Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармакологические и токсикологические свойства биокоординационных соединений

РГ6 од

/ 6 ИЮЛ 1998

На upaiuut рукописи

дорожкин влгилий инлноиич

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ it ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НИОКООРДИНАЦИОННЫХ СОЕДИНЕННА

le.UO.OI - Ветершмрши! фармакология с токсикологией

АВ1Ч1РЕФЕРАТ

диссертации ua coituxairae ученой степени доктора биологических наук .

Вороне» 18S8

1'аГк>та выполнена во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов Минсельхозпрода РФ

Научные консультанты. - доктор ветеринарных наук

A.С.СЕЛИВАНОВА

- доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, действительный член Нью-Йоркской академии наук А.ПЛ1РОСТЯКОВ

Официал! ные оппонентьг.-доктор биологических наук, профессор,

академик РАСХН ВТ.САМОХИН

• доктор ветеринарных наук, профессор ва-антипов

- доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ

b. манохин

Ведущая организация '- Казанская государственная академия

ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана

Защита состоится « » "/¿-О/*'1998 года в ^часов на заседании диссертационногЬ совета Д 020.65.02 во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии(394043, г.Воропеж, ул.Ломоносова, 114-6).

С. диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института Автореферат разослан » ^-^Л _1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

М.НАРГУНОВ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Основной задачей, стоящей перед. ветери нариой наукой и практикой, является защита здоровья животных от заболеваний инфекционного и незаразного характера. Общепризнан^, что наибольший удельный вес(свыгие 95%) заболеваний составляют незаразные болезни животных(В.Т.Самохин,1986; А.П.Простяков, 1994; Б.М.Анохин,1996; А.Г.Шахов,1997; В.М.Авилов, 1998). Радикальным путем решения этой проблемы следует считать изыскание эффективных и безопасных лечебно-профилактических средств(АН. Панин,1991; Н.Л.Андреева,1992; В.Д.СоколовД993; Г.А.ТалановД994, А-Д/Гретьяков,1994;М.И.Рабинович,1996; В.А.АнтиповД99?; М.Н.Аргу • нов,1997; В.С.БузламаД997; А.Н.ПашковД997; А.М.Смирнои,1997).

В общей номенклатуре незаразных болезней значительную долю занимают гипомлкроэлементозы(паракератоз, гипокобальгоч, гииоку-проз, анемия и другие эндемические болезни), наносящие животноводству значительный экономический ущерб(Н.И.Кузнецов,1983; А.И. КарелинД983; А.А.Кабыш,1986; С.Г.КузнецовД989; В.В.Концеьешш, 1990; В.И,Беляев,1995; А.В.Жаров,1995; С.М.СулеймановД995; В.ТСа-мохинД997; ,Ы.В1атД9ЙЗ; А..Г.1п<150п,1983; ЕХШатэДЭвб; И.Веггит.. 1992; Н.Китаеа^ 1993).

Проблема гипомикроэлеменгазов усугубляется тем, что в последние годы отмечается повсеместное нарушение баланса микробиогенных металлоп-комплексообразователей в системе иочва-растение-животное(Х.Ш.Казаков,1964; Р.Г.Бинеев и др.198б,1987) и они имеют тенденцию к росту, что связано с постоянным уменьшением в почве и растениях содержания многих биоэлементов, в том числе цинка, кобальта, меди, железа, марганца, йода и других(В.В.Ковальский, 1967; Н.А.Уразаев и др. 1990; IO.II Кандратьев,1997; В.В.Концевенко, '1997; ЫЛЭ.Огаее е1 а1.1990; Б-Багкаг е1 а1.1992). Установлено, что поступление микроэлементов с кормами рациона даже в условиях Черноземных областей обеспечивает от 30 до 70% потребности организма в них(В.Т.Самохин,1997).

Для профилактики и лечения гипомикроэлементозов в настоящее время используются микроэлементы в виде неорганических солей. Однако, используемые в клинической практике лекарственные средства в такой форме недостаточно эффективны. Это связано с тем, что биологическая доступность микроэлементов из неорганических солей невелика(не более 20-30%) и организм животных даже при достаточном количестве их в рационе может испытывать дефицит {В.ИГеоргиевский, 1979; Э.В.Тен,1987; В.В.Логинов,1988; Ю.Н.Кали-¿1уллин,1989; С.Г.Кузнецов,1989; К.ХЛапуниди и др.1995).

Дефицит микроэлементов в организме животных связан также и с невозможностью включения их в обмен, так как для этого -он и нуждаются в специальных носителях(аминокислоты, белки и другие)

(Э.ВТен,1987; Ю.Н.Калимуллин,1991; С.В Пантелеев,1994). Поэтому с углублением ананий о роли биологически активных веществ в жизнедеятельности животного организма, внимание ученых сосредоточено на комплексных г1репяратах, полученных путем синтеза микроэлементов с аминокислотами или другими веществами и входящих в группу биокоординационных соединенийБКС). Функциональная активность этих соединений обусловлена их способностью образовывать хелатные структуры и участвовать во всех метаболических реакциях и п клеточном химизме(ХЛН.Казаков,1975; БД.Кальницкий,1986; Э.В. ТэнДШ; Л.С.Селиванова и др.1991; Х.Х.Хакимов и др.1991; Б.и.АЬп е1 а1.199.Ч; А.М.КшпегекуДЭЭЗ; ПКМои^ а1.1993,1994). Однако, многие стороны биологического действия, токсикологических свойств и лечебно- профилактической эффективности БКС остаются неизученными. Отсутствует нормативная документация на применение и производство, не налажен их промышленный выпуск.

Учитывая перспективность данной группы препаратов, в соответствии с требованиями к лекарственным средствам(приказ ДВ МСХП РФ №31 от 23.10.1995) нами проведены комплексные исследования по выяснению фармакологических и токсикологических свойств лизииата цинка, метионината кобальта и метиоиината меди, с целью их внедрения в ветеринарную практику. Работа выполнена в соответствии с государственным заданием, включена в плановую тему ВГНКЩгосрегистрационный номер 01860107515) и задание ГУВ СССР(тема 07.04.01. 1986-1990 г. и 04.0 5.04.Д. 1991-1995 г.).

Цель и задачи исследований. Основная цель настоящей работы состояла в исследовании фармакологического действия и токсических свойств лизииата цинка, метионината кобальта и метионината меди, а также в выяснении их профилактической и лечебной эффективности при гипомикроэлементозах животных.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

- изучить биологическую активность биокоординационных соединений;

- исследовать общетоксические и аллергенные свойства, эмбриоток-сичрскую, тератогенную и мутагенную активность препаратов;

- изучить фармакологическое действие биокоординационных соединений на обменные процессы и неспецифическую резистентность;

- определить лечебно-профилактическую эффективность лизииата цинка при наракератозе, метионината кобальта при гипокобальтозе. метионината меди при гипокупрозе животных;

- разработать нормативную документацию на испытуемые препараты, методы контроля и наставления по применению;

- внедрить препараты в промышленное производство и сельское хозяйство • ■. '

Цаучная новизна работы состоит в новом решении проблемы ги иомикроэлементозов, путем применения биокоординационных соединений. Препараты этой группы: лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди представляют не механическую смесь отдельных элементов, а синтезированы путем окислительно-восстановительных реакций, образующих химическую связь(хелагной структуры) микроэлементов и аминокислот. Научно обоснована и экспериментально доказана целесообразность коррекции микроэлементной недостаточности организма предложенными препаратами. Установлен высокий уровень биологического действия и лечебно-профилактической эффективности биокоординационных соединений по сравнению с биогенными металлами в форме минеральных солей.

В результате работы установлено, что биологические эффекты препаратов находятся в определенной зависимости не только от типа химической связи, но и от их химической природы. Показано, что препараты, состоящие из простых лигандов {лизинат цинка, метионинат кобальта, метионинат меди, аспарагинат меди) являются малотоксичными, со слабовыраженными кумулятивными свойствами, а препараты состоящие из сложных лигандоп( двойной метионинат натрий медь, двойной метионинат натрий кобальт, двойной глютаминат натрий медь) относятся к среднетоксичным соединениям. Показано также, что минеральная соль{сульфат цинка) является высокотоксичным соединенней, с умеренными кумулятивными свойствами.

Установлено отсутствие отдаленных последствий применения лизииата цинка, метионината кобальта и метионината меди, а именно эмбриотоксического, тератогенного, мутагенного и аллергенного действия. Зто гарантирует безопасность их применения для животных и через продукты питания для людей.

Исследовано фармакологическое действие лизииата цинка, метионината кобальта, метионината меди и раскрыт механизм их фар-макодтгамики, проявляющийся позитивным действием на обменные процессы, неспецифическую резистентность и физиологические функции организма животных. Показано, что препараты эффективно влияют на процессы зритропоэза, гемопоэза, обмен белков и дифференцированно на метаболизм минеральных веществ и некоторых фгрментоа Так лизинат цин1са эффективно влияет на обмен цинка и активность щелочной фосфатазы, метионинат кобальта на обмен кобальта и активность щелочной фосфатазы, а метионинат меди на обмен меди и активность церулоплазмина. Установлено, что положительный эффект биокоординационных соединений на обменные процессы значительно выше минеральных веществ.

Научная новизна исследований защищена авторским свидетельством^« 1653710 от 08.02.1991г.).

Для профилактики и-лечения шпомикроэлементозов животных, предложена новая группа препаратов - биокоординационные соединения(лизииат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди), с научно обоснованными рекомендациями применения при паракератозе, гинокобальтозе и гипокупрозе, и также гипотрофии. Разработана нормативная документация, определи мща я условия технологического процесса их производства, показатели качества и методы контроля. Препараты выпускают на Ли- ' панском биохимическом заводе и Волгоградском заводе«Оргсинтез».

Наставления по применению препаратов и технические условия на опытную партию одобрены Фармакологическим советом и утверждены ГУБ СССР, на серийное нроипводство - ДВ МСХП РФ.

На основании фармако-токсикологических исследований БКС, экспертной оценки препаратов и документации, представленной в ВГНКИ и Ветфармбиосовет, а также обобщения данных литературы, п соавторстве, разработаны:

-«Методические указания по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве»;

- * Методические рекомендации по оценке мутагенной активности препаратов, применяемых в животноводстве»;

-»Мечодические рекомендации ^ро экспериментальному изучению новых фармакологических препаратов, содержащих минеральные вещества, предлагаемых для применения в животноводстве и ветеринарии»;

-» Методические рекомендации по изучению новых препаратов для коррекции метаболизма в организме животных».

Указанные методические рекомендации позволяют объективно оценивать биологические и токсические свойства препаратов, а также совершенствовать все этапы испытания и внедрения в практику ветеринарной медицины высокоэффективных и безопасных средств, которые необходимы для исследователей, проводящих скрининг новых биологически активных вещеста

Препараты экспонировались во ВВЦ РФ в 1993,1994,1996,1997 и удостоены 5 медалей«Лауреат ВВЦ».

Арробаиия результатов исследований. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на отчетных заседаниях ученого совета ВГНКИ, 1985-1997; Госветфармкомиссии ГУВ СССР 19881991; Фармакологического совета ДВ РФ, 1995; Всесоюзной научной конференции«Экология окружающей среды» Ташкент,1990; Всесоюзном совещании«Биологически активные вещества гидробионтов-новые лекарственные, лечебно-профилактические и технические препараты» Владивосток, 1991; Всесоюзной научной конференции«Совер-шенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов» Москва, 1991,1994,1995; Всесоюзной научной сессии секции

бионеорганической химии АН СССР, Бишкек,1991; Российской кон-ференции«Проблемы диагностики, профилактики и лечения сельскохозяйственных животных в нечерноземной зоне» Нижний Новгород, 1992,1993; Межгосударственной межвузовской научно практической конференции«Новые фармакологические средства в ветеринарии» Санкт-Петербург,1993; Всероссийской конференции«Использование новых методов диагностики и фармакологических средств в лечении и профилактике незаразных болезней животных»Воронеж,1993; Всероссийской конференции «Проблемы ветеринарной санитарии и эко-логии»Москва,1994; Всероссийской конференции, посвященной 100 летию НИИСХ Северо-Востока, Киров,1995; Научной конференции, посвященной 50 летию Краснодарской НИВС, 1996; Международной конференции«Загрязненность экологических систем токсикантами и актуальные вопросы современной фармакологии и токсикологии» Троицк, 1996; Международном координационном совещании «Экологические проблемы, патологии, фармакологии и терапии животных» Воронеж,1997; Межлабораторном совещании научных сотрудников ВГНКИ, 1998.

Основные подржения, внностмне. на. зашита:

- результаты исследований биологической активности и токсических свойств лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди;

- результаты исследований фармакологического действия препаратов;

- профилактическая и лечебная эффективность лизината цинка при пара кератозе, метионината кобальта при гипокобальтозе и метионината меди при гипокупрозе животных;

- практические предложения по применению препаратов.

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 35 научных работ.

Обьем и структура диссертации. Диссертация изложена на 315 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, предложений для практики, библиографического списка, включающего 437. источников, из них 310 отечественных и 127 зарубежных авторов. Работа иллюстрирован^ 61 таблицами, 7 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1. Материалы и методы

Работа выполнена во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов(отдел экспертизы й стандартизации), Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной санитарии, гигиены и экологии(лаборатория токсикологии),

Центре безопасности Лекарственных средств(лаборатория мутагенеза), Научно-исследовательском ветеринарном институте Нечерноземной зоны РФ. Исследования проводились в период с 1984 по 1997 гг.

Лабораторные образцы биокоординационных соединений синтезированы в лаборатории химии комплексных соединений Института неорганической и физической химии АН Киргизии(двойной метиони-нат натрий медь, двойной метионинат натрий кобальт, двойной глготаминат натрий медь) и на кафедре бионеорганической химии Ташкентского фармацевтического института(лизинат цинка, метионинат цинка, метионинат кобальта и аспарагинат меди), а опытно-промышленные образцы изготовлены на Ливанском биохимическом заводе и Волгоградском заводе «Оргсинтез».

Научно-производственные испытания препаратов проводили в соответствии с временными наставлениями, одобренными Фармакологическим советом и утвержденными Главным управлением ветеринарии. Истытания препаратов проведены совместно с сотрудниками ВГНКИ-Е.И.Марасинской, З.Ю.Аугутавичюс, Г.Т.Приходько; Ташкентского фарминститута-Х.Х.Хакимовым, Э.САмировой; НИВИ нечерноземной зоны-Г.И.Ивановым, Т.Е.Григорьевой; Казанского ветеринарного института-Ю.Н.Калимуллиным, Г.Ф.Кабировым. Испытания препаратов проводили в хозяйствах Московской-Томилинское ППО, ГПЗ«Петровское»,ОПХ«Манихино»; Горьковской-совхоз«Ту-рапский»; Калининской-совхоз«Щеколдино»; Куйбышевской-ЭПО «Поволжское»; Мурманской-совхоз«Тулома»; Виницкой-колхоз«Пе-р*_можець» областях; Татарии-колхоз«П.М.Гаврилова»,совхоз«Сосно-воборский»; Удмуртии-птицефаьрика«Вараксино»; Чувашии-колхаз «Заветы Ильича»; Белоруссии-ГПЗеЗа днепровский»; Литве-колхоз «Рокай»; Узбекистане-«Ташкентская птицефабрика», «Гулистанский племптицерепродуктор», экспериментальная база УзНИИЖ «Красный водопад».

Экспериментальная часть работы выполнена на 894 белых мышах, 180 мышах линии C57BL/6, 1586 белых крысах, 286 морских свинках, 40 кроликах, 50 курах, 420 куриных эмбрионах, 282 цыплятах разной возрастной группы, 312 поросятах и 48 телятах Производственное испытание препаратов проведены на 1073.поросятах, 535 телятах,, 2815 ягнятах, 7 2 0 индейках, 675600 ць.плятах, 40746 песцах и 160 норках. Эффективность препаратов оценивали по их влиянию на сохранность, продуктивность и клинико-физиологические показатели животных. ,

Обще токсические свойства препаратов оценивали методам опреЦ деления острой и хронической токсичности, а отдаленных последствий - изучением аллергенной, эмбриотоксической, тератогенной и мутагенной активности в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвержденными ГУВ СССР.

Исследование острой токсичности препаратов проводили иа белых мышах, белых крысах, поросятах, цыплятах и курах-иесушках. Для оценки токсичности определяли максимально-переносимую до-зу(МПД), абсолютно-смертельную(ЛД|оо) и дозу, вызывающую гибель 50%1 животных(ЛД50).

Выявление кумулятивных свойств препаратов проводили на белых крысах. В опытах использовали тест субхронической токсичности. Вычисление коэффициента кумуляции проводили по формуле Ю.С.Кагана, В.В.Станкевича(1968). Изучение хронической токсичности проводили на белых крысах, получавших препараты в течение шести месяцев.

Первичную оценку тератогенной активности исследуемых соединений проводили на эмбрионах кур, полученных от птицы, которым назначали препараты в течение трех месяцев. Внутренние органы исследовали по методу Вильсона(\УП.чоп,1965), модифицированному отделом эмбриологии Института экспериментальной медицины. Для изучения скелета использовали метод Даусона( Ба \v.son, 1926).

Аналогичные исследования по изучению эмбриотоксической и '' тератогенной активности БКС были проведены на белых крысах при ежедневной их даче на протяжении всей беременности. Для' определения наиболее чувствительных к препаратам сроков беременности учитывали пред - и постимплантационную гибель плодов. Влияние препаратов на постнатальное развитие изучали на рожавшихся белых крысятах.

Степень мутагенной активности БКС исследовали в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке мутагенной активности препаратов, применяемых в животноводстве», утвержденными ГУВ ,РФ(1993). Для выявления генных'мутаций использовали индикаторные штаммы ТА 1950, ТА!)8, ТАЮО, предложенные В.Н.Атез(1973). Штаммы ТА1950 и ТАЮО позволяют учитывать мутации типа замены пар оснований, а ТА98 и ТАЮО-типа сдвига рамки считывания. Штаммы были получены из Центра безопасности лекарственных средств.

Мутаг. иную активность БКС изучали в условиях метаболической активации и без нее. В предложенном В.КАтея методе проводят параллельный учет мутагенной активности исследуемого соединения в условиях наличия и отсутствия метаболической активации. В вариантах с отсутствием метаболической активации при этом не вносят гомогенат и кофакторы. В наших экспериментах мы использовали предложенную Л.М.Фонштейном с соавторами(1983) модификацию метода, где гомогенат вносили во всех вариантах опыта. Условия же наличия или отсутствия метаболической активации создавали внесением в смесь кпфакторов(НАДФ и глюкозе-6-фосфат). Результаты исследований статистически обработаны по методу множественных сравнений Данетта, где предусмотрено логарифми-

рование исходных данных с целью стабилизации дисперсии похаза-теля(С1Хтеи,1955) ^

Для окончательного решения вопроса а степени мутагенной активности БКС использовали метод цитогенетческого анализа «леток костного мозга. При этом учитывали хромосомные аберрации клеток костного мозга мышей линии С57ВЪ/6. Препараты вводили в дозах 1/2 однократно и 1/10; 1/100 ЛД50 в течение одного месяца. Для цитогенетического анализа готовили препараты костного мозга животных по методу СЕ.Гогй, ЛЛ1атегЧоп (1956), позволяющему учитывать повреждения хромосом на стадии мета фазы. При исследовании учитывали одиночные и парные фрагменты, хроматидные и хромосомные обмены. Отдельно регистрировали гепы - пробелы. Статистическую значимость различий в опыте и контроле по показателям процента клеток со структурными аберрациями хромосом определили с помощью критерия Стьюдента.

Аллергенные свойства БКС исследовали на морских свинках и крысах. Первичную оценку раздражающего действия препарата исследовали путем однократных накожных аппликаций в нативном виде и в разных разведениях. Далее проводили многократные(5-30) аппликации препарата на один и тот же участок кожи. Для этого у животных выстригали шерсть на^частке спины размером 2x3 см. Препараты наносили в нативном йиде и в разных разведениях(10, 20, 30, 40, 50 % водные растворы) в течение одного месяца подряд. Местное действие БКС на слизистую желудочно-кишечного тракта исследовали на белых крысах Испытуемые препараты вводили пер-орально в терапевтических и пять раз превышающих дозах в течение шести дней. Так, для лизината цинка эти дозы составляли 10 и 50; для метионината кобальта - 0,3 и 1,5; для метионината меди - 1,0 и 5,0; для концентрата лизина - 300 и 1500 мг/кг. На седьмой день животных убивали, извлекали желудок и проводили макро-и микроскопическое исследование. Ульцерогенную активность препаратов оценивали по числу животных с язвами.

Кроме того, потенциальную аллергенность исследуемых сое дине-, ний изучали на морских свинках методом количественной оценки тяжести пищевой анафилаксии, согласно методических рекомендаций М3(1982). Для этого, животных перорально сенсибилизировали испытуемыми образцами препаратов и пищевым аллергеном. Через 7 и 21 сутки после сенсибилизации внутривенно вводили разрешающие дозы испытуемых образцов и пищевого эталона аллергена. После этого проводили сравнительную оценку тяжести экспериментальной пищевой анафилактической реакции и делали заключение о потенциальной аллергенности исследуемых соединений. Наряду с вышесказанным, аллергенные свойства препаратов исследовали на морских свинках методом гистаминового шока.

Ветеринарно-санитарную оценку мяса животных, получавши* ВКС, проводили с использованием общепринятых методов, руковод-ствуясь«Правилами ветеринарно-санитарного осмотра убойных животных и ветеринрно-санитарной экспертизы мясных продуктов» (М.,1985).

Эксперименты по выяснению механизма фармакологически!'») действия БКС выполнены согласно«Методических рекомендаций но изучению новых препаратов для коррекции метаболизма в организме животных», утвержденных ДВ РФ. Программа исследований включала набор общепринятых тестов, а именно, проводились комшшсс-ные клиника-физиологические и биохимические исследования. О бе-локсинтезирующей функции печени судили по содержанию общего белка и его фракций в сыворотке крови рефрактометрическим методом. Количество свободных аминокислот в сыворотке крови определяли методом ионообменной хроматографии на автоматическом анализаторе аминокислот ААА-339.

Влияние БКС на углеводный обмен исследовали по уровню глюкозы о сыворотке крови ортотлуидиновьгм методом. Липидный обмен оценивали по содержанию общих липидоа и холестерина в сыворотке крови. Минеральный обмен оценивали по содерисанию микроэлементов в крови Активность ферментов, а именно ACT и АДТ определялась динитрофенилгидрозиновьш методом. Данные ферменты позволяют судить не только о функциональном состоянии печени, но и о состоянии мио1сарда, белкового, углеводного и минерального обменов веществ. О состоянии периферической кропи судили по количеству зритроцитов, лейкоцитов(с лейкоцитарной формулой) и гемоглобина. Действие препаратов на функцию печени оцени-'пали методом гексеналового сна.

Действие БКС на показатели резистентности определяли путем исследования бактерицидной и лизоцинной активности сыворотки крови. Определение бактерицидной активности проводили по методу О.В.Смирковой и Т.Н Кузминой (1966), Определение активности лизо-цима в сыворотке крови проводили фотоэлектроколориметрически по методу В.Г.Дорофейчука(1968). ФА нейтрофилов периферической крови определяли с использованием тест-микроба (штамм 209) по методу В.С.Гостева(1664). В мазках подсчитывали 100 нейтрофилов, учитывая фагоцитирующие клетки и количество захваченных ими бактерий. ФА представляли в процентах клеток, вступивших в фагоцитоз, от общего числа. ФИ нейтрофилов составляли отношением общего числа микробных тел, захваченных подсчитанными лейкоцитами, к общему числу исследованных нейтрофилов.

Определение Т-лимфоцитов в периферической крови, исследовали методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана. Определяли процент Е-РОК путем подсчета 200-300 лимфоцитов. Количество В-лимфоцитов определяли также методом розеткообра-

зования с эритроцитами мыши(М-РОК). Способность БКС влиять на развитие клеточной*- иммунного ответа оценивали по реакции ГЗТ. Опыты проводили на мышах линии С57ВЬ/6. Реакцию ГЗТ индуцировали внутрибрюшинным введением эритроцитов барана-ЭБ в дозе 5x10. Уровень ГЗТ оценивали на четвертые сутки с помощью кожных проб. Мышам в подушечку одной из лапок вводили 1x10 ЭБ и 40 мкл физиологического раствора, в другую лапку вводили только физиологический раствор. Через 24 и 48 часов с помощью микромет-ра(МКО-25) измеряли толщину каждой лапки. Разница в толщине характеризовала величину отека и интенсивность реакции ГЗТ. Испытуемые препараты вводили многократно в течение 21 дня в следующих дозах: лизинат цинка- 5; 10; 50; метионинат кобальта-0,15; 0,3; 1,5 и метионинат меди 0,5; 1,0; 5,0 мг/кг. Влияние препаратов на формирование иммунитета оценивали путем определения специфических антител против вакцинного штамма(Ла-Сота) возбудителя Ньюкаслской болезни птиц по РЗГА

Профилактическую и лечебную эффективность препаратов оценивали по их способное! и восстанавливать показатели эритро и гемо-поэза, а также показатели обмена веществ, неспецифической резистентности и нормализации физиологических функций организма больных животных при патологии обмена веществ. Биохимические и морфологические исследования проводились общепринятыми методами, а также при помощи наборов(Лахема) и прибора ААБ-З. Эффективность БКС сравнивали с минеральными солями микроэлементов. При этом, опытные животные получали БКС, а контрольные - микроэлемент и аминокислоту(в равной с опытными животными дозе).

В работе использованы методу ки опубликованные в монографиях П.Т.Лебедева и А.Т.Усовича(1977), ИП.Кондрахина, Н.В.Кирилова и др.(1085), В.Т.Самохина, П.ЕЛетрова и др.(1989); БЛАнтонова, Т.Ф. Яковлевой и др.(1991), а также ГОСТ 22995-88 и ГОСТ 27996-88. Полученный в опытах цифровой материал подвергнут математической обработке методом вариационной статистики по Стыоденту. Разница считалась достоверной при Р<0,05 (АЛГ.Усович, П.Т.Лебедев, 1970). . •

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.1. Характеристика физико-химических свойств препаратов

Лизинат цинка(цикол)- биокоординационное соединение, полу ченное на основе синтеза аминокислоты лизина и микроэлемента цинка. Представляет собой порошок коричневою цвета со специфическим запахом, малорастворимый в воде, с водой образует суспен зию, при этом лизинат цинка переходит в раствор. Химическая формула лизината цинка: С^Нго^О^п. Препарат должен соответствовать требованиям ТУ 10.07.209-91.

Метионинат кобальта - биокоординационное соединение, полученное на основе синтеза аминокислоты метионина и микроэлемента кобальта. Представляет собой мелкокристаллический порошок розового цвета, не растворимый в воде, 95% спирте, эфире, хлороформе; растворим в соляной, серной, азотной кислотах, со слабым специ фическим запахом. Химическая формула метионината кобальта: С1оН20М20482Со. Препарат должен соответствовать требованиям ТУ 9318-151-004.99185-98.

Метионинат меди - биокоординационное соединение, полученное на основе синтеза аминокислоты метионина и микроэлемента иеди. Представляет собой сыпучий однородный порошок от серого до голубого цвета, не растворимый в воде, углеводородах, эфире, мало растворимый в этиловом спирте, со специфическим запахом. Химическая формула метионината меди: СюНго^С^БгСи. Препарат дол жен соответствовать требованиям ТУ 9318-150-00499185-98.

Препараты изготавливаются в соответствии с техническим регламентом, утвергкденным в установленном порядке. По качеству препараты должны соответствовать показателям и нормам, указанным в разделе технических требований. Стандартизация и контроль качества препаратов проводится аналитическими методами по физико-химическим показателям, согласно технических условий.

2.2. Биологическая активность лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди

Биологическую активность БКС оценивали на модели воспроизведенной экспериментально постгеморрагической анемии белых крыс С целью установления эффективной дозы препарата первоначальный скрининг проведен на ограниченном поголовье крыс по три животных в каждой группе. При скрининге были испытаны следующие диапазоны доз: лизинат цинка 1,0-20,0; метионинат кобальта 0,05-1,0; метионинат меди 0,1-2,0 мг/кг. В результате этих опытов были установлены оптимальные дозы, которыми руководствовались в последующих исследованиях.

Далее, в основном опыте было сформировано пять групп крыс по принципу аналогов. Первая, вторая и третья группа животных в течение месяца получали соответственно лизинат цинка 5,0;мети-ошшат кобальта ОД и метионинат меди 0,5 мг/кг. Животные четвертой группы служили в качестве позитивного контроля, которым однократно вводился ферроглюющ-75 в дозе 0,5 мл внутримышечно. Пятая группа животных служила в качестве негативного контроля и 1грепараты им не назначали.

В период опыта за животными опытных и контрольной групп вели ежедневное наблюдение. На 5 и 20 день опыта у всех животных из хвостовой вены брали по 2 мл крови в которой исследовали содержание общего белка, гемоглобина, эритроцитов и гематокрита. Гематологические показатели определяли в динамике начале опыта, далее через 15 и 30 дни опыта. Кроме того учитывали клиническое состояние и динамику массы животных.

На основании проведенных исследований установлено, что йведение БКС профилактируют постгеморрагическую анемию. Так, в опытных группах, получавших лизинат цинка, метионинат кобальта, метионинат меди и ферроглюкин профилактическая эффективность составила соответственно ВО, 90, 90, и 80%. В этих группах не было случаев гибели животных. В тс/" же время в группе негативного контроля зарегистрировано тяжелое течение анемии и гибель 12% животных. Масса тела опытных животных была достоверно выше по сравнению не только с негативны!I, но и позитивным контролем. Результаты исследований позволяют сделать вывод о том, что испытуемые соединения способствуют легче переносить анемию и восстанавливать показатели гемопоэза и эритропоэза.

Лечебную эффективность БКС изучали на крысах, взятых из группы негативного контроля предыдущего опыта. Для этих целей было сформировано пять групп животных Животным первой, второй и третьей группы назначали соответственно лизинат цинка 10, метионинат кобальта 0,2 и метионинат меди 1,0 мг/кг в течение месяца. Четвертая группа животных служили в качестве позитивного контроля и им вводили ферроглюкин-75 в дозе 1,0 мл внутримышечно однократно. Пятая группа животных препараты не получали и служили негативным контролем.

В результате проведенных исследований установлено положительное действие БКС на течение и исход постгеморрагической анемии крыс. У животных, получавших препараты к 15-20 дню постепенно исчезали клинические признаки заболевания. Полное выздоровление больных животных наступало на 25-30 дни лечения. В опытных группах крыс, получавших лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди, выздоровело соответственно 77,8; 88,9; 77,8; против 66,7% в позитивном контроле. Сохранность и среднесуто-

Таблица 1

Показатели крови крыс на фоне применения БКС при постгеморрагической анемии

Группа Показатели л/цинка 10 мг/кг и/кобальта 0,2 мг/кг м/меди 1,0 мг/кг контроль (позитивный) контроль (негативный)

Гемоглобин, г/% до одыта 7,5±0,31

15 дней 11,7±0,21* 12,2±0,23* 11,9±0,26* 12,7^=0,29* 8,8±0,36

30 дней 12,2±0,30* 12,7±0,32* 12,4±0,27* 12,0±0,36* 9,2±0,26

Эритроциты, млн/мм3 до опыта 5,3±0,28

15 дней 8,2±0,15* 8,4±0,24* 8,3±0,17* 8,6±0,28* 6,4±0,31

30 дней 8,5±0,31* 8,8±0,21* 8,6±0,30* 8,2±0,25* 6,7±0,40

Гематокрит, % ' до опыта 26,5±2,13

15 дней 37,9±2,1б* 39,5±2,19* 38,7*3,26' 40,2±2,72* 28,7±2,49

30 дней 38,5±3,05* 40,3±3,15* 39,0±2,84* 36,4±3,38* 29,1 ±3,05

Общий белок, т% до опыта 4,0±0,52

15 дней 6,3±0,28* 6,1 ±0,34* 6,2±0,47* 5,9±0,39* 4,2±0,27

30 дней 6,6±0,43* 6,4±0.45* 6,3±0.50* 5,7±0,52 4.3±0,33

■

*Р<0,05

чный прирост животных в опытных группах также были выше чем в позитивном и негативном контроле. Если сравнить интенсивность роста опытных животных с группой позитивного контроля, то статистически значимой она была только в группе животных, получавших лизииат цинка.

Из таблицы 1 видно, что перед началом опыта у животных регистрировали понижение уровня показателей красной крови. После дачи препаратов они нормализовались и на протяжении всего периода наблюдений находились на более высоком уровне. Сравнивая результаты опытных животных и позитивного контроля, установлена закономерность, что и в предыдущих исследованиях, то есть у крыс, получавших ферроглюкин уровень гемоглобина и гематокритиого показателя были несколько выше через 15 дней, а у опытных, получавших БКС на 30 день. Содержание общего белка у опытных животных на протяжении всего экспериментального периода было выше и статистически отличалось с негативным и незначительно с позитивным контролем. Это явление, вероятно, объясняется тем, что иньекция ферроглюкина оказывает более кратковременный стимулирующий эффект на гемопоэз, а лизииат цинка, метионинат кобальта И метионинат меди при многокрарюм их применении способствуют постепенному его увеличению.

Таким образом, проведенными исследованиями установлено, что лизинат цинка в дозе 5, метионинат кобальта-0,1 и метионинат меди-0,5 мг/кг обладают выражсчным профилактическим действием при анемии белых крыс. При введении препаратов в удвоенных дозах достигается их лечебное действие. Испытуемые соединения способствуют восстановлению показателей красной крови при экспериментальной постгеморрагической анемии белых крыс.

2.3. Общетоксические свойства биокоординационных соединений разных групп

2.3.1. Острая токсичность

Сравнительное исследование острой токсичности БКС показало, что из всех испытанных соединений(рис.1,2) наименее токсичными были препараты, состоящие из простых лигандов аминокислот и микроэлементов(лизин~т цинка, метионинат цинка, метионинат меди, метионинат кобальта и аспарагинат меди). Препараты состоящие из сложных лигандов(двойной метионинат натрий медь, двойной метионинат натрий кобальт, двойной глютаминат натрий медь) были более токсичными соединениями для лабораторных животных. Сульфат цинка оказался самым токсичным среди испытуемых препаратов. Данные исследований показываю*, что токсичность БКС, значительно ниже по сравнению с неорганическими солями микроэлементов

ЛДи "Лг

Уепоанывобсинв.«»**. СИ)-б.^ мыши;

ШШ -

6140

¿Й7

ми:

М«ТИ0**1М4Т собагъта

метионим»т миди

Рис.1 Парамегры острой токсичности БКС

ЛД» ыгЬг

Условные обозначения: — белые мыши;

- бегые |цл>1С4>1.

двойной матионинат натрий медь

двойной метионинат натрий кобальт

двойной гпкяаминат натрий медь

сульфат цинка

Рис.2 Параметры острой токсичности препзрагоа разных групп

Так ЛД50 метионината цинка и лизината цинка в 76-48 раз была меньше по сравнению с сульфатом цинка(рИс.1,2).

Клиническая картина острого отравления при введении животным БКС в летальных и сублетальных дозах характеризуется быстрым развитием симптоматики, кратковременным развитием двигательного возбуждения, сменяющегося дискоординацией движений с последующим длительным пребыванием в состоянии . прострации. Указанные проявления сочетаются со снижением температуры тела и урежением сердечного ритма. Гибель животных наступает, преимущественно, в течение первых суток. При вскрытии отмечают резко выраженную гиперемию внутренних органов, воспаление слизистой пищеварительного канала, переполнение мочевого пузыря, пенистую жидкость в трахее и в бронхах. Нормализация клинического состояния у выживших животных происходила в течение двух-трех суток после введения препаратов.

Таким образом, препараты состоящие из простых лигандов(лизи-нат цинка, метионинат кобальта, метионинат меди, метионинат цинка, аспарагинат меди) являются малотоксичными, а из сложных ли-гандов(двойной метионинат натрий медь, двойной метионинат натрий кобальт, двойной глютаминат натрий медь) могут быть отнесены к среднетоксичным соединениям. Минеральная соль(сульфат цинка) оказался высокотоксичным препаратом.

2.3.2. Хроническая токсичность

Коэффициент кумуляции для лизината цинка(6,4), метионината кобальта(7,0), метионината меди(8,8) и концентрата лизина(8,4) оказался больше 5, что дает право отнести данные соединения к препаратам со слабовыраженными кумулятивными свойствами. Согласно классификации химических веществ по кумуляции сульфат цин-ка(4,7) можно отнести к препаратам с умеренными кумулятивными свойствами.

Изучение хронического действия препаратов в рекомендуемых и десятикратных дозах проведено на белых крысах массой 80-90 г, которым ежедневно в течение 6 месяцев с кормом задавали БКС. Для этого было сформировано по три опытных группы животных по каждому препарату и одна группа крыс служила контролем. Исследуемые дозы для животных 1,2,3 группы составили соответственно для лизината цинка 5,10,50; для метионината кобальта 0,1; 0,2; 1,0; для метионината меди- 0,5; 1,0; 5 и концентрата лизина- 150, 300,1500 мг/кг. Во время опытов учитывали следующие показатели: внешний вид, поведение, потребление корма, изменение массы тела, морфологическая картина периферической крови.

В результате установлено, что испытуемые препараты не вызывали отрицательного действия на организм крыс. Поедаемость корма

во всех группах животных была сравнительно одинаковой. Отмечено увеличение прироста опытных животных, по сравнении! с контрольными. Действие препаратов на обменны ' и физиологические функции лабораторных животных описаны в разделе изучения фармакологических свойста

Таким образом, в итоге можно заключить, что лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди обладают слабовыраженны-ми кумулятивными свойствами. Длительное их применение крысам не оказывает отрицательного действия для животных.

2.4. Оценка возможных отдаленных последствий и побочных свойств лизииата цинка, метионината кобальта и метио-нината меди

2.4.1. Эмбриотропное действие

В опытах по исследованию эмбриотоксического и тератогенного действия лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди на эмбрионах кур, получавших препараты в дозах 1/25 и 1/50 МПД установлено отсутствие эффекта действия. Так, при исследовании эмбрионального материала по Даусону и Вильсону не выявило каких либо нарушений во время инкубации. Основные показатели: масса эмбрионов, печени и сердца, длина конечностей и кранио-каудаль-ный размер на 19 день развития били в близких пределах с контрольными.

При микроскопическом исследовании внутренних органов эмбрионов не выявило каких либо изменений подопытных плодов в сравнении с контрольными. При микроскопическом измерении костей скелета плодов установлено, что размеры центров окостенения в отдельных частях исследованных костей(плечевой, лучевой, логтевой, бедренной и коленной) в подопытных группах находились в близких пределах. Анализ динамики изменения массы цыплят показал отсутствие достоверной разницы между опытом и контролем. Постнаталь-ная гибель наблюдалась в единичных случаях и была сравнима с контролем.

Аналогичные результаты получены при исследовании на крысах как при однократном, так и при многократном введении препаратов. Так, основные показатели, характеризующие эмбриотропное действие препарата-предимплантационная смертность зигот, постимплан-тационная гибель эмбрионов и общая эмбриональная смертность у опытных животных, получавших БКС в исследуемых дозах были в близких пределах с контрольными. При макроскопическом наружном осмотрю плодов и их плацент в опытных и контрольных группах изменений не обнаружено. При микроанатомическом исследовании внутренних органов и костной системы плодов дефектов развития не выявлено, что указывает на отсутствие у них змбриотоксического и тератогенного действия.

Установлено, что роды у опытных самок, получавших БКС наступали, как правило, на 23-24 дни беременности. В те же дни наступали роды и у контрольных самок Численность помета у самок, пачучовших БКС была такой же как и в контроле. Крысята рождались живые без внешних аномалий. Масса и длина опытных крысят мало отличались от контроля на протяжении всего периода исследований. Постнатальная гибель крысят наблюдалась в единичных случаях и была сравнима с контролем, что свидетельствует об отсутствии отрицательного влияния лизината цинка, метионината кобальта и метионинат меди, вводимых в различные дни эмбриогенеза на постнатальиое развитие животных.

2.4.2. Мутагенная активность

2.4.2.1. Генные мутации

Для выявления генных мутаций при применении БКС опыты были проведены на индикаторных штаммах в условиях метаболической активации и без нее. В первом случае, в отличие от опытов без метаболической активации, параллельно включали варианты с полной микросомальной активирующей смесью(ПМАС) и неполной мик-росомальной активирующей смесью(НМАС). В состав первой входили суспензия бактерий, исследуемый' препарат, гомогенат и кофакто-ры(НАДФ, глюкозо-6-фосфат). В вариантах с НМАС вместо кофакторов вносили воду в соответствуют ;м объеме.

При испытании БКС с помощь х- теста 5а1топе11а/микросомы на разных штаммах ТА98, ТА1950, ТА100 во всех случаях были получены отрицательные результаты, демонстрирующие отсутствие мутагенных свойств. При сравнении числа ревертантов контрольных и опытных данных в каждом варианте не выявлено статистически достоверных различий между ними.

Сравнивая результаты тестирования БКС с позитивным контролем, где в качестве последнего в опыт включали заведомо известный мутаген, можно с уверенностью сказать, что отмечена существенная разница. Так, число ревертантов в позитивном контроле (НММ) примерно в 90 раз было больше опытных(испытуемые соединения).

Следовательно, лизинат цинка, метионинат кобальта, метионинат меди, а также концентрат лизина на индикаторных штаммах сальмонелл в условиях метаболической активации и без нее показали отсутствие мутагенного эффекта.

2.4.2.1. Хромосомные аберрации

Данные, характеризующие. индукцию клеток с "хромосомными аберрациями представлены в таблице 2, из которой видно, что при однократном введении БКС в дозе 1/2.ЛД50 не обнаружено достовер-

Таблица 2

Влияние БКС на хромосомы мышей при однократном введении

Препарат, :Эксопо-:Число амали-мг/кг : акция : анроваюодх клеток Гет* Фрагменты : Хромосом оше аберрации Всего повреядокных кетайи»

число: % + число : % : число : % ± число : % ±

Л/цинка. 6 412 2 0,48 ± 0.24 1 0,24 1 0,24 ± 0,17 3 0,72 ± 0,44

2684 24 -495 4 0,81 + 0,46 2 0,40 2 0.40 ± 0.24 6 1.21 + 0.67

48 426 3 0,70 ± 0,52 2 0,47 2 0.47 ± 0.32 5 1,17 ± 0,60

М/кобальта, 6 500 3 0,60 ± 0,38 1 0,20 1 0,20 ± 0.15 4 0,80 ± 0,47

575 24 487 4 0,82 + 0,45 2 0,41 2 0.41 ± 0.27 6 1,23 + 0.79

48 . 448 • 2 0.45 ± 0,27 • 2 0,45 2 0.45 ± 0.32 4 0,90 ± 0.46

М/меди. 6 440 2 0,45 ± 0,31 2 0.45 2 0,45 ± 0.30 4 0.90 ± 0,60

1350 24 495 4 0,81 ± 0,63 3 0,61 3 0,61 ± 0.45 7 1,42 х 0.92

48 413 3 0,73 ± 032 2 0.48 2 0,48 ± 0,29 5 1.21 ± 0.84

Конц-лиаина, 6 480 2 0,42 ± ОЛЬ 2 0,41 2 0,42 ± 0.28 4 0,84 ± 0,41

6100 24 472 4 0,85 ± 0,52 з 0,64 3 0,64 ± 0,43 7 1,49 ± 0,77

48 465 3 0,64 ± 0,34 1 0.23 1 0,23 + 0.22 4 С.88 + 0,44

Контроль 6 452 3 0,66 ± 0,45 2 0,44 2 0,44 ± 0,40 5 1,10 + 0.65

24 474 4 0,86 ± 0,40 2 0,42 2 0,42 ± 0,32 6 1.24 +. 0.52

48 446 2 0,45 ± 0,28 2 0,45 0,45 ± 0,34 4 0.90 ± 0.62

иого увеличения хромосомных аберраций при разных экспозициях. Качественный спектр хромосомных нарушений в контрольных и опытных группах включали гепы и одиночные фрагменты. Сходные результаты получены при многократном введении препаратов в дозах 1/10 и 1/100 ЛДюо.

Обобщая результаты цитогенетических исследований можно заключить, что при введении лизината цинка, метионината кобальта, метионината меди, а также концентрата лизина однократно и при многократном введении в течение одного месяца статистически достоверных различий между контрольными и опытными данными не установлено, что указывает на отсутствие повреждающего влияния испытуемых соединений на хромосомы мышей линии C57BL/6.

2.4.3Аллергенное действие

2.4.3.1. Местно-раздражающие свойства

Результаты проведенного эксперимента свидетельствуют о том, что испытуемые препараты при местном действии не ведут к выработке специфических аллергических антител-реагентов на месте контакта с кожей и слизистой желудочно-кишечного тракта. Язвенных дефектов слизистой оболочки желудка нё выявлена При макро и микроскопическом исследовании отдельных участков слизистой оболочки у всех опытных животных дефектов и язв не выявлено, что свидетельствует об отсутствии улцерогенного действия исследуемых соединений.

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют о гом, что препараты в испытуемых дозах не проявляют раздражающего влияния на кожу, слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта и ротовой полости, а также не обладают ульцерогенным эффектом.

2.4.3.2. Анафилактогенная активность

Результаты оценки сенсибилизирующего действия испытуемых соединений установили отсутствие картины развития анафилактического шока у морских свинок. Сравнивая результаты тяжести анафилаксии животных опытных и контрольной групп можно сказать об отсутствии достоверной разницы между ними. Число животных с летальным исходом на 7 и 21 дни. сенсибилизации после введения лизината цинка составило соответственно 18,7 и 21,3; метионината кобальта- 17,4 и 20,3; метионината меди- 21,3 и 24,5; концентрата лизина- 19,7 и 22,9; против 26,9 и 23,5% в контроле.

Аналогичные данные получены при введении исследуемых соединений с кормом. Тестируемые препараты не приводят к достоверному повышению .тяжести реакции пищевой анафилаксии. Так, число животных с летальным исходом в группе, получавших лизина i

цинка в дозе 10 мг/кг на 7 и 21 дни сенсибилизации составило соответственно 16,6 и 13,3%; а в дозе 50 мг/кг - 23,3 и 26,6% Число животных с летальным исходом у животных, получавших метиони-нат кобальта в дозе 0,3 мг/кг в разные дни (7. 21) сенсибилизации составило 13,3 и 20,0%; а в дозе 1,5 мг/кг - 26,6 и 23,3%. При введении метионината меди в дозе 1,0 мг/к1 число жипотных с летальным исходом в разные дни(7, 21) сенсибилизации составило соответственно 20,6 и 21,7%; а в доле 5,1) мг/кг - 25,6 и 28,2%. После дачи концентрата лизина в дозе 300 мг/кг на 7 и 21 дни сенсибилизации выявлено соответственно 16,8 и 20,9% животных с летальным исходом, а в дозе 1500 мг/кг в те же сроки - 18,6 и 22,4%. Число животных с летальным исходом у животных контрольной группы, получавших ПКМ в разные дни(7,21) сенсибилизации составило соответственно 30,0 и 23,3%.

Результаты аллергенных свойств, исследованных методом шста-минового шока указывают на то, что БКС, а также и концентрат лизина не обладают антигистаминной активностью, поскольку они не предотвратили смерть животных от вводимой дозы гистамина, а также не ускорили ее, что говорило бы о гисгаминном аллергезирую-щем действии. Все животные, опытной и контрольной групп пали приблизительно в одни сроки. Реакция всех животных на введение гистамина была одинаковой и проявлялась депрессией, сонливостью, беспокойством, учащенным дыханием, одышкой, судорогами и смертью.

Статистическая обработка показала, что разница в показателях анафилактического шока и времени наступления гистаминового шока животных опытной и контрольной групп оказалась несущественной, что указывает на отсутствие аллергенных свойств тестируемых прела ратоа

2.5. Санитарно-гигиеническая оценка продуктов убоя животных при применении лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди

Гигиеническую оценку продуктов животноводства на фоне применения БКС проводили на поросятах и цыплятах. В результате проведенных оргаиолептических исследований установлено, что мясо и мясопродукты опытных и контрольных поросят было хорошо обескровленным, бледно-розового цвета, плотной консистенции, при надавливании пальцем ямка быстро выравнивается. Запах поверхностного слои туши специфический. Жир исследуемых туш плотной консистенции, белого цвета, без запаха. Проведенный химический анализ длиннейшей мышцы спины не выявил достоверных изменений содержания воды, протеина, жира и золы.

Аналогичные результаты получены при исследовании препаратов на цыплятах. При этом не выявлено заметных различий в образцах мяса цыплят. По общей сумме баллов, отражающих органо-

лептические свойства изучаемых продуктов, а именно: цвет и консистенция варенного мяса, запах, вкус и прозрачность бульона, не выявлено достоверных отличий от контроля(Р>0,05).

При исследовании влияния мяса цыплят на организм крыс в хроническом токсикологическом эксперименте клиническими наблюдениями не обнаружено разницы динамики массы тела и относительной массы внутренних органов. В течение всего периода крысы равномерно прибавляли в массе, были активны, корм поедали с аппетитом. Биохимическими исследованиями установлено, что показатели обменных процессов находились в пределах физиологической нормы. Функциональное состояние кроветворной системы у животных в опыте не отличалось от контрольной группы.

Таким образом, применение БКС не влияет отрицательно на качество продуктов убоя животных и гарантирует безопасность его использования в питание для людей.

2.6. Фармакологические свойства лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди

2.6.1. Действие на обмен веществ(основные показатели)

Исследования по выяснению действия препаратов на показатели обмена веществ и физиологическое состояние животных проводились путем комплексных клинико-физиологических и биохимических исследований. Исследуемые дезы для животных 1, 2, 3 группы составили соответственно для лизината цинка- 5; 10; 50; для метионината кобальта- 0,1; 0,2; 1,0; для метионината меди- 0,5; 1,0; 5,0 и для концентрата лизина-150, 300, 1500 мг/кг.

Исследованиями установлено, что БКС и концентрат лизина в рекомендуемых дозах не вызывали отклонений от физиологической нормы у лабораторных и сельскохозяйственных животных. При даче препаратов в 10 раз превышающих рекомендуемые дозы наблюдали небольшое снижение потребности в корме и прироста массы тела животных. Установлено увеличение прироста массы животных в опытных группах, по сравнению с контролем. Прибавка массы опытных животных происходила как правило, равномерно в сравнении с таковой контрольной группы. Однако, от первых двух доз она была более интенсивной. Абсолютный и относительный вес сердца, печени и селезенки у крыс оставался в пределах контрольных величин (Р>0,05) в течение всего периода опытов.

При даче лизината цинка в дозах 5 и 10; метионината кобальта-0,1 и 0,2 и метионината меди- 0,3 и 0,6 мг/кг в течение месяца цыплятам установлено увеличение среднесуточного прироста от 1,5 до 8% (в зависимости от дозы) по сравнению с- контролем Применение препаратов цыплятам в течение двух месяцев способствовало увеличению среднесуточного прироста от 7,6 до 16% по сравнению с контрольной птицей. Через месяц после последней дачи препаратов,

среднесуточный прирост опытных цыплят также был выше «гонт-рольных на 1-6%. Аналогичная закономерность отмечена и на поросятах. Среднесуточный прирост у опытны* поросят через один два и три месяца исследований был выше соответственно на 0,5-8; 5,7-13,6 и 1,2-5,5% по сравнению с контрольными. Сходные результаты получены на телятах. Так, через месяц среднесуточный прирост телят был выше на 0.6-7%, через два месяца на 0,4-5% и через месяц после последней дачи препаратов на 1,2-9%. по сравнению с контрольными животными.

Общеклинические данные показали отсутствие статистически достоверной разницы в показателях температуры тела, пульса и дыхания опытных и контрольных животных. Следует отметить, что показатели клинического состояния животных всех групп в течение всего периода экспериментов находились в пределах физиологической нормы.

Биохимических анализы на лабораторных животных не выявили существенной разницы в показателях у опытных и контрольных групп до 3 месяцев исследований. Через три месяца у крыс опытных групп, получавших БКС обнаружено повышение содержание общего белка в сыворотке крови(на 2,5-13,5%), за счет -глобулиновой фракции. Аналогичные результаты получены по уровню содержания гемоглобина. Несколько иные результаты получены при исследовании БКС на птице и молодняке сельскохозяйственных животных. При этом интенсивность обмена веществ в организме повышается раньше чем у лабораторных животных. Так, через месяц исследований установлено повышение до верхнего уровня физиологической нормы, в крови содержания эритроцитов, глюкозы, гемоглобина и общего белка. Аналогичная закономерность установлена после двухмесячного применения препаратоа

С целью глубокого изучения влияния БКС на белковый обмен определено количество свободных аминокислот в сыворотке крови кроликов. Данные о динамике содержания свободных аминокислот позволяют говорить лишь о тенденции незначительного увеличения той аминокислоты которая содержится преимущественно в препарате. Так, лизинат цинка дозе 10 мг/кг способствует небольшому увеличению лизина на 4-7% по сравнению с контрольными животными. У кроликов, получавших метионинат кобальта отмечено незначительное увеличение метионина и цистина. Через месяц исследований количество метионина и цистина у опытных животных составили соответственно 0,44±0,02 и 2,09±0,12, против 0,39±0,02 и 1,97±0,12 мг% в контроле. Аналогичные результаты получены после дачи ме-тионината меди. Так, количество метионина у опытных животных равнялось 0,43±0,02 весь период опыта, а в контроле 0,39±0,02 в первый месяц и 0,38±0,01 мг% во второй месяц исследований. Содержание цистина в опытной группе составило 2,07±0,12 в первый и 2,06*0,10 во второй месяц, против 1,97±0Д2 и 2,01*0,10 мг/% в

контроле. Анализ полученных данных позволяет сделать вывод о позитивном влиянии испытуемых БКС на содержание свободных аминокислот в сыворотке крови животных.

Пока:»атели, характеризующие липидный обмен, а именно содержание общих липидов и общего холестерина у животных опытных и контрольной группы находились в пределах физиологической нормы. Однако, при введении БКС наблюдается тенденция снижения холестерина по сравнению с контрольными животными. При статистической обработке полученных данных установлена достоверность при даче лизината цинка и метиоиината кобальта в дозах соответственно 10 и 0,2 мг/кг. Аналогичные результаты о липотропных свойствах соединений цинка, а именно об угнетении биосинтеза холестерина в печени при экспериментальном атеросклерозе установлены ране« другими авторами(А.И.Искандероы,1983).

Показатели, характеризующие углеводный обмен, а именно содержание глюкозы и крови, не позволяют говорить о существенном ее изменении после введения препарата Антитоксическая функция печени, исследованная по длительности сна, вызываемого вкутри-брюшинным введением гексенала животным опытных и кош-рольной групп не отличаются, это свидетельствует о том, что исследуемые препараты не нарушают обезвреживающую функцию печени. Состояние выделительной системы белых крыс изучали по ряду гестов, позволяющих дать оценку фильтрационной, концентрационной и секреторной функций ночек. Как показал анализ мочи, введение препаратов не приводило к выявлению в моче повышенного содержания белка и элементов, указывающих на развитие патологических процессов в почках и мочевыводящих путях.

Активность сывороточных аминотрансфераз у животных всех опытных групп находились в пределах физиологической нормы. Достоверное увеличение ACT отмечено лишь у животных, получавших лиаинат цинка и метионинат кобальта в дозах соответственно 10 и 0,2 мг/кг через один месяц, в сравнении с контрольными. Далее, в последующий период' исследования через два и три месяца также наблюдается тенденция увеличения ACT у животных, получавших лизинат цинка и метионинат кобальта, но при статистической обработке установлено отсутствие достоверности по сравнению с контролен Следует отметить, что аналогичную закономерность стимуляции естественных факторов защиты организма, в частности небольшое повышение ACT при подкожной инъекции хелатных комплексов установлена и другими автирами(Ю.Н.Калимуллин,1989).

Анализируя данные активности церулоплазмина в крови поросят можно сказать, что все испытуемые соединения, за исключением метионината меди не вызывали статистически достоверных измене-ний(табл.З). Метионинат меди в дозах 0,5 и 1,0 мг/кг способствовал

Таблиц» 3

Влияние БКС на активность церулоплазмина и щелочной фосфатазы в крови поросят

Препарат, мг/кг

Церулопддзмин.

3

Щелочная фосфатаза. мкм/ч/ил

Лмте.,..

' мес.

Лизинат 5 цинка 10

25,7+ 0,85 27,Э± 0,91

31,6± 1,29 32,3± 1,35

0,52+ 0,03* 0,59+ 0,06«

0,56+ 0,04* 0,62± 0,03*

Метионинат 0,1 кобальта 0,2

26,0+ 0,78 27,3+ 0,92

30,8± 1,06 31,9± 1,12

0,48+ 0,04 0,49+ 0,06

0,49+ 0,02' 0,57+ 0,03*

Метионинат 0,5 меди 1,0

29,9+ 0,93* 34,1+ 1,42*

34,7± 1,20* 41,6+ 1,84*

0.42+ 0,04 0,45+ 0,05

0,44+ 0.02 0,46+ 0,04

Контроль

26,4+ 0,82

30,5+ 1,41

0,42+ 0,03

0,40+ 0,03

Таблица 4

Влияние БКС на содержание микроэлементов в крови у поросят, мкмаяь/л

Препарат, мг/кг :_Цинк_;_Медь_;_Железо_: Кобальт_,

_i .1 МГС __I_2 мес. :_1 мес. ;_2 мрс. : 1 нес._;_2 мес. 1 мес. : 2 и ее.__

Лизинат 5 10,9+0,53* 11,9+0,84* 15,4±1,02 16,5+1,21 25,3±1,24 24,9+1,81 0,48±0,03 0,49+0,02

цинка 10 10,6+0,82* 13,2+1,12* 15,0±1.33 16,2+1,00 23,9±1,41 26,8+1.70 0,51+0,04 0,53±0,06

Метионинат 0.1 9,2±0,63 9,7+0,63 15.3±0,84 17,0+0,64 25.2±1,32 28,0+1,53 0,57+0,03* 0,62±0,04*

кобальта 0.2 9,5±0,73 9,9±0,84 15,6+1,12 17,3+0,83 25,6±1,70 29,8+2,02 0,62±0,07* 0,64±0,06*

Метионинат 0,5 9,3±0,52 9,5±0,61 16,4±1,24* 19,5+0,83* 24,9+1,35 27,1 + 1,63 0,46±0,02 0,47+0,04

меди 1.0 8,9+0,65 9,1+0,61 19,8±1,05* 23,2±1,01* 22,5+1,43 26,0±1,34 0,49±0,04 0,49±0,05

Контроль 9,3+0,50 9,7+0,40 15,2±0,83 16,8+0,92 24,8+1,12 27,3±1,62 0,48±0,02 0,46+0,04

более интенсивному синтезу церулоплаэмина и проявлению его активности в сыворотке крови. Установленное повышение активности церулоплаэмина у животных, получавших метионинат меди, вероятно, можно объяснить тем, что медь в комплексе с аминокислотами более активно включается в структуру этого фермента, являющегося основным носителем этого металла. Аналогичная закономерность установлена О.Ф.ДенисовоЙ(1992) при иньекции тирозипата меди.

Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови поросят, получавших метионинат меди не отличалась от контрольных. Установлена достоверная разница повышения активности щелочной фасфа-тазы у животных, получавших лизинат цинка в дозах 5 и 10, А также метионинат кобальта 0,2 мг/кг по сравнению с контролем Это позволяет говорить о том, что для активации данного фермента, вероятно, необходимы ионы цинка и кобальта, содержащие в составе исследуемых соединений.

Данные о содержании микроэлементов!цинка, меди, железа и кобальта) свидетельствуют о том, что БКС способствуют увеличению микроэлементов в крови опытных животных Так, при даче лизината цинка в дозах 5 и 10 мг/кг установлено статистически достоверное увеличение цинка на 17-36% в зависимости от дозы препарата по сравнению с контрольными животными. При применении метионина -та кобальта в дозах 0,1 и 0,2 мг/кг установлено увеличение кобальта в крови опытных поросят в первый месяц на 18 и 29% соответственно и во второй на 30 и 39% по сравнению с контрольными животными. У животных, получавших метионинат меди в дозах 0,5 и 1,0 мг/кг установлено увеличение содержания меди на 8-38% в зависимости от дозы по сравнению с контрольными поросятами(табл.4). Полученные результаты согласуются с данными других авторов (Э.В.Тен,1976; ИЛСтеценко, 1981; В.А. Ершова,1982; СГ.Кузнецов,1989).

2.6.2. Действие на неспецифическую резистентность

Опытами установлено положительное влияние лизината цинка, метио1<ината кобальта и метионината меди на показатели бактерицидной активности сыворотки крови крыс, цыплят, поросят и телят. Клеточные факторы защиты организма, а именно фагоцитарная активность нейтрофилов животных, получавших испытуемые соединения также показали небольшое увеличение по сравнению с контролем. Уровень фагоцитарной активности нейтрофилов у крыс, получавших лизинат цинка равнялся 42,3-52,6; метионинат кобальта-43,7-55,7 и метионинат меди- 42,0-45,0; против 40,0-43,2% у животных контрольной группы. Положительные результаты получены при определении лизоцимной активности(тзбл.5). При статистической обработке установлено достоверное увеличение лизоцимной активности при назначений; лизинат^ цинка в дозах 10 и 50 мг/кг и метионината кобальта в дозах 0,2 и 1,0 мг/кг в течение двух и трех месяцев.

Таблица 5

Влшяше Б КС на уровень лизоцимной активности сыворотки крови крыс

Препарат, мг/кг : ___СР91Ш Ж«1Ш>ВаНИЙ

по опыте : 1 ы«*с. ; 2 мес. : 3 мес

Лнзшшт 5 21,3 ± 1,43 22,0 + 2,07 23,5 ± 1,12 23,4 ± 1,24

ЦИНХ8 10 20,? ± 2.14 24,5 + 1,66 26,2 + 2,06* 28,5 + 1,74*

50 ]0.в± 2,26 24,8 + 1,14 26,4 ± 2,14* 26,7 + 2,06'

Метношшат 0,1 20,2 + 2,03 23,4 ± 1,29 24,3 + 2,42 24,7 ± 2,13

кобальта 0,2 ± 1,88 25,1 + 2,15 27,4 ± 1,93' 28,2 ± 2,51*

1,0 20,е± 1,74 24,9 ± 1.93 27,2 ± 2,19* 28,3 ± 1,86*

Метнонмшт 0,5 21,в ± 2.12 21,8 + 1,42 22,8 + 2,18 22,7 + 2,17

меди »,0 21,2 + 2,05 23,6 + 1,75 24,7 + 2,42 24,3 + 2,10

5,0 10,9 + 1,87 24,0 + 2.00 24,8 + 2,36 24,2 ± 2,03

Кош-роль 20,3 + 2,17 21,2 ± 2,07 20,6 ± 1,42 20,2 ± 1,78

♦ Р < 0,05

Положительное влияние испытуемых соединений на резистентность и иммунобиологическую реактивность организма характеризуется способностью препаратов поддерживать на верхнем уровне физиологической нормы Т и В-лимфоциты(табл.б).

Влияние ВКС на развитие клеточного иммунитета оценивали по реакции гиперчувствительности замедленного типа(ГЗТ). Показано, что препараты не оказывают влияния на величину реакции ГЗТ. Однако, при введении лизината цинка и метионината кобальта в дозах, соответственно' 50 и 1,0 мг/кг наблюдается незначительная тенденция подавления развития ГЗТ.

При изучении влияния БКС на выработку антител к аиру су штамма Ла-Сота установлено повышение титров у цыплят, получавших препараты. Профилактические дозы препаратов не вызывали существенного изменения на формирование иммунитета, но наблюдается небольшая тенденция повышения титров антител. При испытании лечебных доз установлено, что диапазон титров в опытных группах был меньше и на более высоком уровне 1:32-1:512, а при даче лизината цинка в двух пробах сыворотки крови достигал 1:1024, против 1:8-1:128 в контроле.

Таким образом, испытуемые препараты способствуют повышению естественной резистентности животных. Механизм этого действия проявляется способностью препаратов поддерживать на верхнем уровне физиологической нормы показатели бактерицидной и лизо-

Действие Б КС на содержание Т и В-лимфоцитов

Таблица С

Препарат, мг/кг:_КаЛНЗ££ГВ&-ЗЬ_ ■

:_И^имфяаяса—_; В-лимфошпда_

-!_Через 1 мес.; Чгееэ 2 ш?с......: .4<реа 1 мте. :

ШЛ1Л>ггц

Лизииат В 42,0 ± 3,0 42,1 ± 2,5 18,4 ± 1,7 19.0 ± 2,2

цинка 10 43,8 ± 2,8 43,6 + 3,1 20,1 ± 2,3 20,2+1,8

Метионинат 0,1 44.4 ± 2,6 44,5 + 3,9 19,5 ± 2,0 19.4 ± 2,0

кобальта 0,2 44,3 + 3,0 44,6 + 4,0 21,7 ± 2,2 22,0 ± 2.6

Метионинат 0,3 42,5 + 3,2 42,5 + 2,7 20,3 + 1,6 20,0 ± 2,8

Меди 0,6 42,6 ± 2.4 42,8 ± 2,9 20,2 ± 2.4 21,2 ± 3,0

Контроль 37,3 ± 2,1 37,0 + 2,5 15,1 ± 2,4 14.7 + 3,1

ЦСРССЯ1Й

Лизипат 5 35,7 ± 1,4 35,8 ± 2,3 31,3 ± 1,9 32,0 ± 2,9

цинка 10 30,4 +.2,0 39,4 ± 3,1 34,8 ± 2,7 35,7 ± 3,1

Метионинат 0,1 36,0 + 3,3 35,9 ± 2.7 32,7 ± 3,2 33,5 ± 3,4

кобальта 0,2 30,8 + 2,4 33,9 ± 2.2 36,4 ± 2,6 36,2 ± 2,2

Метионинат 0,5 34,1 + 2,4 34,3 + 3,2 30,3 ± 4,0 31,2 ± 3,6

меди 1,0 35,2 ± 2,7 36,4 ± 4,1 34,2 ± 3,6 36,3 ± 3,2

Контроль 33,4 + 2,3 33,2 ± 3,5 29,2 ± 2,8 29,5 ± 3,1

телята

Лизинат 5 25,4 + 2,8 27,3 ±3,2 10,6 ± 1,5 12,9 ± 2,1

пинка 10 27,2 +_3,1 29,4 ± 4,0 12,3 ± 1,8 14,2 ± 3,0

Метионинат 0,15 26,6 ± 3,2 27,2 ± 2,8 12,0 ± 2,0 13.6 + 3,2

кобальта 0,30 27,2 + 3,5 30,6 + 4,2 12,7 ± 1,9 15,4 ± 2,8

Метионинат 0,5 24,8 + 2,8 26,0 + 3,3 11.0 ± 1,7 13,4 ± 2,7

меди 1.0 25,9 ± 3,7 27,9 ± 4,5 11,5 ± 2,2 14,0 ± 2,5

Контроль 26,7 + 3,1 26,9 ±4,2 10,2 ± 2,0 12,7 ± 1,8

цимной активности сыворотки крови, фагоцитарной активности нейтрофилов, Т и В-лимфоцитов, а также активизировать выработку антител на штамма Ла-Сота, не влиять на величину реакции гиперчувствительности замедленного типа.

2.7. Лечебно-профилактическая эффективность биокоорди-нацнонных соединений

2.7.1. Ли-чинат цинка при паракератозе

Результаты опытов показали, что назначение лизината цинка в дозе 5 мг/кг в течение одного месяца поросятам, получавшим рационы с низким содержанием цинка(8,5 мг/кг сухого вещества корма), предо! вращает развитие пара кератоза, поддерживает на нормальном уровне интенсивность роста, сохранность поголовья, морфологический и биохимический статус крови, особенно по содержанию микроэлемента и щелочной фосфатазы. Установлена, что лизинаг цинка лучше, по сравнению с сульфатом цинка, действует на эритропозз и обмен цинка. Профилактическая эффективность при применении лизината цинка и сульфата цинка составили, соответственно 100 и 06,7%

Применение препарата н дозе 10 мг/кг больным животным на фоне паракератоза прекращав - его клинические проявления(рис.З). При этом повышается содержание микроэлемента цинка и щелочной фосфатазы, нормализуется морфологический и биохимический статус крови, возрастает интенсивность роста, стабилизируется сохранность погалоиья(табл.7)

Таблица 7

Гематологические и биохимические показатели поросят, получавших

препараты цинка

Группа Показатели ■ Лигшиат цинка, 10 мг/кг Сульф.цинка,5 мг/кг (контроль, ПОЗИТИВН.) Контроль (негативный)

Гемоглобин, г%

до опыта 8,9*0,12 8,7*0,15 9,0*0,19

через мес. 10,3*0,34* 9,8*0,27* 8,8*0,25

Эритрллн/мм3

до опыта 4,4 ±0,32 4.1*0,26 4,2*0,28

через мес. 5,9*0,47' 5,2*0,32' 4,3*0,26

Общ.белок, г%

до опыта 6,0*0,24 6,2*0,19 5,9*0,25

через мес. 8,1*0,30'* 6,8*0,17 6,2*0,28

Цинк, мкмоль/л

до опыта 6,5*0,47 6,4*0,60 6,6*0,65

через мес. 10,2*0,62" 8,4*0,52* 6,8*0,49

*Р<0,05 по сравнению с негативным контролем

**Р<0,05 по сравнению с позитивным контролем

(00 во 80 70 ею 50 40 30

го ю

Условные

обозначения р" ] — пюикат цима

tLviíivil СУПЬФЙ' ЦИМ»в

50.0

- MetXííHHifai «оСалыз ЙЙ53 ~ супьфат «облльи

- мегимниилт МРДИ

65,7

Кйй - с»пьфаг

83.3

СО,О

.V.V.wJ .•.•.V.'.V,

Г »«'■>«-'ят.'оз

Г ииову^р^з

. i'ik 3 Jlo'iei'.ir.ií гиштс и, препарат»

Животные, получавшие лизинат цинка развивались более интенсивно по сравнении? с контрольными группами. Так, у животных опытной группы среднесуточный прирост составил 343, против 264 в негативном и 328 г в позитивном контроле, то есть выше соответственно на 30 и 5Тс. Кроме тот, в группах негативного и позитивного контролей установлена гибель поросят соответственно 33,3 и 16,7%

2.7.2. Метионинат кобальта при гипокобальтозе

Назначение метишшната кобальта в дозе 0,1 мг/кг свиноматкам в течение 15 дней до и после опороса, получавшим рационы с низким содержанием ко6альта(0,05 мг/кг сухого вещества корма), профилактирует развитие гипокобальтоза у полученного потомства. Применение препарата в дозе 0,2 мг/кг больным гигюкобальтозом поросятам спосогютвует его выздоровлению(рис.З). При этом поддер-

живается в первом случае и нормализуется во втором(табл.8), морфологический и биохимический статус крови, повышается содержание кобальта, интенсивность роста и сохранность поголовья.

Таблица В

Влияние препаратов кобальта на показатели крови поросят, больных гишжоб&дьтоэам

Группа Метионинат Сульф. кобальта, Коитроль

Пок»ватедм кобальте, 0,2 мг/кг 0,5 мг/к.г (коитроль, позит.) (негативный)

Гемоглобин, х%

ДО ОШЛА 7,7*0,14 8,1*0,24 7,8*0,23

'через мес. 10,2*0,25* 8,8*0,30* 8,0*0,31

Эритроциты, млн/та3

до опыта 4,3*0,20 4,4*0,21 4,5*0,34

через юс. 6,8*0,33* 5,4*0,10* 4,6*0,26

Общий белок, Т%

до опыта в, 0*0,28 5,0*0,40 6,2*0,29

через ыес. 8,2*0,36'* 7,0*0,25 6,3*0,30

Кобальт, ккмоль/л

до опыта 0,34*0,01 0,40*0,03* 0,32*0,02 0,53*0,02

через нес. 0,40*0,04 0,35*0,05

*Р<0,05 по срдвнсимю с позитивным контролем **Р<0,05 па сравнению с негативным контролем

Профилактическая эффективность при применении сульфата ко6альта(позитивный коитроль) составила 90,5% животных. В группе поросят чистого контррля, которым иньецировали только ферроглю-кин отмечено заболевание и гибель 9,5% животных

2.7.3. Метионинат ыеди при гипокупрозе

Включение в рацион метионината меди в дозе 0,5 иг/кг свиноматкам, с низким содержанием меди в рационе{1,5 мг/кг сухого вещества корма) в течейие 15 дней до и после опороса профилактиру-ет развитие гипокупроза у полученного потомства. Применение препарата в дозе 1,0 мг/кг больным гипокупрозом поросятам способствует их выздоровлению. При этом поддерживается в первом случае и нормализуется во втором(табл.9, рис.3), морфологический и биохимический статус крови, повышается содержание меди, интенсивность роста и сохранность поголовья. Профилактическая эффективность при применении метионината меди и сульфата меди соста-

вила, соответственно 100 й §0,5%. Иные результаты получены в третьей фуппе Поросят(чистЫЙ контроль), полученных от свиноматок >еотт>рым препараты не давали, а поросят в трехдневном возрасте иньецировали ферроглнжинои. В этой группе заболело 10% поросят и столько же пало. В группе негативного контроля, которым препараты и ферроглюкин не применяли заболели все животные и 11,1% пали.

Проведенные исследования выявили, что до опыта у псе^ животных содержание гемоглобина и число эритроцитов п крови были понижены(табл.9). После назначения метионинат меди установлено достоверное увеличение содержания гемоглобина, эритроцитов и меди в крови опытных животных.

Таблиц» 9

Влияние препаратов меди на показатели крови поросят, больных гилохупрояоы

Группа Метиояинат меди, Сульфат меди, Контроль

Показатели 1,0 мг/кг 2 мг/кг(лозит.) (яегат.)

Гемоглобин, г%

до опыта 7,9*0,19 7,8*0,21 7,8*0,26

через лес. 10,0*0,32* 8,8*0.46 8,0*0,31

Эритроциты, млн/мм3

до опыта 4,4*0,37 4,5*0,36 4,6*0,34

через кос. 6,7*0,25* 5,2*0,27* 4,6*0,26

ОСпр1Й белок, г%

до опыте в,2*0,37 5,8*0,34 6,2*0,29

через нее 8,4*0,42** 6,8±0,37 6,3*0,30

Медь, мкмоль/я

до опыта 6,8*0,47 6,9*0,60 7,0*0,71

через мес. 12,9*1,12* 10,1*0,94 8,1*0,67

*Р<0,05 по сравнению с негативным контролем °**Р<0,05 по сравнению с позитивным контролем

Следовательно, лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди при гипомикроэлементозах являются эффективными средствами(рис-З). Результаты исследований позволяют рекомендовать БКС для профилактики и лечения гипоиикроэлементозов (лизинат цинка при паракератозе, метионинат кобальта при гипокобаль-тозе, метионинат меди при гипокупрозе), так как они способны корректировать показатели обменных процессов и механизмы неспецифической резистентности животных.

2.7.4. Лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди при гипотрофии

Для выяснения лечебной эффективности БКС при гипотрофии было сформировано три группы поросят гипотрофиков месячного возраста. Первая группа поросят в течение месяца получали лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди в дозах, соответственно 5; 0,1 и 0,5 иг/кг. Вторая группа поросят также в течение месяца получали лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди в дозах соответственно 10; 0,2 и 1 мг/кг. Третья группа поросят служила а качестве негативного контроля. Четвертая группа состояла из нормально развивающихся поросят-нормотрофиков, служила в качестве позитивного контроля.

Совместное использование лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди с целью лечения гипотрофии поросят является эффективным. Препараты способствуют восстановлению показателей гемо- и зритропозза, общего белка и неспецифической ре-зистентности(табл.10). В группах поросят-гипотрофикоа, получавшие препараты в профилактических дозах выздоровело 66,7%; а при их назначении в лечебных дозах 83,3%. Сохранность поголовья в этих группах составила соответственно 83,3% и 91,7%; против 60% в контроле. Препараты устойчива обеспечивали среднесуточный прирост массы животных. Так, в первой и второй опытных группах среднесуточный прирост составили соответственно 213 и 237, против 197 в негативном и 210 г в позитивном контроле. Биогенные элементы, входящие в состав препаратов не показали антогонистического действия. Это связано с тем, что причины возникновения гипотрофии полиэтиологические, связанные с алиментарной недостаточностью не одного, а многих минеральных вещеста

Из данных таблицы 10 видно, что БКС способствуют восстановлению показателей гемо и зритропозза, общего белка и неспецифической резистентности. До опыта морфологические и биохимические показатели у поросят-гипотрофиков были ниже физиологических и достоверно отличались от поросят-нормотрофиков. Наилучшие результаты получены при даче БКС в лечебных дозах. Назначение препаратов в профилактических дозах также показали статистически достоверное увеличение показателей гемо и зритропозза, а также неспецифической резистентности организма поросят-гипотрофикоа

Анализируя результаты определения бактерицидной активности сыворотки крови как интегрального фактора неспецифической гуморальной защиты организма, отражающее в основном иммунный статус животных можно сказать, что у поросят, получавших БКС этот показатель был выше контрольных на 14,6-16,3% в зависимости от дозы.

Таблица 10

Влияние БКС на показатели крови по^осят-гипотрофиков

Группа I 2 3 4

Показатели ___

Гемоглобин, г$>

до опыта 8,1*0,27" 7,9*0,19" 8,2*0,21** 11,6*0.32

после 0,7*0,31' 10,6*0,25* 8,0*0,15 11,8*0,43

Эритроциты, млн/мм3

до опыта 4,5*0,18** 4,3*0,14" 4,6*0,21" 5,9*0,10

после 5,4*0,12* 5,7*0,20* 4,4*0,17 5,8*0,15

Общий белок, т%

до опыта 6,0*0,22" 5,8*0,24** 6,1*0,31" 8,1*0,35

после 7,2*0,30* 7,9*0,18* 5,9*0,27 8,1*0,26 Вак-грицидн&я активность, %

до опыта 40,3*2,14" 40,1*2,36" 41,6*2,17" 48,5*2,18

после 46,9*1,26* 47,6*2,19* 40,9*2,04 48,0*2,35 Лизоцимная активность, %

до опыта 50,3*3,06" 50,0*2,15" 51,3*2,07" 58,9*2,12

после 56,4*2,78 58,5*2,10* 51,0*2,14 58,3*3,81

'Р<0,05 по сравнению с негативным контролем

**Р<0,05 по сравнению с позитивным контролем

Другой показатель, а именно лизоцим как индуктор макрофа-гальной функции организма у гипотрофиков играет важную роль в гуморальной защите организма. Активность лизоцима при применении БКС также увеличивалась на 10,6-14,7% в зависимости от дозы по сравнению с контролем.

Таким образом, установлено, что лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди при их совместном применении для лечения нарушений обмена веществ, в частности гипотрофии поросят, оказались эффективными. Препараты способствовали выздоровлению животных, увеличивали сохранность и прирост их массы, а также восстанавливали морфологические показатели гемо и эритро-гюэза, стимулировали резистентность органйзма.

2.8. Научно-производственное испытание лизината цинка, метишошата кобальта и метионината меди

На основании проведенных научно-производственных испытаний установлено, что лизинат цинка обладает выраженной лечебно-профилактической эффективностью при паракератозе сельскохозяйственных животных и пушных зверей. Профилактическая и лечебная эффективность препарата на поросятах составила, соответственно 92,5-06,0 и 91,2-96,8%. Среднесуточный прирост массы у опытных животных был выше на 12-16,7; а затраты корма ниже 36% по сравнению с контрольными. Влияние препарата на убойные качества откормочных подсвинков показало, что убойный выход у животных опытной группы было на 1,9; а выход мяса в туше на 2,7% выше, чем и контрольной группе.

При применении препарата овцам установлено, что он способствует увеличению шерстной продуктивности на 9-16 и сохранности поголовья на 4-9% Аналогичная закономерность установлена при испытании лизината цинка на цыплятах, и курах у которых увеличивалась яйценоскость до 7,2%. Применение лизината цинка нетелям повышало содержание цинка в сыворотке крови и активизировал гуморальные факторы резистентности животных, а также профилак-тировал не только пара кератоз на 64,2; но и на 62,8% остеодистро-фию. У песцов и норок препарат повышал продуктивные качества пушник зверей. У опытных животцых отмечено улучшение качества махи и товарных качеств шкурок.

Результаты испытания метионината кобальта в условиях производства также подтвердили данные экспериментальных исследования Профилактическая и лечебная эффективность препарата на сельскохозяйственных животных в разных хозяйствах колебались, соответственно, п пределах 94,3-96,5 и 90-95,6%. Препарат повышает среднесуточный прирост массы животных на 7,3-17,6 и сохранность поросят на 4-6% по сравнению с контрольными.

Аналогичные результаты получены При испытании метиони-ната кобальта на ягнятах и овцах. Добавление препарата i:урак-несушка ы способствует повышению яйценоскости на 5-7, сохранности на 1-3 и снижению затрат кормов на 2,5-3%. При применении метиошшата кобальта индюшатам сохранность птицы составила 87, против 73% в контроле. Препарат способствует повышению показателей роста зверей и качества, полученного от них ыеха. Сохранность молодняка песцов и норок, получавших препарат была выше на 4-7% по сравнению с контрольными.

Научно-производственные испытания метионината меди показали высокую эффективность при его применении в течение 15 дней свиноматкам до и после родов. Препарат способствовал улучшению

репродуктивных качеств, а у полученного потомства увеличению концентрации гемоглобина и эритроцитоа В опьЬ-ных группах маток отмечен рост числа приплода в помете в среднем на 3-5 и массы поросят на 4-6% в сравнении с контрольными животными. Масса опытных поросят к отъемному возрасту отличалась от контрольных и была выше на 6,0-11,2%. Сохранность поросят опытных групп, получавших дополнительно метионинат меди колебался в пределах 95-97%, а в контрольных 89-95%. Профилактическая и лечебная эффективность препарата на поросятах в разных хозяйствах колебалась в пределах соответственно 94,5-95,0 и 89-93,6% Аналогичные результаты получены при испытании метионииата меди на ягнятах, птице, песцах и норках. *

Суммируя результаты научно-производственных испытаний БКС, можно сделать общий вывод о том, что все препараты лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди оказывали положительное профилактическое и лечебное действие на организм сельскохозяйственных животных и пушных зверей. Полученные данные позволяют рекомендовать испытуемые соединения в качестве лечебно-профилактических средств при нарушениях обмена веществ, а именно при гипомикроэленентозах животных, в частности лизинат цинка при паракератозе, метионинат кобальта при гипокобальтозе и метионинат меди при тапокупрозе.

ВЫВОДЫ

1. Обьем и характер результатов проведенных исследований подтверждает целесообразность выделения из числа препаратов, включающих в свой состав микроэлементы в особую их группу с присущими ей биокоординационными свойствами. Препараты этой группы содержат не механическую смесь отдельных элементов, а синтезированы путем окислительно-восстановительных реакций, образующих химическую связь(хелатной структуры) микроэлементов и аминокислот. К ним относятся лизинат цинка, метионинат кобальта, метионинат меди.

2. Показано, что лизинат цинка в дозах 5-10; метионинат кобальта- 0,1-0,2 и метионинат меди- 0,5-1,0 мг/кг проявляют биологическую активность на фоне патологии обмена веществ, а именно при воспроизведенной экспериментальным путем постгеморрагической анемии крыс. Препараты корректировали морфологические и биохимические показатели крови, интенсивность роста животных, показали профилактический и лечебный эффект Для скрининга биологической активности биокоординационных соединений, целесообразно воспроизведение соответствующей патологии обмена веществ.

3. Определено, что биокоординационныб соединения, состоящие из простых лигандных форм являются малотоксичными. ЛД50 лизината

цинка для мышей, крыс и цыплят составили соответственно 5367, 13100 и 28125 мг/кг; метионинат кобальта- 1150, 1470 и 6140 мг/кг; метионината меди- 2700, 62300 и 7435 мг/кг. ЛД30 аспарагината меди для мышей и крыс - 2090 и 5800 мг/кг. ЛД50 метионината цинка для мышей равнялась Й500 мг/кг.

4. Установлено, что биокоординационные соединения, состоящие иа сложных лигандных форм являются среднетоксичными. ЛД5а двой ного метионината натрия меди для мышей и крыс равнялась, соответственно, 392 и 750 мг/кг; двойного метионината натрия кобальта-383 и 650мг/кг; двойного глютамииата натрии меди- 500 и 433 мг/кг. Неорганические соли микроэлементов оказались самыми токсичными. ЛД50 сульфата цинка для мышей и крыс равнялась, соответственно, 112 и 260 мг/кг, что в 48-76 раз выше биокоординационных соединений цинка.

5. Определено, что лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди обладают слабовыраженными кумулятивными свойствами, коэффициент кумуляции для перечисленных препаратов составили, соответственно, 6,4; 7,0; 8,8; а сульфат цинка показал умеренные кумулятивные свойств«- 4,7. Применение биокоординационных соединений крысам в течение шести месяцев в рекомендуемых и десятикратных долах не оказывало отрицательного влияния на филологическое состояние животных, процессы пищеварения и мочеотделения, на основные морфологические и биохимические показатели крови, прирост и относительную массу внутренних органов.

6. Выявлено, что лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди, а также концентрат лизина а дозах 1/25 и 1/50 МПД и терапевтических дозах не обладают эмбриотоксическим и тератогенным действием на эмбрионы кур и крыс и не влияют отрицательно на посткаталыюе развитие животных

7. Показано, что лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди, а также концентрат лизина и дозах 0,1, 1, 10, 100, 1000 мкг/чашку не вызывают мутагонных эффектов у индикаторных штаммов Salmonella typhimurium о условиях метаболической активации и без тч\

8. Введение ли.чината цинка, метионината кобальта и метионината меди, а также концентрата лизина мышам линии C57BL/6 однократно в дозе 1/2 ЛДМ) и многократно в течение одного месяца а Дозах 1/10 и 1/100 ЛД;,„ не вызывают повреждающего влияния на хромосомы.

9. Показано, что лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди, а также концентрат лизина в испытуемых дозах не проявляют раздражающего влияния на кржу,-слизистую, оболочку желудочно-кишечного тракта и ротовой полости, не обладают аллер-

тезирующими свойствами. Препараты в рекомендуемых долах не оказывают отрицательного влияния на органолептичоские и биохимические показатели мяса сельскохозяйственных животных.

10. Фармакодинамика лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди обусловлена благотворным действием на обменные процессы организма животных, а именно способностью поддерживать на верхнем уровне физиологической нормы в крови крыс, цыплят, поросят и телят содержание эритроцитов, глюкозы, гемоглобина и общего белка. Препараты положительно влияют на биохимические показатели аминокислот и ферментов, минеральной) и линидного обмена, а также на интенсивность роста, функциональное состояние печени, дыхания, сердечно-сосудистой и, выделительной системы.

И. Лизинат цинка в дозах 5 и 10 мг/кг и мотионинат кобальта в дозе 0,2 мг/кг способствуют повышению щелочной фасфатазы соответственно на 24,0-55,0%" и 22,5-42,5% Установленное повышение активности щелочной фасфатазы позволяет утверждать о том, что для активации этого фермента, необходимы ионы цинка и кобальта, содержащиеся в составе исследуемых соединений. Метионинат меди в дозе 0,5-1,0 мг/кг способствовал более интенсивному синтезу церу-лоплазмина и проявлению его активности в крови на 13-36%. Установленное повышение активности церулоплазмина у опытных животных, получавших метионинат меди, мы связываем с тем, что медь в комплексе с аминокислотами более активно включается в структуру фермента, являющегося основным носителем этого металла.

12. Выявлено, что биокоординационные соединения способствуют увеличению уровня микроэлементов в крови опытных животных,

. Назначение лизината цинка(5 и 10 мг/кг) способствует увеличению содержания цинка в среднем на 26; метионината кобальта(0,1 и 0,2 мг/кг)-кобальта на 28 и метионината меди(0,5 и 1,0 мг/кг)-меди на 23%

13. Определено, что лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди положительно действуют на показатели неспецифической резистентности крыс, цыплят, поросят и телят. Механизм этого действия проявляется способностью препаратов поддерживать на верхнем уровне физиологической нормы, показатели бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, фагоцитарной активности нейтрофилов, Т и В лимфоцитов, не влиять на величину гиперчувствительности замедленного типа, а также активизировать выработку антител на штамм Ла-Сота.

14. Назначение. .Лизината цинка ,в дозе 5 мг/кг в течение одного (месяца поросятам; пблучавшим рационы с низким содержанием цинка, предотвращает развитие паракератоза, поддерживает на нормальном- уровне интенсивность роста, сохранность поголовья, морфо-

логический и биохимический статус крови, особенно по содержанию микроэлемента и щелочной фосфатазы. Применение препарата в дозе 10 мг/кг больным животным на фоне паракератоза прекращает его клинические проявления. При этом повышается содержание микроэлемента цинка и щелочной фосфатазы, нормализуется морфологический и биохимический статус крови, возрастает интенсивность роста, стабилизируется сохранность поголовья.

15. Назначение метионината кобальта в дозе 0,1 мг/кг свиноматкам в течение 15 дней до и после опороса получавшим рационы с низким содержанием кобальта профилактирует развитие гипоко-бальтоза у полученного потомства. Применение препарата в дозе 0,2 мг/кг больным гипокобальтозом поросятам способствует его выздоровлению. При этом поддерживается в первом случае и нормализуется во втором, морфологический и биохимический статус крови, повышается содержание микроэлемента кобальта и щелочной фосфатазы, интенсивность роста и сохранность поголовья.

16. Включение в рацион метионината меди в дозе 0,5 мг/кг свиноматкам в течение 15 дней до и после опороса профилактирует развитие гипокупроза у полученного потомства. Применение препарата в дозе 1,0 мг/кг больным гипокупрозой поросятам способствует их выздоровлению. При этом поддерживается в первом случае и нормализуется во втором, морфологический и биохимический статус крови, повышается содержание микроэлемента меди и церулоплазмина, интенсивность роста и сохранность поголовья.

17. Совместное использование лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди с целью лечения гипотрофии поросят является эффективным. Препараты способствуют восстановлению показателей гемо- и эритропоэза, общего белка и неспецифической резистентности. В группах поросят-гипотрофиков, получавшие препараты в профилактических дозах выздоровело 66,7%; а при их назначении в лечебных дозах 83,3% Сохранность поголовья в этих группах составила соответственно 83,3% и 01,7%; против 60% в контроле. Препараты устойчиво обеспечивали среднесуточный прирост животных. Биогенные элементы, входящие в состав препаратов не показали антогонистическаго действия. Это связано с тем, что причины возникновения гипотрофии полиэтиологнческие, связанные с алиментарной недостаточностью не одного, а многих минеральных вещеста

18. Производственными испытаниями, проведенными совместно с специалистами разных предприятий, подтверждена эффективность лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди; Они обладают профилактическим(92-96%) и лечебным(89-96,8%) действием при их применении сельскохозяйственным животным и пушным зверям. Эффективность применения препаратов обусловлена

повышением гемо- и эритропоэза, белкового и минерального обменов и неспецифической резистентности, а также увеличением в среднем на 11,5% среднесуточного прироста и до 9% сохранности животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для профилактики и лечения заболеваний животных, связанных с нарушением обмена веществ, а именно при гипомикроэлемен-тозах целесообразно применять лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди соответственно при паракератозе, гипокобальтоле и гипокупрозе, а также гипотрофии их совместным применением. Препараты изготавливают и применяют.на основании следующей нормативной документации:

г

-«Технические условия на промышленное производство лиаината цинка» - ТУ 10.07.209-91, согласованные ВГНКИ и утвержденные-ГУВ РФ 12.11.1991 г.

-«Технические условия на промышленное производство метионина-та кобальта» - ТУ 9318-151-00494185-98, согласованные ДВ РФ и утвержденные ВГНКИ 17.03.1998 г.

-«Технические условия на промышленное производство метиони-ната меди» - ТУ 9318-150-00494185-98, согласованные ДВ РФ и утвержденные ВГНКИ 17.03.1998 г.

-«Наставление по применению лизината цинкаодобренное Фармакологическим советом 17.10.1995, протокол №5 и утвержденное ДВ МСХП РФ 17.03.1998 г.

-«Наставление по применению метионината кобальта ».одобренное Фармакологическим советом 17.10.1995, протокол №5 и утвержденное ДВ МСХП РФ 17.03.1998 г.

-«Наставление по применению метионината меди ».одобренное Фар макологическим советом 17.10.1995, протокол №5 и утвержденное ДВ МСХП РФ 17.03.1998 г.

Для определения фармакологических и токсикологических свойств новых биологически активных препаратов разработаны ряд методических рекомендаций:

-«Методические указания по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвержденные ГУВ СССР 1991 г.

-«Методические рекомендации по оценке мутагенной активности препаратов, применяемых в животноводстве», утвержденные ГУВ МСХ РФ 1993 г.

-«Методические рекомендации по экспериментальному изучению новых фармакологических препаратов, содержащих минеральные вещества, предлагаемых для применения в животноводстве и ветери-

парии», одобренные Фармакологическим советом ДВ 17.10.1995 г. про го кол N»5, утвержденные ДВ МСХП РФ 1998 г. -«Методические рекомендации по изучению новых препаратов для коррекции метаболизма в организме животных», одобренные ВФБС 12.02.1998 г. протокол №1 и утвержденные ДВ РФ 1998 г.

СПИСОК РЛВОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Токсикологическая оценка и перспективы использования хелатного соединения цикол в животноводстве.//Тезисы докладов научно-теоретической конференции «Экология окружающей среды» -Ташкент, 109О.-С.65-66.

2 К вопросу о контроле качества, эффективности и безопасности биологически активных препаратов.//Всесоюзное совещание. "Биологически активные вещества гидробионтов-новые лекарственные, лечебно-профилактические и технические препараты" Владивосток,1991.-С.60-61

3 Контроль качества, эффективности и безопасности лекарственных средста//Всесоюзная научная конференция."Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов. Москва,1991.-С.27-28.

4. Влияние комплексного соединения - цикила на рост и развитие поросят.//Всесоюзная научная конференция «Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов" Москва, 1991.-С.230-231

5. Влияние биостимулятора цикол на рост и продуктивность свиней и кур-несушек.//Тезисы докладов Выездной сессии секции бионеорпшической химии Научного Совета по неорганической химии АН СССР. 1991.-С93(в соавторстве).

6. Изучение острой токсичности ыетионата кобальта.//Тезисы докладов к 5-й межгосударственной межвузовской научно-практической конференции " Новые фармакологические средства в ветеринарии" Санкт-Петербург, 1993.-С. 109(в соавторстве).

7. Влийние цикола на некоторые факторы естественной резистентности.//Тезисы докладов к 5-й межгосударственной межвузовской научно-практической конференции "Новые фармакологические средства в ветеринарии" Санкт-Петербург, 1993.-С.39(в соавторстве).

8. Изучение общетоксических свойств'препарата МОС//Тезисы докладов к 5-й межгосударственной межвузовской научно-практической конференции "Новые фармакологические средства в ветеринарии" Санкт Петербург, 1Й93.-С.128(в соавторстве).

9. Влияние хел&тных соединений метислшта и лизина н*1 эмбриогенез птиц и крыс.//С6орник научных трудов. "Проблемы профи-

лактики и лечения заболеваний с/х животных" Нижний Новгород, 1993.-С.220-227.

10. Аллергенное действие биокоординационных соединений.// Сборник научных трудов. «Проблемы ветеринарной санитарии и экологии»Москва,1994.-С.64-65.

11. Влияние биокоординационных соединений на функцию почек// Сборник научных трудов.«Проблемы ветеринарной санитарии и экологии»Москва,1994.-С.65-66.

12. Влияние биокоординационных соединений на функцию печени/ / Сборник научных трудов."Проблемы ветеринарной санитарии и зкологии".Москва,1994.-С.66-67.

13. Токсикологичестая оценка микро1сапсулированного препарата из хвои //Сборник научных трудов ВГНКИ. Москва, 1994.-C.6l-67(с соавторами).

14. Исследование биологического действия некоторых хелатных соединений.//Сборпик научных трудов ВГНКИ. Москва,1994.-С90-93.

15. Оценка тератогенных свойств некоторых хелатных соединений.//Сборник научных трудов ВГНКИ Москва, 1094.-С.93-96

16. Препарат микбак-средство повышения резистентности норок//Тезисы Всероссийской научной конференции"Иммуно-дефи-циты с/х животных"Москва,1994.-С42-43(в соавторстве).

17. Влияние препарата риал на естес-пзеетгую резистентность животных.//Тезисы Всероссийской научной конференции"Имму-нодефициты с/х животных"Москва,1994.-С.62-63(в соавторстве).

18. Биокоординация резистентности цыплят и поросят пеп-тидсодержащими препаратами// 1 Всероссийская научная кон-ференця«Иммунодефициты с/х животных».Тез.докл.-М.1994.-С.64 -66(в соавторстве).

19. Защита телят и поросят раннего возраста от смешанных инфекций аллогенными серопрепаратамя//Сборник научных трудов ВГНКИ. Москва, 1995-С.10-20(с соавторами).

20. Токсикологическая оценка нового витаминно-минерального препарата.//Сборник научных трудов ВГНКИ. Москва, 1995.-С.54-60(с соавторами).

21. Определение генетической токсичности (мутагенности) химических соединений в окружающей среде.//Сборник научных трудов "Сельскохозяйственная наука северо-востока европейской част» России" Киров, 1995.-С.35-37(с соавторами).

22. Общетоксическое действие симбионтного препарата. // Материалы научной конференции, посвященные 50-летию Краснодарской НИВС"Состояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечению болезней с/х животных и птиц" Краснодар, 1996.-С.84-85(с соавторами).

23. Биологически активный препарат для птицеводства.//Ма-териалы научной конференции, посвященные 50—летию Краснодарской НИВС "Состояние и перспективы развития научных иссле-

доьанмй по профилактика и лечению болезней с/х живот-ных и и«ициКрасж»дар,Ш6.-С.Б7-88|;с соавторами).

24. Влияние метионата кобальта на некоторые показатели ;л специфической резистентности организма животных.//Материалы научной конференции, посвященные 50-летию Краснодарской НИВССостояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечению болезней с/х животных и птиц" Краснодар, 1996.-С.&8-89.

25. Влияние метионата цинка на некоторые показатели обме-на аещоств //Материалы научной конференции, посвященные 50-летию Криснодасрской НИВССостояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечению болезней с/х животных и (пиц" Краснодар,199б.-С.89-90.

26. Использование комплексного соединения на основ« микроэлементов а кормлении кур.//Материалы научной конференции, посвященные 50-летию Краснодарской НИВССостояние и лерспектиаы развития научных исследований по профилактике н лечению болезней с/х животных и птиц" Краснодар, 199(3.-С.90-91(с соавторами).

27. Результаты исследований биологической активности метионата меди.//Материалы научной конференции, посвящен-ные 50-летию Краснодарской НИВССостояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечению болезней с/х жизотных и птиц" Краснодар,1996.-С.91-92.

28. Результаты исследований биологической эффективности цикола.//Материалы научной конференции, посвященные 50-ле-тию Краснодарской НИВС "Состояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечению болезней с/х животных и птиц" Краснодар,1996.-С.92-94.

29. Изучение специфической активности скмбионтного препарата.//Материалы научной коференции посвященные 50-летию Краснодарской НИВС "Состояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечению болезней с/х животных и птиц" Краснодар, 1996.-С.82-83(в соавторстве).

30. Результаты исследований кумулятивных свойств биокоор-динационпых соединений.//Материалы международной конкуренции. "Загрязненность экологических систем токсикантами и актулъные вопросы современной фармакологии и токсикологии. Подютовка кадров" Троицк, 1996.-С.62-63.

31. Общетоксическое действие биокоординационных соединений.// Материалы международной конференции." Загрязненность экологических систем токсикантами и актуальные вопроси современной фармакологии и токсикологии. Подготовка кадров" Тро-ицк

• 1996.-С.61-С2.

32. Биологические свойства биокоординационных соединений. //Материалы международной конференции/'Загрнзненность зко-

логических систем токсикантами и актуальные вопросы сопре-менной фармакологии и токсикологии. Подготовка кадров" Троицк, 1906,-С.60-61. '

33. Влияние биокоординационных соединений на функцию печени//Международное координационное совещание."Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных" ВоронежД997.-С.204-205.

34. Действие биокоордияационных соединений на оби«*»! веществ и физиологическое состояние животных./ /Международное координационное совещание. "Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных" Воронеж, 1997 -С.205

35. Действие биокоординационных соединений на покаяатрли естественной резистентности организма жшютны>г.//Между11арод ное координационно».» говейн ио."Згоогич^'-кис проблемы патологии, фармакологии и горячий житннмх" Воронеж. -С

ВНИИВСГЭ, }99Й г.. г.Москва, Звенигородское ш.5 заказ 2734/3, тираж 100 гжа

Актуальность темы. Основной задачей, стоящей перед ветеринарной наукой и практикой, является защита здоровья животных от заболеваний инфекционного и незаразного характера. Общепризнано, что наибольший удельный вес(свыше 95%) заболеваний составляют незаразные болезни животных(16,231,248,300). Радикальным путем решения этой проблемы следует считать изыскание эффективных и безопасных лечебно-профилактических средств (15,18,20,52,66,218, 238,260,261,267,272).

В общей номенклатуре незаразных болезней значительную долю занимают гипомикроэлементозы(паракератоз, гипокобальтоз, гипоку-проз, анемия и другие эндемические болезни), наносящие животноводству значительный экономический ущерб(35,88,99,125,156,163,164, 245,266,320,322,358,364,370).

Проблема гипомикроэлементозов усугубляется тем, что в последние годы отмечается повсеместное нарушение баланса микробиогенных металлов-комплексообразователей в системе почва-растение-животное(44,45,108) и они имеют тенденцию к росту, что связано с постоянным уменьшением в почве и растениях содержания многих биоэлементов, в том числе цинка, кобальта, меди, железа, марганца, йода и других(132,144,151,280,357,408). Установлено, что поступление микроэлементов с кормами рациона даже в условиях Черноземных областей обеспечивает от 30 до 70% потребности организма в них (245).

Для профилактики и лечения гипомикроэлементозов в настоящее время используются микроэлементы в виде неорганических солей. Однако, используемые в клинической практике лекарственные средства в такой форме недостаточно эффективны. Это связано с тем, что биологическая доступность микроэлементов из неорганических солей невелика(не более 20-30%) и организм животных даже при достаточном количестве их в рационе может испытывать дефицит (73,117,164,182,217,269).

Дефицит микроэлементов в организме животных связан также и с невозможностью включения их в обмен, так как для этого они нуждаются в специальных носителях(аминокислоты, белки и другие) (114,220,269). Поэтому с углублением знаний о роли биологически активных веществ в жизнедеятельности животного организма, внимание ученых сосредоточено на комплексных препаратах, полученных путем синтеза микроэлементов с аминокислотами или другими веществами и входящих в группу биокоординационных соединений. Функциональная активность этих соединений обусловлена их способностью образовывать хелатные структуры и участвовать во всех метаболических реакциях и в клеточном химизме(106,123,269,257,287, 312,366,390,391). Однако, многие стороны биологического действия, токсикологических свойств и лечебно-профилактической эффективности биокоординационных соединений остаются неизученными. Отсутствует нормативная документация на применение и производство, не налажен их промышленный выпуск.

Учитывая перспективность данной группы препаратов, в соответствии с требованиями к лекарственным средствам(приказ ДВ МСХП РФ №31 от 23.10.1995) нами проведены комплексные исследования по выяснению фармакологических и токсикологических свойств лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди, с целью их внедрения в ветеринарную практику. Работа выполнена в соответствии с государственным заданием, включена в плановую тему ВГНКИ(госрегистрационный номер 01860107515) и задание ГУВ СССР(тема 07.04.01. 1986-1990 г. и 04.06.04.Д. 1991-1995 г.).

Цель и задачи исследований. Основная цель настоящей работы состояла в исследовании фармакологического действия и токсических свойств лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди, а также в выяснении их профилактической и лечебной эффективности при гипомикроэлементозах животных.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

- изучить биологическую активность биокоординационных соединений;

- исследовать общетоксические и аллергенные свойства, эмбриоток-сическую, тератогенную и мутагенную активность препаратов;

- изучить фармакологическое действие биокоординационных соединений на обменные процессы и неспецифическую резистентность;

- определить лечебно-профилактическую эффективность лизината цинка при паракератозе, метионината кобальта при гипокобальтозе, метионината меди при гипокупрозе животных;

- разработать нормативную документацию на испытуемые препараты, методы контроля и наставления по применению;

- внедрить препараты в промышленное производство и сельское хозяйство

Научная новизна работы состоит в новом решении проблемы ги-помикроэлементозов, путем применения биокоординационных соединений. Препараты этой группы: лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди представляют не механическую смесь отдельных элементов, а синтезированы путем окислительно-восстановительных реакций, образующих химическую связь(хелатной структуры) микроэлементов и аминокислот. Научно обоснована и экспериментально доказана целесообразность коррекции микроэлементной недостаточности организма предложенными препаратами. Установлен высокий уровень биологического действия и лечебно-профилактической эффективности биокоординационных соединений по сравнению с биогенными металлами в форме минеральных солей.

В результате работы установлено, что биологические эффекты препаратов находятся в определенной зависимости не только от типа химической связи, но и от их химической природы. Показано, что препараты, состоящие из простых лигандов (лизинат цинка, метио-нинат кобальта, метионинат меди, аспарагинат меди) являются малотоксичными, со слабовыраженными кумулятивными свойствами, а препараты состоящие из сложных лигандов(двойной метионинат натрий медь, двойной метионинат натрий кобальт, двойной глютаминат натрий медь) относятся к среднетоксичным соединениям. Показано также, что минеральная соль(сульфат цинка) является высокотоксичным соединением, с умеренными кумулятивными свойствами.

Установлено отсутствие отдаленных последствий применения лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди, а именно эмбриотоксического, тератогенного, мутагенного и аллергенного действия. Это гарантирует безопасность их применения для животных и через продукты питания для людей.

Исследовано фармакологическое действие лизината цинка, метионината кобальта, метионината меди и раскрыт механизм их фар-макодинамики, проявляющийся позитивным действием на обменные процессы, неспецифическую резистентность и физиологические функции организма животных. Показано, что препараты эффективно влияют на процессы эритропоэза, гемопоэза, обмен белков и дифференцированно на метаболизм минеральных веществ и некоторых ферментов. Так, лизинат цинка эффективно влияет на обмен цинка и активность щелочной фосфатазы, метионинат кобальта на обмен кобальта и активность щелочной фосфатазы, а метионинат меди на обмен меди и активность церулоплазмина. Установлено, что положительный эффект биокоординационных соединений на обменные процессы значительно выше минеральных веществ.

Научная новизна исследований защищена авторским свидетельством^ 1653710 от 08.02.1991г.).

Практическая значимость работы. Для профилактики и лечения гипомикроэлементозов животных, предложена новая группа препаратов - биокоординационные соединения(лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди), с научно обоснованными рекомендациями применения при паракератозе, гипокобальтозе и гипокупрозе, а также гипотрофии. Разработана нормативная документация, определяющая условия технологического процесса их производства, показатели качества и методы контроля. Препараты выпускают на Ливанском биохимическом заводе и Волгоградском заводе«Оргсинтез».

Наставления по применению препаратов и технические условия на опытную партию одобрены Фармакологическим советом и утверждены ГУВ СССР, на серийное производство - ДВ МСХП РФ.

На основании фармако-токсикологических исследований БКС, экспертной оценки препаратов и документации, представленной в ВГНКИ и Ветфармбиосовет, а также обобщения данных литературы, в соавторстве, разработаны:

-«Методические указания по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве»;

-«Методические рекомендации по оценке мутагенной активности препаратов, применяемых в животноводстве»;

-«Методические рекомендации по экспериментальному изучению новых фармакологических препаратов, содержащих минеральные вещества, предлагаемых для применения в животноводстве и ветеринарии»;

-«Методические рекомендации по изучению новых препаратов для коррекции метаболизма в организме животных».

Указанные методические рекомендации позволяют объективно оценивать биологические и токсические свойства препаратов, а также совершенствовать все этапы испытания и внедрения в практику ветеринарной медицины высокоэффективных и безопасных средств, которые необходимы для исследователей, проводящих скрининг новых биологически активных веществ.

Препараты экспонировались во ВВЦ РФ в 1993,1994,1996,1997 и удостоены 5 медалей«Лауреат ВВЦ».

Апробация результатов исследований. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на отчетных заседаниях ученого совета ВГНКИ, 1985-1997; Госветфармкомиссии ГУВ СССР 1988-1991; Фармакологического совета ДВ РФ, 1995; Всесоюзной научной конференции«Экология окружающей среды» Ташкент,1990; Всесоюзном совещании« Биологически активные вещества гидробионтов-новые лекарственные, лечебно-профилактические и технические препараты» Владивосток,!991; Всесоюзной научной конференции«Совер-шенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов» Москва, 1991,1994,1995; Всесоюзной научной сессии секции бионеорганической химии АН СССР, Бишкек, 1991; Российской конференции «Проблемы диагностики, профилактики и лечения сельскохозяйственных животных в нечерноземной зоне» Нижний Новгород, 1992,1993; Межгосударственной межвузовской научно практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» Санкт-Петербург, 1993; Всероссийской конференции«Использование новых методов диагностики и фармакологических средств в лечении и профилактике незаразных болезней животных»Воронеж,1993; Всероссийской конференции«Проблемы ветеринарной санитарии и эко-логии»Москва,1994; Всероссийской конференции, посвященной 100 летию НИИСХ Северо-Востока, Киров,1995; Научной конференции, посвященной 50 летию Краснодарской НИВС, 1996; Международной конференции «Загрязненность экологических систем токсикантами и актуальные вопросы современной фармакологии и токсикологии» Троицк, 1996; Международном координационном совещании «Экологические проблемы, патологии, фармакологии и терапии животных»

Воронеж,1997; Межлабораторном совещании научных сотрудников ВГНКИ, 1998.

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты исследований биологической активности и токсических свойств лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди;

- результаты исследований фармакологического действия препаратов;

- профилактическая и лечебная эффективность лизината цинка при паракератозе, метионината кобальта при гипокобальтозе и метионината меди при гипокупрозе животных;

- практические предложения по применению препаратов.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

4. ВЫВОДЫ

1. Объем и характер результатов проведенных исследований подтверждает целесообразность выделения из числа препаратов, включающих в свой состав микроэлементы в особую их группу с присущими ей биокоординационными свойствами. Препараты этой группы содержат не механическую смесь отдельных элементов, а синтезированы путем окислительно-восстановительных реакций, образующих химическую связь(хелатной структуры) микроэлементов и аминокислот. К ним относятся лизинат цинка, метионинат кобальта, метионинат меди.

2. Показано, что лизинат цинка в дозах 5-10; метионинат кобальта- 0,1-0,2 и метионинат меди- 0,5-1,0 мг/кг проявляют биологическую активность на фоне патологии обмена веществ, а именно при воспроизведенной экспериментальным путем постгеморрагической анемии крыс. Препараты корректировали морфологические и биохимические показатели крови, интенсивность роста животных, показали профилактический и лечебный эффект. Для скрининга биологической активности биокоординационных соединений, целесообразно воспроизведение соответствующей патологии обмена веществ.

3. Определено, что биокоординационные соединения, состоящие из простых лигандных форм являются малотоксичными. ЛД50 лизината цинка для мышей, крыс и цыплят составили соответственно 5367, 13100 и 28125 мг/кг; метионинат кобальта- 1150, 1470 и 6140 мг/кг; метионината меди- 2700, 62300 и 7435 мг/кг. ЛД50 аспарагината меди для мышей и крыс - 2090 и 5800 мг/кг. ЛД50 метионината цинка для мышей равнялась 8500 мг/кг.

4. Установлено, что биокоординационные соединения, состоящие из сложных лигандных форм являются среднетоксичными. ЛД50 двой ного метионината натрия меди для мышей и крыс равнялась, соответственно, 392 и 750 мг/кг; двойного метионината натрия кобальта-383 и 650мг/кг; двойного глютамината натрия меди- 500 и 433 мг/кг. Неорганические соли микроэлементов оказались самыми токсичными. ЛД50 сульфата цинка для мышей и крыс равнялась, соответственно, 112 и 260 мг/кг, что в 48-76 раз выше биокоординационных соединений цинка.

5. Определено, что лизинат цинка, метионинат кобальта и мети-онинат меди обладают слабовыраженными кумулятивными свойствами, коэффициент кумуляции для перечисленных препаратов составили, соответственно, 6,4; 7,0; 8,8; а сульфат цинка показал умеренные кумулятивные свойства- 4,7. Применение биокоординационных соединений крысам в течение шести месяцев в рекомендуемых и десятикратных дозах не оказывало отрицательного влияния на физиологическое состояние животных, процессы пищеварения и мочеотделения, на основные морфологические и биохимические показатели крови, прирост и относительную массу внутренних органов.

6. Выявлено, что лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди, а также концентрат лизина в дозах 1/25 и 1/50 МПД и терапевтических дозах не обладают эмбриотоксическим и тератогенным действием на эмбрионы кур и крыс и не влияют отрицательно на постнатальное развитие животных.

7. Показано, что лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди, а также концентрат лизина в дозах 0,1, 1, 10, 100, 1000 мкг/чашку не вызывают мутагенных эффектов у индикаторных штаммов Salmonella typhimurium в условиях метаболической активации и без нее.

8. Введение лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди, а также концентрата лизина мышам линии C57BL/6 однократно в дозе 1/2 ЛД50 и многократно в течение одного месяца в дозах 1/10 и 1/100 ЛД50 не вызывают повреждающего влияния на хромосомы.

9. Показано, что лизинат цинка, метионинат кобальта и метио-нинат меди, а также концентрат лизина в испытуемых дозах не проявляют раздражающего влияния на кожу, слизистую, оболочку желудочно-кишечного тракта и ротовой полости, не обладают аллергезирующими свойствами. Препараты в рекомендуемых дозах не оказывают отрицательного влияния на органолептические и биохимические показатели мяса сельскохозяйственных животных.

10. Фармакодинамика лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди обусловлена благотворным действием на обменные процессы организма животных, а именно способностью поддерживать на верхнем уровне физиологической нормы в крови крыс, цыплят, поросят и телят содержание эритроцитов, глюкозы, гемоглобина и общего белка. Препараты положительно влияют на биохимические показатели аминокислот и ферментов, минерального и липидного обмена, а также на интенсивность роста, функциональное состояние печени, дыхания, сердечно-сосудистой и выделительной системы.

11. Лизинат цинка в дозах 5 и 10 мг/кг и метионинат кобальта в дозе 0,2 мг/кг способствуют повышению щелочной фасфатазы соответственно на 24,0-55,0% и 22,5-42,5%. Установленное повышение активности щелочной фасфатазы позволяет утверждать о том, что для активации этого фермента, необходимы ионы цинка и кобальта, содержащиеся в составе исследуемых соединений. Метионинат меди в дозе 0,5-1,0 мг/кг способствовал более интенсивному синтезу церу-лоплазмина и проявлению его активности в крови на 13-36%. Установленное повышение активности церулоплазмина у опытных животных, получавших метионинат меди, мы связываем с тем, что медь в комплексе с аминокислотами более активно включается в структу ру фермента, являющегося основным носителем этого металла.

12. Выявлено, что биокоординационные соединения способствуют увеличению уровня микроэлементов в крови опытных животных. Назначение лизината цинка(5 и 10 мг/кг) способствует увеличению содержания цинка в среднем на 26; метионината кобальта(0,1 и 0,2 мг/кг)-кобальта на 28 и метионината меди(0,5 и 1,0 мг/кг)-меди на 23%.

13. Определено, что лизинат цинка, метионинат кобальта и ме-тионинат меди положительно действуют на показатели неспецифической резистентности крыс, цыплят, поросят и телят. Механизм этого действия проявляется способностью препаратов поддерживать на верхнем уровне физиологической нормы, показатели бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, фагоцитарной активности нейтрофилов, Т и В лимфоцитов, не влиять на величину гиперчувствительности замедленного типа, а также активизировать выработку антител на штамм Ла-Сота.

14. Назначение лизината цинка в дозе 5 мг/кг в течение одного месяца поросятам, получавшим рационы с низким содержанием цинка, предотвращает развитие паракератоза, поддерживает на нормальном уровне интенсивность роста, сохранность поголовья, морфологический и биохимический статус крови, особенно по содержанию микроэлемента и щелочной фосфатазы. Применение препарата в дозе 10 мг/кг больным животным на фоне паракератоза прекращает его клинические проявления. При этом повышается содержание микроэлемента цинка и щелочной фосфатазы, нормализуется морфологический и биохимический статус крови, возрастает интенсивность роста, стабилизируется сохранность поголовья.

15. Назначение метионината кобальта в дозе 0,1 мг/кг свиномат-„кам в течение 15 дней до и после опороса получавшим рационы с низким содержанием кобальта профилактирует развитие гипоко-бальтоза у полученного потомства. Применение препарата в дозе 0,2 мг/кг больным гипокобальтозом поросятам способствует его выздоровлению. При этом поддерживается в первом случае и нормализуется во втором, морфологический и биохимический статус крови, повышается содержание микроэлемента кобальта и щелочной фос-фатазы, интенсивность роста и сохранность поголовья.

16. Включение в рацион метионината меди в дозе 0,5 мг/кг свиноматкам в течение 15 дней до и после опороса профилактирует развитие гипокупроза у полученного потомства. Применение препарата в дозе 1,0 мг/кг больным гипокупрозом поросятам способствует их выздоровлению. При этом поддерживается в первом случае и нормализуется во втором, морфологический и биохимический статус крови, повышается содержание микроэлемента меди и церулоплазмина, интенсивность роста и сохранность поголовья.

17. Совместное использование лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди с целью лечения гипотрофии поросят является эффективным. Препараты способствуют восстановлению показателей гемо- и эритропоэза, общего белка и неспецифической резистентности. В группах поросят-гипотрофиков, получавшие препараты в профилактических дозах выздоровело 66,7%; а при их назначении в лечебных дозах 83,3%. Сохранность поголовья в этих группах составила соответственно 83,3% и 91,7%; против 60% в контроле. Препараты устойчиво обеспечивали среднесуточный прирост животных. Биогенные элементы, входящие в состав препаратов не показали антогонистического действия. Это связано с тем, что причины возникновения гипотрофии полиэтиологические, связанные с алиментарной недостаточностью не одного, а многих минеральных веществ.

18. Производственными испытаниями, проведенными совместно с специалистами разных предприятий, подтверждена эффективность е. лизината цинка, метионината кобальта и метионината меди. Они обладают профилактическим(92-96%) и лечебным(89-96,8%) действием при их применении сельскохозяйственным животным и пушным зверям. Эффективность применения препаратов обусловлена повышением гемо- и эритропоэза, белкового и минерального обменов и неспецифической резистентности, а также увеличением в среднем на 11,5% среднесуточного прироста и до 9% сохранности животных.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для профилактики и лечения заболеваний животных, связанных с нарушением обмена веществ, а именно при гипомикрозлемел тозах целесообразно применять лизинат цинка, метионинат кобальта и метионинат меди соответственно при паракератозе, гипокобальтозе и гипокупрозе, а также гипотрофии их совместным применением. Препараты изготавливают и применяют на основании следующей нормативной документации:

-«Технические условия на промышленное производство лизината цинка» - ТУ 10.07.209-91, согласованные ВГНКИ и утвержденные ГУВ РФ 12.11.1991 г.

-«Технические условия на промышленное производство метионина-та кобальта» - ТУ 9318-151-00494185-98, согласованные ДВ РФ и утвержденные ВГНКИ 17.03.1998 г.

-«Технические условия на промышленное производство метиони-ната меди» - ТУ 9318-150-00494185-98, согласованные ДВ РФ и утвержденные ВГНКИ 17.03.1998 г.

-«Наставление по применению лизината цинка», одобренное Фармакологическим советом 17.10.1995, протокол №5 и утвержденное ДВ МСХП РФ 17.03.1998 г.

-«Наставление по применению метионината кобальта»,одобренное Фармакологическим советом 17.10.1995, протокол №5 и утвержденное ДВ МСХП РФ 17.03.1998 г.

-«Наставление по применению метионината меди»,одобренное Фармакологическим советом 17.10.1995, протокол №5 и утвержденное ДВ МСХП РФ 17.03.1998 г.

Для определения фармакологических и токсикологических свойств новых биологически активных препаратов разработан ряд методических рекомендаций:

-«Методические указания по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвержденные ГУВ СССР 1991 г.

-«Методические рекомендации по оценке мутагенной активности препаратов, применяемых в животноводстве», утвержденные ГУВ МСХ РФ 1993 г.

-«Методические рекомендации по экспериментальному изучению новых фармакологических препаратов, содержащих минеральные вещества, предлагаемых для применения в животноводстве и ветеринарии», одобренные Фармакологическим советом ДВ 17.10.1995 г. протокол №5, утвержденные ДВ МСХП РФ 1998 г. -«Методические рекомендации по изучению новых препаратов для коррекции метаболизма в организме животных», одобренные ВФБС 12.02.1998 г. протокол №1 и утвержденные ДВ РФ 1998 г.