Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.08) на тему:Характеристика иммунного ответа у крупного рогатого скота и овец, экспериментально инфицированных ВЛКРС, M. BOVIS, M. SMEGMATIS и вакцинированных БЦЖ в различных советаниях

российская академия селъскохозяиствешш наук

сибирское отделение инс'шгут экспериментальной ветеринарии сибири и дальнего ВОСТОКА

На правах рукописи УДК 619:616*006,446

МАТЕР Сергей Николаевич

ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУННОГО ОТВЕТА У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И ОВЕЦ. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО ИНФИЦИРОВАННЫХ ВДКРО, М.ВОШ, М.БМЕОМАТГЙ И ВАКЦИНИРОВАННЫХ БШ В РАЗЛИЧНЫХ СОЧЕТАНИЯХ

16.00.03 - ветеринарная микробиология,вирусология эпизоотология, (микология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени , кандидата ветеринарных наук

НОВОСИБИРСК 1892

Работа выполнена в отделе лейкозов сельскохозяйственных животных и в отделе да раэ{иботке мер борьбы с туберкулезом института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока.

Научныэ руководители - доктор ветеринарных наук,

про«1)ессор П.Н.СМИРНОВ

доктор ветеринарных наук, профессор А.С.ДОНЧЕНКО

Официальные оппоненты - доктор ветеринарных наук,

профессор В.М.НАХМАНСОН

доктор ветеринарных наук, профессор В.Ф.МАРТЫНОВ

Ведущая организация - Новосибирский Госудаственный

аграрий унивеситет

Зашита состоится "/¿5" июня 1Р92 г. в _часов на

заседании специализированного совета Д.020.23.01 при Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО ГЪссельхозакадемии.

Адрес института: 633128, Новосибирская обл., п.КраснооОск, ИЭВСкДВ.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО Росселъхозакадэмии. Автореферат разослан " " Г8&Д, г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат ветеринарных наук,

о.к.димов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одной из наиболее актуальных.проблем етеринарной медицины сегодня является проблема ассоциированных ифекций, в том числа лейкоза и туберкулеза крупного рогатого ¡кота. В изучение каждой из них (в варианте моноинфекции) наукой юстигнуты определенные положительные результаты, разработаны относительно эффективные система оздоровительно-профилактических вроприятий по лейкозу (Вурба, Валихов, Дун, 197?; Бусол, 1086} [ахмансон, 1986; Смирив, 1987; Шишков, Бурба, 1988; Нагаева и юавт., 1988; Лемэш, Минасян, 1890; Симоварг, 1991; Валихов, :992s Иоскалик, 1992) и туберкулезу , (Кисленко, I97X; Щепилов. 976; Спин, 1976; ' вокун, 1976; Новак, 1977; Донченко, 1980; 'рбан, 1980; Коромыслов и соавт., 1982; Кочмарский, 1982; Хайкин, йлычев, 1982; Тузова, 1983; Джупина и соавт., 1989; Ходун и юавт., 1990). Их ассоциации хотя и изучались отдельными исследо-ютелями, но носили фрашентарный характер (Кобызев, ÎÔ67; Рабу-:ин и соавт., 1961; Httremski, Kaazabklewlca, 1973; Яблоков, Гатчина, 1976; Смирнова, 1984; Смирнов, Храмцов, Хайкин и др., 989),

Прикладное содержание проблема состоит в получении новых [еучных знаний об особенностях формирования иммунного ответа у ;рупного рогатого скота при бинарной (лейкозно-туберкулезной) нфекции, причем в различных сочетаниях и последовательности манкирования животных в естественных условиях. Кроме того, представляется ваанш изучение возможного негативного влияния ВЛКРС у нфицированных животных на формирование иммунитета при вакцинации ДО и проявление аллергической реакции на П1Щ туберкулин длл мла-опитаиш.

Актуальным остается выяснениз степени возможного взаимного силения или ингибирования лейкозного и (или) туберкулезного про-ессов при бинарном развитии этих патологий у животных. Öra часть опроса продиктована, особенностями эпизоотического состояния аблагополучных по »уберкулезу крупного рогатого скота хозяйств аладной Сибири. Проведенный нами анализ показал, что такие хо-яйства, как правило, неблагополучны и по лейкозу.

В контексте рассматриваемой проблемы научный поиск, ня наш згляд, позволит раскрыть отдельные стороны рйцедивов туберкулеза | оздоровленных пунктах. Кроме того, комплексное изучение ассоци-

ированного развития лейкоза и туберкулеза крупного рогатого скотг позволит создать предпосылки для методически нового научного направления в познании особенностей развития инфекционного и эпизоотического процессов лейкоза и туберсулеза сельскохозяйственны? животных.

Цель исследования. Изучить особенности формирования иммунного ответа у овец и крупного рогатого скота при экспериментально* инфицировании ВЛКРС, И.bovis, M.eraegnatie и вакцинировании БВД i различных сочетаниях.

В задачи исследования входило изучение:

1. Частоты одновременного реагирования крупного рогатогс скота на ПОД туберкулин для млекопитающих и на gp51 антигег ВЛКРС.

2. Динамики показателей иммунного ответа у овец и крупноте рогатого скота, экспериментально инфицированных ВЛКРС и M.bcviE о различных сочетаниях.

3. Динамики показателей иммунологической активности у ягнят, экспериментально шфицированных ВЛКРС и M.megmatle.

4. Особенности формирования поствакцинального противотуберкулезного иммунитета у овец и крупного рогатого скота, экспериментально инфицированных ВЛКРС.

5. Разработать дополнения в систему мероприятий ш борьбе с туберкулезом крупного рогатого скота.

Научная новизна. На экспериментальных моделях (овцы и крупный рогатый скот) изучена динамика показателей иммунного ответа при сочетанном течении инфекции ВЛКРС и М.bovis. Установлено, что у инфицированных животных, на фоне общей активации синтеза специфических антител снижается функциональная активность как клеточного, так и гуморального звена юдаунокомпетентной системы (ИКС). При этом последовательность экспериментального заражения ВЛКРС и М.bovis у овец практического значения не имела. У крупного рогатого скота при наложении инфекции ВЛКРС на М.bovis развивался наиболее выраженный иммунологический дефект. Кроме тото, выявлено активизирующее влияю® ВЛКРС на проявление туберкулезного процесса у оэец,

У овей, экспериментально юфщировзнных ВЛКРС и M.eroegmetls установлено снижение бактерицидной, лизоцдаяой активности сыбо-роткг. крови, уровня сывороточного lgG1, фагоцитарной активности нейтрофклов и пралиферативного ответа лимфоцитов на туберкулин.

У телят, иммунизированных вакциной БЦИ по фону ииф-кции IKPC, измзнзнязтся активность как клеточного, так и гуморального муннтета, снижаются показатели ПЧЗТ (повышенная чувствитель-ють замедленного типа), фагоцитоза и пролиферативноП активности мфоцитов крови на конканавапин к (Con А), туберкулин, а также ¡специфическая резистентность и общий уровнь иммуноглобулинов. В :сперименте на овцах установлено, что ВЛКРС снижает протективные юйства вакцины БЦЖ.

гактаческоа значение работа. Разработаны дополнения в систему ipbOu с туберкулезом крупного рогатого скота для Новосибирской ¡ласти, утвержденные ученым советом ИЭВСиДВ СО Шссельхозакаде-и и ветеринарюй - секцией НТО Управления сельского хозяйства >восибирсгсой области (1992).

Ряд положений диссертации использован в методических реновациях по оценке естественной резистентности крупного рогатого :ота и овец (Новосибирск, 1687).

Апробация работа. Материалы диссертации доложены на Ш Все-1ЮНОЙ конференции по эпизоотологии (Новосибирск, 1991); на заданиях ученого совета ИЭВСиДВ (Новосибирск, 1990 - 1992); на «радиационном совещании по ветеринарии (Новосибирск, 1992).

Публикация. По те№ диссертации опубликовано 5 научных ра-

>т.

Структура п объем работы. Диссертация изложена на 130 стратах машинописного текста, иллюстрирована 25 рисунками и 16 таб-щами и состоит из следующих разделов: введение, обзор литерату-1, собственные исследования, обсуждение, вывода и практические едложения. Список используемой литературы содержит 137 отечест-«ных и 57 иностранных публикаций.

, СОВСТВКННЫК ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы

Для выявления частоты одновременного реагирования крупного >гатого скота на ППД туберкулин и в РИД с антигеном ВЛКРС нами ши проанализированы результаты серологических исследований в ¡акции иммунодиффузии с антигеном gp51 ВЛКРС, пропеденнюс сот-датами отдели лейкозов ИЭВСиДВ и НПЦ "Сибонковет", и ргзульта-I аллергических исследований на туберсу.изз, отражайте в до купцах ветеринарной отчетности с учетом шьтоди« С.И.Джупини,

В.А.Ведерникова (1981) и В.Л.Петухова, А.И.Желтикова и др. (I98S в хозяйствах Новосибирской области и Алтайского края.

Динамику показателей иммунологической реактивности у ове1 экспериментально инфицированных ВЛКРС, М.bovis, M.sraegmatis, пр витых вакциной БВД изучали на 40 одновозрастных овцах, которь сформировали по принципу аналогов в 9 груш по 4-5 в каждой. Ki вотных всех групп содержали изолированно.

Характеристика групп ягнят:

1. Экспериментально инфицированн&в ВЛКРС, а через 40 да М.bovis.

2. Экспериментально инфицированные M.bovle.

3. Экспериментально инфицированные M.bovle, а через 40 дне ВПКРО.

4. Экспериментально инфщированныэ ВЛКРС, а через 40 дне M.smegBatia.

5. Экспериментально инфицированные M.sraegmatis.

6. Экспериментально вакцинированные БШ, а через 46 дне юфшировагомэ ВЛКРС. '

?. Вакцинированные БЦ1.

8. Экспериментально инфицированные ВЖРС.

9. Интактные животные (контроль).

Динамика формирования иммунного ответа у крупного рогвтог скота при ассоциированном течении инфекции ВЛКРС и туберкулез изучалась на клинически здоровых 5-6-месячных телятах черно пестрой породы, завезенных из благополучного по туберкулезу хо зяйства. Из них сформировали 7 групп:

1. Эксгкримэнтаяьно инфицированные ВЛКРС, а через 20 дне M.bovle.

2. Экспериментально инфицирование М.bovis.

3. Экспериментально инфицированные М.bovis, а через 20 дне ВЛКРС.

4. Вакцинированные БВД.

Б. Экспериментально инфицированные ВЛКРС, а через 14 дне вакцинированные БШ.

6. Экспериментально инфицированные ВЛКРС.

7. Интактные животные (контроль).

Материалом для экспериментального инфицирования овец вирусо лейкоза служила нативная кровь больной лейкозом коровы, а да ¡цитирования телят использовали кровь (в дозе 5 мл) от овцы

сспертмэнтально инфицированной культуральдай ¡падкостью культура шток почки эмбриона овцы, хронически продуцирующей ВЛКРС (5-й icca*).

Для инфицирования животных туберкулезом использовали оттит->вадаую дозу вирулентного штамма М.bovis (14х 8НИИБТЯ) и сапро-1тный штамм M.sDiegmatia (ВГНКИ), выращенные на среда Левенштей-1-Иенсена.

Животных иммунизировали вакциной БЩ, приготовленной Ставро->льским НИИ вакцин и сывороток, согласно наставлению.

Комплексные диагностические исследования крупного рогатого юта на лейкоз и инфекцию ВЖРО проводили в соответствии с'ЧИато-гаескими указаниями по диагностике лейкоза крупного рогатого' юта" (1988). Для постановки реакции иммунодиффузии (РИД) в геле 'ара использовали gp51 антиген ВЖРС, изготовленный в ИЗВСиДВ СО »ссельхозакадемии.

В период проведения опытов животных исследовали внутрикожной шергической пробой ПГЩ-туберкулином для млекопитащих, согласно ютавлению по его применению (1986). Сыворотку крови эксперимен-1льных животных исследовали в реакции связывания комплемента >СК) с туберкулезным антигеном КТА У1ШЭВ, согласно "Временному ютавлению по постановке РСК для диагностики туберкулеза крг шю-) рогатого скота" (1976).

Уровень сывороточных иммуноглобулинов G в сыворотке крови грэделяли путем электрофореза сывороток в геле агарозы марки В, в отдельных случаях в геле агара марки "Difco" (США) по методи-! В.М.Чекишева (1977); IgM - методом радиальной иммунодиффузии > Q.Manoini et al (1965); общий бэлок в сыворотке крови - по >ури (1951); бактерицидную (IffiA) и лизоцимную активность (ЛА) .¡воротки крови - нефелометрически, используя в качестве тест-жроба культуру белого стафилококка (Staphllococua albus) дли 5А и микрококка (Micrococcus lyzodeiticua) для ЛА, в соответ-'вш с методическими рекомендациями по оценке естественной ре-гстентности крупного рогатого скота и овец (П.Н.Смирнов и >авт., 1087).

Оценку, лролиферативного ответа лимфоцитов In vitro у экспе-1шнталъных животных осуществляли выделением лим{>оцитоа из ¡паринизированной венозной крови стандартным методом центрифуги-шания в градиенте плотности фиколла-версграфина (1.073). Клетки гльтивироваяи в лунках планшетов для иммунологических исслгдопа-

г

иий в среде Г'ШГ-1640, дополненной 1С№~ми сыворотки крупного рс гатого скота, антибиотиками, 1-глютамином и НЕРЕ-буфером. Лимфе нити стимулировали мигогеном лакокоса {ГШ) в дозе 5 мкг/мл, кои канавалииоч А в дозе 10 мкг/мя и ППД туберкулином для млекопитак тих в разведении 1/50. Пролиферативный ответ оценивали через 5 ч. по включению Н^-тимццииа, вводимого за 20 часов до конца куль тивирования в дозе Я мгада/лушеу. После культивирования клетк переносили на фильтр с помощью Харзестра. Радиоактивность зкепе риментального материала определяли з жидкостном сцинциляциошго счетчике БЬ-ЗО. Результаты представляет средний счет (имп/мин) и грех идентичных культур.

Цифровые данные обрабатывали по Е.В.Гублеру (1978) и Г.Ф Лакину (1880) и по на персональных компьэтерах "Правэц-16" "С1)-28Г>".

Результаты исследований

Частота одновременного реогаровашзя крупного рогатого скоте но ГОД туберкулин для млекопитающих и в РИД с йр51 антигеном ВЛКРС

Нами проанализированы результаты исследований 161673 голо! крупного рогатого скота 28 хозяйств Новосибирской области и Алтайских) края в РИД с бр51 антигеном ВЖРС и внутрикоккой аллер гической пробой за 1990-Т991 гг.

Установлено, что В 68,2% случаев коровы, реагирующие на "туберкулин, явля.лись в то же время носителями вируса лейкоза крупного рогатого скота. Однако среди животных, нереагирукших на туберкулин, также имелись носители ВЛКРС (47,1%).

Для выявления закономерностей "взаимного влияния кнфекщй лейкоза и туберкулеза хозяйства по уровню инфицированности ВЛКК были схругаш{шшы в 6 классов. Классовый промежуток распределе-1шя хозяйств по инфицированности ВЛКРС составил 15%.

Отмечено, что прирост уровня инфицированности маточного стада ВЛКРС влечет за собой и увеличение количества вирусоносителеЯ среди животных как реагирующих (г=0,983), так и нереагирушщия (г-0,947) на туберкулин. Причем процент вирусоносителей из числа реагирующих, как правило, превшая подобный показатель среди не-гатишых в отношении туберкулина животных.

Среди хозяйств, относящихся к 1-му и Я-му классам , выяшенк

зличия в уровне инфкцированкости в зависимости от рзашрэвашя вотных на туберкулин. Так, среди коров з хозяйствах с уровнем фицированности до 15% (1-ый классовый праизжуток) выявлено по-вительных в РИД животных среди реагирующих на туберсулш ,6%, а среди негативных в отношении ППД туберкулина - 5,6%. Это здетельствует о том, что в стадах с незначительным распростра-нием ВЛКРС частота совпадений одновременного реагирования ки-тных на йр51 антиген ВЛКРС и на туберкулина Была.

Выявленная закономерность свидетельствует о взаимосвязи мзж-уровнем инфицирозанности стад вирусом лейкоза и реагированием ров на ПГЩ туберкулин. Данная закономзрюсгь протекает по типу лоаительной корреляции с высокой степенью достоверности изуча-ых показателей (р<0,00Г).

Анализ эпизоотической ситуации хозяйств Новосибирской облао-:, оздоравливаемых от лейкоза крупного рогатого скота, показал, о до проведения оздоровительной работы уровень инфицирозанности точного стада вирусом лейкоза составлял на фермах: Неудачино -,2%, Шгатннково - 38,6, Чернаково - 49,8, Тулинское- 26,635. еле проведения оздоровительных мероприятий на всех фермах резко изилось количество животных, реагирующих на туберкулин аблица).

Реагирование коров на ПОД туберкулин для илекопитащих в динамике оздоровления ферм от лейкоза крупного • рогатого скота (благополучные по туберкулезу стада)

Ферма реагировало на туберкулин .

до оздоровления* *» после оздоровления

Всего, гол. В т.ч.РИД(+) Всего, гол. В Т.Ч.РШ+)

гол % гол % '

Неудачино 35 18 61,4 4 - -

Плотшшово 38 19 50,0 I - -

Чер|аково< 40 22 55,0 . 3 г

Тулинское И 8 72.7 1 .г -

"результаты осеншго исследования 1689 г.; "результаты осеннего исследования 1991 г..

Работа по оздоровлению стад от лейкозной инфекции веля Научно-производственным центром "Сибонковет" и была направлена выявлешо вирупоносителей, с последующей их изоляцией и замен поголовьем, свободли-м от ВЛКРС.

Особенности иммунного ответа у овец, экспериментально инфицированных ВЛКРС и M.bovie в различии! сочетаниях

У 01юц в динамике экспериментальной лейкозной и'туберкуле ной инфекций выявили достоверное (р<0,01) снижение на 75-й ден бактерицидной активности сыворотки крови у овец опытных групп сравнении с контрольными, причем более выраженное снижение это показателя (р<0,05) зарегистрировано У овец, инфицированн M.liovlo по Фону лейкозной инфекции на 30-45-й дни наблюдения, а овец, инфицированных в обратной последовательности, на 105-й 120-й дни опыта (р<0,001). л

Уровень лизоцимной активности сывороток крози овец, инфиц: ропатш ВЛККЗ в ассоциации с М.bovis, был достоверно вы ЦхО.ОУ) показателей иитактных животных тоже на 75-й день набл дыши, но у овец, инфицированных М.bovis по фону BMFC, на 120 д-'нь было установлено достовзр-ш его снижение.

У овец опытных групп в начальный период после введения зар жг-шцеш материала отмзчалось снижение уровня фагоцитоза, а в псх Лйдующиа сроки повышение. Достоверюе снижение (р<0,01) ypoBi фагоцитарной активности сывсрогок крови в отношении как интак' ных, так и ифицированных М.bovis зарегистрировано в группе ош зараженных гю схеме ВЛКРС-tM.bovis на 30-й дань, а среди инфицированных в последовательности М.bovis-»ВЛКК5 на 120-й день опыта После заражения экспериментальных животных M.bovis и ВЛК] содержание сывороточного белка снижалось. В то время, как на 90 день у овец, инфицированных только М.bovis, обнаружено достове] ное повышенна уровня сывороточного белка (р<0,05) относителы интактных животных.

Экспериментальное инфицирование вирусом лейкоза овец дост< верно повышало уровень как Igt), и IgCg (р<0,05) в сыворотке Kpoi зашотыж. После введения овцам микобактерий туберкулеза набпвда. т.:,'Ш!л;Н!и:-а к их снижении на 30-75-й дни. Однако на 90-й дань оноц, инфицированных M.bovia, отмечено достоверное повыше» уршш l¿\ü. (p-,0,0f>), а у оноц т&.щропанных по exet

bovis+ВЖРС, Igü2 (p<0,05).

При сравнительном исследовании динамики синтеза антител у ец на введение М.bovis (с помощью РСК с комплексным антигеном ИИЭВ) установлено, что вирус лейкоза стимулирует синтез проти-туберкулезных антител у овец на протяжении воого опыта.

Результаты исследования функциональных свойств лимфоцитов риферической крови овец на 120-190-й дни свидетельствуют об иетенш процессов активации лимфоцитов и развитии неспецифичес-й иммуннодепрэссивной реакции со стороны иммунной системы у ец первых трех групп на 120-й день, что проявляется в снижении эвня спонтанной пролиферации.

В то же время у овец, инфицированных только М.bovis, разви-этся специфический иммунный ответ на возбудитель. В культуре in tro регистрировали четкий пролиферативный ответ лимфоцитов на беркулин. Однако в случае присоединения вируса лейкоза к bovis и, наоборот, отмечали достоверное снижение специфичес-го ответа.

Анализ интенсивности пролиферации лимфоцитов, проведений рез 70 дней после первого измерения показал, что инфицирование bovis овец не сопровождалась формированием специфического отва-- против M.bovi3, что проявлялось в неспособности лимфоь чтов аотных этой группы к эффективному пролиферотквному ответу на Зеркулин. Наряду о этим, отмечали признаки неспецифической гивации иммунной системы, о чем' свидетельствовал высокий уро-tib спонтанной пролиферации.

Инфицирование овец M.bovla, предварительно инфицированных fíFC, сопровождалось активацией как специфического, так и не зцифического иммунного ответа. Это выракалось усилением проли-ративного ответа на туберкулин и ГШ, что могло быть связано к с количественным, так и с качественным нарушением соотношения и B-лимфоцитов при развитии смэшанной инфекции. Одновременно «чали признак« подавления спонтанной пролиферации и снижение элифератюиюго ответа на Con А.

У овец, инфицированных ВЛКРС но фону М.bovis, отмечали чезновение признаков специфической иммунодепрзссии. Способность чфоцитов к пролиферзтивноиу ответу на туберкулин, по сравнению шггакт1П>[ми. животами и инфицированными M.bovla, была достоверно сличена. При этом ре око слпиакся уровень спонтанной пролифефп-.1, но уве.вичивался прошфератиший ответ на осп А и 1Ш.

IS

Животных дважды исследовали внутрикожной туберкулиновой прс бой. При первом исследовании, через 45 дней после инфицирован* овец М.bovis, достоверных различий в показателях аплергическу реакций (через 48 ч) мэжду группами животных не обнаружено, щ повторном у овец, инфицированных по схеме ВЖРС+ М.bovis, выявле но достоверное увеличение аллергической реакции на введение tj беркулина (р<0,00!).

Через Б месяцев после заражения овцы были убиты в условия эксперимэнталъной базы ЮВСиДВ с последующим проведением ветер® нарно-санитарной экспертизы туш и внутренних органов.

Экспертиза показала, что в группе животных, инфицированнк М.bovis, у двух овец (40%) были установлены туберкулезные пораже ния печени и средостенных лимфатических узлов. Из группы живот ных, инфицированных по схеме ВЛКРС+ M.bovis, у 4 овец (80%) отш чены туберкулезные измэнешя во внутренних органах и лим$атичес ких узлах. В группе овец, экспериментально зараженных ВЛКРО п фону M.bovis, изменения обнаружены у трех животных (60%).

В дальнейшем от всех животных, у которых на вскрытии, тубер кулегньв изменения не установлены, биопробой была изолирован исходная культура возбудителя туберкулеза бычьего ввда.

При гистологическом исследовании биоматериала от овец изме нения, свойственные туберкулезному процессу, отмечены в печени лимфатических узлах .и в отдельных случаях в селезенке. •

Таким образом, по результатам патолого-анатомического, гис тологического и бактериологического исследований установлено, чт в условиях эксперимента ВЛКРС повышает риск развития у овец ту боркулезного процесса.

Динамика показателей иммунологической активности у овец, экспериментально инфицированных ВЛКРС и H.emegmatis

Введете овцам, вируса лейкоза и M.smegmatis вызывает сниже ние бактерицидных свойств сыворотки крови. Причем наиболее выра кенно оно у овец, зкспериментально инфицированных тольк M.smegrcatia.

Уровень .лизоцимной активности сыворотки крови у овец опытны групп значительных изменений не претерпел, хотя в конце наблвде ний был ниже чем у интактных животных.

У овец после введения ВЛКРС наблюдалось снижение' уровня фа гоцитарной активности нейтрсфилов. Посла инфицирования животны

культурой M.smegmatia регистрировали незначительное повышение фагоцитоза с дальнейшей тенденцией к стабилизации, а затем и снижению.

В результате исследований сывороточного белка у овец опытных и контрольной групп Достоверных различий не выявлено. Однако при анализе показателей белковых фракций сыворотки крови установлено, что у овец через 7 дней после введения ВЛКРС уровень IgG, заметно снижался. Причем введение овцам культуры M.smegmatis вело к дальнейшему снижению изучаемого показателя (р<0,05).

Содержание IgGn на протяжении опыта мало отличалось от нормы. Однако на 120-й день наблюдения у овец, эксперимэнтально инфицированных M.Bmegraatis, выявлено достоверное снижение уровня (р<0,05) , а у овец, предварительно инфицированных ВЛКРС, достоверное повышение этого показателя. (р<0,05) относительно животных контрольной группы.

Анализируя динамику показателей синтеза антител у овец при экспериментальном последовательном- инфицировании их- ВЛКРС и M.smegmatis, установлено, что за период наблюдения- EQKFC заметно не влиял на выработку против M.smegmatis антител. Однако в конце наблюдения обнаружено достоверное уменьшение уровня антител у овец, инфицированных бишфеюшей.

Далее внутрикожной туберкулиновой ■ пробой изучали динамику 1ШГ у овец опытных груш.

Результаты исследований показали, что в наблюдаемый период овцы на реагировали на туберкулин. Однако при исследовании их комплексным аллергеном из атипичных микобактерий (НАМ) через 45 дней после введения заражающего материала установлена аллергическая реакция у овец, инфицированных по схеме ВЛКРС+M.smegmatle, причем в контроле она отсутствовала. Повтортое исследование овец через 75 дней положительных результатов не дало.

При исследовании пролиферативной активности лимфоцитов овец опытных и контрольной групп на 120-й день наблюдения установлено достоверное снижение уровня спонтанной пролиферации и повышение специфического гомунного ответа на туберкулин лимфоцитов овец, инфицированных бинарной инфекцией. При повторном исследовании (190-й дань наблюдения) обнаружено повышение уровня спонтанной пролиферации, пролиферативного ответа лимфоцитов в культурах, стимулированных Con А и ГШ и снижений специфического иммунного отгота на туберкулин.

Особенности формирования гюствакцинального противотуберкулезного иммунитета / овец, инфицированных ВЛКРС

Результаты исследований озец опытных групп в динамике поствакцинального иммунного ответа на вакцину БШ при одновременном экспериментальном1 заражении ВЛКРСпо отношению к животным, которым вакцина и ВЛКРС не вводшшсь, показа™, что на первом этапе наб-лвдения (16 дней) вакцинация БЩ£ стимулировала у животных НБА и ЛА сыворотки крови и одновременно о -згим вызывала снижение синтеза иммуноглобулинов G, причем все выявленные различия показателей у овец опытных и контрольной групп были статистически достоверны. На 30-й день наблюдения показатели содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови испытуемых животных ошгных групп уже находились на уровне показателей контроля, а к достоверному увеличению показателей' ЛА и НБА добавилась подобная ¡se зависимость и по уровню фагоцитарной активности нейтрофшюв.

После экспериментального заражении овец вирусом лейкоза отмечено достоверное снижение уровня НБА, а то время как показатели ЛА у них оставались заметно более высокими, по отношению к показателям интактных животных, fin 7Ь-й день статистически достоверное снижение НБА у овец этой группы сопровождалось подобной зависимостью в отношении ФА и уровня Г^с. В группе животных, не инфицированных ВЛКРС, в этот период наблвдалось снижение показателей ША. а несколько позднее 045 дней) уровень IgQ достоверно превышал показатели контрольных жинотшх.

По истечение описанного периода овцы licex групп были инфицированы М.bovis. При втом наблюдалось сниленж; НБА на 19Б-й день в группе только вакцинированных и на ?и5~й день ь группе инфицированных ВЛКРС по фону вакцинации ЕШ. Наиболее интересным результатом этих исследований, на наш взх'ляд, представляется длительное (до 500 дней наблхдения) снижение содержания IgQ в сыворотке крови.

Анализ динамики накопления в сыворотке крови телят компле-мзнтсвязиваицих антител, выявленных о помощью РСК с антигеном КТА УНИИЭй, показал, что на 30-й день наблюдения (на 14-е сутки после ишукизацш БШ) в сыворотке крови животных уже накапливались комнлемьнтсаязываыцие антитела, улавливаемые туберкулезным антигеном в РСК. На 145-й день (черьз 4 месяца после введения BUJS) отмечено достоверное снижение ти-ypu вшител (р.0,00) ).

После инфицирования яивотных всех групп M.toovia (через 5 месяцев после иммунизации вакциной БГОК) достоверых различий в показателях синтеза антител не выявлено.

Исследования in vitro Функциональных свойств лимфоцитов периферической крови овец на 75-й (2,5 мзсяиа после вакцинации ВВД) и 145-й (4 месяца после вакцинации Б1Н) показали, что на 75-й день у овец опытных груш наблюдался довольно высокий уровень спонтанной пролиферации, однако при повторном исследовании через 70 дней регистрировалось достоверное снижение данного показателя у овен, инфиииртввнных ifo схеме Б1Щ+ВЛКРС и только ВЛКРО, по отношению к иммунизированным животным, а у овец геггактной группы наблюдалась активация лимфоцитов in vitro.

Уровень пролиферации лимфоцитов, стимулированных туберкулином, в первое йсследовтше был низким у животных всех групп, однако у овен, вакцинированных Б1К, начал формироваться специфический иммунный ответ. При повторном исследовании специфический иммунный ответ усиливался," причем, он был ниже у животных, инфи цированных ВЛКРО по фону рскииняции Б1Ш. -

Инфицирование овец ВЛКРО по фону вакиины ЁЦЯ вызывает на 75-й день наблюдения достоверное снижение пролифе ративной активности лимфоцитов, стимулированных митогедам Con А. При этом у животньк, только вакцинированных Б1Щ, напротив, отмечалось достоверное увеличение данного показателя. В после душем (на 145-й день) было зафиксировано достоверное увеличение показателя проли-феративного ответа лимфоцитов у овец первых трех груш на Con А.

При оценке митогекноге действия FWM на пролиферацию лимфоцитов периферической крови пвс-ц достоверих различий не обнаружено, однако кесиецифическан иммунодупрессквиан реакция со стороны иммунной системы у животных из группы ВШ+BJIKFC наблюдалась на протяжении двух исследований.

При анализе динамики аллергического реагирования овец ira туберкулин установлено, что уже через 30 дней после влнцинаиии вивотныа реагировали на туберкулин. Через один м^-сяц пепле вакцинации животные опытной группы проявили достоверно бо'лее ¡тзкую реакцию на туберкулин, причем тенденция к снижению сохранилась и тосле инфицирования их патогенной культурой туберкулеза (Я¡чьего зида.

Через 12 месяцев после заражения M.bovia овец комиссионно /били в условиях экспериментальной бн-ад ИЭВОиЛЛ. Гезультаты коми-

лексных исследований туш показали, что в I00S случаях у зараженных М.bovis овец (с контрольной целью) выявлялись туберкулезнш поражения. Причем, в группе животных, инфицированныых го схеме БЦК+-ВЛКРС+ М.bovis у двух овец (66.6SK) были обнаружены туберкулезные поражения во внутренних органах и лимфатических узлах. В группе вакцинированных овец и зараженных М.bovis изменения обнаружены только у одного (33,3%) животного.

При бактериологическом исследовании биоматериала от морских свинок была выделена исходная культура возбудителя туберкулеза бычьего вида от всех животных, у которых на вскрытии туберкулезных изменений не обнаружено.

При микроскопическом исследовании органов. овец характерные туберкулезные гранулемы выявлены в лимфатических узлах, печени, кишечнике, селезенке.

В лимфатических узлах наблвдали ш начинающую формироваться туберкулезную гранулему, состоящую из некротической массы в центре и клеточной зоной по переферии, или большие гранулемы с уже обызвествленной некротизкрованной тканью.

Таким образом, по данным патолого-анатомического, гистологического и бактериологического исследований было установлено, что вирус лейкоза крупного рогатого скота снижает протективные свойства вакцины БЦК.

Динаиика показателей шшункого ответа у телят, экспериментально инфицированных ВЛКРС и И.bovis в различных сочетаниях

Исследованиями Телят in vitro, в случае их заражения только И.bovis, выявлена выраженная ишунодепрессивная реакция ухе через 30 дней после инфицирования. Это проявлялось снижением уровня как спонтанной пролиферации, свидетельствующей об угнетении процессов активации лимфоцитов in vivo, так и пролиферативного ответа .лимфоцитов на конканавалин А и митоген лаконоса.

Ьри этом заражение телят Mo.bovis сопровождалось формированием специфического иммунного ответа на возбудитель. В культура in vitro регистрировали четкий про лифе ративный ответ на туберкулин. Способность лимфоцитов отвечать на туберкулин появлялась на 28-й дань и усиливалась к исходу 1,6 месяца с последующей стабилизацией.

В случае сочетанного течения лвЯкоэной и туберкулезной ин

зекиий имела значт'ость последовательность инфицирования. Так при »аражении телят M.bovj3, предварительно инфицированных ВЛНГС, габлюдалось угнетение специфического ответа лимфоцитов на ПГЩ 'уберкулин. Однако со 153-го дня отмечали ei'o резкое стимулирова-Одновременно регистрировали признаки иммунодепрессимого •.остояния, характерного .для животных, инфицированных М.bovis. Грн этом снижение пролиферативного ответа на Соп А и митоген ла-;оноса появлялось раньше (уже через две недели после инфицирова-ия М.bovis) и сохранялось до 130-го дня о момерта заражения I.bovis. Подавление спонтанной пролиферации регистрировали тояысо ерез 3 недели после заражения М.bovis и не выявляли в последую-|ие сроки.

При инфицировании телят ЕШТС по фону М. bovis 'отмечали :счезновение признаков иммунодепрессии. При этом резко возрастал ровень спонтанной пролиферации лимфоцитов, свидетельствующий об ктивации иммунной системы. Тем не менее, специфический иммунный тват на туберкулин-был угнетён.

У тёлят опытных групп на 42, 72-й дни опыта выявлено досто-ерное снижение бактерицидной активности сыворотки крови. Причем олее выраженное снижение данного показателя зарегистрировано у ычков, экспериментально инфицированных В.ПКРС по фону инфекции .bovis. В первый период наблюдения отмечаюсь незначительное нижение уровня лизоцимной активности у бычков как под влиянием яруса лейкоза, так и М.bovis, однако на 72-й день было выявлено остоверное снижение изучаемого показателя по сравнению с таковым нтактных животных. Подобную динамику дефекта, выраяагачуюся в тойком снижении показателей выявили и в уровне фагоцитарной ак-ИРНОСТИ. ,

При исследовании сывороточных иммуноглобулинов мы установи-и, что уровень IgM быт достоверно выю у бычков, инфицированных ГИРС по фону М.bovis, по сравнен™ с ингактными животными, на ■ ротяжении всего периода наблюдений. Тенденция К енижчнип уровня отмечена и у телят других опытных групп.

Анализ динамики показателей содержания иммуноглобулинов под-пассов Gj и С2 у бычков опытных групп с 72-го дня выявит тенпен-® к их снижению. Причем это снгс^ние быта более выражено у те-эт, инфицированных ВЛКГС по Фону инфекции М.bovis.

При исследовании сывороток кропи в ИЩ с gp5I антигеном к 5КРС специфические антитела были выявлены нами у всех бычкоч,

IS.

экспериментально инфицированных ВЛКРС. Сроки от заражения животных до первичной регистрации антител в их сыворотке крови колебались до 30 суток, Протйвотуберсулезнье антитела в РОК с комплексным туберкулезным антигеном (КТА) УШШВ были выявлены на 14-28-е сутки у всех животных, экспериментально инфицированных Me.borla.

Анализ динамики синтеза комплемзнтсвязывашца антител у телят опытных и контрольной групп показал, что на 180-й день наблюдения (170 дней после заражения М.bovis) в опытной группе бычков, инфицированных по схеме ВЛШ> М.bovis, было обнаружено достоверное увеличение титра комплешнтсвягыйаюших антител в сыворотке крови. В то же время у бычков, инфицированных в обратной последовательности, титр антител был ниже тигра животных контрольной группы.

Далее внутрикожной туберкулиновой пробой изучали динамику ПЧЗГ у телят опытных групп.

Результаты исследований показали, что через 45 дней после инфицирования животных М.bovis достоверных различий в уровне реагирования не обнаружено. Однако пра повторим исследовании (через 75 дней) животные опытных груш, реагировали на туберкулин гораздо слабее, чем контрольной, причем у телят, инфицированных ш фону М.bovis, обнаружены достоверные различия в результатах.

Чзрэз 6 месяцев гюсле заражения животные были убиты в условиях мясокомбината о проведением ветеринарно-санитарной экспертизы туш и внутренних органов животных.

Результаты показали, что у бычков, аксперимзнталыю инфицированных M.bovis, туберкулезных поражений, не обнаружено. Это, по-видимому, мочено объяснить коротким периодом после их заражения. При последующих бактериологических исследованиях биоматериала от морских свинок изолирована исходная культура возбудителя туберкулеза бычьего вида. Таким образом, было подтверждено нами развитие у бычков туберкулезной инфекции.

формирование поствакцинального противотуберкулезного ишунитета у крупного рогатого скота инфицированного ВЛКРС

В первый 6 месяцев инфицирование телят ВЛКРС не вызывает угнетения иммунной системы. Более того, исследованиями in vitro установлено, что к моменту синтеза противовирусных антител в титрах, улавливаемых в РИД, (на 15-17-й дай) имэло масто повышение

активности ИКС, выршэвшееся в повышении уровня спонтанной пролиферации лимфоцитов крови. Нроме того,через 1,6 - 2 месяца после введения заражающей дозы ВЛКРС был зарегистрирован пролифератив-ный ответ у инфицированных ВЛКРС телят на такой митоген, как туберкулин, превышавший в 2 раза уровень ответа телят контрольной группы. Этот феномен дает нам основание к предположению о том, что животные могут давать псевдопозитивнье реакции на туберкулин. Кроме того, у быков этой группы отмечено снижение пролиферативно-го ответа лимфоцитов на митогены PWM и Con А, следовательно, ВЛКРС в определенные периоды способен снижать функциональную активность Т- и В-лимфоцитов.

Вакцинирование Б1Ш телят, предварительно инфицированных ВЛКРС, не сопровождается формированием специфического ответа против M.bOYlo, что проявляется в неспособности лимфоцитов животных этой группы к эффективному пролиферативному ответу на туберсу-лин. Наряду с этим, отмечаются признаки неспецифической активации иммунной системы, о чем свидетельствует высокий уровень спонтанной пролиферации, сохранившийся до 153-го дня. Снижение проли-феративного ответа на Con А у\. ГШ наблюдалось только через 3 недели после вакцинации.

У телят, вакцинированных БЦЖ, установлено активное формирование специфического иммунного ответа. При этом, однако уровень спонтанной пролиферации лимфоцитов был снижен на протяжении всего опыта. Несколько сильнее, по сравнению с группой животных, инфицированных по схеме ВЖИЗ+БШ, выражено подав тонне FWM стимулированного пролиферативного ответа через неделю после вык-цинации. Пролиферативный ответ лимфоцитов животных на Con А но протяжении 3 месяцев после введения Б1Ш был ниже уровня животных других групп, однако, на 153-Й .день наблюдения йыяаиено достоверное его повышение.

У телят опытных групп выялено достоверное снижение бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки кропи, причем наиболее выражено снижение изучаемых показателей у телят, ваяшпшроппннмх БЦК по фону инфекции ВДКРС. Тенденция к снижению была обнаружена и в уровне фагоцитарной активности у телят, пакцинироракнчх Б!Щ по фону инфекции ВЛКРС.

При исследовании сывороточных иммуноглобулинов мы установили, что уровень IgM в течение опыгя оставался относительно низким у телят, предварительно инфицированных ВЛКРС по сравнению с

интактными животными. В то ata время У телят, только вакцинированных БШ, изучаемый показатель достоверно превшан уровень контроля с 72-ю дня наблюдений.

При анализе динамики показателей содержания IgG] и IgGg j бычков опытных 'групп с 72-го дня набльдашй выявили тенденции к снижении.

При сравнительном исследовании динамики синтеза антител у крупного рогатого скота на вакцину Б!Щ, выявленного в FCK с комплексным антигеном УНИИЭВ установлено, чю вирус лейкоза стимулирует синтез поствакцинальных антител у крупного рогатого окота в первые 2 месяца после заражения.

У животных, вакцинированных БШ rio фону ВЛККЗ, на протяжении двух исследований наблюдалось угнетение ПЧЗТ под влиянием ВЖРС, причем при повторном исследовании обнаружены достовернш различия показателей с контролем.

Таким образом, введение .телятам в.жцины БЦМ по фону экспери-изнтальной инфекции ВЛКРС активизирует имиунмуи систему животных, вызывая более ранний (по сравнению с: ингактними в отношении ВЛКРС животными) синтез противотуберкулезных антигел, однако инрекция ВЛКРС у иммунизированных животных вы-зывае! снижение показагелей клеточного и гуморального иммунитетов.

вывода

1. Развитие экспериментальной инф-л-ции B./JHFC у телят сопровождается усилением in vitro прсш^йративното ответа лимфоцитов на ПДД туберкулин для млекощтчвдих.

2. У овец при сочетанием течении инф^ший ВЛКРС и M.bovis, ВЛКРС и М. smegmatis (в эксперимзнтальном варианте) на фоне общей активации синтеза специфических противотуберкулезных антител происходит снижение отдельных показателей гуморального иммунитета -бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, общего белка,. сывороточных иммуноглобулинов 0,, П2 при одновременном повышении некоторых показателей клеточного иммунитета - спонтанной пролиферации лимфоцитов, митогенного ответа лимфоцитов на туберкулин и уровня фагоцитоза.

Установлено отягчающее шшшше инфекции ВЛКРС на развитие экспериментального туберкулеза у оц^ц. При агом последовательность заражения ВЛКРС и M.bovla практического значения H<*¡ имэет.

3. У овец, иммунизированных вакциной В1Ш, а затем инфиниро-внных ВЛКГС, усттювтно ингибирувдез влияние вируса лейкоза на орадрований шств?киинз,пьного противотуберкулезного иммунитета.

4. У инфицированных ВЛКРО телят, а зятем иммунизированных Ш, происходит угнетение клеточного иммунитета, выражакиееся в нижении внутрикожной реакции на туберкулин, уровня фагоцитоза, ролиферативной активности лимфоцитов крови на конкянавглин А и уберкулин, при одновременном снижении показателей естественной эзистентности.

5. При экспериментальном инфицировании телят по схеме ffltFC+M.bovis развивается наиболее выраженный иммунологический гфэкт, характеризующийся снижением показателей как клеточного, ак и гуморального иммунитета.

6. В раде хозяйств Западной Сибири коровы,' реагирующие на ПИ туберкулин для илекопитакщих, в 68,2% случаев являются одно-ременно носителями вируса лейкоза крупного рогатого скота. При гом выявлена прямая зависимость между уровнем йнфинированности гад ВЛКРС и реагированием животных на туберкулин.

7. В исследованных нами благополучных по туберкулезу крупно} рогатог-о скота стадах, после их полного оздоровления от инфек-да ВЛКРС, количество животных с неспецифическими (на ППД тубер-дан для млекопитавдих) реакциями уменьшилось на порядок.

8. Результаты эпизоотологических и экспериментальных иссле-эваяий позволяют считать, что в стадах крупного рогатого скота, ^благополучных одновременно по туберкулезу и лейкозу происходит ?аимноа усиление развития патологических процессов, особенно в пучзе наложения инфекций ВЛКРС на М.bovis.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ

1. Дополнения в систему мероприятий по борьбе с туберкулезом эупного рогатого скота для Новосибирской области. Расмотрзны и Юбргны ученьи советом ИЗВСиДВ СО Россельхозякадемии и ветери-1р1юЯ секции НТО Управления сельского хозяйства 1йпосибирской 5ласти(1992).

При этом рекомендовано:

1.1. Планирование и организации оздоровительно-профилзкги-!ских мерзпрйятий по туберкулезу в неблагополучных пунктах осу-¡ствлять одновременно с оздоровительными морзприятигчи по лейко-

зу крупного рогатого скота,

1.3. В благополучном по туберкулезу крупного рогатого скот, хозяйстве, но неблагополучном до лейкозу, анализ причин неспаци фических реакций на ППД туберкулин для млекопитающих должен вюш чать учет результатов диагностических иследований животныых и лейкоз.

1.3. В хозяйства, оздоравливаемые от туберкулеза методах полной замены неблагополучных стад необходимо завозить животных нескомпрометированных в отношении ВЛКГС.

1.4. В одновременно неблагополучных да туберкулезу и лейкоз; крупного рогатого окота хозяйствах вакцинировать БЦК телят, полу ченных только от РЙД-отрицательных коров.

2/ Методические рекомендации и Оценка естественной резио тентности крупного рогатого скота и овец". Рассмотрены и одобрем ученым советом ИЭВСиДВ СО Воосельхозакадемии (1987) и 1ГГС Нэвоси бирского облагропрома (1690).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

)

1. Динамика показателей иммунного ответа у крупного рогатого скота при ассоциированном течении лейкозно-туберкулезной инфекций в экспериментальном варианте /П.Н.Смирнов, А.О.Донченко О.Н.Магер, Г.З.Шубинокий, Е.Р.Черных //Эпизоотический и инфекционный процессы (теоретические и практические аспекты)t Об, науч.тр. /РАСХН. Оиб. отд-ние. ИЭВСиДВ. - Новосибирск, 1992,-С. 24-27.

2. Матер С.Н. Резистентность телят, экспериментально инфицированных вирусом лейкоза и M.bovie в различных сочетаниях //Диагностика и профилактика заразных болезней о.-х. животных Сб.науч.тр. /РАСХН. Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ. - Новосибирск 1992. - С. 12-16.

3. Особенности проявления инфекционного (лайкозно-туберкулазно ' го процесса) в экпериментальном варианте./П.Н.Смирнов

А.С.Донченко, О.Н.Магер, Г.З.Шубинский, Е.Р.Черных //Тез докл. III Все com. конф. по эпизоотологии, Новосибирск, 24-2< сентября 1991 г./ВАОХНИЛ. РАСХН. ИЭВСиДВ. - Новосибирск, 1991. - С. 106-107.

4. Особенности формирования поствакцинального противотубвркулее-

-юго и! Труните га у крупного рогатого скота, инфицированного ЗЛКРС/0. Н. Мз1«р, В.Н.Дончеико, П. И, Смирнов, А.С.Донченко, Р.Черных //Эпизоотология, диагностика, профилактика и мерт Зорьбы с инфекционными болезнями животных: Сб. науч. гр. /РЛСЯ1. Сиб. Ътд-1ше. ИЭВСиДВ. - Новосибирск, 1992. 5.28-32.

Оценка естественной резистентности крупного рогатого скота и >вец // Метод, рекомендации /ВАОХШЛ. Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ; »ст.: П.Н.Смирнов, Н.В.Гончарова, И.М.Воронова, В.МЛекишев, !. С. Васильев, П.Н.Никоноров, И.В.Фирсов, С.Н.Магер, В.В.Разу-ювская.- Новосибирск, 19В9.- 20 с.

Подписано к печати 24.04.92 г. Формат 60x84/16 Объем 1,5 п.л. Заказ й 76. Тираж 100 экз. Рэдакционно-полиграфическое объединение СО РАСХН, ротапринт 633128, Новосибирская область, п. Краснообск