Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологические свойства тетрасолвина и его применение в ветеринарии

На правах рукописи

ТРОШИНА НАТАЛЬЯ АЛЕКСАНДРОВНА

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ТЕТРАСОЛВИНА И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ В ВЕТЕРИНАРИИ

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Краснодар- 2008

003457146

Работа выполнена в ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт и в Кубанском государственном аграрном университете

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук

Кузьминова Елена Васильевна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Александров Игорь Дмитриевич кандидат ветеринарных наук Яковенко Павел Павлович

Ведущая организация: Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт

Защита состоится «_Л£>> р^сг¿угГ/%р 2008г в/

часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (354400, г Краснодар, ул. Калинина, 13)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Куб ГАУ»

Автореферат разослан «

Ученый секретарь диссертационного совета доктор ветеринарных нау£<-—^ профессор П^

Яо^/}'

2008 г.

Родин И.А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Мировой опыт борьбы с заболеваниями животных показал, что основная роль при этом отводится лекарственной политике, позволяющей значительно снизить наносимый экономический ущерб (С.С. Абрамов, 1990; В.А. Ан-типов, H.A. Трошин и др., 2001; Е.М. Allan, 1988; J.A. Ellis, L.E. Hassard, 1995).

Для этого используют различные фармакологические средства, наибольшее распространение из которых получили антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны (В .А. Аликаев, В.В. Митюшин, 1983; Н.И. Крюков, Э.А. Шегидевич, 1984; В.П. Урбан и И.Л. Найманов, 1984; Н.Ю. Басова, А.Г. Шипи-цын, 2001; Б.М. Анохин, 2002; B.J. Buntain, 1987; В. Genicot, R. Close, 1995). Однако эффективность лекарств в последнее время значительно снизилась из-за изменения биологических свойств микроорганизмов, проявления множественной резистентности после многократного пассажирования и усиления их вирулентных и антигенных свойств. Распространение лекарственно-устойчивых штаммов микробов привело к снижению эффективности терапевтических мероприятий с применением широко используемых антимикробных препаратов (Н.И. Крюков, Э.А. Шегидевич, 1984; P.A. Цион, В.П. Урбан, 1989; Н.И. Баженов, 1998; А.Г. Шахов, 2000; Т. Wittum, W.E. Wolltn, 1996; Н. Schlüter, М. Kramer, 1997). В связи с этим возникает потребность в дальнейшем изучении этиопатогенеза заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных, а также разработка новых, более эффективных антимикробных препаратов комплексного лечебного действия, с дальнейшим их внедрением в ветеринарную практику.

При создании комплексных антимикробных препаратов, следует учитывать, что в инфекционном патологическом процессе, особенно при заболеваниях органов дыхания и пищеварения, принимают участие, как правило, одновременно нескольких различных возбудителей. В связи с этим, применяе-

\

мые лекарственные средства должны обладать широким и устойчивым спектром антимикробной активности, а также действовать противовоспалительно (В.М. Данилевский, 1974; А.И. Высокопоясный, Н.Ю. Басова, А.Г. Шипицын, 2000; В.А. Ан-типов, А.Г. Шипицын и др., 2001; РЛ. Ые, 1986; Ьоз^ег, АЛ. НешпзсЬ, 1996).

На основании вышеизложенного, нам представляется целесообразным разработка комплексного антибактериального препарата тетрасолвина. Внедрению нового лекарственного средства в ветеринарную практику должно предшествовать всестороннее изучение его специфической активности, фармако-токсикологиЧеских свойств и терапевтической эффективности. Цель и задачи исследований. Целью исследований явилась разработка, фармако-токсикологическая оценка и научное обоснование применения тетрасолвина в ветеринарной практике, а также внедрение его в промышленное производство.

Для реализации этой цели были определены следующие задачи:

— разработать состав и технологию промышленного получения тетрасолвина в условиях производственного цеха НПВП «Ветфарм» г. Тимашевска Краснодарского края;

— изучить физико-химические свойства препарата и дать характеристику параметров контроля качества и стабильности тетрасолвина;

— провести токсикологическую оценку препарата;

— определить основные фармакологические свойства тетрасолвина;

— изучить лечебную эффективность препарата при бронхопневмониях (бактериальной этиологии) и сальмонеллезе молодняка сельскохозяйственных животных;

— разработать нормативно-техническую документацию по изготовлению, контролю качества и применению тетрасолвина в ветеринарии.

Научная новизна. Впервые разработан и предложен для ветеринарной практики новый комплексный антибактериальный препарат тетрасолвин. Посредством разносторонних исследований определены фармакологические и токсикологические свойства препарата. Установлено, что новая композиция является малотоксичным соединением, не обладает местно-раздражающим, аллергенным, эмбриотоксичным и тератогенным действием, что гарантирует безопасность его применения животным.

Выявлено, что тетрасолвин проявляет выраженное антибактериальное действие и является эффективным лечебным средством при бронхопневмониях (бактериальной этиологии) и сальмонеллезе молодняка сельскохозяйственных животных. Практическая значимость работы. Для лечения заболеваний органов дыхания и пищеварения бактериальной этиологии у молодняка крупного рогатого скота и свиней предложен новый комплексный антимикробный препарат тетрасолвин.

Практическая ценность препарата подтверждается положительными результатами производственных испытаний в ветеринарии.

По результатам исследований разработана нормативно-техническая документация (технические условия и временное наставление по применению).

Апробация работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований, являющихся основой диссертации, доложены, обсуждены и одобрены на научных конференциях факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета (2003-2007 гг), заседаниях Ученых Советов Краснодарского НИВИ, заседаниях кафедр терапии и фармакологии КубГАУ, научно-производственных совещаниях - семинарах ветеринарных специалистов Краснодарского края в (20032007 г), на Международной научной конференции, посвященной 60-летию Краснодарского НИВИ (Краснодар 2006 г) и на Международной научно-практической конференции ВНИВИПФиТ

«Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» (Воронеж 2008 г).

Публикации: По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ (из них 1 в рецензируемом научном издании). Основные положения, выносимые на защиту:

- состав и физико-химические свойства тетрасолвина, основные требования к контролю качества;

- результаты оценки фармако-токсикологических свойств препарата;

- терапевтическая эффективность тетрасолвина при бронхопневмониях (бактериальной этиологии) и сальмонеллезе молодняка животных;

- результаты внедрения и экономическая эффективность применения тетрасолвина в ветеринарии.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 144 страницах стандартного компьютерного набора и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и приложения. Список использованной литературы включает 190 источников, в том числе, 79 иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 41 таблицей.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась в период с 2003 по 2008 годы на базе лабораторий фармакологии Краснодарского НИВИ и кафедры терапии и клинической диагностики КубГАУ в соответствии с Государственными планами научных исследований Российской академии сельскохозяйственных наук по заданию 06.01.01. с номером Госрегистрации 01.9.80.006908.

В проведении отдельных лабораторных исследований, с учетом их комлексности принимали участие сотрудники Краснодарского НИВИ - Н.Ю. Басова, А.Г. Шипицын и др.

Клинические эксперименты и производственные испытания в условиях животноводческих хозяйств Краснодарского края проводились с участием ветеринарных работников ферм.

Основной объект исследований - препарат тетрасолвин, наработанный ООО НПВП «Ветфарм» (г. Тимашевск).

Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствии с установленными требованиями к эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период работы и учета результатов. При постановке опытов были использованы клинические, токсикологические, фармакологические, биохимические, физиологические, микробиологические и другие методы исследований.

В экспериментальной части работы использовали 116 белых крыс, 96 белых мышей, 25 кроликов, 116 телят и 74 поросят. Широкие производственные испытания лечебной эффективности тетрасолвина проведены на 1650 поросятах и 1248 телятах в хозяйствах Тимашевского района, ОАО «им. Ленина» Новокубанского района, ООО АФ «Победа» Брюховецкого района Краснодарского края.

Общетоксические свойства препаратов оценивали путем определения острой и хронической токсичности, а также возможных побочных свойств и отдаленных последствий в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвержденными ГУВ СССР и «Методическими рекомендациями по токсико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии», одобренных секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1998).

Определение острой токсичности проводили на белых мышах и телятах по методу Deishman, Le Blank (1943), при котором исследуемые образцы вводили внутрибрюшиино и внутримышечно. После введения регистрировали характер токсического действия, обращая внимание на поведение, двигательную

активность, физиологические функции, поедаемость корма животными.

Параметры хронической токсичности изучали по общепринятым методикам на белых крысах, телятах и поросятах при пероральном, внутримышечном, внутрибрюшинном способе введения. Испытуемые образцы при введении внутрибрюшинно применяли в дозе, составляющей 1/5 и 1/10 от Ы)5о, а при введении препарата перорально и внутримышечно использовали терапевтическую дозу и дозы, эквив&тентные 3-х кратной и 5-ти кратной (ориентировочной) терапевтической. Инъекционно препарат вводили в объемах, допустимых нормативными документами (ГФ 11-е издание 1990; Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, под редакцией Фисенко В.П., 2000).

При наблюдениях учитывали потребление корма, воды, состояние кожного покрова и слизистых оболочек, показатели дыхания, пульса и температуры тела. Определение массы тела животных осуществляли в начале опыта, а затем каждые 10 дней, кровь для морфологических исследований брали 3 раза (фоновое, на 21 и 31-е сутки). В конце эксперимента проводили биохимические исследования сыворотки крови.

В хронических опытах на телятах оценивали влияние тет-расолвина на функцию почек и пищеварительного тракта, для чего этого от животных опытной и контрольной групп собирали мочу и фекалии. При этом в динамике устанавливали физико-химические свойства мочи (цвет, консистенцию, запах, концентрацию водородных ионов, удельный вес, содержание белка, углеводов, желчных пигментов и уробилина) и фекалий (цвет, запах и консистенцию - органолептически, наличие кровяных пигментов - бензидиновой пробой, желчных пигментов и жира -окраской суданом-3, крахмала - обработка раствором Люголя).

Выявление кожно-резортивного действия терасолвина проводилось на кроликах по методике И.В. Саноцкого (1970) методом накожных аппликаций.

Эмбритоксическое и тератогенное действие препарата определялась на белых крысах с оценкой влияния препарата на опытных животных во внутриутробный и лактационный период.

О качестве мяса свиней после применения препаратов судили по результатам ветеринарно-санитарной экспертизы, которая включала в себя органолептическую и дегустационную оценку мяса и жира, а также биохимические исследования, при которых определяли рН бульона через час и сутки после убоя, степень бактериальной обсемененности туш методом отпечатков с поверхности и глубоких слоев мышц, реакцию на пероксидазу, формольную реакцию и определение коэффициента кислот-ность-окисляемость по методике Сенченко Б.С. (2001).

Изучение специфической антимикробной активности препарата проводилась в опытах in vitro на чистых культурах микроорганизмов, выделенных при желудочно-кишечных и респираторных болезнях молодняка сельскохозяйственных животных. Применяли метод серийных разведений в жидкой питательной среде, в качестве тест-культур использовали референтные и полевые (патогенные) штаммы микроорганизмов.

Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) тетрасолвина определяли методом серийных разведений в мясопептонном бульоне (МПБ) по сумме компонентов препарата (метод основан на прямом определении основного количественного показателя, характеризующего микробиологическую активность препаратов).

О фармакодинамике препарата судили по клиническим показателям, срокам выздоровления и интенсивности роста животных, а так же его влиянии на морфо-биохимические факторы крови.

Фармакокинетику тетрасолвина изучали на телятах путем определения уровней левомицетина и тетрациклина в субстратах (сыворотке крови, моче, органах и тканях) общепринятым микробиологическим методом в модификации В.Ф. Ковалева с соавторами), а также срокам выведения остаточных количеств действующих веществ препарата из организма телят.

При гематологических исследованиях определяли количество эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева, цветовой показатель, выводили лейкоформулу по В.Г. Мухину, содержание гемоглобина (гемоглобинцианидным методом), высчитывали цветовой показатель, СОЭ в аппарате Панченкова, гематок-рит в капиллярах с центрифугой МЦГ-8.

Биохимические исследования состояли из определения в сыворотке крови общего белка (колориметрически), белковых фракций (нефелометрически), мочевины (цветной реакцией с диацетилмонооксимом и тиосемикарбазидом), общего кальция (с орто-кризолфталеином), неорганического фосфора (с ванадат-молибдатным реактивом), глюкозы (ферментативно). Активность трансаминаз, щелочной фосфатазы, мочевую кислоту, билирубин, холестерин, общие липиды, креатинин оценивали с помощью наборов фирмы «ДДС». Микроэлементный состав крови (железо, цинк, медь) исследовали атомно-абсорбционным методом.

Комплексные исследования животных проводили с учетом их кормления, содержания и выращивания, выявляя при этом причины заболевания, оценивали особенности течения болезни, паталогоанатомическую картину павших и вынуждено убитых животных, диагноз заболеваний подтверждали лабораторными исследованиями.

Применение тетрасолвина при терапии больного молодняка сельскохозяйственных животных обосновывалось выделением микрофлоры от павших или вынуждено убитых животных с обязательной лабораторной подтитровкой на чувствительность к препарату.

О терапевтической эффективности препарата судили по состоянию больного животного, срокам выздоровления, приросту массы тела животного и положительном влиянии на морфологические и биохимические показатели крови в сравнительном аспекте с контрольными животными.

Экономическая эффективность применения тетрасолвина рассчитана в соответствии с «Методикой определения экономи-

и

ческой эффективности ветеринарных мероприятий» (1982), а также с «Методическими указаниями по определению экономической эффективности ветеринарных мероприятий», утвержденными Департаментом ветеринарии МСХ РФ (2002), и на основании «Методических рекомендаций по определению общего экономического эффекта от использования результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ в Агропромышленном комплексе» (2007).

Полученные в опытах данные были подвергнуты биометрической обработке с помощью программного обеспечения фирм Microsoft и Carl Zeiss. Критерий достоверности определяли по таблице Стьюдента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Физико-химические свойства и изучение стабильности

тетрасолвина

В результате сотрудничества лабораторий фармакологии Краснодарского НИВИ, кафедры терапии и клинической диагностики КубГАУ и ООО НПВП «Ветфарм» (г. Тимашевск) разработан новый отечественный препарат тетрасолвин.

Тетрасолвин - комплексный химиотерапевтический препарат, представляющий собой раствор тетрациклина, левомице-тина, новокаина и аскорбиновой кислоты в пропиленгликоле. Растворим в большинстве органических растворителей: поли-этиленгликоле, ксилоле, ацетоне, гексане, метаноле и др.

На препарат разработана научно-техническая документация, в которой отражены требования, гарантирующее высокое качество тетрасолвина. В технических условиях отражены показатели, характеризующие препарат по внешнему виду, цвету, массовой доли действующих веществ, стерильности и безвредности.

Для производства 100 мл тетрасолвина используют следующее сырье:

— левомицетин ГФХ, ст. 371 - 4 г активного вещества;

— тетрациклин гидрохлорид ГФХ, ст. 663 - 4 г активного вещества;

~ аскорбиновая кислота ГФХ, ст.6 или ФСП 42-0035-225102-0,1 г;

- новокаин ГФХ, ст. 467 или ФС 42-2709-90 - 1 г;

--1,2 -пропиленгликоль ТУ 6.01. 4689387-2-88 до 100 мл.

По органолептическим и физико-химическим показателям препарат должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице 1.

Таблица 1 - Физико-химические свойства препарата

Наименование показателя Характеристика и нормы

Внешний вид, цвет Светло-коричневая жидкость

Механические включения Не допускаются

Подлинность:

Левомицетина Вишневый цвет

Тетрациклина гидрохлорид Коричневый цвет

Новокаина Зеленый цвет

Аскорбиновая кислота Образование осадка

Стерильность Стерильный

Токсичность, тест-доза на мышь, п/к 0,05

Массовая доля левомицетина, г 4,0+0,4

Массовая доля тетрациклина гидрохлорида, г 4,0±0,4

Массовая доля аскорбиновой кислоты, г 0,1

Массовая доля новокаина, г 1,0

-1,2 -пропиленгликоля, мл до 100

рН - препарата 2,60-3,85

Изучение физико-химических свойств и стабильности препарата, проведенные в соответствии с СТО 26582716-0001-05 в течении 36 месяцев показали, что содержание активных дейст-

вующих веществ тетрасолвина, хранившегося в сухом темном месте при температуре от 10 до 25°С, соответствуют требованиям НТД и свидетельствуют о возможности установления срока годности препарата при хранении в сухом темном месте при температуре от 10 до 25 °С в течение 24 месяцев.

3.2. Изучение антимикробной активности тетрасолвина

В опытах in vitro проведено изучение специфической антимикробной активности препарата на чистых культурах микроорганизмов, выделенных при желудочно-кишечных и респираторных болезнях у молодняка сельскохозяйственных животных.

Установлено, что препарат обладает широким спектром антимикробного действия в отношении испытанных культур микроорганизмов. Минимальная бактериостатическая концентрация тетрасолвина в отношении грамположительных микроорганизмов в опытах составляла порядка 1,48 - 3,14 мкг/мл. В отношении музейных и полевых штаммов сальмонелл и кишечной палочки минимальная бактериостатическая концентрация составляла 24,5 -50,0 мкг/мл. Бактерицидные свойства тетрасолвина проявлялись в концентрациях, в 2-4 раза превышающих МБсК, а при исследовании диско-диффузионным методом (ДДМ) выявлено, что препарат обладает высокой антибактериальной активностью с зоной задержки роста выделенных бактерий от 25 до 32 мм.

3.3. Токсикологическая характеристика тетрасолвина

Изучение токсических свойств тетрасолвина на разных видах животных позволило определить его основные токсические характеристики.

На основании проведенных исследований было установлено, что для белых мышей МПД тетрасолвина составляет 3,3 мл/кг, LDi6- 3,6 мл/кг, LD50- 5 мл/кг, LD«4- 6,4 мл/кг, LDioo- 6,7 мл/кг (таблица 2).

Таблица 2 - Результаты изучения острой токсичности тетрасол-вина при парентеральном способе введения

Вид животных Доза тетрасолвина (мл/кг массы тела)

Белые мыши Максимально переносимая доза ЛД16 ЛД50 ЛД84 ДЦ100

3,3 3,6 5,0 6,4 6,7

Таким, образом, по параметрам острой токсичности препарат относится к малоопасным веществам (ГОСТ 12.1.007).

Изучение хронической токсичности тетрасолвина показало, что его длительное применение лабораторным животным (белым крысам) и телятам при введении внутрибрюшинно (в дозе, составляющей 1/5 и 1/10 от 1Л)5о), перорально и внутримышечно (в дозе, эквивалентной 3-х кратной и 5-ти кратной ориентировочной терапевтической) не вызывало видимых клинических изменений в организме животных. Все находившиеся в опыте крысы и телята были активны, подвижны, охотно поедали корм, нарушений дефекации и мочеиспускания не отмечалось, температура тела, частота дыхания и пульса находились в пределах физиологической нормы.

При лабораторном исследовании крови опытных животных было установлено, что клинические и морфо-биохимические показатели крови находились в пределах физиологической нормы и не отличались от показателей контрольной.

При патоморфологическом исследовании органов и тканей экспериментальных животных отклонений выявлено не было, взвешивание внутренних органов показало, что средняя масса органов опытных животных существенно не отличалась от таковых показателей в контроле, что может свидетельствовать об отсутствии дополнительной нагрузки на органы, а также токсического воздействия изучаемого препарата и о его хорошей переносимости организмом.

При анализе данных хронического токсикологического эксперимента на телятах, в ходе которого изучали влияние тет-расолвина на функцию почек, пищеварительного тракта и картину крови, получены данные, свидетельствующие о том, что физико-химические показатели мочи и фекалий соответствовали норме, в крови повышалось содержание эритроцитов, общего белка, а также наблюдалась тенденция к увеличению гамма-глобулиновой фракции сыворотки крови (в пределах нормы). Остальные показатели существенно не отличались от контрольных.

В хроническом токсикологическом опыте также изучали влияние тетрасолвина на функциональное состояние печени телят. По результатам исследований сделан вывод, что введение препарата в пределах нормы повысило уровень общего белка, а количественное содержание гепатоспецифических ферментов (AJIT и ACT) и билирубина у телят опытной и контрольной групп не различалось. Это указывает на то, что тетрасолвин при длительном применении животным в дозах, превышающих терапевтические, не оказывает токсического действия на печень.

При проведении ветеринарно-санитарной экспертизы мяса поросят, которым вводили тетрасолвин, установлено, что препарат не изменяет вкусовых и других качеств мяса.

Изучение кожно-резорбтивного и аллергизирующего действия тетрасолвина не выявило его негативного влияния, как в месте инъекций и аппликаций, так и на общую ответную реакцию организма. Это характеризует его как препарат, не оказывающий местного аллергизирующего действия на организм животных.

При изучении отдаленных последствий установлено, что тетрасолвин не оказывает негативного влияния на течение беременности и роды. Потомство, рожденное от крыс, получавших препарат во время беременности, не отличалось от крысят контрольных животных. Различий в их росте, развитии и поведении не обнаружено, что свидетельствует об отсутствии эмбриоток-сического и тератогенного действия у изучаемого препарата.

Таким образом, длительное назначение тетрасолвина исключает опасность возникновения токсикозов, что позволяет его использование в ветеринарной практике.

3.4. Фармакологические свойства тетрасолвина При оценке фармакологических свойств тетрасолвина установили, что фармакокинетика препарата характеризуется его высокой биодоступностью для организма телят.

Телятам с массой 55-60 кг тетрасолвин вводили внутримышечно однократно в дозе 0,3 мл/кг массы тела. Затем через 0,5; 1; 3; 6; 9; 12; 18; 24; 48 и 72 часа после введения препарата у животных брали кровь и проводили определение содержания левомнцетина и тетрациклина в сыворотке. Таблица 3 - Содержание антибиотиков (мкг/мл) в сыворотке крови телят после введения тетрасолвина

Сроки исследования (ч) Левомицетин Тетрациклин

0,5 1,6±0,24 1,1+0,02

1 3,32+0,18 2,85±0,12

3 5,52+0,9 4,96±0,08

6 8,28±0,05 8,02±1,23

9 7,79±0,24 6,84±0,9

12 6,45±0,5 5,60±0,18

18 5,39±0,33 4,35±0,34

24 4,57±1,33 3,52±1,42

48 4,08±1,09 3,19±0,33

72 3,58±1,26 2,80±0,33

Исследованиями установлено (таблица 3), что после инъекции тетрасолвина левомицетин и тетрациклин, входящие в состав препарата, быстро всасываются из места инъекции и обна-

руживаются в сыворотке крови уже через полчаса после введения. Максимальные концентрации тетрациклина и левомицети-на в сыворотке крови регистрировались через 6-9 часов после введения препарата. Однократное введение тетрасолвина телятам в дозах 0,3 мл/кг обеспечивало нахождение терапевтических концентраций антибиотиков в сыворотке крови в течение 72 часов.

Таблица 4 - Содержание остаточных количеств антибиотиков в тканях после введения тетрасолвина телятам

Субс трат Сроки исследования (часы)

120 144 192

Концентрация антибиотиков в субстрате, мкг/г

Левоми-цетин Тетрациклин Левоми-цетин Тетрациклин Левоми-цетин Тетрациклин

Мышечная ткань 0,62 0,43 0,34 0,21 0 0

Место инъекции 2,90 1,62 0,92 0,43 0 0

Печень 1,15 0,76 0,48 0,29 0 0

Почки 0,42 0,24 0,21 0,12 0 0

Сердечная мышца 1,08 1,12 0,54 0,62 0 0

Легкие 0,38 0,22 0,13 0,16 0 0

Сыворотка крови 0,12 0,08 0 0 0 0

Моча 0,92 0,63 0,24 0,18 0 0

При определении концентрации антибиотиков в субстратах и сроков выведения остаточных количеств действующих веществ тетрасолвина из организма телят было установле-но(таблица 4), что через 120 и 144 часов после последнего введения препарата остаточные количества левомицетина и тетрациклина обнаруживали во всех органах и биологических жидкостях. Больше всего их определяется в месте инъекции, печени, сердечной мышце, мышечной ткани и моче. Через 192 часа (8 суток) после окончания применения препарата во всех исследованных образцах остаточных количеств антибиотиков обнаружено не было.

3.5. Терапевтическая эффективность тетрасолвина

Изучение терапевтической эффективности препарата проводили при бронхопневмониях (бактериальной этиологии) молодняка сельскохозяйственных животных и при сальмонелле-зе телят.

Производственные испытания препарата проводили на поросятах и телятах 30-45 дневного возраста больных бронхопневмонией. Диагноз устанавливали на основании данных клинического обследования животных, лабораторных исследований, патологоанатомического вскрытия и с учетом эпизоотической ситуации в хозяйствах.

У культур, выделенных из носовой слизи больных животных и из патологического материала от павшего молодняка, перед началом опыта определяли чувствительность к антибиотикам.

В первой серии опытов изучали терапевтическую эффективность тетрасолвина на телятах. С этой целью было сформировано три группы телят, больных бронхопневмонией: животным первой группы тетрасолвин вводился внутримышечно, один раз в сутки, трехкратно, с интервалом в 72 часа в дозе 0,2 мл/кг массы тела; телятам второй группы препарат применяли по аналогичной схеме в дозе 0,3мл/кг; третья группа была контрольной, в кото-

рой использовали гентамицин два раза в день в/м в дозе 1,5 мг/кг массы тела животного.

Таблица 5 - Терапевтическая эффективность тетрасолвина при бронхопневмонии телят

Показатели Группы животных

Тетрасол-вин Тетрасол-вин Гентамицин

Количество животных в группе 24 22 26

Масса животных на начало опыта (кг) 56,3 65,2 55,8

Разовая доза препарата, мл/кг, мг/кг 0,2 0,3 1,5

Кратность введения в сутки, (раз) 1/4-3 72часа 1/4-3 72часа 2

Длительность применения, (раз, дней) 3 л 10

Вынуждено убитых, жив. 3 1 5

Пало, жив. - ~ 1

Выздоровело, жив. 21 21 20

Терапевтическая эффективность, % 87,5 95,5 76,9

За животными опытных и контрольной групп вели наблюдение, отмечая изменения в клиническом состоянии, прироста массы тела телят, а также динамику морфологических и биохимических показателей крови до и после лечения.

Исследованиями установлено (таблица 5), что тетрасол-вин при бронхопневмонии обладает более высокой терапевтиче-

ской эффективностью (87,5 и 95,5%) в сравнении с гентамици-ном (76,9%), при этом выздоровление больных животных наступало после второй и третьей инъекции препарата. Среднесуточный прирост массы тела у опытных животных второй группы составил 420г, что на 93г выше, чем по контрольной группе.

У 6-ти телят (23,1%) контрольной группы и 4-х телят опытных групп симптомы болезни прогрессировали, животные были угнетены, аппетит резко снизился, носовые выделения приняли слизисто-гнойный характер, при аускультации прослушивались влажные хрипы, температура тела резко снизилась до 35,8 - 36,2 С, животные были вынуждено убиты.

При фоновом изучении биохимических факторов крови у больных телят выявлен повышенный уровень глюкозы, в сравнении со здоровыми, что вероятно, вызвано стрессовым воздействием, влиянием продуктов воспалительной реакции, гипоксией и усилением реакций анаэробного гликолиза с повышением потребности тканей в глюкозе. При этом зарегистрировано снижение концентрации общего белка, нарушение его фракционного состава в сторону увеличения доли глобулиновых фракций. Анализ морфологических факторов крови свидетельствует о том, что у телят больных бронхопневмонией, по сравнению со здоровыми, снижено содержание гемоглобина, эритроцитов и увеличено число лейкоцитов.

Результаты исследования крови по окончании опыта показали, что лечебные мероприятия оказали положительное влияние на ее морфо-биохимические показатели, причем терапия тетрасолвином была более эффективна в сравнении с гентами-цином (таблица 6). Назначение тетрасолвина в дозе 0,3 мл/кг массы тела способствовало повышению числа эритроцитов. Так, у опытных телят этот показатель равнялся в среднем 7,2±0,52, против

6,8±0,31 10'7л в контроле, уровень гемоглобина возрос на 5% при достоверности значений. Количество лейкоцитов, напротив, снизилось и составило в опытной группе 10,4+0,1 109/л, тогда как у животных, получавших гентамицин, их число сохранялось на уровне 12,5±0,3 109/л. К концу эксперимента у жи-

вотных опытных групп устранялась гипопротеинемия, нормализовалось распределение белковых фракций, тогда как в контроле уровень общего белка оставался за нижней границей нормы.

Таблица 6 - Морфологические и биохимические показа-

тели крови телят после лечения (М+т; п=10)

Показатели Тетрасолвин 0,3 мл/кг Контроль гентамицин

Эритроциты, 10 /л 7,2±0,52* 6,8±0,31

Лейкоциты, 10у/л 10,4±0,1 12,5±0,3

Гемоглобин, г/л 116,1+2,7* 110,3+1,8

Лейкограмма, %: Эозинофилы 3,5±0,1 3,0±0,4

Нейтрофилы: юные палочкоядерные сегментоядерные 0,7±0,2 0,6±0,2

4,0±0,5 2,6±0,2

35,2±0,6 31,6±2,8

Лимфоциты 52,4±0,5 57,6±0,5

Моноциты 4,2±0,3 4,6±0,1

Общий белок, г/л 64,3+1,31* 54,7±1,17

Белковые фракции: % альбумины 40,1±2,45 39,46+1,14

а-глобулины 14,12±1,81 14,4+1,81

р-глобулины 15,6+0,75 17,4+1,11

у-глобулины 30,15±1,16 28,7+1,82

Каротин, мкг% 134,1+1,36* 118,8+2,28

МСМ ,ед.опт. пл./л 0,41+0,04* 0,56+0,03

Фагоц.активность, % 75,1±0,4 68,4±1,2

*- Р < 0,05 по отношению к позитивному контролю

При изучении уровня эндогенной интоксикации по концентрации молекул средней массы (МСМ) установлено, что к концу опыта в группе животных, получавших тетрасолвин, этот показатель был ниже на 36,6%, в сравнении контролем.

Влияние препарата на концентрацию каротина проявилось в его достоверном увеличении в сравнении, как с фоновым уровнем, так и с показателями группы позитивного контроля.

Таким образом, динамика полученных показателей свидетельствует о доброкачественном течении патологического процесса и хорошей терапевтической эффективности тетрасол-вина при бронхопневмониях телят.

В следующей серии опытов исследования проводились в ООО к-з «Память Ленина» на поросятах двухмесячного возраста, по изучению лечебной эффективности тетрасолвина при стрептококковой бронхопневмонии (диагноз подтвержден Ти-машевской ветеринарной лабораторией).

Таблица 7 - Терапевтическая эффективность тетрасолвина при бронхопневмонии поросят

Показатели Тетрасолвин Стрептомицин

Количество животных 38 24

Ср. вес на начало опыта, кг 19,8 19,5

Ср. суточный прирост массы тела, г 278,6 189,3

Ср. вес на конец опыта, кг. 23,2 21,8

Пало поросят, жив. 3 4

% 7,9 16,6

Терапевтическая эффективность, % 92,1 83,4

Препарат вводили внутримышечно трехкратно с интервалом в 72 часа в дозе 0,3 мл/кг массы тела, в сравнении с тра-диционно-применяемой в хозяйстве терапии стрептомицином.

За животными вели ежедневные наблюдения, учитывая скорость роста и сроки выздоровления (таблица 7).

Установлено, что тетрасолвин обладает более высокой терапевтической эффективностью, в сравнении со стрептомицином (92,1% против 83,4%). При его применении исчезновение клинических признаков заболевания наступало, чаще всего, после двух-трех введений. Прирост массы за период лечения был также выше, вследствие быстрого купирования симптомов болезни.

С целью определения терапевтической эффективности данного препарата при сальмонеллезе телят принципу пар-аналогов, было сформировано по 2 группы больных животных месячного возраста по 10 особей в каждой. Первой группе телят тетрасолвин вводили внутримышечно в дозе 0,3 мл/кг массы тела один раз в сутки, повторяя инъекции 1 раз через 72 часа. Вторая группа телят находилась на традиционно принятом в хозяйстве лечении, т.е., телятам с терапевтической целью вводили ди-оксидин в дозе 0,2 мл/кг массы тела два раза в сутки. Животным, кроме указанных препаратов, проводилось симптоматическое лечение и заместительная терапия.

У больных телят регистрировались диарея и кашель, в начале редкий и слабый, в дальнейшехм, по мере развития болезни - влажный, частый и болезненный. По мере развития болезни нарастала вялость и угнетение телят, истечение из носа становились гнойными, кашель учащался. Диагноз заболевания подтверждался лабораторным исследованием.

В опытной группе на первый и второй дни лечения пало по одному теленку, а в группе позитивного контроля в течение первых шести дней лечения было вынуждено убито два и пало три теленка. После четырехкратного введения тетрасолвина состояние больных животных улучшилось, животные хорошо поедали корм, тогда как в контрольной группе заболевание прогрессировало (таблица 8).

Результаты опытов свидетельствуют о хорошей терапевтической эффективности тетрасолвина при сальмонеллезе у те-

лят. В опытной группе количество выздоровевших животных при применении тетрасолвина составило 80% от числа заболевшего молодняка, в то время как в группе, где применяли диокси-дин, его терапевтическая эффективность составила не более 50%. При этом сроки выздоровления сокращалось на 25-30% в сравнении с контролем. Препарат, сокращая сроки течения заболевания, способствовал лучшему росту и развитию заболевшего молодняка, что отразилось на увеличении среднесуточного прироста животных в опытной группе на 90,8 г выше, в сравнении с контролем.

Таблица 8 - Терапевтическая эффективность тетрасолвина при сальмонеллезе телят (п= 10)

Группы животных

Показатели Тетрасолвин Диоксидин

Масса животных на начало опыта, кг 52,3 51,7

Разовая доза препарата, мл/кг 0,3 0,2

Кратность введения в сутки, раз 1 2

Кратность обработок, всего 4 24

Срок применения, дней 4 12

Вынуждено убито, жив. — 2

Пало, жив. 2 3

Лечебная эффективность, % 80,0 50,0

Таким образом, тетрасолвин является высокоэффективным терапевтическим средством при стрептококковой бронхопневмонии и сальмонеллезе молодняка крупного рогатого скота и свиней. Применение препарата сокращает сроки выздоровления и снижает отход животных, при этом курс лечения тетрасолвином технологически прост в исполнении.

4. ВЫВОДЫ

1. Тетрасолвин является новым отечественным комплексным препаратом, в состав которого входят левомицетин и тетрациклин. Контроль качественных и количественных показателей препарата осуществляется в соответствии с утвержденными техническими условиями по органолептическим и физико-химическим показателям, характеризующим его внешний вид, запах и вкус, подлинность и массовую долю действующих веществ, стерильность, микробиологическую чистоту и токсичность.

2. При исследовании специфической активности установлено, что тетрасолвин обладает выраженным антибактериальным действием в отношении Escherichia coli, Klebsiela pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus C, Salmonella cholerae suis и др.

3. Препарат является малотоксичным для теплокровных животных, как в острых, так и хронических опытах. Величина LDso тетрасолвина составляет 5 мл/кг, что позволяет отнести его к 4-му классу опасности (незначительные опасные вещества). При длительном многократном введении тетрасолвина в дозах, превышающих терапевтическую в 3-5 раз, а также в дозах, составляющих 1/5 и 1/10 от LD50, он не влияет отрицательно на общее состояние животных и другие показатели их клинического статуса, не оказывает вредного местного действия, существенно не влияет на морфо-биохимические показатели крови, не проявляет отрицательного влияния на основные виды обмена веществ, не нарушает функции и структуру жизненно важных систем, органов и тканей, не изменяет вкусовых и других качеств мяса.

Препарат не действует раздражающе на кожу и слизистые оболочки, не имеет аллергизирующих, эмбриотоксических и тератогенных свойств.

4. Фармакокинетика тетрасовина характеризуется хорошей биодоступностью основных компонентов препарата для организма животных (левомицетин и тетрациклин выявляются в

сыворотке крови через 30 минут после инъекции, а их максимальные концентрации регистрируются через 6-9 часов после введения препарата). Однократное введение тетрасолвина телятам в дозе 0,3 мл/кг массы тела обеспечивает нахождение терапевтических концентраций антибиотиков в сыворотке крови в течение 72 часов. В субстратах (в печени, мышцах, легких, сердце, почках и моче), остаточные количества действующих веществ тетрасолвина обнаруживаются через 120 и 144 часов после последнего введения препарата. Полная его элиминация происходит в течение 168-192 часов, рекомендуемый срок убоя животных на мясо после назначения препарата составляет 7-8 суток.

5. Фармакодинамика препарата обусловлена выраженной антимикробной активностью в отношении возбудителей респираторных (бронхопневмонии) и желудочно-кишечных (сальмо-неллезе) заболеваний молодняка животных. Под влиянием препарата ослабляются и исчезают признаки болезни, возрастает темп прироста массы тела, оптимизируется иммуно-биохимический статус организма, что выражается в ликвидации гипопротеинемии, нормализации протеинограммы, увеличении концентраций эритроцитов и гемоглобина, а также фагоцитарной активности лейкоцитов, снижение же уровня молекул средней массы свидетельствует об уменьшении уровня эндогенной интоксикации.

6. Тетрасолвин является высокоэффективным терапевтическим средством при стрептококковой бронхопневмонии и сальмонеллезе молодняка крупного рогатого скота и свиней. Применение препарата внутримышечно в дозе 0,3 мл/кг массы тела сокращает сроки выздоровления (10-15,2%) и снижает отход животных (5,1-16,6%), терапевтическая эффективность лечения составляет от 80 до 95,5%, при этом курс лечения тетра-солвином технологически прост в исполнении.

7. Широкими производственными испытаниями, проведенными в хозяйствах Тимашевского, Брюховецкого, Каневского, Новокубанского районов Краснодарского края подтверждены

экспериментальные данные о биологической и терапевтической эффективности тетрасолвина, а также об экономической целесообразности его применения в ветеринарии. Так, его экономическая эффективность составляет 8,3 рубля на 1 руб затрат.

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Ветеринарной практике и животноводству предложен новый комплексный антимикробный препарат с пролонгированными свойствами для лечения желудочно-кишечных и респираторных (бактериальной этиологии) заболеваний животных. Применение тетрасолвина проводится в соответствии с временным наставлением, утвержденным в установленном порядке.

Производство препарата обеспечено научно-производственным предприятием «Ветфарм» г. Тимашевск Краснодарский край.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Трошина H.A., Черновская A.A. Лечебная эффективность салура и тетрасолвина при желудочно-кишечных заболеваниях у поросят //Труды КГАУ.- Краснодар 2004.- С. 122.

2. Ткачев E.H., Трошина H.A. Лечебная эффективность ле-вотетрасульфина и тетрасолвина при интрагайморальном методе введения телятам, больным бронхопневмонией //Профилактика и лечение болезней животных.-Труды КубГАУ.- Краснодар 2007,- Выпуск 426 (454). - С. 53-55.

3. Трошина H.A., Редько В.П. Изучение фармакокинетики комплексного антибактериального препарата тетрасол-вин //Профилактика и лечение болезней животных,- Труды КубГАУ.- Краснодар 2007.- Выпуск 426 (454). - С. 5153.

4. Трошина H.A. Антимикробная активность и клиническая эффективность тетрасолвина //Труды Кубанского аграр-

ного университета. - Краснодар 2008. №1(10). - С. 194197.

5. Кузьминова Е.В., Трошина H.A. Изучение токсических свойств препарата Тетрасолвин //Материалы междунар. научно-практич. конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях».- Воронеж 2008.-С. 283-285.

6. Трошина H.A., Кузьминова Е.В. Фармакологические и лечебные свойства Тетрасолвина //Материалы междунар. научно-практич. конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях».- Воронеж 2008.-С. 285-288.

Подписано в печать 20.11.2008 г. Бумага офсетная Печ. л. 1 Тираж 100 экз.

Формат 60*84 J/j^

Офсетная печать Заказ № 771

Отпечатано в типографии КубГАУ 350044. г. Краснодар, ул. Калинина, 13

Актуальность темы. Мировой опыт борьбы с заболеваниями животных показал, что основная роль при этом отводится лекарственной политике, позволяющей значительно снизить наносимый ими экономический ущерб (С.С. Абрамов, 1990; В.А. Антипов, H.A. Трошин и др., 2001; Е.М. Allan, 1988; J.A. Ellis, L.E. Hassard, 1995).

Для этого( используют различные фармакологические средства, наибольшее распространение из которых получили антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны (В.А. Аликаев, В.В. Митюшин, 1983; Н.И. Крюков, Э.А. Шегидевич, 1984; В.П. Урбан и И.Л. Найманов, 1984; Н.Ю. Басова,

A.Г. Шипицын, 2001; Б.М. Анохин, 2002; BJ. Buntain, 1987; В. Genicot, R. Close, 1995). Однако их эффективность в последнее время значительно снизилась из-за изменения биологических свойств микроорганизмов, проявления множественной резистентности после многократного пассажирования и усиления их вирулентных и антигенных свойств. Распространение лекарственно-устойчивых штаммов условно-патогенных микробов привело к снижению эффективности лечения с применением широко используемых антимикробных препаратов (Н.И. Крюков, Э.А. Шегидевич, 1984; P.A. Цион,

B.П. Урбан, 1989; Н.И. Баженов, 1998; А.Г. Шахов, 2000; Т. Wittum, W.E. Wolltn, 1996; Н. Schlüter, М. Kramer, 1997). Что требует дальнейшего изучения этиопатогенеза заболеваний молодняка сельскохо сельскохозяйственных животных, а также разработки и изучения новых, более эффективных антимикробных препаратов комплексного лечебного действия, с дальнейшим их внедрением в ветеринарную практику.

При разработке антимикробных комплексных препаратов, особенно предназначенных для лечения заболеваний органов дыхания и пищеварения у молодняка, необходимо учитывать, что, в большинстве случаев, они протекают с участием одновременно нескольких различных возбудителей. В связи с этим, лекарственные средства должны обладать широким и устойчивым спектром антимикробной активности, а так же действовать противовоспалительно (В.М. Данилевский, 1974; А.И. Высокопоясный, НЛО. Басова, А.Г. Шипицын, 2000; В.А. Антипов, А.Г. Шипицын и др., 2001; Р.II. Ые, 1986; W.C. Ьоэ^ег, АЛ. НетпзсЬ, 1996).

На основании вышеизложенного нам представляется целесообразным разработка комплексного антибактериального препарата тетрасолвина. Внедрению нового лекарственного средства в ветеринарную практику должно предшествовать всестороннее изучение его специфической активности, фар-мако-токсикологических свойств и терапевтической эффективности.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилась разработка, фармако-токсикологическая оценка и научное обоснование применения тетрасолвина в ветеринарной практике и внедрение его в промышленное производство.

Для реализации этой цели были определены следующие задачи: ~ разработать состав и технологию промышленного получения тетрасолвина в условиях производственного цеха НПВП «Ветфарм» г.Тимашевска Краснодарского края; изучить физико-химические свойства препарата и дать характеристику параметров контроля качества и стабильности тетрасолвина; провести токсикологическую оценку препарата; определить основные фармакологические свойства тетрасолвина; изучить лечебную эффективность препарата при бронхопневмониях (бактериальной этиологии) и сальмонеллезе молодняка сельскохозяйственных животных; разработать нормативно-техническую документацию по изготовлению, контролю качества и применению тетрасолвина в ветеринарии. Научная новизна. Впервые разработан и предложен для ветеринарной практики новый комплексный антибактериальный препарат тетрасолвин. Посредством разносторонних исследований определены фармакологические и токсикологические свойства препарата. Установлено, что новая композиция является малотоксичным соединением, не обладает местнораздражающим, аллергенным, эмбриотоксичным и тератогенным действием, что гарантирует безопасность его применения животным.

Выявлено, что тетрасолвин проявляет выраженное антибактериальное действие и является эффективным лечебным средством при бронхопневмониях (бактериальной этиологии) и сальмонеллезе молодняка сельскохозяйственных животных

Практическая значимость работы. Для лечения заболеваний органов дыхания и пищеварения бактериальной этиологии у молодняка крупного рогатого скота и свиней предложен новый комплексный антимикробный препарат тетрасолвин.

Практическая ценность препарата подтверждается положительными результатами производственных испытаний в ветеринарии.

По результатам исследований разработана нормативно-техническая документация (технические условия и временное наставление по применению).

Апробация работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований, являющихся основой диссерации, доложены, обсуждены и одобрены на научных конференциях факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета (2003-07гг), заседаниях Ученых Советов Краснодарского НИВИ, кафедр терапии и фармакологии КубГАУ, научно-производственных совещаниях - семинарах ветеринарных специалистов Краснодарского края в (2003-2007гг), на Международной научной конференции, посвященной 60-летию Краснодарского НИВИ (Краснодар 2006г.) и на Международной научно-практической конференции ВНИ-ВИПФиТ (г. Воронеж, 2008г).

Публикации: По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ (из них 1 в рецензируемом научном издании).

Основные положения, выносимые на защиту:

• состав и физико-химические свойства тетрасолвина, основные требования к контролю качества;

• результаты оценки фармако—токсикологических свойств препарата;

• терапевтическая эффективность тетрасолвина при бронхопневмониях (бактериальной этиологии) и сальмонеллезе молодняка животных;

• результаты внедрения и экономическая эффективность применения тетрасолвина в ветеринарии.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 143 страницах стандартного компьютерного набора и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и приложения. Список использованной литературы включает 190 источников, в том числе 79 иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 41 таблицей.

7. ВЫВОДЫ

1. Тетрасолвин является новым отечественным комплексным препаратом, в состав которого входят левомицетин и тетрациклин. Контроль качественных и количественных показателей препарата осуществляется в соответствии с утвержденными техническими условиями по органолептическим и физико-химическим показателям, характеризующим его внешний вид, запах и вкус, подлинность и массовую долю действующих веществ, стерильность, микробиологическую чистоту и токсичность.

2. При исследовании специфической активности установлено, что тетрасолвин обладает выраженным антибактериальным действием в отношении Escherichia coli, Klebsiela pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus C, Salmonella cholerae suis и др.

3. Препарат является малотоксичным средством для теплокровных животных, как в острых, так и хронических опытах. Величина LD5o тетрасолвина составляет 5 мл/кг, таким образом, он относится к 4-му классу опасности (незначительные опасные вещества). При длительном многократном введении тетрасолвина в дозах, превышающих терапевтическую в 3-5 раз, а также в дозах составляющих 1/5 и 1/10 от LD50, он не влияет отрицательно на общее состояние животных и другие показатели их клинического статуса, не оказывает вредного местного действия, существенно не влияет на морфо-биохимические показатели крови, не проявляет отрицательного влияния на основные виды обмена, не нарушает функций и структуру жизненно важных систем, органов и тканей, не изменяет вкусовых и других качеств мяса.

Препарат не действует раздражающе на кожу и слизистые оболочки, не имеет аллергизирующих, эмбриотоксических и тератогенных свойств.

4. Фармакокинетика тетрасовина характеризуется хорошей биодоступностью основных компонентов препарата для организма животных (левоми-цетин и тетрациклин выявляются в сыворотке крови через 30 минут после инъекции, а их максимальные концентрации регистрируются через 6-9 часов после введения препарата). Однократное введение тетрасолвина телятам в дозе 0,3 мл/кг массы тела обеспечивало нахождение терапевтических концентраций антибиотиков в сыворотке крови в течение 72 часов. В субстратах (в печени, мышцах, легких, сердце, почках и моче), остаточные количества действующих веществ тетрасолвина обнаруживаются через 120 и 144 часов после последнего введения препарата. Полная его элиминация происходит в течение 168-192 часов, рекомендуемый срок убоя животных на мясо после назначения препарата составляет 7-8 суток.

5. Фармакодинамика препарата обусловлена выраженной антимикробной активностью в отношении возбудителей респираторных (бронхопневмонии) и желудочно-кишечных (сальмонеллезе) заболеваний молодняка животных. Под влиянием препарата ослабляются и исчезают признаки болезни, возрастает темп прироста массы тела, оптимизируется иммуно-биохимический статус организма, что выражается в ликвидации гипопротеи-немии, нормализации протеинограммы, увеличении концентраций эритроцитов и гемоглобина, а также фагоцитарной активности лейкоцитов, снижение же уровня молекул средней массы свидетельствовует об уменьшении эндогенной интоксикации.

6. Тетрасолвин является высокоэффективным терапевтическим средством при стрептококковой бронхопневмонии и сальмонеллезе молодняка крупного рогатого скота и свиней. Применение препарата внутримышечно в дозе 0,3 мл/кг массы тела сокращает сроки выздоровления (на 10-15,2%) и снижает отход животных (на 5,1-16,6%), терапевтическая эффективность лечения составляет от 80 до 95,5%, при этом курс лечения тетрасолвином технологически прост в исполнении.

7. Широкими производственными испытаниями, проведенными в хозяйствах Тимашевского, Брюховецкого, Каневского, Новокубанского районов Краснодарского края, подтверждены экспериментальные данные о биологической и терапевтической эффективности тетрасолвина, а также об экономической целесообразности его применения в ветеринарии. Так, его экономическая эффективность составляет 8,3 рубля на 1 руб затрат.

8. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Ветеринарной практике и животноводству предложен новый комплексный антимикробный препарат с пролонгированными свойствами, для лечения желудочно-кишечных и респираторных (бактериальной этиологии) заболеваний животных. Применение тетрасолвина проводится в соответствии с временным наставлением, утвержденным в установленном порядке.

Производство препарата обеспечено Научно-производственным предприятием «Ветфарм» г. Тимашевск Краснодарский край.

6. Заключение

Заболевания сельскохозяйственных животных являются основной причиной резкого снижения экономического состояния отечественного животноводства.

Проведенные нами исследования показали, что, на животноводческих фермах за период с 2003 по 2008 год, заболеваемость крупного рогатого скота составила в среднем 46,5% и среди свинопоголовья 33,7%. На обследованных фермах, нами установлена сезонность возникновения заболеваний. Наибольший процент заболевших животных был выявлен в период январь -май месяц. В эти месяцы заболеваемость животных составляла 52,4-61,9%, в то время, как в летне-осенний период наблюдалось снижение заболеваемости до 21,6-23,4%.

Основными предрасполагающими факторами для возникновения и развития желудочно-кишечных и респираторных заболеваний у молодняка в зимне-весенний период, являются отсутствие в это время активного моциона, неполноценное кормление, влияние температуры, влажности воздуха и усиление вирулентности микроорганизмов во внешней среде. Важную роль в развитии заболеваний молодняка играет такой факт, как содержание животных на ограниченных площадях с высокой плотностью размещения, содержание больных животных вместе со здоровыми, что приводит к пассажиро-ванию микрофлоры и к усилению её вирулентных свойств.

При проведении исследования выделений от больных животных, частота микроорганизмов составила: Е. coli - 28,3%, Salmonella cholerae suis u tiphi murium -17,5%, микроорганизмы рода Staphilococcus — 13,1%, рода Streptococcus - 9,7%, рода Proteus - 12,3%, рода Klebssiella pneumonia -17,8%, грибы родов Candida albicans - 10,5%.

При изучении чувствительности выделенной микрофлоры к антибиотикам нами было установлено, что не все применяемые в хозяйствах антибиотики обладают высокой активностью. К антибиотикам, давшим наиболее высокую зону задержки роста микрооганизмов можно отнести гентамицин, левомицетин и тетрациклин. К этим лекарственным средствам и показала высокую чувствительность, выделенная микрофлора от больных животных.

Анализируя вышеизложенное, следует отметить, что при без контрольном применении в хозяйствах антибиотиков, с нарушением их кратности, дозы и сроков лечения, приводит к повышению у микроорганизмов резистентности и вирулентности.

Следовательно, существует необходимость изыскания новых лекарственных средств, которые обладали бы высоким терапевтическим эффектом и комплексным действием, и вместе с тем не оказывали отрицательного влияния на организм животного.

В связи с этим, нами в лаборатории фармакологии Краснодарского НИВИ и кафедры терапии и клинической диагностики КубГАУ и ООО НПВП «Ветфарм», был разработан новый препарат тетрасолвин, обладающий комплексным антимикробным действием.

Тетрасолвин - комплексный химиотерапевтический препарат, представляющий собой жидкость светло-коричневого цвета, прозрачная, без запаха, горького вкуса, хорошо смешивается с водой и этанолом.

Состав препарата содержит действующие вещества — левомицетин 4 г., тетрациклин - 4 г., аскорбиновую кислоту — 0,1 г. и новокаин — 1 г и пропи-ленгликоль до 100 мл.

На препарат разработана научно-техническая документация, в которой отражены требования, соблюдение которых гарантирует высокое качество тетрасолвина и наличие активнодействующих веществ, что обеспечивало бы рациональное его использование в ветеринарии. В технических условиях отражены показатели, характеризующий препарат по внешнему виду, цвету, массовой доли действующих веществ, стерильности и бевредности.

В ходе исследований были изучены физико-химические свойства препарата, стабильность, антимикробная активность, острая и хроническая токсичность, фармакодинамика и кинетика, противовоспалительное и раноза-живляющее свойство, эмбриотоксичность, стабильность, определена оптимальная терапевтическая доза и эффективность препарата.

Исследования физико-химических свойств, безвредности препарата и содержание активных действующих веществ, проведенные в соответствии с СТО 26582716-0001-05 в течении 36 месяцев показали, что содержание активных действующих веществ препарата, хранившегося в сухом темном месте при температуре от 10 до 25 °С, снизилось по сравнению со стартовым менее чем на 5 % и осталось в пределах требований НТД.

Полученные результаты свидетельствуют о возможности установления срока годности препарата при хранении в сухом темном месте при температуре от 10 до 25 °С в течении 24 месяцев.

В опытах in vitro проведено изучение специфической антимикробной активности препарата на чистых культурах микроорганизмов выделенных при желудочно-кишечных и респираторных болезней у молодняка сельскохозяйственных животных.

Установлено, что препарат обладает широким спектром антимикробного действия в отношении испытанных культур микроорганизмов (Staphylococcus aureus (209Р) - МБсК 3,14 мкг/мл, МБцК - 6,38 мкг/мл;

Klebsiella pneumoniae - МБсК 1,48 мкг/мл, МБцК - 3,24 мкг/мл; Streptococcus гр. В МБсК - 1,56 мкг/мл, МБцК - 3,65 мкг/мл; Streptococcus гр. С МБсК — 1,48 мкг/мл, МБцК - 4,12 мкг/мл; Bordetella bronchiseptica (8346) - МБсК 6,17 мкг/мл, МБцК 12,6 мкг/мл; Citro diversus - МБсК 2,12 мкг/мл, МБцК 3,96 мкг/мл; Escherichia coli 0142 - МБсК 50,0 мкг/мл, МБцК -100,0 мкг/мл; Salmonella cholerae suis - МБсК 24,5 мкг/мл, МБцК 50,0 мкг/мл; Pseudomonas aeruginosa - МБсК 100,0 мкг/мл, МБцК — 200,0 мкг/мл. Минимальная бактериостатическая концентрация тетрасолвина в отношении грам-положительных микроорганизмов в опытах составляла порядка 1,48 - 3,14 мкг/мл. В отношении музейных и полевых штаммов сальмонелл и кишечной палочки минимальная бактериостатическая концентрация составляла 24,5 — 50,0 мкг/мл. Бактерицидные свойства тетрасолвина проявлялись в концентрациях в 2-4 раза превышающих МБсК.'

Исследование тетрасолвина на задержку роста бактериальных культур, проводили диско - диффузионным методом (ДДМ).

Выявлено, что препарат обладает высокой антибактериальной активностью с зоной задержки роста бактерий от 25 до 32 мм. Таким образом, тетра-солвин может являться высокоэффективным средством при лечении желудочно-кишечных и респираторных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных бактериальной этиологии.

Среднелетальную дозу - LD50 - определяли аналитическим способом, величины LD16 и LD84 находили графически на основании пробитов и доз в мл/кг массы тела животных.

Полученные данные позволили определить параметры острой токсичности тетрасолвина. Так для белых мышей МПД тетрасолвина составляет 3,3 мл/кг, LDi6- 3,6 мл/кг, LD50- 5 мл/кг, LD84- 6,4 мл/кг, LDioo- 6,7 мл/кг.

По параметрам острой токсичности препарат относится к малоопасным веществам (ГОСТ 12.1.007).

При изучении хронической токсичности тетрасолвина было установлено, что длительное применение в течение 20 дней препарата телятам в ориентировочной терапевтической дозе (0,3 мл/кг) и трехкратной терапевтической дозе (0,9 мл/кг) не вызывало видимых клинических изменений в организме телят. Животные были активны, подвижны, охотно поедали корм, нарушений дефекации, и мочеиспускания не отмечалось, температура тела, частота дыхания и пульса находились в пределах физиологической нормы.

При лабораторном исследовании крови опытных животных было установлено, что клинические и морфо-биохимические показатели крови находились в пределах физиологической нормы и не отличались от показателей контрольной.

При изучении влияния тетрасолвина на эмбриональное развитие и генеративную функцию животных установлено, что назначение тетрасолвина в дозе 3 раза превышающей терапевтическую беременным белым крысам не оказало токсического действия на течение беременности.

Препарат не нарушал процесс оплодотворения. Число желтых тел в яичниках опытных крыс при назначении тетрасолвина в среднем на 1 самку составило 13,7±0,2, а у контрольных животных 12,7±0,6.

Число резорбтивных эмбрионов в среднем на одну самку в группах были равными и в среднем составило 0,5.

Постимплатационная гибель плодов у животных первой группы равнялся 3,8 %, тогда как во второй — 4,3 %. Аномалий в развитии плодов у опытных и контрольных животных не регистрировали. Регистрировалось лишь незначительное отставание в приросте живой массы плодов контрольных крыс в сравнении с опытными животными. Средняя масса одного эмбриона у крыс получивших препарат составила 6,17 г, а у контрольных-6,0 г. Аномалий внутренних органов у эмбрионов обоих групп не регистрировали.

Уродств и аномалий в развитии у крысят не отмечено, патологические изменения во внутренних органах и скелете также отсутствовали.

Таким образом, длительное назначение тетрасолвина беременным животным, не влияет отрицательно на эмбриональное развитие и в постнаталь-ный период жизни плодов.

При изучении местно-раздражающего действия тетрасолвина установлено, что при однократной аппликации тетрасолвина на кожные покровы кроликам не вызывает патологических изменений кожи в виде эритемы или отеков.

Определение раздражающих свойств препарата при внутрикожном методе введения, показало, что через 30 минут после введения красителя, тет-расолвин оказывал слабое раздражающее действие, но через 60 и 180 минут раздражающее действие препарата было умеренным, через 4 часа — слабым, а через 5 часов отсутствовало.

При изучении раздражающего действия тетрасолвина на конъюнктиву глаз у кроликов, установлено, что препарат вызывает слабое раздражение конъюнктивы спустя 2-3 часа после закапывания, которое проходило уже к 4-му часу.

Таким образом, тетрасолвин не обладает выраженным раздражающим действием при наружном применении.

Изучение аллергизирующего действия тетрасолвина проводили путем воспроизведения местных аллергических реакций (феномена Артюса-Сахарова, скарификационного теста) и анафилаксического шока.

Препарат во всех случаях вводили шестикратно, с интервалом в шесть дней. Наблюдения за животными, с учетом воспалительной реакции, вели ежедневно, в течение всего срока назначения препарата и 6 дней после его назначения. Опытами установлено, что исследуемый препарат не вызывает феномена Артюса-Сахарова.

При этом у всех опытных животных после введения тетрасолвина, характерных для геморрагического воспаления признаков отеков и уплотнений на месте инъекций не отмечалось. Лишь сразу после инъекций в этих местах образовывались небольшие инфильтраты, с размером горошину и отек, вызванный травматическим повреждением иглой, который рассасывался в течение 3-24 часов.

У контрольных животных уже после 3-5 инъекций регистрировали картину воспалительных явлений, характерных для феномена в виде отечно-инфильтративной, инфильтративно-геморрагической и геморрагическо-некротической форм.

Таким образом, в результате изучения острой токсичности тетрасолви-на в опытах на лабораторных животных установлено, что препарат относится к классу малотоксичных соединений, не оказывает эмбриотоксического, тератогенного и аллергизируещего действия.

Нами при исследовании было установлено, что после инъекции тетра-солвина, левомицетин и тетрациклин, входящие в состав препарата быстро всасываются из места инъекции и обнаруживаются в сыворотке крови уже через полчаса после инъекции. Максимальные концентрации тетрациклина и левомицетина в сыворотке крови регистрировались через 6-9 часов после введения препарата.

Однократное введение тетрасолвина телятам в дозах 0,2 и 0,3 мл/кг обеспечивало нахождение терапевтических концентраций антибиотиков в сыворотке крови в течение 72 часов.

Определение антибиотиков в субстратах, их сроков выведения остаточных количеств действующих веществ тетрасолвина из организма телят, проводили общепринятым микробиологическим методом в модификации В.Ф. Ковалева с соавторами. Которые показывают, что через 120 и 144 часов после последнего введения препарата остаточные количества левомицетина и тетрациклина обнаруживали в печени, мышцах, легких, сердце, почках и моче. Через 192 часа (8 суток) после окончания применения препарата во всех исследованных образцах остаточных количеств антибиотиков не обнаружено.

Из полученных данных видно, что через 5 суток после введения тетрасолвина остаточные количества левомицетина и тетрациклина определяются во всех органах и биологических жидкостях, больше всего их определяется в месте инъекции, печени, сердечной мышце, мышечной ткани и моче.

Представленные данные свидетельствуют о том, что значительная часть левомицетина и тетрациклина выделяется с мочой. На 8-е сутки антибиотики в исследуемых органах и тканях не обнаруживаются.

Общее действие препарата при его внутримышечном применении оценивали по клиническому состоянию, морфологическим, биохимическим и иммунологическим показателям крови.

Нами установлено, что при введении препарата в течение 20 дней в терапевтической дозе (1 группа) и трехкратной терапевтической дозе во второй группе животных основные биохимические показатели крови в опытных группах статистически не отличаются от показателей контрольной группы и находятся в пределах физиологических показателей.

Повышение активности аспартатаминотрансферазы наблюдалось на 21 день опыта у животных получавших 0,9 мл препарата в течение 20 суток. Указанное изменение было в пределах физиологической нормы и было обратимо. К 31 дню опыта активность фермента неотличалась от показателей контрольной группы.

У телят через сутки после окончания введения препарата уровень билирубина, получавших 0,3 мл/кг массы, соответствовал физиологической норме (8,9 - 9,0 мкмоль/л), а у телят получавших препарат в дозе 0,9 мл/кг, отмечали небольшое, но достоверное увеличение содержания билирубина в сыворотке крови, что, по-видимому связано с попаданием прямого билирубина в кровь и замедлением выделения его из организма. На 31 сутки содержание билирубина в сыворотке крови пришло в норму и не отличалось от показателей других групп.

О состоянии почек судили по результатам исследования мочи и по содержанию креатинина и мочевины в сыворотке крови. Моча у опытных животных, во все периоды исследования соответствовала физиологической норме, белок, сахар, билирубин, уробилин, индикан и кетоновые тела не обнаруживались.

Содержание креатинина и мочевины в сыворотке крови телят при изучении субхронической токсичности препарата, соответствовало физиологической норме, длительное введение тетрасолвина не оказало отрицательного влияния на функции почек.

Таким образом, нами при исследовании было установлено, что двадцатидневное применение тетрасолвина телятам в ориентировочной терапевтической (0,3 мл/кг) и трехкратной дозе (0,9 мл/кг) не вызывало функциональных изменений в организме опытных животных. В период всего опыта телята контрольной и опытных групп были подвижны, аппетит выражен, рефлексы сохранены. Нарушений функций пищеварения и мочеотделения не установлены. При многократном применении тетрасолвина в дозе 0,9 мл/кг массы тела морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови также существенно не отличались от показателей у телят контрольной группы.

Результаты изучения острой и хронической токсичности тетрасолвина в опытах на лабораторных и сельскохозяйственных животных свидетельствуют, что препарат относится к классу малотоксичных соединений (по принятым нормам в России) и возможно применение его в терапевтической дозе 0,3 мл/кг массы тела животного.

Клинические испытания препарата предусматривали изучение сравнительной терапевтической эффективности тетрасолвина при желудочно-кишечных и респираторных заболеваниях молодняка крупного рогатого скота и свиней бактериальной этиологии, по данным микробиологических исследований проведенных в Тимашевской зональной ветеринарной лаборатории.

Производственные испытания препарата проводили на телятах 20-35 дневного возраста больных сальмонеллезом, телятах и поросятах 30-45 дневного возраста больных бронхопневмонией. Диагноз на заболевания устанавливали на основании данных клинического обследования животных, лабораторных исследований, патологоанатомического вскрытия и с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве.

У культур, выделенных из носовой слизи больных животных и из пат. материала от павшего молодняка, перед началом опыта определяли чувствительность к антибиотикам. Чистые культуры кокковой микрофлоры, коли-бактериоза и сальмонеллеза оказались устойчивыми к полимиксину, мало чувствительны к пенициллину, неомицину, стрептомицину и чувствительны к левомицитину, гентамицину, диоксидину, мономицину, эритромицину и тетрациклину.

Схемой опыта предусматривалось формирование трех клинических групп подопытных телят больных бронхопневмонией. Телятам первых двух групп применялся тетрасолвин по схеме лечения, внутримышечно в дозе 0,3 мл/кг и 0,9 мл/кг массы тела, один раз в сутки, трех кратно с интервалом 72 часа. Животным группы сравнения, которой в качестве этиотропного средства лечения применяли традиционное для даннного хозяйства антибактериальное средство, гентамицин.

Исследованиями установлено, что тетрасолвин обладает более высокой терапевтической эффективностью (87,5 и 95,5%) по сравнению с гентамици-ном (76,9%) при респираторных заболеваниях молодняка бактериальной этиологии.

Назначение тетрасолвина , в дозе 0.3 мл/кг массы тела способствовало повышению числа эритроцитов, так у опытных телят количество эритроцитов равнялась в среднем 7,2±0,52*, против 6,8±0,31 1012 в контроле. Напротив, количество лейкоцитов снизилось, составило в опытной группе 10,4+0,1, 109 тогда как в контороле этот показатель составил 12,5±0,3 109.

У опытных телят наблюдалось увеличение гемоглобина на 5% (в опытной группе составил 116,1+2,7, в контроле 110,3±1,8), что положительно отразилась на фагоцитарной активности, которая выше на 5,2% и составила в опытной группе 75,1±0,4 в контроле 68,4±1,2 %.

Из приведенных данных видно, что тетрасолвин обладает определенным лечебным действием, выздоровление больных животных наступало после второй и третьей инъекции препарата.

Животные хорошо переносили введение препарата, их общее состояние было удовлетворительным, аппетит хорошо выраженным, телята были подвижными и бодрыми.

Среднесуточный прирост живой массы за время опыта составил 420г, что на 93 г выше, чем по контрольной группе.

Тетрасолвин, сокращая сроки течения заболевания, способствовал лучшему росту и развитию молодняка.

Проведенными опытом при изучении терапевтической эффективности тетрасолвина при стрептококковой бронхопневмонии поросят 60-70-и дневного возраста (диагноз подтвержден Тимашевской ветеринарной лабораторией), была установлена лечебная эффективность препарата при трехкратном, с интервалом в 72 часа, внутримышечном введении его в дозе 0,3 мл/кг массы тела поросят, в сравнении с традиционно-применяемым для лечения свиней стрептомицином.

Применение препарата положительно повлияло на сохранность поросят, которая в опытной группе составила 94,9%, что на 11,8 выше чем в контрольной группе животных.

Тетрасолвин положительно повлиял на показатели крови, что выразилось в увеличении гемоглобина на 22,1%, в опыте 115,0±2,67 в контроле 89,6±0,63, общего белка на 17,3% при его содержании в крови опытных животных 58,4±1,23, в контрольных 48,4±1,21.

Препарат проявляет выраженную антимикробную активность к микробам-возбудителям при бронхопневмонии молодняка крупного рогатого скота и свиней.

Применение тетрасолвина сокращает сроки выздоровления и снижает отход животных.

При сальмонеллезе телят количество выздоровевших животных при применении тетрасолвина составило 80% от числа заболевшего молодняка, в то время как в группах контроля терапевтическая эффективность диоксидина составила 50%. Выраженный антимикробный эффект тетрасолвина обеспечивал высокую сохранность опытных животных. Срок выздоровления заболевшего молодняка опытной группы сокращался на 35-38% в сравнении с контролем.

Таким образом, тетрасолвин проявляет выраженную антимикробную активность при стрептококковых пневмониях и сальмонеллезе молодняка крупного рогатого скота и свиней. Применение тетрасолвина сокращает сроки выздоровления и снижает отход животных.