Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.07) на тему:Физиологические основы повышения эффективности гормональной индукции полиовуляции у коров-доноров эмбрионов

1.1 .Актуальность темы. Одним из основных направлений дальнейшего развития молочного и мясного скотоводства страны является интенсивное использование маточного поголовья крупного рогатого скота, особенно, с высоким генетическим потенциалом продуктивности. Однако воспроизводство крупного рогатого скота представляет собой весьма сложный биологический процесс, так как этому виду животных свойственны одноплодие, длительный период репродуктивного цикла и низкие темпы размножения.

Научные достижения в области изучения репродуктивной функции самок животных привели к разработке нового биотехнического метода интенсивного воспроизводства и селекции крупного рогатого скота - метода трансплантации эмбрионов. К настоящему времени он, наряду с широким применением метода искусственного осеменения, становится основой ускоренного воспроизводства высокопродуктивных животных. С его помощью можно получать от одной генетически выдающейся коровы-донора несколько десятков или даже сотен эмбрионов и высокоценных потомков, что позволяет быстро размножить и распространить ценный генетический материал выдающихся представителей по генотипу в целях селекции популяции (М.И. Прокофьев, 1983; А.В.Квасницкий и др., 1988; Л.К.Эрнст, Н.И.Сергеев, 1989; Б.П.Завертяев,1989; Ф.И.Осташко,1995 и другие). Полагают также, что трансплантация эмбрионов позволит не только повысить производство животноводческой продукции, но и возможно станет одним из средств оздоровления сельскохозяйственных животных от ряда инфекционных заболеваний.

Одним из важнейших звеньев в современной биотехнологии трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота является гормональное вызывание полиовуляции у отобранных потенциальных коров-доноров эмбрионов. Для этого используют гонадотропные препараты (ГСЖК, фолликуло-стимулирующий гормон) в сочетании с препаратами простагландина Ф - 2а и другими биологическими активными веществами, в частности , с витаминами А и Е. По данным ряда исследователей (Н.И. Сергеев, Н.З. Жильцов, 1985; Б.П. Завертяев, 1989, и др.) при правильной гормональной обработке коров можно получать около 10-12 и более овуляций. Однако при этом очень часто отмечается крайне высокая степень вариабильности числа овуляций, которая может составлять от 0 до 50 на одну корову-донора. Более того до 30 % обработанных коров потенциальных доноров не реагируют на стимуляцию гормональными препаратами. То есть, гормональная индукция множественной овуляции в большинстве своем характеризуется недостаточной эффективностью и непредсказуемостью реакции коров на введение гормональных препаратов (А.В.Квасницкий,1989; Б.В.Смольянинов,1990).

Анализируя результаты собственных и других исследований, Р. 11от-те1е1а1 ( 1989) приходят к заключению, что на инъекцию гонадотропинов не реагируют 25-35% коров-доноров, а положительно реагирующих животных вариабильность яичников настолько велика, что исключает надежность возможного планирования программы пересадки эмбрионов. Кроме того, Н. КгаизБНсЬ (1985) считает, что лишь половина коров, реагирующих на введение гонадотропных препаратов, может дать 4-5 эмбрионов пригодных для трансплантации. На одну корову-донора после гормональной индукции полиовуляции в среднем было получено только 3,5 эмбриона (Г.А. Багрий, 1990).

Следовательно, индуцирование суперовуляции у коров-доноров эмбрионов и получение стабильного количества полноценных и пригодных для трансплантации эмбрионов является в настоящее время одним из существенных недостатков в интенсивной технологии трансплантации, сдерживающим ее широкое внедрение в практику животноводства.

Б.П. Завертяев (1989), обобщая данные многочисленной литературы, сообщает, что на суперовуляцию влияют такие факторы, как стадия лактации, характер течения родов и послеродового периода, время проявления полового цикла, дозы гормональных препаратов, сезон года, уровень и качество кормления , упитанность и масса тела доноров, стрессы и многие другие факторы. То есть, эффект суперовуляции и качество получаемых эмбрионов в конечном итоге следует связывать с особенностями обмена веществ и гормонального баланса у коров-доноров перед гормональной обработкой и в процессе назначения гормональных препаратов, а также с состоянием половых органов и эндокринных желез, ответственных за репродукцию животных.

Однако эти очень важные вопросы, от которых во многом зависит эффективность суперовуляции и самого метода трансплантации эмбрионов, до сего времени остаются мало изученными. Именно эти обстоятельства диктуют необходимость проведения глубоких исследований по изучению зависимости суперовуляции у коров от гормонально-метаболического гомеостаза их организма, а также особенностей морфофункциональных изменений как в половых, так и эндокринных органах животных при гормональной индукции множественной овуляции. Результаты этих исследований должны послужить научной основой разработки наиболее рациональных технологий отбора потенциальных коров-доноров эмбрионов и снижения вариабельности реакции их половых желез на воздействие гормональных препаратов.

1.2. Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось изучение показателей гормональной индукции множественной овуляции у коров в зависимости от их воспроизводительной способности, состояния гормонально-метаболического статуса организма, половых органов и эндокринных желез и разработка физиологических основ повышения ее эффективности.

В соответствии с этим на разрешение были поставлены следующие задачи:

1. Определить зависимость эффективности гормональной индукции полиовуляции у коров от уровня их молочной продуктивности и показателей воспроизводительной способности.

2. Выявить зависимость эффективности гормональной индукции полиовуляции у коров от гормонально-метаболического гомеостаза их организма.

3. Установить реакцию яичников у коров на гормональную обработку в зависимости от характера течения предшествовавших родов и послеродового периода.

4. Изучить морфофункциональные изменения в половых органах и эндокринных железах коров при гормональной индукции множественной овуляции.

5. Разработать методы коррекции гормонально-метаболического статуса коров и предложить производству рациональную систему отбора потенциальных доноров эмбрионов для гормональной индукции полиовуляции и повышения ее эффективности.

Исследования выполнены в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Воронежского госагроуниверситета по теме 311-3 в «Разработать теоретические основы и практические методы диагностики, профилактики, терапии патологии беременности, послеродовых заболеваний у высокопродуктивных коров и повышения эффективности гормональной индукции полиовуляции и трансплантации эмбрионов». (№ госрегистрации 01.92.0010962).

1.3. Научная новизна. Изучена и определена зависимость эффективности гормональной индукции полиовуляции у коров от показателей их молочной продуктивности, воспроизводительной способности, состояния репродуктивных органов и гормонально-метаболического гомеостаза. Выявлены особенности морфофункциональных изменений в половых органах и эндокринных железах животных при назначении гормональных препаратов. Дано научное обоснование рациональным подходам к отбору и использованию коров в качестве доноров эмбрионов, а также использованию в практике трансплантации эмбрионов нового биологически активного препарата дипровита с целью коррекции обмена веществ и повышения эффективности гормональной индукции множественной овуляции.

1.4. Практическая значимость работы. Производству предложены критерии отбора потенциальных коров-доноров по показателям их воспроизводительной способности, состоянию гормонально-метаболического гомеоста-за, а также биологически активный витаминно-гепатотропный препарат, обеспечивающий нормализацию обмена веществ и снижающий стресс реакцию организма животных на гормональную обработку.

1.5. Апробация и реализация результатов исследований. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на Всероссийской научной и учебно-методической конференции по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных (Воронеж, 1994г.), ежегодных научных конференциях Воронежского госагроуниверситета (1995), Международной конференции, посвященной 30-летию ВНИВИПФиТ (Воронеж, 2000г).

Основные научные положения и практические предложения, вытекающие из выполненных исследований используются в учебном процессе Воронежского и Мичуринского госагроуниверситетов, использованы при разработке методического пособия «Методы морфологических исследований», одобренное секцией патологии и терапии отделения ветеринарии РАСХН 30.03. 2000г. (Воронеж, 2000).

1.6. Публикации. Основные научные результаты, включенные в диссертацию, опубликованы в 7 научных работах.

1.7. Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- результаты гормональной индукции множественной овуляции у коров с разными показателями молочной продуктивности и воспроизводительной способности;

- эффективность гормональной индукции множественной овуляции у коров в зависимости от гормонально-метаболического статуса их организма и характера течения родов и послеродового периода; 9 особенности морфофункциональных изменений в половых органах и эндокринных железах коров при назначении гормональных препаратов; эффективность применения витаминно-гепатотропного препарата дипровита для коррекции гормонально-метаболического статуса коров и повышения эффективности гормональной индукции полиовуляции.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

6. выводы

1. Гормональная индукция множественной овуляции у коров с высокими показателями воспроизводительной способности (межотельный интервал 345+13,4 дней) обеспечила полиовуляцию у 100% животных при среднем значении 17,7+2,3 фолликулов. При увеличении межотельного интервала до 446+12,1 дней полиовуляция в количестве 11,7+2,6 фолликулов зарегистрирована у 66,6% коров.

2. При продолжительности лактации менее 300 дней и молочной продуктивности за лактацию 3618+94 кг ответная реакция яичников на гормональную индукцию множественной овуляции зарегистрирована у 85,7% животных и в среднем составила 19,0+2,8 фолликулов. При увеличении молочной продуктивности до 4821+107,3 кг или на 33,2% за счет увеличения продолжительности лактации эти показатели составили соответственно 77,8% и 11,4+2,2 фолликулов.

3. У коров, не реагирующих на гормональную обработку множественной овуляцией, в сравнении с положительно реагирующими животными, перед введением гормональных препаратов содержание в крови общего белка было выше на 12,3% (при белковом индексе 0,59+0,03 против 0,68+0,04), неорганического фосфора на 17,6%, глюкозы на 18,9%, витамина А на 47,1% при показателях содержания каротина ниже на 29,9%, общих липидов на 22,0%, холестерина на 18,7% и витамина С на 16,4%, что свидетельствует о нарушении белковосинтезирующей функции печени, обмена веществ и энергии.

4. Гормональные показатели крови коров, не реагирующих множественной овуляцией на вводимые гонадотропные препараты, характеризуются более низким содержанием в крови прогестерона (ниже на 60,3%) и более высоким эстрадиола-17(3 (выше на 26,0%) и кортизола (выше на 84,1%). Это свидетельствует о низкой функциональной активности соединительнотканных структур половых желез, выполняющих трофическую, пластическую и эндокринную функции, и высоком функциональном напряжении организма.

5. Реакция яичников коров, переболевших послеродовым эндометритом, на вводимые экзогенные гормоны полиовуляцией снижается в сравнении со здоровым животным в 2,3 раза, а количество нереагирующих животных увеличивается в 2,7 раза. У таких животных выявляются скрыто протекающие хронические эндометриты, фиброзные изменения в строме коркового вещества яичников и гипофункция щитовидной железы, а также нарушение белкового и липидного обменов.

6. Гормональная стимуляция генеративной функции яичников у коров, вызывающая множественную овуляцию, влечет за собой активизацию метаболических процессов и структурные изменения как в половых, так и во всех эндокринных органах. Общая масса яичников увеличивается в 1,43 -2,05 раза, диаметр лютеоцитов на 7,5 - 7,8 % , а их ядер на 27,4 - 34,5%. Лю-теоцитам свойственна выраженная вакуолизация с явлениями лизиса цитоплазмы и ядер. Площадь эндометриальных желез в структуре слизистой оболочки матки увеличивается в 1,25 - 1,50 раза за счет активизации секреторных процессов и расширения их просвета.

7. Гонадотропная стимуляция полиовуляции у коров проявляется резкой активизацией секреторных процессов в щитовидной железе, о чем свидетельствует увеличение высоты тиреоцитов в 1,40 - 1,59 раза, сопровождающееся активным отторжением апикальной их части и глубоким растворением краевого интрофолликулярного коллоида. Щитовидная железа коров с недостаточной ответной реакцией яичников характеризовалась увеличением высоты тиреоцитов в 1,64 раза при отсутствии выраженных признаков секреции и растворения краевого коллоида.

8. Структурная организация надпочечных желез коров, подвергнутых гормональной обработке, характеризовалась уменьшением толщины клубоч-ковой зоны в 1,45 - 1,56 раз, пучково-сетчатой зоны в 1,26 - 1,34 раза, вели

118 чины адренокортикоцитов и их ядер соответственно на 5,4 и 20,2 %. Наиболее выраженные изменения при этом наблюдается у животных с суперовуля-торной реакцией яичников.

9. Применение комплексного витаминно-гепатотропного препарата дипровита для коррекции обмена веществ у коров в период подготовки их к гормональной индукции полиовуляции повышает ее эффективность в сравнении с тривитамином на 17%. Положительное действие препарата реализуется через нормализацию метаболизма в организме животных и через снижение его стрессовой реакции на вводимые экзогенные гормоны.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для получения адекватной реакции яичников на гормональную индукцию множественной овуляции при отборе коров доноров эмбрионов следует учитывать:

- Показатели, как молочной продуктивности, так и воспроизводительной способности. Межотельный интервал для таких животных желателен не более 12 месяцев.

- Показатели гормонально-метаболического гомеостаза. Содержание в крови прогестерона должно быть более 2,5 нг/мл, кортизола менее 1,5 нг/мл, общего белка менее 90 г/л (при белковом индексе более 0,6), общих липидов более 2 г/л и холестерина более 3,5 ммоль/л.

- Характер течения предшествующих родов и послеродового периода. Считать нецелесообразным использовать для получения эмбрионов коров, имевших послеродовую патологию репродуктивных органов.

2. Для высокоценных в племенном и продуктивном отношении коров, включаемых в группу потенциальных доноров эмбрионов, проводить комплекс специальных превентивных лечебно-профилактических мероприятий, направленных на предупреждение патологии органов репродуктивной системы.

3. Для повышения эффективности гормональной индукции множественной овуляции у коров-доноров и получения стабильного количества полноценных эмбрионов, использовать в качестве биологически активного препарата, нормализующего обмен веществ и снижающего стресс реакцию у животных на вводимые гормональные препараты, дипровит, который следует ежедневно скармливать в суточной дозе 5 г. Продолжительность его должна определяться исходным состоянием показателей обмена белков, липидов, функциональным состоянием надпочечных желез и составлять не менее трех недель.

120

4. При выборе сроков повторного использования коров в качестве доноров - эмбрионов учитывать влияние экзогенных гонадотропных препаратов как на органы половой, так и всей эндокринной системы.

5. Материалы исследований использовать в учебном процессе на ветеринарных и зоотехнических факультетах вузов при преподавании дисциплины «Акушерство, гинекология и биотехника размножения животных».

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Метод трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота в настоящее время наряду с искусственным осеменением становится основой ускоренного воспроизводства высокопродуктивных животных. При реализации этого биотехнического метода в селекционных программах придается отбору доноров большое значение. Наиболее важным критерием на первых этапах отбора коров-доноров служит их высокая племенная ценность, т.е. способность передавать гены высокой продуктивности своим потомкам. Однако, оценка коровы-донора по родословной и собственной продуктивности является не окончательной. Как показывает опыт (Konig J., 1986) из-за плохой воспроизводительной функции 50% коров с высокой племенной ценностью непригодны для воспроизводства полноценных эмбрионов, поэтому окончательно корову-донора можно оценить только при получение и оценке ее поL ' томства (Завертяев Б.П., 1989).

Большинство отечественных и зарубежных специалистов считает, что интегральным показателем воспроизводительной способности коров является межотельный период, который не должен превышать 365 дней.

Задачей наших исследователей было установить эффективность гормональной индукции полиовуляции у коров-доноров в зависимости от интенсивности использования животных в воспроизводстве. Полученный нами ^ данные, показали, что у животных с высокими показателями плодовитости (межотельный период составил 345+13,4 дней) после гормональной обработки овулировало с образованием желтых тел в яичниках в среднем 17,7+2,3 фолликула на одно животное, а у животных с удлиненной продолжительностью межотельного периода (в среднем 446+12,1 дней) на одну корову приходится только 7,8+1,5 фолликула, т.е. почти в 2,5 раза эффективность гормональной индукции полиовуляции ниже.

Таким образом, мы подтвердили, что продолжительность межотельного периода является одним из основных показателей воспроизводительной способности коров, которых предполагают использовать в качестве доноров.

Продолжительность межотельного периода коров связана с продолжительностью их лактации и соответственно с величиной молочной продуктивности. Результаты наших исследований показали, что увеличение продолжительности лактации и повышение таким образом молочной продуктивности отрицательно сказывается на эффективности гормональной индукции полиовуляции у коров доноров. Количество овулировавших фолликулов при , продуктивности в 4821 кг оказалось в 1,8 раза меньше, чем при молочной продуктивности в 3618 кг. Причем, с увеличением молочной продуктивности увеличивается вариабельность реакции яичников на введенные экзогенные гонадотропины, так в группе животных с продуктивностью ниже 4000 кг реакция яичников отсутствовала у 14,3%, а с продуктивностью около 5000 кг -у 22,2%.

Известно, что репродуктивная функция животных является одной из наиболее эндокринно-зависимой функцией организма. Гормоны регулируют последовательность и характер течения биохимических реакций, созревание фолликулов, развитие яйцеклеток, овуляцию, оплодотворение, развитие плода и других процессов ( Черемисинов Г.А., 1975; 1992; Падучева А.Л., 1979; Прокофьев М.И., 1983).

Нами установлено, что у животных с высоким уровнем плодовитости и нормальной продолжительностью лактации при включении животных в опыт (нулевой день полового цикла) содержание эстрадиола-17(3 было меньше в 1,9 раза, а прогестерона в 3,2 раза, чем у животных с удлиненным периодом лактации и низким уровнем плодовитости. Уровень гормонов в крови животных перед гормональной обработкой изменяется, если разница содержания прогестерона в крови стала незначительной, то разница в концентрации эстрадиола оказалась выраженной (7,2+5,3 пг/мг у животных с высоким уровнем плодовитости и с удоем менее 4000 кг против 26,9+3,72 пг/мг у животных с низким уровнем плодовитости и удоем более 5000 кг).

Полученные данные уже на II этапе исследований позволяют заключить, что у животных с низкой воспроизводительной функцией и удлиненным периодом лактации значительно нарушен гормональный профиль и это дает возможность предполагать неудовлетворительную реакцию яичников на экзогенные гормоны, Greve Т., Caliesen Н. (1983), Смыслова Н.И. (1986), Сергеев Н.И., Смыслова Н.И. (1987), С.Н.,Хилькевич (1987). Авторы считают, что определение содержания прогестерона и эстрадиола-17(3 в сыворотке крови может служить основанием для выбора доноров. Хотя другие авторы (Kitzig et al., 1986; Афанасьев М.Н., Антане В.В., 1987, 1988) считают, что это не может служить критерием для отбора коров-доноров.

Проведенные нами биохимические исследования венозной крови показали, что у животных с высоким уровнем плодовитости перед введением гормональных препаратов содержание общего белка было на 5,3%, ос-глобулинов - транспортных белков стероидных гормонов на 12,4%, неорганического фосфора 12,6%, общих липидов на 12,5% выше, чем у животных с низким уровнем плодовитости.

Эти результаты соответствуют данным литературы (Афанасьев И.Н., 1985; Avidar Y., 1986; Антане В.В., 1990), в которых отмечена достоверная отрицательная корреляция между эмбриопродуктивностью коров-доноров и концентрацией неорганического фосфора в сыворотке крови.

Поэтому нами были проведены более серьезные исследования по выяснению зависимости гормональной индукции множественной овуляции у коров от состояния обмена веществ и их гормонального статуса.

Установлено, что у коров, не реагирующих на гормональную обработку множественной овуляцией, при включении их в опыт, наблюдалось повышение содержания общего белка на 12,3% , неорганического фосфора на

17,6%, глюкозы на 18,9%, витамина А на 44,1%, чем у животных с хорошей реакцией на индукцию.

В то же время у этих животных отмечалось более низкое содержание в крови каротина на 29,9%, общих липидов на 22%, холестерина на 18,7%, витамина С на 16,4%.

После введения гормональных препаратов у нереагирующих коров полиовуляцией, данные биохимических исследований почти не изменились в сравнение с показателями крови коров отвечающих суперреакциейа )индук- / цию полиовуляции, кроме количества содержания холестерина, ~ которого стало больше на 8,2%.

Эти данные свидетельствуют о нарушении у коров белковосинтези-рующей функции печени и диспротеинемии, снижение интенсивности обмена веществ и активности энергетических процессов. В дополнение к этому более высокий показатель содержания в крови холестерина после гормональной обработки могут свидетельствовать о нарушении стероидогенеза у данных коров на уровне гидроксилирования холестерина.

Роль ß-каротина и витаминов в процессе воспроизводства велика. Их недостаточное поступление в организм животных с кормами приводит к увеличению числа случаев «тихой» охоты (Самохин В.Т., Кузнецов Н.И., 1985), задержания овуляции, низкой оплодотворимости, гибели эмбрионов, вызыва- л ет структурные изменения и снижение функциональной деятельности матки, особенно ее слизистой оболочки и яичников (Kudlac Е.,1981, Пивняк И.Г., Заболотский В., 1983; Шихов И.Я., Сергеев Н.И., 1983, Вечорик 3., Вавжинь-ган Стефан, 1985; Iwanska S., 1985; Саттаров A.A., 1986).

Анализируя данные биохимического анализа крови коров с разной реакцией яичников на гормональную обработку, мы считаем, что результаты исследования венозной крови у коров-доноров перед включением в опыт могут служить одним из критериев отбора.

Результаты радиоиммулогического исследования крови показали, что -у животных, реагирующих множественной овуляцией на гормональную обработку, при включение их в опыт (нулевой день полового цикла) концентрация была выше на 34,2%, а эстрадиола ниже на 59,9%, чем в крови животных, не реагирующих на введение гонадотропинов.

Повышенный уровень эстрогенов у не реагирующих доноров в этот период, мы считаем, указывает на задержку созревания и овуляции фолликулов. И связанно это, по всей видимости, с недостаточной потенцией соединительно-тканных структур половых желез, о чем свидетельствует более низкие показатели содержания в их крови прогестерона.

Перед гормональной индукцией множественной овуляции (десятый день полового цикла) у коров с хорошей реакцией яичников на экзогенные гормоны концентрация прогестерона в крови была выше на 60,3%, эстрадиола- 17(3 ниже на 26,0%, а кортизола на 84%. Следовательно, у коров с низкой овуляторной реакцией на гормональные воздействия до назначения гормонов отмечается низкая функциональная активность циклического желтого тела (клинически не выявляемая) и других прогестероносинтезирую- г щих структур яичников, а так же общее высокое функциональное напряжение организма, проявляющиеся высокой функциональной активностью надпочечных желез.

Следовательно, происходит подавление гормоносинтезирующей . функции аденогипофиза, снижается чувствительность тканевых структур половых желез к гонадотропинам неадекватную их реакцию на воздействие экзогенных гормонов.

После гормональной индукции суперовуляции характер гормональных взаимоотношений в организме коров разных групп сохраняется; концентрация прогестерона выше на 35,6%, концентрация эстрадиола-17Р ниже на 35,3%, а кортизола ниже в 2,1 раза в крови животных с хорошей реакцией яичников на экзогенные гормоны.

Подводя итоги биохимических и гормональных исследований, можно заключить, что эффективность гормональной индукции множественной овуляции во многом определяется общим состоянием метаболизма в организме животных, а также их гормональным статусом.

Данные наших исследований согласуются с результатами исследований Лобадина A.C. (1982), Нежданова А.Г., Соловьева H.A. (1988, 1990), Со-ловьеваН.А. (1989), ЧеремисиноваГ.А. (1992).

Многочисленные данные литературы свидетельствуют о том, что пе-реболевание коров острыми и хроническими эндометритами сопровождаются в последующем нарушением у них половой цикличности, низкой оплодо-творяемостью (Нежданов А.Г.,1987; Ю.А. Скрипицын, 1994 и др.). В связи с этим мы провели исследования эффективности гормональной индукции полиовуляции у животных, имевших в анамнезе акушерскую патологию. Результаты проведенных опытов показали, что у коров имевших в анамнезе акушерскую или гинекологическую патологию, несмотря на то, что у них после соответствующего лечения наступило клиническое выздоровление, а гормональная обработка проводилась после двух нормальных половых циклов, реакция яичников на экзогенные гормональные препараты была менее выраженной, т.е. на индукцию полиовуляции хорошо прореагировало только 40,9%, а с нормальным течением родов и послеродового периода реакция на экзогенные гормоны составила 68,1%, что составило разницу в 27,2%. Отсутствие реакции яичников на гормональную обработку в группе клинически здоровых животных зарегестрированно только у 17%, у животных с предшествующей патологией - 45,5%, а среднее число овуляций на одну корову в 2,3 раза у переболевших животных меньше, чем у здоровых (10,5 эмбрионов против 4,5 эмбрионов).

Исследования морфофункциональных изменений в половых органах и эндокринных железах показали, что после гонадотроной стимуляции у коров множественной овуляции с использованием экзогенных гормональных препаратов средняя масса яичников при суперреакции превосходила массу яичников с низкой реакцией более чем в 2 раза (49,9+2,73 г против 24,2+1,73 г), а при оптимальной реакции эта разница составила 43,4% (Р<0,01).

Вместе с тем, изучение гистологической структуры желтого тела яичников у коров с разной реакцией на гормональные препараты показало, что морфометрическое состояние лютеиновых клеток не имело существенных различий. Так, лютеоциты сформированных желтых тел после овуляции в сравнении с желтыми телами спонтанного полового цикла имели несколько больший диаметр (27,3+0,59 - 27,4+0,83 мкм против 25,4+0,62 мкм и разница составила 7,5-7,8%, Р<0,05), разница размера ядер равна 27,4-34,5% (10,78+0,45 - 11,3+0,25 мкм против 8,4+0,38 мкм). Кроме того, у коров с высокой овуляторной реакцией яичников на введенные гормональные препараты, наблюдалась выраженная вакуолизация цитоплазмы и ядер с явлением лизиса лютеиновых клеток.

Морфометрия эндометрия подопытных коров показала, что количество маточных желез у животных с разной реакцией яичников не отличается от количества маточных желез интактных животных (99,8+6,17 против ч

99,3+4,05). Однако их площадь в структуре слизистой оболочке при слабой , реакции увеличивается на 6,6%, при оптимальной на 10%, при суперреакции на 20,1% (Р<0,001). Отмечалось также значительное увеличение высоты клеток железистого эпителия и их вакуолизация. Все эти данные указывают на высокую активных маточных желез.

Гистологические исследования щитовидной железы коров, подвергнутых гормональным воздействиям показали, что в зависимости от степени реакции яичников на воздействие экзогенных гормонов активность функции щитовидной железы меняется. Так при суперовуляторной реакции яичников при одинаковом диаметре фолликулов щитовидной железы увеличилась высота эпителия фолликулов на 58% (12,92+0,78 мкм против 8,11+0,05 мкм). Внутрифолликулярный коллоид имел гомогенную оксифильную структуру с глубоким растворением краевого коллоида, а в интрофолликулярной ткани выявилось активное формирование новых фолликулов. Эпителий фолликулов имел цилиндрическую или кубическую форму с базально расположенными ядрами, наблюдалось активное отторжение аппекальной части эпите- и ' лия. При оптимальной и недостаточной овуляторной реакции наблюдалось понижение активности щитовидной железы, которая выражалась увеличением диаметра фолликулов и Д/п фактором (3 против 3,7). Эпителий фолликулов был представлен кубическими и цилиндрическими клетками. Внутри фолликула наблюдалось незначительное растворение краевого гомогенного коллоида. I

Вывод, для коров с низкой ответной реакцией их яичников на воздействие гонадотропных гормонов характерным является низкая функциональная активность щитовидной железы и низкие ее потенциальные возможности" ответной реакции на экзогенные гонадотропины.

Функциональная морфология надпочечных желез коров после воздействия на организм животных гонадотропинов при разной овуляторной реакции яичников отличается от морфофункционального состояния их у коров, не подвергавшихся гормональной обработке. Так, у животных при суперову-ляторной реакции толщина клубочковой зоны уменьшилась на 36% (67,5+7,47 мкм при 105,3+5,41 мкм у интактных животных, Р<0,08), а пучко-во-сетчатой зоны на 25,5% (540,1+17,56 мкм и 722,2+13,33 мкм, Р<0,001).

Такие изменения в корковом веществе надпочечных желез возможно связаны с проявлением активной секреторной реакции со стороны адрено-кортикоцитов, что привело к уменьшению их размера. Диаметр адренокорти-коцитов уменьшился на 20,2%> (Р<0,001), а их ядер на 21%.

Аналогичные изменения в структурной организации надпочечников после инъекции гонадотропинов выявляются и с недостаточной овуляторной реакцией яичников, однако, степень выраженности этих изменений была меньше.

Изменения в структурной организации тканей эндокринных желез при воздействии на них эндогенных факторов с последующим угнетением их функций наблюдали Сапожкова O.A. (1990), Торгун П.М. (1993,1997), Нежданов А.Г., Торгун П.М. (1993), Мозговая Е.И., Торгун П.М. (1997).

Проведенные нами морфологические исследования половых органов коров, ранее переболевших эндометритом и не давших ответной реакции на гонадотропные гормоны полиовуляцией, показали, что в эндометрии у таких животных наблюдались воспалительные процессы, характеризующиеся деск-вамацией покровного эпителия, диффузной гистеоцитарной и лимфоцитар-ной инфильтрацией его функционального слоя, а также дистрофическими изменениями в маточных железах, гиалинозом кровеносных сосудов, пассивной гиперемией со стазом крови.

Наши исследования подтверждают данные исследований Нежданов й А.Г. (1985), Мюйрсепп И.Я., Яакна Ю.Р. (1988), Антоне В.В. (1999), которые / установили отрицательную корреляционную зависимость между патологическими изменениями в эндометрии и полиовуляторной реакцией, количеством и качеством эмбрионов.

Введение гонадотропных препаратов коровам ранее переболевших эндометритом очень часто сопровождалось кистозным перерождением половых желез. В строме коркового вещества яичников, таких животных,- выявлялись ее разволокнение, фиброзные изменения, утолщение стенок кровеносных сосудов. Выявлено также, что низкой функциональной активности стро-мальных структур яичников, воспалительным процессам в матке часто сопутствует гипофункциональное состояние щитовидной железы. Активизация секреторной реакции тиреоцитов, вводимыми гонадотропинами, оказывается недостаточной для нормального синтеза тиреоидных гормонов, а их недостаток снижает чувствительной соединительно-тканных структур к воздействию как эндогенных, так и экзогенных гонадотропинов.

Можно заключить, что структурные изменения в половых и щитовидной железах коров находятся в тесной взаимосвязи с воспалительными процессами в эндометрии и глубоко нарушенным у них белковым и липидным обменами.

Исследования Нежданова А.Г. (1988), Черемисинова Г.А. (1992), Антоне В.В. (1999) и других установили, что степень действия гонадотропных препаратов на активизацию роста и созревания фалликулов, их овуляцию, зависит от исходного состояния эндометрия, яичников и щитовидной железы, а также от состояния обменных процессов в их организме, что подтверждают наши исследования.

От состояния обмена веществ зависит эффективность гормональной индукции у коров.

Нами были проведены исследования нового комплексного витаминно-гонадотропного препарата дипровита в сравнение с широко распространен- ; ным препаратом - тривитамином.

Анализ биохимических показателей крови животных при включение / их в опыт свидетельствуют, что многие из них (глюкоза, общие липиды, витамин С, каротин) были на границе нормы, в то время как содержание белков (общих белков, глобулинов) превышал соответствующие нормативы.

Исследования крови после применения экзогенных гормонов и витаминных препаратов, выявили значительные изменения. Отмечалось повышение интенсивности обмена белков, углеводов липидов и фосфорных соединений, которые обеспечивают пластические и энергетические процессы в организме животных.

Но, наиболее выраженные изменения в биохимических показателях крови проявляются у коров, которым назначали дипровит. Концентрация белка в сыворотке крови этих животных снизилась на 8% и была ниже животных контрольной группы на 4,9%. Показатели содержания каротина у них оказались выше на 12,5% (4,85+0,33 мкмоль/л против 4,31+0,46 мкмоль/л), глюкозы на 8,2% (2,90+0,24 мкмоль/л против 2,68+0,23 мкмоль/л), общих ли-пидов на 9,1% (1,79+0,09 мкмоль/л против 2,49+0,29 мкмоль/л), витамина С на 6,1% (35,0+1,12 мкмоль/л против 33,0+1,90 мкмоль/л.

При изучение изменений содержания половых и кортикостероидных гормонов при воздействие экзогенных гонадотропинов на фоне применения дипровита и тривитамина установлено, что назначение дипровита оказывает коррелирующее влияние на обмен веществ в организме животных, сглаживая реакцию надпочечных желез, снижая стресс реакцию в 2,3 раза. Содержание кортизола в крови при использовании тривитамина составило 27,5+5,95 нг/мл - при использование дипровита.

Сопоставление этих данных дает возможность определить регулирующую роль дипровита и положительного его влияния как на биохимические показатели крови животных, так и на их гормональный статус.

Количество адекватно прореагировавших животных на гормональную обработку с применением гепатропно-витаминных препаратов показала одинаковое число (по 7 коров или по 77,8%). Но число овуляций с образованием желтых тел на одно животное при назначение дипровита составило 19,4+2,8, а при использовании тривитамина 16,1+1,8.

Количество овуляций на каждое животное получено при использовании дипровита - 15, а с тривитамином по 13,4+?, что на 11,2% ниже.

Таким образом положительное влияние дипровита на гормональную индукцию полиовуляции у коров реализуются как через нормализацию мме-таболизма в организме животных, так и через снижение стрессового воздействия на них экзогенных гормонов, повышая при этом эффективность гормональной индукции множественной овуляции.

Положительное влияние дипровита на организм животных были отмечены в исследованиях Нежданова А.Г., Кузнецова Н.И. (1990), Сапожкова B.C. (1993,1994,1995), Скрипицына Ю.А. (1994).