Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологические свойства родентицидного средства на основе метилфенацина

На правах рукописи

Дроздов Дмитрий Александрович

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА РОДЕНТИЦИДНОГО СРЕДСТВА НА ОСНОВЕ МЕТИЛФЕНАЦИНА

16 00 04 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

16 00 06 - Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-

санитарная экспертиза

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

ООЗ159818

Москва 2007

003159818

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии)

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор

ДОРОЖКИН Василий Иванович (ГНУ ВНИИВСГЭ)

кандидат биологических наук ПАВЛЕНКО Галина Ивановна (ГНУ ВНИИВСГЭ)

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

УРАЗАЕВ Дмитрий Николаевич (МВАим К И Скрябина)

кандидат ветеринарных наук, заслуженный ветеринарный врач РФ КАДИРОВ Адиль Фатулла оглы (ГНУ ВНИИВСГЭ)

Ведущая организация. Федеральное государственное учреждение Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГУ ВГНКИ)

Защита состоится « 3 /» 2007 в часов на

Заседании диссертационного совета Д 00600801 при Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (123022, Звенигородское шоссе, 5)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного научного, учреждения Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии)

Автореферат разослан ¿^"t^Q^llР 2001т

Ученый секретарь диссертационного совета Е С Майстренко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Исследования в области борьбы с синантропными грызунами обусловлены необходимостью уменьшения ущерба, наносимого ветеринарным объектам Мышевидные грызуны являются источником, резервуаром и механическими переносчиками возбудителей зооантропонозных (чума, туляремия, лептоспироз, листериоз, сальмонеллез, трихинеллез) и зоонозных болезней (мелиоидоз, болезнь Ауески, грипп птиц), поедают и загрязняют корма и готовую продукцию, повреждают дорогостоящие устройства, системы и материалы (А А Поляков, 1960, В Г Зацепин, 1970, 1999, ДФ Траханов, 1973, 1994, ИМ Козлов, 1983, АН Козлов, 1985, 1991, ВС Пуцято, 1986, А И Дроздов, 1997, AM Смирнов, 1999, АФ Кадиров, 1999, ЮМ Артеменков, 2000, В А Рыльников, 2007, М Lund, 1977, RM Corrigan, 2001)

Использование комплекса родентицидных средств и инженерно-профилактических методов препятствует распространению грызунов на ветеринарных объектах Вместе с тем, при регулярном профилактическом проведении дератизации отмечают избегание грызунами приманки (неофобия, аверсия) и появление резистентности к применяемым родентицидам (В А Быковский, 1990, Н В Бабич, 2005, А Ф Кадиров, 2006, В А Рыльников, 1992, 2006, С А Клементьева, 2006, A D MacNicoll, 1986)

Истребление грызунов на объектах и профилактика повторных заселений освобожденных зон показывает, что лучших результатов можно добиться при смене дератизационных препаратов Возникает необходимость изыскания новых соединений для эффективной ротации ассортимента средств борьбы с грызунами с целью предотвращения появления устойчивости (В Г Зацепин, 1970, СД Каракотов, 2005, АФ Кадиров, 2007) Необходимость исследований новых родентицидных средств также обусловлена вопросами, связанными с механизмом действия этих веществ и предотвращением развития адаптационных процессов, что оказывает влияние на эффективность родентицидного средства и позволит

прогнозировать физиологическое воздействие на организм грызунов и сельскохозяйственных животных

В этой связи, приобретают значение исследования фармако-токсикологических свойств новых средств борьбы с грызунами, оценка количественной зависимости соотношений общетоксических и специфических эффектов, а также особенностей проявления материальной и функциональной кумуляции в зависимости от режима воздействия

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилась разработка родентицидного средства на основе метилфенацина и изучение фармако-токсикологических свойств Для достижения цели были поставлены следующие задачи

- Разработка препаративной формы метилфенацин-0,75%, выбранного на основании результатов скрининговых исследований индан-1,3-дионовых соединений

- Изучение фармако-токсикологических свойств метилфенацина-0,75%

- Разработка методов определения метилфенацина-0,75% в препаративной форме и биологических субстратах (кормах)

- Испытание метилфенацина-0,75% в произволегвенных условиях

Научная новизна. Разработано родентицидное средство, представляющее собой 0,75%-ный раствор метилфенацина в полиэтиленгликоле с горечью (битрекс), окрашенное водным раствором красителя

Метилфенацин-0,75% позволяет проводить дератизацию с подбором оптимальной пищевой основы и возможностью приготовления разнообразных форм (зерновые приманки, липкие массы и др )

Изучены фармако-токсикологические свойства метилфенацина-0,75% определены параметры токсичности., пороги острого и хронического действия, кожно-оральный коэффициент Изучено раздражающее, аллергическое и кожно-резорбтивное действие препарата Определена

эффективность действия метилфенацина-0,75%, разработаны режимы применения

Практическая денность работы.

Разработано родентицидное средство на основе метилфенацина в виде концентрата

Установлены режимы и принципы обработки, позволившие получить эффективность дератизации не менее 95%

Разработаны технические условия и инструкция по применению препарата метилфенацин-0,75%

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на

- V международной научной конференции молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (г Москва, 2006)

- VI Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2006» (г Самара, 2006)

- Заседании Ученого Совета ВНИИВСГЭ (2005-2007)

- Межлабораторном совещании ВНИИВСГЭ (08 06 2007) Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ Основные положения, выносимые на защиту

- Разработка родентицидного средства метилфенацин-0,75%

- Результаты фармако-токсикологических исследований метилфенацина-0,75% в опытах на лабораторных и сельскохозяйственных животных

- Результаты испытания эффективности действия метилфенацина-0,75% Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка используемой литературы и приложения Диссертация изложена на 118 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы, 13 рисунков Список литературы включает 212 источников отечественных и зарубежных авторов

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Экспериментальные исследования для решения поставленных задач проводились в лаборатории токсикологии и санитарии кормов и виварии ВНИИВСГЭ, производственной базе научно-производственного предприятия «Аратамус», свинокомплекса «Шувалово», на кафедре инфекционных и паразитарных болезней МГУПБ и химической лаборатории «Щелково-Агрохим» в период 2004-2007 гг

В опытах использовано шесть видов животных 450 лабораторных крыс, 30 бечых мышей, 12 морских свинок и 12 кроликов, 12 кур-несушек и 9 свиней крупной белой породы Исходный вес животных колебался в пределах для крыс - 250 - 280 г, для мышей - 22-25 г, для кроликов - 2700 - 3000 г, для кур - 1700 - 2000 г, для свиней - 300-310 кг В опыг брали клинически здоровых животных, которые предварительно выдерживались на 14-дневном карантине (ПП Сахаров, 1952, Н Харламова, 1993, С М Ланг, 1993)

Статистические группы состояли из 6 - 10 животных Исследования проводились в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке эффективности, токсичности и опасности родентицидов» (1995), Положением о порядке токсиколого-гигиенической экспертизы и гигиенических исследований, проводимых с целью регистрации ветеринарных препаратов в РФ, «Методическими рекомендациями по токсикометрии» (1987)

Изучение острой токсичности метилфенацина-0,75% и способности кумулироватъ в организме проводилось в условиях введения препарата в желудок, а также в условиях нанесения препарата на кожу

Токсичность средства определяли на 30 белых крысах Полученные данные использовались для определения параметров смертельного эффекта -DLie, DL5o и DL84 по методу Кербера в модификации В Б Прозоровского (пробит-анализ) (В Б Прозоровский, 1965)

Для изучения кумулятивных свойств препарата метилфенагога-0,75%, использовали метод Ю С Кагана и В В Станкевича (1964) и метод Lim et al (1961)

Кожно-резорбтивное действие изучалось в опыте на 12 белых мышах, а также на белых крысах Учитывались клиническая картина интоксикации, масса тела, ректальная температура и морфологический состав крови

Изучение раздражающего и аллергического действие препарата на кожу проводилось на 12 кроликах породы «Шиншилла» (О Г Алексеева, 1970)

Исследовали раздражающее действие препарата на слизистые оболочки глаз кроликов (А Majda, 1973)

Эксперименты проводили в условиях подострого и субхронического воздействия препарата, оценивали изменения интегральных и специфических показателей

В качестве интегральных показателей были взяты масса тела, оценка морфологического состава крови, суммационно-пороговый показатель

Специфическими считали оценку свертывающей системы крови, функционального состояния печени и почек

Количество гемоглобина, лейкоцитов и эритроцитов в крови оценивали с помощью общепринятых методик Протромбиновое время определяли по Квику (И П Кондрахин, 1985, А А Козлов, 2003)

Функциональное состояние центральной нервной системы оценивали по величине суммационно-порогового показателя

При изучении влияния средства на печень использовались показатели, характеризующие обезвреживающую (сульфгидрильные группы) и белковообразовательную (общий белок) функции органа

Изучение функционального состояния почек проводилось по комплексу методов измерения диуреза, содержания в моче белка и хлоридов (ИП Кондрахин, 1985)

Мутагенную активность изучали методом цитогенетического анализа в соответствии с «Методическими рекомендациями по определению мутагенной активности ветеринарных препаратов» (1983)

Для проведения гистологических исследований отбирали пробы сердца, легких, печени, селезенки, почек, части тонкого отдела кишечника, фиксировали в 10 %-ном формалине, обезвоживали, заливали в парафин, срезы окрашивали гематоксилином и эозином (ГА Меркулов, 1969, ИФ Иванов, 1976)

Апробацию родентицидного средства ме1илфенацин-0,75% проводили на свинокомплексе «Шувалово» в помещениях промышленной зоны № 6 и №7

Экспериментальные данные обрабатывались статистически, достоверность различий оценивалась по Стьюденту

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Скрининговые исследования индан-1,3-дионовых соединений

Первоначально с целью отбора наиболее эффективного родентицидного соединения проводили изучение 13 образцов вновь синтезированных индан-1,3-дионовых соединений на основе дифенацина (рис 1) О ^

Рис 1 Общая структурная формула изученных индан-1,3-дионовых соединений, где Их - радикалы, различные по химическому составу (СН3 - метилфенацин), п - количество радикалов (п = 1 - 3)

Использовался метод аналогового синтеза и сплошного скрининга (НН Мельников, 1993) Основным критерием отбора соединений служила эффективность, целесообразность и технологичность при использовании в целях борьбы с синантропными грызунами

Обнаружена зависимость между химическим строением изучаемой пы соединений и токсикологическими свойствами Наибольшая ичность в ряду соединений, отмечалась у веществ, имеющих не более 1-адикала в иараположении К ним относится фториндан, броминдан и лфенацин с содержанием яараизомеров более 90% Важно отметить, что ез индан-1,3-дионов проводится по единой технологической схеме При , средства одной химической группы обладают схожими показателями, при обосновании, позволяет уменьшить объем исследований по метрам, уже изученным на аналогичных веществах за счет корреляции ктеристик

В результате проведенных исследований, для создания родентицидного парата был выбран метилфенацин, как наиболее перспективное средство овным параметром, определяющим эффективность родентицидного ства, служила токсичность действующего вещества без учета снижения ективности за счет инертных соединений-

Приготовление препаративной формы родентицидов Опыты по разработке родентицидного средства в виде препаративной мы, содержащей метилфенацин, проводились на базе ООО ШШ атамус»

Опытную партию родентицидного средства изготовили из нического метилфенацина с содержанием действующего вещества 54,0 % сумме индандионов В качестве растворителя действующего вещества и испытаны растительное масло, полиэтиленгликоль-400, пиленгликоль и глицерин

Учитывали степень растворимости, длительность растворения, пературу нагревания, гомогенность, отсутствие или наличие осадка

Наилучшие результаты были получены при использовании шэтиленгликоля-400 Полученный раствор коричневого две га, озрачный, равномерно окрашен по всему объему Содержание

действующего вещества - 0,75% Выбор концентрации обусловлен рекомендуемым для данной группы содержанием действующего вещества 0,015% - 0,02% в готовой приманке, что достигается добавлением 2,0 % препарата метилфенацина-0,75% к пищевой основе (А Ф Кадиров, 2005) При этом реакции на изменение органолептических характеристик кормов в опытах отмечено не было, что оказывает значительное влияние на поедаемость приманки синантропными грызунами

В соответствии с требованиями «Методических рекомендаций по оценке эффективности, токсичности и опасности родентицидов» (1995) проводили цветовую маркировку родентицидных средств В качестве сигнальной окраски выбран красный цвет, который достигался добавлением пищевого красителя кармуазина Поскольку ПЭГ-400 плохо окрашивается большинством растворителей, в рецептуру при разработке формы было добавлено 20,0 % воды, что позволило использовать водорастворимые красители и способствовало снижению температуры кристаллизации препаративной формы Для предотвращения использования формы не по назначению в препаративную форму добавляли битрекс (горечь)

Таким образом, была получена препаративная форма (в виде концентрата) зооцидного средства с выраженными родентицидными свойствами на основе вновь синтезированного соединения индан-1,3-дионовой группы - метилфенацин-0,75%

Приготовленные формы хранились согласно СП 3 53 1129-02 и ежемесячно исследовались на стабильность в течение всего срока хранения Определение действующего вещества в препаративной форме проводили по методике, общей для определения содержания индан-1,3-дионовых соединений в препаративной форме Метод основан на взаимодействии растворенного в диоксане метилфенацина с хлорным железом при этом образуется окрашенный комплекс, интенсивность окраски которого отражает концентрацию метилфенацина в растворе Оптическую плотность измеряли при помощи фотоколориметра

Токсикологические свойства метилфенацина-0,75%

Изучение острой токсичности метилфенацина-0.75% Проведено изучение биологического действия препарата метилфенацин-0,75% в опытах на разных видах животных белых крысах, мышах, морских свинках, кроликах, свиньях и курах

Среднее время гибели (ТЕ50), которое определялось по результатам острого опыта, составило 7 суток, что позволило уже по данным однократного опыта прогнозировать высокие кумулятивные свойства препарата

Среднелетальная доза препарата при внутрижелудочном введении (DL50) составила 250 мг/кг Патологоанатомические изменения отмечали в печени (анемия), селезенке (гиперплазия фолликулов), кишечнике (катаральное воспаление) В органах и полостях тела крыс кровоизлияния различных видов и размеров

Токсичность метилфенацина-0,75% при нанесении на кожу Токсичность при нанесении на кожу (DL5oCut) составила 550 мг/кг, что соответствует III классу опасности

Клиническая картина интоксикации при введении в желудок и нанесении на кожу проявлялась на 4-6 сутки после поступления метилфенацина-0,75% в организм в виде угнетения, взъерошенности шерсти, петехий и гематом Механизм действия метилфенацина схож с действием других родентицидов индан-1,3-дионовой группы, что обусловлено конкурентным ингибированием метилфенацином предшественников витамин K-зависимых факторов свертывания Это приводит к нарушению механизма свертывания крови в связи с высокой скоростью обмена и возникновением дефицита постепенно уменьшающегося количества факторов Кожно-резорбтивное. раздражающее и аллергическое действие препарата Кожно-оральный коэффициент (К100) составил 2,2 , что свидетельствует о выраженной способности препарата проникать через кожу Нанесение 10%-ного раствора метилфенацин-0,75% при 20-кратных аппликациях на кожу

морских свинок не выявило аллергического действия. Покраснения кожи, раздражения, расчесов у животных не наблюдалось

Определение порогов острого действия метилфенацина-0,75%. В опыте испытаны дозы- 1/2, 1/10, 1/25 и 1/50 DL50, что соответствует 125, 25, 10 и 5 мг/кг

В результате, в группах животных, 1-кратно получивших метилфенацин в дозах 1/2, 1/10 и 1/25 DL50, наблюдалось достоверное увеличение протромбинового времени, снижение уровня эритроцитов, гемоглобина в крови (табл 1).

Таблица 1

Динамика изменения по интегральным и специфическим показателям у крыс в остром

эксперименте

Группы Поступившая доза Сутки обслед Hb (г%) Эритр (млн /мм3) Тсв, 1 (С)

125 мг/кг (1/2 DLSo) 0 5 8 11,3±0,1 10,4±0,36* 9,9±0,6* 6,05±0,28 5,93±0,08 5,2±0Д* 23,7±1,8 28±2Д* 33±2,5*

25 мг/кг (1/10 DL50) 0 5 8 11,2±0,28 11,2±0,25 8,7±в,53* 6,35±0,2 6,3±0,13 5,б±0,06* 23,5±1,95 26±1,6* 31±2,8*

Контроль 1 (1/2,1/10 DL») 0 5 8 11,2±0,28 11,5±0,14 10,б±0,22 6Д1±0,18 6Дб±0Д6 5,97±0,06 19,2±1,7 20,2±1,3 19,6±0,84

10 мг/кг (1/25 DL50) 0 5 8 11Д±0,23 10,7±0,29* 11,0±0,12 6,5±0Д9 6,45±0,28 6,0±0,18 21,5±2,2 26£±1,6* 25±1,85

5 мг/кг (1/50 DLS0) 0 5 8 И,4±0,24 11,0±0,5 11,2±0,28 6,4±0Д2 6,28±0,29 6,2±0,16 21±3,0 22,5±2,5 26,0±2,5

Контроль 2 (1/25, 1/50 DLjo) 0 5 8 11,2±0Д8 11,4±0,2 11,5±0,29 6,3±0,22 6,2±0,24 6,5±0,3 20,5±1,4 21,4±0,94 19,8±1,2

* - при Р<0,05

В группе животных, которым вводили метилфенацин-0,75% в количестве 1/50 Ш^о в течение 8 суток, достоверных изменений не отмечали ни по одному из учитываемых показателей На основании данных

исследований порогом острого действия (1лтас) была определена доза 10 мг/кг (1/25 DL50)

Кумулятивные свойства метилфенацина-0.75%. Сравнение выраженности кумулятивных свойств препарата при разных режимах проведено в условиях введения нарастающих доз (метод Lim и др, 1961) и при введении постоянной дозировки по методу Кагана (табл 2)

Таблица 2

Результаты изучения кумулятивности метилфенацина-0,75%

Группы Длительность введения (сут) Уровень 1-кратного введения (мг/кг) I поступившая доза (мг/кг) В пересчете на DL50 % гибели животных Kcum

IA 5 1/10 125 0,5 DL50 80,0 <0,5

1В 8 "Г/10 "" "250 1,0 DL*,' 100,0" "

НА 20 1/20 250 1,0 DL50 0,0 -

ИВ 30 1/20 375 1,5 DL50 50,0 1,5

Ввиду высокой кумулятивное ги препарата уже на 5 сутки после начала введения по методу Lim et al, наблюдались характерные для антикоагулянтов признаки отравления Поэтому часть животных (группа IA), получившая суммарную дозу 125 мг/ кг (1/2 DL50), перестала получать препарат Это было вызвано тем, что, как правило, при появлении симптомов клинической интоксикации аитикозгулянтными родентицидами, гибель животных наступает на 6-10 сугки Вторая часть животных продолжала участвовать в опыте 8 дней (группа IB) Причем первоначальная доза была увеличена через 4 дня в 1,5 раза Суммарно эта группа получила дозу близкую к уровню одной DL50

Гибель животных отмечали только после прекращения введения На основании данных, представленных в таблице 2, можно предположить, что DLson подострого эксперимента менее 125 мг/кг, а значит коэффициент кумуляции (Kcum) (<125/ 250) будет составлять < 0,5, что свидетельствует о чрезвычайной степени опасности кумулятивного действия метилфенацина-0,75% при данном режиме воздействия

Группе НА, задавали метилфенацин-0,75% по методу Кагана в дозе, составляющей 1/20 ОЬ5о в течение 20 суток, ИВ группе вводили препарат в том же количестве, но в течение 30 суток III группа служила контролем

Группа ПА получила суммарно дозу 250 мг/кг, т е уровень 1,0 ВЬ50> а группа ПВ - дозу 375 мг/кг (те 1,5 ОЬ50) Причем в ПА-группе не было гибели животных как на протяжении опыта, так и в последующие дни после опыта В данном случае наблюдалось проявление адаптационных механизмов по отношению к данному режиму воздействия метилфенацина-0,75%

В группе ПВ гибель животных наступала юлько на 4-6 сутки после окончания введения препарата и составила 50%, несмотря на го, чго суммарная доза в 1,5 раза больше однократной ОЬзо Таким образом, результаты более длительного воздействия низких доз свидетельствуют о сохранении адаптационных процессов, хотя и в меньшей степени На эго указывает и коэффициент кумуляции, рассчитанный по данным, полученным в этом опыте, который в первом случае составил 0,5, во втором 1,5 Таким образом, выявлена зависимость изменения кумулятивных свойств родентицидного препарата на основе метилфенацина от поступающей дозы и режима поступления в организм белых крыс

Определение порогов хронического действия метилфенацина-0,75% В целях определения реакции организма на длительное поступление метилфенацина-0,75% в организм, был проведен субхронический двухмесячный эксперимент (табл 3) На уровне 1/250 и 1/500 БЬ5о наблюдались изменения целого ряда показа гелей снижение количества эритроцитов, гемоглобина, сульфгидрильных групп и суммационно-порогового показателя, увеличение времени свертывания крови На уровне 1/1000 ВЬ50 (0.25 мг/кг) наблюдалось достоверное снижение СИЛ и повышение белка в моче, увеличение протромбинового времени

Таблица 3

Динамика изменения по интегральным и специфическим показателям у крыс в

субхроническом эксперименте

Группы Сутки исслед Эритр (млн/мкл) Гемогл (г%) Протромб время (с) SH-группы (ммоль'л) спп Белок в «оче (мг/л)

1/250 ОЬ50 (1 мг/кг) 14 28 42 56 5,8+0,12 6,5±0,11 6,0+0,06 9,8+0,21* 9,4+0,92 И 1±0,23* 11,2±0,34 38,4+2,2* 33,2+1,5* 25,8+1,1 28,0+1,6* 11,4+1,2 11,1+1,3 10,3+0,9* 9,8+1,1* 4,3+0,5 2,5+0,18* 3,7+0,42 3,2+0,18* 60+3,1* 69+5,7" 41+1,9* 77+7,8

1/500 ОЬ50 (0,5 мг/кг) 14 28 42 56 6,1+0,26 5,8+0,06* 6,36±0,23 6,15+0,11 10,4+0,16 10,3+0,42 11,5+0,45 11,5+0,34 31,7+2,4* 33,0+1,7* 25,0+1,5 25,5+2,0 12 1+0,8 10,3+0,9* 12,8+1,1 13,9+0,85 4 0+0,4 з,о±озб* 4,5+0,56 3,0+036* 83=5,1* 75,5+1,1* 35+10,4 94+6,0*

1/1000 ОЬ50 (0,25 мг/кг) 14 28 42 56 6,1 ±0,21 6,35±0,21 6,59+0,03 5,87+0,13 10,8+0,11 10,4+0,17 11,0+0,61 10,9+0,17 29,2+2,4* 30,4+1,2* 23,0+1,7 24,5+1,5 12,5+1,3 11,1+0,6 13,1=1=0 9 14,0+0,8 4,0+0,4 3,6+0,18* 4,0+0,42 3,0+036" 62+4,0* 60+3,4* 89+8,2 90+5,2*

1/3500 ОЬ50 (0,07 мг/кг) 14 28 42 56 6 0±0,28 6,1+0,22 6,5+0,12 5,9±0 16 10,7+0,22 10,2+0,12 11,5+0,18 11,4+0,3 24,8-г2,4 26,4+1,8* 24,6+3,1 25,0±2,5 13,1+0,9 12,6+1,2 12,9+0,9 14,2+1,3 3,8+0,24 4,0+0,18 4,2±0,3 4,0=1=0 18 6,0+0,28 6,1+0,22 6,5+0,12 5,9-ь0 16

Контроль 14 28 42 56 5,8-i0,14 6,1+0,11 6,43+0,17 6,0=0,08 10,7+0,14 9,9+0,25 12,0+0,06 11,3+0,37 21,0+2,7 20,0+1,6 22,0+2,2 20,5+2,1 13,5+0,7 12,8+0,8 13,0+0,9 14,За-1,1 3,8+0,2 4,2+0,18 4,3+0,28 4,2+0,18 индиввд> альный, ДЛЯ каждой пробы

* - при Р<0,05

В более низкой дозе 1/3500 ОТя, (0,07 мг/кг) выявлено лишь увеличение протромбинового времени, которое является специфическим показателем действия данной группы соединений Таким образом, дозу препарата 0,25 мг/кг можно считать порогом интегрального действия (Глтск ,„,), а дозу 0,07 мг/кг - близкой к порогу специфического действия (1лт л 5р)

Наличие адаптивных процессов в организме в условиях повторного действия метилфенацина-0,75% оценивалось по окончании эксперимента путем «нагрузки» тем же веществом в дозе, составляющей уровень ПЪ30

В контрольной группе гибель крыс при введении DL50 соответствует уровню среднелетальной дозы При ежедневном введении крысам дозы метилфенацина на уровне 1/3500 и 1/1000 DL50 отмечали аналогичную картину При введении DL50 крысам, ежедневно получавшим метилфенацин-0,75% на уровне 1/500 DL50, отмечали более высокий уровень гибели, чем в остальных группах Наибольшее отличие результатов при введении среднесмертельной дозы наблюдали в группе 1/250 DL50, где гибели крыс не отмечали

Анализируя полученные данные, можно предположить, что степень устойчивости животных зависит от дробности повторного введения

При определении степени опасности препарата, зона хронического интегрального действия (Zch mt-Lim!lc lnt/Limci, mt) составила 40, а зона хронического специфического действия (ZQh sp^Lim,* int/Limch sp) - 3,5 Значения зон биологического действия свидетельствуют о высокой степени опасности препарата в условиях хровическо1 о воздействия Мучагенная активность Оценка мутагенной активности метилфенацина-0,75% проводилась с помощью анализа клеток костного мозга белых беспородных крыс на стадии ана-телофазы

Мутагенная активность метилфенацин определялась на животных, подвергавшихся однократному и хроническому воздействию При сравнении, количество истинных перестроек хромосом, а также количество слипаний и отставаний в опытных группах достоверно не отличалось от тех же показателей контроля и не выходило за границу физиологической нормы для данного вида животных

На основании результатов проведенных исследований, получены токсикологические характеристики средства метилфенацин-0,75%, которые указывают на возможность использования полученной формы в целях борьбы с грызунами (табл 4)

Таблица 4

Параметры токсичности метилфенацина-0,75%

Показатели Результаты Заключение

ОЬ5о в желудок, мг/кг 2S0 III Класс опасности

Коэфф корреляции, г 1,0 Отс Комбинир действ

на кожу, мг/кг 550 III Класс опасности

Кк/0 2,2 Выраженное кожно-резорбт действ

ТЕ50 гибели, ч 168 <1 Класса опасности

Аллергическое, раздражающее действие Отсутствует -

Ьш1а(. 10 мг/кг Порог острого действия

Кк>М <0,5 (Lim et all) 1,5 (Каган) I Класс опасности II Класс опасности

ЬнПсь 0,25 мг/кг 0,07 мг/кг Порог интегрального действия Порог специфич Действия

Стабильность при хранении, мес >12 -

Коэфф избирательной токсичности (Кит) >7,0 > II класс опасности

40 (int) 3,5 (sp) Высокая степень опасности по общетоксич и специфич пок-лям

Коэфф запаса (К5) 10 Соединения, не представляющие непосредственной опасности

ОДУ 0,01 мг/кг Безвредный уровень воздействия

Гистологические изменения органов крыс при воздействии летальных доз препарата метилфенацин-0,75%

При исследовании легкого крыс были обнаружены признаки острой застойной гиперемии коллагеновые волокна периваскулярной соединительной ткани утолщены, полости альвеол и бронхиол частично заполнены гомогенной массой

В печени выявляли нарушение балочной структуры, центральные вены и внутридольковые капилляры не имели выраженных границ, были расширены и заполнены кровью

В селезенке отмечали гиперплазию и деструктивные изменения клеточных элементов фолликулов Наблюдали гиперемию и реактивное изменение состава белой и красной пульпы, а также соединительной ткани стромы

В почках крыс выявляли нечеткую границу между корковым и мозговым веществом Отмечали нарушения структур канальцев, расширение межканальцевых прослоек соединительной ткани Обнаружены скопления эритроцитов между прямыми канальцами собирательных трубочек

При исследовании тонкого отдела кишечника наблюдали десквамацию покровного эпителия ворсинок слизистой оболочки, а также увеличение количества бокаловидных клеток, в подслизистой основе выявляли отек и кровенаполнение сосудов

В целом, при поступлении метилфенацина-0,75% в летальных дозах наблюдалось комплексное нарушение структуры различных систем органов, вызванное нарушением гомеостаза в организме.

Результаты исследования метилфенацива-0,75% на сельскохозяйственных животных

С целью использования препарата метилфенацин-0,75% на объектах животноводства, проведено изучение возможности отравления родентицидным средством сельскохозяйственных животных (свиней) (табл 5)

Разовое поступление метилфенацина-0,75% в организм свиней в количестве до 1785 мг/кг не вызывает клинических признаков отравления и гибели Важно отметить, что эта доза соответствует 7 Ш^о для крыс Таким образом, коэффициент избирательной токсичности (Кит) для свиней превышает значение 7,0

Гибель свиней вызывает безальтернативное кормление в течение 8 суток готовой отравленной приманкой, приготовленной на основе метилфенацина-0,75%, в количестве 115 мг/кг в сутки

Таблица 5

Изменение гематологических показателей у свиней под действием

метилфенацина-0,75%

Доза Показатели

1 сут | 3 сут. | 5 сут |7сут | 9 сут. | Исут [ ЗОсут.

Эритроциты (млн/мм )

1785 мг/кг (1-кратн ) 7,1±0,42 7,05^0,42 - 7,210,42 7,3+0,27 - 7,2+0,6

115 мг/кг (8-кратн ) - 7,3+0,12 7,2+0,08 - 6,75+0,42 6,95* 7,1*

Контроль 7,2+0,42 7,2+0,28 7,2+0,28 7,3+0,18 7,05+0,33 7,05+0,33 7,05+0,15

Гемоглобин (г%)

1785 мг/кг (1-кратн) 9,9+1,0 9,9+1,1 - 9,7+0,1 9,5^0,59 - 9,8+0,3

115 мг/кг (8-кратн ) - 9,9+0,3 9,8+0,34 - 9.6+1,2 9,95* юл*

Контроль 9,9+0,42 9,8+0,28 9,8+0,28 10,2+0,28 10,63-0,33 10,6+0,33 9,8+0,15

Протромбиновое время (с)

1785 мг/кг (1-кратн ) 24,0+1,5 60,0+21,0 - 21,0+1,0 23,0+1,0 - 20,5+1,0

115 мг/кг (8-кратн ) - 36,5±9,5 54,5+16,0 - 57,5Х21,0 60,5* 21,75*

Контроль 24,5+1,5 22,5±0,5 22,5+0,5 20,0+0,5 21,0+0,5 21,0+0,5 19,511,5

* - среднее значение по результатам исследования двух живошых

Куры менее чувствительны к метилфенацину Кормление лтицы в течение 14 суток при ежедневном поступлении 820 - 930 мг/кг препарата не вызывало гибели и клинических признаков отравления метипфенацином

На основании полученных данных, был определен коэффициент запаса (К5) и безвредный уровень воздействия на организм сельскохозяйственных животных (1лтсьЗр/К*) Кч согласно классификации по составил 10 В качестве Ьпти брали значение 0,07 мг/кг (1/3500 ВЬ50) в виду выраженного воздействия метилфенацина-0,75% на ортшзм животных по специфическим показателям (1лтск 5р )

Таким образом, безвредный уровень воздействия на организм сельскохозяйственных животных метилфенацина-0,75% равен 0,01 мг/кг, что дает возможность использовать полученное родентицидное средство, в соответствии с требованиями санитарных и ветеринарно-санитарных правил

Испытание различных форм метилфснацина-0,75% в условиях производства

Эффективность родентицидного действия рабочих форм препарата метилфенацин-0,75% изучали на объектах (№ 6, № 7) промышленной зоны свинокомплекса «Шувалово» Костромской области На основании обследования мест обитания грызунов, изучения поедаемости контрольных проб неотравленной приманки был сделан вывод о высокой степени заселенности (22 крысы на 100 кв м) и проведена дератизация объектов площадью 2600 кв м

Комплексная обработка включала в себя раскладку и ежедневный контроль поедаемости приманки на основе препарата метилфенацин-0,75% в помещениях промышленной зоны, прилегающей территории, галереях, обработку нор и мест миграции грызунов В качестве пищевой основы использовали зерновую основу (комбикорм, дробленую пшеницу), которую смешивали с метилфенацином-0,75% согласно инструкции по применению и раскладывали в проходах и бытовых помещениях, вдоль стен и в пустых клетках В случае полной поедаемости приманки, количество приманочных точек и раскладываемой приманки пропорционально увеличивали Испорченную приманку заменяли на новую, использовали приманочные ящики и меняли место расположения приманочной точки, с целью предотвращения повторного загрязнения Жилые норы и пути миграции грызунов обрабатывали ядовитой пастой на основе вазелина, содержащего метилфенацин-0,75% в местах, недоступных для контакта с сельскохозяйственными животными Высокую поедаемость отмечали в первые 3-4 дня обработки В последующие 10 суток дератизационных мероприятий отмечали снижение поедаемости, вплоть до полного прекращения

В результате ежедневного проведения дератизации на обрабатываемых объектах отмечали снижение числа грызунов В дневное и вечернее время живых особей не наблюдалось, уменьшилось количество жилых нор,

признаков жизнедеятельности грызунов на объекте (помет, следы) не отмечали Эффективность проведенных мероприятий составила 95%

С целью сравнения эффективности действия метилфенацина-0,75%, на объектах № 1-5 промышленной зоны и на объектах № 1, 2 племенного сектора, проводили дератизацию с использованием Аратамус-М -аналогичного препарата индан-1,3-дионовой группы на основе этилфенацина В зависимости от первоначальной заселенности объектов крысами, возможности миграции и общего санитарного состояния, эффективность дератизации составила 90 - 98%

Таким образом, экспериментальные данные свидетельствуют о эффективности и целесообразности использования препарата метилфенацин-0,75% в качестве родентицидного средства

Выводы

1 Исследование 13 образцов индан-1,3-дионовых соединений показали, что наибольшая биологическая активность в ряду соединений отмечена у химически чистых веществ, имеющих не более 1-го радикала в паралю!южен и и При этом, метилфенацин, броминдан и фториндан обладали выраженными рагацидными свойствами и перспективны для производства родентицидных средств

2 Разработана препаративная форма родентицидного средства метилфенацин-0,75% В качестве растворителя использован полиэтиленгликоль-400, окрашенный водным раствором кармуазина

3 Среднелетальная доза препарата метилфенацин-0,75% составила 250 мг/кг при внутрижелудочном введении (III класс по ГОСТ 12 1 007-76), при поступлении через кожу - 550 мг/кг Кожно-оральный коэффициент составил 2,2, что свидетельствует о выраженном кожно-резорбтивном действии

4 Показано, что признаки отравления метилфенацином проявляются на 3-5 сутки в виде угнетения, взъерошенности шерсти, петехий и гематом

Патологоанатомические изменения отмечены в печени и почках (анемия), селезенке (гиперплазия), кишечнике (катаральное воспаление) В органах и полостях тела множественные кровоизлияния

5 По результатам острого опыта установлено среднее время гибели (ТЕ50) белых крыс 168 часов, что позволило прогнозировать высокую степень кумуляции метилфенацина в организме животных

6 Порог острого действия Liroac препарата метилфенацин-0,75% составил 10 мг/кг (1/25 DL50), порог хронического интегральною действия (Limchmt) - 0,25 мг/кг, специфического (Limci, sp) - 0,07 мг/кг (по протромбиновому времени) Зона хронического интегрального действия (Zch mt) составила 40, специфического действия (Zct, sp) - 3,5, что свидетельствует о высокой степени опасности препарата для крыс в условиях хронического воздействия

7 Установлено, что введение препарата метилфенацин-0,75% в конъюнктивальный мешок глаза кроликов вызывало слабое раздражающее действие на слизистую оболочку

8 Установлено, что метилфенацин-0,75% не обладает аллергенным и мутагенным действием Нанесение 20-кратных аппликаций 10%-ного раствора метилфенацин-0,75% на кожу морских свинок не выявило аллергического действия Ана-телофазный метод оценки мутагенной активности на кчетках костного мозга крыс показал, что воздействие доз ниже общетоксического уровня при однократном введении (1/2 DL50) не вызывало достоверного повышения уровня хромосомных аббераций

9 Показано, что кумулятивные свойства метилфенацина зависят от режима поступления в организм Коэффициент кумуляции (Kcum) при поступлении метилфенацина-0,75% на уровне 25 мг/кг (1/10 DL50), составил <0,5 (сверхкумулятивное вещество), а на уровне 12,5 мг/кг (1/20 DL5o) - 1,5 (вещество с выраженными кумулятивными свойствами)

10 При ежедневном 2-месячном введении метилфенацина в организм крыс в сублетальных дозах на уровне 1/250 DL30, у животных происходит

развитие адаптации, что выражается уменьшением чувствительности при введении среднелетальной дозы 11 Установлено, что для сельскохозяйственных животных и птицы метилфенацин-0,75% в форме приманки малоопасен Однократное введение препарата в дозе 1785 мг/кг не вызывало клинических признаков отравления свиней Кормление в течение 8 суток приманкой, в дозе 115 мг/кг метилфенацина-0,75%, вызывает падеж свиней Кормление кур приманкой содержащей 820-930 мг/кг препарата в течение 14 суток не вызывало признаков отравления

Предложения для практики

Для борьбы с синантропными грызунами разработано родентицидное средство метилфенацин-0,75%

Разработаны инструкция по применению препарата и технические условия, содержащие показатели качества и методы аналитического контроля

Список опубликованных работ

1 ДА Дроздов Определение токсичности родентицидов и их влияние на морфологию органов и тканей мышевидных грызунов / Материалы II международной научной конференции молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» -Москва-2003 - С 145-146

2 ДА Дроздов Влияние химической «чистоты» на токсикологические характеристики индандионов / Материалы V международной научной конференции молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» -Москва-2006 - С 213-214

3 Д А Дроздов, Г И Павленко Определение содержания метилфенацина в объектах окружающей среды / Материалы VI Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2006» - Самара -2006 - С 139

4 ДА Дроздов Влияние метилфенацина на процессы формирования устойчивости к антикоагулянтным родентицидам // Сб трудов научно-практической конференции «Качество продукции, технологий и образования» - Магнитогорск -2007 - С 108-109

5 Д А Дроздов, И В Самсонов, А Н Лебедев, С Л Кузнецов, Г И Павленко, Н М Бочаров Степень опасности метилфенацина для животных // Ветеринария -Москва -2007 -№7 -С 53-55

6 С Д Каракотов, А В Желонкин, В В Шапилова, А Л Чимишкян, В А Колесова, Д А Дроздов, Е М Ленченко Проблемы дератизации в России Синтез родентицидов в ряду производных индан-1,3-диона и их сравнительная характеристика // Химия России - Москва - 2004 - С 17-19

7 Г И Павленко, Д А Дроздов Влияние режимов воздействия родентицидных средств на процесс возникновения устойчивости у грызунов // Материалы 1 съезда ветеринарных фармакологов России - Воронеж -2007 - С 500-504

ГНУ ВНИИВСГЭ, 2007 г , Москва, Звенигородское шоссе, д 5 Заказ 247/2, тираж 80 -жз

Актуальность работы. Исследования в области борьбы с синантропными грызунами обусловлены необходимостью уменьшения ущерба, наносимого ветеринарным объектам. Мышевидные грызуны являются источником, резервуаром и механическими переносчиками возбудителей зооантропонозных (чума, туляремия, лептоспироз, листериоз, сальмонеллез, трихинеллез) и зоонозных болезней (мелиоидоз, болезнь Ауески, грипп птиц); поедают и загрязняют корма и готовую продукцию, повреждают дорогостоящие устройства, системы и материалы (А.А. Поляков, 1960; В.Г. Зацепин, 1970 -1999; Д.Ф. Траханов, 1973 -1994; И.М. Козлов, 1983; А.Н. Козлов, 1985, 1991; B.C. Пуцято, 1986; А.И. Дроздов, 1997; А.А. Нафтеев, 1997; A.M. Смирнов, 1999; А.Ф. Кадиров, 1999; Ю.М. Артеменков, 2000; В.В. Кучерук, 2000; В.А. Рыльников, 2007; М. Lund, 1977; R.J. Quy, 1992; R.M. Corrigan, 2001).

Использование комплекса родентицидных средств и инженерно-профилактических методов препятствует распространению грызунов на ветеринарных объектах. Вместе с тем, при регулярном профилактическом проведении дератизации отмечают избегание грызунами приманки (неофобия; аверсия) и появление резистентности к применяемым родентицидам (В.А. Быковский, 1990; Н.В. Бабич, 2005; А.Ф. Кадиров, 2006; В.А. Рыльников, 1990 - 2006; С.А. Клементьева, 2006; W.B. Jackson, 1975; A.D. MacNicoll, 1986; К. Nahas, 1989; P. Smith, 1994; R.A. Bevins, 1999; C.V. Prescott, 2000).

Истребление грызунов на объектах и профилактика повторных заселений освобожденных зон показывает, что лучших результатов можно добиться при смене дератизационных препаратов. Возникает необходимость изыскания новых соединений для эффективной ротации ассортимента средств борьбы с грызунами с целью предотвращения появления устойчивости (В.Г. Зацепин, 1970; С.Д. Каракотов, 2005; А.Ф.

Кадиров, 2007). Необходимость исследований новых родентицидных средств также обусловлена вопросами, связанными с механизмом действия этих веществ и предотвращением развития адаптационных процессов, что оказывает влияние на эффективность родентицидного средства и позволит прогнозировать физиологическое воздействие на организм грызунов и сельскохозяйственных животных.

В этой связи, приобретают значение исследования фармако-токсикологических свойств новых средств борьбы с грызунами, оценка количественной зависимости соотношений общетоксических и специфических эффектов, а также особенностей проявления материальной и функциональной кумуляции в зависимости от режима воздействия.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилась разработка родентицидного средства на основе метилфенацина и изучение фармако-токсикологических свойств. Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

- Разработка препаративной формы метилфенацин-0,75%, выбранного на основании результатов скрининговых исследований индан-1,3-дионовых соединений.

- Изучение фармако-токсикологических свойств метилфенацина-0,75%.

- Разработка методов определения метилфенацина-0,75% в препаративной форме и биологических субстратах (кормах).

- Испытание метилфенацина-0,75% в производственных условиях.

Научная новизна. Разработано родентицидное средство, представляющее собой 0,75%-ный раствор метилфенацина в полиэтиленгликоле с горечью (битрекс), окрашенное водным раствором красителя.

Метилфенацин-0,75% позволяет проводить дератизацию с подбором оптимальной пищевой основы и возможностью приготовления разнообразных форм (зерновые приманки; липкие массы и др.).

Изучены фармако-токсикологические свойства метилфенацина-0,75%: определены параметры токсичности, пороги острого и хронического действия, кожно-оральный коэффициент. Изучено раздражающее, аллергическое и кожно-резорбтивное действие препарата. Определена эффективность действия метилфенацина-0,75%, разработаны режимы применения.

Практическая ценность работы.

Разработано родентицидное средство на основе метилфенацина в виде концентрата.

Установлены режимы и принципы обработки, позволившие получить эффективность дератизации не менее 95%.

Разработаны технические условия и инструкция по применению препарата метилфенацин-0,75%.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на:

- V международной научной конференции молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (г. Москва, 2006)

- VI Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2006» (г. Самара, 2006)

- Заседании Ученого Совета ВНИИВСГЭ (2005-2007)

- Межлабораторном совещании ВНИИВСГЭ (08.06.2007) Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ. Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка используемой литературы и приложения. Диссертация изложена на 118 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы, 13 рисунков. Список литературы включает 212 источников отечественных и зарубежных авторов.

Выводы

1. Исследование 13 образцов индан-1,3-дионовых соединений показали, что наибольшая биологическая активность в ряду соединений отмечена у химически чистых веществ, имеющих не более 1-го радикала в шраположении. При этом, метилфенацин, броминдан и фториндан обладали выраженными ратицидными свойствами и перспективны для производства родентицидных средств.

2. Разработана препаративная форма родентицидного средства метилфенацин-0,75%. В качестве растворителя. использован полиэтиленгликоль-400, окрашенный водным раствором кармуазина.

3. Среднелетальная доза препарата метилфенацин-0,75% составила 250 мг/кг при внутрижелудочном введении (III класс по ГОСТ 12.1.007-76); при поступлении через кожу - 550 мг/кг. Кожно-оральный коэффициент составил 2,2, что свидетельствует о выраженном кожно-резорбтивном действии.

4. Показано, что признаки отравления метилфенацином проявляются на 35 сутки в виде угнетения, взъерошенности шерсти, петехий и гематом. Патологоанатомические изменения отмечены в печени и почках (анемия), селезенке (гиперплазия), кишечнике (катаральное воспаление). В органах и полостях тела множественные кровоизлияния.

5. По результатам острого опыта установлено среднее время гибели (ТЕ5о) белых крыс 168 часов, что позволило прогнозировать высокую степень кумуляции метилфенацина в организме животных.

6. Порог острого действия Limac препарата метилфенацин-0,75% составил 10 мг/кг (1/25 DL5o), порог хронического интегрального действия (LimCh int) - 0,25 мг/кг, специфического (Limch sp) - 0,07 мг/кг (по протромбиновому времени). Зона хронического интегрального действия (Zd, int) составила 40; специфического действия (Zch Sp) - 3,5, что свидетельствует о высокой степени опасности препарата для крыс в условиях хронического воздействия.

7. Установлено, что введение препарата метилфенацин-0,75% в конъюнктивальный мешок глаза кроликов вызывало слабое раздражающее действие на слизистую оболочку.

8. Установлено, что метилфенацин-0,75% не обладает аллергенным и мутагенным действием. Нанесение 20-кратных аппликаций 10%-ного раствора метилфенацин-0,75% на кожу морских свинок не выявило аллергического действия. Ана-телофазный метод оценки мутагенной активности на клетках костного мозга крыс показал, что воздействие доз ниже общетоксического уровня при однократном введении (1/2 DL5o) не вызывало достоверного повышения уровня хромосомных аббераций.

9. Показано, что кумулятивные свойства метилфенацина зависят от режима поступления в организм. Коэффициент кумуляции (Kcum) при поступлении метилфенацина-0,75% на уровне 25 мг/кг (1/10 DL50), составил <0,5 (сверхкумулятивное вещество), а на уровне 12,5 мг/кг (1/20 DL50) - 1,5 (вещество с выраженными кумулятивными свойствами).

10. При ежедневном 2-месячном введении метилфенацина в организм крыс в сублетальных дозах на уровне 1/250 DL50, у животных происходит развитие адаптации, что выражается уменьшением чувствительности при введении среднелетальной дозы.

11 .Установлено, что для сельскохозяйственных животных и птицы метилфенацин-0,75%) в форме приманки малоопасен. Однократное введение препарата в дозе 1785 мг/кг не вызывало клинических признаков отравления свиней. Кормление в течение 8 суток приманкой, в дозе 115 мг/кг метилфенацина-0,75%, вызывает падеж свиней. Кормление кур приманкой содержащей 820-930 мг/кг препарата в течение 14 суток не вызывало признаков отравления.