Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.01) на тему:Этиологические факторы, профилактика и терапия диарей телят и поросят в Краснодарском крае

На правах рукописи

Шпонько Юрий Борисович

ЭТИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ, ПРОФИЛАКТИКА И ТЕРАПИЯ ДИАРЕЙ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ

16 00 01 - диагностика болезней и терапия животных 16 00 03 - ветеринарная микробиология, эпизоотология, вирусология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Воронеж - 2007

003071112

Работа выполнена в Краснодарском научно-исследовательском ветеринарном институте Россельхозакадемии

Научные руководители доктор ветеринарных наук,

Басова Натальи Юрьевна кандидат ветеринарных наук Кощенко Наталья Владимировна

Официальные оппоненты

доктор ветеринарных наук, доцент Никулин Иван Алексеевич кандидат ветеринарных наук Лебедев Максим Игоревич

Ведущая организация Северо-Кавказский зональный

научно-исследовательский ветеринарный институт

Защита состоится 2007 г в часов на засе-

дании диссертационного совета Д 006 004 01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии (394087, г Воронеж, ул Ломоносова, 114-6)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИВИПФиТ Автореферат разослан «й^» 200Т^г

Ученый секретарь диссертационного совета

Ермакова Т И

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы Одной из актуальнейших проблем современного животноводства является сохранность молодняка сельскохозяйственных животных Гибель новорожденных происходит главным образом вследствие болезней желудочно-кишечного гракта, а колибактериоз (эшерихиоз) занимает значительное место среди заболеваний данной группы (Полоцкий Ю Е, Бондаренко В М, 1986, Ургуев К Р, Нажалов М Н , 1998, Сидоров М А, Субботин В В , 1999) Несмотря на более чем вековой промежуток времени со дня открытия этиологической роли кишечной палочки в развитии диарей у новорожденных животных и внедрения массовых вакцинаций, эшерихиоз телят и поросят по-прежнему остается одной из наиболее острых проблем в ветеринарии Наличие у Е coli ряда биологических свойств и, прежде всего, большого набора серологических вариантов, факторов адгезии и колонизации, способности гоксинообразования, инвазивной активности, устойчивости к различным антибактериальным препаратам обеспечивает этому микроорганизму широкое распространение и циркуляцию в организме животных и во внешней среде (Коляков Я Е , 1974, Урбан В Г1, Наиманов И JI, 1984, Зароза В Г, 1991) Именно эти обстоятельства являются основной причиной недостаточно высокой эффективности коммерческих вакцин и традиционно осуществляемой этиотрошюй терапии

Поэтому, изучение биологических свойств, факторов патогеиности и выяснения этиологии и распространения колибактериоза телят и поросят на территории Краснодарского края, а также совершенствование экспресс-методов лабораторной диагностики токсинообразования и других факторов патогеиности у Е coli является вопросом злободневным, решение которого позволит рекомендовать практике более эффективные средства и меры борьбы и профилактики кишечных инфекций

Цель и задачи исследований. Основной целью работы было изучение распространения диареи телят и поросят, биологических свойств и факторов патогеиности Е coli, циркулирующих на фермах Краснодарскою края, а также изыскание средств специфической терапии, профилактики и методов лабораторной диагностики Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи

- изучить распространение и этиологическую структуру желудочно-кишечных болезней телят и поросят в хозяйствах края

- изучить биологические свойства и факторы патогеиности изолятов Е coli, выделенных от телят и поросят

- разработать альтернативные методы индикации токсинообразования у Е coli с помощью биотестирования токсигенности Е coli и реакции коагглютинации (РКА на планшетах)

- изучить возможность применения модифицированной сорбитоло-вой среды для дифференциации Е coli 0157

- разработать комплексную этиотропную и патогенетическую профилактику и терапию при желудочно-кишечных заболеваниях телят и поросят на территории Краснодарского края

Научная новизна. Изучены распространение, этиологическая структура желудочно-кишечных болезней телят и поросят на фермах Краснодарского края биологические свойства и факторы патогенности Е coli, выделенных от молодняка сельскохозяйственных животных Впервые для установления токсигенных свойств Е coli использовали инфузории стилонихии и реакцию коагглютинации (РКА на планшетах) Для дифференциации Е coli 0157 разработана и использована модифицированная сорбитоловая среда Разработана комплексная система профилактики и лечения эшерихиозов молодняка сельскохозяйственных животных с использованием имунофана, кормовой добавки «Гидрогемола» и гипериммунной антитоксической сыворотки и инактивированных антигенов из местных штаммов бактерий, полученных с учетом факторов патогенности Е coli

Практическая значимость. Установлено распространение диареи телят и поросят на территории Краснодарского края и этиологическая структура возбудителей, изучены некоторые механизмы развития коли-бактериоза с учетом биологических свойств и факторов патогенности, встречающихся штаммов Е coli Разработан, испытан и предложен практике метод индикации токсинообразования у Е coli (биотестирование на стилонихиях) На способ изучения токсигенности кишечной палочки получен патент РФ № 2262529 от 20 октября 2005 года Для выявления образования шигатоксинов применена реакция коагглютинации (РКА на. планшетах) Для ускоренной дифференциации патогенных Е coli 0157 предложена модифицированная сорбитоловая среда На способ пршотовлсния питательной среды для выявления кишечной палочки серотипа 0157 получен патент РФ № 2273661 oí 10 апреля 2006 года Разработана комплексная высокоэффективная система профилактики и лечения колибактериоза телят и поросят с учетом серологического профиля и токсигенности возбудителей, циркулирующих на территории Краснодарского края

Апробация работы Основные материалы диссертационной работы доложены и получили одобрение на Ученом совете Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института, научной конференции, посвященной 80-летию Кубанского государственного аграрного университета (Краснодар, 2002 г), совещаниях зооветспециалистов Ти-машевского, Каневского, Ейского и других районов Краснодарского края

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 7 научных работ

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- распространение и этиологическая структура диареи телят и поросят в хозяйствах Краснодарского края

- биологические свойства и факторы патогенности шолятов Е coli, выделенных от телят и поросят на территории Краснодарскою края

- метод индикации токсинообразования у Е coli с помощью биотестирования (инфузории-стилонихии) тогссигепности Е coli, применение реакции коагглтотинации (РКА на планшетах) и полимеразно-цепной реакции для обнаружения образования шшатоксинов у Е coli и модифицированная сорбитоловая среда для ускоренной дифференциации Е coli 0157

- комплексная этиотропная и патогенетическая профилактика и терапия при диареях телят и поросят

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 160 страницах машинописною текста, иллюстрирована 36 таблицами и 12 рисунками Состоит из введения, обзора литерагуры, материалов и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений Список литературы содержит 163 источника, из которых 72 иностранных

2. Собственные исследования

2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в соответствии с государственным планом научных исследований по заданию 06 02 01 , утвержденному Российской Академией сельскохозяйственных наук на 2000-2005 годы в лабораториях микологии, микробиологии Краснодарского НИВИ

При выполнении диссертационной работы проведено 10 научно-производственных опытов, при этом использовано 685 белых крыс, 745 белых мышей, 2140 телят, 2474 поросят, 10 лошадей Проведено 1250 бактериологических, 1180 серологических, 860 токсико-биологических, 2540 пагологоанатомических исследований проб из различных хозяйств края

Распространение острых кишечных заболеваний у молодняка крупного крупного рогатого скота и свиней в хозяйствах Краснодарского края изучали путем анализа данных краевой ветеринарной отчетности и собственных исследований за 5 лет Бактериологические исследования проводили общепринятыми методами, согласно «Методическим указаниям по диагностике колибактериоза животных и птицы (1991)» и «Методическим указаниям по диашостике смешанной кишечной инфекции, (1991)» с использованием коммерческих сред и тест-систем СИБ, ПБДЭ, ММТП 1 И 2, производства Нижегородского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии и НПО «Аллерген» (г Ставрополь)

Выделенные культуры идентифицировали на основании данных официальных справочников Патогенность изолированных от телят и поросят полевых штаммов Е coli и других бактерий устанавливали при внут-рибрюшинном заражении белых мышей взвесью суточных агаровых культур

Чувствительность бактерий к антибиотикам и химиопрепаратам определяли, используя метод диффузии в агар (луночковыи метод), где оценку чувствительности осуществляли но диаметру зоны задержки роста тест-культуры, и количественный метод серииных разведений в жидкой питательной среде, где чувствительность к препарату оценивали по показателю минимальной подавляющей концентрации, выраженной в мкг/мл

Серотипизицию по О-антигену полевых штаммов Е coli проводили с помощью набора коли-сывороток производства Армавирской биофабрики, а по пилевым антигенам с помощью адгезивных коли-сывороток производства ВНИИ прикладной микробиологии (г Оболенск)

Изучение колициногенной активности Е coli проводили следующим образом чистую культуру с косячка пересевали на чашку Петри с мясо-пептонным агаром (МПА) После инкубации в термостате при t-37 "С в течение 24 часов, выросшие колонии обрабатывали паром хлороформа (15-20сек) и заливали слоем 0,7 мм МПА, смешанного с 0,1 мл взвеси суточной культуры индикаторного штамма Escherichia coli К-12 При наличии в образцах колициногенных колоний эшерихии вокруг них формировались зоны задержки роста на фоне сплошного газона индикаторной культуры Обнаружение фимбрий проводили смешиванием на предметном стекле равных объемов (по одной капле) 0,85%-ного раствора NaCl, взвеси эритроцитов и суспензии испытуемых клеток Е coli Параллельно ставили реакцию с аналогичными компонентами, но вместо 0,85%-ного раствора NaCl использовали 1,5-2%-ный раствор D-маннозы На основании РГА адгезины классифицировали на 2 разновидности (фимбрии 1 типа, общие или неспецифические адгезины и фимбрии 2 типа или специфические адгезины) Для выявления реакцией гемагглю-тинации фимбрий 1-го типа и Их дифференциации от специфических адгезинов использовали эритроциты барана и кролика

Для выявления шигатоксинов Е coli применяли реакцию коагглюти-нации (РКА на планшетах) При этом использовали фосфатно-солевой буфер (ФСБ), бульонная культура Ь coli 174 (9) - продуцирующая VT-1, VT-2, LT, CNF, b-гемолизин, Е coli 0157, Е coli 546 (16) продуцирующая VT-2, LT, в качестве кошроля (К) - 1%-ную взвесь стафилококка для реакции коагглклинации РКА и диагностикум (Д) -1% -антишигатокси-ческий (произведен в ГИСК им Л А Тарасевича для лабораторных испытаний)

Для индикации энтерогеморрагической Е coli 0157 были модифи-

цированы имеющиеся среды Эндо с сорбитом, разработанная и выпускаемая государственным научным центром прикладной микробиологии, г Оболенск, агар Мак-Конки с сорбитом (SMAC-arap), выпускаемый фирмой Sifin (Германия)

При определении токсш снности Е coli был применен способ биотестирования токсичности с помощью инфузорий по Д О Виноходову, (1995) В нашем случае смешивали питательные среды, содержащие суточные культуры инфузорий (стилонихни) и фильтраты кишечной палочки различных сроков инкубации

При получении поливалентной гипериммунной сыворотки для лечения телят и поросят использовали лошадей-доноров В качестве бактериального антигена для индукции процесса антителообразования у лошадей-доноров использованы инактивированные формалином культуры Ь coli, выделенные от телят и поросят в острой стадии болезни Бактериальный антшен вводили в нарастающих дозах 5-10-15-20-25-30-35-40 мл с интервалом 5 дней Для активации гуморального ответа применяли иммуностимулятор - имунофан в дозе 4 мл на животное Через 14 дней после последнего введения антигенов у живенных из яремной вены, соблюдая правила асептики и антисептики, брали кровь в количестве 1% от живой массы Сыворотку готовили по общепринятым методикам Полученную сыворотку консервировали 5% раствором фенола до 0,5% конечной концентрации У полученной сыворотки проверяли титры антител к Е coli в реакции агглютинации (РА), стерильность и безвредность Превентивную активность полученной сыворотки определяли на беспородных белых мышах, согласно «Методическим указаниям по биохимическим и иммунологическим методам использования клеток их компонентов и других биолен ических субстратов», М 1980 Для изучения профилактического действия имунофана, КД «полученной гипериммунной сыворотки поставили серию опытов на новорожденных телятах <29-32 кг) и поросятах (1,8-1,9 кг) По принципу аналогов было сформировано 2 группы телят по 150 голов и поросят по 250 голов Животным опытных групп вводили исследуемую гипериммупную сыворотку против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных внутримышечно в дозе 1 мл на 1 ы веса Телятам и поросятам контрольной группы поливалентную сыворотку против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных (Армавирская биофабрика), согласно наставлению Для изучения терапевтической эффективности полученную сыворотку животным опытных групп вводили внутримышечно в дозе 2 мл на 1 кг массы тела В качестве контроля использовали поливалентную сыворотку против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных (Армавирская биофабрика), согласно наставлению, в лечебных дозах и антибактериальные препараты, используемые в хозяйстве после определения чувствительности к ним выделенной

микрофлоры В опыте было использовано 30 телят и 100, поросят больных эшерихиозом

Математическую и биометрическую обработку полученных цифровых данных исследований проводили с помощью программы Microsoft Exsel 2000 на компьютере с процессором Pentium 4, степень достоверности «Р» устанавливали по распределению Стьюдента

3. Результаты исследований

3.1. Распространение эшерихноза телят и поросят на фермах Краснодарского края

Проведенный анализ статистической отчетности краевого управления ветеринарии показал, что на фермах Кубани за шесть лег (19992004гг) было получено 1634,2 тыс телят и 10058,9 тыс поросят, из которых колибактериозоч заболело 11369 телят и 39581 поросят, летальность при данном заболевании составила у телят 2711 (23,8%) голов, у поросят 11485 (29,0%) Это значит, что из числа заболевших колибакте-риозом погибал каждый четвертый теленок и третий поросенок

Острые кишечные заболевания, как телят, так и поросят продолжают диагностироваться как диспепсия, то есть заболевание неинфекционного характера Анализ данных Краснодарской межобластной ветеринарной лаборатории и районных лабораторий края за 1999-2004 гг, указывает на высокий процент поражения эшерихиозом молодняка телят и поросят в хозяйствах края Из общего количества исследованного за шесть лет пат материала от крупного рогатого скота количество положительных результатов по годам исследования в среднем составило 48,4%, от свиней -44,8% соответственно Больше половины всех положительных результатов от поступившего на исследование патматериала по сравнения с другими инфекционными заболеваниями у телят (до 67,2 %) и поросят (до 56,0 %) приходится на колибактериоз

Анализ полученных данных свидетельствует, что заболевание широко распространено в хозяйствах Краснодарского края и является одной из причин гибели телят и поросят в период новорожденное™ Сложившаяся ситуация обусловлена тем, что специалисты хозяйств не уделяют должного внимания диагностике, профилактике и лечению диареиных заболеваний

3.2 Биологические свойства и факторы патогенности изолятов Е. coli, выделенных от телят и поросят на территории Краснодарского края 3.2.1. Серотиповои профиль изолягов Е. coli, выделенных от телят н поросят

Из числа установленных нами полевых штаммов, наиболее часто у телят встречаются эшерихии с поверхностным антигеном 015(10,93%), 09(8,64%), 020(7,92%), 078(7,31%), 08(5,70%), 018(5,47%), 026(4,91%)

и 02(4,27%) У поросят чаще выделяются этерихии с поверхностным антигеном 026(8,87%), 08(8,12%), 0103(6,31%), 0138(5,81%), 0101(5,26%), 015(4,78%), 018(4,17%) и 02(4,17%) Изучение серотипо-вого профиля и факторов патогенности у сероваров Е coli, выделенных от новорожденных телят и поросят при диареях показал, что в этиологии заболевания участвуют разнообразные по соматическому О-антиге-ну эшерихии Полученные данные позволяют обьяснить в целом низкую эффективность в хозяйствах Краснодарского края таких вакцин как Коли-Вак, которую выпускают в двух вариантах первый вариант вакцины содержит эшерихии серогрупп 06, 09, 0138, 0139, 076, 0141, 0147, 0149 или эшерихии тех же серогрупп, обогащенные адгезивным антигеном К88 (Коли-Вак К88), для профилактики колибактериоза поросят, второй вариант вакцины содержит эшерихии серогрупп 06, 09, 015, 020, 026, 041, 055, 056, 076, 0101, 0115, 0117, 0119 или эшерихии тех же серогрупп, обогащенные адгезивным антигеном К99 (Коли-Вак К99), для профилактики колибактериоза телят и ягнят При сравнении антигенной структуры используемых вакцин с антигенной структурой возбудителен эшерихиоза было установлено, что в хозяйствах края Е coli серогрупп 09, 0139, 076, 0141, 0147, 0149 у поросят встречается в 0,7-3,38% случаев, Е coli серогрупп 041, 055, 056, 076, 0101, 0115, 0117, 0119 у телят выделяется в 1,67 - 2,85 % То есть, идет несовпадение структуры заболевания по серотиповому составу с вакциной Коли-Вак на 50-60% у поросят, и 30-40 % у телят

3 2.2 Адгезивная и колициногениая активность изолятов Е. coli, циркулирующих на фермах Краснодарского края

По данным авторов В Г Зароза, 1991, В А Бурлаков, 2002, М М Levme, 1984, W Н Ewing, 1986 и др , патогенные Е coli обладают факторами патогенности, одними из которых являются колицииогенная и адгезивная активность С помощью антигенов адгезии энтеротоксиген-ные штаммы Е coli прикрепляются к эпителиальным клеткам кишечника, что позволяет им реализовать свои энтеропаюгепные свойства, а с помощью колицинов - выживать в микробном сообществе, вытесняя неколициногенные штаммы

Обнаружение адгезинов (фимбрий) и установление их типов у эшерихии выделенных от поросят и телят на территории Краснодарского края проводили с помощью мапозонезависимой реакции гемагпнотина-ции (РГА) Нами было протестировано 98 полевых штаммов Е coli, при этом установлено, ч го у 56 (57,1%) из них имелись фимбрии, а у остального количества 42 (43%) они отсутствовали У адгезинпозитивных сероваров в 42 (75%) случаев фимбрии были представлены 1 (общим) типом, и в 14 (25%)- 2 (специфическим) типом Из 98 изученных полевых штаммов Е coli, у 32 (32,7%) обнаружены колициногениая актив-

ность, а у 66 (67,3%) она отсутствовала Было установлено, что все серовары, продуцирующие колицины, либо имели фимбрии 1 типа 18 (56,3%), либо их вообще не имели 14(43,7%) Ни у одного полевого штамма Е coli, обладающего специфическими адгезинами, не обнаружена колициногенная активность, что позволяет предположить отсутствие способности их продуцирования эшерихиями с фимбриями 2 типа

Таким образом, у 57,1% полевых штаммов Е coli, выделенных из патологического материала от молодняка крупного рогатого скота и свиней обнаружена способность к выработке адгезинов и колицинов

По данным краевой ветлаборатории и результатам собственных исследований, за последние 5 лет установлена изменчивость состава адгезинов сероваров Е coli, выделенных от молодняка крупного рогатого скота и свиней Специфические адгезины у Е coli, выделенных от телят, чаще всего представлены А20 - 706 (42,1%), К99-341 (20,3%), К88-311 (18,5%), 987Р- 202 (12,0%) и реже всего F41-107 (6,4%) Специфические адгезины у Е coli, выделенных от поросят, чаще всего представлены К88 968 (46,4%), К99 487 (23,3%), А20 287 (13,8%), 987Р 245 (11,7%) и реже всего F41-91 (4,4%) То есть в настоящее время ведущая роль в развитии эшерихиоза у теля г принадлежит Е coli А20, а у поросят Е coli К88

3 2.3. Гемолитическая активность изолятов Е. coli

Одним из факторов пагогенности штаммов Е coli, является цитоток-сичность (гемолитическая активность) Гемолизины состоят из нолипеп-тидов и ЛПС (липопотисахариды), обладают способностью лизировать эритроциты, но окончательно их роль в развитии ОКЗ не выяснена Гемолитические свойства изолятов Е coli, выделенных от телят и поросят, обнаруживали - методом культивирования на кровяном агаре приготовленном четырьмя способами 1) добавлением нативной крови барана с 5% глюкозы, 2) добавлением отмытых эритроцитов крови барана, 3) нативной крови кролика с 5% шюкозы, 4) добавлением отмытых эритроцитов крови кролика В первом случае 2 мл дефибринированной крови барана добавляли к растопленному и остуженному до 45-50°С АГВ затем разливали в чашки Петри Во втором случае 2 мл дефебринирован-ной крови барана смешивали с буферинизированным физраствором и трехкратно центрифугировали (не более 1 ООО оборотов в мин ) В третьем и четвертом случаях вместо крови барана использовали кровь кролика Чаще гемолитической активностью обладали штаммы Е coli, выделенные от поросят, которые, в зависимости от способа приготовления кровяного aiapa, в 35,4% - 43,7% случаев давали на кровяном агаре b-гемолиз, в 2,08%) - 6,25% - а-гемолиз, а в 52,0% - 62,5 % случаев его не образовывали От телят выделялось меньше гемолитических форм Е coli, b-гсмолиз образовывали 19,0 %- 33,3 %, а-гемолиз 2,3% - 4,7% и 64,2 80,9 % штаммов были не гемолитическими При проведении опыта лучший результат был получен при использовании нативной крови бара-

на с 5% глюкозы, а также в случае добавления отмытых эритроцитов крови кролика (гемолиз четкий, не смазанный) При приготвлении кровяного агара вторым и третьим способом некоторые Е coli, обладающие b-гемолитическими свойствами, из-за смазанности нечеткости картины, были отнесены к a-i емолитическим Но, учитывая технологию приготовления кровяного агара обоими способами (первым и четвертым), а именно затраты времени и реактивов на отмывание эритроцитов, проще использовать нативную кровь барана с добавлением 5 % глюкозы

3.2 4. Чувствительность Е. coli к антибактериальным препаратам

Нами изучена чувствительность 183 изолятов эшерихии выделенных от телят и поросят в различных хозяйствах края к антибактериальным препаратам, представляющих собой различные группы фармакологических средств Из 31 испытанного препарата всего 17 (54,8%) средств были высокоактивны по отношению к Е coli выделенных от поросят (зона задержки pocia свыше 25 мм), от телят соответственно-19 (61,2%) средств, что свидетельствует об устойчивости, выделенных сероваров Е coli к ним

Не эффективными препаратами в отношении полевых штаммов Е coli оказались как у телят, так и попросят оксациллин 100% у обоих видов животных, метициллин - 100% и 95,6% соответственно, ампиокс 100% и 90,7% 42% штаммов Е coli не чувствительны и малочувствительны к 15 из 31 препаратов, 16% - к 10 антибактериальным препаратам, 16% к 5 антибактериальным препаратам, 6,4% - соответственно к 3 препаратам

Исследования антибиотикочувствительности у полевых штаммов эшерихий показало, что среди них имеется большое количество резистентных вариантов Это создает определенные трудности при проведении лечебных мероприятий при кишечных заболеваниях, вызванных Е Coli

3.3 Разработка алыернативиых методов индикации юксннообразования у £ coli

3.3.1. Применения реакции коагглютинации для выявления у Е.соН образования шигаюксинов

На следующем этапе нашей работы было изучение возможности применения реакции коагглютинации (РКА на планшетах) для индикации у Е coli, способности выделять шигатоксины в питательный бульон с учетом различных сроков культивирования, поскольку они являются одним из факторов пагогенности Е coli, также эти данные необходимы при создании средств специфической профилактике Методика разработана в ГИСК имени JI А Тарасевича и предоставлена нам для проведения испытаний Результаты испытания указывают, чго Е coli 174(9) продуцирует шигатоксины со второго дня культивирования и не прекращает в течение семи дней причем не уменьшая концентрации Наибольшие

титры достигают 1 16384 Е coli 0157 выделяет шигатоксины со второго дня максимума (титр 1 65536) достигает на 5 день культивирования, а затем снижает их продукцию Е coli 546 (16) продуцирует шигатоксины начиная с первого дня наибольшей величины достшает на второй день культивирования (титр 1 65536) и не снижает количества их продукции в течение шести дней

Полученные данные свидетельствуют о возможности использования реакции коагглютинации для обнаружения продуцирования шигатокси-нов токсигснными Е coli, а также определения сроков их максимального выделения

3 3 2. Применение модифицированной сорбитоловой среды для дифференциации Е. coli 0157

Для медицины и ветеринарии огромное значение имеет ускоренная индикация энгерогеморршической Е coli 0157 одной из биологических особенностей данной бактерии является неспособность ее, в отличие от других кишечных палочек усваивать сорбит В связи с чем, были разработаны и предложены питательные среды для лабораторной диагностики модифицированная среда Эндо с сорбитом, она же питательная среда для выделения и дифференциации 0157 Н7 сухая (еорбитол 0157 Н7 агар), разработанная и выпускаемая государственным научным центром прикладной микробиологии, города Оболенск, агар Мак-Конки с сорбигом (SMAC-arap), выпускаемый фирмой Sifin (Германия) Эти среды содержат в качестве углевода сорбит, а в качестве индикатора изменения pH среды- в первом случае - фуксин основной, во втором - нейтральный красный с фиолетовым красным Способы приготовления указанных сред явпяются сложными и для их приготовления необходимы дефицитные дорогостоящие компоненты, полученные среды чувствительны к свету и теплу и сами по себе могут изменять свои цвет, ввиду чего готовые среды рекомендуется использовать в день приготовления, бактерии со слабой ферментативной активностью могут быть ошибочно учтены как сорбит (-), так как для этих вариантов требуется более продолжительная инкубация в процессе которой изменяется цвет самой среды, кроме того, импортная среда в 3-4 раза дороже отечественной

Нами разработан метод приготовления сорбитоловой среды, соответствующий необходимым требованиям микробиологических исследований, что достигается тем, что в качестве питательной среды используется агар АГВ (панкреатический гидролизат кильки, натрия хлорид, крахмал, агар, динатрия фосфат), Выпускаемый НПО «Питательные среды» (г Махачкала), сорбит и индикатор, представляющий собой водный раствор кислого фуксина и бромтимолового синего Первоначально сухие ингридиенты среды разводятся в воде и доводятся до кипения, фильтруется, после чего устанавливается pH 7,0-7,4, вводится индикатор, затем готовая среда разливается по флаконам и автоклавируется при 0,5 атм ,

в течение 20 минут Расплавленную и охлажденную до 45-50 °С срсду разливают в чашки Петри Индикатор готовится по прописи, 0,5 г Кислого фуксина растворяется в 16 мл 1%-ного раствора гидроксида натрия, к полученному раствору добавляют 84 мл дистиллированной воды и 0,4 бромтимолового синего Количественные значения ввода в среду сорбита, кислого фуксина и бромтимолового синего подобраны экспериментально

Полученная среда стабильна при воздействии солнечного или элек-трическог о света, обладает четким дифференцирующим свойством, позволяющим достоверно различать сорбит (-) и сорбит (+) бактерии среда может использоваться при первичной дифференциации Е coli 0157 от других серотипов кишечнои палочки, поскольку 70-80% случаев является сорбит (-) Готовая среда имеет оливково-зеленый цвет, прозрачная па просвете, штаммы кишечной палочки расщепляющие сорбит уже через 15-18 часов после посева, образуют на ней непрозрачные желтого или оранжевого цвета колонии с изменением цвета среды вокруг колонии из оливково-зеленого в желто-оранжевую Сорбит (-) Е coli (0157) к тому же сроку образуют непрозрачные зеленовато-голубые колонии, на фоне неизмененной, оливково-зеленого цвета среды

3.3 3 Способ биотестирования юкснгенности Е. coli

Применяемые в настоящее время методы для выявления токсигенных кишечных палочек весьма трудоемки, дорогостоящи и трудновоенроиз-воцимы, а значит мало востребованы Целью нашей работы являлся поиск и разработка простого, экономичного, легко воспроизводимого, гуманного и достоверного метода определения токсигенности Е coli В качестве объекта для тестирования токсигенности Е coli были выбраны инфузории, которые в настоящее время используют для индикации в кормах и пищевых продуктах токсикантов химического и грибного происхождения В эксперименте изучалось 4 вида инфузории-парамеции стилонихии, колподы и тетрахимены После ряда испытаний мы пришли к выводу, что в данном опыте можно использовать только инфузорий-стилонихии, так как только они оказались чувствительными к выделяемым токсинам Е coli Все остальные инфузории не только не погибали, но и размножались в присутствии бульонной культуры кишечной палочки, даже при высоких ее концентрациях Также большим плюсом является и то, что при гибели сгилонихий происходит их лизис, то есть полный распад, что весьма удобно при их подсчете Предварительно, с помощью метода полимеразноцепной реакции (ПЦР), были подобраны штаммы Е coli имеющие гены, отвечающие за выработку токсинов у штамма 196 - за энтерогемолизин, у 173 - за выработку только шигагоксина, у 174(9) - за выработку гемолизина, некротизирутощего и шшатоксина Контролем служил штамм Е coli-M-17 используемый в качестве про-биотического препарата и поступающий в аптечную сеть под названием

«колибактерин», он не обладает патогенными и токсигенными свойствами В качестве отрицательного контроля использовался стерильный питательный бульон Хоттингера В предварительных исследованиях было подобрано оптимальное соотношение бульонов и среды культивирования инфузорий, которое составило 1 3 (то есть на одну каплю питательного бульона три капли среды культивирования инфузорий), что позволило максимально снизить процент ошибки На предметное стекло вносится среда с инфузориями (суточная культура), проводится их подсчет (для удобства подсчета желательно, чтоб количество стилонихий составило 10-20 штук), при помощи бинокулярной лупы или микроскопа (при увеличении 2X8), и добавляется исследуемая бульонная культура Е coli Через 5 минут производится предварительный просмотр и подсчет количества инфузорий (для того чтобы избежать влияния различных факторов окружающей среды) Стекла с исследуемым материалом помещают в предварительно приготовленные чашки Петри, а затем в термостат с оптимальной для культивирования инфузорий (18-2"ГС) По истечении 2-х часов производится окончательный подсчет числа живых инфузорий, который сравнивается с первоначальным значением Для получения достоверных данных опыт дублируется 3-5 раз, затем высчи-тывается средний показатель Чем выше процент лизированных (погибших) микроорганизмов, тем более токсичной является культуральная среда, а исследуемый штамм, соответственно-токсигенным Кроме того, провели исследования по выявлению влияния сроков инкубации на токсичность культуральной среды Тест-гсультуры инкубировали в течение 72 часов, через каждые 24 часа осуществляли контроль уровня токсичности Количество стилонихий после их инкубации в присутствии бактериальной культуры Е coli способной продуцировать некротизирую-щий, шигатоксин и 1емолизины составляет 45-55% Количество погибших стилонихий после контакта со средой культивирования Е coli, продуцирующих только шигатоксиньт-23-26% Количество лизированных инфузории после контакта со средой культивирования Е coli, продуцирующих только гемолизин-10-11% Количество спонтанно погибших и после контакта со средой культивирования Е coli-M-17 (непатогенного) 0-5% Результаты проведенных опытов показали, что инфузорий можно использовать в качестве модели для тестирования токсигенных свойств Е coli Использование бульона Хоттингера в опыте является наиболее предпочтительным, поскольку на такой питательной среде как мясопеп-тонный бульон, основной среде культивирования бактерий, продукция токсинов этой бактерией не стопь выражена Метод позволяет определить время накопления максимального количества токсинов, выделяемых колонией Е coli в процессе ее жизнедеятельности в питательную среду Так, например, штамм имеющий ген отвечающий за выработку только шигатоксинов, максимально продуцировал токсин по истечению 24 часов его культивирования, а штамм, обладающий образованием

гемолизинов, шиготокеинов и некротизирующим фактором - по истечению трех суток (72 часа культивирования в питательном бульоне)

Таким образом, новизна предложения заключается в возможности осуществления биотестирования токсигенности кишечной палочки за счет культивирования инфузорий совместно с бульонной культурой кишечной палочки, а также возможности контроля уровня токсичности, что можно использовать при приготовлении вакцин из местных штаммов На изобретение способа биотестирования токсигенности кишечной палочки получен патент РФ № 2262529 от 20 октября 2005 года

3 4. Разработка комплексной этионатогенетнческой профилактики и терапии при диареях теляг и поросят в Краснодарском крае

3 4.1. Эффективность имунофана при диареях молодняка сельскохозяйственных животных

Современная ветеринария имеет широкий выбор лекарственных средств, но, несмотря на это эффективность терапевтических мероприятий против эшерихиоза молодняка остается на низком уровне По нашему мнению основной нричинои этого является нерациональное использование антибактериальных препаратов без определения чувствительности и выдерживания схем лечения, что ведет к антибиотикоустойчи-восги штаммов и повышению патогенности Е coli Также зачастую не учитывается структура заболевания при применении вакцин и сывороток, патогенез болезни, не проводится дезинфекция помещений и принцип щадящего кормления больных животных Поэтому с учетом изложенного были разработаны схемы профилактики и терапии колибакте-риоза телят и поросят, включающие применение имунофана, КД «Гид-рогемола» и гипериммунной антнтрксической поливалентной сыворотки против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных, почученной при гипериммунизации лошадей гидроокисьалюми-ниевои вакциной из местных штаммов сконструированной с учетом факторов патогенности Е coli

Имунофан применяли при лечении новорожденных телят с заболеваниями желудочно-кишечного тракта Для проведения опыта подбирали животных с клинической картиной болезни, сопровождающейся нарушениями обменных процессов с симптомами диареи Предварительно проводили анализ анамнестических данных, результатов диспансерного обследования стада крупного рогатою скота, условий его кормления, содержания, эксплуатации При исследовании больных телят определяли массу их тела, выраженность сосательного рефлекса, сосюяние видимых слизистых оболочек, кожи, наличие или отсутствие явлений обезвоживания, интоксикации, гипо- или гипертермии, расстройств дыхания, пищеварения, патологических изменений в деятельности органов мочеполовой и нервной систем При этом учитывали результаты лабораторных исследований крови телят и матерей Заболевшими считали телят со

сниженной живой массой, слабой выраженностью подкожной клетчатки, бледностью видимых слизистых оболочек, заторможенностью сосательного рефлекса, учащением дыхательных движений и ослаблением везикулярного дыхания, уменьшением в крови гемоглобина и эритроцитов, снижением показателей естественной резистентности организма на фоне диарей

В первой серии опытов подобрали 40 телят с более или менее одинаковыми клиническим статусом По принципу аналогов больных телят разделили на две группы но 20 голов в каждой Одна группа телят была опытной, другая контрольной Телята обеих групп находились в одинаковых условиях содержания и кормления Телят лечили с применением метода, принятого в хозяйстве - под кожу вводили кровь здоровой коровы из расчета 1 мл на 1 кг массы тела Наряду с гемотерапией им подкожно вводили имунофан в дозе 0,7 мг/кг В контроле проводили только гемотерапию У телят происходило улучшение общего состояния Сосательный рефлекс восстанавливался, аппетит улучшался, уменьшались расстройства жкт Повышался нервно-мышечный тонус Нормализовались основные клинические показатели (температура, пульс, дыхание) Повышение уровня гемоглобина и эритроцитов свидетельствовало об активизации эритропоэза и исчезновении анемии Произошли позитивные сдвиги в обмене веществ У опытных телят по сравнению с контрольными увеличилось содержание общего белка на 5,9% (р<0,05) и каротина на 13,6% (р<0,05) в сыворотке крови Имунофан блаюприятно повлиял на показатели естественной резистентности организма телят Бактерицидная активность сыворотки крови возросла на 32,1% (р<0,05), лизоцимная - на 72,9% (р<0,05) На 52,4% (р<0,05) увеличилась фагоцитарная активность нейтрофилов

У телят опытной группы по сравнению с контролем масса тела в конце опыта была выше Однако говорить о нормализации живои массы у телят обеих групп нет оснований Масса опытных и контрольных телят не достигла величин, характерных для здороьых гелят того же возраста Гемотерапия, сочетаемая с подкожным введением имуиофана, предохранила телят от диспепсии и бронхопневмонии Среди телят опытной группы не наблюдалось респираторных и желудочно-кишечных болезней В контрольной группе животных зарегистрировано дна случая бронхопневмонии, четыре случая простой диспепсии

Таким образом, имунофан в комплексе с другими терапевтическими средствами, эффективен при лечении желудочно-кишечных заболеваний телят Терапевтическое действие имунофана (тимогексина) оценивали при лечении телят с желудочно-кишечными заболеваниями Опытную группу больных телят с респираторной патологией в кодичес гве 24 голов лечили общепринятыми методами (антибиотики, сульфаниламидные препараты и т п ) и дополнительно инъецировали имунофан (тимогексин) в дозе 100 мкг/гол в течение 4-6 дней Контрольную группу больных

телят (20 голов) лечили аналогичными методами без применения имуно-фана Оценку действия имунофана проводили по срокам течения заболевания и количеству отхода телят (табл 1)

Таблица 1

Эффективность применения имунофана при лечении желудочно-кишечных заболеваний телят

Группа Кол-во голов Выздоровело Отход Длительность болезни

Опытная 24 24 0 4-9 дней

Контрольная 20 18 2 6-15 дней

Использование имунофана при лечении больных желудочно - кишечными заболеваниями позволяет сократить сроки течения болезни и усилить эффективность действия других химиогерапевтических средств

При проведении широких производственных испытаний тимогексина территории Краснодарского края получены следующие данные (табл 2) - при профилактике желудочно-кишечных заболеваний у телят на откорме эффективность применения имунофана характеризуется следующими цифрами заболеваемость сократилась в 23 раза

Таблица 2

Профилактическая эффективность имунофана при желудочно-кишечных заболеваниях у телят

Группа Кол-во животных Заболело, гол Заболеваемость,% Среднесуточные привесы, г Вын\ждснно \бито, гол

Опытная 762 16 2 717 12

Контрольная 942 566 60 557 127

Падеж сократился в 10,5 раз (под падежом подразумевается сумма вынужденно убитых и павших животных) Необходимо отметить, что среднесуточные привесы в опытной группе возросли в среднем на 159 грамм Аналогичные данные были получены при испытаниях препарата на поросятах и приведены в табл 3

Таблица 3

Эффективность профилактики желудочно-кишечных заболеваний поросят имунофаном

Группа Кол-во животных Заболело, гол Заболеваемость, % Среднесрочные привесы, г

Опытная 68 0 0 346

Контрольная 72 16 42 271

Необходимо отметить, что привесы поросят при одинаковом рационе увеличились в среднем на 75 г в сутки Таким образом, данные экспериментов однозначно свидетельствуют о высокой эффективности имуно-фана, как профилактического ветеринарного препарага

Применение имунофана в дозе 1-1,5 мл/гол при иммунизации поросят против сальмонеллеза (бивалентной вакциной против сальмонел-леза свиней из аттенуированных штаммов Б (урЬптшгшш № 3 и Б сЬокгае-Би« № 9) и колибактериоза (ОКЗ) способствует усилению иммунных реакций в организме животных

3.4.1 .Применение кормовой добавки «Гидрогемол» при диареях поросят и ее биологическое действие на организм

Было проведено производственное испытание кормовой добавки (КД) «Гидрогемол» с целью профилактики диарей у поросят Гидрогемол испытывали по 3 схемам По схеме №1 гидрогемол получали 375 порося1, который задавали, начиная с первого дня отъема и на протяжении 10 дней в дозе 2,5-4,0 мл/кг массы тела По схеме №2 - КД получали 393 поросенка, который начинали вводить в корма за 3 дня до отъема в дозе 6 мл/кг массы тела животного, а в последующие 10 дней карантина эту дозу последовательно уменьшали до 2 мл/кг По схеме №3 гидрогемол получали 405 поросят, который начинали давать за 3 дня до отъема в дозе 2 мл/кг, а после отъема дозу добавки увеличивали до 6 мп/кг на 6,7 сутки карантина и вновь ее снижали к 10 дню до 2 мл/кг Суточная доза кормовой добавки, равномерно распределялась в течение суток (утром, днем и вечером) Данные испытаний представлены в табл 24, из данных которой видно, что число заболевших в опытных группах на 25,5 -34,6%, а количество павших в 3,0 - 4,8 раза меньше, чем в контрольных группах Анализ данных заболеваемости поросят при отъеме в опытных и контрольных группах животных, показал, что существует четкая динамиканарастания заболеваемости поросят к 6 дню отъема, с последующим затуханием к 9 дню и новой волной заболевших на 10 день отъема Максимальный пик заболевших приходиться на 6 сутки во всех

группах поросят, но в опытных группах животных не было отмечено резкого пика заболеваемости, в этот день заболевало не более 9,2% поросят, тогда как в контрольных группах - 15,7% Кроме этого в опытных группах имеется тенденция снижения заболеваемости поросят к 10 дню отъема Тогда как в контрольных группах, наоборот, на 10 сутки карантина возникала новая волна заболеваемости поросят диареями В контрольных группах диарею у животных отмечали, на протяжении всего карантина При этом испражнения имели вид жидких (водянистых), темно-коричневых или черных масс, с примесью крови и слизи Заболевание 9,4% случаев заканчивалось истощением и гибелью животных В этих же группах на 10-14 сутки карантина peí истрировали появление у 4,7% животных отечной болезни со 100% летальным исходом (при несвоевременно оказанной медикаментозной помощи) В опытных группах заболевание протекало за 2-3 дня, и характеризовалось более легкой формой, с минимальным обезвоживанием и истощением Летальных случаев с клиникой нервных явлений и отеков среди поросят опытных групп не было

До карантина и по достижении поросятами возраста 60-дней была проведена перевеска подопытных и контрольных животных Средний вес поросят опытных ipynn до опыта был примерно одинаков 9,4 и 9,3 кт Однако после срока наблюдения средняя масса поросенка из опытных групп была на 2,9 кг больше, чем в контрольных группах, и составила в среднем 16,8±0,57 кг Это значит, что ежедневный прирост живой массы тела каждого подопытного поросенка был в среднем выше на 164,6 г но отношению к контрольным животным Наибольший среднесуточный прирост массы тела (458,8 г) наблюдался у поросят, которым вводили КД «Гидрогемол» по схеме №3, в других опытных группах данный показатель был ниже и составил в группе, где вводился 1Идрогемол по схеме №1-394,1 г, а по схеме №2- 447,1 г

Испытания гидрогемола на значительном поголовье норосят-охъемы-шей показали, что он благотворно влияет на организм молодых живот-пых, способе 1вуе г значительному снижению заболеваемости и летальности от заболеваний, сопровождающихся диареями за счет сохранения у них высокого уровня кишечных симбионтов, нормализации и активации обменных процессов и факторов иммунорезистснтности, улучшению аппетита и посдаемости корма, и, как следствие, повышению привесов Биологическое действие КД «Гидрогемол» изучали на поросятах отъемышах (возраст 30-45 дней) В хозяйстве отъем поросят проводится в 35-дневном возрасте, сопровождается массовыми заболеваниями диа-рейной формой колибактериоза Поэтому по принципу аналогов были подобранны две группы поросят, опытной группе - задавали препарат в смеси с кормом 2 раза в день в дозе 2,5-4,0 мл/кг по схеме 3 дня до и в течение 10 дней после отъема, а контрольная ipynna оставалась на основном рационе Биологическое влияние КД «Гидрогемол» на организм

поросят-отьемышей, контролировали по динамике изменений кишечного микробиоценоза, гематологических, иммунологических и биохимических показателей крови, а также по приросту живой массы тела животных

Изучение влияния КД «Гидрогемол» на кишечный микробиоценоз поросят показало, что у поросят опытной группы, в отличие ог контрольных животных, у которых количество эшерихий имело четкую тенденцию к повышению с ^ 7,8+0,28 КОЕ/г до ^ 12,5+0,32 КОЕ/г на 10 день отъема с незначительным снижением к 14 дню до ^ 11,8±0,64 КОЕ/г, численность эшерихии возросла только до № 9,4±0,34КОЕ/г на 3 день отъема, с последующим закономерным снижением до ^ 8,4+0,17КОЕ/г к 14 суткам Такая же тенденция отмечается и в содержании гемолитических форм эшерихий, так при равном их количестве у поросят обеих групп за 3 дня до отъема ^ 7,4±0,11 КОЕ/г, у животных контрольной группы к 10 дню они увеличились до ^ 12,2+0,39 КОЕ/г с последующим незначительным снижением к 14 дню до ^ 11,8±0,63 КОЕ/г, а у подопытных животных, напротив, рост числа этих форм кишечной палочки происходит только до 3 дня, а к 14 дню снижается до ^ 8,0+0,32 КОЕ/г В результат действия кормовой добавки у поросят опытных групп, снижается не только численность гемолитических эшерихий, по и меняются их гемотитические свойства - преобладают не |3-гемолитические, а а-гемо-литические формы эшерихий Также теряют гемолитическую активность энтерококки, хотя их содержание в кишечнике подопытных поросят на период исследований достоверно не отличается, от поросят контрольной группы Содержание стафилококков и клостридий напротив, в обеих группах растет до 6 дня и закономерно по мере выздоровления снижается к 14 дню отъема, но количество стафилококков в опытной группе поросят под действием препарата на 6, 10, 14 день было достоверно (р<0,05) ниже на 20,8%, 36,4%, 20,0%, а клостридий в эти же дни на 22,6%, 7,6%, и 36,0% соответственно Кормовая добавка так же оказывала позитивное влияние и на количественный состав симбионтной микрофлоры (рисунок 8) Так если у норосят-отъемышей контрольной группы к 6 дню отьема, отмечалось снижение молочнокислых стрептококков до 1£ 7,3±0,25 КОЕ/г, лакто-бактерии - 5,7±0,53 КОЕ/г и бифидумбакте-рий - ^ 8,0±0,50 КОЕ/г, что совпадает с пиком массовых диарей в этот период времени По мерс Оздоровления к 14 дню отъема количество молочнокислых стрептококков повысилось до 7,7+0,47 КОЕ/г, лактобак-терий - ^ 7,7+0,22 КОЕА и бифидумбактерий - 9,3+0,47 КОЕ/г У поросят-отьемышей получавших с профилактической целью «Гидр01ем0Л» уровень данных бактерий на протяжении опыта оставался стабильно высоким молочнокислых стрептококков - ^ 9,6+0,57-10,9+0,33 КОЕ/г, лактобактерии 9,5+0,14 -Ю,6+0,25 КОЕ/г и бифидумбактерий 9,9+0,10 Ю,3+0,07КОЕ/г

Таким образом, из полученных данных видно, что применение гидро-гемола в составе основного рациона поросятам в дозе 2,5 - 4,0 мл/кг по схеме 3 дня до и 10 дней после отъема их от матерей, препятствует не только чрезмерному размножению в кишечнике (3-гемолитических эше-рихий, но и угнетаег ее патогенные свойства (выработку гемолизинов), что является весьма важным свойством препарата Кроме того, кормовая добавка сдерживает рост условно патогенных бактерий, таких как стафилококки, клостридии и энтерококки, причем у последних подавляет гемолитические свойства, но в то же время, стимулирует развитие и размножение собственной симбионтной микрофлоры, в частности лакто-кокков, лакто- и бифидумбактерий Следовательно, гидрогемол, оказывая, благотворное действие на полезную микробиоту кишечного тракта поросят, поддерживает на высоком уровне кологшзационную резистентность, тем самым препятствуе1 развитию острых кишечных инфекций, в основе которых лежат глубокие нарушения микроэкологического равновесия

В результате проведенных исследований, установлено, что кормовая добавка позитивно влияет на эритро- и лейкопоэз, повышает насыщенность эритроцитов гемоглобином, что имеет важное значение в профилактике анемических процессов в период заболевания поросят колидиа-реями Кроме того, гидрогемол не только способствует повышению общего количества лейкоцитов, но стабилизирует их популяционный состав, (в частности количество нейтрофшюв и эозинофилов), а также сокращает срок созревания юных форм лимфоцитов

Результаты опыта показали, что введение поросятам в основной рацион КД «Гидрогемол» способствует повышению у них обмена веществ В частности нормализует белковый, минеральный, углеводный и витаминный обмен, это позитивно отражается на факторах естественной ре-зистепшостп поросят в период огьема и нереболевания их колидиареей КД «Гидрогемол», стимулирует Т~, В-клеточное и фагоцитарное звено иммунитета, повышая их количественное содержание и функциональную активность Так, если у поросят, которые после отъема от свиноматок были только на основном рационе, наблюдали снижение всех звеньев иммунитета приводящее к более широкому распространению колидиареи, а следовательно, к потере продуктивности, то у поросят, получавших гидрогемол как дополнение к основному рациону более высокое состояние иммунитета позволяло им активно противостоять болезни и сохранять свою продуктивность, о чем свидетельствовали результаты перевески порося г-отъемышей (табл 4) Исходя из выше изложенных данных видно, что гидрогемол обладает многими полезными свойствами Помимо вкусовых и питательных качеств, обеспечивающих высокую иоедаемость кормов, а следовательно, более быстрый рост и развитие поросят, он оказывает пробиотическое действие за счет нормализации экосистемы желудочно-кишечного тракта, в результате стимулирования размножения собственных лакто - и бифидумбактерий и

угнетения условно патогенной и патогенной микрофлоры

Таблица 4

Влияние препарата на прирост живой массы тела поросят-отъемышей

Показатель Опытная (п=10) Контрольная (п=10)

Общий вес до/после опыта, кг 88,0/123,0 88,1/117,0

Средний вес одного поросенка до/ после опыта, кг 8,8/12,3 8,81/11,7

Среднесуточный прирост живой массы тела по группе, кг (за 13 дней) 3,5 2,9

Среднесуточный прирост на одно животное, г (за 13 дней) 269,2 222,3

Кроме того, имея в своем составе биологически активные вещества (органические и аминокислоты, микро-, макроэлементы) кормовая добавка нормализует обмен веществ и тем самым повышает общую резистентность организма поросят, что является одним из ключевых моментов в профилактике колидиарей у поросят-отъемышей Следует, отметить, что гидрогемол является полностью регенерируемым продуктом, он не представляет угрозы ни для самих животных ни для окружающей среды и обслуживающего персонала А высокая окупаемость предопределяет целесообразность внедрения гидрогемола в свиноводстве

3.4.3 Применение антитоксической гипериммунной поливалентной сыворотки из местных штаммов против колибактериоза молодняка КРС и свиней

Животных предназначенных для получения гипериммунной поливалентной сыворотки против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных предварительно исследовали на сап, трихомоноз, бруцеллез, туберкулез, пироплазмидозы и инфекционную анемию В качестве бактериального антигена для индукции процесса антителообра-зования у лошадей - доноров была использована гидроокисьашоминие-вая вакцина из местных штаммов Е coli 015, 09, 020, 078, 08, 018, 026, 02 для телят и 026, 08, 0103, 0138, 0101, 015, 018, 02 для поросят, обладающих факторами адгезии К99, К88, F41, А20 и 987Р, выделенных в хозяйстве от больных телят и поросят в острой стадии болезни Культуры Е coli, отобранные для производства вакцины наиболее чаще выделялись от телят и поросят, а также обладали следующими фактора-

ми патогенности вырабатывали шигатоксины, некротизирующий токсин, гемолизины

Бактериальный антиген вводили подкожно, в область средней трети шеи и коленной складки в нарастающих дозах 5-10-15-20-25-30-35-40 мл с интервалом 5 дней в качестве иммуностимулятора использовался им-мунофан в дозах 4 мл на животное В результате гипериммунизации получили поливалентную сыворотку с титрами агглютининов от 1 8600 до 12400 для телят и поросят Полученную сыворотку консервировали 5% раствором фенола до конечной концентрации 0,5%, отстаивали, фильтровали, расфасовывали во флаконы После получения сыворотку контролировали на безвредность и стерильность по общепринятым методикам Превентив1гую активность полученной поливалентной сыворотки из местных штаммов определяли на беспородных белых мышах живой массой 13-15 г В качестве тест-культуры использовали выделенные штаммы Е Coli

Испьпания лечебного и профилактического действия полученной поливалентной сыворотки против колибакгериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных проведены в условиях МТФ №2 и СТФ№1 ОАО ГПЗ им В И Чапаева

В качестве сравнения использовались контрольные группы гелят и поросят с клиническими признаками колибакгериоза, которые лечились по традиционно сложившимся схемам с использованием таких средств как левомецитин, поливалентная сыворотка против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных (Армавирская биофабрика), настой ромашки аптечной, физраствор

В случае колибакгериоза телят в опытной группе применяли гиперим-гипериммунную сыворотку против колибакгериоза включающую серо-типы 015, 09, 020, 078, 08, Ol8 и специфические адгезины Е coli К88, К99, А20, 987Р и F41, внутримышечно в дозе 2 мл на 1 кг веса двукратно с интервалом 24 часа Телят второй контрольной группы лечили с использованием левомецитина в дозе 20 mi/кг массы 3 раза в день за 30 минут до кормления, а гакже поливалентной сыворотки против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных (Армавирская биофабрика) в до ie 1 мл/ю веса дважды с интервалом 24 часа В третьей контрольной группе телят лечили с применением левомецитина в дозе 20 мг/кг массы 3 раза в день и настоя ромашки аптечной (1 10) в дозе 5 мл/ki веса 3 раза в день за 30 мин до кормления Во всех группах лечение начинали с исключения очередной выпойки молозива, а в последующие кормления его объем уменьшали в два раза и разбавляли равным количеством физиологического раствора К прежнему количеству молозива возвращались постепенно с учетом клиническою состояния На-людение за животными вели в течение 15 дней

В опытной группе в течение 3-5 дней выздоровели все животные, при этом продолжительность лечения составила 4,35±0,32 дня В контроль-

ных группах, где применялись традиционные препараты и схемы их использования, выздоровели 80%-86,6% подопытных животных, продолжительность лечения была большей на 1,25 - 1,47 дня соответственно Несмотря на применение поливалентной сыворотки против колибакте-риоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных (Армавирская биофабрика) в первой и второй опытных группах погибло соответственно 1 и 2 теленка Гибель телят и больший период лечения в третьей контрольной группе указывает на недостаточность применения только лишь антибиотиков и симптоматических средств терапии

При колибактериозе поросят в опытной группе применяли гипериммунную поливалентную сыворотку против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных, включающую серотипы 026, 08, Ol03, 0138, OlOl, 015 и специфические адгезины Ecoli К88, К99, А20, 987Р и F41, внутримышечно в дозе 2 мл на 1 кг веса двукратно с интервалом 24 часа Поросят второй контрольной группы лечили с использованием левомецитина в дозе 20 мг/кг массы 3 раза в день, а также поливалентной сыворотка против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных (Армавирская биофабрика) в дозе 1 мл/кг веса трижды с интервалом 24 часа В третьей контрольной группе лечили с применением левомецитина в дозе 20 мг/кг массы 3 раза в день за 30 минут до кормления и физраствора Наблюдение за животными вели в течение 15 дней В первой опытной, второй и третьей контрольной погибло 3, 9 и 14 поросят соответственно, терапевтическая эффективность примененных схем составила 94%, 82%) и 72% Продолжительность лечения по группам в среднем составила 3,1 ±0,41, 4,6±0,28 и 5,6±0,28 дней соответственно

Для определения профилактического действия гипериммунной поливалентной сыворотки против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных (КНИВИ) в сравнении с используемой в хозяйстве, в течение 2-х месяцев, было сформировано и обработано по две группы телят (150 голов) и поросят (250 голов) Испытуемую сыворотку вводили новорожденным телятам и поросятам внутримышечно в дозе 1 мл на 1 кг веса двукратно с интервалом 24 часа

Таким образом, в результате проведенных экспериментальных исследований нами установлено, что гипериммунные сыворотки для телят и поросят, где в качестве бактериального антигена использованы местные штаммы Е coli, при лечении больных ошерихиозом телят и поросят на б,7%о и 12% соответственно эффективнее по сравнению с сывороткой применяемыми в данном хозяйстве (Р<0,05) Профилактическая эффективность полученной сыворотки у телят оказалась на 16%, у поросят на 11,6 выше по сравнению с испытанным коммерческим препаратом (Р<0,05)

4. Выводы

1 Заболеваемость эшерихиозом является одной из причин 1ибели телят и поросят в Краснодарском крае в период новорожденности и составляет в среднем 48,4 % у телят и 44,8% у поросят Летальность 23,8 % и 29,0 % соответственно

2 Наиболее часто от больных диареями телят выделяются Е coli с по верхностным антигеном 015 (10,93%), 09 (8,64%), 020 (7,92%), 078 (7,31%), 08 (5,70%), 018 (5,47%), а от поросят 026 (8,87%), 08 (8,12%), 0103 (6,31%), 0138 (5,81%), 0101 (5,26%), 015 (4,78%)

Выделенные от телят и поросят культуры Е coli обладали специфическими факторами адгезии в 35,7% и 35,4% случаев соответственно, у телят они чаще всего были представлены А20 42,1%, К99 20,3% и К88 18,5%, у поросят К88 46,4%, К99 23,3% и Д20 13,8% В хозяйствах края ведущая роль в развитии эшерихиоза у телят принадлежит Е coli А20, а у поросят Е coli К88

Полевые штаммы Е coli, выделенные от поросят, в 43,7% случаев обладали ß-гемолитической и в 6,25% - а-гемолшической активностью Е coli, выделенные от телят, ß-гемолиз образовывали в 33,3 %, а-гемолиз 4,7% Для выявления гемолизинов Е coli использовав кровяной агар с 10% нативной крови барана и добавлением 5% глюкозы, позволяющий четко дифференцировать гемолитические изоляты Е coli

3 Большинство культур Е coli высокорезистентно к антимикробным препаратам Из 31 испытанною препарата 17 (54,8%) средств были высокоактивны по отношению к Е coli, выделенных от поросят, и 19 (61,2%) к Е coli, изолированных от гелят 42% изученных штаммов Е coli не чувствительны и малочувствительны, что свидегельствуе1 о широкой антибиотикозезис гентности Е coli, циркулирующих на территории Краснодарского края

4 Высокочувствительный специфичный тест для выявления у Е coli продукции шигатоксинов реакция коагпнотинации (РКА на планшетах) с использованием диагностикума (Д) - 1 % -антишиготоксический (произведен в институте им Тарасевича для лабораторных испытании) позволяет учитывать накопление шигатоксинов на разных сроках культивирования Е coli Метод биотестирования токсигенности кишечной палочки с использованием инфузории-стилонихий позволяет контролировать уровень токсичности и определять время накопления максимального количества токсинов, выделяемых Е coli в питательную среду в процессе ее жизнедеятельности

5 Полученная среда для ускоренной индикации энтерогеморрагичес-кой Е coli 0157 стабильна при воздействии солнечного или электрического света, позволяет достоверно различать сорбит (-) и сорбит (-1) бактерии, что может использоваться при первичной дифференциации Е coli 0157 от других серотипов кишечной палочки

6 Применение имунофана совместно с вакцинами позволяет увеличить титры специфических антител, а также повысить продолжительность их циркуляции в организме животных, что значительно потенцирует действие данных биопрепаратов Назначение имунофана телятам с нарушением функции желудочно-кишечного тракта в сочетании с гемотерапией позволило улучшить общее состояние животных, нормализовать основные клинические показатели, увеличить прирост массы тела (на 28,7%) и содержание общего белка (на 5,9%) и каротина (на 13,6%) в сыворотке крови Бактерицидная активность сыворотки крови возросла на 32,1%, лизоцимная на 72.9% и фагоцитарная активность нейтрофилов на 52,4%

7 Кормовая добавка «Гидрогемол» позитивно влияет на кишечный микробиоценоз, нормализует обмен веществ и стимулирует иммунитет Применение КД «Гидрогемол» с профилактической целью по схеме 3 дня до отъема в дозе 2,5 мл/кг и 10 дней после отъема в дозе 4,0 мл/кг 2 раза в сутки снижает заболеваемость на 34,6%, а смертность в 6,8 раза При этом среднесуточный привес увеличивается в 1,61 раза, окупаемость составляет 14,9 рублей на 1 рубль затрат

8 Лечебная эффективность гипериммунных антитоксических поливалентных сывороток для получения которых использованы токсигенные штаммы Е coli, при колибактериозе телят и поросят была на 6,7% и 12% выше, чем при применении коммерческой сыворотки (Р<0,05) Профилактическая эффективность ее была так же на 16% и 11,6% соответственно выше (Р<0,05)

5. Практические предложения

1 Для повышения эффективности специфической профилактики и лечения больных колибактериозом животных применять антитоксические сыворотки, полученные путем гипериммунизации животных - доноров вакцинами из «местных» штаммов, в сочетании с имунофаном Наряду с проведением ветеринарно-санитарных мероприятий, улучшением качества кормления, содержания и ухода за животными этиотропную и патогенетическую терапию осуществлять с применением сыворотки, иммуностимуляторов и биологически активных кормовых добавок

2 При идентификации токсинообразующих Е coli, а также оптимизации сроков их культивирования для приготовления вакцин, использовать метод биотестирования токсигенности эшерихий на стилонихиях и реакцию коагглютинации (РКА на планшетах), для ускоренной индикации энтерогеморрагической Е coli 0157 применять усовершенствованную дифференциально-диагностическую среду

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Шпонько Ю Б Адгезивная и колициногенная активность штаммов Е coli, циркулирующих на фермах Краснодарского края/ Ю Б Шпонько // Матер пятой регион научно-практ конф молодых ученых «научное обеспечение агропромышленного комплекса» Краснодар -КГАУ-2003 -С 191-192

2 Терехов В И Серотииовой профиль и патогенные свойства эшери-хий, выделенных от телят в Краснодарском крае / В И Терехов, Ю Б Шпонько // Материалы Междунар научно-практ конф , Ульяновск -2003 -С 114-115

3 Телыюв С Н Серотиповой профиль и антибиотико-чувс гвительность эшерихии выделенных от поросят больных колибактериозом, в хозяйствах Краснодарского края / С Н Тсльнов, В И Терехов, Ю Б Шпонько и др // Материалы всероссийской научно-практ конф и межвузовского координационного совета «Свинина» , 2005 г-С 150-152

4 Шпонько Ю Б Применение модифицированной сорбитоловой среды для дифференциации Е coli 0157 / Ю Б Шпонько // Материалы Межд Научи Конференции посвященной 60-летию ГНУ КНИВИ, 2006 -С 255-257

5 Шпонько Ю Б Совершенствование методов лечения и профилактики эшерихиоза поросят / ЮБ Шпонько// Ветеринарная патология, 2007 -№1 (20)

6 Патент «Способ биотестирования токсш енности кишечной палочки» РФ Лгз 2262529 от 20 октября 2005 года

7 Патент «Способ приготовления питательной среды для выявления кишечной палочки серотипа 0157» РФ № 2273661 от 10 апреля 2006 года

Заказ № 138, Тираж - 100 экз

Отпечатано в ООО 'Полибиг - 1" г Краснодар, ул Дзержинского, 5, тел/факс (861) 21-555-35

Актуальность темы. Одной из актуальнейших проблем современного животноводства является сохранность молодняка сельскохозяйственных животных. Желудочно-кишечные заболевания новорожденных телят и поросят продолжают оставаться одной из проблемных патологий современной ветеринарии как в нашей стране, так и в странах ближнего и дальнего зарубежья. Гибель новорожденных происходит, главным образом, вследствие болезней желудочно-кишечного тракта, а эшерихиоз занимает значительное место среди данной группы заболеваний (Полоцкий Ю. Е., Бондаренко В. М., 1986; Курашвили Т. К., 1992; Ургуев К. Р., Нажалов М. Н., 1998; Сидоров М. А., Субботин В. В., 1999; Rao D. S., 1990). В большинстве случаев данное заболевание обусловлено энтеропатогенными штаммами Е. coli (Коляков Я. Е., 1974; Урбан В. П., Найманов И. Л., 1984; Зароза В. Г., 1991). Несмотря на более чем вековой промежуток времени со дня открытия этиологической роли кишечной палочки в развитии диарей у новорожденных животных и внедрения массовых вакцинаций, эшерихиоз телят и поросят по-прежнему остается одной из наиболее острых проблем в ветеринарии.

Данное заболевание относят к многофакторным инфекциям. В связи с наличием множества возможных причин диарей молодняка сельскохозяйственных животных инфекционной и неинфекционной природы подчеркнута важность подтверждения диагноза колибактериоз (Anon, 1984). По основным культуральным и биохимическим свойствам патогенные Е. coli практически не отличаются от непатогенных представителей нормальной микрофлоры кишечного тракта (Бурлаков В. А., Родионова В. Б., Интизаров М. М., 2002).

На сегодняшний день установлено, что в большинстве случаев штаммы, вызывающие диареи как у детей, так и молодняка сельскохозяйственных животных, имеют одинаковый О-групповой профиль (Поляков Я. Е. с соавт., 1970; Зароза В. Г., 1991; Улиско И. Н., 1996). Наличие у Е. coli ряда биологических свойств и, прежде всего, большого набора серологических вариантов, факторов адгезии и колонизации, способности токсинообразования, инвазивной активности, устойчивости к различным антибактериальным препаратам обеспечивают данному микроорганизму широкое распространение и циркулирование в организме животных и во внешней среде. Именно эти обстоятельства являются основной причиной недостаточно высокой эффективности коммерческих вакцин и традиционно осуществляемой эгиотропной терапии.

В связи с этим, изучение биологических свойств и факторов патогенности у циркулирующих на территории Краснодарского края возбудителей колибактериоза телят и поросят, а также совершенствование экспресс-методов лабораторной диагностики токсинообразования и других факторов патогенности у Е. coli являются актуальными, решение которых позволит рекомендовать практике более эффективные средства и меры борьбы и профилактики кишечных инфекций.

Цель и задачи исследований Целью работы было изучение распространения эшерихиоза, биологических свойств и факторов патогенности E.coli, циркулирующих на фермах Краснодарского края, а также разработка средств специфической профилактики и терапии на основе установленных факторов патогенности и изыскание методов альтернативной экспресс-лабораторной диагностики. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить распространение и этиологическую структуру желудочно-кишечных болезней телят и поросят в хозяйствах края.

- изучить биологические свойства и факторы патогенности изолятов Е. coli, выделенных от телят и поросят.

- изучить возможность применения модифицированной сорбитоловой среды для дифференциации Е. coli 0157.

- разработать альтернативные методы индикации токсинообразования у Е. coli с помощью биотестирования токсигенности Е. coli и реакции коагглютинации (РКА на планшетах).

- разработать комплексную этиотропную и патогенетическую профилактику и терапию при желудочно-кишечных заболеваниях телят и поросят на территории Краснодарского края.

Научная новизна. Изучены распространение, этиологическая структура желудочно-кишечных болезней телят и поросят на фермах Краснодарского края, биологические свойства и факторы патогенности Е.

I coli, выделенных от молодняка сельскохозяйственных животных. Впервые для установления токсигенных свойств Е. coli использовали инфузории стилонихии и реакцию коагглютинации (РКА на планшетах). Для дифференциации Е. coli 0157 разработана и использована модифицированная сорбитоловая среда. Разработана комплексная система профилактики и лечения эшерихиозов молодняка сельскохозяйственных животных с использованием имунофана, кормовой добавки «Гидрогемола» и гипериммунной антитоксической сыворотки и инактивированных антигенов из местных штаммов бактерий, полученных с учетом факторов патогенности Е. coli.

Практическая значимость. Установлено распространение эшерихиоза телят и поросят на территории Краснодарского края и этиологическая структура возбудителей, изучены некоторые механизмы развития колибактериоза с учетом биологических свойств и факторов патогенности, встречающихся штаммов Е. coli. Разработан, испытан и предложен практике метод индикации токсинообразования у Е. coli (биотестирование на стилонихиях). На способ изучения токсигенности кишечной палочки получен патент РФ № 2262529 от 20 октября 2005 года. Для выявления образования шигатоксинов применена реакция коагглютинации (РКА на планшетах). Для ускоренной дифференциации патогенных Е. coli 0157 предложена модифицированная сорбитоловая среда. На способ приготовления питательной среды для выявления кишечной палочки серотипа 0157 получен патент РФ № 2273661 от 10 апреля 2006 года. Разработана комплексная высокоэффективная система профилактики и лечения колибактериоза телят и поросят с учетом серологического профиля возбудителей и их токсигенности, циркулирующих на территории Краснодарского края.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и получили одобрение на Ученом совете Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института, научной конференции, посвященной 80-летию Кубанского государственного аграрного

§ университета (Краснодар, 2002 г.), а также на совещаниях зооветспециалистов Тимашевского, Каневского, Ейского и других районов Краснодарского края.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ.

Основные положения, выносимые на защиту:

- распространение и этиологическая структура эшерихиоза телят и поросят в хозяйствах Краснодарского края.

- биологические свойства и факторы патогенности изолятов Е. coli, выделенных от телят и поросят на территории Краснодарского края.

- метод индикации токсинообразования у Е. coli с помощью биотестирования (инфузории-стилонихии) токсигенности Е. coli, применение реакции коагглютинации (РКА на планшетах) и полимеразно-цепной реакции для обнаружения образования шигатоксинов у Е. coli и модифицированная сорбитоловая среда для ускоренной дифференциации Е. coli 0157.

- комплексная этиотропная и патогенетическая профилактика и терапия при диареях телят и поросят.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 160 страницах машинописного текста, иллюстрирована 36 таблицами и 12 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений. Список литературы содержит 163 источника, из которых 72 иностранных.

5. Выводы

1. Эшерихиоз является одной из причин гибели телят и поросят в период новорожденное™ в Краснодарском крае и составляет в общей заболеваемости в среднем 48,4 % у телят и 44,8% у поросят, а летальность -23,8 % и 29,0 % соответственно. ) 2. Наиболее часто от больных диареями телят выделяются Е. coli с поверхностным антигеном 015 (10,93%), 09 (8,64%), 020 (7,92%), 078 (7,31%), 08 (5,70%), 018 (5,47%), а от поросят 026 (8,87%), 08 (8,12%), 0103 (6,31%), 0138 (5,81%), 0101 (5,26%), 015 (4,78%).

Выделенные от телят и поросят культуры Е. coli обладали специфическими факторами адгезии в 35,7% и 35,4% случаев соответственно, у телят они чаще всего были представлены А20 - 42,1%, К99 - 20,3% и К88 - 18,5%, у поросят: К88 - 46,4%, К99 - 23,3% и А20 - 13,8%. В хозяйствах края ведущая роль в развитии эшерихиоза у телят принадлежит Е. coli А20, а у поросят Е. coli К88.

Полевые штаммы Е. coli, выделенные от поросят, в 43,7% случаев обладали ß-гемолитической и в 6,25% - a-гемолитической активностью. Е. coli, выделенные от телят, ß-гемолиз образовывали в 33,3 %, а-гемолиз - '4,7%. Для выявления гемолизинов Е. coli использовать кровяной агар с 10% нативной крови барана и добавлением 5% глюкозы, позволяющий четко дифференцировать гемолитические изоляты Е. coli.

3. Большинство культур Е. coli высокорезистентно к антимикробным препаратам. Из 31 испытанного препарата 17 (54,8%) средств были высокоактивны по отношению к Е. coli, выделенных от поросят, и 19 (61,2%) к Е. coli, изолированных от телят. 42% изученных штаммов Е. coli не чувствительны и малочувствительны, что свидетельствует о широкой антибиотикозезистентности Е. coli, циркулирующих на территории Краснодарского края.

4. Высокочувствительный специфичный тест для выявления у Е. coli продукции шигатоксинов реакция коагглютинации (РКА на планшетах) с использованием диагностикума (Д) - 1% -антишиготоксический (произведен в институте им. Тарасевича для лабораторных испытаний) позволяет учитывать накопление шигатоксинов на разных сроках культивирования Е. coli. Метод биотестирования токсигенности кишечной палочки с использованием инфузорий-стилонихий позволяет контролировать уровень токсичности и определять время накопления максимального количества токсинов, выделяемых Е. coli в питательную среду в процессе ее жизнедеятельности.

5. Полученная среда для ускоренной индикации энтерогеморрагической Е. coli 0157 стабильна при воздействии солнечного или электрического света, позволяет достоверно различать сорбит (-) и сорбит (+) бактерии, что может использоваться при первичной дифференциации Е. coli 0157 от других серотипов кишечной палочки.

6. Применение имунофана совместно с вакцинами позволяет увеличить титры специфических антител, а также повысить продолжительность их циркуляции в организме животных, что значительно потенцирует действие данных биопрепаратов. Назначение имунофана телятам с нарушением функции желудочно-кишечного тракта в сочетании с гемотерапией позволило улучшить общее состояние животных, нормализовать основные клинические показатели, увеличить прирост массы тела (на 28,7%) и содержание общего белка (на 5,9%) и каротина (на 13,6%) в сыворотке крови. Бактерицидная активность сыворотки крови возросла на 32,1%, лизоцимная - на 72,9% и фагоцитарная активность нейтрофилов на 52,4%.

7. Кормовая добавка «Гидрогемол» позитивно влияет на кишечный микробиоценоз, нормализует обмен веществ и стимулирует иммунитет. Применение КД «Гидрогемол» с профилактической целью по схеме: 3 дня до отъема в дозе 2,5 мл/кг и 10 дней после отъема в дозе 4,0 мл/кг 2 раза в сутки снижает заболеваемость на 34,6%, а смертность - в 6,8 раза. При этом среднесуточный привес увеличивается в 1,61 раза, окупаемость составляет 14,9 рублей на 1 рубль затрат.

8. Лечебная эффективность гипериммунных антитоксических поливалентных сывороток, для получения которых использованы токсигенные штаммы Е. coli, при колибактериозе телят и поросят была на 6,7% и 12% выше, чем при применении коммерческой сыворотки (Р<0,05). Профилактическая эффективность ее была так же на 16% и 11,6% соответственно выше (Р<0,05).

6. Практические предложения

1. Для повышения эффективности специфической профилактики и лечения больных колибактериозом животных применять антитоксические сыворотки, полученные путем гипериммунизации животных - доноров вакцинами из «местных» штаммов, в сочетании с имунофаном. Наряду с проведением ветеринарно-санитарных мероприятий, улучшением качества кормления, содержания и ухода за животными этиотропную и патогенетическую терапию осуществлять с применением сыворотки, иммуностимуляторов и биологически активных кормовых добавок.

2. При идентификации токсинообразующих Е. coli, а также оптимизации сроков их культивирования для приготовления стадоспецифических вакцин, использовать метод биотестирования токсигенности кишечной палочки на стилонихиях и реакцию коагглютинации (РКА. на планшетах), для ускоренной индикации энтерогеморрагической Е. coli 0157 применять усовершенствованную дифференциально-диагностическую среду.

1 л 1