Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологические свойства и эффективность динопена при профилактике и лечении послеродового эндометрита коров

□□348708

На правах рукописи

РАСТРИЖЕНКОВА ЛАРИСА ВИКТОРОВНА

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ДИНОПЕНА ПРИ ПРОФИЛАКТИКЕ И ЛЕЧЕНИИ ПОСЛЕРОДОВОГО ЭНДОМЕТРИТА КОРОВ

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 о ДЕК 2009

Воронеж - 2009

003487085

Работа выполнена в отделе фармакологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии» Россельхозакадемии.

Научный руководитель: доктор биологических наук

Востроилова Галина Анатольевна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Бригадиров Юрий Николаевич

кандидат ветеринарных наук Шапошников Иван Тихонович

Ведущая организация: Московская академия ветеринарной меди-

цины и биотехнологии им. К.И. Скрябина

Защита состоится декабря 2009 г. в ^ ч. на заседании диссертационного совета ДМ 006.004.01 при Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии РАСХН (Россия, 394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-6).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГНУ Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии.

Автореферат разослан « Л ноября 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

Т. И. Ермакова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Ветеринарная наука и практика уделяют большое внимания вопросам профилактики и лечения акушерско-гинекологических заболеваний, которые по данным ветеринарной статистики наносят значительный экономический ущерб ведению животноводства. Эти заболевания проявляются у животных бесплодием, снижением молочной продуктивности животных, преждевременной их выбраковкой, значительными затратами на кормление, содержание, многократное безрезультатное осеменение и лечение бесплодных коров, а также снижением качества продуктов питания (А.Г. Нежданов, с соавт., 2005; C.B. Шабунин с соавт., 2005.). Одним из таких заболеваний является острый послеродовой эндометрит, который у крупного рогатого скота регистрируется во всех регионах страны и последние годы наметилась тенденция к его более широкому распространению (О. В. Распутина, 2007).

Степень распространения послеродового эндометрита у коров колеблется от 5,0 - 20,0% (Р.Г. Кузьмич, 2000; В.М. Бреславец, 2001), до 20,0 - 57,0% (В.А. Напримеров, 2004; В.И. Михалев с соавт., 2005).

Для лечения коров, больных острым послеродовым эндометритом, используются разнообразные средства и методы патогенетической, обще-стимулирующей, этиотропной и симптоматической терапии, а также методы физиотерапевтического воздействия.

В качестве средств этиотропной терапии, направленной на подавление патогенной микрофлоры в матке и организме животных в целом, используют нитрофурановые, сульфаниламидные и антибиотические препараты в различных сочетаниях. Однако эффективность многих антибиотиков, как и других антибактериальных препаратов, резко снижается из-за широкого распространения антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов.

Поэтому разработка новых эффективных антибактериальных препаратов для лечения и профилактики острого послеродового эндометрита у коров является важной актуальной задачей ветеринарной науки и практики.

Одной из перспективных групп антибактериальных препаратов в настоящее время является группа фторхинолонов, обладающая широчайшим спектром антимикробного действия в отношении грамположитель-ных и грамотрицательных бактерий, сравнительно низкой токсичностью и практически полным отсутствием резистентности к ним у микроорганизмов (Н.И. Фадеева и др., 1993; E.H. Падейская, В.П. Яковлев, 1998; C.B. Яковлев, 2007).

Исходя из этих данных, был разработан пенный антибактериальный препарат для профилактики и лечения послеродового эндометрита коров -динопен, активнодействующими веществами которого являются: норфлок-

3

сацин (фторхинолон II поколения) и диоксидин (препарат хиноксалиново-го ряда).

Цели и задачи исследования. Целью исследования являлась разработка, фармакотоксикологическая оценка и внедрение в практику ветеринарии препарата динопен для лечения послеродового эндометрита у коров.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить фармакотоксикологические свойства динопена;

2. Определить влияние динопена на гематологические и биохимические показатели коров и сроки выведения активнодействующих веществ препарата из организма животных;

3. Оценить профилактическую и лечебную эффективность динопена при послеродовом эндометрите коров;

4.Определить экономическую эффективность применения динопена при профилактики и лечении послеродового эндометрита коров.

Научная новизна. Впервые изучены фармако-токсикологические свойства нового пенного антибактериального препарата динопен, влияние его на клинико-биохимические показатели животных. Установлены пути и сроки выведения препарата из организма коров, определены лечебная и профилактическая эффективность его при послеродовом эндометрите коров, а так же экономическая эффективность применения препарата.

Практическая значимость. В практику ветеринарии предложен, для профилактики и лечения послеродового эндометрита коров, новый пенный высокоэффективный антибактериальный препарат.

Данные исследований включены в нормативную документацию и инструкцию по применению динопена.

Апробация результатов исследований. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» (Воронеж, 2008), Международной научно-практической конференции «Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных», посвящ. 100-летию со дня рождения проф. В.А. Акатова (Воронеж, 2009), Международном рабочем совещании «Инновационные подходы в профилактике, диагностике и лечении зооантро-понозных и метаболических болезней животных и человека» (Саратов, 2009).

Публикации. Основные научные результаты, включенные в диссертацию, опубликованы в 5 печатных работах, в том числе 1 статья в журнале «Ветеринарный врач», рекомендованном ВАК Минобразования РФ, 1 методических рекомендациях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, иллюстрирована 46 таблицами и 7 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения,

выводов и практических предложений. Список литературы состоит из 202 источников, из которых 32 иностранных.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Фармакотоксикологические свойства динопена;

2. Гематологические и биохимические показатели животных при применении динопена;

3. Профилактическая и терапевтическая эффективность динопена.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 2006-2009 гг. в отделе фармакологии ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН и в других подразделениях института, а также в крестьянском хозяйстве «Раздолье», крестьянском фермерском хозяйстве «Прохоровка» и сельскохозяйственном производственном кооперативе СХА «Весна» Тепло-Огаревского района Тульской области в соответствии с планом научно-исследовательских работ по государственному заданию «Разработать новые экспресс-тесты и терапевтические препараты для эффективной системы мероприятий по диагностике, профилактике и терапии болезней органов размножения и молочной железы у коров и свиней, обеспечивающие снижение бесплодия маточного поголовья, получение жизнеспособного приплода и производство продукции высокого санитарного качества» (№ гос. регистрации 15070.3666026906.06.8.002.3).

В проведении отдельных исследований принимали участие сотрудники ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии Л.В. Ческидова, В.И. Шушлебин, Т.Е. Рогачева, А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, А.Г. Нежданов, В.И. Михалев, В.Н. Коцарев, В.Ю. Боев и другие, которым автор выражает искреннюю признательность за оказанную помощь.

В лабораторных экспериментах использованы беспородные белые мыши обоего пола массой 20-22 г. - 160 гол., беспородные белые крысы обоего пола массой 190-230 г. - 200 гол., морские свинки массой 300-350 г. - 40 гол., кролики массой 2,2-3,2 кг. - 20 гол., в научно-производственных опытах - крупный рогатый скот симментальской и черно-пестрой породы массой 500-550 кг. - 450 гол.

Изучение антимикробной активности препарата динопен и его компонентов (диоксидин и норфлоксацин) проводили методом серийных разведений. В качестве тест культуры использовали референтные штаммы Е. coli 866, 57/856, 04 и Staph, aureus 209Р, cowan-I, полевые штаммы Е. coli 0139, Staph, aureus и Strept. feccalis rp. D. Микробная загруженность составляла 500 тыс. м.к. на 1 мл среды.

Стабильность препарата динопен определяли в условиях долгосрочного исследования: показатели качества, предусмотренные требованиями

проекта СТО, изучали через 0,5 , 1 и 2 года хранения в защищенном от света месте при температурах: (5±2) °С, (20±2) °С и (25±2) °С.

Токсические свойства динопена изучали в остром и хроническом опытах в соответствии с "Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве" (1991). При острой токсичности эксперименты проведены на половозрелых конвенциональных нелинейных разнополых белых мышах (160 гол.) и белых крысах (90 гол.). Изучение параметров токсичности препарата в остром опыте проведено при однократном пероральном и подкожном введении динопена указанным видам животных с использованием двухэтапного метода. Опыты выполняли в двух повторностях для каждого вида животных. Содержание животных и обеспечение кормами соответствовало нормативным требованиям Международной конвенции. Одновременно на этих животных изучали симптомы острого экспериментального отравления. Павших животных и особей с признаками отравления препаратом, подвергали патологоанатомическому вскрытию.

Среднелетальную дозу - ЬО50 - определяли аналитическим способом Спирмена-Кербера (Лакин Г.Ф., 1990) и с помощью пробит-анализа с использованием прикладной программы «Статистика +2003». Величины 1ЛЭ|6 и 1^84 динопена для белых мышей и белых крыс определяли графически на основании соответствующих пробитов и доз в мг/кг массы тела, показатель ошибки средней дозы эффекта - 8ЬО50 - аналитически и графически.

Хроническую токсичность динопена изучали на половозрелых конвенциональных нелинейных белых крысах (60 гол.) при подкожном введении динопена в течение 21 дня в следующих дозах; 1-я группа - котроль; 2-я группа - 1/50 1ЛЭ50 - 570,0 мг/кг; 3-я группа - 1/20 П)5о - 1430,0 мг/кг и 4-я группа -1/10 иЭ50 -2860,0 мг/кг.

Общетоксическое действие препарата оценивали в течение 21 дня, по динамике массы тела животных при взвешивании 1 раз в неделю. Вегетативный статус определяли по состоянию слизистых, шерстного покрова, ширине глазных щелей, наличию саливации, диареи, опрятности животных. Для исследования внутренних органов животных часть грызунов из каждой группы на 7-е, 14-е и 21-е сутки с момента начала опыта подвергали эвтаназии. В эти же сроки проводили морфологический и биохимический анализ крови.

Изучение раздражающего действия динопена на слизистые оболочки, было проведено на кроликах массой 2,2-3,2 кг. С этой целью закапывали пипеткой по 2 капли подогретого до 40 °С препарата, в конъюнктиваль-ный мешок левого глаза животного. Правый глаз у кроликов служил контролем, в конъюнктивальный мешок которого препарат не вносили. Через 0,5; 1; 2; 3; 4; 5 и 6 часов после инсталляции препарата учитывали клиническое состояние организма животных (температуру тела, частоту пульса,

количество дыхательных движений), а также изменение кровенаполнения конъюнктивы, наличие лакримации и выделений, состояние роговицы и век.

Опыты по изучению раздражающего действия динопена на кожу были проведены на кроликах с массой тела 2,2-3,2 кг. Исследуемый препарат наносили в нативном виде. Площадь нанесения составляла 80-82 см2. За два дня до эксперимента тщательно выстригали шерсть на спине, избегая механических повреждений кожных покровов. Препарат равномерно распределяли по поверхности участка кожи в дозах от 0,02-0,12 мл/см2. Экспозиция 4 часа, после чего кожу аккуратно протирали ватным тампоном, смоченным дистиллированной водой. Реакцию на воздействие препарата оценивали через 1 и 16 часов после однократного нанесения.

Учитывали функциональные нарушения кожи, характеризующиеся появлением различной степени выраженности эритемы, отека, трещин, изъязвлений, изменением температуры тела.

Изучение аллергизирующих свойств динопена проводили в соответствии с методическими рекомендациями Фармакологического Комитета МЗ РФ по оценке аллергенных свойств фармакологических средств. Изучение аллергенного действия было проведено на морских свинках и белых крысах, постановкой тестов in vivo: метод накожных аппликаций, конъ-юнктивальная проба. В качестве in vitro-тестов применяли реакцию непрямой дегрануляции тучных клеток (РДТК), реакцию специфической агломерации лейкоцитов (PCAJI) и реакцию специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ).

Определение сроков выведения активнодействующих веществ препарата динопен проводили по содержания диоксидина и норфлоксацина в молоке, крови и моче.

Определение содержания норфлоксацина в крови и молоке коров проводили методом ВЭЖХ с использованием калибровочных кривых. Определение содержания диоксидина проводили спектрофотометрическим методом, также с использованием калибровочных кривых.

Для оценки общего действия динопена на организм лабораторных животных и коров, определяли морфологические и биохимические показатели крови в соответствии с общепринятыми методами, описанными в руководствах Колба В.Г., Камышникова B.C., (1982); Кондрахина И.П. с со-авт. (2004). В крови определяли количество эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов. Фракции белка определяли электрофорезом в агарозном геле, концентрацию общего белка, липидов наборами фирмы «Vital Diagnostics», концентрацию мочевины, фосфора, холестерина, глюкозы, активность ас-партат- и аланинаминотрасфераз (АсАТ и АлАТ), щелочной фосфатазы на биохимическом анализаторе «Hitachi-902».

Для определения эффективности лечения динопеном послеродового эндометрита у коров был проведен опыт на 123 животных. Диагноз на за-

болеваемость послеродовыми эндометритами устанавливали на основании данных анамнеза, результатов клинического и акушерско-гинекологического исследований, учитывая общее состояние животных, поведение, аппетит, состояние половых органов, характер и количество экссудата, выделяемого из половых органов. После постановки диагноза на острый послеродовой эндометрит (через 8-10 суток после отела) из больных животных формировали, по принципу аналогов, опытную и контрольную группы.

Животным опытной группы вводили динопен внутриматочно двух-, трехкратно в дозе Юг/ 100 кг массы тела с 24-часовым интервалом до выздоровления на фоне комплексного лечения, предусматривающего внутримышечное введение 1%-го масляного раствора синестрола в дозе 45 мл дважды с интервалом 24 часа с последующим введением внутримышечно 40-50 ЕД окситоцина, а также подкожное введение ихтиола и плаценты денатурированной эмульгированной в соответствии с инструкциями по их применению.

Животным контрольных групп для лечения применяли препарат эн-роцид в соответствии с инструкцией по применению в те же сроки, что и коровам опытной группы, на фоне комплексного лечения.

За животными в течение опыта проводили ежедневное клиническое наблюдение, учитывая общее состояние, время исчезновения клинических признаков заболевания, объем и характер выделений из наружных половых органов, проявление первой охоты, сроки плодотворного осеменения, процент выздоровевших животных.

Для полного суждения о влиянии динопена на организм коров прослеживали изменения морфологических и биохимических показателей крови подопытных и контрольных животных.

Опыты по изучению эффективности применения динопена для профилактики послеродового эндометрита у коров проведены на 127 животных. Коровы были разделены по принципу аналогов на три группы.

Коровам опытной группы (п=44) применяли препарат динопен, который вводили внутриматочно однократно в дозе 12 г /100 кг массы тела сразу после оперативного отделения последа или через 6-12 часов после нормальных родов.

Коровам контрольной группы (п=41) применяли однократно внутриматочно препарат йодопен в соответствии с инструкцией по применению сразу после отделения последа или через 6-12 часов после нормальных родов. Животные третьей группы (п=42) служили отрицательным контролем и им препараты не назначали.

За животными в течение опыта проводили ежедневное клиническое наблюдение, учитывая время заболевания, проявление первой охоты, сроки плодотворного осеменения, количество заболевших животных.

При расчетах экономической эффективности лечебно-профилактических мероприятий была взята за основу «Методика определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (Москва, 1982) и «Методика определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ, новой техники, изобретений и рационализаторских предложений» (Москва, 1980).

Полученный цифровой материал обрабатывали, используя методы математической статистики, принятые в биологии и медицине (Г.Ф. Лакин, 1990). Статистическая обработка полученных данных проведена с использованием пакета прикладных программ «Microsoft Excel 2007» и «Statistica 3.0» на PC «Pentium D820».

м кг/мл

■ Е. coli 57856 □ Staph, aureus 209 Р

3.РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИИ

3.1. Фармако-токсикологическая оценка препарата дннопен 3.1.1. Антимикробная активность динопсна

Изучением антимикробной активности препарата динопен и его компонентов установлено, что оба компонента препарата - норфлоксацин и диоксидин, имеют высокую антимикробную активность по отношению к Е. coli 866 и Staph, aureus 209Р.

Бактериостатическая концентрация норфлоксацина по отношению к Staph, aureus 209Р составляет соответственно 3,12 мкг/мл, к Е. coli 866 -0,39 мкг/мл. Бактериостатическая концентрация диоксидина по отношению к Staph, aureus 209Р составила 25 мкг/мл, к Е. coli 866 - 1,56 мкг/мл (рис. 1). Было изучено 5 композиций в сравнении с норфлоксацином и дио-

ксидином. Наиболее активной оказалась композиция 2. Антимикробная активность ее в отношении эшерихий увеличилась по сравнению с норфлоксацином в 2 раз, а по сравнению с диоксидином - в 8

Рис. 1. Антимикробная активность норфлоксацина, диок- p|Q охношению к

сидина и различных композиций препарата на примере ^ E.coli и Staph. Aureus 209Р (Н-норфлоксацин; Д-диоксидин; стафилококку - оста-1 - композиция 1; 2 - композиция 2; 3 - композиция 3; 4 - лась на том же уровне композиция 4; 5 - композиция 5) (по сравнению с норфлоксацином) и увеличилась в 8 раз по отношению с диоксидином Та- ким образом, совместное применение норфлоксацина и диоксидина в различных соотношениях позволило снизить минимальную бактериостатическую концентрацию в отношении изученных культур, что

9

Л

свидетельствует о синергическом действии составляющих компонентов. В дальнейшей работе из изученных композиций была выбрана композиция 2, которая была названа - динопеном.

Динопен обладает широким спектром антимикробного действия в отношении всех испытанных культур микроорганизмов. Активность препарата в отношении как музейных, так и полевых штаммов эшерихий была высокой - 0,19-3,12 мкг/мл. Бактериостатическая концентрация для кокковой микрофлоры составила - 3,12-6,25 мкг/мл. МБцК динопена превышала бактериостатическую в отношении изученных культур в 2 раза.

3.1.2. Оценка острой токсичности динопена

В результате изучения острой токсичности пенного комплексного антибактериального препарата динопен на лабораторных животных установлено (табл. 1), что по параметрам острой токсичности согласно ГОСТ 12.01.007-76 препарат относится к IV классу опасности - веществам малоопасным.

Таблица 1

Параметры острой токсичности динопена для лабораторных животных при однократном внутрижелудочном и подкожном введении (мг/кг)

Вид животных Параметры токсичности

МПД 1ЛЭ16 ьо50 ьэ84 ЬО.оо

Внутрижелудочное введение

Белые мыши 45000,0 48707,6 53428,4 (51400-55400) 58641,9 61125,5 ±990,0

Белые крысы 45000,0 48539,4 54048,7 (51900-56200) 59680,2 62465,3 ±852,0

Подкожное введение

Белые мыши 17000,0 17387,7 18575,3 (18100-19000) 19799,7 20402,6 ±225,5

Белые крысы 18000,0 18237,7 19357,2 (18900-19800) 20422,2 20968,3 ±212,9

3.1.3. Хроническая токсичность динопена

Опыт по изучению хронической токсичности препарата динопен проведен на 60 белых половозрелых крысах самцах с массой тела 190-230 г при подкожном введении препарата в течение 21 дня в дозах: 1-я группа

- контроль (стерильный изотонический раствор хлорида натрия); 2-я группа - 1/50 иэ50 - 385,0 мг/кг; 3-я группа - 1/20 - 967,0 мг/кг и 4-я группа

- 1/10 иэ50 - 1933,0 мг/кг.

Проведенными исследованиями установлено, что многократное подкожное введение динопена во всех испытанных дозах не вызывает сущест-

венных изменений в клиническом состоянии животных. Гибели животных в период опыта не было.

Существенной разницы в привесах крыс контрольной и опытных групп (в дозах 385,0 и 937,0 мг/кг) в течение опыта не было отмечено. В третьей группе (1933,0 мг/кг) наблюдалось снижение привесов животных по сравнению с крысами контрольной группы в среднем на 29,1% в первые 8 дней опыта, в следующие 8 дней - на 12,2%, а последние 5 дней - на 7,4% (рис. 2).

Относительные массы внутренних органов крыс, которым применяли динопен подкожно в изученных дозах в течение 21 дня, существенно не отличались от контроля. При исследовании крови животных, которым вводили динопен, не отмечено достоверных изменений в морфологическом составе крови и

-Контроль

16 21

•—967,0 мг/кг

Рис. 2. Динамика изменения массы тела белых крыс при многократном подкожном введении динопена биохимических показателях по сравнению с показателями в крови животных контрольной группы (табл. 2).

Таблица 2

Морфологические и биохимические показатели крови белых крыс

Показатели Контроль Динопен, доза, мл/кг

385,0 937,0 1933,0

Эритроциты, 1012/л 6,10±0,30 6,10±0,17 5,73±0,05 5,57±0,09

Лейкоциты, 10ч/л 7,30±0,10 7,87±0,73 8,6±0,55 9,87±0,57

Гемоглобин, г/л 148,9±3,83 141,5±6,14 141,0±1,71 133,4±3,83

Общий белок, г/л 67,5±2,03 65,2±1,81 63,6±0,50 62,0±0,58

Альбумины, г/л 37,3±0,60 35,7±0,82 31,0±1,57 31,1±1,01

а- глобулины, г/л 4,76±0,55 4,91 ±0,42 6,01±0,37 5,41±0,71

(3- глобулины,г/л 12,21±0,30 11,28±0,58 12,21±0,63 12,15±0,20

у-глобулины, г/л 13,20±0,85 13,30±0,47 14,37±0,79 13,31±0,52

Глюкоза, мМ/л 5,55±0,52 4,77±0,17 4,79±0,05 4,93±0,13

Мочевнна, мМ/л 5,98±0,30 5,37±0,58 4,99±0,29 4,26±0,90

Креатинин, мкМ/л 31,50±1,50 28,25±2,53 36,25±3,33 31,33±2,33

Холестерин, мМ/л 2,11 ±0,09 2,43±0,20 1,41±0,13 1,27±0,16

Липиды, г/л 2,51 ±0,23 2,12±0,30 2,53±0,26 1,77±0,08

ЩФ, Ед/л 140,5±17,0 135,0±23,1 105,5±15,8 120,7±10,8

АсАт, Ед/л 102,6±11,9 88,1±8,86 100,6±4,94 95,2±4,31

АлАТ, Ед/л 38,20±15,8 34,13±1,91 42,93±2,77 42,73±1,67

Билирубин, мкМ/л 0,91 ±0,15 0,83±0,03 1,00±0,14 1,05±0,09

Кальций, мМ/л 2,42±0,01 2,37±0,07 2,44±0,02 2,40±0,01

Фосфор, мМ/л 1,75±0,14 1,78±0,01 1,51±0,10 1,47±0,08

3.1.4. Раздражающие и аллергенные свойства препарата динопен

Изучение раздражающего действия динопена на слизистые оболочки, проведенное на кроликах, инсталляцией препарата в течение 6 часов на конъюнктиву глаза, не выявило изменений температуры тела, частоты пульса и количества дыхательных движений, изменений кровенаполнения конъюнктивы, наличие лакримации и выделений.

Опыты по изучению раздражающего действия на кожу проведенны на кроликах, однократной апликацией препарата динопен в нативном виде в дозах от 0,02-0,12 мл/см2. Реакцию кожи на воздействие препарата оценивали через 1 и 16 часов после однократного нанесения. Согласно полученным данным при однократной аппликации на кожные покровы, динопен не вызывает повреждение кожи в виде эритемы или ее отеков.

Опыты по изучению аллергенных свойств динопена проведены на белых беспородных крысах и морских свинках при наружном, конъюнкти-вальном и внутрикожном способах применения препарата.

Результаты оценки сенсибилизирующего действия динопена показали отсутствие выраженной реакции иммунной системы подопытных животных на введение препарата. Препарат не вызывал контактного дерматита после многократных накожных аппликаций, при этом реакции специфического лизиса, специфической агломерации лейкоцитов и непрямой де-грануляции тучных клеток были отрицательны. Полученные данные позволяют сделать вывод об отсутствии аллергенного действия у динопена.

3.1.5. Определение остаточных количеств активнодействующих компонентов препарата динопен в крови и молоке коров

Определение остаточных количеств активнодействующих компонентов препарата в крови, молоке и моче, проведено в 2 опытах, на коровах больных острым послеродовым эндометритом. В первом опыте динопен вводили в полость матки в дозе 10 г / 100 кг массы тела однократно. Во втором опыте динопен вводили в полость матки в дозе Юг/ 100 кг массы тела трехкратно. У коров опытных групп для исследования брали пробы молока, крови и мочи для определения остаточных количеств норфлокса-цина и диоксидина до введения препарата и через 24, 48, 72 и 120 часов после последнего введения динопена. У коров контрольной группы для исследования брали пробы молока, крови и мочи до начала и в конце опыта.

Результаты изучения остаточных количеств норфлоксацина и диок-сидина после однократного введения динопена представлены в таблицах 3 и 4.

Данные таблицы 3 позволяют сделать вывод о том, что при однократном внутриматочном введении препарата компоненты всасываются в кровь, хотя и в разной степени, а из нее проникают в молоко и обнаруживаются в нем в различных концентрациях.

Количественное определение содержания активнодействующих веществ в пробах крови, молока и мочи после однократного внутрима-точного введения динопена коровам показало, что норфлоксацин и ди-оксидин содержатся в пробах биоматериала до 48 часов.

Таблица 3

Содержание диоксидина и норфлоксацина в биологических жидкостях

коров после однократного применения динопена

Время Диоксидин, Норфлоксацин

исследования, мкг/мл мкг/мл

час молоко кровь моча молоко кровь моча

До введения 0 0 0 0 0 0

24 2,76±0,67 5,58±0,83 4,90±0,76 0,81 ±0,17 0,98±0,83 1,14±0,20

48 1,18±0,22 2,49±0,91 3,12±0,60 0,44±0,10 0,38±0,17 0,64 ±0,14

72 0 0 0 0 0 0

120 0 0 0 0 0 0

После трехкратного введения норфлоксацин и диоксидин обнаруживаются в молоке, крови и моче в течение 48 часов. Остатки диоксидина и норфлоксацина в биологических жидкостях на 3 сутки были ниже предела количественного анализа (табл. 4).

Таблица 4

Содержание диоксидина и норфлоксацина в биологических жидкостях

коров после трехкратного применения динопена

Время Диоксидин, Норфлоксацин

исследования, мкг/мл мкг/мл

час молоко кровь моча молоко кровь моча

До введения 0 0 0 0 0 0

24 3,07±0,82 6,90±1,22 4,78±1,04 2,12±0,51 2,91±0,60 3,46±0,42

48 1,06±0,28 0,74±0,32 1,36±0,35 0,87±0,21 0,25±0,09 0,96±0,18

72 <0,5 <0,5 <0,5 <0,035 <0,025 <0,025

120 0 0 0 0 0 0

Таким образом, применять молоко в пищевых целях можно через 3-е суток после последнего введения препарата. Убой животных может быть разрешен через 3-е суток после последнего введения препарата.

3.2. Эффективность динопена при лечении послеродового эндометрита

коров

При оценке терапевтической эффективности динопена при остром послеродовом эндометрите коров установлено, что динопен проявляет высокую терапевтическую эффективность. Эффективность применения динопена для лечения коров, больных послеродовым эндометритом составила 90,9%, что в среднем на 15,9% выше, чем в результате применения препарата энроцид (контрольная группа). Клиническое выздоровление коров опытной группы констатировали после 3,0±0,2 введений динопена, а в контрольной группе после 3,9±0,3. Продолжительность лечения животных опытной группы была короче, чем коров контрольной группы на 2,5 дня. При этом в последующем, из числа выздоровевших животных, оплодотворились в опытной группе 86,4% и в контрольной группе 70,0%.

Индекс оплодотворения у коров опытной группы среднем равнялся 1,7±0,1 , тогда как в контрольной группе он составил 2,2±0,2. Период от отела до оплодотворения, в среднем на одно животное, в опытной группе составил 63,1±4,5 , что по сравнению с коровами контрольной группы было меньше на 23,6 дня.

Таблица 5

Эффективность препарата динопен при лечении послеродового

эндометрита у коров

Показатели Группа животных

Энроцид Динопен

Количество животных, гол 20 22

Выздоровело, гол 15 20

% 75,0 90,9

Осталось больными, гол. 5 2

% 25,0 9,1

Срок выздоровления, дни 12,9±1,20 10,4±1,40

Количество введений препарата 3,90±0,3 3,00±0,2

Период от отела до оплодотворения, дни 86,7±7,1 63,1±4,5

Оплодотворилось, % 70,0 86,4

Индекс оплодотворения 2,20±0,2 1,81 ±0,2

В процессе выздоровления коров, в опытной группе животных, которым вводили динопен, с момента начала лечения, на 12 день, в крови повысилось содержание гемоглобина на 11,7% (Р<0,02), эритроцитов - на 10,0%, глюкозы - на 20,1% (Р<0,05), а в сыворотке - содержание общего белка на 10,2% (Р<0,05), мочевины - на 19,6%, общих липидов - на 23,3%, кальция - на 10,3% (Р<0,05), витамина А - на 19,9% (Р<0,05), витамина Е -на 18,6% и каротина - на 32,3%. В то же время в крови уменьшилось количество лейкоцитов на 24,5%, а в сыворотке — активность щелочной фос-фатазы - на 33,0%, АсАТ и АлАТ - соответственно на 22,8 (Р<0,01) и 8,2%.

3.3. Применения динопена при профилактике послеродового эндометрита коров

Эффективность применения динопена для профилактики острого послеродового эндометрита у коров (табл. 6), составила после самопроизвольного отделения последа 91,7% и после оперативного отделения последа 81,8%, что в среднем соответственно на 8,4% и 21,8% выше, чем после применения йодопена. В течение 90 дней после отела, оплодотворение у животных после внутриматочного введения динопена наступило у 87,0%, что на 14,3% больше, чем у коров после введения йодопена. При этом период от отела до оплодотворения у животных получавших препарат динопен оказался короче на 13,5 дня, чем у коров получавших йодопен.

Проведенные испытания свидетельствуют о высокой эффективности применения динопена для профилактики острого послеродового эндометрита у коров.

Таблица 6

Эффективность применения динопена для профилактики послеродового

эндометрита коров

Группа животных

Показатели динопен йодопен

СОП ООП СОП ООП

Количество животных, гол. 12 11 12 10

Заболело послеродовым эндометритом: гол. % 1 8,3 2 18,2 2 16,7 4 40,0

Оплодотворилось, % 87,0 72,7

Период от отела до оплодотворения, дней 51,9±4,1 65,4±4,4

Индекс оплодотворения

1,7±0,1

2,0±0,2

Профилактическая

эффективность, гол.

%

11

91,7

9 81,8

10

83,3

6 60,0

Примечание - СОП - самопроизвольное отделение последа, ООП - оперативное отделение последа

3.4. Экономическая эффективность динопена при терапии и профилактики острого послеродового эндометрита у коров

Проведенные расчеты экономической эффективности профилактических и лечебных мероприятий при остром послеродовом эндометрите с использованием динопена указывают на обоснованность его применения с экономической точки зрения. Экономический эффект на 1 корову при профилактике динопеном составляет 648,4 руб., экономический эффект на 1 рубль затрат - 14,17 руб. Экономический эффект при лечении динопеном на 1 корову составляет 958,2 руб., экономический эффект на 1 рубль затрат -5,1 руб.

4. ВЫВОДЫ

1.Динопен - антибактериальный препарат для профилактики и лечения послеродового эндометрита коров, обладает широким спектром действия в отношении эшерихий, стрептококков и стафилококков. Активность препарата в отношении как музейных, так и полевых штаммов эшерихий составляет - 0,19-3,12 мкг/мл. Бактериостатическая концентрация для кокковой микрофлоры составляет - 3,12-6,25 мкг/мл. Бактерицидная концентрация динопена превышает бактериостатическую в отношении изученных культур в 2 раза.

2. 1^50 динопена при однократном внутрижелудочном введении для белых мышей составляет 53428,4 мг/кг, для белых крыс - 54048,7 мг/кг массы тела. При однократном парентеральном (подкожном) введении ЬЭзо для белых мышей составляет 18575,3 мг/кг, для белых крыс - 19357,2 мг/кг массы тела. Выраженной видовой и половой чувствительности к препарату не выявлено. По показателям острой токсичности динопен относится к малоопасным веществам - 4 класс опасности по ГОСТ 12.01.007-76.

3. Препарат не оказывает существенного влияния на поведение и общее состояние, интенсивность роста и вегетативные функции животных. Препарат не обладает кумулятивными, аллергизирующими, раздражающими (слизистая глаз, кожа) и кожно-резорбтивными свойствами.

4. Многократное подкожное введение динопена белым крысам в дозах 385,0 (1/50 ЛД50); 967,0 (1/20 ЛД50) и 1933,0 (1/10 ЛД50) мг/кг в течении 21 дня не вызывает функциональных изменений в организме животных. Применение динопена существенно не влияет на биохимические показатели крови, характеризующие состояние внутренних органов, не вызывает изменения метаболических процессов в печени и нарушения ее обезвреживающей функции.

5. После однократного внутриматочного применения динопена коровам норфлоксацин и диоксидин не обнаруживается в пробах крови, молока и мочи через 72 часа после введения. После трехкратного введения норфлоксацин и диоксидин не обнаруживаются в молоке, крови и моче -на 3 сутки. Использовать молоко в пищевых целях и проводить убой животных можно через 3-е суток после последнего введения препарата.

6. Однократное внутриматочное применение динопена коровам через 6-8 часов после самопроизвольного отделения последа или сразу после оперативного его отделения предупреждает развитие эндометрита соответственно у 91,7% и 81,8% (в среднем у 86,8%) животных. Заболеваемость коров послеродовым эндометритом после применения динопена ниже, чем при назначении йодопена в 2 раза. Кратность применения динопена в 1,3 раза ниже, чем энроцида при лечении острого послеродового эндометрита.

7. Эффективность лечения коров, больных острым послеродовым эндометритом с использованием динопена составляет 90,9%, что в среднем на 15,9% выше, чем при лечении животных энроцидом. По сравнению с энроцидом при использовании динопена уменьшается срок выздоровления на 18,2%, на 19,4% - коэффициент оплодотворения и на 16,4% - повышается оплодотворяемость животных.

8. Экономическая эффективность применения динопена при профилактике послеродового эндометрита составляет - 648,4 руб. на 1 корову, а экономический эффект - 14,17 руб. на 1 рубль затрат. При лечении послеродового эндометрита динопеном - 958,2 руб. на 1 корову, а экономический эффект - 5,1 руб. на 1 рубль затрат.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1.Для профилактики послеродового эндометрита коров в случаях широкого распространения данной патологии в хозяйстве вводить динопен внутриматочно однократно в дозе 12 г / 100 кг массы тела сразу после оперативного отделения последа или через 6-12 часов после нормальных родов.

2. Для лечения послеродового эндометрита коров динопен вводить внутриматочно двух-, трехкратно в дозе 10 г / 100 кг массы тела с 24-часовым интервалом.

6. Список работ опубликованных по теме диссертации

1. Мисайлов В.Д. Препарат ДН-1 - средство профилактики и терапии послеродовых болезней свиноматок / В.Д. Мисайлов, В.Н. Коцарев, В.Ю. Боев, Г.А. Востроилова, JI.B. Пестовникова // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Матер.междунар. науч.- практ. конф. - Воронеж, 2008. - С. 327-331.

2. Пестовникова JI.B. Параметры токсичности препарата ДН-1 / JI.B. Пестовникова // Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных: Матер, междунар. науч.- практ. конф., посвящ. 100-летию со дня рождения проф. В.А. Акатова. - Воронеж, 2009.-С. 418-421.

*3. Востроилова Г.А. Фармако-токсикологическая характеристика пенного аэрозольного препарата динопен / Г.А. Востроилова, JI.B. Рас-триженкова, J1.B. Ческидова//Ветеринарный врач. - 2009. -№5 - С.13-14.

4. Методические рекомендации по диагностике, профилактике и терапии гестоза у молочных коров и свиноматок / А.Г. Нежданов, C.B. Шабунин, В.Д. Мисайлов, В.Н. Коцарев, Ю.Н. Алехин, М.И. Рецкий, В.И. Михалев, С.М. Сулейманов, Г.Н. Близнецова, В.А. Сафонов, Т.П. Брехов, H.A. Горохов, Е.В. Шишкина, Д.А. Ерин, C.B. Чупрын, JI.B. Растриженко-ва, В.Ю. Боев. - Воронеж, 2009. - 30 с.

5. Шабунин C.B. Влияние препарата динопен на гематологические показатели крови крыс в хроническом опыте / C.B. Шабунин, JI.B. Рас-триженкова // Инновационные подходы в профилактике, диагностике и лечении зооантропонозных и метаболических болезней животных и человека в Саратовской области: Матер, рабочего совещания. - Саратов, 2009. - С. 78-79.

Подписано в печать 23.11.2009г. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать цифровая Объем 1,25 п.л. Заказ № 3900.

Отпечатано с готового оригинал-макета

в ООО «Цифровая полиграфия» 394036, г. Воронеж, ул. Ф.Энгельса, д. 52 Тел.: (4732) 61-03-61, e-mail: zakaz@print36.ru

Актуальность темы. Ветеринарная наука и практика уделяют большое внимания вопросам профилактики и лечения акушерско-гинекологических заболеваний, которые по данным ветеринарной статистики наносят значительный экономический ущерб ведению животноводства. Эти заболевания проявляются у животных бесплодием, снижением молочной продуктивности животных, преждевременной их выбраковкой, значительными затратами на кормление, содержание, многократное безрезультатное осеменение и лечение бесплодных коров, а также снижением качества продуктов питания (А.Г. Нежданов, с соавт., 2005; С.В. Шабунин с соавт., 2005.). Одним из таких заболеваний является острый послеродовой эндометрит, который у крупного рогатого скота регистрируется во всех регионах страны и последние годы наметилась тенденция к его более широкому распространению (О. В. Распутина, 2007).

Степень распространения послеродового эндометрита у коров колеблется от 5,0 - 20,0% (Р.Г. Кузьмич, 2000; В.М. Бреславец, 2001), до 20,0 -57,0% (В.А. Напримеров, 2004; В.И. Михалев с соавт., 2005).

Для лечения коров, больных острым послеродовым эндометритом, используются разнообразные средства и методы патогенетической, общести-мулирующей, этиотропной и симптоматической терапии, а также методы физиотерапевтического воздействия.

В качестве средств этиотропной терапии, направленной на подавление патогенной микрофлоры в матке и организме животных в целом, используют нитрофурановые, сульфаниламидные и антибиотические препараты в различных сочетаниях. Однако эффективность многих антибиотиков, как и других антибактериальных препаратов, резко снижается из-за широкого распространения антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов.

Поэтому разработка новых эффективных антибактериальных препаратов для лечения и профилактики острого послеродового эндометрита у коров является важной актуальной задачей ветеринарной науки и практики.

Одной из перспективных групп антибактериальных препаратов в настоящее время является группа фторхинолонов, обладающая широчайшим спектром антимикробного действия в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, сравнительно низкой токсичностью и практически полным отсутствием резистентности к ним у микроорганизмов (Н.И. Фадеева и др., 1993; Е.Н. Падейская, В.П. Яковлев, 1998; С.В. Яковлев, 2007).

Исходя из этих данных, был разработан пенный антибактериальный препарат для профилактики и лечения послеродового эндометрита коров -динопен, активнодействующими веществами которого являются: норфлокса-цин (фторхинолон II поколения) и диоксидин (препарат хиноксалинового ряда).

Цели и задачи исследования. Целью исследования являлась разработка, фармакотоксикологическая оценка и внедрение в практику ветеринарии препарата динопен для лечения послеродового эндометрита у коров.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить фармакотоксикологические свойства динопена;

2. Определить влияние динопена на гематологические и биохими- чес-кие показатели коров и сроки выведения активнодействующих веществ препарата из организма животных;

3. Оценить профилактическую и лечебную эффективность динопена при послеродовом эндометрите коров;

4.Определить экономическую эффективность применения динопена при профилактики и лечении послеродового эндометрита коров.

Научная новизна. Впервые изучены фармако-токсикологические свойства нового пенного антибактериального препарата динопен, влияние его на клинико-биохимические показатели животных. Установлены пути и сроки выведения препарата из организма коров, определены лечебная и профилактическая эффективность его при послеродовом эндометрите коров, а так же экономическая эффективность применения препарата.

Практическая значимость. В практику ветеринарии предложен, для профилактики и лечения послеродового эндометрита коров, новый пенный высокоэффективный антибактериальный препарат.

Данные исследований включены в нормативную документацию и инструкцию по применению динопена.

Апробация результатов исследований. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» (Воронеж, 2008), Международной научно-практической конференции «Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных», посвящ. 100-летию со дня рождения проф. В.А. Акатова (Воронеж, 2009), Международном рабочем совещании «Инновационные подходы в профилактике, диагностике и лечении зооантропонозных и метаболических болезней животных и человека» (Саратов, 2009).

Публикации. Основные научные результаты, включенные в диссертацию, опубликованы в 5 печатных работах, в том числе 1 статья в журнале «Ветеринарный врач», рекомендованном ВАК Минобразования РФ, 1 методических рекомендациях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста, иллюстрирована 46 таблицами и 7 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений. Список литературы состоит из 202 источников, из которых 32 иностранных.

6. ВЫВОДЫ

1. Динопен - антибактериальный препарат для профилактики и лечения послеродового эндометрита коров, обладает широким спектром действия в отношении эшерихий, стрептококков и стафилококков. Активность препарата в отношении, как музейных, так и полевых штаммов эшерихий составляет -0,19-3,12 мкг/мл. Бактериостатическая концентрация для кокковой микрофлоры составляет - 3,12-6,25 мкг/мл. Бактерицидная концентрация динопена превышает бактериостатическую в отношении изученных культур в 2 раза.

2. LD50 динопена при однократном внутрижелудочном введении для белых мышей составляет 53428,4 мг/кг, для белых крыс - 54048,7 мг/кг массы тела. При однократном парентеральном (подкожном) введении LD50 для белых мышей составляет 18575,3 мг/кг, для белых крыс - 19357,2 мг/кг массы тела. Выраженной видовой и половой чувствительности к препарату не выявлено. По показателям острой токсичности динопен относится к малоопасным веществам - 4 класс опасности по ГОСТ 12.01007-76.

3. Препарат не оказывает существенного влияния на поведение и общее состояние, интенсивность роста и вегетативные функции животных. Препарат не обладает кумулятивными, аллергизирующими, раздражающими (слизистая глаз, кожа) и кожно-резорбтивными свойствами.

4. Многократное подкожное введение динопена белым крысам в дозах 385,0 мг/кг (1/50 LD50), 967,0 мг/кг (1/20 LD50) И 1933,0 МГ/КГ (1/10 LD50) в течении 21 дня не вызывает функциональных изменений в организме животных. Применение динопена существенно не влияет на биохимические показатели крови, характеризующие состояние внутренних органов, не вызывает изменения метаболических процессов в печени и нарушения ее обезвреживающей функции.

5. После однократного внутриматочного применения динопена коровам норфлоксацин и диоксидин не обнаруживаются в пробах крови, молока и мочи через 72 часа после введения. После трехкратного введения норфлоксацин и диоксидин не обнаруживаются в молоке, крови и моче - на 3 сутки.

Использовать молоко в пищевых целях и проводить убой животных можно через 3-е суток после последнего введения препарата.

6. Однократное внутриматочное применение динопена коровам через 6-8 часов после самопроизвольного отделения последа или сразу после оперативного его отделения предупреждает развитие эндометрита соответственно у 91,7% и 81,8% (в среднем у 86,8%) животных. Заболеваемость коров послеродовым эндометритом после применения динопена ниже, чем при назначении йодопена в 2 раза.

7. Эффективность лечения коров больных острым послеродовым эндометритом с использованием динопена составляет 90,9%, что в среднем на 15,9% выше, чем при лечении животных энроцидом. По сравнению с энро-цидом при использовании динопена уменьшается срок выздоровления на 18,2%, на 19,4% - коэффициент оплодотворения и на 16,4% - повышается оп-лодотворяемость животных. Кратность применения динопена в 1,3 раза ниже, чем энроцида при лечении острого послеродового эндометрита.

8. Экономическая эффективность применения динопена при профилактике послеродового эндометрита составляет - 648,4 руб. на 1 корову, а экономический эффект - 14,17 руб. на 1 рубль затрат. При лечении послеродового эндометрита динопеном - 958,2руб. на 1 корову, а экономический эффект - 5,1 руб. на 1 рубль затрат.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1.Для профилактики послеродового эндометрита коров в случаях широкого распространения данной патологии в хозяйстве вводить динопен внутриматочно однократно в дозе 12 г / 100 кг массы тела сразу после оперативного отделения последа или через 6-12 часов после нормальных.

2. Для лечения послеродового эндометрита коров динопен вводить внутриматочно двух-, трехкратно в дозе 10 г / 100 кг массы тела с 24-часовым интервалом.