Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологическая оценка арбузного масла и его препаратов

На правах рукописи

ГАЗЕЕВ ИЛЬНУР АХМЕТОВИЧ

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА АРБУЗНОГО МАСЛА И ЕГО ПРЕПАРАТОВ

16.00.04 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

□□3487520

Казань - 2009

003487529

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор

Набиев Фанис Галинурович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Новиков Валерий Александрович

кандидат биологических наук, доцент Каримова Руфия Габделхаевна

Ведущее учреждение _ ФГОУ ВПО «Чувашская государственная сельскохозяйственная академия»

Защита состоится 29 декабря 2009 г. в 0 часов на заседании диссертационного совета Д 220.034.02 при ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» (420074, г. Казань, ул. Сибирский тракт 35).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана».

Автореферат разослан » /<л>Л1>£л 2009 г. и размещён на официальном сайте www.ksavm.senet.ru

Учёный секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, доцент

.Н. Мухаметгалиев

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Акту альность темы. Лекарственные растеши оказывают на организм более мягкое и многостороннее действие и, как правило, не вызывают отрицательных побочных эффектов и различного рода осложнений (Б.М. Авакаянц, 2004; К.С. Маловастый, 2007; М.И. Маркова, Ф.Г. Набиев и др., 2006, 2007). Такое многогранное действие растений на организм животных и человека обуславливается, во многом, содержанием в их составе биологически активных веществ (С.Я. Соколов, 1990; Б.П. Суханов, 2004; В.А. Тутельян, 2005).

Одним из биологически активных веществ (парафармацевтиков) является арбузное масло, получаемое из семян арбузов. Установлено, что арбуз не имеет себе равных в растительном мире по содержанию фолиевой кислоты, полиненасыщенных жирных кислот, витамина Е, которые активно участвуют в процессах кроветворения и влияют на сохранение тонкого равновесия химических процессов, происходящих в живом организме (Х.Х. Халматов, 1964; Г.П. Яковлев, К.Ф. Блинова, 1999).

Арбузное масло в народной медицине рекомендуется при цистите, уретрите, хроническом гломерулонефрите, пиелонефрите, почечнокаменной и других болезнях (Ю.Г. Аляев, 2004, 2006). Действие и применение арбузного масла в ветеринарии мало изучено.

Одной из серьёзных проблем, с которыми очень часто приходится сталкиваться ветеринарным специалистам, работающими с мелкими жиботными, является мочекаменная болезнь. Это достаточно распространенная патология органов мочевой системы животных. Чаще регистрируется у кошек, пушных зверей и собак (З.С. Вайнберг, 1971; В.И. Астраханцев, 1978; JI.B. Кузнецов, 1999; Г.Г. Щербаков, A.B. Коробов, 2002; Е.М. Козлов, 2002).

В связи с этим, изучение фармако-токсикологических свойств арбузного масла и возможности применения на его основе препарата «Уромелонола» при мочекаменной болезни кошек представляется весьма актуальным.

1.2 Цель и задачи исследований. Целью наших исследований явилась фармако-токсикологическая оценка арбузного масла и разработка наиболее эффективной прописи лекарственного препарата на его основе при лечении кошек, больных мочекаменной болезнью. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Оценить острую и хроническую токсичности, местно-раздражающее действие, эмбриотоксическое и тератогенное влияние арбузного масла;

2. Определить влияние арбузного масла на изолированные сердце и сосуды лапок озёрных лягушек;

3. Провести оценку мочегонного и литолитического (in vitro) действия арбузного масла и создать пропись лекарственного препарата на его основе;

4. Установить влияние «Уромелонола» на морфологические и биохимические показатели крови и на физико-химические свойства мочи кошек, больных мочекаменной болезнью.

1.4 Научная новизна. Впервые изучены параметры острой и хронической токсичности, раздражающие, эмбриотоксические и тератогенные свойства арбузного масла. Исследовано влияние арбузного масла на изолированные органы хладнокровных животных. Установлено мочегонное и литолитическое действия арбузного масла. Разработан новый эффективный препарат -«Уромелонол» и доказана его эффективность при лечении мочекаменной болезни кошек. Изучено влияние «Уромелонола» на морфологические, биохимические показатели крови и на физико-химические свойства мочи при мочекаменной болезни котов. На основании проведённых исследований нами было разработано и утверждено Главным управлением ветеринарии Республики Татарстан «Временное наставление» по применению «Уромелонола» для лечения кошек, больных мочекаменной болезнью (от 3 июля 2009 года).

1.5 Практическая ценность работы. Проведены доклинические испытания, подтвердившие безвредность арбузного масла, его мочегонные и литолитические свойства. Разработан и внедрён в практику новый препарат на основе арбузного масла - «Уромелонол» для лечения и профилактики кошек,

больных мочекаменной болезнью. Предложена схема лечения мочекаменной болезни кошек с применением «Уромелонола», которая используется в ветеринарных клиниках Казани.

1.6 Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных заседаниях Учёного совета ФГОУ ВПО «Казанской государственной академии ветеринарной медицины» (2007-2009); Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: Опыт, проблемы и пути их решения» (Ульяновск, 2009); Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения ветеринарной медицины и биологии - в сельскохозяйственное производство» (Уфа, 2009); Всероссийской научно-практической конференции «Современные тенденции развития ветеринарной медицины и инновационные технологии в ветеринарии и животноводстве» (Казань 2009); II-ом съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии» (Казань, 2009).

1.7 Публикации результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ в рамках научно-практических конференций, в том числе три статьи в ведущем рецензируемом издании, определённом Высшей аттестационной комиссией РФ.

1.8 Основные положения, выносимые на защиту:

- Арбузное масло является безвредным малотоксичным препаратом, не обладающим кумулятивным действием;

- Арбузное масло в разведении 1:10 и 1:20 уменьшает амплитуду и силу сердечных сокращений лягушек на 45,2 % и 22,9 %, соответственно. Арбузное масло в разведении 1:10; 1:20 вызывает расширение просвета изолированных сосудов лапок озёрных лягушек на 46 % и 23 %, соответственно;

- арбузное масло обладает мочегонным и литолитическим (in vitro) действиями;

- «Уромелонол» полностью восстанавливает морфологические, биохимические показатели крови и физико-химические свойства мочи кошек, больных мочекаменной болезнью к физиологическим показателям;

1.9 Объем и структура диссертации.

Работа изложена на 117 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 15 таблицами и 12 рисунками. Список литературы включает 178 источников, в том числе 63 иностранных.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились в соответствии с планом научных работ академии в период с 2006 по 2009 годы. Работу осуществляли на кафедре фармакологии и токсикологии имени H.A. Сошественского ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», в ветеринарных клиниках городов Волжска, Зеленодольска, Ижевска и Казани, в лечебно-консультативном центре ФГОУ ВПО «КГАВМ».

Арбузное масло приобретали в компаниях следующих производителей: ООО «Рось» (Россия, г. Новосибирск); ООО ТПК «Ароматы Жизни» (Россия, г. Москва).

Исследования проводились на белых беспородных крысах, мышах, кроликах; озёрных лягушках; кошках и собаках.

Эксперименты на животных проводились с учётом суточных и сезонных ритмов преимущественно в осенне-зимний период, а убой и взятие материалов на исследование осуществлялись в полуденные часы. Все животные содержались в стандартных условиях вивария при температуре 18-20 °С со свободным доступом к воде. Кормление крыс, мышей и кроликов производили один раз в сутки, а за 12 часов до начала экспериментов они лишались корма. В ходе опытов обязательным условием было гуманное обращение с животными. Убой животных осуществляли под эфирным наркозом.

Определение острой и хронической токсичности, отдалённых последствий (тератогенность, эмбриотоксичность) и раздражающего действия арбузного масла проводили согласно «Методическим указаниям по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве» (М.Л. Беленький, 1963; О.Н. Елизарова, 1974; А.Д. Третьяков, 1988). В опыте были использованы белые беспородные мыши, крысы и кролики, которых содержали согласно рекомендациям (Ф.В. Андроносов, 1981; В.П. Западшок, И.П. Западнюк и др., 1974,1983; Г. Гасспер, 2004 и др.).

Влияние арбузного масла на хроническую токсичность изучали на белых крысах путем введения препарата внутршкелудочно в дозе 5 мл на одно животное. Вводимый объем является максимально допустимой дозой для белых крыс массой 250 - 300 г. Перед экспериментом определяли первоначальную массу каждого животного, затем вводили масло. Повторные измерения проводили на 10; 20; 30 дни опыта, оценивая общее состояние и прирост массы тела животных.

Влияние различных концентраций арбузного масла на изолированные сердце и сосуды лапок озёрных лягушек изучали, используя аппарат Березина (Н.И. Шарапов, 1952).

Эмульсию готовили согласно ГФ XI и ГФ XII. В качестве эмульгатора использовали 2 %-ную крахмальную слизь. Крахмальную слизь готовили из 1 части крахмала, 4 частей холодной воды и 45 частей горячей воды. При этом 1 часть крахмала смешивали с 4 частями холодной воды и затем добавляли 45 частей горячей воды. Эту смесь при постоянном помешивании на огне доводили до появления пузырьков (кипения) и кипятили 3-5 минут (М.И. Рабинович, 2003; Ф.Г. Набиев, 2008).

Эмульсию из арбузного масла готовили путём тщательного смешивания остывшей 2 % крахмальной слизи с маслам в соотношении 1:10; 1:20 и 1:50. Раствор Рингера для хладнокровных животных и эмульсию из арбузного масла готовили в день проведения опытов.

При определении растворимости мочевых камней использовали оксалатные и фосфатные уролиты. Перед опытами измеряли их массу на аналитических весах. Затем в течение 10 дней камни выдерживали в различных концентрациях арбузного масла и вновь определяли их массу (М.И. Маркова, Ф.Г. Набиев, 2006, 2007).

Влияние арбузного масла на суточный объём мочи определяли на 18 белых крысах обоего пола. Всех крыс перед началом опыта содержали в большой воронке с сетчатым дном в течение недели для адаптации. Сверху воронку накрывали металлической сеткой, на которой закрепляли сосуд с водой (для свободного водопоя) и подавали корм. Арбузное масло вводили непосредственно в ротовую полость. Для этого применяли одноразовые шприцы для инъекций. Для каждой крысы использовали свой шприц. При введении препарата животное прижимали к груди, левой рукой захватывали шкурку иа затылке, а животное отводили вверх. Зафиксировав, таким образом, крысу в рот вводили арбузное масло (О.Н. Елизарова, 1974).

Вначале определяли суточный объём мочи в норме, после этого в течение 7 дней задавали арбузное масло в различных дозах для каждой группы животных (1350 мг/кг; 2270 мг/кг и 4550 мг/кг). По истечении 7 дней анализировали характер изменения объёма мочи и делали соответствующие выводы.

Влияние разработанного препарата на основе арбузного масла на морфологические показатели изучали на больных мочекаменной болезнью котах. Кровь для морфологических и биохимических исследований брали из бедренной артерии и наружных вен голени, соблюдая правила асептики и антисептики. Количество форменных элементов крови (эритроцитов, лейкоцитов) определяли, используя камеру Горяева (И.П. Кондрахин, 1985; Г.А. Симоняи, 1995). Гемоглобин определяли гематиновым методом Сали в гемометре ГС-3. Лейкоцитарную формулу выводили общепринятыми методами

.а-.л»

(В.А. Чечеткин, 1980; И.П. Кондрахин, 1985). Для получения сыворотки кровь брали в стерильные пробирки без антикоагулянта, выдерживали несколько часов в термостате при температуре 37 °С, после чего свернувшуюся кровь отделяли

от стенки пробирки стеклянной палочкой. Отделившуюся сыворотку отсасывали пипеткой и сливали в другую стерильную пробирку для биохимических исследований (мочевина, креатинин, общий белок, альбумины, щелочная фосфатаза).

Биохимические исследования сыворотки крови проводились на биохимическом анализаторе «Stat Fax 3300» (Awareness Technology Inc., США), с использованием реактивов компании ООО «ВитаЛаб» (г. Санкт-Петербург, Россия).

Влияние разработанного препарата на основе арбузного масла на физико-химические свойства мочи изучали на котах. Физико-химический анализ мочи проводили визуально, органолептически и при помощи тест полосок для исследования мочи DEKA PHAN LEUCO. Мочевой осадок исследовали визуально под малым и большим увеличением микроскопа (х80; х400). Для этого предварительно полученную мочу центрифугировали 10 минут при 1500 оборотов в минуту. Надосадочную жидкость удаляли, а осадок помещали на предметное стекло, покрывали покровным стеклом и исследовали под микроскопом (Г.Я. Стриха, 2004; Б.В. Уша, 2004). При этом учитывали размер и количество кристаллов осадка мочи до и после применения препарата (М.И. Маркова, Ф.Г. Набиев, 2006,2007).

Статистическую обработку материала осуществляли пакетом прикладных программ Microsoft Excel 2007 на PC AMD Atlon XP 1900. Достоверность устанавливали по методу Стьюдента-Фишера с вычислением средней арифметической ошибки критерия Стьюдента (р). При этом различия считали достоверными при р < 0,05. При определении эффективной дозы арбузного масла использовали метод Литчфилда-Уилкинсона (И.А. Плохинский, 1970, 1980; Г.Ф. Лактин, 1990; Р.Х Тукшаитов, 2001).

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Токсикологические свойства арбузного масла

При изучении токсических свойств арбузного масла в опытах на белых мышах и крысах мы установили, что однократное введение максимально

допустимых доз (1 и 5 мл соответственно) арбузного масла не вызывало гибели и какие-либо нарушения со стороны общего состояния животных. При вскрытии животных контрольной и опытной групп патологических изменений внутренних органов не было выявлено. Поскольку дозы 1 и 5 мл являются максимально вводимыми при внутрижелудочном введении соответственно белым мышам (массой 18-22 г) и белым крысам (массой 250-300 г), то большие дозы препарата ввести не удалось. Вследствие этого невозможно определить полулетальную дозу (ЛД50).

В результате изучения хронической токсичности арбузного масла было установлено, что применение крысам препарата в дозе 0,5 мл (1800 мг/кг) один раз в сутки в течение 30 дней не вызывало какие-либо нарушения со стороны общего состояния животных, стимулировало прирост массы тела белых крыс, улучшало их рост и развитие.

Проведенные исследования крови показали, что существенной разницы у крыс контрольной и опытной групп в морфологических показателях не выявлено. В конце эксперимента из каждой группы животных были убиты по 5 крыс, для выявления патологических изменений в органах и тканях. При вскрытии у животных • контрольной и опытной групп видимых изменений внутренних органов не наблюдали. Слизистая оболочка желудка и кишечника была без кровоизлияний и некрозов. Почки и печень без видимых изменений.

При определении раздражающего действия арбузного масла на кожу и кожные покровы белых крыс установили, что при апликации масла в течение 30 дней изменения со стороны кожи и волосяного покрова не наблюдались. Исследования по изучению раздражающего действия на слизистые оболочки глаз кроликов показали, что арбузное масло не вызывало каких-либо патологических изменений. А, следовательно, не оказывало раздражающего действия на слизистые оболочки глаза.

При определении эмбриотоксического и тератогенного действия арбузного масла были использованы беременные самки белых крыс. Им в течение всего периода беременности вводили арбузное масло. Во время наблюдения за

клиническим состоянием самок никаких изменений не было отмечено. На протяжении всего опыта, как в контрольных, так и в опытных группах летальных исходов не наблюдали. При вскрытии самок на 20 день беременности мёртвых плодов, как в опытной, так и в контрольной группах не было обнаружено. После родов кормление и уход за потомством в обеих группах был одинаковым. Сохранность приплода в течение 30 дней была 100%.

При изучении тератогенного действия арбузного масла методом Вильсона и Даусона (А.Д. Третьяков, 1988) (исследование внутренних органов и скелета эмбрионов) аномалий развития и уродств, как в опытной, так и в контрольной группах не наблюдали. Следовательно, арбузное масло не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действиями.

Таким образом, применение арбузного масла не вызывает раздражающего и кожно-резорбтивного действия, так как оно не обладает токсическими свойствами и по ГОСТу - 12.1.007.76 его токсичность может быть отнесена к IV классу опасности химических веществ - незначительно опасные вещества. Полученные на опытах данные позволяют отнести арбузное масло к безвредным малотоксичным препаратам, не обладающим кумулятивным действием.

3.2 Действие арбузного масла на изолированные органы озёрных лягушек

В опытах на изолированном сердце озёрных лягушек (Rana ridibunda) установили, что при пропускании через их сердце эмульсии арбузного масла в разведении 1:50 не оказывало влияния на работу сердца. При пропускании арбузного масла через изолированное сердце лягушки в разведении 1:20 наблюдали достоверное уменьшение амплитуды и силы сердечных сокращений на 22,9 %. Однако частота сердечных сокращений не изменялась. После промывания раствором Рингера амплитуда сердечных сокращений восстанавливалась до первоначальных значений в течение 1-2 минут.

При пропускании эмульсии в разведении 1:10 регистрировали достоверное уменьшение амплитуды сердечных сокращений на 45,2 %. Частота сердечных сокращений не изменялась. После промывания раствором Рингера амплитуда

сердечных сокращений восстанавливалась до первоначальных значений в течение 2-3 минут. При отмывании питательной жидкостью амплитуда и сила сердечных сокращений восстанавливались полностью. Это указывает на то, что арбузное масло не обладает кумулятивными свойствами и не является токсичным препаратом для изолированного сердца лягушки (И.Е. Мозгов, 1985; Ф.Г. Набиев, Р.Н. Ахмадеев, 2000; М.И. Рабинович, 2003, 2006; В.Г. Скопичев, 2008 и др.).

Такое влияние на сердце, вероятно, оказывают компоненты арбузного масла (соли калия, кальция, магния и др.), которые влияют на периферические синапсы блуждающих нервов, оканчивающиеся в сердечной мышце, и усиливают выделение медиатора (ацетилхолина), который вызывает ослабление работы сердца (И.Е. Мозгов, 1985; Ф.Г. Набиев, Р.Н. Ахмадеев, 2000; М.И. Рабинович, 2003,2006; В.Г. Скопичев, 2008 и др.).

В опытах на изолированных сосудах лапок лягушек мы исследовали влияние различных разведений арбузного масла на их пропускную способность. При перфузии раствора Рингера через изолированные сосуды ланок лягушек вытекало в среднем 79,2±11,7 капель за одну минуту. После пропускания арбузного масла в разведении 1:10 вытекало в среднем 115,7±5,9 капель за одну минуту, что больше первоначальных показателей на 46 %. После промывания питательной жидкостью просвет изолированных сосудов лапок лягушек восстанавливался в течение 8-10 минут.

Достоверное увеличение количества капель, вытекающих из сосудов изолированных лапок лягушек, наблюдали при перфузии арбузного масла в разведении 1:20. Так, при пропускании эмульсии 1:20 через изолированные сосуды за одну минуту вытекало в среднем 97,6±9,2 капель, что больше первоначальных показателей на 23 %. После промывания питательной жидкостью просвет изолированных сосудов восстанавливался к исходным значениям в течение 5-7 минут.

При перфузии арбузного масла в разведении 1:50 за одну минуту вытекало в среднем 79,6±11,5 капель, что немного больше первоначальных показателей -на 0,5 %.

Сосудорасширяющий эффект, очевидно, связан с влиянием действующих начал арбузного масла на холинорецепторы гладкой мускулатуры стенки сосудов (Д.К. Червяков, 1977; И.Е. Мозгов, 1985; Ф.Г. Набиев, Р.Н. Ахмадеев, 2000; М.И. Рабинович, 2003, 2006). Такое влияние арбузного масла на изолированные сосуды лапок лягушек временное и обратимое.

3.3 Влияние арбузного масла на мочеотделение белых крыс

При исследовании влияния арбузного масла на мочеотделение белых крыс установили, что внутреннее введение препарата в дозе 0,3 мл на животное (1350 мг/кг) один раз в сутки в течение 7 дней оказывал лёгкое мочегонное действие. Суточное количество мочи достоверно увеличилось на 17,6 % по сравнению с первоначальными показателями. При применении арбузного масла в дозе 0,5 мл на животное (2270 мг/кг) один раз в сутки в течение 7 дней суточное выделение мочи достоверно увеличилось на 30,7 % по сравнению с исходными данными. А при применении арбузного масла в дозе 1 мл на животное (4550 мг/кг) один раз в сутки в течение 7 дней суточный объём мочи достоверно увеличился на 28,6 % по сравнению с первоначальными показателями.

Следовательно, мочегонный эффект арбузного масла не является дозозависимым. При вычислении эффективной дозы арбузного масла установлено, что оно увеличивает отделение мочи у белых крыс на 30 % в дозе 0,5 мл на животное (2270 мг/кг). В ходе экспериментов также установили, что крысы-самки и крысы-самцы одинаково чувствительны к арбузному маслу и выраженность мочеотделения у них на введение препарата одинаковое.

Мочегонный эффект арбузного масла, очевидно, связан с увеличением просвета сосудов почек, что было доказано в ходе экспериментов на изолированных сосудах лапок озёрных лягушек. В результате чего через почки циркулирует большее количество крови и соответственно фильтруется большее

количество мочи. Также, вероятно, происходит уменьшение реабсорбции воды в извитых канальцах почек (М.И. Маркова, Ф.Г. Набиев, 2006; В.Г. Скопичев, В.И. Яковлев, 2008).

3.4 Влияние арбузного масла на растворимость мочевых камней (in vitro)

В целях выяснения влияния арбузного масла на растворимость мочевых камней мы проводили исследование на конкрементах, полученных оперативным путём у больных мочекаменной болезнью котов. В исследовании использовали 36 мочевых камней: 18 фосфатных и 18 оксалатных. Перед началом опыта на аналитических весах производили измерение массы мочевых камней. Затем камни помещали в стеклянные лабораторные стаканчики и заливали часть уролитов (12 штук: 6 фосфатных и 6 оксалатных) арбузным маслом, вторую часть - арбузным маслом в разведении 1:10 и третью часть - эмульсией препарата в разведении 1:20 до полного их покрытия. Эксперимент проводили в течение 10 дней. После этого снова измеряли массу мочевых камней на аналитических весах, и полученные данные сравнивали с исходными. В результате проведённых экспериментов установили, что арбузное масло эффективней растворяло мочевые камни, чем его эмульсии в разведениях 1:10 и 1:20. Причём лучше растворялись оксалатные уролиты. Так, при использовании арбузного масла, масса оксалатных камней достоверно уменьшилась в среднем на 50,1 %. Масса фосфатных уролитов - в среднем на 8,5 %. При использовании арбузного масла в разведении 1:10 масса оксалатных камней достоверно уменьшилась в среднем на 31,6 %, а масса фосфатных - на 4,7 % от исходных данных. При использовании арбузного масла в разведении 1:20 масса оксалатных уролитов достоверно уменьшилась в среднем на 22,5 %, а масса фосфатных - на 2,6 %.

Таким образом, арбузное масло обладает литолитическим действием. Вероятно, это связано с действием флавоноидов и полиненасыщенных жирных кислот, которые входят в состав арбузного масла. Они могут связывать кальций и магний в хелатные растворимые комплексы и уменьшать массу камней

(В.К. Лавренов, Г.В. Лавренова, 1999; Ю.Г. Аляев, 2004, 2006; М.И. Маркова, Ф.Г. Набиев, 2006,2007).

3.5 Разработка и применение прописи препарата на основе арбузного масла для лечения котов, больных мочекаменной болезнью

Проведённые нами исследования по токсическим, раздражающим, мочегонным и литолитическим действиям арбузного масла, его влиянии на изолированные сердце и сосуды послужили основанием для создания нового комплексного препарата для лечения котов, больных мочекаменной болезнью. Нами были разработаны три основные прописи препарата с различным содержанием компонентов: 1) арбузное масло - 90 %, гексаметилентетрамин -4 %, настойка валерианы - 3 %, глюкоза - 3 %; 2) арбузное масло - 85 %, гексаметилентетрамин - 5 %, настойка валерианы - 5 %, глюкоза - 5 %; 3) арбузное масло - 80 %, гексаметилентетрамин - 8 %, настойка валерианы -6 %, глюкоза - 6 %. Данные прописи препаратов использовали при лечении котов, больных уролитиазом. Сравнивая результаты лечения, друг с другом, а также с арбузным маслом и наиболее часто используемым препаратом «Котэрвин» делали заключение об эффективности действия препаратов.

В результате проведённых исследований установили, что при применении больным котам «Котэрвина» полное выздоровление удалось добиться у 80 % животных в течение 40-50 дней лечения. При использовании арбузного масла выздоровление наступило у 40 % котов в течение 50-60 дней применения препарата. При использовании прописи с содержанием арбузного масла 90 %, гексаметилентетрамина - 4 %, настойки валерианы - 3 %, глюкозы - 3 %, выздоровление наступило у 60 % котов в течение 50-60 дней применения препарата. При назначении прописи с содержанием арбузного масла 85 %, гексаметилентетрамина - 5 %, настойки валерианы - 5 %, глюкозы - 5 %, полного выздоровления удалось добиться у 100 % котов в течение 30-40 дней без рецидивов заболевания в течение 3 месяцев. При использовании прописи препарата с содержанием 80 % арбузного масла, гексаметилентетрамина - 8 %,

настойки валерианы - 6 %, глюкозы - 6%, полное выздоровление наступило через 45-60 дней у 80 % заболевших котов.

Таким образом, лучший терапевтический эффект при лечении котов, больных мочекаменной болезнью удалось получить, применяя пропись препарата с содержанием 85 % арбузного масла, гексаметилентетрамина - 5 %, настойки валерианы - 5 %, глюкозы - 5 %. Нами было решено назвать его -«Уромелонол» (urine - моча, melon - арбуз, oil - масло). Хорошее лечебное действие, по-видимому, связано с наличием в препарате настойки валерианы, которая обладает спазмолитическим эффектом, а флавоноиды и ненасыщенные жирные кислоты арбузного масла могут связывать кальций и магний в хелатные растворимые комплексы (И.Е. Мозгов, 1985; Ф.Г. Набиев, Р.Н. Ахмадеев, 2000; М.И. Маркова, Ф.Г. Набиев, 2006, 2007). Наличие мочегонного эффекта арбузного масла, гексаметилентетрамина и глюкозы позволяет быстро выводить их из организма (Ф.В. Андроносов, 1981; И.Е. Мозгов, 1985; Ф.Г. Набиев, Р.Н. Ахмадеев, 2000; М.И. Маркова, Ф.Г. Набиев, 2006,2007).

3.6 Влияние «Уромслонола» на морфологические и биохимические показатели крови и на физико-химические свойства мочи кошек, больных мочекаменной болезнью

Так как «Уромелонол» показал лучший терапевтический эффект мы исследовали его влияние на морфологические показатели крови и физико-химические свойства мочи котов, больных мочекаменной болезнью. При применении «Уромелонола» происходило восстановление морфологических показателей крови к физиологическим нормам. Так, у больных животных в день приёма в клинику наблюдали повышенное количество лейкоцитов (19,6±0,9-107л) и пониженный уровень гемоглобина (95,7±3,8 г/л) в крови. После применения «Уромелонола» количество лейкоцитов достоверно уменьшилось до уровня физиологических показателей

После применения «Уромелонола» происходило достоверное увеличение количества базофилов с 0,5±0,4 до 0,7±0,5 %, эозинофилов - с 3,5±0,5 до 4,7±0,5 %, сегментоядерных нейтрофилов - с 34,5±2,1 до 44,8±1,1 % и

моноцитов - с 2,3±0,5 до 3,5±0,5 %. Количество палочкоядерных нейтрофилов достоверно уменьшилось с 8,3±0,5 до 5,7±0,5 %, лимфоцитов - с 49,8±1,9 до 39,3±1,1 %. Такое изменение морфологических показателей крови обусловлено, по-видимому, способностью «Уромелонола» восстанавливать обменные процессы, уменьшать воспалительные реакции, которые возникли в организме котов, больных мочекаменной болезнью (Г.А. Симонян, 1995; С.И. Лютинский, B.C. Степин, 2001; В. Grogaard, 1990; Ph. D. Hodjkin, 1992).

При исследовании влияния «Уромелонола» на физико-химические свойства мочи установили, что препарат оказывал благоприятное влияние на мочевыделительную систему котов. Он восстанавливал физико-химические свойства мочи к физиологическим показателям. «Уромелонол», очевидно, растворяет образовавшиеся в мочевом пузыре кристаллы солей и вымывает их из него. Положительные результаты действия уже были видны на 10 день после применения препарата. Так, в день приёма у котов, больных мочекаменной болезнью моча была тёмно-янтарного цвета, неприятного запаха, мутная, средней вязкости. Невооружённым взглядом был виден осадок. Удельный вес мочи был достаточно высоким - в среднем 1,038 (при физиологической норме -1,020-1,000). У всех животных моча была нейтральной реакции - рН ~ 7,0. Осадок мочи содержал клетки эпителия мочевого пузыря, неоформленные массы, а неорганический осадок в большинстве случаев состоял из трипельфосфата (75 %) и уратов (25 %). В поле зрения микроскопа было видно от 20-30 кристаллов размером до 4-5 мкм.

На 10 день применения препарата моча была светло-жёлтого цвета, специфического запаха, жидкой консистенции, прозрачная. Удельный вес составлял в среднем 1,023. Реакция мочи смещалась в кислую сторону рН = 6,9. Неорганический осадок составляли кристаллы трипельфосфата и уратов. Количество их незначительно уменьшилось, и в поле зрения микроскопа было видно около 15-20 кристаллов. По размеру они были около 2-3 мкм.

К концу лечения моча была светло-жёлтого цвета, специфического запаха, прозрачная, водянистой консистенции. Удельный вес составил в среднем 1,016.

Реакция мочи в среднем — рН = 6,6. При исследовании осадка мочи выявили значительные изменения. Размер кристаллов сильно уменьшился до 0,2-0,5 мкм, они стали сильно деформированными, бесформенными, округлыми, в большинстве случаев в виде точек, а крупные кристаллы не обнаруживались вообще.

По результатам наших исследований видно, что «Уромелонол» нормализует физико-химические свойства мочи, растворяет мочевые камни и вымывает их из мочевого пузыря с мочой.

При исследовании биохимических показателей сыворотки крови котов, больных уролитиазом установили, что в день приёма в клинику у животных было повышенное содержание общего белка и мочевины (82,2±1,0 г/л и 16,6±0,5 ммоль/л соответственно). Уровень креатинина (Ю1,5±0,5 мкмоль/л), показатели альбумина (30,3±0,6 г/л) и щелочной фосфатазы (50±1,0 U/L) находились в пределах физиологической нормы. После применения «Уромелонола» для лечения кошек, больных мочекаменной болезнью, показатели общего белка (67,7±2,5 г/л) и мочевины (7,5±0,2 ммоль/л) стали находиться в пределах физиологической нормы (И.П. Кондрахин, 1985; M. Charles, 2001 и др.).

3.7 Материальные затраты при лечении кошек, больных мочекаменной болезнью

При определении материальных затрат на лечение котов, больных мочекаменной болезнью установили, что при назначении «Котэрвина» затраты на лечение составили 695,60 рубля. При применении «Уромелонола» - затраты на лечение составили 301,92 рубля. Следовательно, экономически выгодней и эффективней применение «Уромелонола» для лечения котов, больных мочекаменной болезнью, так как при его назначении на 56,8 % сокращаются материальные затраты.

Таким образом, механизм фармакологического действия «Уромелонола», очевидно, заключается в перестройке и нормализации нарушенных обменных процессов в организме котов, больных мочекаменной болезнью. Такие сдвиги в

нейрохимических, биохимических и других реактивных системах организма достигается оптимальным соотношением компонентов препарата, а также содержанием в арбузном масле (основной компонент) биологически активных веществ. При лечении мочекаменной болезни кошек, разработанный препарат «Уромелонол» производит лучший терапевтический эффект, который проявляется в полном выздоровлении больных мочекаменной болезнью котов без рецидивов в течение 3 месяцев, а также в сокращении сроков лечения животных. Применение «Уромелонола» в ветеринарной практике позволит повысить эффективность проводимых лечебных мероприятий и существенно сократить материальные расходы на лечение и профилактику кошек, больных мочекаменной болезнью.

4 ВЫВОДЫ

1. Внутреннее введение арбузного масла белым мышам и крысам в дозе 50000 мг/кг и 18000 мг/кг, соответственно, не оказывает токсического влияния, а его наружное применение не вызывает местно-раздражающего и кожно-резорбтивного действия. В соответствии с ГОСТ 12.1.007.76 арбузное масло относится к IV классу опасности химических веществ - незначительно опасные вещества.

2. Арбузное масло в разведении 1:10 и 1:20 достоверно уменьшает амплитуду и силу сердечных сокращений лягушек на 45,2 % и 22,9 %, соответственно. Арбузное масло в разведении 1:10; 1:20 вызывает расширение просвета изолированных сосудов лапок озёрных лягушек на 46 % и 23 %, соответственно.

3. Арбузное масло в дозе 2270 мг/кг один раз в день в течение 7 дней увеличивает суточное отделение мочи крыс на 30 %.

4. Арбузное масло и его эмульсии в разведении 1:10 и 1:20 оказывают литолитическое действие. Наиболее эффективно (in vitro) растворяются оксалатные уролиты (в среднем на 50,1±1,8 %), менее фосфатные (в среднем на 8,5±1,2 %).

5. Создан комплексный препарат «Уромелонол», состоящий из арбузного масла (85 %), гексаметилентетрамина (5 %), настойки валерианы (5 %) и глюкозы (5 %).

6. «Уромелонол» обладает лучшим терапевтическим эффектом в сравнении с «Котэрвином», арбузным маслом и другими прописями препаратов при лечении котов, больных мочекаменной болезнью.

7. При пероральном применении «Уромелонола» котам, больным уролитиазом в дозе 1 мл на кг массы 2 раза в сутки в течение 30 дней происходит полное восстановление морфологических и биохимических показателей крови, а также физико-химических свойств мочи к физиологическим нормам.

8. При применении «Уромелонола» сокращаются материальные затраты при лечении котов, больных мочекаменной болезнью на 56,8 %, в сравнении с «Котэрвином».

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. «Уромелонол» рекомендуется в качестве препарата для профилактики и лечения кошек, больных мочекаменной болезнью.

2. Применяется препарат во время кормления (вместе с кормом) из расчёта 1 мл на кг массы животного два раза в день в течение 1-1,5 месяца.

3. На основании проведённых исследований было разработано и утверждено Главным управлением ветеринарии Республики Татарстан «Временное наставление» по применению «Уромелонола» для лечения кошек, больных мочекаменной болезнью (от 3 июля 2009 года).

6 СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Газеев, И. А. Влияние арбузного масла на изолированные органы лягушек / И.А. Газеев, Ф.Г. Набиев // Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. Том 192: материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 135-летию академии «Современные подходы развития АПК». - Казань, 2008. - С. 256-259.*

2. Газеев, И.А. Влияние арбузного масла на мочеотделение белых крыс / И.А. Газеев, Ф.Г. Набиев // Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. Том 192: материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 135-лстню академии «Современные подходы развития АПК». - Казань, 2008. - С. 260-262.*

3. Газеев, И.А. Токсикологическая оценка арбузного масла / И.А. Газеев, Ф.Г. Набиев // Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. Том 195. - Казань, 2008. - С. 78-86.*

4. Газеев, И.А. Влияние арбузного масла на растворимость мочевых камней / И.А. Газеев, Ф.Г. Набиев // Материалы Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». Том III: актуальные вопросы ветеринарной медицины, биологии и экологии. - Ульяновск, 2009. - С. 18-21.

5. Газеев, И.А. Влияние препарата на основе арбузного масла на морфологические показатели крови при мочекаменной болезни у кошек / И.А. Газеев, Ф.Г. Набиев // Материалы второго съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии». - Казань, 2009. - С. 64-66.

6. Газеев, И.А. Влияние препарата на основе арбузного масла на физико-химические свойства мочи при мочекаменной болезни кошек / И.А. Газеев // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения ветеринарной медицины и биологии - в сельскохозяйственное производство». - Уфа, 2009. - С. 80-83.

* - публикации в центральных изданиях согласно перечню ВАК России.

Подписано в печать 23.11.09г. Форм. бум. 60x80 1/16. Печ. л.1,5.

Тираж 100. Заказ № 226. Отпечатано с готового оригияал - макета в ООО «Весгфалика» г. Казань, ул. Б. Красная, 67. Тел.: 250-30-42

1.1. Актуальность темы. Лекарственные растения оказывают на организм более мягкое и многостороннее действие и, как правило, не вызывают отрицательных побочных эффектов и различного рода осложнений [2; 47; 49; 50]. Такое многогранное действие растений на организм животных и человека обуславливается, во многом, содержанием в их составе биологически активных веществ. Они в свою очередь либо усиливают, либо подавляют определённые биохимические реакции в организме и, тем самым, оказывают благоприятное действие [83; 86; 94].

Одним из биологически активных веществ (парафармацевтиков) является арбузное масло, получаемое из семян арбузов. Установлено, что арбуз содержит большое количество фолиевой кислоты, полиненасыщенных жирных кислот, витамина Е, которые активно участвуют в процессах кроветворения и влияют на сохранение тонкого равновесия химических процессов, происходящих в живом организме [103; 115].

Арбузное масло в народной медицине рекомендуется при цистите, уретрите, хроническом гломерулонефрите, пиелонефрите, почечнокаменной и других болезнях [4; 5]. Действие и применение арбузного масла в ветеринарии мало изучено.

Одной из серьёзных проблем, с которыми очень часто приходится сталкиваться ветеринарным специалистам, работающим с мелкими животными, является мочекаменная болезнь. Это достаточно распространенная патология органов мочевой системы животных. Чаще регистрируется у кошек, пушных зверей и собак [8; 16; 19; 38; 41].

Общими факторами риска камнеобразования в почках могут служить: возраст, условия содержания, географические и климатические факторы гиподинамия, дегидратация, а так же неправильное и несбалансированное питание, неадекватный режим приема жидкости. Наследственная предрасположенность к развитию мочекаменной болезни связана с особенностями формирования мочеполовой системы и обмена веществ (минерального, пуринового, жирового, углеводного) [8; 16; 19; 38; 41].

В аллопатической медицине в настоящее время в лечебной тактике мочекаменной болезни используют в основном хирургический метод, а в легких случаях консервативный (медикаментозный, в том числе фитотерапия и гомеопатические средства, но довольно редко). Особенно возрастает роль медикаментозного лечения при хронических заболеваниях [4; 5; 84].

В связи с этим, изучение фармако-токсикологических свойств арбузного масла и возможности применения препарата «Уромелонола» на его основе при мочекаменной болезни кошек представляется весьма актуальным.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью наших исследований явилась фармако-токсикологическая оценка арбузного масла и разработка наиболее эффективного лекарственного препарата на его основе при лечении кошек, больных мочекаменной болезнью. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Оценить острую и хроническую токсичности, местно-раздражающее действие, эмбриотоксическое и тератогенное влияние арбузного масла на организм белых крыс, мышей и кроликов;

2. Определить влияние арбузного масла на изолированные сердце и сосуды лапок озёрных лягушек;

3. Провести оценку мочегонного и литолитического (in vitro) действия арбузного масла и создать пропись лекарственного препарата на его основе;

4. Установить влияние «Уромелонола» на морфологический и биохимический состав крови и на физико-химические свойства мочи кошек, больных мочекаменной болезнью.

1.3. Научная новизна. Впервые изучены параметры острой и хронической токсичности, раздражающие, эмбриотоксические и тератогенные свойства арбузного масла. Исследовано влияние арбузного масла на изолированные сердце и сосуды лапок озёрных лягушек. Установлено мочегонное и уролитолитическое действия арбузного масла. Разработан новый эффективный препарат - «Уромелонол» и доказана его эффективность при лечении мочекаменной болезни кошек. Изучено влияние «Уромелонола» на морфологические, биохимические показатели крови и на физико-химические свойства мочи при мочекаменной болезни котов. На основании проведённых исследований нами было разработано и утверждено Главным управлением ветеринарии Республики Татарстан «Временное наставление» по применению «Уромелонола» для лечения кошек, больных мочекаменной болезнью (от 3 июля 2009 года).

1.4. Практическая ценность. Проведены доклинические испытания, подтвердившие безвредность арбузного масла, его мочегонные и литолитические свойства. Разработан и внедрён в практику новый препарат на основе арбузного масла - «Уромелонол» для лечения и профилактики мочекаменной болезни у котов. Предложена схема лечения мочекаменной болезни кошек с применением «Уромелонола», которая используется в ветеринарных клиниках Казани.

1.5. Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных заседаниях Учёного совета ФГОУ ВПО «Казанской государственной академии ветеринарной медицины» (2007-2009); Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: Опыт, проблемы и пути их решения» (Ульяновск, 2009); Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения ветеринарной медицины и биологии -в сельскохозяйственное производство» (Уфа, 2009); Всероссийской научно-практической конференции «Современные тенденции развития ветеринарной медицины и инновационные технологии в ветеринарии и животноводстве» (Казань 2009); II-ом съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов России «Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии» (Казань, 2009).

1.6. Публикации результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ в рамках научно-практических конференций, в том числе три статьи в ведущем рецензируемом издании, определённом Высшей аттестационной комиссией РФ.

1.7. Основные положения, выносимые на защиту:

- Арбузное масло является безвредным малотоксичным препаратом, не обладающим кумулятивным действием;

- Арбузное масло в разведении 1:10 и 1:20 уменьшает амплитуду и силу сокращений изолированного сердца лягушек на 45,2 % и 22,9 %, соответственно. Арбузное масло в разведении 1:10; 1:20 вызывает расширение просвета изолированных сосудов лапок озёрных лягушек на 46 % и 23 %, соответственно;

- арбузное масло обладает мочегонным и уролитолитическим (in vitro) действиями;

- «Уромелонол» полностью восстанавливает морфологические, биохимические показатели крови и физико-химические свойства мочи кошек, больных мочекаменной болезнью к физиологическим показателям.

1.8. Объём и структура диссертации

Работа изложена на 117 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 15 таблицами и 12 рисунками. Список литературы включает 178 источников, в том числе 63 иностранных.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

5. ВЫВОДЫ

1. Однократное и многократное внутреннее введение арбузного масла белым мышам и крысам в дозе свыше 1000 мг/кг, не оказывает токсического влияния, а его наружное применение не вызывает местно-раздражающего и кожно-резорбтивного действия. В соответствии с ГОСТ 12.1.007.76 арбузное масло относится к IV классу опасности химических веществ — незначительно опасные вещества.

2. Арбузное масло в разведении 1:10 и 1:20 достоверно уменьшает амплитуду и силу сердечных сокращений лягушек на 45,2 % и 22,9 %, соответственно. Арбузное масло в разведении 1:10; 1:20 вызывает расширение просвета изолированных сосудов лапок озёрных лягушек на 46 % и 23 %, соответственно.

3. Арбузное масло в дозе 2270 мг/кг один раз в день в течение 7 дней увеличивает суточное отделение мочи крыс на 30 %.

4. Арбузное масло и его эмульсии в разведении 1:10 и 1:20 оказывают литолитическое действие. Наиболее эффективно (in vitro) растворяются оксалатные уролиты (в среднем на 50,1 ±1,8 %), менее фосфатные (в среднем на 8,5± 1,2%).

5. Создан комплексный препарат «Уромелонол», состоящий из арбузного масла (85 %), гексаметилентетрамина (5 %), настойки валерианы (5 %) и глюкозы (5 %).

6. «Уромелонол» обладает лучшим терапевтическим эффектом в сравнении с «Котэрвином», арбузным маслом и другими препаратами при лечении котов, больных мочекаменной болезнью.

7. При пероральном применении «Уромелонола» котам, больным уролитиазом в дозе 1 мл/кг 2 раза в сутки в течение 30 дней происходит полное восстановление морфологических и биохимических показателей крови, а также физико-химических свойств мочи к физиологическим нормам.

8. При применении «Уромелонола» сокращаются материальные затраты при лечении котов, больных мочекаменной болезнью на 56,8 %, в сравнении с «Котэрвином».

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. «Уромелонол» рекомендуется в качестве препарата для профилактики и лечения кошек, больных мочекаменной болезнью. Применяется препарат во время кормления (вместе с кормом) из расчёта 1 мл на кг массы животного два раза в день в течение 1-1,5 месяца.

2. На основании проведённых исследований было разработано и утверждено Главным управлением ветеринарии Республики Татарстан «Временное наставление» по применению «Уромелонола» для лечения кошек, больных мочекаменной болезнью (от 3 июля 2009 года).

3. Результаты, полученные в ходе исследований, используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре фармакологии и токсикологии ФГОУ ВПО КГАВМ, а также в ветеринарных клиниках г. Казани Республики Татарстан.