Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Биологическая характеристика потомства здоровых и больных лейкозом коров, и ассоциативное развитие лейкоза и туберкулеза у животных

На правах рукописи

МАГЕР Сергей Николаевич

БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПОТОМСТВА ЗДОРОВЫХ И БОЛЬНЫХ ЛЕЙКОЗОМ КОРОВ, И АССОЦИАТИВНОЕ РАЗВИТИЕ ЛЕЙКОЗА И ТУБЕРКУЛЕЗА У ЖИВОТНЫХ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Новосибирск - 2006

Работа выполнена в ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН и Институте ветеринарной медицины ФГОУ ВПО Новосибирский государственный аграрный университет

Научный консультант:

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор ХРАМЦОВ Виктор Викторович

доктор ветеринарных наук, старший научный сотрудник ГЛОТОВ Александр Гаврилович,

доктор ветеринарных наук, профессор ОКОЛЕЛОВ Владимир Иванович,

доктор биологических наук, старший научный сотрудник КУШНИР Анатолий Владимирович

Ведущая организация:

Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ)

часов на

Защита состоится « / » Л? 2006 г. в

заседании диссертационного совета Д 006.045.01 в ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН по адресу: 630501, Новосибирская обл., Новосибирский р-н, п. Краснообск, СО РАСХН, ИЭВСиДВ

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО РАСХН Автореферат разослан « Э0 » » С ^Рл^ 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

С.И. Логинов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В структуре инфекционной патологии лейкоз крупного рогатого скота в РФ занимает лидирующее место и составляет 57% от других нозологий (М.И. Гулюкин, 2003).

Широкое распространение лейкоза крупного рогатого скота в сельхозпредприятиях и организациях всех форм собственности, большой экономический ущерб, наносимый животноводству, социальная значимость данной нозологии, отсутствие средств терапии и специфической профилактики определяют актуальность фундаментальных и приоритетно-прикладных исследований по этой проблеме (Г.Ф. Коромыслов, 1975; Г.А.Симонян, 1975; В.П.Шишков, 1976; 1992; В.М. Лемеш, 1982; В.А. Бусол, 1983; O.K. Приедниекс, 1985; P.C. Москалик, 1985, 1998; М.И. Гулюкин, 1985; 2003; Л.Г. Бурба, А.Ф. Валихов, 1985; В.М. Нахмансон, 1986; П.Н. Смирнов, 1992;

A.Т. Левашев, 1994; А.Г. Незавитин, 1995; И.М. Донник, 1999;

B.В. Разумовская, 2004; В.А. Апалькин, М.И. Гулюкин, Н.И. Петров, 2005; В.В. Храмцов, М.А. Амироков, 2005 и др.).

В последние годы продолжается накопление новых научных данных, характеризующих особенности ассоциативного проявления таких хронически протекающих инфекций, как лейкоз и туберкулез крупного рогатого скота. Вероятность бактериально-вирусного взаимодействия на уровне ассоциатов всегда давали основание предполагать о возможных иммунологических и патогенетических особенностях сочетанного течения лейкоза и туберкулеза (В.В. Смирнова, 1983; П.Н. Смирнов, 1988; П.Н. Смирнов, A.C. Донченко, 1992, 1994; Л.М. Ерова, 1996; А.Г. Иванов, 2000; А.И. Сорокина, 2000; Г.А. Гаврилова, 2005 и др.).

Если изучение этиологических и патогенетических аспектов лейкоза крупного рогатого скота велось интенсивно и достаточно подробно представлено в научных трудах, то биологические (иммунологические, биохимические, цитогенетические) особенности и хозяйственно-полезные признаки потомства коров с разной степенью компрометации к лейкозу изучены недостаточно. Более глубокие научные познания в этой области позволят объективнее подходить к оценке биологических и хозяйственно-полезных признаков таких животных и рационально использовать их в процессе воспроизводства стада и производства продукции животноводства.

Цель исследований. Изучить иммунологические и биохимические показатели потомства, полученного от коров с разной степенью компрометации к лейкозу, и особенности ассоциативного (сочетанного) развития лейкоза и туберкулеза у животных.

Задачи исследований:

1. Установить наследственную обусловленность устойчивости и восприимчивости крупного рогатого скота к лейкозу.

2. Дать иммунологическую и биохимическую характеристику потомству, полученному от здоровых, инфицированных ВЛКРС и больных лейкозом коров-матерей.

3. Провести корреляционно-регрессионный анализ эпизоотологических и хозяйственно-полезных признаков со степенью компрометации животных к лейкозу.

4. Изучить частоту инфицированности рота-, коронавирусами и вирусом диареи - болезни слизистых у интактного, инфицированного ВЛКРС и больного лейкозом крупного рогатого скота.

5. Изучить частоту одновременного реагирования крупного рогатого скота на ППД-туберкулин для млекопитающих, ^51 антиген ВЛКРС и показатели иммунного ответа при экспериментальной ассоциативной лейкозно-туберкулезной инфекции у овец и телят.

6. Определить иммунологические и биохимические показатели при спонтанной ассоциативной лейкозно-туберкулезной инфекции у крупного рогатого скота.

7. Оценить уровень хромосомной нестабильности и патоморфологические изменения у крупного рогатого скота с разной степенью компрометации к лейкозу и туберкулезу.

Научная новизна. Проведено комплексное изучение иммунобиохимического статуса потомства, полученного от коров-матерей с разной степенью компрометации к лейкозу. Выявлено, что у животных, полученных от больных лейкозом коров снижаются 6 из 44 тестируемых показателей, в том числе синтез таких аминокислот, как аспарагин, валин, лейцин, лизин, а также бактерицидная активность, продукция сывороточных гаммаглобулинов.

Установлена тенденция повышения молочной продуктивности у первотелок, полученных от больных лейкозом коров, в сравнении с потомством здоровых. Показатели уровня прогестерона и тестостерона таких животных не превышали контрольных значений. Уровень 11-ОКС у животных, полученных от больных лейкозом коров-матерей, составил 22,4±0,6 нг/мл и превышал соответствующий показатель телочек, рожденных от интактных и инфицированных ВЛКРС коров.

Показано, что уровень спонтанной пролиферативной активности у животных от больных коров был выше, чем у потомства от инфицированных ВЛКРС и интактных коров.

Потомство больных коров-матерей характеризуется признаками пониженной жизнеспособности и относится к группе повышенного риска. В популяции таких животных имела место тенденция роста показателей заболеваемости и смертности, вызванных бактериальной и вирусной инфекциями. 4

Установлено, что у животных неблагополучных по лейкозу семейств частота регистрации болезни в 2 раза выше, чем среди животных из семейств, устойчивых к заболеванию.

У животных с разной степенью компрометации к лейкозу антителоносительство к рота-, коронавирусам и вирусу диареи — болезни слизистых установлено у 1/3 части обследованных. Случаи носительства ротавирусов и вируса диареи зарегистрированы с равной частотой, тогда как специфические антитела к коронавирусу были обнаружены только у одного животного. Частота антителоносительства у интактного и больного лейкозом крупного рогатого скота не зависела от степени компрометации к лейкозу, и вирусы этого типа не являются эпигенетическим фактором, предрасполагающим к спонтанному инфицированию животных BJIKPC.

Установлен факт одновременного реагирования коров (до 68,2% случаев) на ППД-туберкулин для млекопитающих и в РИД с gp 51 антигеном BJIKPC. Выявлена положительная корреляция между уровнем инфицированности вирусом лейкоза и реагированием животных на ППД-туберкулин для млекопитающих.

Выявлены особенности иммунобиохимических изменений в организме животных при сочетанном течении лейкоза и туберкулеза в системе in vivo и in vitro. Так, у овец при сочетанном течении инфекций на фоне общей активации синтеза специфических противотуберкулезных антител происходит снижение бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, концентрации общего белка, IgGt, IgG? при одновременном повышении спонтанной пролиферации лимфоцитов, митогенного ответа лимфоцитов на ППД-туберкулин для млекопитающих и уровня фагоцитоза. Установлено отягчающее влияние инфекции ВЛКРС на развитие экспериментального туберкулеза у овец. При этом последовательность заражения ВЛКРС и М. bovis практического значения не имеет.

У телят установлено взаимное усиление патологических процессов, особенно в случае стратификации ВЛКРС на М. bovis. Развитие экспериментальной инфекции ВЛКРС у телят сопровождается усилением in vitro пролиферативного ответа лимфоцитов на ППД-туберкулин для млекопитающих.

В случаях спонтанного сочетанного течения лейкоза и туберкулеза у животных снижаются показатели иммунобиохимического статуса организма, возрастает хромосомная нестабильность, которая проявляется увеличением количества эритроцитов с микроядрами в крови животных.

Морфологические изменения в органах и тканях у инфицированных ВЛКРС животных свидетельствовали об антигенной стимуляции, однако дифференциального диагностического значения они не имели.

Теоретическая и практическая значимость работы. В работе дана комплексная иммунологическая и биохимическая характеристика потомства, полученного от коров с разной степенью компрометации

к лейкозу. Результаты исследований могут быть использованы для биологической оценки потомства, полученного от инфицированных и больных лейкозом коров, с учетом их хозяйственно-полезных признаков и целесообразности использования таких животных для воспроизводства стада.

В процессе исследований получены новые научные знания о патогенезе ассоциативного проявления инфекционного процесса лейкоза и туберкулеза животных. Такое проявление инфекций сопровождается изменением количественных показателей иммунного и биохимического статуса животных, позволяющим говорить об ингибиции их функциональной активности.

Для физиологического мониторинга разработаны и предложены практике рекомендации по определению наиболее информативных иммунологических и биохимических показателей крови крупного рогатого скота разных возрастных групп, породной принадлежности и степени компрометации к лейкозу.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на 3-й Всесоюзной конференции по эпизоотологии (Новосибирск, 1991); республиканской научно-производственной конференции (Якутск, 1994); региональной научно-практической конференции «Проблемы АПК в условиях рыночной экономики» (Новосибирск, 1996); 14-м Международном конгрессе (Италия, 1996); 1-й научно-практической конференции факультета ветеринарной медицины НГАУ (Новосибирск, 1997); региональной научно-методической конференции (Омск, 2001); научно-практической конференции «Болезни сельскохозяйственных животных вирусной и другой этиологии» (Иркутск, 2001); научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарии» (Новосибирск, 2001); научно-практической конференции «Проблемы ветеринарной экологии в Якутии» (Якутск, 2002); Международной научно-практической конференции «Информационные технологии, информационные измерительные системы и приборы в исследовании сельскохозяйственных процессов» (Новосибирск, 2003); Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2004); научно-практической конференции «Проблемы экологии агропромышленного комплекса» (Новосибирск, 2004); Сибирском международном ветеринарном конгрессе «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2005).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 36 научных работ, в том числе одна монография, учебное пособие и 6 статей в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ («Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук», «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки»).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 250 страницах и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Работа иллюстрирована 35 таблицами и 23 рисунками. Список литературы содержит 379 работ отечественных и зарубежных авторов.

Внедрение результатов исследований. Результаты научных исследований использованы для разработки 13 методических рекомендаций, утвержденных на федеральном и региональном уровнях, по оптимизации мер профилактики и борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота; проведению биохимических и патоморфологических исследований животных; при оценке естественной резистентности; применение многофакторного математического анализа для обработки эпизоотологических данных при лейкозе; разработке комплексной системы профилактики и борьбы с лейкозом крупного рогатого скота в Новосибирской области; противоэпизоотических мероприятий при лейкозе крупного рогатого скота в фермерских и личных подсобных хозяйствах.

Результаты научных исследований вошли в Государственную программу ветеринарно-санитарных мероприятий по профилактике и ликвидации лейкоза крупного рогатого скота в РФ, представленную в Управление ветеринарии Федерального агентства по сельскому хозяйству МСХ РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Факторы наследственности и степень их влияния на заболеваемость крупного рогатого скота лейкозом.

2. Иммунологические, биохимические и хозяйственно-полезные показатели потомства, полученного от здоровых, инфицированных и больных лейкозом коров.

3. Результаты корреляционно-регрессионного анализа факторов, сопоставляемых со степенью компрометации животных к лейкозу.

4. Анализ частоты одновременного реагирования крупного рогатого скота на ППД-туберкулин для млекопитающих, gp51 антиген BJIKPC и иммунобиохимических показателей при экспериментальной и спонтанной ассоциативной лейкозно-туберкулезной инфекциях.

5. Результаты цитогенетических и патоморфологических исследований крупного рогатого скота с разной степенью компрометации к лейкозу и туберкулезу, в том числе при ассоциативном течении болезней.

Автор выражает глубокую признательность и благодарность доктору ветеринарных наук, профессору В.В. Храмцову за научное руководство и доктору биологических наук, профессору |А.Ф. Бакшееву| за научно-методические консультации и полезные советы; академику РАСХН A.C. Донченко и доктору ветеринарных наук, профессору П.Н. Смирнову — за научное руководство при подготовке кандидатской диссертации и

организационную помощь в выполнении данной работы; доктору ветеринарных наук, профессору Н.А. Шкиль, доктору ветеринарных наук, профессору С.К. Димову, за методическую помощь; сотрудникам лаборатории лейкоза и лаборатории по разработке мер борьбы с туберкулезом ИЭВСиДВ СО РАСХН, сотрудникам Института ветеринарной медицины НГАУ за научные консультации и Института клинической иммунологии СО РАМН и НПО «Вектор» - за методическую помощь и использование материально-технической базы для выполнения отдельных фрагментов работы.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнена в 1983 - 2005 гг. в ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН и Институте ветеринарной медицины ФГОУ ВПО Новосибирский государственный аграрный университет. Отдельные фрагменты исследований проведены при участии научных сотрудников НПО «Вектор», Института клинической иммунологии СО РАМН, ЦИВО СО РАСХН.

Объект исследования — животные разных возрастных групп , полученные от коров-матерей с разной степенью компрометации к лейкозу, а также одновременно реагирующие в РИД с gp 51 ВЛКРС и на 1111Д-ту беркулин для млекопитающих при ассоциативном течении лейкозно-туберкулезной инфекции в спонтанном, выполненном в условиях контролируемого производственного опыта, и экспериментальном вариантах.

Предмет исследования — пробы крови, сыворотки крови и биоматериал для проведения бактериологических и патоморфологических исследований.

Комплексные диагностические (серологические, гематологические и патоморфологические) исследования на лейкоз проводили в соответствии с « Методическими указаниями по диагностике лейкоза крупного рогатого скота» (М., 2000).

В период проведения опытов животных исследовали внутрикожной аллергической пробой ППД-туберкулином для млекопитающих, согласно наставлению по его применению (1999). Сыворотку крови экспериментальных животных исследовали в реакции связывания комплемента (РСК) с туберкулезным антигеном КТА УНИЭВ, согласно «Временному наставлению по постановке РСК для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота» (1976).

Оценку хозяйственно-полезных признаков потомства, полученного от коров-матерей с разной степенью компрометации к лейкозу, и 8

генеалогический анализ животных проводили на базе сельхозпредприятий Новосибирского, Искитимского районов Новосибирской области и Кемеровского района Кемеровской области.

Многофакторный математический анализ выполнен в лаборатории лейкозов ГНУ ИЭВСиДВ и ЦИВО СО РАСХН. При этом использовали данные диагностических исследований, полученные в районных и областных ветеринарных лабораториях и лаборатории лейкозов ИЭВСиДВ. Кроме того, были проанализированы результаты ветеринарно-санитарной экспертизы мясокомбинатов перечисленных областей.

Для выявления частоты проявления феномена одновременного реагирования крупного рогатого скота на ППД-туберкулин для млекопитающих и gp51 антиген ВЛКРС были проанализированы результаты серологических исследований в реакции иммунодиффузии с антигеном gp 51 ВЛКРС и результаты аллергических исследований на туберкулез, отраженные в документах ветеринарной отчетности, с использованием методик С.И. Джупины, В.А. Ведерникова (1981) и В.Л. Петухова, А.И. Желтикова и др. (1989), проведенные в хозяйствах Новосибирской области и Алтайского края. Диагностическим исследованиям было подвергнуто 3688 голов крупного рогатого скота. Диагноз животным опытных групп поставлен с использованием методик, регламентированных соответствующими методическими указаниями и правилами.

Для изучения эпигенетических факторов и тестирования частоты регистрации у животных с разной степенью компрометации к лейкозу рота-, коронавирусов и вируса диареи использовали коммерческие тест-системы ИФА.

Особенности проявления спонтанного варианта сочетанного лейкозно-туберкулезного процесса изучали в условиях производственного эксперимента и по данным ветеринарно-санитарной экспертизы мясокомбинатов.

Для изучения спонтанного варианта сочетанного течения инфекций были подобраны животные, которых распределили на 5 групп:

1) с сочетанным течением лейкоза и туберкулеза по результатам серологического, гематологического, аллергического и бактериологического исследований;

2) одновременно реагирующие в РИД с gp 51 антигеном ВЛКРС, ИФА и на ППД-туберкулин для млекопитающих;

3) реагирующие в РИД и ИФА;

4) реагирующие на ППД-туберкулин для млекопитающих;

5) интактные животные (контроль).

Для изучения экспериментального варианта сочетанного течения инфекций были подобраны овцы и телята, которых распределили на 5 групп:

1) инфицированные ВЛКРС, а затем М. Ьоук;

2) инфицированные М. bovis;

3) инфицированные ВЛКРС;

4) телята и ягнята, инфицированные М. bovis, а затем ВЛКРС;

5) интактные животные (контроль).

Материалом для экспериментального инфицирования овец вирусом лейкоза служила нативная кровь клинически больной лейкозом коровы, а для инфицирования телят использовали кровь (в дозе 5 мл) от овцы, экспериментально инфицированной жидкостью культуры клеток почки эмбриона овцы, хронически продуцирующей ВЛКРС (5-й пассаж). Всего в эксперименте было использовано 25 овец и 25 телят.

Для инфицирования животных туберкулезом применяли оттитрованную дозу вирулентного штамма М. bovis (14х ВНИИБТЖ), которую выращивали на среде Левенштейна-Иенсена.

Комплексные иммунологические и биохимические исследования проводили, используя классический метод, так и новые методики, в частности применяя автоматический спектроанализатор «Infrapid-61» (производства «Венгрия-Россия»). Всего исследованию подвергнуто 119 животных.

Для оценки уровня метаболической активности лимфоцитов крови проведено колориметрическое исследование на 30 интактных, больных лейкозом и туберкулезом животных.

Индекс субпопуляций лимфоцитов периферической крови 30 животных определяли, используя метод проточной цитометрии.

Для оценки пролиферативного ответа лимфоцитов in vitro применяли радиометрический метод. Пролиферативный ответ стимулировали митогеном лаконоса (PWM) (Pokeweed Mitogen, Serva, Feinbiochemica, Heidelberg, ФРГ) в конечном разведении 1:200; конканавалином A (Con А) (Concanavalin A, Serva, Feinbiochemica, Heidelberg, ФРГ) в дозе 10 м кг/мл; ППД-туберкулином в разведении 1:50. Интенсивность пролиферации оценивали через 96 часов по включению НЗ-тимидина в нуклеопротеидные фракции клеток, который вводили за 20 часов до окончания культивирования в дозе 2 мккю/лунку. Радиоактивность экспериментального материала определяли в жидкостном сцинциляционном счетчике SL-30. Результаты представляют средний счет (имп/мин) из трех идентичных культур.

Уровень сывороточных иммуноглобулинов G в сыворотке крови определяли путем электрофореза сывороток крови в геле агарозы марки В, а в отдельных случаях - в геле агара марки "Difko" (CILIA) по методике В.М. Чекишева (1977); IgM - методом радиальной иммунодиффузии по Манчини (С. Mancini et al., 1965); общий белок в сыворотке крови — по Лоури (1951); бактерицидную (НБА), лизоцимную активность (ЛА) и фагоцитарную активность (ФА) нейтрофилов периферической крови — нефелометрически, используя в качестве тест — микроба культуру Е. coli для НБА и Micrococcus lyzodeiticus для ЛА, Staphilococcus albus для ФА в 10

соответствии с методическими рекомендациями по оценке естественной резистентности сельскохозяйственных животных (П.Н.Смирнов и соавт., 2003).

Цитогенетические исследования проводили на 25 животных на базе лаборатории клинической иммунологии ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН, используя микроядерный тест эритроцитов (С.И. Логинов, 2003).

Патоморфологические исследования выполнены совместно с кандидатом ветеринарных наук В.В. Смирновой. Биоматериал взят от 52 животных из трех хозяйств и двух мясокомбинатов в дни санитарного убоя.

Для постановки биопробы использовали 30 морских свинок.

Стандартная обработка вариационных рядов включала подсчет значений средних арифметических величин (М) и ошибок средних (ш). Таблицы и иллюстрации содержат информацию в виде значения (М±ш).Сравнение средних величин осуществляли с помощью параметрических критериев для независимых выборок по Г.Ф. Лакину (1980) с использованием t-критерия Стьюдента и коэффициента корреляции, а непараметрических критериев для попарно-сопряженных выборок по Е.В. Гублеру (1978) с использованием U-критерия Вилкоксона-Манна-Уитни. Обработку цифровых данных производили с помощью персонального компьютера.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Оценка влияния факторов наследственности (генофонда семейств, генотипа коров-матерей и быков-производителей) на заболеваемость потомства лейкозом

В результате анализа выявлено 26,6% свободных от лейкоза семейств, 36,5% семейств с заболеваемостью от 10 до 30% и 28,3% - с заболеваемостью выше 40%. От больных матерей получено 142 (37,2%) больных и 159 (19,9%) здоровых дочерей. Следовательно, в среднем по 1182 парам «мать-дочь» от больных матерей получено на 17,3% больше больных дочерей, чем здоровых. Коэффициент корреляции частоты заболеваемости лейкозом матерей и дочерей равен 0,195, а коэффициент наследуемости - 0,38.

Таким образом, генетическое разнообразие по устойчивости-восприимчивости к лейкозу довольно значительно, что указывает на необходимость учета данного феномена при массовом отборе животных.

При оценке влияния генотипа 36 быков-производителей на частоту заболевания потомства лейкозом установлено что, средняя заболеваемость потомства составляла 37,8%. Всего в хозяйстве выявлено 5,5% быков, имевших до 10% больных дочерей, и 30,6% быков, имевших свыше 40% лейкозных дочерей. Варьирование устойчивости-восприимчивости к лейкозу было более значительным между потомками быков-

производителей, чем между линиями, поэтому необходимо проводить оценку генотипа быков и последующий их отбор при селекции крупного рогатого скота на устойчивость к лейкозу.

3.2. Иммунологические н биохимические показатели молодняка, полученного от интакгных, инфицированных ВЛКРС и больных лейкозом коров-матерей

При оценке иммунологических и биохимических показателей потомства от коров с разной степенью компрометации к лейкозу (табл. 1) установлено, что из 44 сопоставляемых иммунологических и биохимических показателей изменения зарегистрированы только по аспарагину, вапину, лейцину, лизину и гамма-глобулинам, содержание которых у животных, полученных от больных лейкозом коров-матерей, было ниже, чем у животных двух других сопоставляемых групп (Р<0,05).

У молодняка крупного рогатого скота, полученного от коров-матерей с разной степенью компрометации к лейкозу выявили значительную вариабельность иммунобиохимических показателей, большинство из которых стабилизировались с возрастом.

Полученные данные согласуются с данными Ю.В. Итэсь (2002) и подтверждают, что большинство изменений, " зарегистрированных у животных, обусловлены динамикой их роста, физиологического и полового созревания.

Таблица 1 — Морфологические и биохимические показатели крови первотелок, полученных от коров-матерей с разной степенью компрометации к лейкозу (М±ш)

Показатели Животные, полученные от коров-матерей

интактных (1-я группа), п=32 инфицированных ВЛКРС (2-я группа), п=30 больных лейкозом (3-я группа), п=20

1 2 3 4

ЦЕЛЬНАЯ КРОВЬ

Эритроциты, х Ш'^/л Лейкоциты, х Ю'/л Лимфоциты, х Ю'/л Гематокрнт, % НЬ, г% Липиды, мг% Холестерин, мг% Аспарагии, мг% Серии, мг% Глутамин, мг% Пролин, мг% 5,20 ± 0,18 5,40 ± 0,43 4,40 ± 0,38 37,95 ± 0,60 9,00 ± 0,28 333,73 ± 5,48 148,95 ± 1,20 0,716 ± 0,002 0,250 ± 0,011 0,927 ± 0,004 0,497 ± 0,009 5,35 ± 0,20 4,62 ± 0,46 4,03 ± 0,44 40,79 ± 1,26 9,09 ± 0,25 310,0 ± 16,2 145,9 ± 2,6 0,728 + 0,003 0,293 ± 0,030 0,946 ± 0,010 0,520 ± 0,019 5,47 ± 0,23 5,23 ± 0,66 4,20 ± 0,62 39,66 ± 1,46 9,03 ± 0,31 338.8 ± 4,2 148.9 ± 1,9 0,710 + 0,001* 0,234 ± 0,013 0,923 ± 0,004 0,492 ± 0,008

1 2 3 4

Глицин, мг% 0,225 ± 0,001 0,228 + 0,002 0,224 + 0,001

Алании, мг% 0,365 ± 0,002 0,373 ± 0,005 0,363 ± 0,002

Валин, мг% 0,512 ± 0,004 0,526 + 0,004 0,504 ± 0,002*

Метионин, мг% 0,039 ± 0,001 0,044 ± 0,003 0,038 ± 0,001

Изолейцин, мг% 0,204 ± 0,002 0,211 ± 0,004 0,202 ± 0,002

Лейцин, мг% 0,689 ± 0,004 0,704 ± 0,006 0,682 + 0,002*

Тирозин, мг% 0,203 ± 0,008 0,223 ± 0,016 0,192 ± 0,011

Фенилаланин, мг% 0,311 ± 0,003 0,325 ± 0,010 0,307 ± 0,004

Гистидин, мг% 0,411 + 0,002 0,422 ± 0,007 0,409 ± 0,001

Лизин, мг% 0,386 ± 0,001 0,398 ± 0,008 0,370 ± 0,002*

Аргинин, мг% 0,185 ± 0,003 0,197 + 0,008 0,179 ± 0,003

Треонин, мг% 0,238 + 0,002 0,236 ± 0,002 0,235 ± 0,002

Витамин А, мкг/кг 27,00 ± 0,24 27,81 + 0,30 27,40 ± 0,34

Витамин Е, мг/кг 0,415 ± 0,035 0,524 ± 0,082 0,355 ± 0,028

Калий, мг/кг 0,541 + 0,012 0,540 ± 0,030 0,542 ± 0,015

Натрий, г/л 2,071 ± 0,019 2,149 ± 0,044 2,054 ± 0,026

Магний, г/л 0,024 ± 0,002 0,031 ± 0,003 0,024 ± 0,002

Железо, мг/кг 194,2 ± 2,7 204,4 ± 7,3 193,3 + 4,0

Марганец, мг/кг 0,131 ± 0,006 0,161 ± 0,021 0,125 ± 0,012

Медь, мг/кг 0,860 ± 0,039 0,847 ± 0,090 0,854 ± 0,048

Цинк, мг/кг 2,112 ± 0,140 2,718 ± 0,345 1,931 + 0,181

СЫВОРОТКА КРОВИ

Общий белок, г/л 74,7 + 0,8 76,8 ± 1,5 78,1 ± 1,8

Каротин, мг% 0,772 + 0,016 0,740 ± 0,012 0,752 ± 0,033

Кальций, мг% 10,83 ± 0,06 10,70 ± 0,05 10,76 ± 0,09

Фосфор, мг% 6,26 ± 0,06 6,24 ± 0,08 6,25 ± 0,12

Щелочной резерв, % 58,11 ± 0,58 57,85 ± 0,81 58,58 ± 0,41

ЛАСК, % 7,9 ± 0,5 8,0 ± 0,4 8,4 ± 0,5

БАСК, % 69,0 ± 2,3 69,4 ± 2,0 65,3 ± 1,9

Альбумины, % 36,9 + 0,8 35,2 ± 1,0 36,1 ± 1,1

а-глобулины, % 16,0 ± 0,4 15,3 ± 0,6 13,4 ± 0,4

Р-глобулины, % 23,4 ± 0,8 21,5 + 0,7 21,0 ± 1,1

у-глобулины, % 24,9 ± 0,3 25,0 ± 0,2 22,0 ± 0,3*

* Разница с показателями животных 1-й, 2-й групп достоверна (Р<0,05).

3.3. Иммунологические и биохимические показатели крупного рогатого скота, полученного от инфицированных и больных лейкозом коров-матерей, в сопоставлении с хозяйственно-полезными признаками животных

При анализе показателей прироста живой массы телок опытных и контрольных групп установлено, что в опытной группе живая масса

животных при рождении и в возрасте 3 мес была больше у телок, полученных от инфицированных ВЛКРС коров-матерей.

Прирост живой массы молодняка всех возрастных групп, полученного от больных лейкозом коров-матерей, был ниже, чем у контрольных животных и полученных от инфицированных ВЛКРС коров.

При анализе воспроизводительной способности телок опытной и контрольной групп установили, что наименьший индекс (1,29) и возраст первого осеменения (18,5 мес) при живой массе 428,7 кг был у телок, полученных от больных лейкозом коров.

Установлена тенденция к повышению молочной продуктивности первотелок, полученных от инфицированных вирусом лейкоза и больных лейкозом коров, в сравнении с контролем. Так, средняя продуктивность первотелок опытной группы составила 2850,40±98,27 кг молока, контрольной - 2700,40±86,91 кг (разница недостоверна).

По проценту жирности и выходу молочного жира разница у животных сопоставляемых групп также недостоверна. Некоторые исследователи-генетики объясняют этот феномен тем, что высокопродуктивный скот заболевает лейкозом чаще, и генетически детерминированный и селекционно-закрепленный потенциал передается потомству. Однако развитие хронического лимфолейкоза крупного рогатого скота сопровождается понижением молочной продуктивности и уровень ее зависит от стадии болезни.

Оценка прогестерона, тестостерона и 11-оксикортикостероидов в тест-системах ИФА опытных групп животных (рис. 1) показала, что уровень прогестерона у животных, рожденных от инфицированных и больных лейкозом коров-матерей, составил 0,92±0,02 и 0,84+0,01 нг/мл соответственно и не превышал контрольных значений.

Уровень тестостерона также находился в пределах контрольных значений, 3,57±0,70 и 3,64±0,80 нг/мл в 1-й и 2-й группах соответственно.

У животных, полученных от больных лейкозом коров, уровень 11-ОКС составил 22,4±0,6 нг/мл и достоверно превышал аналогичный показатель у телочек, полученных от интактных и инфицированных ВЛКРС коров. При сопоставлении уровня 11-ОКС животных от инфицированных коров разница с контролем недостоверна.

Радиометрическое исследование потомства, полученного от интактных, инфицированных ВЛКРС и больных лейкозом коров (рис. 2) показало, что уровень синтеза ДНК мононуклеаров был выше контрольных значений у потомства от инфицированных и больных лейкозом коров-матерей (разница достоверна). Отдельные исследователи высказывают предположение о наследственном характере уровня спонтанной пролиферативной активности лимфоцитов.

Опыт (п=6) I Контроль (п=6) Опыт (п=б) I Кон-фоль (п"6)

Телки и бычки от инфицированных коров Телки и бычки от больных коров

[□Прогестерон И Тестостерон В 11-ОКС }

•Разница с контролем достоверна (Р<0,01)

Рисунок 1 — Уровень прогестерона, тестостерона и 11-ОКС в сыворотке крови инфицированных и больных лейкозом животных

В процессе наблюдения и согласно лабораторных исследований, у молодняка, полученного от коров с разной степенью компрометации к лейкозу, регистрировали респираторные и желудочно-кишечные болезни, обусловленные диплококковой, стафилококковой и пневмококковой инфекциями. У телят, рожденных от больных лейкозом коров-матерей, показатели заболеваемости составили 66,6%, смертности - 33,3,% и были выше, чем в группе молодняка, полученного от интактных коров-матерей.

Наиболее жизнеспособный молодняк получен от интактных коров-матерей, хотя заболеваемость его также была высокой — 33,3%.

При сопоставлении показателей заболеваемости, смертности и летальности потомства больных лейкозом коров с аналогичными показателями инфицированных и интактных животных наиболее существенные различия установлены между группами от больных и интактных, в то время как между животными, полученными от инфицированных ВЛКРС и интактных коров, разница в показателях менее существенна.

У животных, полученных от больных лейкозом коров, показатель 11-ОКС достигал 22,4±0,6 нг/мл и был достоверно выше, чем у телочек, рожденных от интактных и инфицированных ВЛКРС коров.

Уровень спонтанной пролиферативной активности мононуклеаров периферической крови потомства от больных коров (2010±431 имп/мин) достоверно превышал (Р<0,05) показатели животных, полученных от инфицированных ВЛКРС (624±77,3 имп/мин) и интактных (700,1±90,1 имп/мин).

Е9 Молоднис от больных лснкоюм корон (п-5 ) ■ Молоднис от инфицированных ВЛКРС коров(п-5) □ Молодняк от интактиыч коров(п-5) __

•Разница с контролем достоверна (Р <0,05)

Рисунок 2 — Результаты радиометрического исследования телят, полученных от коров с разной степенью компрометации к лейкозу

Заболеваемость и смертность потомства в период от рождения до 2 мес., вызванная условно-патогенной микрофлорой, зависит от степени компрометации к лейкозу коров-матерей. Потомство гематологически больных коров-матерей характеризуется признаками пониженной жизнеспособности и относится к группе повышенного риска.

3.4. Результаты картографирования и программа корреляционно-регрессионного анализа эпизоотологических и технологических факторов риска возникновения и распространения инфекции ВЛКРС

С целью поиска качественных и количественных признаков, представляющих группу риска возникновения и распространения лейкоза, математически обработаны показатели (факторы), отражающие экономический, эпизоотический и технологический потенциал сельхозпредприятий.

К числу показателей, определяющих напряженность эпизоотической ситуации, степень риска возникновения инфекции ВЛКРС и лейкоза, были отнесены:

1. Данные ветеринарно-санитарной экспертизы мясокомбинатов (подтверждают неблагополучие пунктов и тяжесть течения инфекционного процесса).

2. Показатель реагирования животных в РИД с гликопротеидным ^р51) антигеном ВЛКРС (высокий уровень инфицированности коррелирует, как правило, с высоким уровнем заболеваемости лейкозом).

3. Показатель реагирования животных в РИД с полипептидным (р24) антигеном (результаты РИД с р24 в 75% случаев совпадают при постановке диагноза с данными гематологического исследования, подтверждающего лейкоз).

4. Количество больных лейкозом животных на передержке (критерий, предопределяющий высокий показатель внутриутробного инфицирования телят).

5. Количество быков-производителей (у животных этой половозрастной группы подтвержден феномен продолжительного латентного вирусоносительства, не позволяющий своевременно выявлять инфекцию ВЛКРС в РИД).

6. Возраст маточного поголовья. Установлена эмпирически и подтверждена математически связь возраста коров с частотой развития у них гематологической стадии болезни. Чаще лейкемическая, злокачественная форма проявления болезни с высокими показателями лимфоцитоза регистрируется у коров в возрасте 5-7 лет.

7. Технологический фактор. Отсутствие сменных родильных отделений и дворов для изолированного (отдельного) содержания интактного молодняка крупного рогатого скота. Совместные отелы и содержание инфицированных и интактных животных являются существенным фактором распространения вируса лейкоза.

Из 68 сопоставляемых качественных показателей корреляция разной величины установлена по 37 признакам, причем максимальное значение корреляции - только по одному признаку, а именно при сопоставлении уровня инфицированности с количеством инфицированных ВЛКРС коров в хозяйстве (г=0,558); корреляция (от г=0,297 до г=0,220) установлена по 6 признакам, таким, как количество гематологически больных лейкозом коров, оставшихся в хозяйстве на передержке (г=0,297), количество неблагополучных по лейкозу ферм (г=0,271) и др.

3.5. Кореляционно-регрессионный анализ хозяйственно-полезных признаков животных, полученных от коров-матерей с разной степенью компрометации к лейкозу

Результаты исследований показали, что связь иммунобиохимических показателей и хозяйственно-полезных признаков у животных в процессе онтогенеза выражена слабо и разнонаправленно. Уровень общего белка достоверно и отрицательно связан с живой массой телок в возрасте 18 мес (г=0,329 при Р<0,05). ЛАСК имела значительную и положительную связь с удоем коров за первую лактацию и выходом молочного жира (г=0,406 и 0,350 соответственно при Р<0,01 - 0,05).

Таким образом, полученные результаты позволяют дать иммунобиохимическую и хозяйственно-биологическую характеристику потомству, полученному от инфицированных и больных лейкозом коров-матерей, и определить степень целесообразности использования этих животных для воспроизводства стада.

3.6. Изучение частоты инфицироваиности рота-, коронавирусами и вирусом диареи — болезни слизистых у интактного, инфицированного ВЛКРС и больного лейкозом крупного рогатого скота

Информация о сопутствующих инфекциях, модифицирующих иммунный ответ и повышающих восприимчивость животных к инфекции вируса лейкоза, необходима для оценки эффективности методов диагностики и при разработке оздоровительных мероприятий.

В главе представлены данные по выявлению ротавирусов, коронавирусов и вируса диареи - болезни слизистых среди интактных, инфицированных ВЛКРС и больных лейкозом животных.

У гематологически больных лейкозом животных в 20 % случаев была зарегистрирована ротавирусная инфекция и у 10% животных вирус диареи — болезни слизистых.

Среди носителей ВЛКРС в 10 % случаев регистрировали антитела к коронавирусам и в /5% — к вирусу диареи.

Среди интактных к ВЛКРС животных (контроль) в 25% случаев регистрировали антитела к : роузвирусной инфекции и в 8,3% — к вирусу диареи.

В совокупности у животных трех групп частота постановки диагноза на коронавирусную инфекцию составила 3,1%, ротавирусную - 15,6 и инфекцию вируса диареи - 12,5%. Различий между частотой встречаемости носителей ротавирусов и вирусов диареи не выявлено (Р>0,05).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что частота антителоносительства ( к рота-, коронавирусам и вирусу диареи — болезни слизистых) у интактного и больного лейкозом крупного рогатого скота не зависела от степени компрометации к лейкозу, и, следовательно, вирусы этого типа не являются эпигенетическим фактором, предрасполагающим к спонтанному инфицированию животных ВЛКРС.

3.7. Особенности иммунного ответа у овец и телят при

экспериментальном инфицировании их BJIKPC и М. bovis в различной последовательности

3.7.1. Показатели иммунного ответа у овец, экспериментально инфицированных BJIKPC и М. bovis

Исследования бактерицидной, лизоцимной активности сыворотки крови и уровня фагоцитоза у овец в динамике экспериментальной лейкозной и туберкулезной инфекций выявили достоверное (Р<0,01) снижение на 75-й день наблюдения бактерицидной активности сыворотки крови у овец опытных групп в сравнении с контрольными животными, причем более выраженное снижение этого показателя (Р<0,05) было зарегистрировано у овец, инфицированных М. bovis по фону лейкозной инфекции на 30 и 45-й дни наблюдения, а у овец, инфицированных в обратной последовательности, - на 105-й и 120-й дни опыта (Р<0,001). Уровень лизоцимной активности сывороток крови овец, инфицированных BJIKPC в ассоциации с М. bovis, был достоверно выше (Р<0,05) показателей интактных животных также на 75-й день наблюдения, однако у овец, инфицированных М. bovis по фону BJIKPC, на 120-й день было установлено достоверное снижение изучаемого показателя (Р<0,05).

У овец опытных групп в начальный период после введения заражающего материала отмечалось снижение фагоцитоза, но в последующие сроки фагоцитарная активность крови повышалась. Достоверное снижение (Р<0,01) фагоцитарной активности нейтрофилов зарегистрировано в группе овец, зараженных по схеме BJ1KPC+M bovis, на 30-й день, а в группе овец, инфицированных в последовательности М. bovis+BJIKPC, — на 120-й день наблюдения под влиянием вируса лейкоза и возбудителя туберкулеза.

В то же время установлен более низкий уровень фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа у овец при биинфекции по сравнению с животными с моноинфекцией. Таким образом, у животных, экспериментально инфицированных BJIKPC в сочетании с М. bovis, отмечалась тенденция к снижению клеточного иммунитета.

После введения экспериментальным животным М. bovis и BJIKPC содержание сывороточного белка (рис. 3) снижалось, в то время как у овец, инфицированных только М. bovis, на 90-й день наблюдения обнаружено достоверное повышение (Р<0,05) относительно интактных животных.

Одновременно установили, что экспериментальное инфицирование вирусом лейкоза овец достоверно повышало синтез сывороточных IgG| и IgG2 (Р<0,05). После введения овцам возбудителя туберкулеза наблюдалась тенденция к их снижению на 30 и 75-й дни наблюдения. Однако на 90-й день у овец, инфицированных М. bovis, отмечено достоверное повышение синтеза сывороточных IgGi и IgGi (Р<0,05), а у

1.2 1

■g 0.8 Ü

Э 0,4 0.2 0

1с

»

____ j

у* » V

5 15 30 45 Пер* 60 од набл 75 юдения 90 дни 105 120 190

30 45 | 60 | 75 90 105 120 190 Период наблюдения, дни

- -• — ВЛКРС+M.bovis -•*-- M.bovis+ВЛКРС

■ ' 'М.bovis

—X—Интактные (контроль)

Примечание: + - момент введения инфицирующего материала.

Рисунок 3 — Динамика содержания IgGj, IgGi и общего белка в сыворотке крови овец, экспериментально инфицированных ВЛКРС и М. bovis в различных сочетаниях

овец инфицированных по схеме М. 6оуи+ВЛКРС, - только 1^2 (Р<0,05). Такое повышение, по-видимому, можно объяснить включением регуляторных механизмов компенсации клеточного иммунодефицита (иммунологического дефекта).

Результаты исследования функциональных свойств лимфоцитов периферической крови овец на 120 и 190-й дни наблюдения представлены

на рис. 4 и свидетельствуют об угнетении процессов активации лимфоцитов и развитии неспецифической иммунодепрессивной реакции со стороны иммунной системы у овец опытных групп на 120-й день наблюдения, что проявляется снижением уровня спонтанной пролиферации.

В культуре in vitro регистрировали пролиферативный ответ лимфоцитов на туберкулин. Однако в случае присоединения вируса лейкоза к М. bovis и наоборот отмечали достоверное снижение специфического ответа.

S ВЛКРС+M.bovis П M.bovis В M.bovis+ВЛКРС В BJ1KPC □ Иктактные (контроль)

"Достоверность различий с группой интактных животных (Рц<0,05) (U — критерий Вилкоксона-Манна-Уитни).

Рисунок 4 — Уровень пролиферативного ответа лимфоцитов периферической крови овец, экспериментально инфицированных BJ1KPC и М. bovis (в культурах, стимулированных Соп А и PWM)

Инфицирование М. bovis овец, предварительно инокулированных ВЛКРС, сопровождалось активацией как специфического, так и неспецифического иммунного ответа. Это выражалось в усилении пролиферативного ответа на ППД-туберкулин для млекопитающих и PWM и снижении спонтанной пролиферации.

Анализ интенсивности пролиферации лимфоцитов, проведенный через 70 дней после первого измерения (190-й день наблюдения), показал, что инфицирование М. bovis овец не сопровождалось формированием специфического ответа против М. bovis.

У овец, инфицированных ВЛКРС по фону М. bovis обнаружено достоверное увеличение пролиферативного ответа лимфоцитов на ППД-туберкулин для млекопитающих, Con А и PWM в сравнении с интактными и инфицированными М. bovis животными, при этом резко снижался уровень спонтанной пролиферации.

При сочетанием течении лейкозной и туберкулезной инфекций в одном случае (через 70 дней после инфицирования М. bovis) происходило снижение специфического иммунного ответа на туберкулин, в другом (140 дней после инфицирования М. bovis) - усиление.

Таким образом, у овец при сочетанном течении инфекции ВЛКРС и туберкулеза на фоне общей активации синтеза специфических антител происходит снижение функциональной активности гуморального звена ИКС. Кроме того, выявлено прямое влияние ВЛКРС на проявление туберкулезного процесса у овец. Последовательность введения ВЛКРС и М. bovis практического значения не имела.

3.7.2. Показатели иммунного ответа у телят при экспериментальном инфицировании ВЛКРС и М. bovis в рахчичной последовательности

Исследованиями крови телят in vitro (рис. 5, 6), при заражении их только М. bovis, выявлены признаки иммунодепрессии уже через 30 дней после инфицирования. Она характеризовалась снижением уровня как спонтанной, так и митоген-стимулированной пролиферации лимфоцитов.

Так, при заражении телят M.bovis, предварительно инфицированных ВЛКРС, наблюдалось угнетение специфического ответа лимфоцитов на ППД-туберкулин. Однако на 153-й день отмечали его резкое стимулирование. Одновременно регистрировали признаки иммунодепрессивного состояния, подобного тому, которое наблюдали у животных, инфицированных М. bovis. При этом развитие иммунодепрессии сопровождалось следующими особенностями: снижение пролиферативного ответа на Con А и митоген лаконоса проявлялось раньше (уже через 2 недели после инфицирования М. bovis) и сохранялось до 130-го дня с момента заражения М. bovis. Подавление спонтанной пролиферации регистрировали только через 3 недели после заражения М. bovis и не выявляли в последующие сроки. 22

При инфицировании телят BJIKPC по фону М. bovis отмечали повышение уровня спонтанной пролиферации лимфоцитов, свидетельствующее об активации иммунной системы. Тем не менее специфический иммунный ответ на ППД-туберкулин для млекопитающих был угнетён. Установлено, что при ассоциированном течении инфекции ВЛКРС и туберкулеза, особенно когда лейкозная инфекция наслаивалась на туберкулезную, у телят развивался наиболее выраженный иммунологический дефект, характеризующийся достоверным снижением уровня IgG|, IgGi, фагоцитоза и бактерицидных свойств сыворотки крови.

У телят опытных групп по сравнению с контрольными животными, на 42 и 72-й дни наблюдения было выявлено достоверное снижение бактерицидной активности сыворотки крови, причем более выраженное у бычков, экспериментально инфицированных ВЛКРС по фону инфекции М. bovis. Подобную Динамику, дефекта, выражающуюся в стойком снижении показателей во второй половине периода наблюдений, выявили и в уровне фагоцитарной активности.

При исследовании сывороточных иммуноглобулинов установлено, что уровень IgM был достоверно выше у бычков, инфицированных ВЛКРС по фону М. bovis, по сравнению с интактными животными на протяжении всего периода наблюдений. Тенденция к снижению уровня IgM отмечена и у телят других опытных групп.

Анализ динамики синтеза сывороточных IgGi, IgGi у бычков опытных групп с 72-го дня наблюдений выявил тенденцию к их снижению, причем более выраженную у телят, инфицированных ВЛКРС по фону инфекции М. bovis.

При исследовании сывороток крови в РИД с gp51 антигеном ВЛКРС специфические антитела выявлены у всех бычков, экспериментально инфицированных ВЛКРС. Противотуберкулезные' антитела в РСК с комплексным туберкулезным антигеном (КТА) УНИИЭВ были выявлены на 14-28-е сутки у всех животных, инфицированных М. bovis.

Анализ динамики синтеза комплементсвязывающих антител у телят опытных и контрольной групп показал, что на протяжении почти всего периода наблюдений ВЛКРС не оказывал заметного влияния на выработку антител. Однако на 190-й день наблюдения (170 дней после заражения М. bovis) в опытной группе бычков, инфицированных по схеме ВЛКРС+М bovis, было обнаружено достоверное увеличение титра комплементсвязывающих антител в сыворотке крови. В то же время у бычков, инфицированных в обратной последовательности, титр антител был ниже, чем у животных контрольной группы, и составил 1,30+0,68 lg.

--» — ВЛКРС+М .bovis • - * " -M.bovis

-л-м .Ьо vi s+B Л KP С

Примечание: + - момент введения инфицирующего материала.

Рисунок 5 — Динамика пролиферативного ответа лимфоцитов телят, инфицированных BJIKPC и М. bovis (при спонтанной пролиферации и в культурах, стимулированных ППД-туберкулином для млекопитающих) .

Через 170 дней после экспериментального инфицирования животных-носителей BJIKPC культурой М. bovis отмечено достоверное увеличение титра противотуберкулезных антител.

Таким образом, результаты исследований свидетельствуют о том, что у крупного рогатого скота при ассоциированном течении инфекции BJIKPC и туберкулеза, особенно при наслоении первой инфекции на вторую, развивается наиболее выраженный иммунологический дефект, характеризующийся снижением показателей как клеточного, так и гуморального звеньев иммунокомпетентной системы.

250 200

1

-g 150

ü 100 S

50 0

4 11 А

\\ \ у ; >

rv-' ч Ч «ч ч\ *

ч Ч . —1

14 г 28 j 42 1ериод наблюдения, дн 153 и 190

180 160 140 g 120 I 100 * 80 I 60

40 20 0

I

1 1 * Р ■VM

ч\

ч. ,// ч » Ч'

' Ч , i \

1 ; 1 S > ■

ч ■ 1

1 14 Г 28 ер иод набл 42 юдения, дн 153 и 190

— -♦ — ВЛКРС+M.bovis

— • M.bovis+BJIKPC

• M.bovis

"Интактные (контроль)

Примечание:

: it —

момент введения инфицирующего материала.

Рисунок 6 — Динамика пролиферативного ответа лимфоцитов у телят, инфицированных ВЛКРС и М. bovis в культурах, стимулированных Соп А и PWM

3.8. Особенности ассоциативного проявления вирусно-бактериальных инфекций на примере лейкоза и туберкулеза крупного рогатого скота

3.8*1. Частота одновременного реагирования крупного рогатого скота на ППД-туберкулин для млекопитающих и др51 антиген ВЛКРС

Установлено, что в 68,2% случаев коровы, реагирующие на туберкулин, являлись в то же время носителями вируса лейкоза крупного рогатого скота. Однако среди животных, не реагирующих на туберкулин, также имелись носители ВЛКРС (47,1%).

Для выявления закономерностей взаимного влияния инфекций лейкоза и туберкулеза все рассматриваемые хозяйства по уровню инфицированности ВЛКРС были сгруппированы в 6 классов (табл. 2).

Промежуток распределения хозяйств по уровню инфицированности ВЛКРС между классами составил 15%,

Наибольшее число хозяйств находится в середине вариационного ряда, в 3-м и 4-м классах, причем заметно смещение хозяйств как в сторону больших, так и меньших значений классов.

Отмечено, что прирост уровня инфицированности маточного стада ВЛКРС влечет за собой и увеличение количества вирусоносителей среди животных как реагирующих (г=0,983), так и не реагирующих (1=0,947) на туберкулин. При этом процент вирусоносителей из числа реагирующих на туберкулин, как правило, был выше, чем у негативных в отношении туберкулина животных.

Среди хозяйств, относящихся к 1-му и 2-му классам, выявлены различия в уровне инфицированности в зависимости от реагирования животных на туберкулин. Так, в хозяйствах с уровнем инфицированности до 15% (1-й классовый промежуток) выявлено 51,8% положительных в РИД животных среди реагирующих на туберкулин, а среди негативных в отношении туберкулина — 5,5%. Выявленная закономерность свидетельствует о высокой степени взаимосвязи между уровнем инфицированности стад вирусом лейкоза и реагированием коров на туберкулин, причем она протекает по типу положительной корреляции с высокой степенью достоверности изучаемого коэффициента (Р<0,001).

Таблица 2 — Распределение хозяйств по уровню инфицированности животных вирусом лейкоза крупного рогатого скота

Класс Уровень инфицированности ВЛКРС, % Количес тво хозяйств Реагировало на туберкулин Не реагировало на туберкулин

всего животных в том числе РИД(+),% всего животных в том числе РИД(+), %

1 0,2 - 14,9 3 620 51,8 16657 5,5

2 15-29,9 1 62 58,1 6313 14,2

3 30-44,9 8 1082 65,4 43027 38,5

4 45 - 59,9 8 1691 74,5 55759 49,2

5 60-74,9 4 165 79,4 18744 70,9

6 75 - 89,9 4 68 85,3 16485 83,2

3.8.2. Результаты колориметрического, иммунологического и биохимического исследований крупного рогатого скота при спонтанном варианте сочетанного течения лейкоза и туберкулеза

Уровень энзимной активности мононуклеаров крови достоверно ниже у крупного рогатого скота в гематологической стадии болезни и составлял - 0,375±0,02 условных единиц оптической плотности (УЕОП), при незначительной вариабельности показателей (от 0,350±0,03 до 0,467±0,03 УЕОП). Эта тенденция сохранялась на протяжении всего срока наблюдений (рис.7).

В случае ассоциативного проявления инфекций у крупного рогатого скота также обнаружено снижение показателей энзимной активности лимфоцитов (рис.8).

Однако уровень метаболической активности клеток крови животных, одновременно больных лейкозом и туберкулезом, был значительно ниже, чем при лейкозе, что также указывает на усиление ингибиции метаболического процесса при ассоциативном течении инфекций.

Цитометрическое определение индекса Т-хелперов и Т-супрессоров (рис. 9) выявило рост концентрации тестируемых клеток, однако соотношение их не изменилось. У животных, больных лейкозом, туберкулезом, и при сочетанном течении инфекций установлено изменение индекса клеток, обусловленное достоверным снижением количества Т-хелперов и увеличением - Т-супрессоров, в сопоставлении с контролем.

Июнь Июль Август Сентябрь Октябрь Ноябрь Декабрь Январь

□ Больные лейкозом ИИнфнцированные ВЛКРС □ Интактные. контроль )

Рисунок 7 — Результаты определения энзимной активности лимфоцитов периферической крови животных опытных и контрольной групп

Июнь Июль Август Сентябрь Октябрь Ноябрь Декабрь Январь

В Больные лейкозом и туберкулезом ■ Реагирующие в РИД и на 1II 1Д-туберкулнн □ Интактныс, контроль_

Рисунок 8 - Результаты определения энзимной активности лимфоцитов периферической крови животных опытных и контрольной групп

51 в 20

§ % 10

Больные лейкозом н туберкулезом

□ Т-хелперы ■Т-супрессоры

* Разница с контролем достоверна (Р<0,05).

Рисунок 9 — Индекс Т-хелперов и Т-супрессоров периферической крови исследуемых животных

Для изучения особенностей функционирования иммунобиохимической системы организма у животных с разной степенью компрометации к лейкозу и при сочетанием течении лейкоза и туберкулеза комплексному иммунологическому и биохимическому исследованию был подвергнут крупный рогатый скот 5 групп: 1 — больные лейкозом и туберкулезом

28

животные с ассоциативным проявлением нозологии; 2 - животные, одновременно реагирующие в РИД и ИФА на антиген ВЛКРС и ППД-туберкулин для млекопитающих; 3 - животные, реагирующие в РИД и ИФА на антиген ВЛКРС; 4 - реагирующие на ППД-туберкулин для млекопитающих; 5 — интактные животные (контроль).

Заключительный диагноз был поставлен по результатам серологического, аллергического, гематологического, патоморфологического и бактериологического исследований. Тестирование проводили по 35 иммунологическим и биохимическим показателям сыворотки крови крупного рогатого скота (табл. 3).

Наиболее существенные изменения иммунобиохимических параметров установлены в 1-й (больные лейкозом и туберкулезом), 2-й (реагирующие в РИД, ИФА и на ППД-туберкулин) и 4-й (реагирующие на 111 ]Д-туберкулин) группах животных в сопоставлении с контролем.

У крупного рогатого скота 1-й опытной группы изменения выявлены по 14 показателям. Установлено повышение концентрации аспарагина, аланина, валина, лейцина, треонина, изолейцина, гистидина и одновременно ингибиция бета-глобулинов и липидов по сравнению с контрольной группой. В сравнении с показателями животных 2-й группы установлено снижение синтеза бета-глобулинов, концентрации кальция, марганца, меди и глутамина.

Во 2-й группе животных выявлено повышение по 14 и снижение по двум показателям.

У животных 4-й группы изменения зарегистрированы также по 14 показателям, из них 6 - в сторону понижения.

Для этих групп животных характерна тенденция к увеличению содержания аминокислот. У реагирующих на ППД туберкулин выявили увеличение продукции альбуминов и одновременно снижение альфа-глобулинов. Между животными 2-й и 3-й, 2-й и 4-й групп выявлена незначительная разница в исследованных показателях, а между животными 1-й и 3-й, 1-й и 4-й групп разница не выявлена.

3.8.3. Показатели спонтанного мутагенеза при сочетанием течении лейкоза и туберкулеза крупного рогатого скота

С целью изучения уровня соматической хромосомной нестабильности были проведены исследования животных с разной степенью компрометации к лейкозу и туберкулезу, в том числе в случае сочетанного течения болезней. Установлены максимальные значения цитогенетической нестабильности у коров при ассоциативном течении лейкоза и туберкулеза — 11,2 эритроцита с микроядрами на 10 тыс. клеток. Эти показатели были достоверно выше, чем у животных других сопоставляемых групп.

Таблица 3 - Результаты сопоставления иммунобиохимических показателей животных с разной степенью компрометации к лейкозу и туберкулезу__

Показатель Группа Достоверность разницы между группами

I 2 3 4 Контроль

М т М т м т М М М ш 1-2 1-4 1-5 2-3 2-4 2-5 3-5 4-5

Кальций, ммоль/л 2,93 0,01 3,11 0,02 2,99 0,05 2,98 0,05 3,00 0,03 +++ +

Фосфор, ммоль/л 2,19 0,09 2,36 0,04 2,15 0,06 2,24 0,10 2,21 0,07 +

Альбумины, % 46,60 0,44 46,10 1,08 46,54 0,59 47,68 1,13 42,77 0,93 + + +

Альфа-глобулины, % 14,15 0,44 13,68 0,34 14,07 0,39 13,19 0,40 15,18 0,64 +

Бета-глобулины, % 25,48 0,18 26,92 0,31 25,59 0,59 26,69 0,47 26,96 0,39 + +

Гамма-глобулины, % 13,76 0,42 13,29 0,65 13,80 0,18 12,44 0,91 15,09 0,73

АЛаТ, ед/л 34,76 0,24 34,90 226 36,15 2,27 30,39 3,42 43,75 4,16 +

АСаТ, ед/л 27,29 4,43 27,50 1,46 27,99 1,16 26,77 1,71 29,97 1,96

Мочевина, ммоль/л 4,26 0,30 3,71 0,24 4,54 0,46 4,51 0,28 4,55 0,39

Общий белок, г/л 60,62 6,41 54,98 5,00 62,06 6,07 54,02 6,95 72,24 5,81

Липиды, мг% 256,4 4,4 272,0 9,0 264,5 4,0 263,1 5,0 313,7 3,8 +++ + +++ +++

Холестерин, мг% 174,0 2,4 200,0 8,9 182,2 6,9 176,2 4,6 172,4 2,2 +

Калий, г/кг 1,254 0,065 1,599 0,103 1,282 0,091 1,301 0,070 1,334 0,040 +

Магний, г/кг 0,036 0,0004 0,037 0,000 0,036 0,001 0,037 0,0003 0,035 0,0003 + ++ ++

Марганец, мг/кг 0,111 0,003 0,084 0,005 0,106 0,007 0,105 0,001 0,115 0,002 ++ + + ++ ++

Медь, мг/кг 1,034 0,035 1,195 0,046 1,034 0,053 1,052 0,039 1,003 0,017 + +

Цинк, мг/кг 2,199 0,106 2,080 0,237 2,093 0,083 2,236 0,110 1,449 0,091 ++ ++ ++

Аспарагин, % 0,727 0,002 0,712 0,006 0,720 0,003 0,721 0,004 0,700 0,002 +++ ++ +

Треонин, % 0,269 0,003 0,280 0,004 0,267 0,004 0,268 0,004 0,257 0,001 + + ++

Глутамин, % 1,503 0,016 1,567 0,017 1,520 0,029 1,532 0,026 1,603 0,012 + ++

Пролин, % 0,567 0,084 0,830 0,103 0,563 0,075 0,603 0,058 0,367 0,055 + +

Глицин, % 0,222 0,001 0,220 0,004 0,221 0,001 0,223 0,001 0,220 0,001

Алании, % 0,316 0,005 0,327 0,006 0,311 0,004 0,311 0,005 0,241 0,008 +++ +-Н- +++ +++

Валин, % 0,574 0,002 0,570 0,007 0,572 0,002 0,574 0,005 0,530 0,002 +4+ + +++ +++

Изолейцин, % 0,204 0,002 0,209 0,006 0,204 0,002 0,205 0,004 0,169 0,007 + ++ + +++

Лейцин, % 0,552 0,003 0,531 0,009 0,550 0,007 0,549 0,001 0,444 0,014 ++ ++ ++ ++

Тирозин, % 0,113 0,006 0,135 0,008 0,115 0,005 0,110 0,004 0,102 0,003 +

Гистидин, % 0,230 0,004 0,228 0,006 0,230 0,002 0,230 0,004 0,209 0,003 ++ + +++ ++

Гематокрит, % 40,36 0,63 40,58 1,39 42,05 1,25 39,27 1,53 36,85 0,65 ++ +

Примечание - (+) - Р<0,05; (++) - Р<0,01; (+++) - Р<0,001.

Разница показателей у животных-носителей ВЛКРС и реагирующих на ППД-туберкулин составила 8,4 и 8,0 эритроцитов с микроядрами на 10 тыс. клеток соответственно и была сопоставима с контрольными значениями здоровых животных.

Хромосомную нестабильность у потомков больных лейкозом коров-матерей и бактерионосительство можно рассматривать как биологический промотор, опосредованно усиливающий генетический резонанс клетки.

3.9. Результаты патоморфологического исследования крупного рогатого скота с разной степенью компрометации к лейкозу

Нами было проведено патоморфологическое изучение биоматериала от 52 животных при одновременном течении гемобластозного и туберкулезного процессов.

Гистологическое исследование биоматериала от животных 1-й группы показало, что изменения, характерные как для туберкулезного, так и для лейкозного процессов, выражены у всех животных, однако степень их проявления была различной в зависимости от формы и стадии обеих патологий. У 5 животных туберкулез протекал на фоне лимфосаркомы и в 4 случаях — на фоне лимфоидного лейкоза.

При сочетании туберкулеза с лимфоидным лейкозом в патологической картине превалировали изменения, характерные для данной формы лейкоза. В печени и почках при отсутствии изменений, характерных для лейкоза и туберкулеза, отмечали дистрофию гепатоцитов.

Таблица 4 - Характеристика животных опытных групп по результатам прижизненного и послеубойного исследований

Коли- Реагирование Исследования на лейкоз Исследования на туберкулез

№. группы чество животных в группе в РИД в ИФА на ППД-туберкулин гемма-тологи-ческие пато-лого-анато-миче-ские гистологические бакте-риоло-гичес-кие пато-лого-анато-миче-ские гистологические

1 9 + + + + + + + + +

2 11 + + + + - - + + +

3 8 + + + - — — + - +

4 14 + + — — - — - - —

5 10 - - + - - - - - -

В случаях одновременного течения лимфосаркомы и туберкулеза чаще всего выявляли значительное увеличение лимфатических узлов грудной и тазовой полостей. Лимфатические узлы имели вид опухолевых образований, дряблой консистенции, серовато-белого цвета с пестрым рисунком на разрезе из-за множества очагов кровоизлияний, которые чередовались нередко с участками некроза. Туберкулезные гранулемы в печени были выявлены у большинства животных с одновременным течением лейкозного и туберкулезного процессов.

У животных 2-й группы, реагирующих на ППД-туберкулин, в РИД с антигеном ВЛКРС и в ИФА, и по результатам гематологического и бактериологического исследований признанных больными лейкозом и туберкулезом, на вскрытии преобладали изменения туберкулезного характера.

У четырех животных 3-й группы, которые реагировали на ППД-туберкулин для млекопитающих, в РИД с антигеном ВЛКРС и в ИФА, и по результатам бактериологических исследований признанных больными туберкулезом, при гистологических исследованиях были установлены изменения, характерные для туберкулеза.

У животных 4-й группы, которые реагировали в РИД и ИФА с антигеном ВЛКРС, при вскрытии регистрировали изменения, свойственные возрастным особенностям организма и дифференциального диагностического значения не представляли. Патоморфологические изменения свидетельствовали об антигенной стимуляции, что проявлялось появлением в тканях большого количества плазматических клеток.

При гистологическом исследовании лимфатических узлов у 4 животных, реагирующих на ППД-туберкулин, не удалось обнаружить типичных туберкулезных гранулем. Были выявлены лишь небольшие скопления из эпителиоидных и гигантских клеток.

4. ВЫВОДЫ

1. Иммунологические и биохимические изменения у молодняка, полученного от коров с разной степенью компрометации к лейкозу, в возрасте 6, 12, 18 и 24 мес. обусловлены динамикой роста, физиологическим и половым созреванием.

У потомства, полученного от больных лейкозом коров-матерей, установлено снижение 5 из 44 тестируемых иммунобиохимических показателей (содержание аспарагина, валина, лейцина, лизина и гамма-глобулина).

2. Уровень прогестерона и тестостерона у животных, рожденных от инфицированных и больных лейкозом коров-матёрей, составил соответственно 0,92±0,02; 0,84+0,01 и 3,57±0,70; 3,64±0,80 нг/мл и не превышал контрольных значений. Уровень 11-ОКС у потомства, полученного от больных лейкозом коров, достигал 22,4±0,6 нг/мл и

превышал соответствующий показатель у телочек, рожденных от интактных и инфицированных BJ1KPC.

3. Потомство от больных лейкозом коров относится к группе повышенного риска и характеризуется предрасположенностью к заболеваниям. У таких животных уровень спонтанной пролиферативной активности мононуклеаров периферической крови (2010±431 имп/мин) был выше, чем у инфицированных BJ1KPC (624±77,3 имп/мин) и интактных (700,1±90,1 имп/мин) животных.

4. Установлена корреляция по 37 из 68 сопоставляемых эпизоотологических и хозяйственно-технологических признаков, при этом максимальная корреляция (i=0,558) выявлена только при сопоставлении среднего уровня инфицированности животных всех возрастов и количества инфицированных BJIKPC коров в хозяйстве.

5.Связь иммунобиохимических показателей и хозяйственно-полезных признаков у животных в процессе онтогенеза выражена слабо и разнонаправленно. Уровень общего белка достоверно и отрицательно связан с живой массой телок в возрасте 18 мес (r=-0,329); JIACK имела значительную положительную связь с удоем коров за первую лактацию и выходом молочного жира (г = 0,406 и 0,350 соответственно).

Установлена тенденция к повышению молочной продуктивности у первотелок, полученных от больных лейкозом коров-матерей.

6. В некоторых хозяйствах Западной Сибири, крупный рогатый скот, реагирующий на ППД-туберкулин для млекопитающих, в 68,2% случаев был одновременно носителем вируса лейкоза. Выявлена прямая связь между уровнем инфицированности BJ1KPC и реагированием на ППД-туберкулин для млекопитающих.

7. Развитие ассоциированной экспериментальной инфекции BJ1KPC и М. bovis сопровождается:

- у телят - усилением in vitro пролиферативного ответа лимфоцитов на ППД-туберкулин для млекопитающих;

- у овец на фоне общей активации синтеза специфических противотуберкулезных антител происходило одновременное повышение спонтанного и митогенного ответа лимфоцитов на ППД-туберкулин для млекопитающих.

При этом последовательность заражения ВЛКРС и М. bovis практического значения не имела.

8. У животных при сочетанном течении лейкоза и туберкулеза происходит взаимное усиление развития патологических процессов у животных, при этом уровень энзимной активности мононуклеаров крови ниже у крупного рогатого" скота в гематологической стадии болезни (0,375±0,02) и при сочетанном течении лейкоза и туберкулеза (0,223±0,020), а показатели хромосомной нестабильности в клетках крови коров при сочетанном течении лейкоза и туберкулеза возрастают до

максимальных значений и достоверно превышают значения животных других сопоставляемых групп.

9. Наиболее существенные изменения иммунобиохимических показателей установлены у крупного рогатого скота при сочетанном течении лейкоза и туберкулеза, у одновременно реагирующего в РИД, ИФА и на ППД-туберкулин для млекопитающих и реагирующего только на туберкулиновую пробу.

10. Частота инфицированности рота-, коронавирусами и вирусом диареи — болезни слизистых у интактного и больного лейкозом крупного рогатого скота не зависела от степени компрометации к лейкозу, и, следовательно, вирусы этого типа не являются эпигенетическим фактором, предрасполагающим к спонтанному инфицированию животных ВЛКРС.

11. Подтверждена наследственная обусловленность устойчивости и восприимчивости крупного рогатого скота к лейкозу. При этом:

- в неблагополучных семействах в течение 2-4 поколений у крупного рогатого скота частота возникновения лейкоза возрастает в 2 раза;

- от больных лейкозом коров-матерей получено на 17,3% больше больных дочерей, чем здоровых;

- линейная принадлежность быков не оказывает значительного влияния на заболеваемость потомков лейкозом, поэтому оценка генотипа быков и последующий их отбор имеют большее значение для селекции крупного рогатого скота на устойчивость к лейкозу.

12. Патоморфологические изменения в органах и тканях животных, реагировавших только в РИД с антигеном ВЛКРС и в ИФА, проявлялись отчетливо выраженной плазмоклеточной реакцией, что свидетельствовало об антигенной стимуляции организма.

У животных, реагировавших в РИД с антигеном ВЛКРС, ИФА и на ППД-туберкулин для млекопитающих, а по результатам гематологического и бактериологического исследований признанных больными лейкозом и туберкулезом в патоморфологической картине преобладали изменения, характерные для туберкулезного процесса.

У животных, которые реагировали на ППД-туберкулин для млекопитающих, в РИД с вр51 антигеном ВЛКРС и в ИФА, и по результатам бактериологических исследований признанных больными туберкулезом, при гистологических исследованиях были установлены изменения, характерные для туберкулеза.

Изменения туберкулезного характера выявляли также у животных в случаях ассоциативного течения лейкоза (при выраженной патолого-анатомической картине) и туберкулеза (при положительной бактериологии и характерных патолого-анатомических изменениях).

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

По результатам научных исследований издано 13 методических рекомендаций, которые используются в научных, учебных и производственных целях:

«Оценка естественной резистентности крупного рогатого скота и овец» (Новосибирск, 1989) (утв. ученым советом ИЭВСиДВ 2.11.1987 г.).

«Дополнения в систему борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота в Новосибирской области», рассмотрены и одобрены ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН и утверждены ветеринарной секцией НТС Управления сельского хозяйства Новосибирской области 9.04.1992 г.).

«Программа перехода к устойчивому развитию агропромышленного комплекса в Новосибирской области (2000-2005 гг.)» (Новосибирск, 2000) (утв. ученым советом НГАУ 31.03.2000 г.).

«Оценка естественной резистентности сельскохозяйственных животных» (Новосибирск, 2003) (рассмотрены и одобрены подсекцией «Инфекционная патология животных» отделения ветеринарной медицины РАСХН 10.04.2003 г.).

«Биохимическое исследование крови и сыворотки крови крупного рогатого скота с использованием спектроанализатора 1п1тар1с1-61» (Новосибирск, 2002) (утв. ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН; подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН, 8.05.2002г.).

«Основы патоморфологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота» (Новосибирск, 2002) (утв. Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН; подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН 9.10.2001 г.).

«Комплексная система оздоровления и профилактики лейкоза крупного рогатого скота в Новосибирской области на 2002-2006 гг.» (Новосибирск, 2001) (утв. ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН; подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН и администрацией Новосибирской области 15.02.1999 г.).

«Биометрическая обработка результатов научно-исследовательских и производственных опытов» (Новосибирск, 2000) (утв. методической комиссией факультета ветеринарной медицины НГАУ 7.02.2000 г.).

«Многофакторный анализ (на примере обработки данных по оценке эпизоотической ситуации при лейкозе крупного рогатого скота)» (Новосибирск, 2003) (утв. ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН; подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и

Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН 12.03.2002 г.).

«Противоэпизоотические мероприятия при лейкозе крупного рогатого скота в фермерских и личных подсобных хозяйствах» (Москва, 2005) (рассмотрены и одобрены секцией «Инфекционная патология животных» отделения ветеринарной медицины РАСХН 8.12.2005 г.).

«Лабораторные исследования крови животных» (Новосибирск, 2003) (утв. метод, комиссией факультета ветеринарной медицины НГАУ 8.05.2003 г.).

«Исследование мочи и изменение ее показателей при патологиях животных» (Новосибирск, 2005) (утв. методической комиссией Института ветеринарной медицины НГАУ 24.05.2004 г.).

«Государственная программа ветеринарно-санигарных, организационно-хозяйственных и специальных мероприятий по профилактике и ликвидации лейкоза крупного рогатого скота» (Москва, 2005) (представлена на рассмотрение в Управление ветеринарии Федерального агентства по сельскому хозяйству МСХ РФ).

Результаты научных исследований использованы в издании учебного пособия с грифом МСХ РФ:

«Лейкоз ' крупного рогатого скота» (Новосибирск, 2005) (утв. Министерством сельского хозяйства РФ №06-270 от 24.03.2005 г.).

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Монография

1. Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири / Соавт.: П.Н. Смирнов, В.В. Храмцов, С.И. Джупина, A.C. Донченко и др. -Новосибирск, 1995. - 257 с.

Учебное пособие

2. Лейкоз крупного рогатого скота / Соавт.: В.В. Храмцов, П.Н. Смирнов, В.В. Смирнова. - Новосибирск, 2005. - 160 с.

Статьи в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ для публикации основных результатов диссертации

3. Краткий аналитический обзор приоритетных фундаментальных и прикладных исследований в области ветеринарной экологии и лейкозологии / Соавт. В.В. Храмцов // Сибирский вестник сельскохозяйственных наук. - №2. — 2005. — С. 124-126.

4. Метаболическая активность клеток крови интактного, инфицированного ВЛКРС и больного лейкозом крупного рогатого скота// Сибирский вестник сельскохозяйственных наук. - №2. — 2005. — С. 127-129.

5. Изучение эпигенетических факторов предрасположенности к лейкозу крупного рогатого скота // Сибирский вестник сельскохозяйственных наук. - №2. -2005. - С. 129-131.

6. Патоморфологическая характеристика ассоциативного течения лейкоза и туберкулеза крупного рогатого скота / Соавт. В.В. Смирнова // Сибирский вестник сельскохозяйственных наук. - №3. — 2005. — С. 96-103.

7. Использование многофакторного анализа для определения степени корреляции признаков с рапространением лейкоза крупного рогатого скота в Новосибирской области // Сибирский вестник сельскохозяйственных наук. - №4. - 2005. - С. 135-138.

8. Ассоциативное проявление вирусно-бактериальных инфекций на примере лейкоза и туберкулеза животных. Сочетанное течение лейкоза и туберкулеза крупного рогатого скота / Соавт. A.C. Донченко // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - №5. — 2005. — С. 66-67.

Статьи в сборниках научных трудов и материалы докладов региональных научно-практических конференций

9. Естественная резистентность у потомства местного и импортированного в Западную Сибирь крупного рогатого скота / Соавт. П.Н. Смирнов // Селекция сельскохозяйственных животных на устойчивость к болезням и повышение резистентности в условиях промышленной технологии: Сб. науч. тр. - М., 1988. - Вып. 8. - С. 86.

10. Наследственная обусловленность предрасположенности и устойчивости крупного рогатого скота к заболеванию лейкозом / Соавт.: А.Г. Незавитин, B.JI. Петухов, Н.С. Уфимцева, П.Н. Смирнов // Болезни с наследственной предрасположенностью у сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр. Новосибирского СХИ. - Новосибирск, 1990. -С. 4-9.

11. Особенности проявления инфекционного (лейкозно-туберкулезного) процесса в экспериментальном варианте / Соавт.: П.Н. Смирнов, A.C. Донченко, Г.З. Шубинский, Е.Р. Черных // Тез. докл. III Всесоюз. конф. по эпизоотологии (Новосибирск, 24-26 сентября 1991 г.) /СО ВАСХНИЛ. ИЭВСиДВ.- Новосибирск, 1991.-С. 106-107.

12. Динамика иммунного ответа у крупного рогатого скота при ассоциированной лейкозно-туберкулезной инфекции / Со авт.: П.Н. Смирнов, A.C. Донченко, Г.З. Шубинский, Е.Р. Черных // Эпизоотический и инфекционный процессы (теоретические и практические аспекты): Сб. науч. тр. / РАСХН. Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ — Новосибирск, 1992. - С. 24-27.

13. Особенности формирования поствакцинального противотуберкулезного иммунитета у крупного рогатого скота, инфицированного ВЛКРС / Соавт.: В.Н. Донченко, П.Н. Смирнов, A.C. Донченко, Е.Р. Черных // Эпизоотология, диагностика, профилактика

и методы борьбы с инфекционными болезнями животных: Сб. науч. тр. / РАСХН. Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ. - Новосибирск, 1992. - С. 28-32.

14. Динамика показателей естественной резистентности и 11-ОКС у овец, экспериментально инфицированных BJ1KPC, М. bovis, М. smegmatis и привитых вакциной БЦЖ (в различных сочетаниях) / Соавт.: И.В. Фирсов, П.Н. Смирнов, A.C. Донченко // Перспективные направления интегрирования экологических проблем в республике для совершенствования ветеринарного обслуживания: Докл. Якутской респуб. науч.-произв. конф. — Якутск, 1994. - С. 166-170.

15. Экологическое нормирование хромосомной нестабильности у сельскохозяйственных животных / Соавт.: С.Г. Куликова, М.Л. Кочнева, В.Л. Петухов и др. // Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири.— Новосибирск, 1995. —С. 110.

16. Естественная резистентность и гормональный статус крупного рогатого скота, импортированного в Западную Сибирь / Соавт.: И.В. Фирсов, П.Н. Смирнов // Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири. - Новосибирск, 1995. — С. 159-164.

17. Сила иммунного ответа и клеточный иммунитет, как параметры экологического нормирования / Соавт.: В.Л. Петухов, О.С. Короткевич,

A.И. Желтиков и др. // Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири. - Новосибирск, 1995. — С. 200-201.

18. Динамика реагирования крупного рогатого скота на 1111Д-туберкулин для млекопитающих в оздоровленных от лейкоза фермах / Соавт.: Л.М. Ерова, В.Н. Донченко, В.А. Напримеров, Л.В. Наторхина // Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири. -Новосибирск, 1995.-С. 221-224.

19. Особенности проведения завершающей стадии оздоровления хозяйств от инфекции, вызываемой вирусом лейкоза крупного рогатого скота / Соавт.: П.Н. Смирнов, М.В. Сологубова, A.B. Киселев // Проблемы АПК в условиях рыночной экономики: Тез. докл. регион, науч.-практ. конф. - НГАУ, Новосибирск, 1995. - С. 141.

20. Применение ИК-спектрофотометра «ИНФРАПИД-61» в биохимическом исследовании субстратов животных / Соавт.: Ю.В. Итэсь,

B.В. Храмцов, В.В. Смирнова, В.В. Заборовский // Проблемы сельскохозяйственной экологии: Докл. и тез. докл. науч.-практ. конф. (Новосибирск, декабрь 1999 г.) / Новосиб. гос. аграр. ун-т, Госкомитет по охране окружающей среды Новосиб. обл. — Новосибирск, 2000. — С. 48-49^

21. Данные биохимического исследования крови и сыворотки крови крупного рогатого скота разных территорий Новосибирской области / Соавт.: Ю.В. Итэсь, A.A. Шукель // Проблемы экологии в программах профессионального образования: Матер, межрегион, науч.-практ. конф. -Новосибирск: 2000. - С. 24-26.

22. Применение спектроанализатора «Инфрапид-61» для биохимического анализа субстратов животных / Соавт.: Ю.В. Итэсь,

B.В. Храмцов // Инфекционные патологии животных: Сб. науч. тр. - Омск, 2001.-С. 275-277.

23. Результаты биохимического исследования крови и сыворотки крови крупного рогатого скота разной степени компрометации к лейкозу / Соавт.: Ю.В. Итэсь, В.В. Храмцов // Болезни сельскохозяйственных животных вирусной и других этиологии и меры борьбы с ними / Матер, науч.-практ. конф. (Иркутск, 6-7 сентября 2001 г.). -Новосибирск, 2001. -

C. 49-52.

24. Экологическая иммунология как новое направление клинической иммунологии, ее научно-практические и научно-организационные задачи / Соавт. П.Н. Смирнов // Актуальные вопросы ветеринарии: Матер, науч.-практ. конф. фак. вет. мед. НГАУ / НГАУ. - Новосибирск, 2001. - С. 5-13.

25. Влияние лейкозного процесса на динамику биохимических показателей крови / Соавт. Ю.В. Итэсь // Актуальные вопросы ветеринарии: Матер, науч.-практ. конф. фак. вет. мед. НГАУ / НГАУ, — Новосибирск, 2001. - С. 25-27

26. Иммунодефициты. Классификация иммунодефицитов / Соавт. Е.А. Борисенко // Проблемы ветеринарной экологии в Якутии: Матер, науч.-практ. конф., посвященной 65-летию Каратаевой Т.Д. - Якутия, 2002. -С. 50.

27. Биохимический статус крупного рогатого скота разного возраста / Соавт.: Ю.В. Итэсь, В.В. Храмцов, О.Н. Паршина // Проблемы ветеринарной экологии в Якутии: Матер, науч.-практ. конф., посвященной 65-летию Каратаевой Т.Д. — Якутия, 2002. - С. 42-46.

28. Гематологические, иммунологические и биохимические показатели крупного рогатого скота разной породной принадлежности / Соавт. Ю.В. Итэсь // Проблемы экологии агропромышленного комплекса: Матер, науч.-практ. конф. — Новосибирск, 2004. - С. 138-144.

Материалы докладов международных научных и научно-практических конференций

29. Chromosomme instability in healthy and anomalous pigs / Co-auth.: M.L. Kochneva, S.G. Kulikova, V.L. Petukhov et al. // Proceedings of the 14lh IPVS Congress (Bologna, Italy, 7-10 July 1996). - 1996. - P. 645.

30. The ecological regulation of chromosomal instability in pigs of West Siberia / Co-auth.: N.A. Osipova, M.L. Kochneva, T.N. Nikolaeva et al. // 10th North American Colloquium on gene mapping and cytogenetics in human and domestic species: Abstract Booklet (Florida, July 14-18,1997). - 1997. - P.38-39.

31. The correlation between frequency of chromosome mutations and chemical elements in sows / Co-auth.: N.A. Osipova, M.L. Kochneva, O.S. Korotkevich et al. // Book of Abstracts of the 51st Annual Meeting of the EAAP (The Hague, 21-24 August 2000). - Wageningen Pers, 2000. - P. 76.

32. Использование технических средств при постановке реакции иммунодиффузии (РИД) в геле агара для диагностики инфекции вируса

лейкоза крупного рогатого скота / Соавт.: В.В. Храмцов, О.Н. Паршина, A.M. Зазнобин, H.A. Волков И Информационные технологии, информационные измерительные системы и приборы в исследовании сельскохозяйственных процессов: Матер. Междунар. науч.-практ. конф. -Краснообск, 2003. - 214 с.

33. Результаты биохимического исследования крови и сыворотки крови крупного рогатого скота разной степени компрометации к лейкозу / Соавт. Ю.В. Итэсь // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Матер, междунар. науч.-практ. конф. Новосибирского ГАУ. - Новосибирск, 2004. -С. 288-293.

34. Использование многофакторного анализа для определения степени корреляции признаков с распространением лейкоза крупного рогатого скота в Новосибирской области / Соавт.: Ю.В. Итэсь, В.В. Храмцов // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Матер, междунар. науч.-практ. конф. Новосибирского ГАУ. - Новосибирск, 2004. — С. 293-296.

35. Краткий аналитический обзор генеалогических аспектов лейкоза крупного рогатого скота II Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Матер. Сиб. Междунар. ветеринар, конгр. / Новосибирский ГАУ. - Новосибирск, 2005. - С. 142.

36. Теоретическое и практическое обоснование ассоциативного течения лейкоза и туберкулеза крупного рогатого скота Н Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Матер. Сиб. Междунар. ветеринар, конгр. / Новосибирский ГАУ.— Новосибирск, 2005.— С. 143-144.

Подписано в печать 12.01.06. Формат60*84 '/ Усл.-псч. л. 2. Тираж 100 экз. Заказ № 4.

ИГ1Ц «Юпитер» 630501, пос. Краснообск, Новосибирская область

Актуальность темы. В структуре инфекционной патологии лейкоз крупного рогатого скота в РФ занимает лидирующее место и составляет 57% от других нозологии (М.И. Гулюкин, 2003).

Широкое распространение лейкоза крупного рогатого скота в сельхозпредприятиях и организациях всех форм собственности, большой экономический ущерб, наносимый животноводству, социальная значимость данной нозологии, отсутствие средств терапии и специфической профилактики определяют актуальность фундаментальных и приоритетно-прикладных исследований по этой проблеме (Г.Ф. Коромыслов, 1975; Г.А.Симонян, 1975; В.П. Шишков, 1976; 1992; В.М. Лемеш, 1982; В.А. Бусол, 1983; O.K. Приедниекс, 1985; Р.С. Москалик, 1985, 1998; М.И. Гулюкин, 1985; 2003; Л.Г. Бурба, А.Ф.Валихов, 1985; В.М. Нахмансон, 1986; П.Н. Смирнов, 1992; А.Т. Левашев, 1994; А.Г. Незавитин, 1995; И.М. Донник, 1999; В.В. Разумовская, 2004; В.А. Апалькин, М.И. Гулюкин, Н.И. Петров, 2005; В.В. Храмцов, М.А. Амироков, 2005 и др.).

В последние годы продолжается накопление новых научных данных, характеризующих особенности ассоциативного проявления таких хронически протекающих инфекций, как лейкоз и туберкулез крупного рогатого скота. Вероятность бактериально-вирусного взаимодействия на уровне ассоциатов всегда давали основание предполагать о возможных иммунологических и патогенетических особенностях сочетанного течения лейкоза и туберкулеза (В.В. Смирнова, 1983; П.Н. Смирнов, 1988; П.Н. Смирнов, А.С. Донченко, 1992, 1994; Л.М. Ерова, 1996; А.Г. Иванов, 2000; А.И. Сорокина, 2000; Г.А. Гаврилова, 2005 и др.).

Если изучение этиологических и патогенетических аспектов лейкоза крупного рогатого скота велось интенсивно и достаточно подробно представлено в научных трудах, то биологические (иммунологические, биохимические, цитогенетические) особенности и хозяйственно-полезные признаки потомства коров с разной степенью компрометации к лейкозу ^ изучены недостаточно. Более глубокие научные познания в этой области позволят объективнее подходить к оценке биологических и хозяйственно-полезных признаков таких животных и рационально использовать их в процессе воспроизводства стада и производства продукции животноводства.

Цель исследований. Изучить иммунологические и биохимические показатели потомства, полученного от коров с разной степенью » компрометации к лейкозу, и особенности ассоциативного (сочетанного) развития лейкоза и туберкулеза у животных.

Задачи исследований:

1. Установить наследственную обусловленность устойчивости и восприимчивости крупного рогатого скота к лейкозу.

2. Дать иммунологическую и биохимическую характеристику потомству, полученному от здоровых, инфицированных ВЖРС и больных лейкозом коров-матерей.

3. Провести корреляционно-регрессионный анализ эпизоотологических и хозяйственно-полезных признаков со степенью компрометации животных к лейкозу.

4. Изучить частоту инфицированности рота-, коронавирусами и вирусом диареи - болезни слизистых у интактного, инфицированного ВЖРС и больного лейкозом крупного рогатого скота.

5. Изучить частоту одновременного реагирования крупного рогатого скота на ППД-туберкулин для млекопитающих, gp51 антиген ВЖРС и показатели иммунного ответа при экспериментальной ассоциативной лейкозно-туберкулезной инфекции у овец и телят.

6. Определить иммунологические и биохимические показатели при спонтанной ассоциативной лейкозно-туберкулезной инфекции у крупного рогатого скота.

7. Оценить уровень хромосомной нестабильности и * патоморфологические изменения у крупного рогатого скота с разной степенью компрометации к лейкозу и туберкулезу.

Научная новизна. Проведено комплексное изучение иммунобиохимического статуса потомства, полученного от коров-матерей с разной степенью компрометации к лейкозу. Выявлено, что у животных, полученных от больных лейкозом коров снижаются 6 из 44 тестируемых f показателей, в том числе синтез таких аминокислот, как аспарагин, валин, лейцин, лизин, а также бактерицидная активность, продукция сывороточных гаммаглобулинов.

Установлена тенденция повышения молочной продуктивности у первотелок, полученных от больных лейкозом коров, в сравнении с потомством здоровых. Показатели уровня прогестерона и тестостерона таких животных не превышали контрольных значений. Уровень 11-ОКС у животных, полученных от больных лейкозом коров-матерей, составил 22,4±0,6 нг/мл и превышал соответствующий показатель телочек, рожденных от интактных и инфицированных BJ1KPC коров.

Показано, что уровень спонтанной пролиферативной активности у животных от больных коров был выше, чем у потомства от инфицированных BJIKPC и интактных коров.

Потомство больных коров-матерей характеризуется признаками пониженной жизнеспособности и относится к группе повышенного риска. В популяции таких животных имела место тенденция роста показателей заболеваемости и смертности, вызванных бактериальной и вирусной инфекциями.

Установлено, что у животных неблагополучных по лейкозу семейств частота регистрации болезни в 2 раза выше, чем среди животных из семейств, устойчивых к заболеванию.

У животных с разной степенью компрометации к лейкозу 1 антителоносительство к рота-, коронавирусам и вирусу диареи - болезни слизистых установлено у 1/3 части обследованных. Случаи носительства ротавирусов и вируса диареи зарегистрированы с равной частотой, тогда как специфические антитела к коронавирусу были обнаружены только у одного животного. Частота антителоносительства у интактного и больного лейкозом крупного рогатого скота не зависела от степени компрометации к лейкозу, и вирусы этого типа не являются эпигенетическим фактором, предрасполагающим к спонтанному инфицированию животных BJ1KPC.

Установлен факт одновременного реагирования коров (до 68,2% случаев) на ППД-туберкулин для млекопитающих и в РИД с gp 51 антигеном BJIKPC. Выявлена положительная корреляция между уровнем инфицированности вирусом лейкоза и реагированием животных на ППД-туберкулин для млекопитающих.

Выявлены особенности иммунобиохимических изменений в организме животных при сочетанном течении лейкоза и туберкулеза в системе in vivo и in vitro. Так, у овец при сочетанном течении инфекций на фоне общей активации синтеза специфических противотуберкулезных антител происходит снижение бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, концентрации общего белка, IgGj, IgG2 при одновременном повышении спонтанной пролиферации лимфоцитов, митогенного ответа лимфоцитов на ППД-туберкулин для млекопитающих и уровня фагоцитоза. Установлено отягчающее влияние инфекции BJIKPC на развитие экспериментального туберкулеза у овец. При этом последовательность заражения BJIKPC и М. bovis практического значения не имеет.

У телят установлено взаимное усиление патологических процессов, особенно в случае стратификации BJIKPC на М. bovis. Развитие экспериментальной инфекции BJIKPC у телят сопровождается усилением in vitro пролиферативного ответа лимфоцитов на ППД-туберкулин для млекопитающих.

В случаях спонтанного сочетанного течения лейкоза и туберкулеза у животных снижаются показатели иммунобиохимического статуса организма, возрастает хромосомная нестабильность, которая проявляется увеличением количества эритроцитов с микроядрами в крови животных.

Морфологические изменения в органах и тканях у инфицированных ВЛКРС животных свидетельствовали об антигенной стимуляции, однако дифференциального диагностического значения они не имели.

Теоретическая и практическая значимость работы. В работе дана комплексная иммунологическая и биохимическая характеристика потомства, полученного от коров с разной степенью компрометации к лейкозу. Результаты исследований могут быть использованы для биологической оценки потомства, полученного от инфицированных и больных лейкозом коров, с учетом их хозяйственно-полезных признаков и целесообразности использования таких животных для воспроизводства стада.

В процессе исследований получены новые научные знания о патогенезе ассоциативного проявления инфекционного процесса лейкоза и туберкулеза животных. Такое проявление инфекций сопровождается изменением количественных показателей иммунного и биохимического статуса животных, позволяющим говорить об ингибиции их функциональной активности.

Для физиологического мониторинга разработаны и предложены практике рекомендации по определению наиболее информативных иммунологических и биохимических показателей крови крупного рогатого скота разных возрастных групп, породной принадлежности и степени компрометации к лейкозу.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на 3-й Всесоюзной конференции по эпизоотологии (Новосибирск, 1991); республиканской научно-производственной конференции (Якутск, 1994); региональной научно-практической конференции «Проблемы АПК в условиях рыночной экономики» (Новосибирск, 1996); 14-м Международном конгрессе (Италия, 1996); 1-й научно-практической конференции факультета ветеринарной медицины

НГАУ (Новосибирск, 1997); региональной научно-методической * конференции (Омск, 2001); научно-практической конференции «Болезни сельскохозяйственных животных вирусной и другой этиологии» (Иркутск, 2001); научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарии» (Новосибирск, 2001); научно-практической конференции «Проблемы ветеринарной экологии в Якутии» (Якутск, 2002); Международной научно-практической конференции «Информационные » технологии, информационные измерительные системы и приборы в исследовании сельскохозяйственных процессов» (Новосибирск, 2003); Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2004); научно-практической конференции «Проблемы экологии агропромышленного комплекса» (Новосибирск, 2004); Сибирском международном ветеринарном конгрессе «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2005).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 36 научных работ, в том числе одна монография, учебное пособие и 6 статей в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ («Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук», «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки»).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 250 страницах и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Работа иллюстрирована 35 таблицами и 23 рисунками. Список литературы содержит 379 работ отечественных и зарубежных авторов.

ВЫВОДЫ

1. Иммунологические и биохимические изменения у молодняка, полученного от коров с разной степенью компрометации к лейкозу, в возрасте 6, 12, 18 и 24 мес. обусловлены динамикой роста, физиологическим и половым созреванием.

У потомства, полученного от больных лейкозом коров-матерей, установлено снижение 5 из 44 тестируемых иммунобиохимических показателей (содержание аспарагина, валина, лейцина, лизина и гамма-глобулина).

2. Уровень прогестерона и тестостерона у животных, рожденных от инфицированных и больных лейкозом коров-матерей, составил соответственно 0,92+0,02; 0,84+0,01 и 3,57±0,70; 3,64±0,80 нг/мл и не превышал контрольных значений. Уровень 11-ОКС у потомства, полученного от больных лейкозом коров, достигал 22,4±0,6 нг/мл и превышал соответствующий показатель у телочек, рожденных от интактных и инфицированных ВЛКРС.

3. Потомство от больных лейкозом коров относится к группе повышенного риска и характеризуется предрасположенностью к заболеваниям. У таких животных уровень спонтанной пролиферативной активности мононуклеаров периферической крови (2010±431 имп/мин) был выше, чем у инфицированных ВЛКРС (624±77,3 имп/мин) и интактных (700,1±90,1 имп/мин) животных.

4. Установлена корреляция по 37 из 68 сопоставляемых эпизоотологических и хозяйственно-технологических признаков, при этом максимальная корреляция (г=0,558) выявлена только при сопоставлении среднего уровня инфицированности животных всех возрастов и количества инфицированных ВЛКРС коров в хозяйстве.

5.Связь иммунобиохимических показателей и хозяйственно-полезных признаков у животных в процессе онтогенеза выражена слабо и разнонаправленно. Уровень общего белка достоверно и отрицательно связан с живой массой телок в возрасте 18 мес (г=-0,329); ЛАСК имела значительную положительную связь с удоем коров за первую лактацию и выходом молочного жира (г = 0,406 и 0,350 соответственно).

Установлена тенденция к повышению молочной продуктивности у первотелок, полученных от больных лейкозом коров-матерей.

6. В некоторых хозяйствах Западной Сибири, крупный рогатый скот, реагирующий на ППД-туберкулин для млекопитающих, в 68,2% случаев был одновременно носителем вируса лейкоза. Выявлена прямая связь между уровнем инфицированности ВЖРС и реагированием на ППД-туберкулин для млекопитающих.

7. Развитие ассоциированной экспериментальной инфекции ВЛКРС и М. bovis сопровождается:

- у телят - усилением in vitro пролиферативного ответа лимфоцитов на ППД-туберкулин для млекопитающих;

- у овец на фоне общей активации синтеза специфических противотуберкулезных антител происходило одновременное повышение спонтанного и митогенного ответа лимфоцитов на ППД-туберкулин для млекопитающих.

При этом последовательность заражения ВЛКРС и М. bovis практического значения не имела.

8. У животных при сочетанном течении лейкоза и туберкулеза происходит взаимное усиление развития патологических процессов, при этом уровень энзимной активности мононуклеаров крови ниже у крупного рогатого скота в гематологической стадии болезни (0,375±0,02) и при сочетанном течении лейкоза и туберкулеза (0,223±0,020), а показатели хромосомной нестабильности в клетках крови коров при сочетанном течении лейкоза и туберкулеза возрастают до максимальных значений и достоверно превышают значения животных других сопоставляемых групп.

9. Наиболее существенные изменения иммунобиохимических показателей установлены у крупного рогатого скота при сочетанном течении лейкоза и туберкулеза, у одновременно реагирующего в РИД, ИФА и на ППД-туберкулин для млекопитающих и реагирующего только на туберкулиновую пробу.

10. Частота инфицированности рота-, коронавирусами и вирусом диареи - болезни слизистых у интактного и больного лейкозом крупного рогатого скота не зависела от степени компрометации к лейкозу, и, следовательно, вирусы этого типа не являются эпигенетическим фактором, предрасполагающим к спонтанному инфицированию животных ВЛКРС.

11. Подтверждена наследственная обусловленность устойчивости и восприимчивости крупного рогатого скота к лейкозу. При этом:

- в неблагополучных семействах в течение 2-4 поколений у крупного рогатого скота частота возникновения лейкоза возрастает в 2 раза;

- от больных лейкозом коров-матерей получено на 17,3% больше больных дочерей, чем здоровых;

- линейная принадлежность быков не оказывает значительного влияния на заболеваемость потомков лейкозом, поэтому оценка генотипа быков и последующий их отбор имеют большее значение для селекции крупного рогатого скота на устойчивость к лейкозу.

12. Патоморфологические изменения в органах и тканях животных, реагировавших только в РИД с антигеном ВЛКРС и в ИФА, проявлялись отчетливо выраженной плазмоклеточной реакцией, что свидетельствовало об антигенной стимуляции организма.

У животных, реагировавших в РИД с антигеном ВЛКРС, ИФА и на ППД-туберкулин для млекопитающих, а по результатам гематологического и бактериологического исследований признанных больными лейкозом и туберкулезом в патоморфологической картине преобладали изменения, характерные для туберкулезного процесса.

У животных, которые реагировали на ППД-туберкулин для млекопитающих, в РИД с gp51 антигеном ВЖРС и в ИФА, и по результатам бактериологических исследований признанных больными туберкулезом, при гистологических исследованиях были установлены изменения, характерные для туберкулеза.

Изменения туберкулезного характера выявляли также у животных в случаях ассоциативного течения лейкоза (при выраженной патолого-анатомической картине) и туберкулеза (при положительной бактериологии и характерных патолого-анатомических изменениях).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

По результатам научных исследований издано 13 методических рекомендаций, которые используются в научных, учебных и производственных целях:

Оценка естественной резистентности крупного рогатого скота и овец» (Новосибирск, 1989) (утв. ученым советом ИЭВСиДВ 2.11.1987 г.).

Дополнения в систему борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота в Новосибирской области», рассмотрены и одобрены ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН и утверждены ветеринарной секцией НТС Управления сельского хозяйства Новосибирской области 9.04.1992 г.).

Программа перехода к устойчивому развитию агропромышленного комплекса в Новосибирской области (2000-2005 гг.)» (Новосибирск, 2000) (утв. ученым советом НГАУ 31.03.2000 г.).

Оценка естественной резистентности сельскохозяйственных животных» (Новосибирск, 2003) (рассмотрены и одобрены подсекцией «Инфекционная патология животных» отделения ветеринарной медицины РАСХН 10.04.2003 г.).

Биохимическое исследование крови и сыворотки крови крупного рогатого скота с использованием спектроанализатора Infrapid-61» (Новосибирск, 2002) (утв. ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН; подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН, 8.05.2002г.).

Основы патоморфологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота» (Новосибирск, 2002) (утв. Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН; подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН 9.10.2001 г.).

Комплексная система оздоровления и профилактики лейкоза крупного рогатого скота в Новосибирской области на 2002-2006 гг.» (Новосибирск, 2001) (утв. ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН; подсекцией

Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН и администрацией Новосибирской области 15.02.1999 г.).

Биометрическая обработка результатов научно-исследовательских и производственных опытов» (Новосибирск, 2000) (утв. методической комиссией факультета ветеринарной медицины НГАУ 7.02.2000 г.).

Многофакторный анализ (на примере обработки данных по оценке эпизоотической ситуации при лейкозе крупного рогатого скота)» (Новосибирск, 2003) (утв. ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН; подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН 12.03.2002 г.).

Противоэпизоотические мероприятия при лейкозе крупного рогатого скота в фермерских и личных подсобных хозяйствах» (Москва, 2005) (рассмотрены и одобрены секцией «Инфекционная патология животных» отделения ветеринарной медицины РАСХН 8.12.2005 г.).

Лабораторные исследования крови животных» (Новосибирск, 2003) (утв. метод, комиссией факультета ветеринарной медицины НГАУ 8.05.2003 г.).

Исследование мочи и изменение ее показателей при патологиях животных» (Новосибирск, 2005) (утв. методической комиссией Института ветеринарной медицины НГАУ 24.05.2004 г.).

Государственная программа ветеринарно-санитарных, организационно-хозяйственных и специальных мероприятий по профилактике и "ликвидации лейкоза крупного рогатого скота» (Москва, 2005) (представлена на рассмотрение в Управление ветеринарии Федерального агентства по сельскому хозяйству МСХ РФ).

Результаты научных исследований использованы в издании учебного пособия с грифом МСХ РФ:

Лейкоз крупного рогатого скота» (Новосибирск, 2005) (утв. Министерством сельского хозяйства РФ №06-270 от 24.03.2005 г.).