Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологические свойства препарата гемовит-плюс

На правах рукописи

Пчельников Дмитрий Владимирович

Фармако-токсикологические свойства препарата готовит — плюс

16.00.04 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Краснодар - 2005

Работа выполнена на кафедре «Основ ветеренарии, акушерства и зоогигиены» Тверской Государственной Сельскохозяйственной академии, во Всероссийском государственном Центре качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов МСХ РФ

Научный руководитель Доктор биологических наук

профессор Дорожкин В.И.

Официальные оппоненты Доктор ветеринарных наук

профессор Шипицин А.Г.

Кандидат ветеринарных наук Семененко М.П.

Ведущая организация Всеросийскнй научно-исследовате-

льский ветеринарный институт паталогин, фармакологии и терапии

Защита диссертации состоится « wOttJ 2005 года в « /2-» часов на заседании дисертационного совета Д 220.038.07 в Кубанском государственном аграрном университете (350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13).

С дисертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан 2005г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, к.в.н. ^^SCfpf^ В. Н. Боровой

1 .ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Среди незаразных заболеваний животных особое место занимают нарушения обмена веществ, связанные с недостатком в организме животных микроэлементов, называемые гипомикроэлементозами. Эти заболевания приводят к торможению роста и развития животных, снижению интенсивности процессов пищеварения и использования питательных веществ, расстройству функций воспроизводительной системы (В.И. Георгиевский и др., 1979; В.Т. Самохин, 1981; CJM Сулейманов, 1985; ИЛ. Кондрахин, 1989; В. Н. Жуленко, О. И. Волкова, Б. В. Уша и др., 1998; А. Г. Шахов и др., 2003,2004; В. И.Беляев и др., 2004).

Для профилактики и лечения гипомикроэлементозов в настоящее время используются микроэлементы в виде неорганических солей. Однако, использование в клинической практике лекарственных средств в такой форме недостаточно эффективно. Это связано с тем, что биологическая доступность микроэлементов из неорганических солей невелика (не более 20-30%) и организм животных даже при достаточном количестве их в рационе может испытывать дефицит (В Л Георгиевский; 1979, Э.В. Тен, 1987).

Дефицит микроэлементов в организме животных связан также и с затруднениями при включении их в обмен веществ, так как для этого они нуждаются в специальных носителях (аминокислоты, белки и др.) (Э.В. Тен, 1987; Ю.Н. Калимулин, 1991; СВ. Пантелеев, 1994). Поэтому в последние годы внимание учёных сосредоточено на комплексных препаратах, полученных путем синтеза микроэлементов с аминокислотами или другими веществами, входящими в группу биокординационных соединений (В.И.Дорожкин, 1998; О.В.Мерзленко, В А Антипов, 1998; Г. К. Кабиров, 2000). Функциональная особенность этих соединений обусловлена их способностью образовывать хелатные структуры и участвовать во всех метаболических реакциях (БД. Кальницкий, 1986; Э.В. Тен, 1987). Однако, многие стороны биологического действия некоторых соединений, токсикологические и лечебно-профилактические свойства остаются не изученными.

В связи с этим актуальным остается вопрос разработки биокоординационных соединений, наиболее удобных в применении и эффективно решающих проблему гипомикроэлементозов, изучение их токсикологических, фармакологических и лечебно-профилактических свойств и проведение мероприятий по внедрению этих препаратов в производство. Одним из таких препаратов является препарат гемовит-плюс - хелатное соединение ряда микроэлементов: Бе, Мп, /п, Си, Со, Бе, I с этилендиаминдиянтарной кислотой.

Учитывая перспективы данной группы препаратов нами проведены исследования по выяснению фармакологических и токсических свойств препарата гемовит-плюс.

Цель и задачи исследований. Целью работы являлось изучение фармако-токсикологических свойств препарата гемовит-плюс.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи: - изучить токсичность препарата гемовит-плюс;

- изучить влияние препарата на неспецифическую резистентность организма лабораторных и сельскохозяйственных животных;

- изучить влияние препарата на минеральный обмен организма животных;

- изучить лечебно-профилактические свойства гемовита-плюс;

- подготовить нормативную документацию по применению препарата;

Научная новизна. Впервые были изучены токсические, фармакологические и лечебно-профилактические свойства гемовита-плюс. Установлено, что препарат относится к малотоксичным соединениям, со слабо выраженными кумулятивными свойствами, действует положительно на показатели неспецифической резистентности, морфологический состав крови и минеральный обмен, обладает лечебно-профилактическим действием при гипомикроэлементозах животных.

Практическая ценность работы. Для профилактики и лечения алиментарной анемии животных, повышения неспецифической

резистентности предложен новый препарат - гемовит-плюс. На препарат разработана нормативная документация: технические условия и наставление по его применению, утвержденные Департаментом ветеринарии МСХ РФ.

Апробация. Основные материалы диссертационной работы доложены: на международной научной конференции «Современные достижения и проблемы клеточной биотехнологии и иммунологии в ветеринарной медицине» Всеросийский НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко 15-16 мая 2003 года; научной конференции молодых ученых и специалистов Московской ГСХА им. К.А. Тимирязева 3-4 июня 2003 года; методических комисиях и заседаниях ученого совета ФГУ ВГНКИ 2001 -2003 годов; заседаниях ветфармбиосовета Департамента ветеринарии МСХ РФ 19 июля 2002 года; межкафедральном совещании ТГСХА 9 ноября 2004 года.

Публикации. По результатам исследований опубликовано 11 научных

статей.

• Основные положения, выносимые на защиту.

- результаты исследований токсикологических свойств препарата гемовит-плюс;

- результаты исследований фармакологических свойств гемовита-

плюс;

- лечебно - профилактическая эффективность препарата гемовит-плюс. Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 142

страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, -описания методик, собственных экспериментальных исследований, обсуждения их результатов, выводов и предложений для производства. Работа иллюстрирована 23 таблицами, 15 графиками, список литературы включает 214 источников, в т.ч. 61 иностранных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы Работа выполнена в Тверской государственной сельскохозяйственной академии, во Всероссийском государственном центре

качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов МСХ РФ (ФГУ ВГНКИ) и ООО «Гемовит».

Препарат гемовит-плюс изготовлялся в соответствии с временными техническими условиями ТУ 9337 - 003 - 40720721 - 02, разработанными ООО «Гемовит». В качестве испытуемого материала были использованы партии препарата гемовит-плюс марки А в форме раствора. Препарат по качественным показателям и химическому составу соответствовал требованиям, предъявляемым к продукции промышленного изготовления. В одном мл препарата гемовит-плюс содержится: Fe - 20 мг, Мп - 9 мг, Zn -12 мг, Си - 2 мг, Со - 0,25 мг, J - 0,33 мг, Se - 0,17 мг.

Исследования по испытанию препарата проводились на 270 беспородных белых мышах, 231 белых крысах, 40 кроликах породы шиншилла, на 60 коровах чёрно-пёстрой породы в глубокой стадии стельности (сухостойный период), 180 телятах от рождения до шестимесячного возраста. Широкие производственные испытания проводились на 700 коровах и 2532 телятах.

Исследования по определению токсичности препарата гемовит-плюс проводились на белых крысах согласно «Методическим указаниям по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве (Справочник «Ветеринарные препараты» №8). Параметры острой токсичности вычисляли по методу Кербера. Кумулятивные свойства препарата изучали по методу Лим с сотр., (1961). При исследованиях учитывали следующие показатели: внешний вид и поведение животных, состояние волосяного покрова и видимых слизистых оболочек, приём корма и воды, акты дефекации и мочеиспускания, консистенцию и цвет каловых масс, время возникновения и характер интоксикации, её тяжесть и обратимость, сроки гибели животных и картину патологоанатомических изменений внутренних органов. После убоя крыс были взвешены внутренние органы (сердце, печень, почки, селезёнка) и вычислен коэффициент корреляции по отношению к массе тела. Действие препарата при многократном введении в течение месяца изучали на трех группах коыс массой тела 80-100 г

подобранных по принципу пар аналогов. Животные первой и второй группы получали гемовит-плюс в рекомендованной дозе 0,01 мл (12 мг/кг) и 0,2 мл (240 мг/кг), что в 20 раз больше рекомендованной, животные третьей группы препарат не получали. Препарат ежедневно вводился в пищеварительный тракт животным опытных групп на дистиллированной воде при помощи зонда. Взвешивание крыс проводилось ежедекадно в течение всего опыта, масса внутренних органов измерялась в конце опыта.

Аллергические свойства гемовита-плюс исследовали на белых крысах. Первичную оценку раздражающего действия препарата исследовали путем однократных накожных аппликаций. Далее проводили многократные (5-30) аппликаций препарата на один и тотже участок кожи. Для этого у животных выстригали шерсть на участке спины размером 2 на 3 см. Препарат наносили в течении одного месяца. Местное действие гемовита-плюс на слизистую желудочно-кишечного тракта исследовали на белых крысах. Испытуемый препарат вводили перорально в терапевтической и в пять раз превышающей дозах в течении шести дней. На седьмой день животных убивали, извлекали желудок и проводили макро и микроскопические исследования.

Кроме того исследования проводили на кроликах породы шиншилла. Дня проведения опыта было создано три опытных группы кроликов, получавших следующие дозы препарата: животные первой опытной группы 0,1 мл (120 мг/кг), второй 03 мл (360 мг/кг), третьяей 0,5 мл (600 мг/кг). Гемовит добавляли в корм один раз в сутки в течение 45 дней. Животные контрольной группы получали обычный рацион. У животных на 15, 30 и 45 день опыта брали кровь для гематологических исследований общепринятыми методами (Меньшиков В. В., Делекторская Л.Н и др. 1987). Определение биологической активности гемовита-плюс проводили на половозрелых кроликах породы шиншилла, при клеточном содержании в одинаковых условиях при равноценном кормлении. Кроликов в опытные и контрольные группы подбирали по принципу аналогов по 10 животных в группе. Было создано четыре группы кроликов. Животные первой группы получали препарат в дозе 0.1 мл (120 мг/кг). второй 0.3 мл (360 мг/кг). третьей 0.5 мл

(600 мг/кг). Гемовит добавляли в корм один раз в сутки в течение 30 дней. Кролики четвертой контрольной группы получали общехозяйственный рацион. До опыта и по его окончанию в крови кроликов исследовали лизоцимную, бактерицидную активность сыворотки, фагоцитарную активность лейкоцитов, активность комплемента по гемолизу, морфологический состав лейкоцитов, фракционный состав белков. Определение активности лизоцима в сыворотке крови проводили по (Дорофейчуку А.Г. Колабская Л.С. и др., 1980). Определение бактерицидной и фагоцитарной активности лейкоцитов проводили фотонефелометрическим методом (Чернушенко Е. Ф., Когосова Л. С, 1978). Комплементарную активность определяли с помощью колориметрической методики Вагнера (Плященко И. П., Сидоров В. Т., 1979). Морфологический состав лейкоцитов исследовали в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимза. Определение общего белка проводили рефрактометрическим методом (Лабораторные исследования в ветеринарии, 1991). Количественное определение соотношения фракций белков сыворотки крови проводили методом электрофореза по методике Кудашевой А. В. и Шестака С.С. (Лебедев П Т., Усович А.Т., 1976).

Исследования влияния препарата на показатели неспецифической резистентности и морфологический состав лейкоцитов сельскохозяйственных животных проводили на телятах черно-пестрой породы в возрасте трех месяцев. Для этого были сформированы две группы телят по 10 животных. Телята опытной группы ежедневно в течение 30 дней с кормом получали препарат гемовит-плюс, в дозе 5 мл на животное в сутки с молоком индивидуально. Животным контрольной группы препарат не давали. У телят до начала опыта и по его окончанию брали кровь на исследования: бактерицидной, лизоцимной, фагоцитарной активности, активности комплемента и морфологического состава лейкоцитов.

Влияние препарата на минеральный обмен изучали на телятах черно-пестрой породы. Для чего подобрали опытную и контрольную группы животных по 10 телят в группе. Телятам опытной группы В РАЦИОН вводили

препарат гемовит-плюс в течении 45 дней. До опыта на 15,30 и 45 день опыта у телят брали кровь на исследование содержания микроэлементов в сыворотке крови. В те же сроки кровь брали у контрольных животных.

Профилактическое действие препарата гемовит-плюс изучали на стельных сухостойных коровах черно-пестрой породы. Было сформировано две группы коров по 10 животных. Коровы опытной группы получали препарат . в количестве 10 мл на животное в сутки, животные контрольной группы получали общехозяйственный рацион. Во время опыта проводили наблюдения за общим состоянием коров, протеканием беременности, прохождением отелов, отделением последа, наличием послеродовых осложнений. У шести животных из каждой группы до опыта и после его окончания брали кровь на биохимические и гематологические исследования. Кроме того проводили наблюдения за состоянием здоровья родившихся телят. Для подтверждения профилактического действия препарата у 6 телят из каждой группы брали кровь на биохимические и гематологические исследования сразу после рождения и через месяц. В крови определяли: сывороточное железо, гемоглобин, эритроциты, лейкоциты, общий белок и белковые фракции сыворотки крови.

Исследование лечебного действия препарата гемовит-плюс проводили на телятах черно-пестрой породы, больных алиментарной анемией. Диагноз заболевания ставили на основании клинических признаков, а также морфологических и биохимических исследований крови: на содержание эритроцитов, гемоглобина, гематокрита, сывороточного железа, насыщенности транс-ферина железом, проводимые по общепринятым методикам. Для этого было сформировано три группы телят в возрасте трех месяцев по 10 животных в группе. Животные опытной группы получали обычный рацион и препарат гемовит-плюс в дозе 5 мл на животное в сутки, телятам контрольной группы (позитивный контроль) в рацион вводили премикс К-61, содержащий в своем составе те же микроэлементы, телята третьей группы (негативный контроль) получали общехозяйственный рацион. Препарат гемовит-плюс и премикс телятам давали в течение 30 дней.

Все результаты исследований биометрически обработаны методом Плохинского.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Изучение острой токсичности препарата гемовит-плюс

В опытах по изучению острой токсичности на белых мышах установлено, что при введении гемовита-плюс в дозах от 5 до 40 мл/кг, (от 6000 до 48000 мг/кг) массы тела, минимальная доза, вызвавшая летальный исход, составила 10 мл/кг (12000 мг/кг) массы тела. В группе мышей, получавших данную дозу препарата, пало 7 животных из 30, что составило 23,4% животных группы- Сто процентную летальность наблюдали в группе мышей, получавших дозу 35 мл/кг (42000 мг/кг) массы тела. Среднесмертельная доза, вычисленная по методу Кербера, равняется 20 мл/кг (24000 мг/кг) массы тела, что позволяет отнести гемовит-плюс к 4 классу токсичности (малотоксичных соединений). При введении мышам гемовита в дозе 10 мл/кг (12000 мг/кг) у животных появлялись признаки отравления, характеризующиеся постоянным снижением активности, замедлением движений, общим угнетением. Фекальные массы, становились почти черного цвета, мажущейся консистенции, но сильного расстройства желудочно-кишечного тракта не наблюдали.

При паталогоанатомическом вскрытии павших животных наблюдали заполненность желудка кормовыми массами в смеси с гемовитом, толстый отдел кишечника заполнен полужидким содержимым темного цвета, тонкий отдел вздут, но не воспален. Печень светлокоричневая, с серыми размытыми очагами, упругой консистенции. Другие органы были без видимых изменений.

3.2. Исследование кумулятивных свойств препарата гемовит-плюс

Исследования кумулятивных свойств препарата проводили на 30 белых мышах массой 16-18 г. За 24 дня опыта летальный исход наблюдали у всех 30 мышей. Гибель мышей происходила в основном за три последних периода. В первые три периода летального исхода у мышей не наблюдалось,

в четвертом погибло 6 животных. От дозы 0,75 ЛД50 при четырехкратном введении погибли все опытные животные.

При расчете по формуле Ю.С Кагана, В.В.Станкевича (1964), коэффициент кумуляции составил 5,3, что свидетельствует о слабовыраженных кумулятивных свойствах препарата гемовит-плюс.

При 30 дневной даче препарата в рекомендованной дозе установлено увеличение массы тела по сравнению с животными других групп. Масса внутренних органов у убитых крыс из каждой группы изменялась соответственно росту тела и была характерной для здоровых животных. При осмотре внутренних органов каких-либо патологических изменений не обнаружено.

При исследовании крови установлено, что гемовит-плюс достоверно увеличивает количество эритроцитов. Так, в течение месяца у животных опытных групп количество эритроцитов увеличилось на 26,00 и 20,50% соответственно, а в контрольной на 19,40 %. Уровень гемоглобина у опытных животных также увеличился на 19,0; 12,2 и 9,8 % соответственно. 3 3. Исследования аллергических свойств гемовита-плюс Результаты проведенного эксперимента свидетельствуют о том, что испытуемый препарат при местном действии не ведет к выработке специфических аллергических антител-реагентов на месте контакта с кожей и слизистой желудочно-кишечного тракта. Язвенных дефектов слизистой оболочки желудка не выявлено. При макро и микроскопическом исследовании отдельных участков слизистой оболочки у всех опытных животных дефектов и язв не выявлено.

3.4. Влияние гемовита-плюс на гематологические и морфологические показатели крови лабораторных животных

Исследования проводили на кроликах породы шиншилла. Результаты исследований представлены в табл. 1.

Из данных таблицы видно, что наилучшие результаты получены в группе животных получавших препарат в дозе 360 мг/кг массы тела.

Таблица 1.

Влияние гемовита-плюс на гематологические показатели крови кроликов

Показатели до опыта гемовит в дозе 120 мг/кг гемовит в дозе 360 мг/кг гемовит в дозе 600 мг/кг контроль

фоно 15 30 45 15 30 45 15 30 45 15 30 45

вые день день день день день день день день день день день день

Эритроциты, 10л12/л 5,4 ± 0,90 5,5± 0,21 5,7 ± 0,58 6,1± 0,35 5,9± 0,39 6,9± 0,75* 6,8± 0,25* 6,1± 0,99 6,9 ± 0,71* 6,5± 0,36* 5,3 ± 0,75 5,3 ± 0,72 5,4 ± 0,52

Гемоглобин, ммоль/л 128± 0,70 131± 0,25 149± 1,84 162± 1,56 148± 1,26 167± 1,25* 168± 1,55* 145± 1,96 165± 1,65* 163± 1,46* 129± 0,60 131± 0,90 130± 0,80

Цветной пока- 0,71 0,71 0,72 0,73 0,73 0,73 0,73 0,72 0,73 0,73 0,72 0,71 0,71

затель

Гематокрит, л/л 0,37± 0,02 0,39± 0,03 0,41 ± 0,02 0,44± 0,01 0,45± 0,05 0,49± 0,04* 0,48± 0,03* 0,42± 0,05 0,47± 0,03* 0,43± 0,02* 0,37± 0,05 0,38± 0,07 0,37± 0,03

Примечания * - р<0,05

Увеличение дозы до 600 мг/кг не эффективно, так как рост исследуемых показателей крови наблюдается в той же степени, что и в предыдущей группе животных, получавших гемовит-плюс в дозе 360 мг/кг. А концентрация гемоглобина и гематокрита становится ниже на 1,2 и 4,1%. Одновременно с этим наиболее эффективной продолжительностью скармливания препарата является срок в 30 дней, так как после 30 дней опыта получены лучшие показатели крови, чем после 15 дней, а после 45 дней исследуемые показатели крови были эдентичны с показателями после 30 дней опыта. Таким образом, наиболее эффективным сроком введения препарата является срок в 30 дней при дозе 360 мг/кг.

Морфологическими исследованиями установлено достоверное изменение адаптационных реакций у животных. Так содержание лейкоцитов в крови животных опытных группах меньше по сравнению с показателями кроликов контрольной группы на 34,1% получавших препарат в дозе 120 мг/кг, 360 мг/кг на 44,1% и 600 мг/кг на 45,2%.

Количество сегментоядерных нейтрофилов к концу опыта уменьшилось у животных получавших 120мг/кг на 12,0% 360 и 600 мг/кг на 32,0%.

Количество эозинофилов у животных опытных груупп больше чем у контрольных соответственно на 22,0% и на 67,7%.

Увеличение количества базофилов наблюдали у животных опытных групп по сравнению с контрольными на 3,3% получавших препарат в дозе 120 мг/кг, 25,8% 360 мг/кг; 24,7% 600 мг/кг.

Количество моноцитов достоверно снижается у кроликов опытных групп соответственно на 21,4%; 41,0%; 39,2%.

Количество лимфоцитов достоверно увеличивается у животных опытных групп по сравнению с контрольными на 39,4; 46,2 и 46,9% соответственно

Таким образом, исследованиями установлено, что под действием препарата гемовит-шпос повышается потенциальная функциональная активность нейтрофилов, а также активность поглотительной и деструктивной способности нейтрофилов.

ЗА Влияние препарата гемовит-плюс на показатели неспецифической резистентности лабораторных животных и телят

Исследования проводили на кроликах породы шиншилла. В результате проведенных исследований было установлено, что бактерицидная активность сыворотки крови лабораторных животных увеличивается у кроликов опытных групп по сравнению с контрольными животными: получавших препарат в дозе 120 мг/кг на 243%; 360 мг/кг на 86,1; 600 мг/кг на 83,0%.

Лизоцимная активность в конце опыта увеличивается соответственно на 64,8; 80,5 и 82,0% по сравнению с показателями в контрольной группе.

Активность комплемента сыворотки крови у животных опытных групп к концу опыта по сравнению с теми же показателями в контрольной группе увеличивается на 17,9; 47,7 и 44,7% соответственно.

Фагоцитарный индекс у кроликов опытных групп возрастает в конце опыта по сравнению с животными контрольной группы соответственно на 28,5; 50,6 и 48,0%.

Процент фагоцитирующих лейкоцитов увеличивается у животных опытных групп соответственно на 28,5% в группе получавшей гемовит в дозе 120 мг/кг, 41,1% 360 мг/кг и 41,4% 600 мг/кг.

Таким образом, изучаемые нами показатели неспецифической резистентности организма лабораторных животных, получавших препарат гемовит-плюс, достоверно увеличиваются, что свидетельствует о повышении неспецифических защитных функций организма.

Аналогичные данные получены при испытании препарата на телятах. Так у телят опытной группы получавших 5 мл гемовита-плюс на животное в сутки показатели неспецифической резистентности по окончанию опыта достоверно возрастают: бактерицидная активность на 40,6%, лизоцимная на 42,1%, активность комплемента на 53,1%, фагоцитарный индекс на 75,0%, процент фагоцитирующих лейкоцитов на 25,0%. Из полученных данных можно сделать вывод о том, что препарат гемовит - плюс повышает неспецифическую резистентность организма животных.

3.6. Влияние гемовита-плюс на некоторые показатели белкового и минерального обмена животных

Исследования по определению обмена белка и белковых фракции проводили на кроликах породы шишпила. Из данных исследований можно судить о достоверном увеличении содержания общего белка и глобулиновых фракций в сыворотке крови кроликов, получавших препарат гемовит-плюс, а также о снижении у них количества альбуминовых фракций. Так, по сравнению с кроликами контрольной группы, содержание общего белка в сыворотке крови увеличилось у кроликов получавших 120 мг/кг гемовита на 15,4%; 360 и 600 мг/кг на 41,2%. Наблюдался рост содержания глобулиновых фракций в сыворотке крови животных соответственно на 4,1, 12,1,12,7%. Количество а-глобулинов, у животных получавших препарат в дозе 120 мг/кг больше чем у контрольных на 2,9%; 360 мг/кг на 10,2% и 600 мг/кг на 11,0%. Количество Р- глобулинов увеличилось соответственно на 8,2; 18,2, и 17,6%. Содержание в сыворотке крови у-глобулинов выросло на 2,4%; 9,6% и 0,9% соответственно. Снижение количества альбуминовых фракций составило у кроликов получавших 120 мг/кг препарата 7,5%; 360 мг/кг 25,6% и 600 мг/кг 27,3%.

Таким образом, под воздействием препарата гемовит-плюс увеличиваеся содержание общего белка в сыворотке крови животных. Увеличение глобулиновых фракций еще раз доказывает активизацию иммунной системы организма животных под воздействием препарата гемовит —плюс.

Действие препарата на минеральный обмен изучали на телятах черно-пестрой породы трехмесячного возраста. Результаты исследований представлены в таблице 2.

Из таблицы 2 видно, что в крови телят опытной группы получавших гемовит-плюс в дозе 5 мл препарата на животное в сутки к тридцатому дню опыта увеличивается количество следующих микроэлементов по сравнению с теми же показателями у контрольных животных; Fe на 65,3; Мп на 95,0; Zn на

53,8; Си на 64,4; Со на 71,4; 8е на 15,3; I на 11,0%. Таким образом, установлено, что испытуемый препарат можно использовать в качестве профилактического средства при нарушениях обмена микроэлементов в организме животных. Одновременно с этим можно отметить, что содержание микроэлементов в крови при введении препарата 45 дней практически не меняется по сравнению с теми же показателями через 30 дней опыта.

Таблица 2.

Влияние гемовита-плюс на минеральный обмен телят

До По группам животных на конец опыта

Показатели опыта Гемовит, 5 мл Контроль

фоновые 15 день 30 день 45день 15 день 30 день 45 день

Бе, мкмоль/л 13,32 ± 15,0 ± 22,0 ± 22,0 ± 13,34 ± 13,24 ± 13,29 ±

0,27 0,49 0,43* 0,55* 0,29 0,52 0,22

Мп,мкг% 2,0 ± 2,5 ± 3,9 ± 3,8 ± 2,6 ± 2,2 ± 2,4 ±

0,29 0,21* 0,31* 0,30* 0,11 0,21 0,24

2п,МКг% 146,5 ± 172,9 ± 225,4 ± 225,1± 145,6 ± 144,6 ± 147,6 ±

19,50 19,24 19,80* 21,85* 18,30 16,30 17,80

_ Си,мкг% 943 ± 137 ± 155 ± 153 ± 93,8 ± 93,3 ± 93,5 ±

14,50 18,25 13,40* 12,45* 15,40 14,20 14,80

Со,мкг% 3,5 ± 4,9 ± 6,0 ± 6,1 ± 3,7 ± 3,6 ± 3,7 ±

0,56 0,72 0,90* 0,73* 0,28 0,24 0,15

8е, мкг% 7,2 £ 7,8± 8,3 ± 8,2 ± 6,7 ± 6,9 ± 6,2 ±

0,32 0,28 0,21* 0,22* 0,27 0,27 0,28

.1, мкт% 3,3 ± 4,2 ± 7,2 ± 7,0 ± 3,2 ± 3,3 ± 3,1 ±

0,89 0,55 0,45* 0,49* 0,51 0,61 0,67

Примечание: * р < 0,05 3.7. Изучение профилактического действия препарата гемовит-плюс

Исследования проводились на стельных сухостойных коровах черно-пестрой породы и телятах, рожденных от этих коров. Установлено, что у

коров опытной группы, получавших 10 мл гемовита-плюс в сутки, отелы проходили без родовспоможения, отделение последа проходило в течение 10 часов после отела, лишь у одной из шести опытных коров до 20 часов после отела. Послеродовых осложнений у животных этой группы не отмечено.

У животных опытной и контрольной групп на начало опыта все показатели крови были ниже нормы, что свидетельствует о нарушении обмена веществ (табл. 3). Отмечено также низкое содержание общего белка, указывающее на нарушение белкового обмена, изменение его фракционного состава, гиперальбунемию и диспротеинемию.

Таблица 3.

Влияние гемовита-плюс на показатели крови коров

Показатели На начало опыта

Фоновые

Сывороточное железо,мкмоль/л 7,0 ±9,20

Гемоглобин, г/л 80,0 ± 0,80

Эритроциты, 1012 л 4,9 ±0,30

Лейкоциты, 109 л 3,8 ± 1,70

Общий белок, г/ л 5,6 ± 1,20

Альбумины, % 60,8 ± 8,30

10,0 ± 1,10 10,2 ±2,40 19,0 ± 1,80

Коэффициент А/Г 1,50

По окончанию опыта

Опытная Контрольная

10,5 ±11,30* 7,2 ±8,50

104,0 ± 1,10* 80,0 ±0,30

5,9 ±0,90* 4,1 ±0,90

5,2 ±0,780* 3,2 ± 0,50

7,5 ±2,80* 5,4 ±0,90

42,4 ±5,20* 62,8 ±7,80

15,2 ±2,70* 9,0 ±0,90

15,4 ± 1,90* 10,8 ±2,30

27,0 ±3,20* 19,4 ±1,30

0,70* 1,60

Примечания * р< 0,05

При даче гемовита-плюс коровам с кормом отмечено выздоровление от алиментарной анемии, наблюдается стабилизация гемопоэза, эритропоэза, лейкопоэза, о чем свидетельствует повышение количества гемоглобина, эритроцитов и сывороточного железа. Кроме того, происходит стабилизация в белковом обмене, о чем свидетельствует повышение содержания общего белка и нормализация его фракционного состава. У животных контрольной

группы отмечено низкое содержание гемоглобина и сывороточного железа, подтверждающие заболевание коров алиментарной анемией.

Исследованиями установлено, что телята, рожденные от коров опытной группы, имели больший, прирост массы тела по сравнению с контролем, не болели диспепсией в первые дни жизни, были более жизнеспособными.

У телят, рожденных от коров опытной группы все показатели крови были в пределах физиологической нормы (табл. 4). Напротив, у телят, рожденных от коров контрольной группы уже при рождении исследуемые показатели были на уровне нижней границы физиологической нормы, что свидетельствует о нарушении обменных процессов в организме животных.

Таблица 4.

Влияние гемовита-плюс на показатели крови телят

Показатели До опыта По окончанию опыта

опытная группа контрольная группа опытная группа контрольная группа

Сывороточное железо,мкмоль/л 10,8±3,20 8,0 ±1,60 9,7 ±1,30* 8,0 ±1,80

Гемоглобин, г/л 110,0*1,50 83,011,20 90,0±1,10* 82,0±1,10

Эритроциты, 10й л 9,4 ± 1,20 7,3 ± 0,90 8,7 ±0,80* 7,9 ±1,30

Лейкоциты, Ю'/л 10,8 ± 2,20 7,2 ±1,30 7,3 ±1,70* 6,7 ±1,00

Общий белок, г/л 6,5 ±0,60 5,0 ± 0,20 5,8 ±0,40* 5,1 ±0,50

Альбумины, % 48,9 ±1,30 51,3±2,70 41,6±2,50* 56,0±3,20

Глобулины, %. а Р У 9,1 ± 1,30 13,0 ±2,80 29,0 ±1,60 Ю,5±2Д0 18,0±0,30 20,2+2,70 15,2±2,40* 15,2±1,90* 28,0±3,40* 11,5±2,40 8,3 ±1,30 24,2±3,70

Коэффициент А\Г 0,90 1,05 0,70 1,20

Примечания * р <0,05

Производственные испытания профилактической эффективности препарата проводились в колхозах «Тверь» Калининского района, «Родина»

Старицкого района Тверской области, на 700 стельных сухостойных коровах. В результате проведенных испытаний установлено, что у 92 - 93% новорожденных телят признаков алиментарной анемии не выявлено.

3.8. Изучение лечебных свойств препарата гемовит-плюс

Исследования проводили на телятах черно-пестрой породы в возрасте трех месяцев, больных алиментарной анемией.

Исследованиями установлено, что в начале опыта у всех телят выявлены клинические признаки алиментарной анемии, характеризующиеся бледностью слизистых оболочек ротовой полости и половых органов, а также снижением содержания в крови эритроцитов, гемоглобина, сывороточного железа (табл. 5).

У телят опытной группы достоверно повышается количество эритроцитов на 24,2%, концентрация гемоглобина в крови на 28,0%, гематокрит на 84,6%, цветной показатель на 4,9%. насыщенность эритроцитов гемоглобином на 3,6%, средний объем эритроцитов на 45,8%, средний диаметр эритроцитов на 16,9 %, удельное сопротивление крови на 65,3%, сывороточное железо на 16,2%. Премикс на показатели крови животных влияет меньше чем гемовит-плюс, так концентрация гемоглобина повышается на 7%, количество эритроцитов на 8,6%, гематокрит на 30%, сывороточное железо на 13,8%. В конце опыта у животных опытной группы, получавших препарат, клинические признаки заболевания практически исчезают. Отмечено, что телята опытной группы имели большие приросты массы тела, по сравнению с контрольными животными. Таким обрезом, установлено что, препарат гемовит-плюс обладает лечебным действием при железодефицитной анемии телят.

Широкие производственные испытания лечебной эффективности препарата при алиментарной анемии проводились в колхозах «Тверь» Калининского района, «Родина» Старицкого района Тверской области на 2532 телятах. В результате испытаний установлено, что лечебная эффективность составила 92-94%.

Таблица 5.

Влияние гемовита-плюс на показатели крови телят

Показатели На начало По группам на конец опыта

опыта фоновые Гемовит-плюс Позитивный Негативный

5 мл/сут контроль премиксК-61 контроль

Эритроциты, 1012л 3,24 ±0,19 4,03 ± 0,25* 3,52 ±0^0 332 ±031

Гемоглобин, г/л 90,76 ±0,92 116,21 ±0,23» 97,44 ±0,87 85,46 ±0,87

Гемагокриг, л/л 0,26 ±0,02 0,48 ±0,09* " 0,34 ±0,07 0,28 ±0,07

Цветной показатель 0,82 ±0,.02 0,86 ±0,04* 0,81 ±0,09 0,79 ±0,03

Эр. ср. объем, фл 81,70 ± 1,00 119,10 ±0,75* 89,89 ±0,91 86,90 ±0,95

Эр.ср.диаметр,мкм 7,42 ± 1,00 8,68 ±0,97* 7,91 ±0,77 7,58 ± 137

Ср.сод. гемогл. в

эрит.,пг 27,83 ±0,91 28,83 ± 1^2* 2731 ±0,91 26,54 ±0,99

Удельное

сопр.крови, ом/см 104,18 ±0,85 124,04 ± 1,25* 112,25 ±0,83 10330 ±0,79

Железо

сывороточное,

мкмоль/л 13,32 ±0,27 22,00 ±0,43* 1834 ±032 1334 ±032

ОЖСС, мкмоль/л 58,00 ± 135 92,18 ±2,34* 78,07 ± 1,41 58,00 ± 1,49

НЖСС, мкмоль/л 45,71 ±0,95 70,18 ± 1,02* 48,70 ± 1,83 44,76 ± 1,58

Насыщенность

трансферта _

железом, % 24,78 ± 0,84 23,86 ±0.63* 22,99 ±0,81 22,82 ±0,75

Трансферин, мг/дл 270,08 ± 1^5 129,19 ± 1,90* 220,04 ±1,51 270,04 ±1,48

Примечание: * р < 0,05.

4.ВЫВОДЫ

1. Препарат гемовит-плюс, представляющий собой комплекс зссенцальных микроэлементов Бе, Мп, Си, /п, Со, Бе, I с этилендиаминдиянтарной кислотой

обладает малой токсичностью и относится к 4 классу опасности - (ЛД50 -24000 мг/кг, ЛД100 - 42000 мг/кг, МПД - 6000 мг/кг).

2. Установлено, что гемовит-плюс обладает слабовыраженными кумулятивными свойствами, коэфициент кумуляции равен 5,3. Препарат в рекомендованной дозе не вызывает аллергических реакций.

3. Гемовит-плюс в дозе 0,2 мл/кг массы тела достоверно повышает показатели крови, а именно гемоглобин, эритроциты, гематокрит, общий белок и белковые фракции у лабораторных животных.

4. Введение гемовита-плюс в рацион лабораторным животным в дозе 360 мг/кг в течение 30 дней повышает показатели бактерицидной, лизоцимной, комплементарной активности сыворотки крови, фагоцитарный индекс, процент фагоцитирующих лейкоцитов.

5. Введение в рацион сельскохозяйственных животных препарата гемовит-плюс в дозе 5 мл на теленка в сутки в течении 30 дней повышает функциональную, поглотительную и деструктивную способность нейтрофилов. Интегральным показателем этих изменений в организме было увеличение прироста массы тела телят на 10%, сохранности новорожденного молодняка на 20%.

6. Препарат гемовит - плюс при даче его телятам в дозе 5 мл препарата на животное в сутки в течении 30 дней способствует увеличению некоторых микроэлементов в организме, Бе на 65,3%, Мп на 95,0%, 2п на 53,8%, Си на 64,4%, Со на 71,4%, 8е на 15,3% и 1 на 118,0%.

7. Введение гемовита-плюс коровам в сухостойный период в дозе 10 мл на корову в сутки оказывает профилактическое действие при алиментарной анемии новорожденных телят, 92-93% телят при рождении не имели клинических признаков заболевания.

8.Применение гемовита-плюс в дозе 5 мл в течение 30 суток телятам больным железодефицитной анемией оказывает лечебное действие. Эффективность препарата составили 92-94%.

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

1. В рацион коров в стадии глубокой стельности ( за месяц до отела ), для профилактики анемии молодняка рекомендуется вводить препарат гемовит-плюс в дозе 10 мл препарата в сутки на одно животное.

2. Для лечения алиментарной анемии рекомендуется вводить в рацион гемо-вит-плюс телятам с пятидневного возраста в течение 30 дней в дозе 5 мл в сутки.

3. Для профилактики и лечения гипомикроэлементозов рекомендуется скармливать препарат гемовит-плюс всему поголовью два раза в год в ноябре и апреле месяце в течение 30 дней.

4. Результаты исследований предлагается использовать в учебном процессе: при чтении лекций и проведении лабораторных занятий по фармакологии (раздел « Минеральные вещества »), внутренним незаразным болезням (раздел « Гипомикроэлементозы ») и кормлению животных (раздел « Кормовые средства »), на курсах (факультетах) повышения квалификации зооветспеци-алистов.

6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Пчельников Д.В., Козлов Ю.М. Влияние препарата гемовит - плюс на неспецифическую резистентность молодняка крс. Улучшение использования природного потенциала Тверского региона. Сборник научных трудов ТГСХА. Тверь, 2002., с. 73-80.

2. Пчельников Д.В., Дорожкин В.И., Бабич ВА Гемовит - плюс для профилактики и лечения при нарушениях обмена веществ у телят. // Ветеринария - 2002. - № 8., с. 12 -15.

3. Пчельников ДЗ., Дорожкин В.И., Бабич ВА Гемовит - плюс для профилактики послеродовых осложнений у коров. // Ветеринария - 2003. - № 4., с. 12-13.

4. Пчельников Д. В., Дорожкин В И., Бабич ВА Фармако-токсилогические свойства гемовит - плюс. // Ветеринария - 2003. - № 7., с. 11 -12.

5. Пчельников Д.В., Дорожкин В.И., Бабич В.А. Гемовит - плюс для лечения анемии телят. // Ветеринария - 2003. - № 12.. с. 14 -15.

6. Пчельников Д.В., Дорожкин В.И., Бабич В.А Гемовит-плюс для

профилактики и лечения микроэлементозов у КРС. // Сб. научн. тр. ВГНКИ. -

2003-т. 64-с. 302-312.

7. Пчельников Д.В., Дорожкин В.И., Бабич В.А. Гемовит-плюс для

профилактики алиментарной анемии телят. // Сб. научн. тр. ВГНКИ. - 2003 - т.

64-с. 312-321.

8. Пчельников Д.В., Дорожкин В.И., Бабич В.А. Профилактика алиментарной анемии телят. // Ветеринарная патология № 3(7) 2003. С.71-76.

9. Пчельников Д.В., Дорожкин В.И., Бабич ВЛ. Лечение алиментарной анемии телят. // Ветеринарная патология № 3(7) 2003. С.76-81.

Ю.Пчельников Д.В., Дорожкин В.И., Бабич ВА Влияние гемовита-плюс на показатели неспецифической резистентности животных. // Ветеринарная патология № 1(5).2003. С.188-189.

11. Пчельников Д.В. Гемовит-плюс при нарушениях обмена веществ у коров. Материалы юбилейной научной конференции молодых ученых и специалистов. Сб. науч. тр. МСХА Москва 2003. С. 409-412.

ООО «Докучеиг-еерысст, ты. 34-7МЮ, зк. Ж2104403, тир 100

»t- -о,"И I

15кавяет . : • ;пл(>

__^