Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эпизоотология, этиология, фаготерапия и специфическая профилактика анаэробной энтеротоксемии телят в хозяйствах Ульяновской области

На правах рукописи

Я;

"о

Л/

Казимир Александр Николаевич

эт^оотолсш, этиолоп1я, фаготерапия и 01шшич2ская профилактика анаэробной уи'геротоксыяп! ешт в хозяйствах улыновскол селаста

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология р иммунология

Автореферат

диссертации но соискание ученой степени кандидата ветгринарнйх наук

Казань 1997

Работа выполнена не кафедре терапии, клинической диагностики^ болезней молодняка Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии и на кайедре впизоотологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени ll.ci.Eayi.iaHa.

Научные руководители Г доктор ветеринарных наук, профессор П.П.ХАЯРУ-'ШЩ

доктор ветеринарных наук, ; ! профессор ы.А.САйШ :. ;;.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Р.Г.ГООиАНОВ

доктор медицинских наук, профессор О.К.ИОЬдШЗ

Ведущая организация:.Всероссийский научно-исследоватсль-.ский ветеринарный институт (г.Казань)

¡Защита состоится & декабря 199/ года в /3 часов на заседании диссертационного совета Д-120.22.01 при Казансгой государственной академии ветеринарной медицины им. Н.У.Ьаумана (4200/4, Казань, ул. Сибирский тракт,35). .

С диссертацией мояио ознакомиться в библиотеке КазаисгоИ государственной акадешш ветеринарной медицины им. И.Э.Ьаумана.

Автореферат разослан /& 159/ года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доцент -

В.Е.ЧЕБОТАРЕВ

I. ОБШ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Результаты исследований, проведенные в последние годы как у нас в стране, так и за рубеяом, свидетельствуют о широком распространении анаэробной энтеротоксеыии телят в различных регионах В.Н.Алеи-кевич,1992). Причем поражается в основном молодняк раннего возраста в тех хозяйствах, где нарушаются зоогш девические условия содержания и кормления животных.

Экономический ущерб, причиняемый этой инфе.гцией животноводству, очень значителен (Л.В.Кириллов,198'/; К.Р.Ургуев,1987; П.Н.лзйруллин,1991). Этиологический фактор этого заболевания -микроорганизмы Клостридпум перфрингенс

типов А, в,0,р ,Е. Одной из основных причин широкого распространения инфекций йнляется несовершенство диагностических методов и средств, а также отсутствие достаточно эффективных препаратор для специфической профилактики и лечения {V. г-еу/'г? ,1981; П.Д.Устарха-нов,1990; ¡1.Н.лайруллин,1991 и др.). Все это обуславливает необходимость изыскания и разработки более свершенных биологических препаратов против анаэробной энтеротоксемии телят - Яагодаагноо-тики, ("аготерагои п (Фагопрофилактики.

Хактериофагн, как установлено, обладают высокой специфи I-ность:-, в большинстве своем не оказывает отрицательного влияния на организм .тавотных. Примэнение их исключает возникяовония дио-бактериоза и не влияет на экономическую ценность получаемой продукции (П.А.1'акулов,1980; В.Я.ГаНШКИН,1984; Н.Н.Кружнов,1£91).

цели и задачи исследования. I. Изучить эпизоотология анаэробной энтеротоксешш телят в условиях хозяйств Улыяовокой области.

2. Определить этиологический Фактор, бпологическле овойсгва выделенных культур.

3. Разработать эффективные лечебно-профилактические препараты - бактериофаги и ГОЛ - формолвакцину против этой инфекции.

задачи исследования: I, Выделить перфрингено - фаги из патологического материала, различных субстратов внешней среда и провести их ТИПИЗРОДГ,

2. Изыскать бактериофаг и испытать его лечебно-профилактические свойства при анаэробной энтеротокоемии телят в хозяйствах Ульяновской области.

3. Из вчделснных культур /iftfic/Wffrrmnoü А и С сконструировать ГШ - форыслвакцину и провести её производственное иопнтпнив.

Ьатчная новизна. I. Выделены бактериофага возбудителей анаэробной энтеротокоемии крупного рогатого скота.

2. Определены биологические свойства бактериофагов и установлена возможность их применения с лечебно-профилактической целью.

3. Сконструирована ГОА - формолвакцина против анаэробной энтеротокоеиии телят.

Теоретическая и практическая ценность работы. Результата исследований могут служить научно-практической основой для про-гедеьия целенаправленных исследований по изысканию перфрингенс-фагов, обладающих специфичностью, активным взаимодействием с бактериальный хозяином в созданию высокоэффективных вакцин против анаэробной энтеротокоеши телят.

Препараты перфрянгено - фагов типов А и С опробироваиы и депонированы во Воеоавзноы Государственном научно-контрольном институте.

Исготовчен бактериофаг и ГОА - формолвакцина против анаэробной антвротоксемия телят, которые успешно применяются в хозяйствах Ульяновске*! области.

Разработана и утг.ерждена 1УВ СССР нормативно-техническая документация по перфрингено - фагу.

Основные положения, выносимые на защиту. I. Выделенные бактериофага ¿^Г Z+f типов А и С облапают высокой специфичностью, широким спектром литического действия и значительной устойчивостью к воздействию различных физико-химических факторов.

2. Сконструированные препарат-бактериофаг и ГОА-фюрмолвакцияа обладают высокой лечебно-профилактической эффективностью при анаэробной энтеротоксемии телят.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на трех научно-производственных конференциях и на расширенном заседании кафедры терапии, клинической диагностики и болезней молодняка Ульяновской государственном сельскохозяйственной академии с участием представителей ветеринарного отдела Ульяновской области.

Публикации. По теме диссертации опубликова 5 работ и "Методические указания по профилактике и лечению пастереллеза, анеэроб-ной энтеротоксемии и смешанных инфекций молодняка сельскохозяйственных .тавотных о применением специфических вакцин и бактериофагов". Основные материалы исследований защищены авторским свидетельством, зарегистрированным Государственным реестром изобретении COUP Jê 1686838 на изобретение: "Штамм фага бактерий типа А для типизации и дифференциации выделенных культур гак-рооо-ганизиов". Приоритет изобретения 28 ноября 1909 года.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 99 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственнее исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Работа содергсит II таблиц, 5 фотографий. Указатель литературы включа т 162 источника, из них 116 отечественных авторов и 46 иностранных.

2. С О Б С Т В Е 11 Н Ы Е ИССЛЕДОВАНИЯ 2,1. МАТЕРИАЛ И ЦЕГОДН Исследования проведены на базах кафедр терапии, юшничеокой диагностики и болезней молодняка Ульяновской ГСХА, на кафедре эпизоотологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины, Ульяновской областной ветеринарной лаборатория и в неблагополучных по анаэробной энтеротоксемии телят хозяПотвах Ульяновской области. В опытах использовали 30 белых лабораторных мышей, Ю кроликов и 4 голов телят. При проведении исследований ру-ководствоталпсь слодувгщш иотодакааа: ¡икооотолотчоекую ситуацию по анаэробной энтеротоксемчи тедят определяли по анализу динамики эпизоотол отческих показателей Ульяновской области, д'ш этого была собраны годовые данные по этой инфекции за гг.

Бактериологпчаокие и токсикологические исследования проводили согласно "Методическим указаниям" по лабораторной диагностике инфекционной энтеротоксемии животных (Утвергсдешшх главным управлением • ветеринарки Шшсельхоз.з СССР 15 Февраля 1984 года).

Выделенные культуры подвергали токсикологическому исследованию в реамуш нейтрализации токсина диагностическими типоспеци^и-че'скш.а антитоксическими сыворотками. Штаммы идентифицировали общепринятыми методам по морфологотинкториальным и культурально-биохимичесним свойствам с использованием определителей Д.Бердяш (1936,195?), Р.А.Циона (1948), И.А.Красильникова (1949). „юрфоло-гию бс,.<теркА изучали в мазках,изготовленных из 18-часовых культур, окрапепках по Грамму. Для подтверждения результатов идентификации Клосридиум перфрингенс, выделенные штаммы отправлял! в областную ветеринарную лабораторию. Выделение бактериофага из патологического материала и различных субстратов ииинэй среду осуществляли по обеептжиятой методике, разработанной О.Д.йррель (19^5), »1.Адаме, (1901), Д.М.Гсоьд^арб (1961). С целью изучения биологических свойств бактериофагов Клострициум пертрингснс использовали несколь-

- б -

но методов:

1. Рассев культур методом Гранля (двухслойный агар).

2. Рассев культуры методом Грация о использованием индикаторной культуры.

3. Метод перекрестных культур.

Для определения активности перфрингенс - бактериофагов чс-пользовали общепринятые методы: по количеству жизнеспособных фаговых частиц, методом агаровых слоев по Грэцпа и по лптпчсскопу дейотвпп фагов методом Лдпельмача. Изготовление РОА—т,ормалвакцшш осуществляли по методике, описанной В.И.Солокатипнм (1973).

Экономическую эффективность разработанных препаратов определяли по общепринятой методике: "..¡етодике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий" (утвержденной Г/В МСХ СССР 4 мая IS8S года).

Кзготоштспие лочебно-псрУялактического бактпрпо.Тага против анаэробной пнтвротокмгсп талят я попнтаппо его в птолзвод-

13 опытах разработаны м были использованы штпш ¡Тагов А-5 л • C-I, которые обладали ло сравнению с другими зддплвптод пер[рил-гоис-<Т.эга!.а более вырзквшвдя яшчэокпм доГязтбпсм в отяозонпп онязоотяческах птш«ов, И'сояой репродуктлзностыо и адсорбтдаонго" способностью, а тэш-.е коротким периодом спутрпклоточкого рэзштчя. Перед применением ех испытывали на стерильность, безвредность путг-поезгя на питательные среды и вводешш опнтчим рдвотнт (12 краткой, 25 белых мн!?ей). Определение лочэбло-про^илактпчегкой эффективности бзктеряо^ахя проводили в четырех хозяйствах Ульяновской области, неблагополучны:' по это!! япгХбкдии (ем. Гая, "Ротанг-кГ-нй", "ОаЕолпснии","Путъ г: коммунзгму") па 12 телятах. Г'зяохнао б^ля разделены на 2 группы - опнтнуп и контрольную (ссэтвохсгвониг по 3 аивотпнх н каядом хозяйства). Полонптелы?!« результаты олнтоз послугалп основанием дая сирояого применения этих препаратов

- 6 -

Против аелудочно-кишечных заболеваний животных.

IMiiLLDL^lHS-Silääl®^

Изготовление препарата осуществляли по методика, описанной В.И. Соломатиным /1973^ с некоторой модификацией: выращивание культуры Клостридиум гтрфр.шпшс типов Л и С проводили б течение

8 ч.

Сценку эффективности препарата осуществляли прадьарлтелыю в лабораторных условиях на 8 кроликах и 4 телятах. После получения положительных результатов,опыты,по испытанию npenapaia оыли проведены в неблагополучных по анаэробной эчтеротоксемии хо..-шст--вах /льяновской области.

Установленные высокие профилактические свойства ГСЛ-фо^.ол-вакцины и ее безвредность являлись основанием для широкого использования ев во многих хозяйствах Ульяновской области, неблагополучных по этой иифеыш.

Результаты подв.!.,гли статистической обработке /И.ъеили,1962/.

3. РЕЗУ; bTATU ИССЛЕДОВАНИЙ '

хозяйствах Ульяновской области

Как показывает литературные данные, алазребпая энтсротакас-мия животных регистрируе'- ся во многих регионах нашей страны и за рубежом / Ф.Ц. Каган, 1901; В.П. Урбан и др., 1984; И.И. Лайрул-лин, 1991; A.B. Алешкевич, 1992 и др./.

Согласно результатам наши" исследований, а также Данным анализа официальной статистической отчетности, эта янфекшш имеет

umjx.KOo распространение и в хозяйствах Ульяновской области. Поэтому лроол..т екпп.нсЛ борьбы с неэ в этом решено яьлне.сн очень актуальной. В связи с этим перед на..и и была поставлена за-

дача выявить особенности возникновения и распространения инфекции в различных хозяйствах области, определить ведущий этиологический фактор в патогенезе заболевания телят анагробной знтеро-токсемией, выделять из патматерпала павших животных и различных субстратов внешней орода возбудитель зтой болезни.

Результаты исследований, проведенных в хозяйствах Ульяновской области показали, что, как правило, шлея каблюцали у жг.во:-!шх в самом раннем постнатальпсм периоде - от 3-до 10-днешого возраста и многие из них длительное время оставались неблагополучными по этой инфекции (совхоз имени Кзя, "Волга", "Роданекий", "Красная звезда", "Красный черемшан" и другие). Степень распространения заболевания определялась кек возрастным, так а сезонным фактором. Характерно, что в последние годы в круговорот инфекции стали более широко вовлекаться и животные, более стар-еих возрастов. Причем, если пик заболеваемости несколько лет назад падал на зимний период, то в настоящее время большой процент падеяа тавотных, особенно молодняка в первые дни яизни, отмечается в осенний и весенний периоды. Это во многом обуслов-лпваетсся неполнотой п песглевремолностьи прояснения ветерикзр-яо-санитарных мероприятий. Для выявления эпизоотических' штаммов возбудителя проводили Ззктериологаческаэ исследования патологического материала от мших телят (п=40) п проб еотестгззл-ннх оуботратой внеияей ореда (п=62). Их результаты о гадатель ст-вуют, что возбудитель зчаэдобяой знтеротоксемпя пи роя о циркулирует в объектах даепней среда (табл. 3.1*1.).

3.1,1, Частота выделлемости возбудителя анаэробной энтеро-тсксемии из органов павших телят и субстратов внешней среди различных хозяйства? Ульяновской области.

Название ! 1 материала Кол-во исследу-мых проб , Выделено 1 культур 1 Кл.перф-рнгенс , Отнесены к типу | С ! 1 Нетокси-1 генные

1.Органы пав- ! ших телят /содержимое кишечника,брыжеэч цые л/,; злы/ 58 48 24 12 10

2. Субстраты внешней среды /сточные воды, каловые массы, почва/ 62 51 И 3 17

Из таблицы явствугт, что частот^ выделения Клостридиум перфрингенс во всех исследуемых источниках довольно ьисока. Примечательно, что наибольший процент выделения из патологического • материала возбудител : болезни приходилось на пробы, взятие нередко не только из с'.'йшюдарно неблагополучных, но и вновь регистрируемых по этой инфекции хозяйатв.

Сопоставляя результаты наших исследований с литературными данными можно в заключение отметить, что увеличение надежа телят в более ранние возрастные периоды - повсеместное явление /P.A. Кадыков и др., 1987/.

Исследованиями, проведенным» нами, установлено, что в этиологической структуре заболеваемости анаэробной энтеритоксемивй опрзцпллюшим фактором является возбудитель Клострвдиум пирфрик- » гене типов А и С. Другие штаммы этого возбудитечя в наших исслепокатлх н? проявляли выраженных патогенных свойств.

^¿21_йк£эл£ий,:_4аЕМ_1й1йстрадп^ ¡¡арфршшаас-иа 90ьектов_пнещней_ерйлй_д_и2_1ипизаш1а

Несмотря на то, что частота выявления возбудителя анаэробно;! знтеротоксемии телят в различных естественных субстратах, как установлено в наших опытах, очень значительна, выделение нерфрнн-гонс-фагов оказалось достаточно сложной задачей, трудность решения которой обуславливалось прекде всего биологическим." особенностей :ЗТИХ МИКРООРГАНИЗМОВ.

Результаты наших исследования показали, что перфрингенс-фаги Вм'цшы.отсм из многих естестяэн'ых лоточников. дЗсего из 62 проб вш1£лоно 15 изоляторов пэрррингенс-фагов типа А и С /табл. ¿.¿4-/

Л.^Дчастота выделения перфрингенс-фагов различных типов из репных естественных субстратов

Название члт --¡риала

Кол-во иссле-)

_Пдр|рингенс-1заги_тииоБ___

! дуемых проб |______В____X___С____

I

| в ! ! в 1 % ! в I % ! л ! %

1.СТОЧ1ШО коды животниводчес-ких ••;ог!Ч'.1;:тв

2,.'люяи а часе и

толя? пз разних хоз-в

З.Но'па с тор-;.нгор.п ЧНВСТ-|.!ОП1,/;-|'!С1;;!Г. и .|'Г'"Н:Г< лагеря;!

'Л 1СГС

30

17

15

С2

4 1Л,3 -

4 27,0 11 19,3

2 6,7 -

3 17,6 - - 1 5,8

1 6,7 -

4 3,48

данные та^лигш свидогольсгпуют, что частота в.:деленгч пер-¿рчмг'жс-иагов находятся в зависимости как от их типа, так и пипа источника [«.деления. Например, пврфрингеис-фаг типа А ш полей из печч.; территории кпвстноволческих хозяйств в 27/5 случаев

тип С - 6,7%, из каловых масс соответственно в 17,6 и 5,8а, из сточных вод животноводческих хозяйств 13,3 и 6,7,« случаев.

Подавляющее больлинство выделенных дорфриагенс-фагов принадлежит к типу Л /57$ / и С /19,2 /, типов н Л выделенл только соответственна 3,2 и 1,6^ случаев. Разница статистически. достоверности /Р>0,01 /.

3 наших опытах по типизации культур Кдостридиум иирдашгепс наиболее эффективными методами оказались: пробирочный и стекающей

капли.

Результаты типизации штау-мов Клостриди/м ц.адрШ1геис представлены в таблицах 3.2.2, и 3.2,^.

3.2.3. Данные типизации штаммов Ююстридиум порф^ингаас на жидкой среде

Вид микроорганизма ! Число изучаемых !- Результаты испытания ____________________|___культур________

Кл. перфрингенс 42 + -

типа А

Кл.перфрингенс 30 +

типа С

Как видно из таблицы, выделенные бактериофаги обладают строгой типослецифичностью ли"ичвского действия.

3.2.3. Данные типизации штаммов Ююстридиум перфрингенс

на пластинчатом агаре

Лид микроорганипма I Число изучаемых |_Резудьт§тл_ли§йе______

_____________________I.____кщштэдэ__________]____А-5_______С-1______

10и перфрингенс 42 +

типа А

Кл. перфпингенс 30 +

типа С

Из таблииы ъидно, что показатели специфичности бактериодагов

типов А и С, выявленные вышеописанными методами, полностью совпадают.

Сравнительный анализ эффективности использования этих методов. позволил., определить нам обшив принципы типизации - взаимодействие типоспецифического бактериофага с микробной клеткой, проявляющегося в виде лизиса культур на яидкой и плотных средах.

3.3. Биологические свойства бактериофагов 1Слостридиум порфрингянс

_Адсорбуионная_способность. ¿ремя и пропент максимальной адсорбции определяли методом учета количества неадсорбированно-го фага. В термостат при 37 С пом(эшали пробирку с 2 мл культуры, разведенной до содержания 2-х 10 микробных тел в 1 мл

с.

и добавляли исследуемый бпктериофа^ в концентрации 2x10 частиц в 1 мл. Такое же количество бактериофага вносили в 2 мл бульона /контрольная проба/. Через каждую минуту >"з опытной пробирки брали по 0,1 мл и вносили 9,9 мл охлажденного на льду бульсна.

Затем пробы центрифугировали при 5000 оборотов в минуту в точечно 5 мши, после чего 0,1 мл верхнего слоя засевали методой Траппа. аЗремя максимальной адсорбции определяй в минутах г, той пробе, в когоро:! обнаруживали наименьшее количество негативных колоний.

¡¡роп'знт адсорбции от количества исходного фага в контроле определяли путем вычита -шя количества свободного фага. Койс-танту скорости адсорбции устанавливали по формуле:

= 2,з /а х р0 / где ¡) - концентрация бактерий, выраианная количеством меток в 1 мл;

"0 - исходное количество фага; ■ Г - количество нзадсорбированного фага.

' Установлено, что из всех взятых в опыт порЬ-ричгенс Фагов. наиболее активную адсорбционную способпость

- lg -

проявляли штаммы Л-5 и С-1. Средний процент адсорбции их составлял, соответственно 94* и В7/£, однако такое различно между штачмамц находилось нпграни первого уровня достоверности /Р?0,0Ь/

с

К 2 мл культуры в концентрации 1,4 х 10 микробных тел u 1 мл добавляли 2 мл бактериофага в концентрации 2 х 10й частиц ь 1мл, затем смесь адсорбировали и разводили 1:10000, Но 0,5 мл конечного разведеш.л разливали в 20 пробирок и инкубировали в микро-анаэроотатах в течение времени, которой соответствует латентному

периоду чнкубашш i^ra. Затем содержимое каждой пробирки исследовали по мчтоду Грациа, Вычисление урожайности проводили н сло-дующем порядке: на каждую из 20 проб преходилось 7 микробов /0,37 х 20 = 7/. Обшээ количество негативных колоний, получш.плх

ча 20 чашках,делили па это число,

Сказалось, что штаммы фагов Клостриди'ум перфрингьнс типов

Л и С обладают высокой урожайностью на одну инфицированную бак-

тещальную клетку, Этот показатель у фага СМ составил 1Ь0

170 корпускул на одну бактериальную клетку,латентный период

развития - 20 25 > лн.

Сднако наиболее bi .законным свойством отличался в этом случав фаг А-5, латентный период которого был равен 32 ...36 мин. при

урожайности 2U5 ,,.216 корпу 'Кул, Если сравнивать результаты наших исследований с общеизвестными /В,Д. Тимаков, д..VI, Гольдфаро, 1961; В.Я. Ганшкин, 1984; И.Н. Хайруллин, Iü91 и др./, то мочию заключить, что бактериофаги Клостридиум перфрипганс этих типив/в^.-Ц/ значительно отличаются в этом отношении от других штаммов /а,Д,й И др./.

Д 3,-/. Биологические свойства выделенных бактериофагов

0 , ,АТе:г. нкй период внупк- , Урожайность фага на одну ииршш-' клеточного развития, мин ■ ' рованную клетку „'корпускул '

---,-------------у------Л------,--------------------------------

37 - 39

60 - 160

1 ! 2 ! 3

А - 2 G2 - £5 90 - 130

А - 3 51 - 53 130 - 1UÜ

А - 4 4? - 52 105 - 107

А - 5 32 - 36 205 - 216

А - 6 5U'- 55 120 - 3 30

А - 7 !)£ - 6Ü - 19.3

А - 8 42 - 45 100 - 123

Л - 9 за - 41 lkJÜ - 161

\ Л - Ш С4 - 67 iba - 175

Л - 11 43 - 53 140 - 1C5

с - 1 ■ 20 - 25 150 - 170

с — О 27 - ,¿9 00 _ nü

1Л о - 3 42 - 4 С 120 - 135

с - 4 32 - 35 105 _ 140

:;ак ш1дио из таблнмы а.3.1., перJ.p.inrghc—í^iru обладают относительно коротким латентным нэрлодом внутриклеточного ра'Сытил и еысо-koü урочайиисты) ua одну шн-;шдров;_ииую бактараалыуи юитку, в частности у ч'ага А-5 - латв.гпшД пзрнод составил 32 ...33 \:инут и уроуааность 205...216 корпускул на одну бактериальную ¿читку.

Сг'гчи пер^т-'шгзн-'-фаГин группы С относительно хоромами показателями отличался штамм фага С-1, латентный период которого составил 20...25 минут при урожайности 150...170 корпускул.

QnESS3í^ü2§_TeEMC¿93HCTeHTHOCTg, /Д.М.Гольдфарб, 196.1./. Испытуемый фаг разводили до содержания 10 частиц в 1 мл. Но Я мл этого разведения вносили в пробирка и выдерживали при температуре 400, 45°0, В0°с, 55°с, 60°С, 65°С, 70°С, 75°С. 80°С в течение 30 май. ; tu ITролей служили бактериофаг в том же рааьзДелин цомв-

ионный в термостат при температуре 3?°С. Как из контрольной, так и из качщой опытной пробы брали по 0,1 гл и исследовали методом ■Граииа. Чашки ставили в микроанаэростат при 37°С и учитывали количество негативных колони!! в контроле и в опыте.

После установления эффективной температуры пробирки с таким яе разведением фага выдерживали в этих условиях и брали пробы в количестве 0,1 v.n с интервал о v в г> мин. Опыт повторяли при температуре, превышающая эффективную на 2°С. Затем окончательно устанавливали порог термо-.шаулм'вации. Результаты определения биологических свойств штаммов ¿Слостридиум перЬрингенс, выделенных из разных объектов, приведены в таблице 3.3.1.

Стобрашшо нам.! штаммы фагов А-5 и С-1 характеризовалийтак-кв по сравнению с другими более высокой терморезистентностью /Р ^0,(с>/, оптимальный режим их инактивации 54...67°с в течение 25,..28мин, Фаги сохраняют свою биологическую активность при т-мпературэ З...5°св течение одного года.

Анализ таблицы 3.3.1. показывает, что Лаги Клостр/диум nepfv-рингенс типов А и С, выделенные из различи:« источников характеризовались одинаковыми биологическим.! свойствами.

3»4._Изготовленле_ба^т^^ испытание_его_лечебно-^

13 связи с тем, что главной задачей наших исследований при салекиии бактериофагов было установление возможности использования последуогаем их в качестве лечебно-профилактических препаратов анаэробной энтеротоксемии теллг, важное значение поплавали решению вопроса о влиянии различных Факторов ля их ю-гические свойства.

Для изготовления лечебног" бактериофага претив анаэробной эитвротоксимш теля» использовали штаммы ¿Слсстркднум пер.-рин-

гене типа Л-5 и 0-1, обладающие высокой скоростью рвироду.-шеи, выраженной адсо^иионной способностью, относительно коротким латентным периодом внутриклеточного развития и широким спектром ли-тического действия в отношении эпизоотических штаммаз Клссмридиум нерфрингенс типа А и С. Стерильнсст_ его проверяли посевом на Ш>, МШШ, МПА, безвредность на белых мышах путем виугрибряздишо-го и подполниго вводоний в дозе по и,5 мл.

Наиболее эц^ектпьным методом нейтрализации токсина оказалось применение теплового фактора /табл. З.4.1./.

3.4.1. Нейтрализация токсина тепловым во;.действием

Темпера-! Зкспози-! Титр фага поАппель-! Количество !Резул: тура ! пая . ¡ману корпускул в мл/ ) мышей ! чаРв'

40 4 Г)

50 55 Ш 65

10

10° Ю8 10° 10а ша 10'

а

Наг я

1 пал

тавы

Анализ д.и шх, приведенных в таблице,показывает, чго ин.штп-валил токсина наблмдаотся при температура £0°С в течение 10 мин при сохранении титра фага.

После не [учения бактериофага провели зго испытание ;.а баз-врецность - белые мыши /п=30/, кролики /п=10/. После получения положительных результатов провали аналогичные опыты на 4 телятах. Заражение осуществляли вирулентной культурой Клостридиум пер^>-ричгенс типа А и С, в дозе 10 мл внутрь двухкратно с интервалом 12 ч. Опытным животным вводили ьпутрь бактериофаг а дозе 50 (лЛ однократно. Гибель животных контрольной группы наблюдалась спустя 8...9ч после заражения. Толя^чопытной группы остались нивы.

п

п

Ьыоокие профилактические свойства бактериофага, установленные в опытах, явились основанием даш испытания его в производственных условиях.■ Эффективность препарата испытывали в нёйлагопо-лучных по гнаоробной внтеротоксемяи хозяйствах на 3292 здоровых телятах. В опит были подобраны телята профилакториого возраста (1...7 дн), которые были разделены ьа 2 группы. )швотным опытной группы в первой депь гпзли вводили полпфаг подколю с интервале?.! 24 часа 3-кратно в области верхней трети шеи в дозе 30 ми (табл. 3.4.2). Телятгд контрольной группы препарат не бродили. 3.4.2. Профилактическая эффективность применения перфрингенс-фагов типа Л и С при анаэробной энтеротоксемпи телат

Наименование:Споооб л; Опытная контрольная :¡Эффективность хозяйств :доза на-: группа : группа .:_

: sua че]шя: кол-во: к ол-во: кол-во: кол-во: опыт-: к онтроль-:голов :заб-х :годов :заб-г. :ная : ноя

I.Совхоз п/к

¿.Совхоз им.

Гая - " - 112

3.Колхоз "Путь

к коммунизму" - " - с80

4. Совхоз "Рощинский" - " - 130

5. В среднем

Из таблшш шдно, что применение бактериофагов о профилактической целью в неблагополучных хозяйствах по анаэробно!! энте-ротокссмпи обоспечивгет довольно высокун сохранность телят -в среднем по неблагополучным хозяйствам - 24,9 %.

"сшташш лечебной биективное™ проводили в различны;: хозяйствах (таблица 3.4.3).

58 80 64 9/,9 40,8

S ьэ 50 92,0 50,5

ео 96 50 9/,6 52,0

6 130 39 92,2 49,3

38,8 101,3 50,8 94,9 50,2

3.4.3. Лечебная эффективность применения бактериофагов против анаэробной эптеротоксемии телят

Нашлепование: Способ и: Опытная группа ¡Контрольная группа:Сохранность хозяйотв ¡Доза на-:кол_ш:км_во ;КОЛ_ЕО ;К0Л_В0 : телят, %

_••^шч 'толоп гпавких голов : погншх :ош;т:копт.

I.Совхоз

"саволдс'шП" 25- -30 '15 2 15 8 66,7 46,7

2.Совхоз им. Гая " _ 12 2 12 7 63,3 41,7

3.Колхоз "Путь к коммунизму" - У - 10 2 10 4 60,0 60,0

4. В среднем по хозяйствам ЗУ 6 37 19 63,3 49,5

Из таблицы видно, что пргменениэ бактериофагов с лечебной целью в хозяйствах, неблагополучных по анаэробной снтеротоксе?лш, обеспечивает такую сохранность телят - в среднем по неблагополучным хозяйствам - 63,3 %,

В настоящее время озктераофаг против анаэробной эптеротоксемии телят, изготовленный из мготных штаммов Клсотрлдиуы пзр-фрингенс типов А и С научно-производственной лабораторией "Вак-фаг" Ульяновской государственной сельскохозяйственно:' акадегип: согласно : ".Методическим указаниям", утверждении Управлаплс;м зэ-терпнарии адлшистрацпи Ульяновской области Сиять 1525 г.), успешно применяется в качестве лочебно-про$1ша::?ическсгс средства против этой инфекции во многих хозяйствах этого региона.

3.5. Рлгтаботка и изучение оф6?ктие.!остп ГО.'.-^огиталвагтопш

против анаэробьой,энтспотокпегап телят Завершающим, запланлровзшшм этапом паццх.псследсваппй бнлс пзготоплепко ГОА-взяцпш: и изучение пг-офзлаксглчзскол эЛ5$кг.гьаос-ти, применение в производственных условиях против указанной выше 1"'<1:екция. В этих целях на основе првдадущего сгшта пзисканяя

такого вгда биопрепаратов применительно к л>угим видам животных (П.Н.Сербеладзе, В.А.Мопогадзе, Е.П.Дроздова,1958; В.С.Соломатип, 1373; И. Н. лайру.-лип ,1991) нами бь'ли определены обцие принципы констругрованля вакгошы плотив анаэробной эптеротоксемки телят.

Для разработки вакцины были отобраны токсигешгае штаммы Клострлдпум персТрингенс типов А и С, выделенные от телЯг, паших от анаэробной энтеротоксе!.'"\п. В работе была поста влепа задача создать вакцину против этой инфекции, которая бы обладала высокими нммунсгеннымл свойствами п была в то г.с срегл безвредна для организма животных.

Положительные результаты лабораторных исследований открыли возможность испытания ГОА-чЕормолвакцпны в производственных условиях, Для испытания вакцины ы хозяйствах имени Гая Сенгилеевско-го района и "Рощинский" Ульяновского района были сформированы две группы животных: опытная и контрольная (коровы - ИЗО, телята - 2190). Вакцпну против анаэробной энтеротоксемяп из местных штаммов Клострцдиум перфрингено типов А и С, серии И I, изготовленную 25 чюля 1994 года в научно-производственно;-: лаборатории "Вак-фаг" Ульяновской государственной сельскохозяйственной екадо-мпв, вводили подкожно в область средней верхней трети шег. в дозе 5 мл телятам однократно в 10 мл коровам двухкратно с интервале?,I 25 дней. Место инъекций выстригали и обрабатывали 70° спиртом (табл. 3,5.1).

Из таблицы видно, что применение о ггроТялэктпчоскоЯ цельп ГОАнЬормолвакцшш в неблагополучных хозяйствах Ульяновской области обеспечивает сравнительно высокую сохранность телят (в среднем во неблагополучным хозяйствам - 95,/ %).

В заключение следует отметить, что применение ГОЛ-огор.юл-вакцу-ны в неблагополучных по анаэробно?, энтеротоксемяп хозяйст-

3.5.1. Профилактичеекая эффективность применения ГОА-

формолвакцины против анаэробной энтеротоксешш талят

Наименование:Споооб и: Опытная группа:Контрольная группа;Сохрзн-

хозяйств :доза на-:

:значения

:кол-ео: кол-во : кол-ве : кол-во ;

:ность те-

!голов :заб-х :голов

: заб-х :

лят.

•ош:т:кон'1'1

I.Совхоз "Крас- п/к

по 10 мл 1500 21 90 47 99,0 57,7

2. Совхоз им. Гая 58 5 59 39 91,4 32,6

3. Совхоз "Рощинский" 8? 3 В/ 54 96,6 37,9

4. В среднем по хозяйствам 548,3 29 У£,3 46,7 95,7 42,8

вах дает существенный экономический эффект (на I рубль затрат 8, /4 рубля).

В дальнейшем эту пкщшу применили во многих хозяйствах Ульяновской области (табл. 3.5.2). Количество ммунизироБагашх гн-вотпых ГОА-формолвакциной в течение 1995-199'/ годов в неблагополучных районах Ульяновской области было следующим.

3.5.2, Сводная таблица по иммунизации крупного рогатого скота по анаэробной энторотоксеши

Года : 1995 : 1996 г 1997 (за 6 месяцев)

лол-во ищу-: визированных: тавотных : 54 УЬ : 8617 : 6537

Неблагополуч-: 1.3ешкаймский ные районы : З.Еарншский

3.Майнский

4. Радищевский Б.Сенгилеевсний 6.Ульяновский

7 Цилышнский

1.Рзрышский 1,Радлщевский

2.Инзенский г.Инзепский

3.Ра дище вский 3.С е нгало е вс кд й

4.Сенгилеевский 4.Ульяновский

5.Старомэйнский 5.Старо:-,щйнокпй

6. ульяновский о.[цльш1нский

/.Цилышнсккй 8.А.11.К.Свяяга

Из таблицы видно, что в течение 1995-1'97 годов в вышеперечисленных районах Ульяновской области иммунизации подвергнуто ГОА-формодвакциной против анаэробной энтеротоксемпи 20647 голов крупного рогатого скота.

ВЫВОДЫ

1. Из II обследованных хозяйств Ульяновокой области 6 оказались неблагополучными по анаэробной энтеротоксемии телят.

2. Установлено, что основными факторами, определяющими этиологическую структуру анаэробной энтеротокоемии телят, являются высокотокспгенные шташы Клостридиум перфрангенс типов А я С.

3. Из наиболее ."мцуногешшх штаммов Клострлдиум перфрлнгенс типов Л и С нашими усилгями изготовлена и испытана в лабораторных и производственных условиях 1ВД-форг.!олЕзкцина против анаэробной энтеротоксемии телят.

4. Сконструированная ГОА-формолвашшо против анаэробной энтеротоксемии телят оказалась пымукогснной, стерильной безвредной длл организма животных.

Б. Применение ГОА-форлолвакцины телятам в неблагополучных хо-ояйстгах по анаэробной энтеротоксемии позволило проф планировать заболевание и повысить их сохранность (в среднем по хозяйствам -17 %> •

6. Из еотествешшх субстратов внешней среды и патологического материала выделены и изучены биологические свойства перфрангенс

'?. Из изученных 15 фагов отобраны два фага А-5 и С-1, которые отличались от друп.х фагов более активным взаимодоЯсгЕяем с бактериальными хозяевами, коротким латентным периоде?.; (32-36 мин), сравнительно высоко'! уропсайпостью (205-216 ¡¡орпускул в 1 мл) и отвечали требования,; производственных итси-юв бактериофагов.

8. Из отобранных порфрингелс фагов сконструированы лечебно-профпрактическио бактериофага.

9, Изготовленные наш бактериофаги отвечают требованиям лечебно-профилактических фагов и обладав? высокой эффективность» при анаэробной энтеротоксеши телят (в средаем по неблагополучным хозяйствам профилактическая - 94,9 %, лзчгбная - 83,Ь %).

10. ¿Экономическая эффективность применения ГОА-формолвакцины против анаэробной энте£отоксемип телят в неблагополучных хозяйствах Ульяновской области составляет 8,74 рубля на I рубль затрат.

5. пра.СПНЕШШ ПРЕДДСШЕНШ

1. При анаэробно? знтсротокссмпн телят практически целесообразно и зконо!.шчески шгодно о лнчебно-прсфмакгпческсй целью использовать разработанный нами г. прсЕедлий успешное производственное испытание препарат - бактериофаг.

2. Применение ГОА-Формслвакцини в неблагополучных по анаэробной знтеротоксемии телят хозяйствах дает возможность в комплексе с другими лечебно-прсхрилактическши мероприятиями (плановое и своевременное проведение встеранарно-саяатариых мер и улучшения зоогпгиенических условий содержания и кормления кавотинх) эффективно бороться о этой инфекцией.

Основные результаты исследований гавдщены авторским свидетельством {Ц 1686838, 22 июня 1991 года).

"Методические указания'' по профилактика I. лечения ШиТСрел-леза, анаэробной энтеротокссмг.а и сиеиашшх инфекций молодняка сельскохозяйственных глвотпгх о применением специфических вакцин и бактериофагов (Ульяновск, 1925), утвэрздоннйз научно-методачо^-ким совотсм Управления ветеринарка лрп администрации Ульяновской области.

6. СПИСОК РАБОТ, ШУЕЛИКОВАШЩХ НО ТЕГ.П; ДИССЕРТАЦИИ Х.П.Н.ХаГфул.чнн, В.Д.Толков, А.II.Казимир, В.А.Счлпмов Азтор-ское свидетельство "Птамм фага бактерий тппа А для типизации

и дифференциации выделенных культур микроорганизмов", J,' 1686838, 22 июня IS9I г.

2. Казимир А.Н., И.Н.Хайруллин. Изучение биологических свойств Клостридиум перфрингенс типа А (Межвузовский сборник научных трудов КШ).Издательство Казань,1993.

3. В.Д.ТоНков, А.Н.Казимир, В.А.Салимов. Выделение бактериофага типа А /Вопросы ветеринарной микробиологии, эпизоотологии и ьетеринарго-санитвряоГ экспертизы - Ульяновск,1995.

4. И.Н.Хайруллин, В.Д.Токков, А.Н.Казимир. О специфической профилактике анаэробной энтеротоксемии поросят./Вопросы ветерянар-неЗ микробиологии, эпизоотологии и ветерпнарно-санитарной экспертизы - Ульяновск,1995.

5. И.Н.Хайруллин, Ю.А.Маркин, А.Н.Казимир, В.А.Салимов, Б.В.Еа-повалов. "Методические указания по профилактике и лечению пас-тереллеза, анаэробной энтеротоксемии и смешанных инфекций молодняка сельскохозяйственных животных с применением опеплфичес-ках вакцин а бактериофагов".-Ульяновск¡"Печатник двор",1996.