Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях животных

Ершов, Петр Петрович

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях животных

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Ершов, Петр Петрович Москва 2008 г.

Ученая степень: кандидата ветеринарных наук

ВАК РФ: 16.00.03

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях животных

На правах рукописи

ЕРШОВ Петр Петрович

Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Ма1а$$ег1а при кожных заболеваниях животных

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

□□3448575

Москва 2008

003448575

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ ВГНКИ).

Научный руководитель: Кандидат ветеринарных наук

Маноян Марина Геворковна Официальные оппоненты: Доктор биологических наук

Бедоева Зелихан Михайловна; Кандидат ветеринарных наук Красота Людмила Александровна

Ведущая организация: Государственное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» (ВНИИТИБП).

Защита диссертации состоится « ¿¿У» ОКЛЛ^р^ 2008 г. в « часов на заседании диссертационного совета Д 220Ю42.01 при Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВМиБ) по адресу: 109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23; тел. (495) 377-9383.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО МГАВМиБ.

Автореферат разослан » 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Т.Н. Грязнева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Инфекции, вызываемые дрожжевыми грибами, в последние годы стали одним из приоритетных вопросов ветеринарной микологии. Возрастает их распространенность среди домашних животных, выявляются новые этиологические агенты, однако вопросы диагностики, терапии и профилактики дрожжевых инфекций животных остаются недостаточно изученными.

Роль дрожжевых грибов в этиологии инфекционных заболеваний («молочницы») была впервые продемонстрирована Ьап^епЬеск в 1839 г., и впоследствии подтверждена & АпвууогЛ (1986). По данным М. СЬе^арра (1984) дрожжевые грибы способны вызывать у животных патологии различной формы -заболевания мочеполовой системы, пищеварительного тракта (стоматиты, гастриты, энтериты), а также кожные поражения и заболевания органов слуха.

Проблема дрожжевых инфекций обострилась в последние 2 десятилетия. Возросло количество этих заболеваний, были описаны патогенные свойства у ряда видов грибов, ранее считавшихся сапротрофными (К. Нагеп, 1995). В последние годы медицинскими и ветеринарными микологами пристальное внимание уделяется заболеваниям человека и животных, вызываемым дрожжевыми грибами рода Ма^егга (& 1*^1еу, 2000; Ы. Ва1га е1 а1., 2005; & Сишапо, 2006). Являясь представителями нормальной микобиоты кожи теплокровных животных и человека, при определенных условиях они способны вызывать патологический процесс. У людей эти микроорганизмы участвуют в патогенезе кожных заболеваний («пестрый лишай», себоренный дерматит, фолликулиты, расстройства пигментации), а также вызывают системные микозы у лиц с ослабленным иммунным статусом. У животных роль грибов рода Мз/гшег/а в патогенезе ряда заболеваний (дерматитов, отитов, атопического дерматита и других) была установлена относительно недавно (V. Запдиепй е1 а1, 1984, Е. СиШп е1 а!., 1985).

На сегодняшний день окончательно не установлено, способны ли эти грибы самостоятельно вызывать заболевания, или же только на фоне предрасполагающих факторов; какие именно механизмы обеспечивают трансформацию грибов рода Мо/омет/'а из комменсальной формы в патогенную. До сих пор в ветеринарии нет

общепринятых методов и критериев диагностики Ма/амег/а-инфекций животных. В нашей стране эти заболевания целенаправленно практически не изучались, информированность о них врачей остается неудовлетворительной.

Следовательно, изучение распространенности, этиологической структуры и клинико-эпизоотологических особенностей Ма^ела-инфекций животных, а также разработка и совершенствование методов лабораторной диагностики данных заболеваний является актуальной задачей для ветеринарии.

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы - изучение этиологической значимости грибов рода Ма^Беиа при кожных заболеваниях мелких домашних животных, разработка рациональной схемы диагностики Ма^еаа-инфекций.

Дм достижения цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать оптимальный алгоритм выявления грибов рода МаЬявейа на покровных тканях животных.

2. В сравнительном аспекте изучил, частоту встречаемости и плотность популяции грибов рода Ма1а5$еаа в слуховом канале здоровых животных и больных острыми и хроническими отитами.

3. Изучить распространенность и этиологическую структуру Ма1аз5еаа-инфекций среди мелких домашних животных Московского региона.

4. Изучить клинические формы и предрасполагающие факторы Ма^еяа-инфекций мелких домашних животных.

5. Выделить культуры возбудителей Ма^еаа-инфекций животных, изучить их биологические свойства (морфологические, физиологические, вирулентные).

6. Определить оптимальные условия поддержания и хранения культур грибов рода Ма^еаа.

Научная новизна. Впервые разработан алгоритм выявления грибов рода Марена на покровных тканях животных.

Впервые получены количественные данные об изменении частоты встречаемости и плотности популяции грибов рода Ма^вела в слуховом канале здоровых животных и больных острыми и хроническими отитами, что

демонстрирует роль этих микроорганизмов в патогенезе хронических отитов.

Впервые в РФ получены данные о широкой распространенности Ма^егт-инфекций среди мелких домашних животных, систематизированы их клинические формы, выявлены предрасполагающие факторы.

Показано, что основным возбудителем Ма^Бегт-инфекций мелких домашних животных в РФ является вид М. расЬуёегтаив.

Впервые выделена чистая культура эпизоотических штаммов возбудителя, охарактеризованы их морфологические, физиологические и вирулентные свойства.

Впервые был воспроизведен экспериментальный Ма^егт-дерматит при накожном заражении собак.

Прастическая значимость.

Паспортизированы этиологические штаммы М. расЬуёегтаЙБ №№: 12803, 15003, 15503, 16103, 16903 ВГНКИ, которые хранятся в отделе контроля качества и стандартизации лекарственных средств против микозов и микотоксикозов животных ФГУ ВГНКИ.

Разработан алгоритм, выявления грибов рода Ма1а$5ег1а на покровных тканях животных, одобренный на межлабораторном совещании ФГУ ВГНКИ 05.07.2007 г. и рекомендован к утверждению на Федеральном уровне.

Разработан метод диагностики поверхностных микозов животных апробированный в условиях ветеринарных клиник Москвы, Казани и других городов РФ.

В опытах на лабораторных животных при экспериментальном заражении собак изучен патогенез поверхностных микозов, вызванных этиологическими штаммами М. расЬускгтаиэ, дана оценка влияния М. расЬускгта^э на обменные и иммунные процессы организма животных.

Разработаны и утверждены в установленном порядке методические указания по диагностике микозов животных, вызываемых грибами рода Ма1а5$ег1а, которые позволяют рационализировать микологический анализ кожного покрова и слухового канала животных.

Результаты исследований используются в учебном процессе в ФГОУ ВПО

МГУПБ, ФГОУ ВПО РУДН, ФГОУ ВПО УГАВМ, ФГОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплинам: «Микробиология», «Биология и патология мелких домашних, лабораторных и экзотических животных».

Апробация результатов исследований. Материалы исследований изложены на заседаниях Учёного совета, методических комиссиях ФГУ ВГНКИ (2002-2005); Международной научной конференции молодых ученых «Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных» (г. Владимир, 2004); Всероссийской конференции «Лекарственные средства для животных и корма. Современное состояние и перспективы» (г. Москва, 2004); IV Всероссийском конгрессе по медицинской микологии (г. Москва, 2005)

Публикации результатов исследований. Основные результаты исследований опубликованы в 7 научных работах, в т.ч. 1 статья в научном журнале, 6 - в сборниках научных трудов.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 165 листах машинописного текста и включает такие разделы, как введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, сведения о практическом использовании результатов исследований, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (171 источник в т.ч. 161 иностранный) и приложения. Работа иллюстрирована 10 таблицами и 49 рисунками.

Основные положения и результаты работы, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения клинической роли грибов рода Ма^Беаа при кожных заболеваниях животных.

2. Метод лабораторной диагностики Ма1а55еаа-инфекций домашних животных.

3. Результаты изучения распространенности, этиологической структуры, клинико-эпизоотологических особенностей Мазепа-инфекций домашних животных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Работа выполнена в 2002-2006 г на базе отдела контроля качества и

стандартизации лекарственных средств против микозов и микотоксикозов животных ФГУ ВГНКИ, а также Ветеринарном Центре ФГОУ ВПО МГАВМиБ и др. ветеринарных клиниках г. Москвы. При выполнении работы было использовано 227 собак и 17 кошек различных пород и возрастных групп, принадлежавших питомникам и частным лицам. Были сформированы три группы животных: животные с клиническими проявлениями отита, животные с клиническим проявлениями дерматита, клинически здоровые животные. При изучении вирулентности культур грибов для экспериментального заражения использовано 175 белых мышей в возрасте 5-6 нед., массой 13 -14 г.

Для изучения биологических свойств было использовано 32 штамма грибов вида М. pachydermatis, выделенных от животных.

Для выделения культур грибов и изучения их свойств использовали: сусло-агар, среды Чапека, Сабуро, Барфатини, Диксона модифицированную, ПД-2,защитную среду «№ 4 ВГНКИ» и молоко с 5% инозита.

Для отбора патматериала применялись методы с использованием контактных чашек (бакпечаток), липкой ленты, ватного тампона-зонда, коллектора с транспортной средой Эймса, соскоба, смыва.

Для окрашивания препаратов применяли лакто фенол синий, лактофуксин, метиленовую синь. Микроскопию проводили в световом микроскопе Micros (Австрия) при увеличении х40, хЮО, х200, х400.

Видовую идентификацию культур грибов проводили в соответствии с определителем «Atlas of clinical fimgi» (G.S. de Hoog et al., 2000).

Изучение физиологических свойств включало определение уреазной активности при посеве культур на среду Кристенсена с мочевиной; определение ферментации цитрата при посеве на цитратную среду Кристенсена; определение каталазной активности по В. Tarazooie et al. (2004). Ассимиляцию источников липидов (Твин-40, Твин-80) изучали луночно-диффузнойным методом по J. Guillot (1996).

Изучение вирулентных свойств грибов рода Malassezia проводили путем парентерального заражения белых мышей суспензиями культур с концентрацией дрожжевых клеток: 200 млн/см3, 500 млн/см3, 1 млрд/см3, 2 млрд/см3, 3 млрд/см3, 4

млрд/см3. Показатель LD50 вычисляли по методу Кербера в модификации Ашмарина.

Определение чувствительности культур грибов к антифунгальным препаратам проводили диско-диффузионным методом. Использовали диски, импрегнированные антифунгальными препаратами производства HiMedia амфотерицин-В, нистатин, клотримазол, флуконазол, кетоконазол, тербинафнн.

Статистическую обработку и интерпретацию экспериментальных данных проводили биометрическими методами (Г. Лакин, 1990) с использованием пакета анализа данных программы Microsoft Excel.

В работе использованы материалы, полученные лично автором, а также в соавторстве с канд. биол. наук Овчинниковым P.C., которому выражаю глубокою благодарность за помощь и поддержку.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Разработка алгоритма диагностики Malassezia-инфекций животных

В настоящее время в ветеринарной практике не существует единого

общепринятого алгоритма выявления грибов рода Malassezia на кожном покрове и в

слуховом канале животных. Для достижения искомого результата в рамках

исследования предстояло: 1. Отработать оптимальный метод отбора

патологического материала, пригодный для повседневного применения в

ветеринарной практике и отвечающий специфическим требованиям; 2. Определить

оптимальную питательную среду для выделения грибов рода Malassezia из

патологического материала, метод посева и условия культивирования, с учетом

физиологических особенностей возбудителя; 3. Изучить сохранность грибов рода

Malassezia в образцах патматериала, отобранных различными методами; 4.

Разработать оптимальную схему видовой идентификации грибов рода Malassezia.

Сравнительная оценка методов выявления грибов рода Malassezia на покровных

тканях животных

Апробация методов отбора патологического материала проводилась на 27 собаках, подозреваемых на наличие Malassezia-инфекций как в форме кожных поражений (дерматитов), так и в форме отитов. Сравнительная апробация данных методов показала, что оптимальным для повседневного использования в

ветеринарной практике является метод с использованием ватного тампона-зонда (сухого или с транспортной средой). Использование тампона-зонда удобно, позволяет проводить отбор проб из труднодоступных участков тела (в т.ч. из слухового канала), а при посевах проб на питательные среды возможна количественная оценка плотности популяции дрожжевых грибов. Кроме того, использование тампонов-зондов в коллекторах, изготовляемых промышленным способом, позволяет стандартизовать процедуру отбора патологического материала, что обеспечивает воспроизводимость и сопоставимость результатов микологического анализа. С целью подбора оптимальной питательной среды для культивирования грибов рода Ма^Беаа было проведено сравнительное изучение жизнеспособности 5 эпизоотических штаммов М. расЬускгтайз на различных питательных средах (табл. 1).

Табл. 1. Жизнеспособность эпизоотических штаммов М. расЬ^чкгтаиБ на различных питательных средах

Питательная № штамма М. расЬу^егта!^ М/а

среда 12803 15003 15503 16103 16903

Барфатини

млн/см3 36,0±1,7 41,0±3,3 39,0±1,3 33,0±4,7 37,0±0,7 37,7/3,03

с.жк (%) 72,0±2,4 82,0±7,6 78,0±3,6 67,0±7,4 74,0±0,4 74,4

Сусло-агар

млн/см3 17,0±1,6 22,0±3,4 20,0±1,4 15,0±3,6 19,0±0,4 18,6/2,70

с Ж.К. (%) 34,0±ЭД 44,0±б,8 40,0±2,8 30,0±7Д 38,0±0,8 37Д

Сабуро

мян/см'* 16,0±3,4 24,0±4,6 21,0±1,6 16,0±3,4 20,0±0,6 19,4/3,43

с.жк. (%) 32,0±6,8 48,0±9Д 42,0±ЗД 32,0±6,8 40,0±1Д 38,8

Сусло-агар + хлорамфеникол

мян/см* 9,0±2Д 14,0±2,8 13,0±1,8 8,0±3,2 12,0±0,8 11,2/2,58

с Ж.К. (%) 18,0±4,4 28,0±5,6 26,0±3,6 16,0±6,4 24,0±1,6 22,4

Диксона

млн/см* 34,0±1,6 40,0±4,4 38,(Н2,4 30,0±5,6 36,0±0,4 35,6/3,84

с.жк (%) 68,0±ЗД 80,0±8,8 76,0±4,8 60ДЫ1Д 72,0±0,8 71Д

ПД-2

млн/см3 20,0±1,8 25,0±ЗД 24,0±2Д 17,0±4,8 / 23,0±1Д 21,8/ЗД7

С.Ж.К. (%) 40,0±3,6 50,0±6,4 48,0±4,4 34,0±9,6 46,0±2,4 43,6

Чапека Роста нет Роста нет Роста нет Роста нет Роста нет

Примечание: «с.ж.к.» - содержание жизнеспособных клеток относительно общей концентрации клеток гриба; Млн./см3 - общая концентрация дрожжевых клеток; М - средняя арифметическая вариационного ряда; о - стандартное отклонение вариационного ряда.

Как следует из данных таблицы, наибольшую жизнеспособность культур М. расЬускппаиБ обеспечивали липид-содержащие питательные среды Барфатини и Диксона (соответственно 67,0±7,4% - 82,0±7,6% и 60,0±11,2% - 80,0±8,8% жизнеспособных клеток). Наиболее быстрое начало роста культур М. расЬускппайз отмечали также на липид-содержащнх средах Барфатини и Диксона - визуально рост колоний на этих средах наблюдали уже на 2-е сутки. Морфологические признаки колоний становились отчетливыми на 4-5-е сут. на липид-содержащих средах и на 6-7 сут. на средах без источников липидов.

Исходя из полученных результатов, в дальнейшем для выделения грибов рода Ма^еиа из патологического материала была использована среда Барфатини.

При изучении сохранности грибов рода Макввепа в образцах патматериала было установлено, что при хранении в коллекторах с транспортной средой Эймса жизнеспособность грибов оставалась стабильной в течение 7 сут. при 5-8°С (рис. 1).

X §

я ,

I®

11 о О

200 150 100 50 0

-Ж_ ___■ --______

*—♦ ^— —...........■

.12 3 7

срок хранения, сут.

• Сухой коллектор —В— Коллектор со средой Эймса

Рис. 1. Жизнеспособность грибов рода Ма1а$$ег1а в образцах патологического материала при различных условиях хранения

В образцах, хранившихся в сухих коллекторах, жизнеспособность МакБзеаа Брр сохранялась на исходном уровне в течение первых 2 сут., однако уже на 3-е сутки количество жизнеспособных дрожжевых клеток сократилось до 87,6 КОЕ, что составило 61,2% от исходного количества. На 7-е сут. из образцов было выделено лишь 16,3 КОЕ грибов (11,3%).

Таким образом, для отбора патматериала целесообразно использовать коллекторы с транспортной средой Эймса, обеспечивающие сохранность Ма^веаа

Брр. в образцах в течение минимум 7 сут. При отсутствии коллекторов с транспортной средой, тампоны-зонды можно хранить в сухих коллекторах, но в этом случае культуральный анализ необходимо провести в течение 2 сут. после

отбора образцов патматериала

Рис. 2. Алгоритм выявления грибов рода Malassezia на покровных тканях

животных

В результате проведенных исследований был разработан алгоритм выявления грибов рода Malassezia в организме животных, этапы которого представлены на рисунке 2. Данный алгоритм был использован для дальнейшег о изучения этиологии, распространенности и клинико-эпизоотологических особенностей Malassezia-инфекций животных.

Изучение частоты встречаемости и плотности популяции грибов рода Malassezia в слуховом канале клинически здоровых животных и животных с клиническими проявлениями отита.

В силу того, что грибы рода Malassezia являются частью нормальной

микобиоты кожи многих теплокровных животных, стояла задача установить, насколько изменяется встречаемость и плотность популяции Ма^еаа Брр. у здоровых животных и животных с проявлениями отитов (острых и хронических).

Был проведен микологический анализ материала из слухового канала 27 клинически здоровых собак и 26 собак с проявлениями отита, в т.ч. 17 собак с хроническим течением отита и 9 с острым. Результаты исследования представлены на рис. 3.

I ■■,-■■■■■ -"-■• I Частота выделения Ма1аз8ег1а врр., % т Плотность популяции Ма1аз8ег1а эрр., КОЕ

Рис. 3. Частота выделения и плотность популяции грибов рода Ма1а88ег1а в слуховом канале клинически здоровых собак и собак с признаками острых и

Встречаемость грибов рода Ма^ейа в слуховом канале здоровых собак составила 29,6%, при этом выделяли лишь единичные колонии (плотность популяции в среднем 7,0 КОЕ). От 17 собак с проявлениями хронического отита грибы рода Мазепа были выделены в 88,2% случаев, при этом плотность популяции гриба составила в среднем 213,4 КОЕ. В то же время у собак с острым течением отита грибы были изолированы в 55,5% случаев, однако плотность популяции была незначительной (в среднем 6,2 КОЕ).

Можно заключить, что существует выраженная корреляция между патологическим процессом (хроническим отитом) и многократным увеличением плотности популяции грибов рода Мак^ена в очаге поражения, что указывает на этиологическую роль грибов при данной патологии. При острых отитах напротив не наблюдали увеличение плотности популяции дрожжей в слуховом канале, что не позволяет сделать вывод об этиологической роли Мак^ела эрр. в данном случае.

здоровые собаки собаки с острым отитом собаки с хроническим

отитом

хронических отитов

Изучение клинико-эпизоотологических особенностей Ма1а**та-инфекцнй животных в Московском регионе

Было проведено обследование 187 животных, в т.ч. 170 собак и 17 кошек

различных пород. У собак в 143 случаях имелись клинические проявления отитов, в 27 случаях - кожные поражения (дерматиты). Все обследованные кошки имели клинические проявления отитов. Результаты микологического анализа патматериала от собак с клиническими проявлениями отита представлены на рис. 4.

Рис 4. Видовой состав микроорганизмов, изолированных от собак с клиническими проявлениями отита

Гриб М. pachydermatis изолирован из 115 изученных проб (80,4%). В большинстве случаев (52,4%) выделяли только М. pachydermatis, в 25,2% этот вид выделяли в ассоциации с бактериальной микрофлорой. В 2,8% М. pachydermatis выделяли в ассоциации с мицелиальными недерматофитными грибами (НДГ). Реже всего (2,0%) из слухового канала выделяли только НДГ. Из 2,8% проб микроорганизмы не были изолированы.

Полученные данные свидетельствуют о доминирующей роли М. pachydermatis в этиологии отитов у собак, как в качестве единственного возбудителя, так и в ассоциации с другими микроорганизмами, прежде всего бактериями. Результаты изучения этиологии дерматитов у собак представлены на рис. 5.

НДГ 2.1% Бактерии 14.7%

Malassezia pachydermatis + бактерии 25.2%

Malassezia

+ НДГ

Микроорганизмы не изолированы 2.8%

pachydermatis 52.4%

НДГ 40."""

Микроорганизмы не изолированы

Дерматофиты 11.1%

Malassezia 14.8%

Бактерии

Рис 5 Видовой состав микроорганизмов, изолированных от собак с клиническими проявлениями дерматитов

Наиболее часто (40,7%) из кожных поражений собак выделяли

недерматофигные грибы (НДГ), бактерии (25,9%), а гриб М. расЬуйегтаЙБ выделены только в 14,8% случаев, что сопоставимо с встречаемостью грибов-дерматофитов (11,1%). От 17 кошек с проявлениями отита М. расЬусЬгтаПБ выделен в 11,8% случаев. Более существенную роль в этиологии отитов у кошек играли бактерии и ушные клещи (29,4% и 17,6%). В 41,2% случаев этиология заболевания очевидно носила неинфекционный характер.

М. расЬуйегтаЙБ был единственным видом рода Ма^Бела, выделенным от животных в наших исследованиях.

Выявление наиболее характерных клинических особенностей (клинических предикторов) МаЫяйеяа-инфещий животных

Было проведено изучение локализации, клинических проявлений, длительности заболевания. В большинстве случаев (63,5%) при Ма^еаа-отитах у животных наблюдались двухсторонние отиты. Односторонняя локализация наблюдалась в 22,6% случаев, а в 13,9% при односторонних отитах при дальнейших клинических наблюдениях отмечали распространение патологического процесса на второе ухо.

На основании характера ушного экссудата было диагностировано несколько форм Ма1а55е21а-отитов у собак, а именно гнойная форма, характеризовавшаяся выделением гнойного экссудата сметанообразной консистенции, (диагностирована у 6,1% больных животных); церуминозная форма, при которой образовывался обильный ушной секрет различного цвета и консистенции, (диагностирована у 85,2% больных животных); себорейная форма, характеризовавшаяся образованием множественных сухих бляшек и корочек на медиальной стороне пораженной ушной раковины, (диагностирована у 8,7% больных животных).

Среди других клинических признаков наиболее часто встречались гиперемия, зуд, болезненность. В силу зуда часто наблюдали самотравмирование животных -расчесы в области ушных раковин, а в отдельных случаях - образование гематом Также наблюдали гиперкератоз, лихенизацию кожи ушных раковин и устья слухового канала - признаки, характерные для хронических воспалительных процессов. Всегда поражения сопровождались специфическим неприятным запахом.

Во всех зарегистрированных случаях течение Ма^еаа-отитов было

хроническим, длительность заболевания составляла не менее 3-6 мес. и достигала 3 и более лет. В большинстве случаев (75%) владельцы животных обращались за ветеринарной помощью, когда клинические признаки отита наблюдались уже в течение 1-3 лет. Самый длительный срок заболевания, зарегистрированный в данном исследовании - 5 лет и 3 месяца Как правило, заболевание носило персистирующий характер, с периодическими улучшениями и обострениями.

При Ма1а$5еаа-дерматигах у собак кожные поражения были локализованы на вентральной поверхности тела в области паха, брюшины (25%), на морде в области губ (25%), в межпальцевых пространствах (50%). Клинически поражения характеризовались ярко-выраженной эритемой, сальным жироподобным экссудатом, мацерацией кожи, образованием пустул. Поражения кожи поверхности тела распространялись на значительную площадь, характеризовались гиперкератозом, лихенизацией, гиперпигментацией и образованием комедонов. Поражения сопровождались зудом, особенно сильным при локализации в межпальцевых пространствах - в этих случаях животные интенсивно вылизывали и покусывали пораженные участки. Течение заболевания также было хроническим.

Изучение эпизоотологических особенностей Malassezia.-omu.moe у собак Установлено, что Ма1аз5еаа-отитами чаще болеют самки (60,9%), нежели самцы (39,1%). Заболевание регистрировалось у собак практически любого возраста, но наиболее часто у животных старше 6 лет (40,0%). Среди пород с диагнозом Ма^ейа-отит большинство относилось к брахицефалам - породам с укороченной мордой - шарпей (13,7%), чау-чау (10,5%), английский и французский бульдоги (7,3 и 5,5%), а также к породам с длинными висячими ушными раковинами - бассет-хаунд (18,5%), коккер-спаниель (8,0%).

Установлено, что частота выявления Ма1а55еаа-отитов была выше в весенний (28,7%) и осенний (39,1%) периоды, нежели в зимний и летний, что может быть связано с обострениями хронических инфекционных процессов.

В большинстве случаев (63%) Ма^вела-инфекции были ассоциированы с пищевыми аллергиями, в 53% - с иммунопатиями (атопический дерматит и др.), в 42% - с эндокринными заболеваниями (гипотироидизм, гиперадренокортицизм).

Реже в истории болезни фигурировали инфекционные заболевания, травмы, новообразования, гепатопатии. 42% животных подвергалось лечению гормональными препаратами, 25% получало антибиотики. Только у 17% животных не были выявлены какие-либо сопутствующие патологии.

Таким образом, большинство случаев Malassezia-отитов развивалось на фоне какой-либо первичной патологии. Применение антибиотиков и гормональных препаратов также часто коррелировало с возникновением Malassezia-отитов.

Изучение биологических свойств эпизоотических штаммов М. pachydermatis

В процессе исследования от животных было изолировано, выделено в чистую культуру и идентифицировано 115 штаммов грибов вида М. pachydermatis, у 32 из которых были изучены морфологические, цитоморфологические, физиологические свойства, у 5 также и вирулентные.

Тканевая форма М. pachydermatis представлена овальными дрожжевыми клетками с толстой оболочкой, напоминающими по форме «отпечаток стопы». Клетки в основном почкующиеся, почкование монополярное, перкуррентное. Клетки располагаются одиночно или в скоплениях. Псевдомицелий не обнаружен.

На среде Барфатини (7 сут. роста) М. pachydermatis образует округлые колонии, светло-желтые или светло-кремовые, слегка выпуклые, морщинистые, матовые. Края неровные, слабо-фестончатые. Вокруг колоний заметна зона помутнения среды шириной 2-3 мм. Реверс желтый. Диаметр колоний 3-5 мм (см. рис. 6а).

Морфологические свойства М. pachydermatis на средах Сабуро, сусло-агаре и сусло-агаре с хлорамфениколом были схожи между собой: колонии округлой формы, от светло-кремового до светло-коричневого цвета, выпуклые, гладкие, матовые. Края ровные. Реверс бесцветный, диаметр 3-5 мм. Диаметр колонии гриба на среде с антибиотиком был несколько ниже - 2-3 мм.

При микроскопии М. pachydermatis наблюдали клетки овальной, эллиптической формы, с толстой оболочкой. Почкование бластоконидиального типа, монополярное, перкуррентное. Почкующиеся клетки по форме напоминают «отпечаток стопы». Дочерние клетки в основном такой же ширины, как и материнские. Псевдомицелий не обнаружен. Размер клеток 3,0-6,5 х 2,5 мкм.

При изучении ферментативных, ассимилятивных свойств и термотолерантности 32 эпизоотических штаммов М. расЬус^гтаИз установлено, что все они были способны к росту на среде Сабуро без липидов, ассимилировали Твин-40 и Твин-80. Также все штаммы проявили способность к росту при 40°С, а у некоторых из них энергия роста при 40°С была выше, нежели при 36°С. Штаммы ферментировали мочевину и цитрат, проявляли каталазную активность.

По степени чувствительности к ангифунгальным препаратам штаммы гриба М. расЬускгтайз отличались между собой. К нистатину было чувствительно наибольшее количество изученных штаммов (47,3%), к тербинафину - 42,1%. Наименьшую активность проявил амфотерицин В - он ингибировал только 16,7% штаммов М. расЬус1егтаЙ5. Клотримазол и флюконазол ингибировали соответственно 27,4% и 24,2% изученных штаммов.

Для изучения вирулентности 5 эпизоотических штаммов М. расЬускппаИБ было проведено внутрибрюшинное заражение белых мышей с последующим расчетом 1Л}50. Результаты опыта представлены в табл. 2

Табл. 2. Определение Ы)^ эпизоотических штаммов М. расЬу(1егтаЦ$

№ штамма Источник происхождения Показатель Заражающая доза, млрд/см3 ьо50, млрд

0,2 0,5 1 2 3 4

12803 Хр. отит у собаки Кол-во животных 5 5 5 5 5 5 1,62

Из них пало - - - - 1 4

Выделена субкультура и/о н/о н/о н/о + +

15003 Дерматит у собаки Кол-во животных 5 5 5 5 5 5 1,41

Из них пало - - - 1 2 2

Выделена субкультура н/о н/о н/о + + +

15503 Слуховой канал здоровой собаки Кол-во животных 5 5 5 5 5 5 2,10

Из них пало - - - - 1 2

Выделена субкультура н/о н/о н/о н/о + +

16103 Хр. отит у собаки Кол-во животных 5 5 5 5 5 5 2,45

Из них пало - - - - - 2

Выделена субкультура н/о н/о н/о н/о н/о +

16903 Хр. отаг у собаки Кол-во животных 5 5 5 5 5 5 1,86

Из них пало - - - 1 2 4

Выделена субкультура н/о н/о н/о + + +

Клинически экспериментальная инфекция у мышей проявлялась апатией,

анорексией, проявлением зуда кожного покрова, появлением алопеции. Гибель

животных в большинстве случаев отмечалась на 2-7 сутки после инъекции культуры. У павших животных при вскрытии ис лед о вали патологоанатомические изменения во внутренних органах.

В результате микологического анализа от всех павших мышей выделены субкультуры штаммов М. расЬус1егтаи8, использовавшихся для экспериментального заражения. Была установлена патогенность всех пяти изученных штаммов для мышей при парентеральном введении, однако ЬО50 варьировала от 1,41 до 2,45 млрд. клеток/доза. При этом не было обнаружено взаимосвязи степени патогенности и источником происхождения штамма.

Для дальнейшего изучения патогенности М. расЬуёегтайв методом накожного заражения был отобран штамм №15003, проявивший наибольшую вирулентность. Клинические признаки в местах заражения были отмечены у 2-х из 3-х зараженных собак, поражения носили характер сквамозного дерматита (образование сухих корочек, струпьев). Наибольшая интенсивность клинических признаков была отмечена на 3-е сутки, а на 6-е сут. наблюдали полное очищение очагов и рост нового волоса. Из мест заражения были выделены субкультуры штамма М. расЬускгтайз15003.

Таким образом, была продемонстрирована способность М. расЬуйеттайз вызывать экспериментальный дерматит при накожном заражении, однако патологический процесс протекал в легкой форме, и в короткие сроки разрешался полным самовыздоровлением.

Изучение условий поддержания и хранения культур М. рас!гу{1егтай.<1

Установлено, что при поддержании культур М. расЬус!егтай5 на агаризованных питательных средах интервалы между пересевами не должны превышать 1 мес. при использовании сусло-агара, и 1,5 мес. при использовании среды Барфатини.

Хранение культур М. расЬускгтайз в глицерине при температуре -16 - -18°С обеспечивало выживаемость гриба в течение 3-х мес. (срок наблюдения).

Лиофилизация с использованием защитных сред №4 ВГНКИ и молока с 5% инозитом обеспечивала сохранность культур М. расЬускгтаНз в течение 3,5-летнего хранения, однако содержание жизнеспособных клеток снижалось с 61,0-65,0% до

2,5-5,0% (среда №4 ВГНКИ) и с 57,0-69,0 до 2,3-2,4% (молоко с 5% инозитом).

Можно заключить, что метод лиофилизации перспективен для длительного хранения М. расЬускгтаЙБ, однако требует существенной оптимизации для обеспечения большей жизнеспособности гриба.

ВЫВОДЫ

1. Грибы рода Ма^Бела выявлены в слуховом канале у 29,6% здоровых собак и у 88,2% собак с проявлениями хронических отитов. Развитие Ма^Беиа-инфекций обусловлено многократным увеличением плотности популяции грибов в слуховом канале по сравнению со здоровыми животными.

2. Для выделения грибов рода Ма1а£Ееаа из патологического материала, в т.ч. липид-зависимых видов, предотвращения контаминации посевов и облегчения видовой идентификации при лабораторной диагностике целесообразно использовать среду Барфатини и среду Сабуро с хлорамфениколом.

3. У собак с хроническим отитом этиологическая роль грибов рода Ма1аз5еаа установлена в 80,4% случаев, у собак с кожными поражениями (дерматитами) - в 14,8% случаев, у кошек с отитами - в 11,8% случаев. Среди клинических форм Ма^Беаа-отитов доминирует церуминозная, Ма^Бегла-дерматитов - себорейная.

4. Основным возбудителем Ма^Бет-инфекций собак и кошек является вид М. расЬусЬппайБ. В 52,4% случаев он является единственным возбудителем, в 25,2% случаев - в ассоциации с бактериями, в 2,8% случаев - в ассоциации с мицелиальными грибами.

5. К Ма1а58ег1а-отигами предрасположены собаки, относящиеся к брахицефалам (бульдоги, чау-чау, шарпей), и породы с висячими ушными раковинами (бассеты, спаниели). В основном болеют собаки в возрасте старше 6 лет, заболеванию более подвержены самки (60,9%).

6. В 83% случаев развитие Ма1а55ела-инфекций наблюдали на фоне первичных патологий, прежде всего пищевых аллергий, иммунопатий, эндокринных заболеваний, при применении гормональных препаратов и антибиотиков.

7. Экспериментально установлена патогенность М расЬускгтаиБ для животных. 1^50 при внутрибрюшинном заражении б. мышей составила 1,41-2,45 млрд/доза в

зависимости от штамма; при накожном заражении собак гриб способен вызывать развитие сквамозного дерматита.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

От собак и кошек с клиническими признаками Malassezia-инфекции выделены и паспортизированы этиологические штаммы М. pachydermatis №№:12803, 15003, 15503, 16103, 16903, которые хранятся в отделе контроля качества и стандартизации лекарственных средств против микозов и микотоксикозов животных ФГУ ВГНКИ.

Разработаны и утверждены 05.07.2007 г. «Методические указания по диагностике микозов животных, вызываемых грибами рода Malassezia».

Разработан алгоритм выявления грибов рода Malassezia на покровных тканях животных для применения в ветеринарии.

Разработан метод диагностики микозов животных, вызываемых грибами рода Malassezia, апробированный в Ветеринарном Центре ФГОУ ВПО МГАВМиБ, в ветеринарных клиниках ООО «ВетЗооСервис» (г. Москва), ООО «Альфавет» (г. Москва), «МиГ» (г. Москва), ИП «Семченко» (г. Люберцы), в лечебно-консультативном центре ФГУ ВПО КГАВМ им. Н.Э Баумана (г. Казань), ветеринарной службой Советского района ХМАО-Югра Тюменской области, что подтверждено актами, утвержденных руководителями клиник.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

Разработанный метод лабораторной диагностики Malassezia-инфекций животных рекомендуется для использования в ветеринарных лабораториях и ветеринарных клиниках, что позволит существенно повысить выявляемость Malassezia-инфекций животных.

Метод ватного тампона-зонда рекомендуется для повседневного использования в ветеринарных лабораториях при выявлении грибов рода Malassezia на покровных тканях животных.

Для поддержания и хранения культур М. pachydermatis в лабораторных условиях рекомендуется использование их пересевов на среде Барфатини с интервалом пересевов до 1 мес., криогенное хранение в глицерине (до 3 мес.) и лиофилизация с защитной средой №4 ВГНКИ (хранение до 3 лет).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Маноян М.Г. Дрожжеподобные грибы при кожных патологиях животных /М.Г. Маноян, А.Н. Панин, П П. Ершов // Золотое кольцо России: Сб. науч. тр. -Владимир: ВНИИВМиВ,- 2001. - С. 87-88.

2. Ершов П.П. Количественный метод оценки концентрации грибов рода Malassezia у собак / П.П. Ершов // Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных. Сб. науч. тр.-Владимир: ФГУВНИИЗЖ. -2004. -С. 149-152.

3. Поверхностные микозы животных, вызываемые дрожжевыми грибами / P.C. Овчинников, М.Г. Маноян, П.П. Ершов и др.// Успехи медицинской микологии: Сб. науч. тр. - М.: Национальная Академия Микологии. - 2006. - Том 8. - С. 192-194.

4. Маноян М.Г. Кожные заболевания животных, вызываемые грибами рода Malassezia / М.Г. Маноян, П.П. Ершов, P.C. Овчинников // Сборник научных трудов ФГУВГНКИ. -М.:ФГУВГНКИ. -2006. - Т. 66. - С. 300-305.

5. Этиологическая роль дрожжевых грибов рода Malassezia в кожных заболеваниях животных / П.П. Ершов, P.C. Овчинников, Е.Ю. Макарова и другие// Сборник научных трудов ФГУ ВГНКИ. - М.: ФГУ ВГНКИ,- 2007.-С.12-13.

6. Возрастающая значимость грибов-оппортунистов в этиологии микозов животных / P.C. Овчинников, М.Г. Маноян, П.П. Ершов и др.// Современная микология в России: Сб. науч. тр. - М.: Национальная академия микологии,- 2008 -Т. 2,- С. 356-357.

7. Ершов П.П. Изучение клинико-эпизоотологических особенностей Malassezia-инфекций собак и кошек в Московском регионе / П.П. Ершов // Ветеринарная медицина.- 2008,- № 1,- С. 23-24

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 22.09.08. Тираж 100 экз. Усл. п.л 1 Печать авторефератов (495) 730-47-74,778-45-60

Оглавление диссертации Ершов, Петр Петрович :: 2008 :: Москва

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Общая характеристика грибов рода Malassezia Bâillon.

1.2. Грибы рода Malassezia как представители нормальной микобиоты кожного покрова животных.

1.3. Грибы рода Malassezia как возбудители инфекционных заболеваний животных.

1.3.1. Патогенез Malassezia-инфекций.

1.3.2. Клинические формы Malassezia-инфекций животных.

1.3.3. Видовой состав возбудителей Malassezia-инфекций и их распространенность у животных различных видов.

1.4. Питательные потребности грибов рода Malassezia и условия для их культивирования.

1.5. Методы диагностики Malassezia-инфекций животных.

1.5.1. Видовая идентификация и биологические особенности.

1.5.2. Цитологические и культуральные методы диагностики.

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Ершов, Петр Петрович, автореферат

Актуальность работы

Инфекции, вызываемые дрожжевыми грибами, в последние годы стали одним из приоритетных вопросов ветеринарной микологии. Возрастает их распространенность среди домашних животных, выявляются новые этиологические агенты, однако вопросы диагностики, терапии и профилактики дрожжевых инфекций животных остаются недостаточно изученными.

Заболевания, вызываемые дрожжевыми грибами, известны с глубокой древности. Их описание встречается уже у Гиппократа (5 век до н.э.). Роль дрожжевых грибов в этиологии инфекционных заболеваний («молочницы») была впервые продемонстрирована Langenbeck в 1839 г., и впоследствии подтверждена Berg и Gruby [15].

Термин «дрожжи» является собирательным; он объединяет виды грибов, не образующие мицелий, имеющие одноклеточное строение и размножающиеся в вегетативной стадии почкованием или делением. Таксономически дрожжи относятся к отделам Ascomycota и Basidiomycota. К настоящему времени известно 7 родов дрожжевых грибов, представители которых способны вызывать инфекционные заболевания человека и животных: Candida, Trichosporon, Cryptococcus, Saccharomyces, Geotrichum, Rhodotorula, Malassezia.

У животных дрожжевые грибы способны вызывать патологии различной формы - заболевания мочеполового тракта, в т.ч. приводящие к абортам у самок и бесплодию у самцов, маститы, заболевания пищеварительного тракта (стоматиты, гастриты, энтериты), поражения внутренних органов, а также кожные поражения и заболевания органов слуха [50].

Особенно проблема дрожжевых инфекций обострилась в последние 2 десятилетия. Начиная с 1980-х гг., в литературе стали появляться сообщения о возрастающем количестве дрожжевых инфекций в медицинской практике. Были описаны патогенные свойства у ряда видов грибов, ранее считавшихся сапротрофными [93]. В последние годы самое пристальное внимание как медицинскими, так и ветеринарными микологами уделяется заболеваниям человека и животных, вызываемым дрожжевыми грибами рода Malassezia [126, 80,]. У людей эти микроорганизмы вызывают ряд кожных заболеваний («пестрый лишай», себорейный дерматит, фолликулиты, расстройства пигментации), а также системные микозы у лиц с ослабленным иммунным статусом. У животных дрожжи рода Malassezia являются причиной широко распространенных инфекционных дерматитов, отитов, заболеваний органов ЖКТ и органов зрения, участвуют в патогенезе атопического дерматита. Начиная с 1990-хх гг., Malassezia-инфекции de facto рассматриваются в ветеринарии как отдельная нозологическая единица, приобретающая все большее клиническое значение [63].

Таким образом, актуальность исследования обусловлена необходимостью изучения этиологической структуры, распространенности и клинико-эпизоотологических особенностей Malassezia-инфекций животных, что может быть достигнуто путем создания эффективного метода лабораторной диагностики данных заболеваний.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы изучение этиологической значимости грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях мелких домашних животных, оценка распространенности и этиологической структуры малассезиозов в Московском регионе и разработка рациональной схемы диагностики этих заболеваний.

Для достижения цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать оптимальный алгоритм выявления и количественного учета грибов рода Malassezia на покровных тканях животных.

2. В сравнительном аспекте изучить частоту всречаемости и плотность популяции грибов рода Malassezia в слуховом канале здоровых животных и больных острыми и хроническими отитами.

3. Изучить распространенность и этиологическую структуру Ма1аз8ег1а-инфекций среди мелких домашних животных Московского региона.

4. Изучить клинические формы и предрасполагающие факторы Ма1а8Бег1а-инфекций мелких домашних животных.

5. Выделить культуры возбудителей МаЬззег^а-инфекций животных и изучить их биологические свойств (морфологические, физиологические, вирулентные).

6. Определить оптимальные условия поддержания и хранения культур грибов рода Ма1а8зе21а.

Научная новизна.

Впервые разработан алгоритм выявления грибов рода Ма1аБ8е21а на покровных тканях животных.

Впервые получены количественные данные об изменении частоты встречаемости и плотности популяции грибов рода Ма1аззег1а в слуховом канале здоровых животных и больных острыми и хроническими отитами, что демонстрирует роль этих микроорганизмов в патогенезе хронических отитов.

Впервые в РФ получены данные о широкой распространенности Ма1аззег1а-инфекций среди мелких домашних животных, систематизированы их клинические формы, выявлены предрасполагающие факторы.

Показано, что основным возбудителем Ма^ББег^а-инфекций мелких домашних животных в РФ является вид М. расЬуёегтаЙБ.

Впервые был воспроизведен экспериментальный Ма1аззег1а-дерматит при накожном заражении собак.

Практическая значимость.

Разработан алгоритм, выявления грибов рода Макэзегга на покровных тканях животных, одобренный на межлабораторном совещании ФГУ ВГНКИ 05.07.2007 г. и рекомендован к утверждению на Федеральном уровне.

В опытах на лабораторных животных при экспериментальном заражении собак изучен патогенез поверхностных микозов, вызванных этиологическими штаммами М. расЬуёегтаЙБ, дана оценка влияния М. расЬуёегтайз на обменные и иммунные процессы организма животных.

Разработаны и утверждены в установленном порядке методические указания по диагностике микозов животных, вызываемых грибами рода Ма1аз8е21а, которые позволяют рационализировать микологический анализ кожного покрова и слухового канала животных.

Результаты исследований используются в учебном процессе в ФГОУ ВПО МГУПБ, ФГОУ ВПО РУДН, ФГОУ ВПО УГАВМ, ФГОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплинам: «Микробиология», «Биология и патология мелких домашних, лабораторных и экзотических животных».

Основные положения и результаты работы, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения клинической роли грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях животных.

2. Метод лабораторной диагностики Malassezia-инфекций домашних животных.

3. Результаты изучения распространенности, этиологической структуры, клинико-эпизоотологических особенностей Malassezia-инфекций домашних животных.

Заключение диссертационного исследования на тему "Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях животных"

ВЫВОДОВ

Разработанный метод лабораторной диагностики Ма1аБ8ег1а-инфекций животных рекомендуется для использования в ветеринарных лабораториях и ветеринарных клиниках, что позволит существенно повысить выявляемость Ма1аБ5ег1а-инфекций животных.

Метод ватного тампона-зонда рекомендуется для повседневного использования в ветеринарных лабораториях при выявлении грибов рода Ма1а8Бег1а на покровных тканях животных.

Для поддержания и хранения культур М. расЬуёегтаЙБ в лабораторных условиях рекомендуется использование их пересевов на среде Барфатини с интервалом пересевов до 1 мес., криогенное хранение в глицерине (до 3 мес.) и лиофилизация с защитной средой №4 ВГНКИ (хранение до 3 лет).

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2008 года, Ершов, Петр Петрович

1. Аравийский, P.A. Практикум по медицинской микологии /P.A.Аравийский, Г.И.Горшкова.- СПб: Интерпресс, 1995.- 40 с.

2. Арзуманян, В.Г. Дрожжеподобные грибы рода Malassezia (Pityrosporum) /В.Г.Арзуманян, М.А.Мокроносова, В.Б.Гервазиева // Вестн. РАМН.- 1998.- № 5.- С.44-47.

3. Дудка, И.А. Методы экспериментальной микологии /И.А.Дудка, С.П.Вассер, И.А.Элланская,- Киев: Наукова думка, 1982,- 550 с.

4. Кашкин, П.Н. Практическое руководство по медицинской микологии /П.Н.Кашкин, В.В.Лисин.- Л.: Медицина, 1983.- 192 с.

5. Курасова, В.В. Методы исследования в ветеринарной микологии /В.В.Курасова, В.В.Костин, Л.С.Малиновская.- М.: Колос, 1971.- 312 с.

6. Лещенко, В.М. Лабораторная диагностика грибковых заболеваний /В.М.Лещенко.- М.: Медицина, 1982.- 142 с.

7. Мокроносова, М.А. Клинико-иммунологическое изучение дрож-жеподобных грибов Malassezia (Pityrosporum) /М.А.Мокроносова, В.Г.Арзуманян, В.Б.Гервазиева // Вестн. РАМН.- 1998.- № 5.- С. 47-50.

8. Паттерсон, С. Кожные болезни собак /С.Паттерсон.- М: Аквариум, 2000.- 176 с.

9. Реброва, Р.Н. Грибы рода Candida при бактериальных инфекциях /Р.Н.Реброва.- М.: Медицина, 1979.- 254 с.

10. Саттон, Д. Определитель патогенных и условно патогенных грибов /Д.Саттон, А.Фотергилл, М.Ринальди.- М.: Мир, 2001.- 468 с.

11. Феофилова, Е.П. Межклеточные взаимодействия в микробных популяциях как основа современной биотехнологии /Е.П.Феофилова

12. Успехи мед. микологии.- М.: Нац. Акад. микологии.- 2005.- Т. 5.- С. 231232.

13. Цыганко, А.В. Болезни ушной раковины и наружного уха /А.В.Цыганко // Бордоский дог.-СПб, 2003.- Т. 2, №4.

14. Ahman, S. Carriage of Malassezia spp. yeasts in healthy and sebor-rhoeic Devon Rex cats /S.Ahman, N.Perrins, R.Bond // Med Mycol.- 2007.-V.45(5).-P. 449-455.

15. Ainsworth, G. History of medical and veterinary mycology /G.Ainsworth // Cambridge University Press.- Cambridge, 1986.- P. 43-47.

16. Akerstedt, J. Malassezia pachydermatis with special reference to canine skin disease /J.Akerstedt, I.Vollset // Br. Vet. J.- 1996.- V. 152(3).- P. 269281.

17. Angus, J. Otic cytology in health and disease /J.Angus // Vet. Clin. North Am Small Anim. Pract.- 2004.- V. 34(2).- P. 411-424.

18. Ashbee, H. Update on the genus Malassezia /H.Ashbee // Med My-col.- 2007.- V. 45(4).- P. 287-303.

19. Ashbee, H. Immunology of diseases associated with Malassezia species /H.Ashbee, E.Evans // Clin. Microbiol. Rev.- 2002.- V.15(l).- P. 21-57.

20. Aspiroz, C. Differentiation of three biotypes of Malassezia species on human normal skin, correspondence with M. globosa, M, sympodialis and M. restricta /С.Aspiroz, L.Moreno, A.Rezusta // Mycopathologia.- 1999.- V. 145(2).- P. 69-74.

21. Assimilation test of Malassezia furfur isolated from the environment /R.Tanaka, K.Nishimura, K.Kamei, S.Murayama // Nippon Ishinkin Gakkai Zasshi.- 2001.- V. 42(3).- P. 123-126.

22. A semiquantitative cytological evaluation of normal and pathological samples from the external ear canal of dogs and cats /P.Ginel, R.Lucena, J.Rodriguez, J.Ortega//Vet. Dermatol.-2002.- V.13(3).- P. 151-156.

23. Atlas of clinical fungi /G.de Hoog, J.Guarro, J.Gene, M.Figueras //Centraalbureau voor Schimmelcultures / Universität Rovira I Yirgilii, Reus.-Utrecht, 2000,- 1126 p.

24. Attachment of Malassezia pachydermatis to the ear dermal cells in canine otitis externa /A.Masuda, T.Sukegawa, H.Tani, T.Miyamoto // J. Yet. Med. Sei.- 2001. V. 63(6).- P. 667-669.

25. Beck, J. Canine otitis externa: evaluation of clinical classification using cytology and bacteriology /J.Beck, W.Osthold // Vet. Dermatol.- 2000.- V. 11(1).- P. 52.

26. Begerow, D. A phylogenetic hypothesis of Ustilaginomycotina based on multiple gene analyses and morphological data /D.Begerow, M.Stoll, R.Bauer // Mycologia.- 2006.- V.98(6).- P. 906-916.

27. Benham, R. The cultural characteristics of Pityrosporum ovale — a lipophilic fungus /R.Benhman // J. Invest. Dermatol.- 1939.- V. 2.- P. 187-203.

28. Bensignor, E. A multicentre prospective study of otitis externa in France: 802 cases /E.Bensignor, D.Legeay // Vet. Dermatol.- 2000.- V.ll(l).- P. 22.

29. Bernardo, F. A survey of mycotic otitis externa of dogs in Lisbon /F.Bernardo, H.Martins, M.Martins // Rev. Iberoam. Micol.- 1998.- V. 15.- P. 163165.

30. Biofilm development by clinical isolates of Malassezia pachydermatis /F.T.Cannizzo, E.Eraso, P.A.Ezkurra et 1. // Med. Mycol.- 2007.-V.45(4).- P. 357361.

31. Blanco, J. Optimum incubation conditions for the isolation of yeasts from canine otitis externa /J. Blanco, J.Guedeja-Marron, I.Blanco // J. vet. Med.-2000.- V. 47(8).- P. 599-605.

32. Blanco, J. Microbiological diagnoses of chronic otitis externa in the dog /J.Blanco, J.Guedeja-Marron, R.Hontecillas // Zentralbl. Vet. Med.- 1996.- V. 43(8).- P. 475-482.

33. Bliss, E. Tinea versicolor dermatomycosis in the goat /E.Bliss // J. am. Vet. Med. Assoc.- 1984.- V. 184.-P. 1512-1513.

34. Bond, R. Evaluation of a detergent scrub technique for the quantitative culture of Malassezia pachydermatis from canine skin /R. Bond, D.H.Lloyd, J.M.Plummer //Res. Vet. Sci.- 1995.- V.58(2).- P. 133-137.

35. Bond, R. Pathogenesis of Malassezia dermatitis /R.Bond // Advances in vet. Dermatol.- 2002.- V. 4.- P.69-75.

36. Bond, R. Isolation of Malassezia sympodialis from feline skin /R.Bond, R.Anthony, M.Dodd // J. med. Vet. Mycol.- 1996.- V. 34(2).- P. 145-147.

37. Bond, R. Factors associated with elevated cutaneous Malassezia pachydermatis populations in dogs with pruritic skin disease /R.Bond, E.Ferguson,

38. C.Curtis // J. small Anim. Pract.- 1996.- V. 37(3).- P. 103-107.

39. Bond, R. Patch test response to Malassezia pachydermatis in healthy dogs /R.Bond, A.Habibah, J.Patterson-Kane // Med. Mycol.- 2006.- V. 44(2).- P. 175-184.

40. Bond, R. Isolation of Malassezia sympodialis and Malassezia globosa from healthy pet cats /R.Bond, S.Howell, P.Haywood // Vet. Rec.- 1997.- V. 141.-P. 200-201.

41. Bond, R. Comparison of media and conditions of incubation for the quantitative culture of Malassezia pachydermatis from canine skin /R.Bond,

42. D.H.Lloyd // Res. Vet. Sci.- 1996.- V. 61(3).- P. 273-274.

43. Bond, R. Clinical, histopathological and immunological effects of exposure of canine skin to Malassezia pachydermatis /R.Bond, J.Patterson-Kane, D.Lloyd //Med. Mycol.-2004.-V. 42(2).-P. 165-175.

44. Bond, R. Population sizes and frequency of Malassezia pachydermatis at skin and mucosal sites on healthy dogs /R.Bond, L.Saijonmaa-Koulumies, D.Lloyd // J. small Anim. Practice.- 1995.- V. 36(4).- P. 147-150.

45. Breierova, E. Malassezia pachydermatis: properties and storage /E.Breierova, A.Kokova-Kratochvilova, J.Sajbidor // Mycoses.- 1991,- V.34(7-8).-P. 349-352.

46. Breitwieser F. Results of bacteriologic and mycologic investigations of otitis media in dogs /F.Breitwieser // Tierarztl. Prax.- 1997.- V.25(3).- P. 257260.

47. Cafarchia, C. Occurence and population size of Malassezia spp. in the external ear canal of dogs and cats both healthy and with otitis /C.Cafarchia, S.Gallo, G.Capelli // Mycopathol.- 2005.- V. 160(2).- P. 143-149.

48. Cafarchia, C. Frequency, body distribution, and population size of Malassezia species in healthy dogs and in dogs with localized cutaneous lesions /C.Cafarchia, S.Gallo, D.Romito // J. Vet. Diagn. Invest.- 2005.- V.17(4).- P. 316322.

49. Cafarcia, C. Association between phospholipase production by Malassezia pachydermatis and skin lesions /C.Cafarcia, D.Otranto // J. Clin. Microbiol.- 2004.- V.42(10).- P. 4868-4869.

50. Cannon, P. International commission on the taxonomy of fungi (ICTF): name changes in fungi of microbiological, industrial and medical importance /P.Cannon // Microbiol. Sci.- 1986.- V. 3.- P. 285-287.

51. Chang, H. An epidemic of Malassezia pachydermatis in an intensive care nursey associated with colonization of health care workers' pet dogs /H.Chang, H.Miller, N.Watkins // N. Engl. J. Med.- 1998.- V. 338.- P. 706-711.

52. Chengappa, M. Isolation and identification of yeasts and yeastlike organisms from clinical veterinary sources /M.Chengappa, R.Maddux, S.Greer // J. Clin. Microbiol.- 1984.- V. 19(3).- P. 427-428.

53. Chikering, W. Cytologic evaluation of otic exudates /W.Chikering // Vet. clinics of North America.- 1988.- V. 18.- P. 773-782.

54. Comparison of two sampling techniques to assess quantity and distribution of Malassezia yeasts on the skin of Basset Hounds /E.Bensignor, F.Jankowski, W.Seewald, F.Touati // Vet Dermatol.- 2002.- V.13(5).- P. 237-241.

55. Colombo, S. Prevalence of Malassezia spp. in feline nail folds: a cyto-logical study /S.Colombo, L.Cornegliani // Vet. Dermatol.- 2000.- V.l 1(1).- P. 38.

56. Coutinho, S.D. Isolation of Malassezia spp. from cerumen of wild felids /S.D.Coutinho, J.D.Fedullo, S.H.Correa // Med. Mycol.- 2006.- V.44(4).- P. 383-387.

57. Coutinho, S. Proteinase, phospholipase, hyaluronidase and chondro-itin-sulphatase production by Malassezia pachydermatis /S.Coutinho, C.Paula // Med. Mycol.- 2000.- V.38(l).- P. 73-76.

58. Crespo, M. Atypical lipid-dependent Malassezia species isolated from dogs with otitis externa /M.Crespo, M.Abarca, F.Cabanes // J. Clin. Microbiol.- 2000.- V.38(6).- P. 2383-2385.

59. Crespo M. Evaluation of different preservation and storage methods for Malassezia spp. /M.Crespo, M.Abarca, F.Cabanes //J. Clin. Microbial.- 2000.-V.38(10).- P. 3872-3875.

60. Crespo, M. Isolation of Malassezia furfur from a cat /M.Crespo, M.Abarca, F.Cabanes // J. Clin. Microbiol.- 1999.- V. 37(5).- P. 1573-1574.

61. Crespo, M. Occurence of Malassezia spp. in the external ear canal of dogs and cats with and without otitis externa / M.Crespo, M.Abarca, F.Cabanes // Med. Mycol.- 2002.- V.40(2).- P. 115-121.

62. Crespo, M. Occurrence of Malassezia spp. In horses and domestic ruminants / M.Crespo, M.Abarca, F.Cabanes // Mycoses.- 2002.- V. 45(7-8).- P. 333-337.

63. Crespo, M. Otitis externa associated with Malassezia sympodialis in two cats /M.Crespo, M.Abarca, F.Cabanes // J. clin. Microbiol.- 2000.- V. 38(3).-P. 1263-1267.

64. David, M. Unusual ultrastructural characteristics of the yeast Malassezia pachydermatis /M.David, M.Gabriel, M.Kopecka I I Scripta medica.-Brno, 2003.- V. 76(3).- P. 173-186.

65. Dorogi, J. Pathological and clinical aspects of the diseases caused by Malassezia species /J.Dorogi // Acta microbial. Immunol. Hung.- 2002.- V. 49(2-3).- P. 363-369.

66. Drouhet, E. Dermatite experimentale a Pityrosporum ovale et (ou) Pityrosporum orbiculare chez le cabaye et la souris /E.Drouhet, D.Dompmartin, A.Parachristou-Moraiti//Sabouradia.- 1980.- 18.-P. 149-156.

67. Duarte, E. Factors associated with the prevalence of Malassezia species in the external ears of cattle from the state of Minas Gerais, Brazil /E.Duarte, R.Batista, R.Hahn // Med. Mycol.- 2003.- V. 41(2).- P. 137-142.

68. Duarte, E. Prevalence of Malassezia spp. in the ears of asymptomatic cattle and cattle with otitis in Brasil /E.Duarte, M.Melo, R.Hahn 11 Med. Mycol.-1999.-У. 37(3).-P. 159-162.

69. Dufait, R. Pityrosporon canis as the cause of canine chronic dermatitis /R.Dufait//Vet. Med. Small anim. Clin.-1983.- V. 78.- P. 1055-1057.

70. Dufaut, R. Presence de Malassezia pachydermatis (syn. Pitirosporum canis) sur les poils et les plumes d'animaux domestiques /R.Dufait // Bull. Soc. Fr. Mycol. Med.- 1985.-V. l.-P. 19-22.

71. Dworecka-Kaszak, B. Comparison of different methods of maintenance of Malassezia pachydermatis (syn. Pitirosporum pachydermatis) strains /В.Dworecka-Kaszak, F.Toka // Acta microbiol. Pol.- 1996.- V. 45(1).- P. 103-105.

72. Effects of Malassezia isolates on cytokines production associated with melanogenesis by keratinocytes /F.Cui, X.She, X.Li et 1. // Zhongguo Yi Xue Ke Xue Yuan Xue Bao.- 2007.- V. 29(2).- P. 196-200

73. Erchiga, L. Malassezia species in skin diseases /L.Erchiga, V.Crespo, V.Deglabo // Curr. Opin. In skin dis.- 2002.- V. 15(2).- P. 133-142.

74. Faergemann, J. Atopic dermatitis and fungi /J.Faergemann // Clin. Microbiol. Rev.- 2002.- V. 15(4).- P. 545-563.

75. Faergemann, J. Pityrosporum species as a cause of allergy and infection /J.Faergemann // Allergy.- 1999.- V. 54.- P. 413-419.

76. Faergemann, J. Microaerophilic and anaerobic growth of Pityrosporum species /J.Faergemann, S.Bernarder // Sabouradia.- 1981.- 19. P. 117121.

77. Fernandez, G. Isolation and identification of microorganisms present in 53 dogs suffering otitis externa /G.Fernandez, G.Barboza, A.Villalobos //Revista Cientifica.- 2006.- V. 16(1).- P. 23-30.

78. Foster, A. BSAVA manual of small animal dermatology /A.Foster, C.Foil //British small animal vet. association.- Quedgeley, 2003.- P. 175-180.

79. Gabal, M. Preliminary studies on the mechanism of infection and characterization of Malassezia pachydermatis in association with canine otitis externa/M.Gabal // Mycopathologia.- 1988.- V. 104(2).- P. 93-98.

80. Garau, M. Prevalence of Malassezia spp. in healthy pigs /M.Garau, A.del Palacio, J.Garcia // Mycoses.- 2005.- V. 48(1).- P. 17-20.

81. Giusiano, G. Malassezia. Current knowledge and study perspectives /G.Giusiano // Rev. Argent. Microbiol.- 2006.- V. 38(1).- P. 41-48.

82. Grono, L. Observations on the incidence of otitis externa in the dog /L.Grono //Aust. Vet. J.- 1969.- V. 45(9).- P. 417-419.

83. Gueho, E. The genus Malassezia with description of four new species /E.Gueho, G.Midgley, J.Guillot // Antonie Van Leeuwenhoek.- 1996.- V. 69(4).- P. 337-355.

84. Gueho, E. Association of Malassezia pachydermatis with systematic infections in humans /E.Gueho, R.Simmons, W.Pruitt // J. clin. Microbiol.-1987.-V. 25.-P. 1789-1790.

85. Guillot, J. Malassezia pachydermatis: a review /J.Guillot, R.Bond // Med. Mycol.- 1999.- V. 37(5).- P. 295-306.

86. Guillot, J. Prevalence du genre Malassezia chez les mammiferes /J.Guillot, R.Chermette, E.Gueho // J. mycol. med.- 1994.- V. 4.- P. 72-79.

87. Guillot, J. Could Malassezia dermatitis be diagnosed in animals other than pet carnivores /J.Guillot, A.Poujade-Delverdier, L.Boulouha // Vet. Dermatol.- 2000.- V.ll(l).-P. 38.

88. Gupta, A. Skin diseases associated with Malassezia species /A.Gupta, R.Batra, R.Bluhm // J. Am. Acad. Dermatol.- 2004.- V. 51(5).- P. 785-798.

89. Gupta, A. In vitro susceptibility of seven Malassezia species to keto-conazole, voriconazole, itraconazole and terbinafme /A.Gupta, Y.Kohli, J.Faergemann //Br. J. Dermatol.- 2000.- V. 142(4).- P. 758-765.

90. Gupta, A. Quantitative culture of from different body sites of individuals with or without dermatoses /A.Gupta, Y.Kohli, R.Summerbell // Med. Mycol.- 2001.- V. 39(3).- P. 243-251.

91. Gustafson, B. Otitis externa in the dog. A bacteriological and experimental study /B.Gustafson / Royal vet. College.- Stockholm, 1955.

92. Habibah, A. Canine serum immunoreactivity to M. pachydermatis in vitro is influenced by the phase of yeast growth /A.Habibah, B.Catchpole, R.Bond // Vet. Dermatol.- 2005.- V. 16(3).- P. 147-152.

93. Hammer, K. Precipitate production by some Malassezia species on Dixon's agar /K.Hammer, T.Riley // Med. Mycol.- 2000.- V. 38(2).- P. 105-107.

94. Hazen, K. New and emerging yeast pathogens /K.Hazen // Clin. Microbiol. Rev.- 1995.- V. 8(4).- P. 462-478.

95. Higher incidence of Malassezia pachydermatis in the eyes of dogs with corneal ulcer than in healthy dogs /M.Prado, E.Brito, M.Girao et 1. //Vet. Microbiol.-2004.- V. 100(1-2).-P. 115-120.

96. Hungerford, L. Veterinary mycology laboratory manual /L.Hungerford, C.Campbell, A.Smith // Iowa State University Press.- 1998.- 75 p .

97. Identification and distribution of a novel Malassezia species yeast on normal equine skin /A.Nell, S.James, C.Bond et 1. // Vet Rec.- 2002.- V. 150(13).-P. 395-398.

98. Quantity and distribution of Malassezia organisms on the skin of clinically normal dogs /R.Kennis, E.Jr.Rosser, N.Olivier, R.Walker // J. am. Vet. Med. Assoc.- 1996.V. 208(7).- P. 1048-1051.

99. Kennis, R.A. Quantity and distribution of Malassezia organisms on the skin of clinically normal dogs /R.A.Kennis, E J.Jr.Rosser, N.B.Olivier // J. Am. Vet. Med. Assoc.- 1996.- V.208(7).- P. 1048-1051

100. Kesavan, S. The effects of lipid extraction on the immunomodulatory activity of Malassezia species in vitro /S. Kesavan, K.Holland, E.Ingham //Med Mycol.- 2000.- V. 38(3).- P. 239-247.

101. Keyworth, N. Swab-wash method for quantitation of cutaneous microflora /N.Keyworth, M.Millar, T.Holland // J. Clin. Microbiol.- 1990.- V. 28(5).- P. 941-943.

102. Kiss, G. Characteristics of Malassezia pachydermatis strains isolated from canine otitis externa /G.Kiss, S.Radvanyi, G.Szigeti // Mycoses.- 1996.-V.39(7-8).- P. 93-95.

103. Kligman, A. The periodic-acid-schiff stain for the demonstration of fungi in animal tissue /A.Kligman, H.Mescon // J. bacter.- 1950.- V. 60.- P. 415421.

104. Kumar, A. Prevalence of Malassezia pachydermatis and other organisms in healthy and infected dogs ears /A.Kumar, K.Singh, A.Sharma // Israel journal of Vet. Med.- 2002.- V. 57(4).- P. 37-40.

105. Kuttin, E. Mycotic otitis externa in animals /E.Kuttin, I.Glas // Mykosen.- 1985.- V. 28.- P. 61-65.

106. Leeming, J. Improved methods for isolation and enumeration of Malassezia furfur from human skin /J.Leeming, F.Notman // J. Clin. Microbiol.-1987.- V. 25(10).- P. 2017-2019.

107. Lodder, J. N. Pitirosporum /J.N.Lodder, Kreger-Van Rij // C. Kurtz-man, J. Well. The yeasts: a taxonomic study.- Amsterdam: North-Holland Publishing Co, 1952.- P. 440-445.

108. Lorenzini, R. Studies on the isolation, growth and maintenance of Malassezia pachydermatis /RXorenzini, F. de Bernardis // Mycopathologia.-1987.-V. 99(2).-P. 129-131.

109. Lorenzini, R. Comparison of various media and various methods for the growth and isolation of Pityrosporum pachydermatis /R.Lorenzini, F. de Bernardis, F.Fratoni //Boll. Soc. Ital. boil. Sper.- 1984.- V. 60(2).-P. 351-354.

110. Malassezia Baillon, emerging clinical yeasts /R.Batra, T.Boekhout, E.Gueho, F.Cabanes, T.Dawson // FEMS Yeast Res.- 2005.- V.5(12).- P. 11011113.

111. Malassezia furfur invasiveness in a kerati nocyte cell line (HaCat): effects on cytoskeleton and on adhesion molecule and cytokine expression /A.Baroni, B.Perfetto, I.Paoletti, E.Buommino // Arch. Dermatol. Res.- 2001.- V. 293(8).- P. 414-419.

112. Malassezia furfur in a case of onychomycosis: colonizer or etiologic agent /A.Chowdhaiy, H.S.Randhawa, S.Sharma, M.E.Brandt // Med. Mycol.-2005.- V. 43(1).- P. 87-90.

113. Malassezia nana sp. Nov., a novel lipid-dependent yeast species isolated from animals /A.Hirai, R.Kano, K.Makimura, E.Duarte // Int. j. syst. Evol. Microbiol.- 2004. V. 54(2).- P. 623-627.

114. Malassezia pachydermatis isolated from normal and diseased external ear canals in dogs: A comparative analysis /M.Girao, M.Prado, R.Brilhante et 1. // Vet. J.- 2005.- V. 9.

115. Mancianti, F. Extracellular enzymatic activity of Malassezia spp. Isolates /F.Mancianti, A.Rum, S.Nardoni // Mycopathologia.- 2001.- V. 149(3).- P. 131-135.

116. Mansfield, P. Infectivity of Malassezia pachydermatis in the external canal of dogs /P.Mansfield, T.Boosinger, M.Attleberger // J. Am. Anim hosp. Assoc.- 1990. V. 26.- P. 97-100.

117. Marcon, M. Human infections due to Malassezia /M.Marcon, D.Powell //Clin. Microbiol. Rev.- 1992.- V. 5(2).- P. 101-119.

118. Matousek, J. Evaluation of the effect of pH on in vitro growth of Malassezia pachydermatis /J.Matousek, K.Campbell, I.Kakoma // Can. J. Vet. Res.- 2003.- V. 67(1).- P. 56-59.

119. Mauldin, E. Retrospective study: the presence of Malassezia in feline skin biopsies. A clinicopathological study /E.Mauldin, D.Morris, M.Goldschmidt // Vet. Dermatol.- 2002.- V. 13(1).- P. 7-13.

120. Mayser, P. Differentiation of Malassezia species: selectivity of cre-mophor EL, castor oil and ricinoleic acid for M. furfur /P.Mayser, P.Haze, C.Papavasssilis //Br. J. Dermatol.- 1997.- V. 137(2).- P. 208-213.

121. Mayser, P. Growth requirements and nitrogen metabolism of Malassezia furfur /P.Mayser, A.Imkampe, M.Winkeler // Arch. Dermatol. Res.-1998. V. 290.- P. 277-282.

122. Mayser, P. Different utilization of neutral lipids by Malassezia furfur and Malassezia sympodialis /P.Mayser, M.Pickel, P.Haze // Med Mycol.- 1998.-V.36(l).- P. 7-14.

123. Mayser, P. Hydrolase activity of 150 Malassezia furfur isolates of different clinical origin /P.Mayser, C.Scheurer, C.Papavasssilis//Mycoses.- 1996.-V. 39(5-6).- P. 225-231.

124. Mayser, P. Further characterization of pigment-producing Malassezia strains /P.Mayser, A.Tows, H.Kramer // Mycoses.- 2004. V. 47(1-2).- P. 34-39.

125. McEwan, N. Malassezia and Candida infections in bull terriers with lethal acrodermatitis /N.McEwan // J. small Anim. Pract.- 2001.- V. 42(6).- P. 291297.

126. Midgley, G. The lipophilic yeasts: state of the art and prospects /G.Midgley // Med. Mycol.- 2000. V. 38(1).- P. 9-16.

127. Mittag, H. Fine structural investigations of Malassezia furfur. II. The envelope of the yeast cell /H.Mittag // Mycoses.- 1995.- V. 38.- P. 13-21.

128. Moretti, A. Malassezia yeast in the external ear canal of healthy dogs and cats /A.Moretti, D.Pergilli-Fioretti, G.Tacconi // World veterinary congress 27th, Tunis. Book of abstracts .- 2002.- P. 161.

129. Morris, D. Malassezia dermatitis and otitis /D.Morris I I Vet. Clin. North. Am. Small anim. Pract.- 1999.- V. 29(6).- P. 1303-1310.

130. Morris, D. Malassezia pachydermatis carriage in dog owners /D.Morris, K. O'Shea, F. Shofer // Emerging infect. Dis.- 2005.- V. 11(1).- P. 8388.

131. Nakabayashi, A. Identification of Malassezia species isolated from patients with seborrhoeic dermatitis, atopic dermatitis, pityriasis versicolor and normal subjects /A.Nakabayashi, Y.Sei, J.Guillot // Med. Mycol.- 2000.- V. 38(5).- P. 337-341.

132. Nakagaki, K. Malassezia pachydermatis isolated from a south american sea lion (Otaria byronia) with dermatitis /K.Nakagaki, K.Hata, E.Iwata // J. vet. Med. Sci.- 2000.- V. 62(8).- P. 901-903.

133. Nardoni, S. Isolation of from healthy cats and cats with otitis /S.Nardoni, F.Mancianti, A.Rum // J. feline med. Surg.- 2005.- V. 7(3).- P. 141145.

134. Nuttall, T. Serum antibodies to Malassezia yeasts in canine atopic dermatitis /T.Nuttall, R.Halliwell // Vet. Dermatol.- 2001.- V. 12.- P. 327-332.

135. Padilha-Goncalves, A. A single method to stain Malassezia furfur and Corynebacterium minutissimum in scales /A.Padilha-Goncalves // Rev. Inst. Med. Trop. San Paulo. -1996.- V. 38(4).- P. 299-302.

136. Patterson, A. How to diagnose and treat Malassezia dermatitis in dogs /A.Patterson, L.Frank // Vet. Med.- 2002.- P. 612-622.

137. Pechere, M. A simple quantitative culture of Malassezia spp. In HIVpositive persons /M.Pechere, C.Remondat, C.Bertrand // Dermatology.- 1995.- V. 191(4).- P. 348-349.

138. Pin, D. Seborrhoeic dermatitis in a goat due to Malassezia pachydermatis /D.Pin // Vet. Dermatol.- 2004.- V. 15(1).- P. 53-56.

139. Pinter, L. Stomatitis, pharyngitis and tonsillitis caused by Malassezia pachydermatis in a dog /L.Pinter // Vet. Dermatol.- 1998.- V. 9(4).- P.257-259.

140. Pinter, L. Apparent cross-infection with a single strain of Malassezia pachydermatis on a pig farm /L.Pinter, R.Anthony, N.Glumac // Acta Veterinaria Hungarica.- 2002.- V. 50(2).- P. 151-156.

141. Plant, J. Factors associated with and prevalence of high Malassezia pachydermatis numbers on dog skin /J.Plant, W.Rosenkrantz, C.Griffin //J.Am Vet. Med. Assoc.- 1992.- V. 201(6).- P. 879-82.

142. Plotkin, L. Characterization of the lipase activity of Malassezia furfur /L.Plotkin, L.Squiquera, I.Mathov // J. Med. Vet. Mycol.- 1996.- V. 34(1).- P. 4348.

143. Porro, M. Induction of hyphae in cultures of Pityrosporum by cholesterol and cholesterol esters /M.Porro, S.Passi, F.Caprili // J. Invest. Dermatol.-1977.- V. 69.- P. 531-534.

144. Prevalence of Malassezia spp. yeasts in feline nail folds: a cytological and mycological study /S.Colombo, S.Nardoni, L.Cornegliani, F.Mancianti // Vet. Dermatol.- 2007.- V. 18(4).- P. 278-283.

145. Preziosi, D. Distribution of Malassezia organisms on the skin of unaffected psittacine birds and psittacine birds with feather-destructive behavior /D.Preziosi, D.Morris, M.Johnston // J. Am. Vet. Med. Assoc.- 2006.- V. 228 (2).-P. 216-221.

146. Raabe, P. Demonstration of Malassezia furfur and M. sympodialis together with M. pachydermatis in veterinary specimens /P.Raabe, P.Mayser, R.Weiss //Mycoses.- 1998.- V. 41(11-12).- P. 493-500.

147. Radi, Z. Outbreak of sarcoptic mange and malasseziasis in rabbits (Oryctolagus cuniculus) /Z.Radi // Comp. Med.- 2004.- V. 54(4).- P. 434-437.

148. Ran, Y. Lipase of Malassezia furfur: some properties and their relationship to cell growth /Y.Ran, T.Yoshiike, H.Ogawa // J. Med. Vet. Mycol.-1993.- V.31(l).- P. 77-85.

149. Rausch, F. Incidence and treatment of budding yeast in canine otitis externa /F.Rausch, G.Skinner//Modern Vet. Pract.- 1978. V. 59.- P. 914-915.

150. Riciputo, R. Phospholipase activity in Malassezia furfur pathogenic strains /R.Riciputo, S.Oliveri, G.Micali //Mycoses.- 1996. V. 39(5-6).- P. 233-235.

151. Rodriguez-Valero, S. Phenotypic characterization of species of Malassezia in healthy skin of an university student population /S.Rodriguez-Valero, L.Mesa, E.Gonzalez-Moran // Invest. Clin.- 2005. V. 46(4).- P. 329-335.

152. Rosenberg, E. Effect of topical applications of heavy suspensions of killed Malassezia ovalis on rabbit skin /E.Rosenberg, P.Belew, G.Bale //Mycopathologia.-1980.- V. 72.-P. 147-154.

153. Rosychuk, R. Management of otitis externa /R.Rosychuk // Vet. clinics of North America.- 1994.- V. 24.- P. 921-952.

154. Salkin, I. Pityrosporum pachydermatis in a black bear (Ursus ameri-canus) /I.Salkin, M.Gordon, W.Stone // Sabouraudia.- 1978.- V. 16(1).- P. 35-38.

155. Sanguinetti, V. A survey of 120 isolates of Malassezia (Pityrosporum) pachydermatis. Preliminary study V.Sanguinetti, M.Tampieri, L.Morganti //Mycopathologia.- 1984.- V. 85(1-2).- P. 93-95.

156. Senczek, D. Characterization of Malassezia species by means of phe-notyping characteristics and detection of electrophoretic karyotypes by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) /D.Senczek, U.Siesenop, K.Bohm //Mycoses.- 1999.-V. 42(5-6).-P. 409-414.

157. Sharma, V. The occurrence and microbiology of otitis externa in the dog /V.Sharma, H.Rhodes // J. small Animal Practice.- 1975.- V. 16.- P. 241-247.

158. Shibata, N. Isolation, characterization and molecular cloning of a lipolytic enzyme secreted from Malassezia pachydermatis /N.Shibata, N.Okanuma, K.Hirai // FEMS Microbio.l Lett.- 2006.- V. 256(1).- P. 137-144.

159. Sierra, P. Fungal flora on cutaneous and mucosal surfaces of cats infected with feline immunodeficiency virus or feline leukemia virus /P.Sierra, J.Guillot, H.Jacob // Am. J. Vet. Res.- 2000.- V. 61(2).- P.158-161.

160. Study of lipid in the ear canal in canine otitis externa with Malassezia pachydermatis /A.Masuda, T.Sukegawa, N.Mizumoto, H.Tani // J. Vet. Med .Sci.-2000.-V. 62(11).-P. 1177-1182.

161. Tarazooie, B. Study of the distribution Malassezia species in patients with pityriasis versicolor and healthy individuals in Tehran, Iran /B.Tarazooie, P.Korbacheh, F.Zaini // BMC Dermatol.- 2004.- V. 4(5).- P. 25-31.

162. Tween 40-based precipitate production observed on modified chro-mogenic agar and development of biological identification kit for Malassezia species /T.Kaneko, K.Makimura, T.Sugita, H.Yamaguchi // Med. Mycol.- 2006.- V. 44(3).- P. 227-231.

163. Two new lipid-dependent Malassezia species from domestic animals /F.Cabanes, B.Theelen, G.Castella, T.Boekhout // FEMS Yeast Res.- 2007.- V. 16.

164. Viability of Malassezia pachydermatis strains maintained in various storage mediums /M.Girao, M.Prado, R.Brilhante et 1. // Rev. soc. Bras. Med. Trop.- 2004.- V. 37(3).- P. 229-233.

165. Vital growth factors of Malassezia species on modified CHROMagar Candida /T.Kaneko, K.Makimurat, M.Onozaki et 1. // Med Mycol.- 2005.- V. 43(8).- P. 699-704

166. Wagner, D. Cutaneous defenses against dermatophytes and yeasts /D.Wagner, P.Sohnle // Clin. Microbiol. Rev.- 1995.- V. 8(3).- P. 317-335.

167. Weiss, R. Yeasts of the genus Malassezia: taxonomic classification and significance in (veterinary and) clinical medicine /R.Weiss, P.Raabe, P.Mayser//Mycoses.- 2000. V. 43(1).- P. 69-72.

168. Wikler, J. The 'tape-method': a new and simple method for quantitative culture of Pityrosporum yeasts /J.Wikler, P.de Haan, C.Nieboer // Acta Derm. Venerol.- 1988.- V. 68(5).- P. 445-449.

169. Xiong, L. Application of methylene blue staining in detection of Malassezia /L.Xiong, Y.Dai // Sichuan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban.- 2004.- V. 35(2).- P. 277-229.

170. Yarrow, D. Methods for isolation, maintanence and identification of yeasts /D.Yarrow.- In: Kurtzman C., Fell J. The yeasts, a taxonomic study.- Elsevier, Amsterdam.- 1998.- P. 77-100.