на СПФ-цыплятах. СПФ-цыплят 3-суточного возраста инфицировали внутримышечно в область бедра в объеме 0,2 см3 одним из полученных изолятов аденовирусов кур с титром инфекционной активности 4,5±0,1 1д ТЦД5о/См3 За птицей вели наблюдение в течение 10 суток. Все изучаемые изоляты аденовирусов кур имели различную степень патогенности. Результаты опыта представлены в таблице 3.

В группе цыплят, зараженных изолятом «Башкирский», через 72 часа после инфицирования отмечали снижение аппетита, затруднённое дыхание, птица сидела скученно, нахохлившись. После переболевания, на 7 сутки, состояние цыплят улучшалось. При вскрытии вынуждено убитых птиц видимых патологических изменений не выявлено, однако при дальнейшем исследовании гомогенатов органов аденовирус кур серотипа ЯА\/ 1 был выделен из кишечника всех инфицированных цыплят, титр которого в Б-ИФА составил 1:1024. Дальнейшее пассирование изолята «Башкирский» на СПФ-цыплятах не привело к усилению его патогенных свойств.

В группах цыплят, инфицированных изолятами «Равис-Сосновский» и «ВД-20», наблюдали отказ от корма, снижение подвижности, взъерошенность перьевого покрова, выделение жидких каловых масс и гибель 80%, 90%,

состветственно. При патологоанатомическом вскрытии павших цыплят каждой группы наблюдали увеличение печени, которая была дряблой консистенции с точечными кровоизлияниями. Почки также были увеличены и гиперемированы, темно-коричневого цвета. У цыплят, зараженных изолятом «ВД-20», канальцы почек и мочеточники были заполнены уратами. В сердце видимых изменений не отмечено.

Таблица 3

Клинические признаки и патологоанатомические изменения в органах СПФ-цыплят, инфицированных изолятами аденовирусов птиц I группы

Изолят Пас саж Клинические признаки Патологоанатомические изменения Гибель

Общее угнетение Отставание в росте Гидроперикардит Гепатит Нефрит

«Башкирский» 1 10/10* 10/10 0/10 0/10 0/10 0/10

2 10/10 10/10 0/10 0/10 0/10 0/10

3 10/10 10/10 0/10 0/10 0/10 0/10

«Равис-Соснов-ский» 1 10/10 2/10 0/10 8/10 8/10 8/10

2 10/10 9/10 0/10 1/10 1/10 1/10

3 0/10 0/10 0/10 0/10 0/10 0/10

«ВД-20» 1 10/10 1/10 0/10 9/10 9/10 9/10

2 10/10 7/10 0/10 3/10 3/10 3/10

3 10/10 8/10 0/10 2/10 2/10 2/10

«ПА-01» 1 10/10 1/10 5/10 9/10 9/10 9/10

2 0/10 0/10 7/10 10/10 10/10 10/10

3 0/10 0/10 8/10 10/10 10/10 10/10

«Тбилис-. ский» 1 10/10 2/10 4/10 8/10 8/10 8/10

2 0/10 1/10 6/10 9/10 9/10 9/10

3 0/10 0/10 6/10 10/10 10/10 10/10

«Кировоградский» 1 10/10 1/10 6/10 9/10 9/10 9/10

2 0/10 0/10 6/10 10/10 10/10 10/10

3 0/10 0/10 7/10 10/10 10/10 10/10

Контрольная группа - 0/10 0/10 0/10 0/10 0/10 0/10

Примечание: «*» знаменатель - количество исследованых СПФ-цыплят,

числитель - СПФ-цыплята с клиническими признаками или с патологией

Наиболее вирулентными в отношении СПФ-цыплят оказались изоляты, относящиеся к серотипу РАУ 4. Так, каждый последующий пассаж изолятов «ПАСИ», «Тбилисский» и «Кировоградский» на СПФ-цыплятах приводил к повышению их вирулентности и смертности птиц до 100%. Аденовирусная инфекция

проявлялась в виде внезапного падежа цыплят в течение 5 суток после заражения. При патологоанатомическом вскрытии павших цыплят из каждой группы было отмечено, что печень увеличена в объёме, неравномерно окрашена с участками светло-жёлтого цвета и кровоизлияниями, у 50% трупов сердце было деформировано, сердечная сорочка увеличена и содержала прозрачную жидкость соломенно-жёлтого цвета вязкой консистенции. Почки увеличены, желто-коричневого цвета.

Патогенность для коммерческих цыплят. Патогенные свойства полученных изолятов изучали на 10-суточных цыплятах кросса «Хайсекс коричневый», не имеющих антител к аденовирусам кур серотипов РА\/ 1, РА\/ 2, РА\/ 4 и РА\/ 6. В опыте использовали 70 цыплят, которых разделили на 1 контрольную и 6 опытных групп, по 10 птиц в каждой. Цыплят каждой опытной группы инфицировали внутримышечно в область бедра в объеме 0,2 см3 одним из выделенных изолятов аденовируса кур с титром инфекционной активности 4,5+0,1 1дТЦД50/см3 За птицей вели наблюдение в течение 10 суток.

Инфицирование коммерческих цыплят изолятами «ПА-01», «Тбилисский» и «Кировоградский» через 48 часов после заражения привело к проявлению клинических признаков аденовирусной инфекции и смертности от 70 до 100%. При патологоанатомическом вскрытии павших цыплят каждой группы был отмечен гепатит, нефрит, а также в 30% случаев - гидроперикардит.

В группах коммерческих цыплят, инфицированных изолятами «Башкирский», «Равис-Сосновский» и «ВД-20», клинических проявлений аденовирусной инфекции не наблюдали в течение 14 суток (срок наблюдения), птица была подвижной, охотно поедала корм.

Стабильность инфекционных и антигенных свойств изолятов аденовирусов птиц I группы при хранении. Стабильность инфекционных и антигенных свойств полученных изолятов оценивали в процессе хранения во временном интервале. До начала хранения и в различные сроки после хранения во всех образцах определяли инфекционную активность вируса титрованием на первичной культуре клеток печени ЭК и антигенную активность в непрямом жидкофазном блокирующем варианте ИФА. Результаты опытов представлены в таблице 4.

Таблица 4

Инфекционная и антигенная активность изолятов аденовирусов птиц

I группы после хранения _(п=3)

Изолят Титр вируса До хранения Длительность хранения, месяцы

При 4иС При минус 40иС

1 2 3 6 12

«Башкирский» 1яТЦД50/см' 5,8±0,7 6,0±0,2 6,0±0,1 4,5±0,3 6,6±0,3 6,0±0,1

Б-ИФА 1:32 1:32 1:32 1:8 1:32 1:32

«Равис-Соновский» 1яТЦД50/см3 4,0±0,2 4,2±0,3 4,0+0,2 2,6±0,3 4,0+0,2 3,8±0,2

Б-ИФА 1:16 1:16 1:8 1:4 1:16 1:16

«ВД-20» 1дТЦД50/см3 6,7+0,4 6,5±0,1 6,0+0,2 4,9±0,2 6,8±0,3 6,7±0,2

Б-ИФА 1:128 1:128 1:64 1:32 1:128 1:64

«ПА-01» 1яТЦД5о/см3 8,7±0,2 8,5+0,1 7,8±0,1 6,5±0,7 9,0+0,2 8,7±0,3

Б-ИФА 1:128 1:128 1:64 1:64 1:128 1:128

«Тбилисский» 1яТЦД50/см;з 8,5±0,1 8,7±0,3 6,1+0,3 5,3±0,2 8,7±0,3 8,0±0,4

Б-ИФА 1:128 1:128 1:32 1:16 1:128 1:64

«Кировоградский» 1дТЦД5Шсм3 8,0±0,4 7,9+0,1 5,2±0,1 4,1±0,1 8,1±0,3 7,9+0,1

Б-ИФА 1:64 1:64 1:16 1:8 1:64 1:64

Из данных, представленных в табл. 4, видно, что хранение изолятов «Башкирский», «Равис-Сосновский», «ПА-01», «Тбилисский», «Кировоградский» и «ВД-20» в течение 12 месяцев при температуре минус 40°С не снижает их антигенную и инфекционную активность. Они также оказались устойчивыми к многократному повторению циклов замораживания - оттаивания. Однако все изоляты постепенно теряли свою инфекционность и антигенную активность после 3 месяцев хранения при 4°С, титры которых снижались от 2 до 4 1дТЦД50/см3 и от 1 до 3 1од2, соответственно.

Антигенные свойства изолятов аденовирусов птиц I группы. В своих дальнейших исследованиях изучали антигенные свойства изолятов «Башкирский», «Равис-Сосновский», «ПА-01», «Тбилисский», «Кировоградский» и «ВД-20» в составе инактивированных вакцин. Экспериментальные образцы инактивированных эмульгированных вакцин готовили на основе каждого из изучаемых изолятов. Для приготовления вакцин использовали культуральную вирусную суспензию с инфекционной активностью не менее 6,0 1дТЦД50/см3.

В опыте использовали 60 цыплят кросса «Хайсекс коричневый» 10-суточного возраста, которых разделили на 6 опытных групп. Цыплятам каждой опытной группы вводили вакцину в прививном объеме 0,5 см3 однократно внутримышечно в область груди. Сыворотки крови получали от всех цыплят опытных групп до

вакцинации и через 28 суток после прививки для выявления специфических антител к серотипам РАУ 1, РА\^ 2, РАУ 4, РАУ 6 аденовирусов птиц I группы в непрямом варианте ИФА с помощью диагностических наборов производства ФГУ «ВНИИЗЖ». Результаты, полученные в ходе проведенных исследований, представлены в таблице 5.

Таблица 5

Антигенная активность лабораторных образцов инактивированной эмульгированной вакцины против аденовирусной инфекции птиц, изготовленных на основе различных изолятов возбудителя

(п=3)

Изолят, использованный в качестве антигена Серотип Средний титр антител к серотипам РАУ 1, РАУ 2, РАУ 4, РАУ 6 в непрямом варианте ИФА

До вакцинации Через 28 суток после вакцинации

«Башкирский» РАУ1 1 160±22 1:840±72

«Равис-Сосновский» FAV2 1 113±14 1:880±184

«ПА-01» ?АУ 4 1 343±43 1:3203±487

«Тбилисский» РАУ 4 1 223±22 1:3074±392

«Кировоградский» РАУ 4 1 168±31 1:2962±156

«ВД-20» РАУ 6 1 100±00 1:940±80

Как следует из данных табл. 5, на 28 сутки после иммунизации во всех группах цыплят, привитых опытными образцами вакцин против аденовирусной инфекции птиц, средний титр антител превысил минимальный положительный уровень 1:800. Однако образцы вакцин на основе изолятов, относящихся к серотипу ¥А\/ 4 («ПА-01», «Тбилисский», «Кировоградский»), обладали наиболее выраженной антигенной активностью и индуцировали в организме привитой птицы образование более высокого уровня специфических антител, средний уровень которых составил 1:3203±487, 1:3074±392 и 1:2962±156, соответственно.

Перекрестная защита между изолятами различных серотипов аденовирусов птиц I группы. Для изучения перекрестной защиты между изолятами «Башкирский» (РАУ 1), «Равис-Сосновский» (РА\/ 2), «ПА-01» (РА\/4) и «ВД-20» (РАУ 6) аденовирусов кур проводили реакцию перекрестной нейтрализации по общепринятой методике.

Для постановки реакции использовали гипериммунные сыворотки кроликов, полученные путем трехкратной иммунизации вакцинными препаратами из

вышеуказанных изолятов. Полученные сыворотки имели уровень вируснейтрализующих антител в ИФА не ниже 1:25000.

Реакцию нейтрализации проводили с разведением вируса и постоянной дозой сыворотки. В качестве тест-системы использовали культуру клеток печени ЭК, выращенную в 96-луночных пластиковых планшетах для культивирования клеток фирмы «Corning» (Германия). Изоляты «Башкирский», «Равис-Сосновский», «ПА-01» и «ВД-20», имеющие титры инфекционной активности 5,0 1дТЦД50/см3, разводили десятикратным шагом. К каждому разведению добавляли равный объем гомо- и гетерологичных сывороток, разведенных 1:100 и инактивированных при 60°С в течение 30 мин. Смеси инкубировали при 37°С в течение 1 часа. В качестве контроля использовали смесь разведений вируса с нормальной сывороткой (не содержащей антител к вышеуказанным изолятам аденовируса). Затем проводили заражение культуры клеток печени ЭК полученными смесями в объеме 0,1 см3. Планшеты инкубировали в С02-инкубаторе в течение 7 суток при температуре 37°С. РН считали положительной, если не наблюдалось ЦПД в виде дегенерации монослоя (75-80%), округления, увеличения и склеивания клеток. Индекс нейтрализации (ИН) рассчитывали по формуле, описанной в разделе 2. При индексе нейтрализации, равном 1 lg и ниже, РН считали отрицательной, от 1 lg до 2 lg - сомнительной, выше 2 lg - положительной.

Таблица 6

Результаты перекрёстной нейтрализации между различными изолятами аденовирусов птиц I группы

______М

^Сыворотка к ^^шоляту Изолят\^ «Башкирский» «Равис-Сосновский» «ПА-01» «ВД-20»

Индекс нейтрализации, 1дТЦД50/см'3

«Башкирский» 2,63±0,08 1,75±0,25 1,92±0,08 1,50+0,25

«Равис-Сос.» 1,50±0,14 4,75±0,14 1,27+0,25 0,95±0,22

«ПА-01» 1,58±0,16 1,58+0,22 5,33±0,08 1,83±0,22

«ВД-20» 1,33±0,08 1,73±0,08 1,25+0,15 5,50±0,14

Как видно из данных табл. 6, изоляты «Башкирский», «Равис-Сосновский», «ПА-01» и «ВД-20» при исследовании с гомологичными сыворотками имели значения ИН выше 2 1д, которые составили 2,63±0,08; 4,75±0,14; 5,33+0,08; 5,50±0,14 1дТЦД5о/см3, соответственно, тогда как при исследовании с гетерологичными сыворотками ИН были меньше 2 1д, что говорит об отсутствии

перекрёстной защиты между серотипами FAV 1, FAV 2, FAV 4 и FAV 6 аденовирусов птиц I группы.

При выборе изолята для депонирования в качестве производственного штамма при изготовлении инактивированной эмульгированной вакцины против аденовирусной инфекции птиц было учтено то обстоятельство, что большинство изолятов аденовирусов птиц, выделенных на территории Российской Федерации, относятся к серотипу FAV 4 и в эпизоотическом плане представляют наибольшую опасность, так как являются патогенными для коммерческой птицы (A.C. Алиев и соавт., 1998; В.А. Бакулин и соавт., 1998; В.В. Борисов и соавт., 1996-2003; H.A. Лагуткин и соавт., 1992).

Из результатов проведенных исследований можно сделать вывод, что изоляты «ПА-01», «Тбилисский» и «Кировоградский» не имеют существенных различий по своим культуральным, патогенным и антигенным свойствам. Изолят «ПА-01» изучался более длительное время, так как одним из первых был выделен и адаптирован к первичной культуре клеток печени ЭК.

Учитывая вышеизложенные факты, для депонирования в качестве производственного штамма при изготовлении инактивированной культуральной вакцины против аденовирусной инфекции кур был выбран изолят «ПА-01».

С целью изучения иммунобиологических свойств изолята «ПА-01» были изготовлены экспериментальные образцы инактивированной вакцины против синдрома гидроперикардита кур, для составления которых использовали культуральный изолят «ПА-01» (FAV 4) с инфекционной активностью 8,5 1дТЦД5о/см3, а также масляный адъювант Монтанид ИЗА 70 «Сеппик» (Франция). Инактивацию вирусной суспензии проводили 1,2 аминоэтилазиридином в конечной концентрации 0,3% в течение 24 часов при 37 °С. Вакцину составляли в соотношении 30 частей антигена и 70 частей адъюванта Монтанид ИЗА 70 (по весу). Эмульгирование проводили на лабораторном эмульсоре «Сильверсон» (Англия) в течение 6 мин при 6000 об/мин.

Для испытания изготовленных образцов вакцины был проведен комиссионный опыт в условиях ФГУ «ВНИИЗЖ».

В опыте использовали 85 цыплят кросса «Хайсекс коричневый» 15-суточного возраста, не имеющих антител к вирусу СГПК.

Проверку вакцины на стерильность проводили в соответствии с ГОСТом 28085-89 «Препараты биологические. Методы бактериологического контроля стерильности». В результате во всех посевах на питательные среды роста микрофлоры не обнаружено (заключение ОБТК от 1.06.05). Вакцина стерильна.

Полноту инактивации вируса и безвредность вакцины определяли методом введения средней пробы вакцины в объеме 0,6 см3 10 цыплятам внутримышечно в область груди.

В течение 21 суток наблюдения все цыплята оставались живыми, без клинических признаков заболевания. При вскрытии вынуждено убитой птицы на месте введения вакцины морфологических изменений в виде воспаления, очагов некроза и гранулём выявлено не было, что характеризует инактивированную культуральную вакцину против СГПК, как безвредный препарат.

Антигенную активность вакцины оценивали по наличию в сыворотках крови птиц специфических антител к аденовирусу кур серотипа РАУ 4 через 21 и 28 суток после вакцинации, используя диагностические наборы производства ФГУ «ВНИИЗЖ».

Результаты опыта представлены в таблице 7.

Таблица 7

Антигенная активность вакцины против СГПК инактивированной эмульгированной из культурального вируса «ПА-01» в различные сроки

после иммунизации

№ Группа Прививной объём Титр антител в непрямом варианте ИФА после вакцинации

пп цыплят вакцины, см3 21 сутки 28 сутки

1 Вакцини- 0,3 1:557 ±72 1:1786 ±283

рованная 0,5 1:885 ± 114 1:3074 ±487

2 Контрольная - 1:140 ±22 1:170 ±43

Через 28 суток после вакцинации у цыплят, иммунизированных в прививном объеме 0,3 см3, в исследованных образцах сывороток крови присутствовали специфические антитела к аденовирусу кур серотипа РАУ 4, средний титр которых значительно превысил минимальный положительный уровень 1:800 и составил 1:1786. В группе цыплят, иммунизированных в прививном объёме 0,5 см3, средний титр антител к вирусу синдрома гидроперикардита составил 1:3074. При этом у цыплят контрольной группы антитела к вирусу СГПК не выявлены.

Иммуногенная активность вакцины была оценена через 28 суток после вакцинации по результатам контрольного заражения птиц вирулентным штаммом «КР 95» методом внутримышечной инъекции в область голени в дозе 5,25 1дЛД50/гол.

В течение 10 суток наблюдения цыплята, привитые вакциной в прививном объёме 0,3 см3 и 0,5 см3, оставались живыми и клинически здоровыми. В контрольной группе 80% зараженных птиц заболело и пало с патологическими признаками СГПК (угнетение, диарея, поражения печени, почек и сердца).

Результаты проведенных исследований показали, что экспериментальная инактивированная вакцина против СГПК из культурального вируса обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью. А изолят «ПА-01» депонирован во Всероссийской государственной коллекции микроорганизмов ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» в качестве производственного штамма для изготовления инактивированной культуральной вакцины против СГПК.

5. ВЫВОДЫ

1. Выделены и адаптированы к первичной культуре клеток печени эмбрионов кур шесть полевых изолятов аденовирусов птиц I группы, циркулирующих на территории РФ. Изолят «Башкирский» наиболее генетически близок к референтному штамму серотипа РА\/ 1; изоляты «ПА-01», «Тбилисский» и «Кировоградский» - к референтному штамму серотипа РАУ 4; изолят «Равис-Сосновский» - к референтному штамму серотипа РА\/ 2, а изолят «ВД-20» - к референтному штамму серотипа РАУ 6.

2. Оптимальными условиями выделения и культивирования аденовирусов птиц I группы являются использование первичной культуры клеток печени эмбрионов кур, поддерживающей среды ПСП или 199 с 2% фетальной сыворотки телёнка, величины рН 7,6-7,8, посевной концентрации клеток 800-900 тыс./см3, множественности заражения 0,1 ТЦД50/кл и времени культивирования 72-96 часов.

3. Все выделенные изоляты, после адаптации к первичной культуре клеток печени эмбрионов кур, достигают максимальных титров к 6-7 пассажу. Изоляты «Башкирский», «ПА-01», «Кировоградский» и «Тбилисский» стабильно сохраняют свою репродуктивную активность до 10 пассажа, а изоляты «ВД-20» и «Равис-

Сосновский» после 7 пассажа снижают свою активность на 2-3 1д при дальнейшем пассировании.

4. Все изученные изоляты являются патогенными для развивающихся эмбрионов СПФ-кур при заражении в желточный мешок. Изоляты «ПА-01», «Кировоградский» и «Тбилисский» патогенны для коммерческих и СПФ-цыплят. Изолят «Башкирский» реплицируется в организме СПФ-цыплят, не вызывая их гибели. А изоляты «Равис-Сосновский» и «ВД-20» являются патогенными для СПФ-цыплят и апатогенными для коммерческой птицы.

5. Хранение всех изолятов при температуре минус 40°С не изменяет их инфекционных и антигенных свойств в течение 12 месяцев наблюдения, а при 4°С их инфекционность и антигенность утрачивается в течение 3-х месяцев. Все изоляты устойчивы при многократном замораживании - оттаивании.

6. Изготовленные опытные образцы культуральных эмульгированных вакцин на основе изолятов «ПА-01», «Тбилисский», «Кировоградский» обладают наиболее выраженной антигенной активностью и индуцируют в организме привитой птицы образование высокого уровня специфических антител.

7. Установлено отсутствие перекрёстной защиты между аденовирусами кур серотипов РА\/ 1, РА\/ 2, РА\/ 4 и РАУ 6, представителями которых являются изоляты «Башкирский», «Равис-Сосновский», «ПА-01» и «ВД-20».

8. Экспериментальная вакцина против синдрома гидроперикардита кур инактивированная эмульгированная из культурального штамма «ПА-01» обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью и может быть использована в ветеринарной практике для специфической профилактики СГПК.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического использования предлагаются следующие методики и методические указания, разработанные в результате проведенных научных исследований, которые одобрены ученым советом и утверждены директором ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»:

«Методика получения первично-трипсинизированных культур клеток печени и почек куриного эмбриона и использования их для выделения и титрования аденовирусов птиц» (2001 г.);

«Методические указания по выделению, титрованию и идентификации аденовирусов птиц I группы» (2002 г.);

«Методические указания по выявлению антигена аденовируса птиц 2 серотипа в непрямом жидкофазном блокирующем варианте ИФА» (2005 г.);

«Методические указания по выявлению антигена аденовируса 1 серотипа в непрямом жидкофазном блокирующем варианте ИФА» (2005 г.).

Штамм «ПА-01» депонирован во Всероссийской государственной коллекции культур микроорганизмов ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» в качестве основного компонента инактивированной культуральной вакцины против СГПК и для получения специфического антигена при комплектовании диагностических иммуноферментных наборов (ноябрь 2006 г.). ■

6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Борисов, В.В. Культивирование вируса синдрома гидроперикардита кур на куриных эмбрионах / В.В. Борисов, Д.С. Сурнев, Е.В. Ельникова // Материалы 5-го зйду паразитоценолопв УкраЫи. - Харюв, 2001. - С. 296 - 298.

2. Борисов, В.В. Синдром гидроперикардита кур: Протективная эффективность эмульсионной вакцины из вируса, полученного в культуре клеток / В.В. Борисов, Д.С. Сурнев, Е.В. Ельникова // Соврем, вопр. вет. медицины и биологии: сб. науч. тр. - Уфа, 2000. - С. 44 - 46.

3. Ельникова, Е.В. Изучение патогенных свойств полевых изолятов аденовирусов кур, выделенных на территории Российской Федерации / Е.В. Ельникова, В.В. Борисов // Вет. патология. - 2006. № 4. - С. 117 - 123.

4. Жидкофазный блокирующий вариант иммуноферментного анализа для выявления и количественного определения аденовирусов птиц 1 серотипа / М.А. Волкова, Г.В. Батченко, М.Е. Качалова, М.С. Мудрак, В.В. Дрыгин, З.Б. Хлебовец, Е.В. Ельникова, А.В. Борисов // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2006. - Т. 4. - С. 381 - 395.

5. Изучение патогенных свойств полевого изолята аденовируса кур шестого серотипа, выделенного от цыплят-бройлеров / Д.С. Сурнев, В.А. Лобанов, В.В.

Борисов, E.B. Ельникова, М.А. Волкова, Г.В. Батченко // Вет. медицина: м1жвид. тем. наук. зб. - Харив, 2003. - Т. 82. - С. 595 - 597.

6. Иммунный ответ у кур, привитых культуральной и тканевой эмульсионными вакцинами против синдрома гидроперикардита / Д.С. Сурнев, В.В. Борисов, Е.В. Ельникова, М.А. Волкова // 1-й Междунар. вет. конгр. по птицеводству: материалы - М., 2005. - С. 97 - 101.

7. Иммуногенная активность инактивированной культуральной вакцины против синдрома гидроперикардита кур / Д.С. Сурнев, Е.В. Ельникова, Р.И. Назаров, В.В. Борисов // Вет. медицина: м!жвид. тем. наук. зб. - Харю'в, 2003. - Т. 82.-С. 592-594.

8. Культуральные свойства полевого изолята аденовируса кур четвёртого серотипа / Е.В. Ельникова, Г.В. Батченко, М.А. Волкова, В.А. Лобанов, Д.С. Сурнев, В.В. Борисов, Ю.В. Зуев // Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных: материалы конф. молодых учёных. -Владимир, 2004. - С. 129 - 133.

9. Laboratory study of Hydropericardium Syndrome inactivated cell culture emulsion vaccine / V. Borisov, D. Surnev, E. Elnikova, A. Borisov // 14th World Veterinary Poultry Congress. - Istanbul, Turkey, 2005 - P. 530.

Отпечатано на полиграфической базе ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья

животных», 90 экз., 2006 г.

Оглавление диссертации Ельникова, Елена Владимировна :: 2006 :: Владимир

ВВЕДЕНИЕ.

1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Аденовирусная инфекция птиц.

1.2. Классификация аденовирусов птиц.

1.3. Морфология и химический состав аденовирусов птиц.

1.4. Устойчивость аденовирусов птиц к физико-химическим воздействиям.

1.5. Антигенная структура и антигенная активность.

1.6. Возникновение и распространение заболевания с синдромом гепатита-гидроперикардита кур.

1.7. Эпизоотологические особенности течения аденовирусной инфекции птиц.

1.8. Патогенез аденовирусной инфекции птиц.

1.9. Клинические признаки и патологоанатомические изменения при аденовирусной инфекции птиц.

1.10. Лабораторная диагностика аденовирусов птиц.

1.11. Профилактика и методы борьбы с аденовирусной инфекцией птиц.

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Ельникова, Елена Владимировна, автореферат

Патогенность и этиологическая роль многих серотипов аденовирусов кур ещё не выяснена окончательно, однако известно, что отдельные серотипы являются возбудителями таких остропротекающих инфекционных болезней, как СЕЮ-инфекция, гепатит с тельцами-включениями (ГТВ) и синдром гидроперикардита кур (СГПК) [7, 32].

СЕЮ-инфекция характеризуется гибелью развивающихся эмбрионов кур во время инкубации и цыплят в первые дни жизни. Заболевание вызывают аденовирусы кур первого серотипа ГМ 1 [228].

Гепатит с тельцами-включениями - инфекционное заболевание молодняка кур, характеризующееся поражением печени, почек и высокой смертностью от 30% и более. Возбудителем ГТВ в естественных условиях чаще являются аденовирусы серотипов РА\/ 5 и РА\/ 8 [88,106,120,139].

Синдром гидроперикардита кур - вирусное заболевание кур всех возрастов, которое характеризуется скоплением жидкости соломенного цвета в околосердечной сумке, отёком лёгких, поражениями печени, почек и высокой летальностью среди молодняка кур (70-80%) [136].

С начала 90-х годов вспышки СГПК с высоким уровнем смертности птиц (30-80%) регистрируются на территории Российской Федерации. Согласно данным сотрудников ФГУ «ВНИИЗЖ», поражения цыплят синдромом гидроперикардита преобладают в регионах Урала и Сибири, а также несколько вспышек заболевания зарегистрировано в птицехозяйствах Северного Кавказа, республиках Карелия, Марий Эл, Кабардино-Балкария и Ингушетия [13, 16, 26, 62].

Ведущее место в борьбе с аденовирусной инфекцией птиц занимает вакцинопрофилактика. Однако проводить специфическую профилактику аденовирусной инфекции птиц очень трудно, потому что даже при моноинфекции возможно выделение нескольких различных серотипов аденовирусов, которые способны осложнять патологический процесс [157, 226]. Поэтому перед проведением специфической профилактики необходимо установить, аденовирусы каких именно серотипов РАУ, циркулирующих в хозяйстве, являются возбудителями инфекции.

Цель и задачи исследований. Основная цель данных исследований заключалась в изучении иммунобиологических свойств полевых изолятов аденовирусов птиц I группы, циркулирующих на территории РФ, и выборе изолята для депонирования в качестве производственного штамма при изготовлении вакцины против аденовирусной инфекции птиц инактивированной эмульгированной из культурального вируса. Для достижения этих целей необходимо было решить следующие задачи:

- отработать метод получения первичной культуры клеток печени и почек эмбрионов кур;

- разработать методику выделения и культивирования полевых изолятов аденовирусов кур;

- изучить культуральные свойства полевых изолятов аденовирусов кур, циркулирующих на территории РФ;

- изучить перекрёстную защиту между изолятами, относящимися к различным серотипам аденовирусов кур;

- обосновать выбор изолята для депонирования в качестве производственного штамма при изготовлении инактивированной культуральной вакцины против аденовирусной инфекции птиц; изучить иммунобиологические и физические свойства экспериментальных образцов инактивированной культуральной вакцины против аденовирусной инфекции птиц в лабораторных условиях.

Научная новизна. Научная новизна работы состоит в том, что в результате проведённых исследований:

- впервые выделены и адаптированы к первичной культуре клеток печени эмбрионов кур шесть полевых изолятов аденовирусов птиц I группы, относящихся к серотипам РА\/1, РАУ 2, ЕАУ 4, РАУ 6 и циркулирующих на территории РФ;

- изучены иммунобиологические свойства полученных изолятов аденовирусов птиц I группы;

- изучена перекрёстная защита между изолятами, относящимися к серотипам ¥АУ 1, РАУ 2, РАУ 4 и РАУ 6 аденовирусов кур;

- изготовлены экспериментальные образцы вакцины против СГПК инактивированной эмульгированной из культурального вируса «ПА-01» и изучены её иммунобиологические и физические свойства в лабораторных условиях.

Практическая значимость работы. В результате проведенных исследований разработаны, одобрены ученым советом, утверждены директором ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» и рекомендованы для использования в практике следующие методики: - «Методика получения первично-трипсинизированных культур клеток печени и почек куриного эмбриона и использования их для выделения и титрования аденовирусов птиц» (2001 г.);

- «Методические указания по выделению, титрованию и идентификации аденовирусов птиц I группы» (2002 г.);

Штамм «ПА-01» депонирован во Всероссийской государственной коллекции культур микроорганизмов ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» в качестве основного компонента инактивированной культуральной вакцины против СГПК и для получения специфического антигена при комплектовании диагностических иммуноферментных наборов (ноябрь 2006 г.).

Результаты научных исследований по изучению иммунобиологических свойств изолятов аденовирусов кур и испытанию опытных образцов вакцины против синдрома гидроперикардита кур рекомендовано использовать при составлении НД на инактивированную культуральную вакцину против СГПК.

Основные положения, выносимые на защиту:

- оптимальные условия выделения и культивирования полевых изолятов аденовирусов птиц I группы;

- культуральные свойства полевых изолятов аденовирусов птиц I группы;

- патогенные свойства полевых изолятов аденовирусов птиц I группы;

- стабильность инфекционных и антигенных свойств изолятов аденовирусов кур при хранении;

- антигенные свойства изолятов аденовирусов кур в составе инактивированных вакцин;

- перекрестная защита между изолятами различных серотипов аденовирусов птиц I группы;

Апробация работы. Основные материалы диссертации были доложены и опубликованы в материалах Международной научной конференции молодых ученых «Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных» г. Владимир (2004), на 1-ом Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству г. Москва (2005) и на заседаниях учёного совета ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» в 2003 - 2005 гг.

Публикации научных исследований. По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ.

Заключение диссертационного исследования на тему "Иммунобиологические свойства полевых изолятов аденовирусов кур, выделенных на территории Российской Федерации"

5. ВЫВОДЫ

1. Выделены и адаптированы к первичной культуре клеток печени эмбрионов кур шесть полевых изолятов аденовирусов птиц I группы, циркулирующих на территории РФ. Изолят «Башкирский» наиболее генетически близок к референтному штамму серотипа РАУ 1; изолят «Равис-Сосновский» - к штамму серотипа РАУ 2; изоляты «ПА-01», «Тбилисский» и «Кировоградский» - к штамму серотипа РАУ 4, а изолят «ВД-20» - к штамму серотипа РАУ 6.

2. Оптимальными условиями выделения и культивирования аденовирусов птиц I группы являются использование первичной культуры клеток печени эмбрионов кур, поддерживающей среды ПСП или 199 с 2% фетальной сыворотки телёнка, величины рН 7,6 - 7,8, посевной концентрации клеток 800-900 тыс./см3, множественности заражения 0,1 ТЦД50/кл и времени культивирования 72-96 часов.

5. Хранение всех изолятов при температуре минус 40°С не изменяет их инфекционных и антигенных свойств в течение 12 месяцев наблюдения, а при 4°С их инфекционность и антигенность утрачивается в течение 3 месяцев. Все изоляты устойчивы при многократном замораживании -оттаивании.

7. Установлено отсутствие перекрёстной защиты между аденовирусами кур серотипов РАУ 1, РАУ 2, РАУ 4 и РАУ 6, представителями которых являются изоляты «Башкирский», «Равис-Сосновский», «ПА-01» и «ВД-20».

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Методика получения первично-трипсинизированных культур клеток печени и почек куриного эмбриона и использования их для выделения и титрования аденовирусов птиц» (2001 г.);

Методические указания по выделению, титрованию и идентификации аденовирусов птиц I группы» (2002 г.);

Методические указания по выявлению антигена аденовируса птиц 2 серотипа в непрямом жидкофазном блокирующем варианте ИФА» (2005 г.);

Методические указания по выявлению антигена аденовируса 1 серотипа в непрямом жидкофазном блокирующем варианте ИФА» (2005 г.).

Штамм «ПА-01» депонирован во Всероссийской государственной коллекции культур микроорганизмов ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» в качестве основного компонента инактивированной культуральной вакцины против СГПК и для получения специфического антигена при комплектовании диагностических иммуноферментных наборов (ноябрь 2006 г.).

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2006 года, Ельникова, Елена Владимировна

1. Алиев, A.C. Инфекционный гидроперикардит у цыплят-бройлеров: методические рекомендации / A.C. Алиев, P.C. Сираждинов, Н.В. Никитина. СПб, 2000 -С. 20.

2. Анализ последовательности гена гексона аденовируса KP 95, вызывающего синдром гидроперикардита у кур / В.А. Лобанов, В.В. Борисов, A.B. Борисов и др. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. -2000. -№ 1. -С. 30-36.

3. Андреев, И. Аденовирусные инфекции по птиците / И. Андреев // Вет. сбирка. -1978.-№ 7.-С. 28-30.

4. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, A.A. Воробьёв -Л.: Медгиз, 1962. -180 с.

5. Бакулин, В.А. Патоморфогенез и дифференциальная диагностика болезни Гамборо, аденовирусной инфекции и других иммунодепрессивных болезней птиц / В.А. Бакулин // Архив ветеринарных наук. Прил. к Т. 1 (48). СПб; Ломоносов, 1998. -С. 322.

6. Бакулин, В.А. Эпизоотология и патоморфология "гидроперикардита" цыплят / В.А. Бакулин, Е.Г. Аксёнова, Т.И. Горецкая // Ветеринария. -1998.-№ 8.-С. 17-19.

7. Бакулин, В.А. Эпизоотология синдрома "гепатита-гидроперикардита" цыплят / В.А. Бакулин, Е.Г. Аксёнова II Материалы науч.-произв. конф., посвящённой 190-летию высшего вет. образования в России и 100-летию вет. науки. СПб, 1998. -Ч. 1. -С. 28.

8. Борисов, B.B. Восприимчивость цыплят кросса "Смена" к возбудителю синдрома гидроперикардита кур при экспериментальном заражении / В.В. Борисов, Д.С. Сурнев, A.A. Гусев II Уч. зап. Витебской акад. вет. медицины. Витебск, 1999. -Т. 35, Ч. 1. -С. 2022.

9. Борисов, В.В. Синдром гидроперикардита кур: протективная эффективность эмульсионной вакцины из вируса, полученного в культуре клеток / В.В. Борисов, Д.С. Сурнев, Е.В. Епьникова // Соврем, вопр. вет. мед. и биол.: сб. науч. тр. Уфа, 2000. - С. 44-46.

10. Борисов, В.В. Экспресс-защита цыплят от аденовирусного гидроперикардита / В.В. Борисов, Д.С. Сурнев, М.А. Волкова II Материалы IV Междунар. Украинской конф. Харьков, 2003. - Вып. 53. - С. 532-536.

11. Виноходов, O.B. Вирусные гепатиты птиц / О.В. Виноходов, В.О. Виноходов, Д.О. Виноходов // Архив ветеринарных наук. Прил. к Т. 1 (48). -СПб; Ломоносов, 1998. -С. 224.

12. Вирусный синдром гидроперикардита кур / В.В. Борисов, Д.С. Сурнев, A.B. Борисов и др. // Птица и птицепродукты. -2003 . -№ 1. -С. 29-32.

13. Выделение и характеристика возбудителя гидроперикардита кур / В.В. Борисов, A.B. Борисов, Г.М. Фалина и др. // Актуапьн. пробл. биотехнологии в растеневодстве, животноводстве и ветеринарии: тез. конф.-М., 1996. -С. 13.

14. Енчев, С. Вирусный гепатит у цыплят бройлеров / С. Енчев, Н. Шишков, Б. Поров// Вет. сбирка. -1981. -№ 5. -С. 26-29.

15. Ибрагимов, A.A. Патоморфология экспериментальной аденовирусной инфекции у птиц / A.A. Ибрагимов // Болезни птиц при интенсивных методах ведения отрасли: межвуз. сб. науч. тр. Харьков, 1988. -С. 15-20.

16. Коровин, Р.Н. Аденовирусные инфекции сельскохозяйственной птицы / Р.Н. Коровин, И.К. Рождественский М: Агропромиздат, 1990.-С. 31.

17. Массовый гидроперикардит у мясных цыплят раннего возраста / H.A. Лагуткин, А.Р. Арсентьев, Ж.А. Краснопевцева, В.И. Ватропин II Вопр. вет. вирусологии, микробиологии и эпизотологии: материалы науч. конф. ВНИИВВ и М. -Покров, 1992. -Ч. 2. -С. 248-251.

18. Носач, Л.Н. Цитопатология аденовирусной инфекции / Л.Н. Носач, Н.С. Дяченко Киев: Наукова Думка, 1982. - 124 с.

19. Опыт борьбы с аденовирусным гидроперикардитом кур в птицехозяйствах Северного Кавказа / В.В. Борисов, Д.С. Сурнев, A.B. Борисов и др. // Конференция по птицеводству: материалы конф-Зеленоград, 2003 С. 211-212.

20. Пат. 2233175 РФ, МПК7 А61К39/235. Вакцинный препарат для профилактики аденовирусного гепатита с включениями-гидропери кардита кур / В.А. Бакулин, Р.Н. Коровин. Заяв. 25.06.02; опубл. 27.07.04. Бюл. № 21 (2).

21. Разработка схемы применения инактивированной вакцины против синдрома гидроперикардита кур для цыплят бройлеров / В.В. Борисов, Д.С. Сурнев, Н.П. Курлова, A.B. Борисов II Уч. зап. Витебской акад. вет. медицины. Витебск, 2001. -Т. 37, Ч. 2. - С. 11-12.

22. Фомина, Н.В. Аденовирусная инфекция животных / Н.В. Фомина. -М.: Колос, 1995. -Т. 2. -С. 15-16,193.

23. Экспериментальная инактивированная вакцина против гидроперикардита кур / В.В. Борисов, Д.С. Сурнев, Д.А. Лозовой и др. // Сб. науч. тр. ВГНКИ. М„ 2003. - Т. 64. - С. 130 -138.

24. Aislamiento у tipificación del virus de la hepatitis a cuerpo de inclusion en broilers en Chili / A. Cubillos, G. Sandoval, J. Ulloa et al. // Arch. Med. Vet. -1986. -V. 18. -P. 115-122.

25. A report on the characterization of fowl adenoviruses associated with a Hydropericardium-Hepatitis syndrome in chickens / B.S. Cowen, H. Lu, D. Weinstock, A.E. Castro // XV Latinoamericano Congreso. -1995. -P. 68.

26. A serological study of Newcastle disease and avian Adenovirus (CELO) infection in ducks / A.A.S. Ahmed, A.L. Sisi, M.A. EL-Agrocedi, S.A.W. Lafer // J. Egypt. Vet. Med. Ass. 1968 b. -V. 28,-P. 117-123.

27. A short description of the adenovirus group / H.G. Periera, R.J. Huebner, H.S. Linsberg, J. Van DerVeen //Virology. -1963. -V. 20. -P. 613-620.

28. Abdul-Aziz, T.A. Hydropericardium syndrome in broiler chickens: its contagious nature and pathology / T.A. Abdul-Aziz, S.Y. Hasan // Res. in Vet. Sei. -1995. -V. 59, N 3. -P. 219-221.

29. Abdul-Aziz, T.A. New syndrome in Iraqi / T.A. Abdul-Aziz, M.A. Al-Attar // Vet. Ree. -1991. -V. 129. -P. 272.

30. Adlakha, S.C. Effect of certain physical and chemical agents on chick-embryo-lethal orphan (CELO) and infection laringo-trachites viruses / S.C. Adlakha // Indian J. Vet. Sei. -1966. -V. 36. -P. 237242.

31. Afzal, M. Age susceptibility of different commercial broiler strains to Angara disease (Hydropericardium syndrome) / M Afzal., A. Hussain // Pakistan J. of Agricul. Res. -1993. -V. 14, N 2. -P. 60-68.

32. Afzal, M. Studies on the etiology of hydropericardium syndrome (Angara disease) in broilers I M. Afzal, R. Muneer, G. Stein // Vet. Ree.-1991.-V. 128. -P. 591-593.

33. Ahmad, I. Comparative efficacy of different Angara disease vaccine in broilers I I. Ahmad, K. Ahmad, M.I. Malik // Zootecnica International. -1991. -V. 30, N 6. P. 67-69.

34. Ahmed, A.A.S. CELO Virusinfection bei Puten (Kurze Mitteilung) / A.A.S. Ahmed // Tierarztl. Wschr. -1971 b. -S. 84, 211-213.

35. Ahmed, A.A.S. Ein Beitrag zur Frage der Trager and der Ausscheidung eines Adenovirus (CELO) bei Huhnern / A.A.S. Ahmed // Zentralbl. Vet. Med.-1971 a.-Bd. 18B.-S. 409-423.

36. Akhtar, S. Some epidemiological characteristics of hydropericardium syndrome outbreaks among commercial broiler flocks in Karachi / S. Akhtar, A.H. Cheema II Proc. of the 3rd Int. Vet. Congress. -Islamabad, Pakistan, 1990. -P. 228-234.

37. Aliev, A.S. Etiology of hydropericarditis in broiler chicks / A.S. Aliev, E.D. Djavadov, N.V. Nikitina II Proc. of the 11th Int. Congress of the World Vet. Poult. Ass. Budapest, Hungary, 1997. -P.157.

38. Al-Sheikhly, F. Inclusion body hepatitis in broiler chickens in Iraq / F. Al-Sheikhly, A.A. Mutalib // Avian Dis. -1979. -V. 23, N 3. -P. 763767.

39. Anjum, A.D. Experimental transmission of hydropericardium syndrome and protection against it in commercial broiler chickens / A.D. Anjum//Avian Pathol. -1990. -V. 19, N 4. -P. 655-660.

40. Anjum, A.D. Study of pathogenicity of the hydropericardium syndrome agent / A.D. Anjum // Proc. of National Seminar on Hydropericardium Syndrome in Chickens in Pakistan. Rawalpindi, 1988. -P. 111-115.

41. Anjum, A.D. Hydropericardium syndrome in broiler chickens in Pakistan I A.D. Anjum, M.A. Sabri, M. Iqbal // Vet. Rec. -1989. -V. 24. -P. 247-248.

42. Antigenic characterization of four viral isolates obtained from inclusion body hepatitis outbreaks in broiler chickens / H. Hidalgo, M. Sanhueza, S. Rosende, H. Toro II Av. Sci. Vet. -1994. -V. 9. -P. 116121.

43. Antillon, A. Inclusion body hepatitis in Mexico / A. Antillon, B. Lucio // Avian Dis. -1975. -V. 19. -P. 195-197.

44. Azab A., Tawfik A., Shehawy L., Rashwan S.M.T. // Egyptian J. of Comparative Pathol, and Clin. Pathol. -1992. -V. 5, N 1. -P. 75-82.

45. Bains, B.S. Inclusion body hepatitis of chickens / B.S. Bains, A.R.A. Watson II N. Z. Vet. J. -1977. -V. 25. -P. 352.

46. Bellett, A.J.D. Replication of the DNA of chick embryo lethal orphan virus / A.J.D. Beliett, H.B. Younghusband // Proc. Aust. Biochem. Soc.-1971.-P. 4-77.

47. Bhatti, B.M. Hematology and clinical chemistry values in broiler chickens affected with hydropericardium syndrome prevalent in Pakistan / B.M. Bhatti, M.S. Qureshi, T.M. Bajwa // Proc. of the

48. National Seminar on Hydropericardium Syndrome In chickens in Pakistan.- Rawalpindi, 1988. -P. 121-125.

49. Bhowmik, M.K. Leechi disease (Hydropericardium syndrome) in broiler chickens in West Bengal / M.K. Bhowmik // Proc. of 20th World's Poult. Congress. New Delhi, India, 1996. -V. 4. -P. 319.

50. Bickford, A.A. Inclusion body hepatitis in chicken / A.A. Bickford // Poultry Digest. -1972. -V. 31. -P. 345-347.

51. Bickford, A.A. The clinical and pathological features of inclusion body hepatitis of chickens / A.A. Bickford // Proc. of the 8th Nat. Meet. Poult. Condemn. Delmar, Maryland, 1973. -P. 28-30.

52. Borisov, V.V. Hydropericardium syndrome in chickens in Russia I V.V. Borisov, A.V. Borisov, A.A. Gusev // Proc. of the 11th Int. Congress of the World Vet. Poult. Ass. Budapest, Hungary, 1997. -P. 258.

53. Burke, C.N. Avian eneric cytopathogenic viruses. I. Isolation. 2. Characterzation of a prototype / C.N. Burke, R.E. Luginbuht, E.L. Jangnerr//Avian Dis. -1959a.-V. 3.-P. 412-427.

54. Burke, C.N. The isolation of a latent adeno-like virus from chicken kidney cell cultures / C.N. Burke, R.E Luginbuht., C.F. Helmboldt // Avian Dis.-1965.-V. 9.-P. 31-43.

55. Cakala, A. Isolation of a CELO virus from pheasants / A. Cakala // Med. Vet. -1966. -V. 22. -P. 261-264.

56. Casnocha, E. Dynamics of maternal and post-infection adenovirus antibodies in fowl / E. Casnocha, P. Lietava // Vet. Med. (Praha). -1980.-V. 25, N5.-P. 277-284.

57. Cell mediated immune response of chicks following fowl adenovirus type 1 infection / B. Lai, N.K. Maiti, M.S. Oberoi, S.N. Sharma // Comp. Immun. Microbiol. Infect. Dis. -1991. -V. 14, N 1. -P. 55-58.

58. Characterization of fowl adenoviruses from outbreaks of Inclusion body hepatitis/Hydropericardium syndrome in Chile / H. Toro, C. Prusas, R. Raue et al. //Avian Dis. -1999. -V. 43. -P. 262-270.

59. Characterization of several viruses isolated from chickens with inclusion body hepatitis and aplastic anemia / J.K. Rosenberger, R.J. Eckroade, S. Klopp, W.C. Krauss II Avian Dis. -1974. -V. 18. -P. 399409.

60. Charlton, B.R. Gross and histologic lesions of adenovirus group 1 in guinea fowl / B.R. Charlton, A.A. Bickford // J. Vet. Diagn. Invest. -1995.-V. 7, N4.-P. 552-554.

61. Cheema, A.H. An adenovirus infection of poultry in Pakistan / A.H. Cheema, J. Ahmad, M. Afzal // Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epiz. -1989. -V. 8, N 3. -P. 789-795.

62. Chick embryo lethal orphan (CELO) virus: some Physical and immunological properties / C.W. Potter, J.S. Oxford, J.C. Dowhie et al. // Virology. 1971. -V. 44. -P. 418-424.

63. Cho, B.R. An adenovirus from a turkey pathogenic to both chicks and turkey poults / B.R Cho // Avian Dis. -1976. -V. 20. -P. 714-719.

64. Cho, B.R. Isolation of GAL virus from peripheral blood of a chicken / B.R. Cho II Am. J. Vet. Res. -1971. -V. 32. -P. 1629-1632.

65. Christensen, N.H. A primary epidemic of inclusion body hepatitis in broilers / N.H. Christensen, Md. Saifuddin //Avian Dis. -1989. -V. 33, N 4. -P. 622-630.

66. Comparative efficiency of two oil emulsion hydropericardium/hepatitis syndrome vaccines / M.R. Zia, Sajjad-ur-Rahman, M. Siddique, M.A. Sandhu // Int. J. of Agriculture and Biology. -2001. -V. 3, N -4. -P. 436^38.

67. Cook, J.K.A. Incidence of chicke embryo lethal orphan virus antibody in the fowl (Gallus domesticus) I J.K.A. Cook // Britan. Res. Vet. Sci. -1970.-V. 11.-P. 343-348.

68. Cowen, B.S. Broad antigenicity exhibited by some isolates of avian adenovirus / B.S. Cowen // Am. J. Vet. Res. 1977. -V. 38. -P. 959962.

69. Cowen, B.S. Inclusion body hepatitis-anemia and hydropericardium syndromes: etiology and control / B.S. Cowen // Proc. of the 40th Western Poult. Dis. Conf. Acapulco, Guerrero Mexico, 1991. -P. 55-61.

70. Davies, M.C. Avian visceral lymphomatosis in tissue culrure/ M.C. Davies, G.R. Sharpless, M.E. Englert // J. appl. Physics. -V. 30. -P. 2025.

71. Devi, K.V. Isolation and identification of avian adenovirus from a case of inclusion body hepatitis in broilers in Malaysia / K.V. Devi, L.S. Sam // Br. Vet. J. -1983. -V. 139, N 6. -P. 556-559.

72. Diagnosis of avian adenovirus infections using DNA in situ hybridization / K.S. Latimer, F.D. Niagro, O.C. Williams et al. // Avian Dis. -1997. -V. 41, N 4. -P. 773-782.

73. Disease pattern and etiology of Hydropericardium syndrome (Angara disease) in broiler chickens in Pakistan / I. Ahmad, M. Afzal, M.I. Malik et al. // Pakistan J. of Agricul. Res. -1989. -V. 10, N 2. -P.195-199.

74. Efficacy of an inactivated oil emulsion vaccine against Hydropericardium syndrome in broiler chickens / T.J. Nassar, A. El-Sanousi, N. Bzour, H. Abu-Ajamieh // Proc. XII International Congress of the World Vet. Poult. Ass. Cairo, Egypt, 2001. -P. 253.

75. Efficacy of formalinized liver-organ-vaccine against Angara disease in broilers /1. Ahmad, M.I. Malik, K. Iqbal et al. //Vet. Arhiv. -1990. -V. 60, N3.-P. 131-138.

76. Epidemic adenovirus inclusion body hepatitis of the chicken in Australia / R.J.H. Wells, H.A. Westbury, K.E. Harrigan et al. II Australian Vet. J. -1977. -V. 53, N 12. -P. 586-590.

77. Epidemiological and pathological studies on adenovirus infection in broiler chickens / M.M. Taha, A.A. Nagi, M.S. Youssef et al. // Assiut Vet. Med. J. -1990. -V. 23, N 45. -P. 80-87.

78. Epidemiology of inclusion body hepatitis in poultry in Northern India from 1990 to 1994 / A. Singh, M.S. Oberoi, S.K Jand., B. Singh // Rev. Sci. Tech. Oft Int. Epi. -1996. -V. 15, N 3. -P. 1053-1060.

79. Erny, K. Immunological and molecular comparison of fowl adenovirus serotype 4 and 10 / K. Erny, J. Pallister, M. Sheppard // Arch. Virol. -1995. -V. 140. -P. 491-501.

80. Erny, K.M. Molecular characterization of highly virulent fowl adenoviruses associated with outbreaks of inclusion body hepatitis / K.M. Erny, D.A. Barr, K.J. Fahey //Avian Pathol. -1991. -V. 20. -P. 597-606.

81. Etiology and control of hydropericardium syndrome (Angara disease) in broilers of Pakistan / M. Afzal, R. Muneer, G. Stein, B.S. Cowen // Proc. of the 3rd Int. Vet. Congress. Islamabad, Pakistan, 1990. -P. 1-20.

82. Experimental studies on hydropericardium syndrome in broiler chickens, Jahanese guail, pigeons and ducklings / Subhash Sharma, R. K. Asrani, R.C. Katoch et al. // World Vet. Poult. Congress. -Istanbul, Turkey, 2005. -P. 530.

83. Experimental transmission of Angara disease in broiler fowls / K. Ahmad, I. Ahmad, M.A. Muneer, M. Ajmal // Stud. Res. Vet. Med. -1992.-V. 1.-P. 53-55.

84. Experiences with an adjuvanted killed inclusion body hepatitis vaccine / E. Soto, M. Gay, J.L. Borrego, E. Camacho // Proc. of the46th Western Poult. Dis. Conf. Sacramento, California, 1997. -P. 19-20.

85. Fadly, A.M. Isolation and some characteristics of an agent associated with inclusion body hepatitis, hemorrhages and aplastic anemia in chickens / A.M. Fadly, R.W. Winterfield // Avian Dis. -1973.-V. 17.-P. 182-193.

86. Fadly, A.M. Role of bursa of Fabricus in the pathogenicity of inclusion body hepatitis and infection bursal disease viruses / A.M. Fadly, R.W. Winterfield, H.S. Olander // Avian Dis. -1976. -V. 20, N 3. -p. 467-477.

87. Fernandez, D.M. Hepatitis con cuerpos de inclusion en el Peru / D.M. Fernandez//Trabajo Indedito. -Peru, 1989. -P. 17-21.

88. Gelderblom, H. The fibers of fowl adenovirus / H. Gelderblom, I. Maichle-Lauppe // Arch. Virol. -1982. -V. 72. -P. 289-295.

89. Ginsberg, H.S. The adenovirus group / H.S. Ginsberg, J.H. Dingle // Viral and Rickettsial Infections of Man / ed. F.L. Horsfall, Yr.l. Tamm. -4 th ed. -Philadelphia, Lipincatt, 1965. -P. 860-891.

90. Gonzalez, E.T. Avian adenoviruses-distribution of infection in commercial flocks of fowls in Argentina / E.T. Gonzalez, A.A. Schudel, M.E. Etcheverrigaray // Avian Dis. -1978. -V. 22, N 4. -P. 787-789.

91. Goodwin, M.A. Adenovirus inclusion body ventriculitis in chickens and Captive Bobwhite Quail (Colinus virginianus) / M.A. Goodwin // Avian Dis. -1993. -V. 37, N 2. -P. 568-571.

92. Green, A.F. Detection of four serotypes of avian adenovirus in New Zealand /A.F. Green, J.K. Clarke//Avian Dis. -1976. -V. 20, N 2. -P. 236-241.

93. Grimes, T.M. Cause and control of a parachute form of inclusion body hepatitis. / T.M. Grimes // Proc. of the 41st Western Poult. Dis. Conf. -Sacramento, California, 1992. -P. 42-44.

94. Grimes, T.M. Comparative study of experimental inclusion body hepatitis of chickens caused by two serotypes of avian adenovirus I T.M. Grimes, O.J. Fletcher, J.F. Munnell //Vet. Pathol. -1978. -V. 15, N 2. -P. 249-263.

95. Grimes, T.M. Effect of maternal antibody on experimental infections of chickens with a type 8 avian adenovirus / T.M. Grimes, D.J. King // Avian Dis. -1977. -V. 21. -P. 97-112.

96. Grimes, T.M. Serotyping avian adenoviruses by a micro neutralization procedure I T.M. Grimes, D.J. King //Am. J. Vet. Res. -1977.-V. 38, N3. -P. 317-321.

97. I.Hasan, S.A. Hydropericardium syndrome / S.A. Hasan // Proc. of the 9th Int. Congress of the World Vet. Poult. Ass. 1989. -P. 114.

98. Heijmans, J.F. Hydropericardium hepatitis syndrome (Angara Disease) in broilers in the Netherlands / J.F. Heijmans // Avian Pathol.-2002.-V. 31.-P. 26.

99. Helmboldt, C.F. Avian hepatic inclusion bodies of unknown significance / C.F. Helmboldt, M.N. Frazier // Avian Dis. -1963. -V. 7. .p. 446-450.

100. Hess, M. The complete nucleotide sequence of the egg drop syndrome virus: an intermediate between mastadenoviruses and aviadenoviruses / M. Hess, H. Blocker, P. Brandt//Virology. -1997. -V. 228. -P. 145-156.

101. Hess, M. Detection and differentiation of fowl adenoviruses by polymerase chain reaction and restriction enzyme analysis / M. Hess, R. Raue // Proc. of the 11th Int. Congress of the World Vet. Poult. Ass. Budapest, Hungary, 1997. -P. 28.

102. Hess, M. Infectious hydropericardium (IHP) is caused by fowl adenovirus serotype 4: epidemiology and control / M. Hess, G. Paul, C. Prusas // Proc. XII Int. Congress of the World Vet. Poult. Ass. -Cairo, Egypt, 2001.-P. 229.

103. Hidalgo, H. Hepatitis con cuerpos de inclusion, una modalidad de control y prevencion / H. Hidalgo // Proc. IV Jomadas de Avances en Patologia y Produccion Avicola. Santiago, Chile, 1990. -P. 143.

104. Hoffman, R. Histological development of lesions in the bursa of Fabricus of chickens with inclusion body hepatitis / R. Hoffman, P. Dorn //Avian Dis. -1977. -V. 22, N 2. -P. 266-281.

105. Hussain, I. An oil emulsion vaccine against hydropericardium syndrome in broiler chickens / I. Hussain, A. Anjum, H. Izhar // Pakistan Vet. J. 1996. -V. 16. -P. 125-128.

106. Hussain, B. Avian adenoviruses and reoviruses isolated from diseased chickens / B. Hussain, P.B. Spradbrow II Aust. Vet. J. -1981.-V. 57, N9. -P. 436-437.

107. Hydropericardium-hepatopathy syndrome in Asian poultry / R.K. Asrani, V.K. Gupta, S.K. Sharma et al. //Vet. Rec. -1997. -V. 141, N 11.-P. 271-273.

108. Inclusion body hepatitis and hemorrhagic enteritis in two African grey parrots (Psittacus erithacus) associated with adenovirus / R. Droual, P.R. Woolcock, P.W. Nordhausen, S.D. Fitzgerald // J. Vet. Diagn. Invest. -1995.-V. 7, N 1. P. 150-154.

109. Isolation of fowl adenoviruses serotype 4 from pigeons with hepatic necrosis I M. Hess, C. Prusas, M. Vereecken, P. De Herdt // Berl. Munch, tierarztl. Wochenschr. -1998. -Bd. 111, N 4. -S. 140-142.

110. Isolation of viruses from clinical outbreaks of Inclusion body hepatitis I J.B. McFerran, R.M. McCracken, T.J. Connor, R.T. Evans II Avian Pathol. -1976.-V. 5.-P. 315-324.

111. Immune response of Angara disease (Hydropericardium syndrome) vaccines in broilers / S. Mashkoor, A. Hameed, K. Ahmad, M.S. Qureshi //Veterinarski Arhiv. -1994. -V. 64, N 4-6. -P. 103-107.

112. Improved Angara disease vaccine for broiler chicks I S. Mashkoor, A. Hameed, K. Ahmad, M.S. Qureshi // Veterinarski Arhiv. -1994. -V. 64, N 1-3. -P. 27-33.

113. Involvement of a type 8 avian adenovirus in the etiology of inclusion body hepatitis / T.M. Grimes, D.J. King, S.H. Kleven, O.J. Fletcher // Avian Dis. -1977. -V. 21. -P. 26-38.

114. Jaffery, M.S. A treatise on Angara disease in chicken / M.S. Jaffery // Pakistan Vet. Med. Ass. Karachi, 1988. -P. 1-33.

115. Jaffery, M.S. Overlapping syndromes scourge / M.S. Jaffery II Poultry Int. -1998. -V. 37, N 11. -P. 56-57.

116. Jtakura, C. Histopathology studies on inclusion body hepatitis in broiler chickens / C. Jtakura, M. Yasuba, M. Goto // Jap. J. Vet. Sci. -1974.-V. 36. -P. 329-340.

117. Kaleta, E.F. Bezichung zwischen der CELO-virus-Infection und anderen Erkrankungen des Huhnes, Berechhung von Signifikanzen I E.F. Kaleta // Tierarztl. Wschr. 1968. -Bd. 75. -S. 553-558.

118. Kawamura, H. Patological changes in chickens inoculated with CELO virus IH. Kawamura, T. Horiuchi // Nath. Inst. Anim. Health Q.- Tokyo, 1964.-P. 31-39.

119. Kawamura, H. Serological relationship between CELO and GAL viruses / H. Kawamura, H. Tsubahara // Nath. Inst. Anim. Health Q.Tokyo, 1963.-P. 77-82.

120. Khusi, M. Efficacy trial with an inactivated oil-adjuvant vaccine against hydropericardium syndrome / M. Khusi, H.N. Chaudry, J. Vanmarcke // Proc. of the 20th World's Poult. Congress. New Delhi, India, 1996. -V. 1.-P. 347-348.

121. Klopp, S. Diagnosis of Inclusion body hepatitis and hemorrhagic anemia syndrome in Delmarva broiler chickens / S. Klopp, J.K. Rosenberger, W.C. Krauss II Avian Dis. -1975. -V. 19. -P. 608-611.

122. Kohler, H. Einschlusskorper-Hepatitis bei Broilern in Osterreich / H. Kohler, L. Hromatka-Vasicek II Wien, tierarztl. Mschr. -1974. -Bd. 61. -S. 90-95.

123. Laursen-Jones, A.P. Inclusion body hepatitis / A.P. Laursen-Jones II Vet. Ree. -1972. -V. 90, N 4. -P. 166.

124. Lawer, W.G. Purification and properties of chick embryo lethal orphan virus (an avian adenovirus) / W.G. Lawer, H.B. Jonghusband, N.G. Wrigley // Virology. -1971. -V. 45. -P. 598-614.

125. Le Gros, F.X. Hydropericardium-hepatitis syndrome: potency of an inactivated vaccine produced on cell cultures / F.X. Le Gros, J.F. Bouquet, D. Gaudry // Proc. of the 45th Western Poult. Dis. Conf. -Cancun, Mexico, 1996. -P. 140-142.

126. Lesions induced in the respiratory tract of chickens by serologically different adenovituses / A.S. Dhillon, R.W. Winterfield, H.L. Thacker, D.S. Feldman //Avian Dis. -1982. -V. 26, N 3. -P. 478-486.

127. Lesions in chickens with spontaneous or experimental infectious hepatomyelopoietic disease (inclusion body hepatitis) in Germany I R. Hoffman, E. Wessling, P. Dorn, H. Dangschat//Avian Dis. -1975. -V. 19. -P. 224-236.

128. Lobanov, V. Characterization of avian adenovirus associated with Hydropericardium syndrome in chickens / V. Lobanov, V. Borisov, V. Drygin II Proc. of the 11th Int. Congress of Virology. August 9-13, Darling Warborr. -Sydney, Australia, 1999. -P. 168.

129. Long, R.H. Inclusion body hepatitis-anemia-gangrenous dermatitis, are they really related ? / R.H. Long II Proc. of the 8th Nat. Meet. Poult. Condemn. Delmar, Maryland, 1973. -P. 23-24.

130. MacPherson, I.A. Inclusion body hepatitis in a broiler integration / I.A. MacPherson, J.S. McDougall, A.P. Laursen-Jones //Vet. Ree. -1974.-V. 95, N3.-P. 285-289.

131. McCracken, R.M. Adenoviruses I R.M. McCracken, B.M. Adair // Virus Infections of Birds I ed. J.B. McFerran, M.S.McNulty -Amsterdam, 1993. -V. 4. -P. 123-144.

132. McFerran, J.B. Adenovirus (group I) infection in chickens / J.B. McFerran // Disease of Poultry / ed. B.W. Calnek, H.J. Barnes, C.W. Beard et al.-9th ed.,-Ames, Iowa, 1991.-P. 553-563.

133. McFerran, J.B. Avian adenovirus: a review / J.B. McFerran, B. Adair //Avian Pathol. -1977. -V. 6. -P. 189-217.

134. McFerran, J.B. Further studies on the classification of fowl adenoviruses / J.B. McFerran, T.J. Connor // Avian Dis. -1977. -V. 21.-P. 585-593.

135. McFerran, J.B. Immunity to adenoviruses / J.B. McFerran // Avian Immunology. 1981. -V. 16. -P. 187-203.

136. Mockett, A.P.A. The use of an enzymeliked immunosorbent assay to detect IgG antibodies to serotype group-specific antigens of fowladenovirus serotype 2, 3 and 4 / A.P.A. Mockett, J.K.A. Cook II J. Virological Methods. -1983. -V. 7. -P. 327-335.

137. Monreal, G. Detection of neutralizing antibodies against avian adenoviruses by a microtiter cell culture system / G. Monreal, R. Dorn, M. Kassim // Berl. Munch tierarztl. Wochenschr. -1980. -Bd. 93.-S. 125-128.

138. Monreal, G. Nachweis von neutralisierenden Antikörpern gegen 11 Serotypen der aviaren Adenoviren / G. Monreal // Arch. Geflugelk. -1984.-Bd. 48. -S. 245-249.

139. Monreal, G. Zur Frage der Pathogenität der aviaren Adenoviren beim Huhn / G. Monreal, M. Hess II Tierarztliche Praxis. -1994. -Bd. 22. -S. 364-367.

140. Morales, G.A. Identificación de los agentes etiologicos del síndrome del hidropericardio / G.A. Morales, V.V. Valle, D.E. Lucio // Memorias de la XX Convencion Annual ANECA. Acapulco, Gro, 1995. -P. 225-227.

141. Morales, G.A. Protection against challenge conferred by Hydropericardium syndrome immunoglobulins in broilers / G.A. Morales, V.V. Valle, D.E. Lucio II Proc. of the 45th Western Poult. Dis. Conf. Cancun, Mexico, 1996. -P. 172-174.

142. Morales, G.A. Use of immunoglobulins against hydropericardium syndrome in field outbreak / G.A. Morales, D.E. Lucio, O.E. Puebla // Proc. of the 46th Western Poult. Dis. Conf. Sacramento, California, 1997. -P. 34-35.

143. Mullis, K. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction / K. Mullís, F. Faloona // Methods Enzymol. -1987.-V. 155.-P. 335-344.

144. Multisystemic adenovirus infection in broiler chicks with Hypoglycemia and Spiking mortality / M.A. Goodwin, L.H. Donna, M.A. Dekich, M.R. Putnam II Avian Dis. -1993. -V. 37. -P. 625-627.

145. Necrotizing pancreatitis and gizzard erosion associated with adenovirus infection in chickens / N. Tanimura, K. Nakamura, K. Imai et al. // Avian Dis. -1993. -V. 37, N 2. -P. 606-611.

146. Olson, N.O. A respiratory disease (bronchitis) of quail caused by a virus / N.O. Olson // Proc. Annu. Meet. Animal Health Ass. USA. -1950.-V. 54.-P. 171-174.

147. Pancreatic necrosis and venrtricular erosion in adenovirus-associated Hydropericardium syndrome of broilers IK. Nakamura, H. Tanaka, M. Mase et al. //Vet. Pathol. -2002. -V. 39. -P. 403-406.

148. Parthasarathy, K.R. Case report of IBH in a fowl in Tamil Nadu / K.R. Parthasarathy, S.A. Shakir, R. A. Ramakrishnan II Cheiron. -1978. -V. 7.-P. 2.

149. Periera, H.G. Typing of adenoidal pharyngeal - conjunctival (APC) viruses by complement - fixation / H.G. Periera // J. Pathol.- 1956. -V. 72. -P. 105-109.

150. Petek, M. Biological properties of CELO virus: stability to various agents and electron-microscopic study / M. Petek, B. Felluga, R. Loletto//Avian Dis. -1963. -V. 7. -P. 38-49.

151. Petterson, U. Structural proteins of adenoviruses 4. On the antigenic determinants of the hexon / U. Petterson // Virology. 1971. -V. 43. -P. 123-136.

152. Pettit, J.R. Inclusion body hepatitis in broiler chickens / J.R. Pettit, H.C. Carlson//Avian Dis. -1972. -V. 18. -P. 858-863.

153. Potter, C.W. Specific tumour antigen induced by chick embryo lethal orphan (CELO) virus / C.W. Potter, J.S. Oxford // J. gen. Virol. -1969.-V. 4.-P. 287-289.

154. Preliminary studies of Hydropericardium syndrome in broilers in Pakistan / M.A. Muneer, M. Ajmal, M. Arshad et al. II Zootécnica Int. -1989.-V. 5. -P. 46-48.

155. Prevalence and pathology of hydropericardium syndrome in broiler chicken / M.Z. Khan, M. Siddique, M.A. Sabri, M.A Majeed // Proc. of the National Seminar on Hydropericardium Syndrome in Chickens in Pakistan. Rawalpindi, 1988.-P. 105-110.

156. Prevención y control de la HCI/SHP en Mexico / P.E. Soto, J.L. Borrego, F.E. Camacho et al. II VII Curso de Actualización Avimex. -Mexico, 1995. -P. 57-59.

157. Prevention of Inclusion body hepatitis/hydropericardium syndrome in progeny chickens by vaccination of breeders with fowl adenovirus and chicken anemia virus / H. Toro, C. Gonzalez, L. Cerda et al. II Avian Dis. -2002. -V. 46. -P. 547-554.

158. Procedings of the 1st National Seminar on Hydropericardium-Pulmonary-Edemacum-Hepatonephritis-Syndrome. -Karachi: Pakistan Vet. Med. Association, 1988. -P. 1-10.

159. Properties of a strain of CELO virus isolated from chickens in Italy / A. Rinaldi, F. Mandelli, D. Cessi et al. II Clin. Vet. -1968. -V. 91. -P. 382-404.

160. Protection conferred by an inclusion body hepatitis commercial vaccine in birds challenged with several group I adenoviruses / G.M. Gay, P.E. Soto, M.A. Suarez et al. // Proc. of the 45th Western Poult. Conf. -Cancun, Mexico, 1996. -P. 167-170.

161. Qureshi, A.A. Diagnosis and control of hydropericardium / A.A. Qureshi // Poult. Int. -1990. -V. 29. -P. 12-14.

162. Qureshi, A.A. Hydropericardium and ascites / A.A. Qureshi // Poult. Int. -1989.-V. 28, N 6.-P. 44-48.

163. Qureshi, A.A. Hydropericardium and kidney lesions / A.A. Qureshi // Poult. Int. -1988. -V. 27, N 1. -P. 48-49.

164. Qureshi, A.A. Hydropericardium in layers / A.A. Qureshi // Poult. Int. -1997.-V. 36, N 1.-P.46.

165. Qureshi, A.A. Migratory birds harbor and spread disease / A.A. Qureshi // Poult. Int. -1988. -V. 4, N 5. -P. 34-35.

166. Reece, R.L. An unusual case of inclusion body hepatitis in a cockerel / R.L. Reece, D.C. Grix, D.A. Barr // Avian Dis. -1986. -V. 30, N 1. -P. 224-227.

167. Reproduction of hydropericardium syndrome in three-week-old cyclophoshamide-treated specific-pathogen-free chickens by adenoviruses from Inclusion body hepatitis / K. Nakamura, T. Shoyama, M. Mase et al. II Avian Dis. -2003. -V. 47. -P. 169-174.

168. Riddell, C. Viral hepatitis in domestic geese in Saskatchewan / C. Riddell // Avian Dis. -1984. -V. 28. -P. 774-782.

169. Ritchie, S.J. "Hepatitis-splenomegaly" syndrome in commercial egg laying hens / S.J. Ritchie, C. Riddell // Canad. Vet. J. -1991. -V. 32, N 8.-P. 500-501.

170. Saifuddin, M. Pathogenesis of an acute viral hepatitis: inclusion body hepatitis in the chicken / M. Saifuddin, C.R. Wilks // Arch. Virol. -1991.-V. 116, N1.-P. 33-43.

171. Saifuddin, M. Reproduction of inclusion body hepatitis in conventionally raised chickens inoculated with a New Zealand isolate of avian adenovirus / M. Saifuddin, C.R. Wilks // New Zealand Vet. J.-1990.-V. 38. -P. 62-65.

172. Scott, P.C. Inclusion body hepatitis associated with adenovirus-like particles in a cockatiel (Psiffaciformes; Nyphicus hollandicus) / P.C. Scott, R.J. Condron, R.L. Reece // Aust. Vet. J. -1986. -V. 63. -P. 337.

173. Serological cross-reactivity of avian adenovirus serotypes in an enzyme-linked immunosorbent assay / B.W. Calnek, W.R. Shek, N.A. Menedez, P. Stinbe II Avian Dis. -1982. -V. 26, N 4. -P. 897906.

174. Shane, S.M. Hydropericardium-hepatitis syndrome (Angara disease) / S.M. Shane, M.S. Jaffery // Disease of Poultry. -10th ed. / ed. B.W. Calnek. Ames, Iowa, USA, 1997. -P. 1019-1022.

175. Sreenivasa Gowda, R.N. Leechi disease (hydropericardium syndrome) a mysterious and emerging thread of poultry industry in India I R.N. Sreenivasa Gowda // Poultry Adviser. -1994. -V. 27. -P. 53-61.

176. Tamayo, M. Hematic values in flocks affected with inclusion body hepatitis / M. Tamayo, J.J. Gomez, R. Senas // Proc. of the 41st Western Poult. Dis. Conf. Sacramento, California, 1992. -P. 7-8.

177. The fine structure of GAL an avian orphan virus / I.A. MacPherson, P. Wildy, M. Stoker, R.W. Home //Virology. - 1961. -V. 13. -P. 146149.

178. The icosahedrae form of an adenovirus. / R.W. Home, S. Brenner, A.P. Waterson, P. Wildy//J. molec. Biol. -1959. -N 1. -P. 84-86.

179. The role of the infectious bursal agent and several avian adenoviruses in the haemorrhagic-aplastie-anemia syndrome and gangrenous dermatitis / J.K. Rosenberger, R.J. Eckroade, S. Klopp, W.C. Krauss// Avian Dis. -1975. -V. 19. -P. 717-729.

180. The use of a commercial vaccine for the control of inclusion body hepatitis in broiler breeders and their progeny / E.J.L. Borrego, P.E. Soto, G.M. Gay et al. // Proc. of the 45th Western Poult. Dis. Conf. Cancun, Mexico, 1996. -P. 164-166.

181. Valle, V. Inclusion body hepatitis outbreaks in Mexico with high mortality IV. Valle, A. Morales, E. Lucio // Proc. of the 44th Western Poult. Dis. Conf. Sacramento, California, 1995. -P. 7-8.

182. Verma, K.C. Emerging poultry diseases in India, new technologies for their diagnosis, treatment and control / K.C. Verma // Proc. of the 20th World's Poult. Congress. New Delhi, India, 1996, -V. 5. -P. 287-292.

183. Ward, F.P. Inclusion body hepatitis in prairie falcon / F.P. Ward, D.G. Fairchild, J.V. Vuicich //J. Wildlife Dis. -1971. -V. 7. -P. 120-124.

184. Wells, R.J.H. A fatal adenovirus infection of broiler chickens: inclusion body hepatitis / R.J.H. Wells, K. Harrigan // Vet. Ree. -1974. -V. 94, N 19.-P. 481-482.

185. Wigand, R. Classification and epidemiology of adenoviruses / R. Wigand, T. Adrian // Adenovirus DNA / ed. W. Doerfler -Boston, 1986. -P. 409-441.

186. Winterfield, R.W. Avian adenovirus infection / R.W. Winterfield // Disease of Poultry. Ames, Iwa, 1984. -P. 497-506.

187. Winterfield, R.W. Immunization of chickens against adenovirus infection I R.W. Winterfield, A.M. Fadly, F.J. Hoerr // Poult. Sei. -1977.-V. 56, N 5. -P. 1481-1486.

188. Yates, V.J. Characterization of the chicken-embryo-lethal-orphan (CELO) virus. Ph. D. Thesis/V.J. Yates. Univ. Wisconsin, 1960.

189. Yates, V.J. Observation on a chicken-embryo-lethal-orphan (CELO) virus/V.J. Yates, D.E. Fry//Am. J. Vet. Res. -1957. -V. 18. -P. 657660.

190. Young, J.A. Inclusion body hepatitis outbreak in broiler flocks / J.A. Young, D.A Purcell, P.J. Kavanagh //Vet. Ree. -1972. -V. 90, N 1. -P. 72.

191. Zaman, T. Serum profiles in hydropericardium affected broiler chicks / T. Zaman, M.Z. Khan // Pakistan Vet. J. -1991. -V. 11. -P. 50-52.

192. Zsak, L. Characterization of adenoviruses isolated from geese / L. Zsak, J. Kisary//Avian Pathol. -1984. -V. 13. -P. 253-258.

193. Zsak, L. Grouping of fowl adenoviruses based upon the restriction patterns of DNA generated by Bam HI and Hind III / L. Zsak, J. Kisary // Int. Virol. -1984. -V. 22. -P. 110-115.

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Иммунобиологические свойства полевых изолятов аденовирусов кур, выделенных на территории Российской Федерации

Оглавление диссертации Ельникова, Елена Владимировна :: 2006 :: Владимир

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Ельникова, Елена Владимировна, автореферат

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2006 года, Ельникова, Елена Владимировна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций