Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эпизоотологический надзор при инфекционных и инвазионных болезнях на примере бруцеллеза и описторхоза

На правах рукописи

Горчакова Наталья Григорьевна

Эпизоотологический надзор при инфекционных и инвазионных болезнях на примере бруцеллеза и описторхоза (функционирование паразитарных систем)

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

03.00.19 - паразитология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Нижний Новгород - 2003

Работа выполнена на кафедрах эпизоотологии и инфекционных болезней, паразитологии, общей биологии и ветсанэкспертизы Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии, в лаборатории по изучению бруцеллеза Научно-исследовательского ветеринарного института НЗ РФ, в хозяйствах и ветлабораториях, Архангельской, Ростовской, Рязанской, Волгоградской и Астраханской областей

Научный консультант:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент РАСХН В.В.Сочнев

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятель науки РФ,

доктор биологических наук, профессор В.В.Макаров доктор биологических наук, профессор М.Д.Новак доктор биологических наук, профессор Н.А.Рыбакова

Ведущая организация - Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана

Защита диссертации состоится 20 ноября 2003 г в 14 часов на заседании Совета по защите докторских диссертаций ДР 220.047.05 при Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии (603107, Н.Новгород, пр.Гагарина, 97).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии

Автореферат разослан «15 » октября 2003 г

Ученый секретарь диссертационного совет кандидат ветеринарных наук, доцент

2оо ?-А

I Общая характеристика работы

Актуальность темы. Организационно-структурные и экономические преобразования в АПК РФ, выраженный диспаритет цен оказали существенное влияние на развитие животноводства России. Возникшее энергетическое и экономическое давление на сельскохозяйственный сектор страны явилось сдерживающим фактором в развитии отраслей животноводства на современном этапе. Практически во всех экономических районах РФ произошло сокращение численности поголовья с/х животных, в значительной степени разрушены промышленные технологии в скотоводстве, свиноводстве и птицеводстве. Снижены и интенсивные показатели развития животноводства.

Реструктуризация сельскохозяйственного производства страны неоднозначно отразилось на эффективности традиционных систем противоэпизо-отического обеспечения животноводства и на характере формирования продовольственного рынка России в целом и ее отдельных регионов. Разработанная для социалистического строя система ветеринарно-санитарного контроля в современных условиях оказалась недостаточно действенной и надежной. В отдельных регионах РФ возросла эпизоотическая и эпидемическая значимость болезней, общих для человека и животных, участились случаи рецидивов хронических болезней животных.

К числу опасных зоонозных болезней в России по-прежнему продолжают оставаться бруцеллез и описторхоз, а за последние годы проявилась неравномерность распространения этих болезней, выявлены регионы с их территориальной приуроченностью. Неоднозначными оказались и эффективность противобруцеллезных и противоописторхозных мероприятий, а оздоровление региопов весьма ненадежным.

Вторая половина XX столетия ознаменовалась бурным развитием методологии в эпидемиологии и эпизоотологии, сформирован и внедрен «эпидемиологический и эпизоотологический надзор», органически включающиеся в систему противоэпидемических и противоэпизоотических мероприятий. Важное значение приобретай молекулярная эпидемиология и эпизоотология, эпидемиологическая и эпизоотологическая диагностика. Исследователи уделяют должное внимание совершенствованию эпизоотологической диагностики и эпизоотологического надзора (В.П.Урбан, 1998; С.И. Джупи-на,1983,1991; И.А.Бакулов,1986; В.В.Макаров,1999; В.В.Сочнев, 1998 и многие др.).

В настоящее время в науке сложилось мнение о том, что инфекционные (инвазионные) болезни необходимо рассматривать не как случайное явление, а как отражение фило- и онтогенетически обусловленного взаимоотношения макро- и микроорганизма (В.В.Макаров,1999).

В настоящее время, по мнению исследователей, весьма актуальным вопросом для ветеринарной науки является разработка карт эпизоотологического надзора и их внедрение. Особенностью этого метода является его специфичность для каждой нозоединицы, системный подход к нозоединице, как к сформировавшейся и системе. В боль-

¿МДИОТСЯА

шинстве случаев болезни животных, в т.ч. и общие для животных и человека, не всегда рассматриваются с позиции паразитарных систем и комплексного подхода в их изучении и профилактике. В связи с этим и учитывая накопленный- йами многолетний исследовательский материал, мы поставили цель изучить и рассмотреть на примере бруцеллеза и описторхоза формирование и развитие эпизоотического проявления паразитарных систем в конкретных экологических и хозяйственно-экономических условиях и на этой основе усовершенствовать систему противоэпизоотических мероприятий при бруцеллезе и описторхозе.

На разрешение были поставлены следующие задачи:

- изучить экологические, хозяйственно-экономические предпосылки формирования и функционирования паразитарных систем бруцеллеза и описторхоза в условиях отдельных регионов Европейской части РФ;

• - изучить нозологический профиль инфекционной и инвазионной патологии животных и определить роль и место конкретных паразитарных систем (бруцеллеза, описторхоза) в формировании общей патологии животных;

- на основе эпизоотологического надзора и методов современной прогностики изучить характер эпизоотического проявления этих паразитозов и их территориальные, временные и популяционные границы в регионах с различной степенью риска;

- изучить возможные случаи имитации активности эпизоотического проявления функционирующей паразитарной системы бруцеллеза крупного рогатого скота под воздействием гетерогенных и родственноантигенных раздражителей;

- в сравнительном аспекте изучить разрешающую способность и эффективность нетрадиционных методов диагностики эпизоотического проявления функционирующих паразитарных систем (бруцеллеза и описторхоза) в зонах с различной степенью их риска и определить роль и место нетрадиционных'методов в общем комплексе эпизоотологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в Европейской части РФ;

- изучить потенциальную и реальную эпидемическую проекцию паразитарных систем бруцеллеза и описторхоза в зонах с различной степенью их риска;

- усовершенствовать систему управления эпизоотическим проявлением паразитарных систем на примере описторхоза и бруцеллеза крупного рогатого скота, с использованием нетрадиционных методов диагностики и профилактики.

Научная новизна. В настоящей работе впервые в условиях Европейской части РФ в сравнительном аспекте и в динамике изучены процессы развития эпизоотического проявления паразитарных систем бруцеллеза крупного рогатого скота и описторхоза, их роль и место в общей патологии животных/ а также основные факторы экологического и хозяйственно-экономического воздействия на их территориальные, временные и популяционные границы. Изучена .разрешающая способность нетрадиционных методов диагностики йаф&йтйряой; еистемы! бруцеллеза крупного рогатого скота *** ' ИИ4 •

' '1&5 ■ -»Г I |

Т«- (к' г \

и имитации активности ее эпизоотического проявления под воздействием гетерогенных и родственноантигснных раздражителей. Усовершенствована научно-обоснованная система управления эпизоотическим проявлением паразитарных систем описторхоза и бруцеллеза крупного рогатого скот в зависимости от степени риска этих болезней.

Практическая ценность. Научно обосновано и доказано, что паразитарные системы описторхоза и бруцеллеза крупного рогатого скота в изучаемом регионе - системы управляемые.

Результаты исследований составили основу для разработки научных рекомендаций: «Дифференциальная диагностики бруцеллеза и иерсиниоза и меры борьбы», утвержденных НТС МСХ РФ, М.,1991; «Нетрадиционные методы исследований при дифференциальной диагностике бруцеллеза животных», одобренные МСХ РФ (Н.Новгород, 1994; 1997); «Газохроматогра-фический метод идентификации микроорганизмов - возбудителей болезней животных», Н.Новгород, 1993; «Научно-обоснованная система противоиер-синиозных мероприятий в животноводческих хозяйствах», одобренная МСХ РФ, Н.Новгород,1995; «Научно обоснованная система противобруцеллезных мероприятий в НЗ РФ», одобренная МСХ РФ, Н.Новгород,1995; «Экологическая защита окружающей среды при возникновении иерсиниозов животных», Н.Новгород, 1999; «Управление эпизоотическим процессом на модели бруцеллеза крупного рогатого скота в Нижнем Поволжье» (монография), Н.Новгород, 1999, 375 е.; «Усовершенствованная система противоэпизооти-ческих мероприятий при бруцеллезе крупного рогатого скота в условиях дельты реки Волга и сопредельных территорий», одобрена МСХ РФ, Н.Новгород, 2000; «Функционирование паразитарных систем на примере описторхоза» (монография), Н.Новгород, 2003, 174 с. (одобрена МСХ РФ и рекомендована в качестве учебно-методического пособия для ветеринарных вузов, № 27 - 6 - 39/150 от 23,01.02); «Эпизоотологический надзор при бруцеллезе в условиях Европейской части РФ (функционирование паразитарной системы)» Монография, (одобрена МСХ РФ и рекомендована к изданию в качестве учебно-методического пособия для ветеринарных вузов, № 27 - 6 — 39/150 от 23.01.02), Н.Новгород, 2003,273 с.

Приоритетность исследований подтверждена Патентом РФ на изобретение №2081917 «Способ идентификации бруцелл» (20.06.97); положительным решением на выдачу патента РФ на изобретение по заявке № 94036309/13 ог 28.09.94 «Способ идентификации и дифференциации бруцелл».

Основные положения, выносимые на защиту:

- эпизоотическое проявление паразитарной системы описторхоза и бруцеллеза крупного рогатого скота является постоянной составляющей нозологического профиля заразной патологии животных в условиях Европейской части РФ;

- паразитарная система бруцеллеза В.аЬогПлэ в различных регионах Европейской части РФ функционирует в четко очерченных территориальных, временных и популяционных границах адекватно степени ее риска,

- под воздействием гетеро- и родственноантигенных раздражителей происходит активация паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота даже в отдаленные сроки после вакцинации противобруцел-лезными вакцинами;

- нетрадиционные методы идентификации бруцелл являются дополнительными методами объективной оценки эпизоотической ситуации и эффективности проводимых противоэпизоотических мероприятий;

- описторхоз в условиях Поволжского региона и Северного Каспия функционирует как многоступенчатая паразитарная система;

- управление эпизоотическим проявлением паразитарных систем опи-сторхоза и бруцеллеза путем воздействия на источник возбудителей и восприимчивых животных, а также разрушения механизма передачи возбудителей Является востребованным и эффективным мероприятием в системе ветеринарного обеспечения конкретных регионов.

Пути реализапии: Результаты исследований используются при разработке и усовершенствовании эпизоотологического надзора при других паразитарных системах в регионе, а также в учебном процессе при подготовке специалистов ветеринарной профессии.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на заседаниях методической комиссии и совета ветеринарного факультета ЫГСХА (1994 -2002), на Всероссийских и региональных научно-практических конференциях: Н.Новгород, 1993, 1994,1997, 1999, 2001; СЛетербург, 1994; Волгоград, 1996; Казань, 2000; Чебоксары, 1994; Свердловск, 1995; Новочеркасск, 1995, 1997; на Международном славянском Евро-Азийском конгрессе деятелей науки и культуры, Н.Н.вгород,1994; На заседаниях издательского Совета НГУ им.Лобачевского, 1999; НГСХА, 1995,1997,1999, 2001, 2003 гг.; На межкафедральном заседании кафедр эпизоотологии и инфекционных болезней, паразитологии, общей биологии и ветсанэкспертизы, микробиологии, вирусологии и биотехнологии (2003), на ученом Совете НГСХА, 2003 г.

Материалы диссертации опубликованы в 57 научных статьях, рекомендациях, монографиях, учебно-методических пособиях, а также в научных отчетах НИВИ НЗ РФ и НГСХА.

Внедрение. Результаты исследований в 1994 - 2003 гг. под авторским надзором с положительным эффектом внедрены в хозяйствах Нижегород- *

ской, Рязанской, Свердловской, Волгоградской, Астраханской, Архангельской областях, а также республики Удмуртия. Подготовлены (в соавторстве), утверждены НТС МСХ РФ, Департаментом ветеринарии и Департаментом образования и кадровой политики МСХ РФ и изданы массовым тиражом: 7 рекомендаций, 4 учебно-методических пособий и 3 монографии: Дифференциальная диагностики бруцеллеза и иерсиниоза и меры борьбы», утвержденных НТС МСХ РФ, М.,1991; «Научно обоснованная система противобру-целлезных мероприятий в НЗ РФ», одобренная МСХ РФ, Н.Новгород, 1995;»Научно обоснованная система по управлению эпизоотическим процессом бруцеллеза в зоне его повышенного риска (1998); «Функционирование паразитарных систем на примере описторхоза» (монография)

(2003); «Бруцеллы и бруцеллез (микробиология и биотехнология) (монография) (1997); «Нетрадиционные методы исследований при дифференциальной диагностике бруцеллеза животных» (1994; 1997; 2003); «Эпизоотологиче-ский надзор при бруцеллезе (функционирование паразитарной сисаемы) в условиях Европейской части РФ» (монография), (2003); Временное наставление по применению инактивированной противобруцеллезной вакцины «БИВ», утв. Департаментом ветеринарии МСХ РФ (1996); Временное наставление по применению антигена «БИВ» для провокации латентных форм бруцеллезной инфекции, утв. Департаментом ветеринарии МСХ РФ, 2003); получен один патент (№ 2081917) и одно положительное решение на изобретение.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений, списка использованной литературы и приложений.

Диссертация изложена на страницах компьютерного текста, иллюстрирована 132 рисунками и 81 таблицами. Список использованной литературы включает 708 наименований, в т.ч. 217 иностранных авторов.

Собственные исследования.

Материалы и методы исследования

Рабата выполнялась с 1993 по 2003 гг. на кафедрах эпизоотологии и инфекционных болезней, паразитологии, общей биологии и ветсанэкспертизы Нижегородской ГСХА, с 1987 по 1993 гг. - в лаборатории по изучению бруцеллеза животных Научно-исследовательского ветеринарного института Нечерноземной зоны РФ (НИВИ НЗ РФ), отдельные эксперименты проводились на экспериментальной базе Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии (г.В.Волочек), в лаборатории бруцеллеза Северо-Кавказского зонального научно-исследовательского ветеринарного института (СКЗНИВИ, г.Новочеркасск), в хозяйсшах и ылеринар-ных лабораториях Нижегородской, Архангельской, Ростовской, Рязанской Волгоградской и Астраханской областей.

С целью изучения характера эпизоотического проявления инфекционных и инвазионных паразитарных систем, совершенствования методов их диагностики были проанализированы:

- данные полученные автором во время эпизоотологических экспериментов и эпизоотологического надзора за очагами бруцеллеза и описторхоза в районах ряда областей Европейской части РФ;

- отчеты и статистические материалы управлений (отделов) ветеринарии администраций сельских районов Волгоградской области и др. субъектов федерации, Департамента ветеринарии Минсельхоза РФ, районных станций по борьбе болезнями животных, областных и районных ветеринарных лабораторий, областных центров Госсанэпиднадзора, Управления перерабатывающей промышленности, ЦСУ за 1980—2003 гг.;

- материалы клинико-эпизоотологических обследований эпизоотических очагов бруцеллеза животных в различных регионах РФ;

-.результаты лабораторных исследований на бруцеллез патологического материала от животных различных видов, проведенных в областных и районных ветеринарных лабораториях в разрезе сельских районов ряда областей;

- результаты иммунологических исследований сельскохозяйственных животных в хозяйствах Архангельской, Волгоградской, Астраханской, Рязанской областей, выполненных по нашей просьбе, в том числе экспертизы исследований 8907 абортированных плодов крупного рогатого скота, 18968 тыс. серологических исследований крупного рогатого скота, экспертизы исследований 1836 культур бруцелл, выделенных от больных животных;

- результаты исследований материала от людей, мелких млекопитающих и объектов окружающей природной среды, выполненных по нашей просьбе в лабораториях отделов особо опасных инфекций Волгоградского, Астраханского, Рязанского и других областных центров Госсанэпиднадзора;

- материалы и протоколы заседаний экспертных комиссий и бруцеллезной экспедиции по периодическому оперативному анализу эпизоотической и эпидемической обстановки по бруцеллезу в условиях сельских районов и урбанизированных территорий Волгоградской, Архангельской, Рязанской и Астраханской областей;

- материалы республиканских и региональных научно-практических конференций и семинаров по инфекционной патологии, в том числе по проблеме бруцеллеза и описторхоза;

- изучена ветеринарная отчетность об инфекционных болезнях животных в колхозах и совхозах, акционерных обществах, ассоциациях фермерских и крестьянских хозяйств Волгоградской и Астраханской областей за весь период ретроспекции.

Проведен эпизоотологический анализ и оценка показателей эпизоотического проявления паразитарной системы бруцеллеза в конкретных условиях Архангельской, Волгоградской и Астраханской областей путем реггроспек- >

тивного анализа на глубину ретроспекции 23 года.

С целью разработки и проведения эпизоотической диагностики бруцеллеза и описторхоза проведен эпизоотологический анализ и оценка показателей паразитарных систем на экосистемном уровне путем оперативного и ретроспективного анализа с использованием методов эпизоотологического мониторинга, сплошного и точечного скрининга.

С целью выявления причинно-следственного механизма эпизоотического проявления паразитарных систем описторхоза и бруцеллеза провели мно-гофаьстйрный анализ на экосистемных уровнях путем ретроспективного и оперативного анализа.

С целью выявления тенденций социально экономической значимости паразитарных систем описторхоза и бруцеллеза животных, своевременной корректировки противоэпизоотических мероприятий на примере Астраханской и Волгоградской областей проведена оценка степени взаимодействия

популяций возбудителей и их хозяев в различных природно-хозяйствепных и технологических условиях в производственных эпизоотологических экспериментах, проведена оценка влияния природной и хозяйственной среды и антропогенной деятельности на развитие функционирования паразитарных систем, а также эффективности противоэпизоотических мероприятий в контролируемых экспериментах. Проанализирована эпизоотическая обстановка по бруцеллезу крупного рогатого скота в 186 животноводческих хозяйствах с различной степенью риска болезни и в 1806 свежих и затухающих эпизоотических очагах бруцеллеза крупного рогатого скота.

С нашим участием проведена оценка испытания научно-обоснованных систем противоэпизоотических мероприятий в районах Астраханской, Нижегородской, Рязанской и Волгоградской областей.

Проанализированы результаты производственного испытания противо-бруцеллезных вакцин из штамма В.аЬоЛш 19 и 82, «БИВ» на поголовье крупного рогатого скота в неблагополучных и угрожаемых но бруцеллезу хозяйствах и районах.

Исследованы 1836 культур бруцелл, дана их характеристика по происхождению и результатам идентификации.

В основу исследований был включен комплексный эпизоотологаческий подход, включающий методы: описательно-исторический, эпизоотологичс-ской статистики, эпизоотологического обследования, бактериологический и иммунологический анализы и экспериментальные исследования. В работе использованы методы современной прогностики, общепринятые статистические методы и методы Хитоси Кумэ с использованием диаграмм и принципа Порето, контрольных карт и диаграмм рассеивания, аппарата дифференциальных уравнений, статистической экстраполяции, автокорреляции и линейной регрессии.

Методом ретроспективного эпизоотологического анализа с использованием методов фактографии, экспертных оценок и верификации изучали основные показатели паразитарных систем бруцеллеза и описторхоза па эко-системном уровне (тенденцию годовой и многолетней динамики, популяци-онных, территориальных и временных границ, влияние различных факторов на формирование механизма передачи возбудителей в популяциях).

Для серологического исследования на бруцеллез использовали традиционные тесты (РА, РСК с единым бруцеллезным антигеном, РБП с цветным антигеном, РПГА с эритроцитарным диагностикумом Одесского предприятия по производству бактерийных препаратов в соответствии с наставлением по его применению; экспресс-РПГА по методике НИВИ НЗ РФ, реакцию агглютинации латекса - по методике ИИВИ НЗ РФ (1993), РСК с Я-антигеном по методике ВНИВИ (г.Казань), РИД с О-ПС антигеном по методике ИЭВС и ДВ (г.Краснообск).

Серологические исследования на иерсиниоз проводили с применением РПГА с кишечно-иерсиниозным диагностикумом сероваров 03 и 09 Санкт-Петербургского НИИ вакцин и сывороток согласно наставлению по их применению.

Кожно-аллергическую пробу с целью исключения бруцеллеза ставили с бруцеллином ВИЭВ пальпебрально - под кожу нижнего века левого глаза в дозе 1 мл. При заболевании глаз - в подхвостовую складку внутрикожно по 0,3 мл. Учет результатов проводили через 48 часов по проявлению местной воспалительной реакции.

РСК с R-антигеном с целью дифференциации иммунологических реакций ставили по методике, разработанной К.М.Салмаковым и А.М.Фоминым (ВНИВИ) и утвержденной Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ.

Бактериологические исследования патологического материала (органов и тканей от абортированных плодов и животных, убитых с диагностической целью) проводили в соответствии с наставлением по диагностике бруцеллеза животных. Биологические исследования проводили на интактных морских свинках живой массой 350 - 400 гр.

Идентификацию выделенных культур бруцелл проводили на базе Волгоградской областной ветлаборатории, а также в лаборатории по изучению бруцеллеза животных СКЗНИВИ по методике, одобренной подкомиссией по таксономии микроорганизмов ФАО/ВОЗ.

Анализ и производственные испытания комплекса противобруцеллез-ных мероприятий, в том числе с применением противобруцеллезных вакцин из штаммов B.abortus 19 и 82, проводили в хозяйствах с различной эпизоотической обстановкой и степенью риска бруцеллеза крупного рогатого скота в Рязанской и Волгоградской областях. Роль и место системы противобруцеллезных мероприятий с использованием «БИВ» определяли первоначально в 18, а в последующем - в 33 районах Волгоградской области и в строго контролируемом эксперименте на лабораторных животных и на интактном в отношении бруцелл крупном рогатом скоте на базе лаборатории по изучению бруцеллеза СКЗНИВИ.

Определили роль толерантных животных в развитии паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота. С этой целью в благополучных и оздоравливаемых от бруцеллеза хозяйствах двух районов об- г ласти по методу аналогов были сформированы подопытные и контрольные группы телочек 4 — 5 месячного возраста. После предварительного исследования их на бруцеллез животным обеих групп вводили вакцину из штамма B.abortus -19 в дозах и методом, рекомендованным наставлением по ее применению. За иммунизированными животными устанавливали наблюдение и через 15 дней после вакцинации исследовали на бруцеллез в РА. Животных, в сыворотке которых отсутствовали противобруцеллезные антитела или они выявлены в титрах ниже 100 ME, удаляли из стада и сдавали на убой. Часть таких животных подвергали диагностическому убою с последующим бактериологическим исследованием на бруцеллез.

С использованием газожидкостной хроматографии (ГЖХ) и электрофореза в полиакриламидном геле (ЭФ ПААГ) изучили и провели идентификацию 37 штаммов бруцелл, в т.ч. 25 - эпизоотических и 16 штаммов иерсиний.

Проведено изучение 117 экстрактов антигенов бруцелл, полученных нами из разных структурных уровней их микробной клетки бактерий.

Микроорганизмы выращивали в зависимости от необходимого объема бакмассы в пробирках, чашках Петри или на бак.матрацах. При проведении сравнительных анализов, основанных на использовании структурных компонентов микробной клетки, соблюдали стандартные условия культивирования микроорганизмов; использовали рекомендуемые питательные среды, строго соблюдали необходимые температурные режимы; культуры определенного возраста; использовали одинаковые условия получения определенных компонентов клеток бактерий. Использовали живую и инактивированную формалином или ацетоном бакмассу. Инактивирующую смесь выбирали в зависимости от необходимости получения определенной структуры или экстракта клетки бактерии. После инактивации культуры отмывали дважды стерильным физраствором и высушивали ацетоном по B.W. Hudson (1975).

Бакмассу для газохроматографического анализа получали путем выращивания микроорганизмов в пробирках на скошенном эритрит-агаре (для бруцелл) и МПА (для иерсиний) в течение 48 часов при соответствующей температуре. Подготовку образцов для ГЖХ проводили по Mac Gee в модификации Л.В.Андреева и А.И.Склифас (1977).

Для получения экзопродуктов бактерии выращивали по B.Vrani (1988) на целлофановой мембране, покрывающей твердую питательную среду.

Эпизоотические штаммы бруцелл предварительно были изучены по куль-турально-биохимическим свойствам в соответствии с методикой ФАО/ВОЗ (1972) и Наставлением по диагностике бруцеллеза (1982, 2000).

Для отработки методов фракционирования субклеточных структур из бактерий использовали вакцинный штамм Br.abortus 19 (в форме сухой бактериальной массы и влажных клеток, убитых формалином, ацетоном, или этанолом).

Для получения клеточных оболочек бруцелл были апробированы общепринятые методики лизиса бактериальной клетки без применения протеиназ Е.С.Grasset (1935), D.E.Guilfoyle (1988). Для выделения липополисахарида (ЛПС) из микробных клеток использовали метод экстракции ЛПС с помощью этилендиаминатетраацетата (ЭДТА) (Захаров, 1982; Zive Z., Morrison (1972), фенол-водной экстракцией по Westphal (1952). Белки наружных мембран (БНМ) выделяли по методу D.R.Verstreate (1982) и по P.J.HJakman (1987). Белки из периплазматического пространства микробной клетки (пе-риплазматические белки) выделяли экстракцией хлороформом по методу A.G.Ferro-Luzzi (1984) в нашей модификации, а также методом многократного замораживания-оттаивания по E.C.Grasset (1935). Антигены бруцелл, растворимые в солевых растворах (солевые антигены) получали по методу Moreno et al. (1979) в нашей модификации в два этапа.

Количественное содержание белка в препаратах клеточных экстрактов определяли стандартным методом по O.H.Lowry (1951), а в образцах, содержащих тритон Х-100 - модифицированным методом Lowry по J.Duley (1975), а также использовали спектрофотометрический метод определения белка на

спектрофотометре СФ-46. Содержание углеводов определяли колориметрическим методом по M.Dubois (1965).

Определение жирнокислотного состава клеток микроорганизмов проводили путем газовой хроматографии, используя метиловые эфиры жирных кислот, приготовленные с помощью гидроокиси тетраметиламмония (ГТМА) по Mac Gee в модификации Л.В.Андреева и А.И. Склифас. После разгонки определяли площади пиков на хроматограммах, и процентное их содержание. Оценку хроматограмм жирнокислотного состава исследуемых культур микроорганизмов проводили путем наложения хроматограмм эталонных культур и эталонных жирных кислот, а также при визуальном сравнение пиков на хроматограммах разных видов микроорганизмов.

Фракционирование белков клеточных экстрактов бактерий на основе их молекулярной массы проводили с помощью электрофореза в полиакрила-мидном геле с использование додецилсульфата натрия (ЭФ в ПААГ-ДСН) по U.K.Laemmli (1970) на пластинах. Подготовку образцов препаратов, фиксацию и окраску электрофореграмм проводили по Jakman P.J.H. (1987). Для определения молекулярной массы (М.м.) исследуемых белков проводили параллельно на той же пластинке геля разделение смеси референс-белков с известными молекулярными массами. По стандартным белкам строили калибровочную кривую, по которой определяли электрофоретическую подвижность (Rf) и М.м. исследуемых белков (K.Weber, M.Osborn (1969). Вычисление показателей подобия спектров проводили по методу Дегтевой Г.К. и Блохиной И.Н. (1972). Оптическую плотность отдельных полос в гелях определяли с помощью регистрирующего микрофотометра МФ-4 с электронным автоматическим потенциометром ЭПП-09 МЗ.

Для изучения антигенов бруцелл, определения их специфичности и идентичности применяли метод радиальной иммунодиффузии (РИД) в геле агаро-зы по Ухтерлони О. (1950). С целью повышения чувствительности этой реакции использовали процедуру двухступенчатой иммунохимической обработки. Для сравнения и контроля ставили РИД позитивной сыворотки и 0-ПС антигена из набора фирмы «Вектор-Бест» (ИЭВС и ДВ ).

Эпизоотологическую диагностику наиболее часто встречающихся болезней рыб проводим путем комиссионной экспертной оценки при плановых и экстренных экспедициях. Ихтиопатологические исследования проводили в соответствии с действующими методическими указаниями по диагностике болезней рыб на базе областной лаборатории и непосредственно в местах отлова.

Вид рыб определяли по «Определителю рыб морских и пресных вод» (1992, 1994). Для выявления паразитов рыб использовали метод полного гельминтологического (паразитологического) вскрытия по К.И. Скрябину и в модификации Быховской-Павловской (1969). Выявляемых паразитов определяли по «Определителю паразитов пресноводных рыб» (1969, 1987). В процессе исследования использовали лупы, микроскопы, компрессории, трихи-неллоскоп и др.

Видовую принадлежность личинок гельминтов определяли и путем постановки биологической пробы на интактных котятах, в отдельных случаях -щенках, морских свинках или хомяках. Определение вида паразита проводили через 3-4 недели после начала опыта по обнаруженным в фекалиях животных яйцам или половозрелым гельминтам в печени, желчном пузыре, кишечнике при патологическом исследовании подопытных животных.

Отбор проб для лабораторных исследований на паразитарную чистоту проводили в строгом соответствии с ГОСТ 7631-85 «Рыбы, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Правила приема, органолептические методы оценки качества, методы отбора проб для лабораторных испытаний».

Эпидемическую проекцию болезней рыб изучали совместно со специалистами областного центра Госсанэпиднадзора.

В плане совершенствования системы управления эпизоотическим проявлением паразитарных систем в условиях их повышенного риска изучали формирование механизма передачи возбудителя в популяциях хозяев, выявляли степень их эпизоотического риска и эпидемической проекции, участвовали в разработке научно обоснованных систем противоэпизоотических мероприятий, в т.ч. эпизоотологической диагностики, профилактики паразито-зов и ликвидации их эпизоотических очагов.

Статистическую обработку результатов исследований проводили по Н.А.Плохинскому и Хитоси Кумэ с использованием электронно-вычислительной техники МК-61, «Philips», «Citisen», «MDC-Control». Линейно-графическое моделирование результатов исследований и картографирование эпизоотического проявления паразитарных систем и их эпидемической проекции в различных социально-экологических условиях проводили по принятым в ветеринарии и биологии методам.

При планировании, методическом обосновании и реализации эпизоото-логических экспериментов участвовали и оказывали методическую помощь по отдельным разделам работы специалисты Департамента ветеринарии Минсельхозпрода РФ, начальники Управлений (отделов) ветеринарии районов и областей, директора ветеринарных лабораторий, специалисты районов и хозяйств, кандидаты ветеринарных наук А.А.Высоцкий, В.Е.Морковкина, кандидаты биологических наук О.М. Валедская, Н.Н.Семенова, доктора ветеринарных наук Л.А.Малышева, Н.П.Старунова. Н.В. Филиппов, заслуженные деятели наук РФ, член-корреспондент Россельхозакадемии В.В.Сочнев и академик Россельхозакадемии В.П.Урбан, которым автор выражает искреннюю признательность и благодарность за методическую помощь и научное сотрудничество.

Результаты исследований Экологические и хозяйственно-экономические предпосылки эпизоотического проявления инфекционных и инвазионных паразитарных ,, систем в современных условиях

Провели сравнительный анализ развития с.-х. производства, бонитета и ' использования земель, демографических показателей, уровня реструктуризации тенденций развития животноводства, сырьевой базы при формировании региональных продовольственных рынков и установили, что в конкретных субъектах федерации Европейской части РФ сложились традиционные особенности АПК, существенные отличия процессов урбанизации, а в условиях Нижнего Поволжья и Северного Каспия - экологические предпосылки сложных многоступенчатых и межпопуляционных взаимоотношений живых существ различных систематических уровней. Реструктуризация АПК, возникший спад в развитии животноводства породили изменения в формировании и наполнении регионального продовольственного рынка и, как следствие - продовольственную и эпизоотическую зависимость регионов. Усиление миграционных процессов способствует эпизоотической нестабильности в конкретных субъектах федерации.

. На глубину ретроспекции в 19 лет изучили нозологический профиль инфекционных и инвазионных паразитарных систем в различных экономических районах Европейской части России и установили, что в отдельных субъекгах РФ перечень регистрируемых инфекционных и инвазионных болезней животных значительно отличается. Так, в Астраханской области он значительно короче, чем в Волгоградской и в целом в РФ. В этих регионах паразитарная система бруцеллеза занимает от 7,3 до 30,1% от общего количества эпизоотических очагов и 10,2 - 41,5% - от общего количества вовлеченных в паразитарные системы животных. В нозологическом профиле паразитарных систем в популяции крупного рогатого скота в этих регионах доминируют: туберкулез, пастереллез, лейкоз, эмкар, бешенство и др. На долю кишечных инфекций приходится 15,6 и 6,5% общего количества эпизоотических очагов и вовлеченных в паразитарные системы животных.

В сравнительном аспекте оценили и разработали линейно-графические схемы-модели нозологического профиля паразитарных систем в популяции крупного рогатого скота в изучаемом регионе. Подтвердили, что по территориальному, популяционному проявлению и набору паразитарных систем, а также временной динамичности нозологический профиль инфекционной патологии крупного рогатого скота в субъектах Европейской части РФ неоднозначен, отличается динамичностью и верификацией.

Эпизоотологический надзор за эпизоотическим проявлением паразитарной системы бруцеллеза в зонах с различной степенью риска.

Имитация эпизоотического проявления паразитарной системы бруцелелеза в популяции крупного рогатого скота в зонах «свободных» от этой инфекции.

В сравнительном аспекте провели ретроспективный анализ эпизоотического проявления паразитарной системы брупелелезной инфекции в популяции животных в Нечерноземной зоне РФ (Архангельская, Рязанская области), в Северо-Кавказском (Ростовская область) и Поволжском экономическом районах (Волгоградская и Астраханская области) и установили, что в хозяйствах Архангельской области (постоянно благополучной по бруцеллезу) начиная с 1989 года при плановых скрининговых исследованиях выявлялись иммунологические показатели паразитарной системы бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота. Комиссионными исследованиями с участием специалистов ВИЭВ и УкрНИВИ установили, что в ряде хозяйств этого региона в течение 11 лет отмечались случаи компрометации эпизоотической ситуации по бруцеллезу. Однако ни в одном случае нарастания иммунологических показателей не имело места (в РА) и они не подтверждены другими реакциями (РСК, РБП) и бактериологическими исследованиями при многолетнем эпизоотологическом мониторинге. Наивысший уровень компрометации по бруцеллезу в популяции крупного рогаюго скота установлен в Приморском и Холмогорском районах (показатель компрометации соответственно 0,643 и 0,533 и индекс эпизоотичности за анализируемый период варьировал от 0,875 до 1,0). На базе Холмогорской опытной станции животноводства и луговодства был проведен эпизоотологический эксперимент. Комиссионными клинико-эгшзоотологическими исследованиями ин-тактных и скомпрометированных живошых на бруцеллез, туляремию, иер-синиоз, сальмонеллез (РА, РСК, РБП, Кумбса, РНГА, КР с молоком, РПЛЛ) совместно со специалистами областного центра Госсанэпиднадзора установили, что только у трех (8,3%) скомпрометированных животных отмечалась манифестация инфекционного процесса в форме патологии воспроизводительной системы, от одного из них получен изолят патогенного штамма У.еШегосоНйса. У всех скомпрометированных животных в РА с единым бруцеллезным антигеном не отмечалось нарастания титров антител, и только у 50% из них они имели диагностическое значение - 100 МЕ); во всех случаях - РСК и РНЛЛ были отрицательными, только в одном случае положительной была РБП. У 50% животных, задействованных в эксперимент, оказалась положительной РА с сальмонеллезным антигеном (100 - 200 МЕ), в 80,6% случаев установлены положительные реакции с эритроцитарным иерсиниоз-ным диагностикумом 09 в титрах 25 - 400 МЕ. В 72,2% случаев - с диагно-стикумом 03 в титрах 25 - 1600 МЕ. При постановке РА с культурами иерси-ний серовара 09 в 64%, серовара 08 - 61%, - 03 - в 47,2%, - 06/30 - в 58,3% -05/27 - в 38,9% случаев получены положительные результаты. При бакте-

риологи^еском исследовании получены изоляты E.coli, Y.enterocolitica, Serratia marcesccns и различные кокки; все изоляты микроорганизмов испытаны в РА с аутосывороткой. У трех животных получены положительные реакции со штаммом. Y.enterocolitica, у четырех - с E.coli. В РА с положительной бруцеллезной сывороткой (с титром 1600 МЕ) только изоляты Y.enterocolitica вступили в реакцию до титра 400 МЕ.

На основании полученных результатов исследований и комиссионной экспертной оценки вынесено объективное заключение о том, что в условиях свободных от бруцеллеза зон па фоне заражения животных иерсиниями, имеющими антигенное родство с бруцеллами, могут развиваться ситуации, имитирующие функционирование паразитарных систем бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота.

Разработаны, апробированы и утверждены НТС МСХ РФ и изданы 10 тыс. тиражом рекомендации по дифференциальной диагностике бруцеллеза и иерсиниоза (1991), внедрены в ветеринарных и медицинских диагностических лабораториях.

Функционирование паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота в зонах с риском энзоотического ее проявления.

В ходе эпизоотологического мониторинга за функционированием паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота в зоне его повышенного риска установили, что в целом в РФ эта патология занимает долю процента от общей заразной патологии, в то время как в Волгоградской области 41,5% - от числа заболевшего заразными болезнями крупного рогатого скота и 30,1% - от функционирующих эпизоотических очагов. В Астраханской области соответственно 10,2 и 7,3%. Разработали ли-нейно-радианную схему-модель роли и места паразитарной системы бруцеллеза в патологии крупного рогатого скота и подтвердили, что она более напряженно протекает в Волгоградской и Астраханской областях. Установили, что на территории Волгоградской области сформировалось 4 зоны риска паразитарной системы бруцеллеза: зоны максимального (показатель неблагополучия 0,648±0,019), повышенного (0,302±0,013), среднего (0,143±0,004) и минимального (0,049±0,001) риска. В целом в Волгоградской области показатель неблагополучия по бруцеллезу крупного рогатого скота за анализируемый период варьировал от 0,045 до 0,727 (М=0,276±0,012), по Астраханской - от 0,056 до 0,900 (М=0,357±0,017).

Установили, что построением линейно-графических схем-моделей территориальных и временных 1раниц паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота можно в историческом плане проанализировать эпизоотическое и межэпизоотическое проявление этой системы, а также эффективность мероприятий по ее сдерживанию. Подтвердили, что продолжительность эпизоотического проявления паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота в 10,9% случаев не превышала 12 мес., в 23,6% - до 2-х , в 30,9% - до 3-х, в 34,5% - до 5 лет. Индекс эпизо-

отечности варьировал от 0,091 до 0,395 (М~0,255±0,005) по Волгоградской и 0,063 до 0,313 (М=0,202±0,010) по Астраханской областям.

Методами прямой, косвенной и инверсивной верификации установили, чю временные границы паразитарной системы бруцеллезной инфекции более стабильны, чем территориальные, которые в большей степени поддаются воздействию антропогенных, чем биологаческих, факторов. Временные границы проявления парят гарной системы бруцеллезной инфекции в популяции облигатного хозяина формируются главным образом под воздействием биологических (объективных) причин, т.е. подчиняются закономерностям функционирования (саморегуляции) паразитарных систем. Их изменение происходило в 1,88 раза медленнее и менее выражено, чем территориальных границ.

В сравнительном аспекте изучили и популяционные границы паразитарной системы бруцеллеза среди крупного рогатого скота в изучаемом регионе и установили их высокую вариабельность по территориям и во времени. Так, в Астраханской области инцидентность этой паразитарной системы в популяции крупного рогатого скота варьировала от 38,8 в 1999г. до 53,3 в 1998г. (М=49,7±2,5) заболевших в расчете на 10 тыс. поголовья. Наивысший показатель инцидентности бруцеллеза имел место в Красноярском районе в 1999г. (286,9 заболевших в расчете на 10 тыс. поголовья). В Волгоградской области от 0 до 601,8 (М=78,2±3,9 заболевших на 10 тыс. поголовья).

Полученные результаты исследований имеют выраженное прикладное значение как для корректировки системы противоэпизоотического обеспечения животноводства, так и для концентрации сил и средств общества на проведение мероприятий по сдерживанию паразитарной системы бруцеллезной инфекции в регионе.

Основные факторы, формирующие инфекционную паразитарную системы и особенности механизма передачи возбудителя бруцеллезной инфекции в популяции облигатного хозяина.

Ре троспективным анализом динамических позиций эпизоотической ситуации по бруцеллезу в зонах с различной степенью его риска установили, что активизация паразитарной системы бруцеллезной инфекции в популяции облигатного хозяина в регионе происходила в период концентрации и специализации животноводства. Так, в 1976 году возникновение новых эпизоотических очагов было в 5,7 раза выше среднемноголетнего показателя. В последующие 20 лет функционирование паразитарной системы в целом в районе не перешло в межэпизоотический этап, а эпизоотическое проявление ее на новых территориях снизилось в 92 раза. Это подтверждает гипотезу о том, что перемещение и концентрация популяции облигатного хозяина бру-целл без учета эпизоотической ситуации является фактором, повышающим напряженность в паразитарной системе за счет активации механизма передачи возбудителя. Аналогичный эффект получен при разукрупнении животноводческих хозяйств в годы их реструктуризации (1990 -: 1994), когда количество свежих эпизоотических вспышек бруцеллеза в регионе возросло в 4,8

раза, паразитарная система бруцеллезной инфекции переместилась в мелкие крестьянские и фермерские хозяйства.

Установили, что пункты временной передержки больных бруцеллезом животных создают условия распространения паразитарной системы этой инфекции по территории и ее укоренения во времени. Так, в 3-х районах области, где функционируют бруцеллезные изоляторы, сконцентрировано 68,9% эпизоотических очагов бруцеллеза в области.

На уровень напряженности паразитарной системы бруцеллезной инфекции в популяции облигатного хозяина в зонах повышенного риска существенное влияние оказывает уровень специфической профилактики. Между этими показателями установлена обратная ранговая коррелятивная связь (коэффициент корреляции = - 0,65).

Результаты исследований позволяют заключить, что в зонах риска паразитарной системы бруцеллезной инфекции одновременно действуют факторы, активирующие и сдерживающие ее функционирование, формируя тенденцию ее изменений (угасания, нарастания, эпизоотической напряженности и эпидемической проекции).

Знание совокупности факторов воздействия на паразитарную систему бруцеллезной инфекции позволяет определить набор мер по разрушению механизма передачи возбудителя в популяциях облигатного и факультативного его хозяев.

Имитация паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота под воздействием гетерогенных раздражителей.

В одном их хозяйств Касимовского района Рязанской области в контролируемых эпизоотологических экспериментах на 152 коровах, ранее вакцинированных противобруцеллезными вакцинами, изучили возможность стимуляции специфического противобруцеллезного антителообразования под воздействием гетерогенных антигенных раздражителей (вакцина СТИ, противолептоспирозная вакцина, бивалентная против ящура, против эмкара). Установили, что у животных, ранее привитых противобруцеллсзной В.аЬогШз-82, а через 6 мес. - гетерогенными вакцинами, индуцируется образование противобруцеллезных антител, начиная с 7 по 21 - 28 дни после введения гетерогенных вакцин. При применении противолептоспирозной вакцины индукция противобруцеллезных антител отмечается у 90% таких животных, но к 45 дню иммунологические показатели на бруцеллез утрачиваются; при применении вакцины против эмкара - соответственно у 85% животных и утрачивались к 28 дню; при применении вакцины СТИ - у 85% животных и утрачивались также к 28 дню, а при применении противоящурной вакцины - практически у всех животных и утрачивались к 21 дню. Наибольшее количество реагирующих выявлялось в РПГА, а у части животных - в нескольких иммунологических реакциях. У животных контрольной группы не вакцинированных гетерогенными вакцинами антител, вступающих в реакции с бруцеллезными антигенами в этот период не выявлено.

Латентные формы бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота в межэпизоотический период паразитарной системы

бруцеллезной инфекции.

Известно, что особенностью паразитарной системы бруцеллеза является развитие у молодых животных иммунологической ареактивности, как правило, при внутриутробном заражении. Опасность таких животных заключается в отсутствии надежной диагностики. В целях подтверждения этого явления в производственных, контролируемых эпизоотологических экспериментах на 1755 телочках 4-5 месячного возраста в оздоравливаемых и благополучных хозяйствах изучили иммунологическую толерантность в отношении бруцелл, используя высокоагглютиногснную вакцину В.abortus -19 и установили, что высокая иммунологическая реактивность на введение данной вакцины установлена у 100% в контрольной и у 93,4 ±1,9% животных подопытных групп, у 4,3 -6,9% (М=5,2 ±0,9%) иммунологическая реактивность была ослабленной, а 0,4 - 3,7 (М=1,3 +0,1) % животных вообще оказались ареактивными. При бактериологическом исследовании ареактивных животных, убитых с диагностической целью, в 25% случаев получены изоля-ты бруцелл, идентифицированные как эпизоотические штаммы, подтвердив эпизоотическую опасность таких животных.

С целью совершенствования эпизоотологической диагностики паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота в

историческом плане на глубину в 30 лет проанализировали многолетнюю динамику ее эпизоотического проявления. Установили, что в условиях Астраханской области за это время возникло 144 новых эпизоотических очага бруцеллеза, вовлечено в паразитарную систему более 64 тыс. голов крупного рогатого скота, наивысшая инцидентность отмечалась в 1974 - 1976 годах. Функционирование маразм шрной системы бруцеллезной инфекции сопровождалось периодическим нарастанием и значительным спадом эпизоотической напряженности и заболеваемости животных. Отмечено, что изменение (снижение) количества эпизоотических очагов в 1,54 раза происходило медленнее, чем снижение уровня вовлеченности популяции в паразитарную систему. Одновременно изучили и годовую динамику функционирования паразитарной системы бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота и установили, что в изучаемом регионе она функционирует круглогодично с выраженными эпизоотическими надбавками во время сезонной рас-плодной компании в скотоводстве и через 1 - 1,5 мес. после начала пастбищного периода.

Разработали линейно-графическую модель годовой динамики функционирования паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота. Совершенствование эпизоотологической диагностики паразитарной системы бруцеллеза проводили путем оптимизации информационного обеспечения во время эпизоотологического мониторинга, клинико-эпизоотологического, иммунологического и бактериологического скрининга.

Выявили тенденцию снижения эпизоотической напряженности и уровня вовлеченности в паразитарную систему облигатного хозяина. Разработали схемы-модели эпизоотологического районирования паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота в регионе.

Осуществляя эпизоотологический мониторинг, изучили вовлеченность сочленов популяции крупного рогатого скота в паразитарную систему бруцеллезной инфекции. Установили, что в условиях Астраханской области она несколько отличается от аналогичных показателей по Волгоградской области. Разработали линейно-радианную схему-модель вовлеченности сочленов популяции облигатного хозяина в паразитарную систему бруцеллеза и подтвердили, что наиболее вовлеченными в данную систему оказались коровы старших возрастов (85,8%), телки случного возраста (6,0%), коровы-первотелки (7,4%), быки всех возрастов (0,1%), телки 4-5 месячного возраста (0,7%). Полученные данные использованы при разработке региональной системы противобруцеллезных мероприятий.

Осуществляя эпизоотологический мониторинг за функционированием паразитарной системы бруцеллеза, установили, что часть эпизоотических очагов этой инфекции в популяции крупного рогатого скота в регионе функционируют постоянно с незначительными колебаниями напряженности, после, казалось бы, затухания эпизоотического проявления инфекции, оно нарастало вновь и с большей силой. В 88-ми хозяйствах 14 районов возникли повторные вспышки бруцеллезной инфекции, 48,8% из них через 2-3 года после оздоровления. В отдельных хозяйствах повторные вспышки бруцеллеза отмечались по 2 - 3 раза. И в то же время в ряде районов, находящихся в непосредственной близости от действующих эпизоотических очагов бруцеллеза, длительно удерживается эпизоотическое благополучие.

• . Комиссионными экспертными оценками повторных эпизоотических вспышек паразитарной системы бруцеллеза подтверждено, что практически половина из них является следствием пополнения стад молодыми животными, полученными и выращенными в оздоровленных и оздоравливаемых хозяйствах. Полученные данные подтверждают гипотезу «территориальной приуроченности» (энзоотичности) бруцеллезной инфекции в популяции облигатного хозяина.

Функционирование паразитарной системы B.abortus среди других видов с.-х. животных и свободноживущих млекопитающих.

Совместно со специалистами Рязанского областного центра Госсанэпиднадзора изучили вовлеченность в паразитарную систему B.abortus сво-• бодноживущих млекопитающих и установили, что на территории неблагополучных по бруцеллезу животных обитает 16 видов мелких млекопитающих, доминирующее положение из них принадлежит полевке обыкновенной, полевке рыжей, мыши лесной, мыши домовой, мыши полевой и крысе-паскж. Иммунологическими исследованиями 484 свободноживущих животных, отловленных в Южной части Мещеры антитела к бруцеллезному антигену

выявлены в 3,9% случаев (у мышей полевых, мышей домовых, мыши желто-горлой, полевки обыкновенной, полевки рыжей и у куторы), в районах, прилегающих к этому району •- у 2,6%, в остальных районах области - у 2,8% свободноживущих мелких млекопитающих. Ни в одном случае бактериологических находок бруцелл при исследовании отловленных животных не получено. В ходе иммунологического мониторинга установили, что с затуханием эпизоотического проявления паразитарной системы бруцеллеза в популяции облигатного хозяина утрачиваются ретроспективные (иммунологические) показатели бруцеллезной инфекции у свободноживущих животных.

Осуществляя скрининговые исследования на бруцеллез с.-х. животных в эпизоотических очагах B.abortus, установили иммунологические показатели паразитарной системы этой инфекции среди лошадей, используемых на работах в скотоводстве (0,3+0,07% от числа исследованных), среди свиней на свинофермах, использующих молоко и молочные продукты с неблагополучных по бруцеллезу ферм (0,17±0,09% от числа исследованных), среди мелкого рогатого скота этих же хозяйств (0,04+0,001% от числа исследованных). Эпизоотологической экспертной оценкой установлено, что дальнейшего эпизоотического развития паразитарная система бруцеллеза среди этих видов животных в регионе не получила и с ликвидацией очагов бруцеллеза в популяции облигатного хозяина иммунологические показатели бруцеллезной инфекции среди лошадей и овец утратились.

Совместно со специалистами Госсанэпиднадзора проанализировали вовлеченность людей в паразитарную систему B.abortus на территории Рязанской области и установили, что с ослаблением эпизоотического напряжения паразитарной системы среди облигатного хозяина резко снижены показатели заболеваемости людей бруцеллезом. Между заболеваемостью крупного рогатого скота бруцеллезом и заболеваемостью людей крепкой коррелятивной связи в условиях Рязанской области не установлено (г= +0,1546). Однако более высокий уровень заболеваемости людей бруцеллезом в районах, неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота логически подтверждает связь эпизоотических и эпидемических показателей этой паразитарной системы. Повышенные показатели временной нетрудоспособности по причине бруцеллеза в отдельные годы при невысоких показателях заболеваемости людей бруцеллезом подтверждает рецидивирующее проявление бруцеллеза у людей, обусловленное длительной персистенцией возбудителя в организме. Однако ни в одном случае семейных или групповых очагов бруцеллеза среди людей в области не отмечено, что косвенно подтверждает роль человека в паразитарной системе B.abortus как тупикового хозяина.

Изучая эпидемическую проекцию паразитарной системы бруцеллеза в зоне повышенного, ее риска установили, что максимальные эпизоотические и эпидемические показатели паразитарной системы не совпадают по времени, последние отстают на 2 - 3 года. Однако наивысшие эпидемические показатели бруцеллеза установлены среди лиц, имеющих прямой или косвенный контакт с животноводством, а в зоне функционирования паразитарной сис-

темы В.abortus бактериологические находки бруцелл, полученные от людей в 57% случаев идентифицированы как B.abortus.

Нетрадиционные методы эпизоотологической диагностики паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота и

других видов животных.

Культуры-изоляты бруцелл, полученные от животных в зоне функционирования паразитарной системы бруцеллезной инфекции совместно с Л.А.Малышевой были охарактеризованы традиционными методами, в т.ч. и по хозяинной принадлежности и оценке эпизоотической ситуации региона. Установили, что изоляты бруцелл, доставленные на идентификацию выделены от животных в неблагополучных или оздоровленных от бруцеллеза хозяйств, в т.ч. и от животных, иммунизированных противобруцеллезными вакцинами. Бактериологическим мониторингом подтверждено, что в регионах Северо-Кавказского и Поволжского экономического районов сформировалась и функционирует, даже в период формального завершения оздоровления, инфекционная паразитарная система бруцеллезной инфекции в популяциях облигатных и факультативных хозяев. Эпизоотическое проявление паразитарной системы часто сменяется различным по продолжительности межэпизоотическим периодом.

Идентификация бруцелл методом газовой хроматографии по составу жирных кислот.

В течение ряда лет на базе лаборатории по изучению бруцеллеза НИВИ НЗ РФ проводилось изучение жирно-кислотного состава микробной клетки референтных штаммов 5 видов бруцелл, эпизоотических штаммов (изолятов) бруцелл, полученных от животных в хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией, а также микроорганизмов других систематических групп (иерси-ний, ешерихий). На основании проведенных исследований референтных и • музейных штаммов бруцелл составлена схема основных характеристик спектров жирно-кислотного состава, проведено математическое моделирование жирно-кислотного спектра бруцелл и иерешшй. Установлено, что в жир- 1 но-кислотных спектрах бруцелл наряду с общими признаками, характеризующими этот род микроорганизмов, выявляются специфические показатели, позволяющие проводить дифференциацию бруцелл по видам. Определенные соотношения основных жирных кислот (ЖК), наличие или отсутствие отдельных (ЖК) в спектре позволило использовать эти критерии для межвидовой дифференциации. На основании проведенных исследований разработана специальная «ключевая» таблица идентификации. По разработанной таблице и таблице основных характеристик проведена идентификация культур бруцелл, выделенных от животных в очагах бруцеллеза. Установили, что по качественному и количественному составу жирных кислот эти культуры характеризуются как бруцеллы вида B.abortus.

Электрофоретический метод идентификации бруцелл, изолированных на территории функционирования паразитарной системы бруцеллеза. В сравнительном аспекте изучили возможность использования элек-трофоретических профилей белков для идентификации и дифференциации культур бруцелл. В порядке последовательности и преемственности провели анализ электрофореграмм белков наружной мембраны (НМ), периплазмы, внеклеточных белков (экзопродуктов) бруцелл, изучили в сравнительном аспекте различные системы белков, белковых фракций при последовательном экстрагировании клетки бруцелл референтных, эпизоотических и вакцинных штаммов, а также иерсиний. Установили, что при электрофоретическом фракционировании экстрактов белков наружных мембран, экзопродуктов и периплазмы бруцелл каждая группа белков, относящаяся к определенному местоположению в микробной клетке, имеет свой, характерный для этой группы, графический профиль. Спектры ДСН-растворимых белков наружных мембран референтных штаммов бруцелл имели разнообразный пептидный состав, общее количество белковых фракций насчитывалось от 12 до 24. Наибольшая насыщенность фракций установлена в анодной части геля с относительной подвижностью (Rf) 50 - 100. В этой зоне относительной подвижности размещаются крупные пептидные фракции. На электрофореграмме в зоне геля выше Rf 50 в основном размещены минорные компоненты. Крупные фракции у разных видов бруцелл не одинаковы. У всех исследуемых видов бруцелл (B.abortus, B.melitensis, B.suis, B.ovis, B.canis) в спектрах отмечалась крупная фракция с молекулярной массой (М.м.) 63 ±1,0 килодаль-тон (кД). Фракция 49 ±1,0 кД отмечалась также у всех видов, но более ярко, отчетливо у видов abortus, canis, melitensis (у В. melitensis Rev-I - слабо). Фракция 40 ±1,0 кД хорошо выражена у изученных штаммов видов melitensis, suis, canis, у В. abortus -544, В. ovis 02 (у остальных штаммов этих двух видов она проявлялась слабее). Крупная фракция 37,5 +0,5 кД отмечалась у штамма В. abortus -54, а фракция 35,5 +0,5 кД - у всех видов бруцелл, особенно у видов ovis, suis, canis. На основании сравнительного анализа установлены не только общие для рода Brucella крупные фракции, но и видоспе-цифические различия.

Таким образом, можно сделать вывод, что основными, характерными для рода Brucella являются фракции ДСН-растворимых белков с Мм 60 - 64 кД, 48 - 49 кД, 40-41 кД и 35 кД (в условиях электрофореза с додецилсуль-фатом натрия (ДСН) в 10% ПААГ).

Наибольшее количество фракций периплазматических белков было сосредоточено на гелевой пластинке в области относительной подвижности белков с М.м. 67 - 13 кД (15% ПААГ), хотя у шт. B.ovis отмечались 3-4 крупных фракции с М.м. более 67 кД. В основном крупные белковые фракции распределялись в области М.м. 63 - 45 кД и 20 - 13 кД. В спектрах изученных штаммов бруцелл насчитывалось от 7 до 20 белковых фракций. Почти у всех видов на электрофореграммах отмечались фракции с М.м. 49 кД, 43 кД, 18 и 15 кД и фракция с М.м. более 13,7 кД. Более похожи по содержанию крупных фракций были спектры белков у видов suis - ovis и abortus - meliten-

srs.'- Так,' У штаммов бруцелл видов suis, ovis отмечались крупные фракции белков с М.м.55, 43 и менее 13,7 кД, а штаммы abortus - melitensis имели на своих спектрах одинаковые белковые фракции с М.м. 49 и 15 кД.

Коэффициент подобия спектров белков периплазмы бруцелл между штаммами одного вида составлял: у abortus - 67%, melitensis - 76%, suis -91%, ovis - 84%. Коэффициент подобия между видами бруцелл: abortus - melitensis - 67%, abortus - suis - 15%, abortus - ovis - 10%, melitensis - suis -14%, melitensis - ovis - 9%, suis - ovis - 32%. Наиболее высокий коэффициент подобия отмечался у штамма вида suis (91%) и ovis (84%), а между видами - у abortus - melitensis (67%).

Установили, что периплазматические белки характеризуются видоспе-цифичностью, каждый вид имеет свой спектр. Так, у штаммов вида abortus на электрофореграммах отмечались крупные фракции белков с М.м. 49, 15, и фракции менее 13,7 кД; у штаммов вида melitensis - 49, 43, 15 кД; у штаммов вида suis - 55, 43 и фракция менее 13,7 кД; у штаммов вида ovis - 55, 43, 18, 15 и фракция менее 13,7кД. Виды ovis вообще наиболее отличались по спектрам периплазматических белков от других видов большим набором крупных фракций (12) и характером их расположения на электрофореграммах. Кроме своеобразного спектра, характерного для каждого вида, у разных штаммов даже одного вида имелись и свои особенности, как по наличию отдельных крупных фракций, так и по содержанию минорных компонентов.

При сравнительном анализе электрофореграмм белков НМ, периплазмы и экзопродуктов установили, что каждая группа белков, относящихся к определенному местоположению в микробной клетке, имеет свой, характерный для этой группы, графический профиль. Так, белковые фракции экзопродуктов и наружных мембран занимали зону геля, соответствующую молекулярной массе 60-14 (кД). Крупные фракции НМ распределялись в области 60 -14 кД, а экзопродуктов - в основном в области 45 - 14 кД и только у двух штаммов (B.melitensis 102-Н и B.suis 181) отмечалось по две и одной (соответственно) крупных фракции в зоне Rf с М.м. 60 - 62 кД. Профили периплазматических белков отличались от вышеописанных большей насыщенностью фракции. Основные крупные белки занимали область геля, соответствующую М.м. 42-14 кД и только два штамма вида ovis (B.ovis 02 и 64) имели на электрофореграммах по четыре крупных фракции с М.м. более 67 кД. При анализе полипептидных профилей этих групп белков установлено, что электрофоретические спектры белков разных структурных уровней микробной клетки имели видовые и штаммовые различия. Крупные фракции белков определяли видовую специфичность бруцелл, а мелкие фракции -штаммовые различия. Каждый вид бруцелл характеризовался собственным набором белковых фракций, позволяющим дифференцировать штаммы бруцелл по видам. Наиболее четко видовые особенности были выражены у белков экзопродуктов и периплазмы.

В связи с тем, что при серологических исследованиях на бруцеллез часто наблюдаются ложноположительные реакции при наличии в сыворотке крови противоиерсинионых антител, нами изучены белковые антигены иерсиний.

При сравнительном анализе белков НМ и экзопродуктов бруцелл и иерсиний установлена гетерогенность белкового состава этих микроорганизмов. У иерсиний крупные фракции белков НМ и экзопродуктов занимали узкую область электрофореграмм с зоной относительной подвижности 53 - 59 (М.м. 50 - 40 кД), а у бруцелл интенсивно окрашенные фракции белков имели видовое отличие и занимали область с 40 - 95, что соответствует области распределения белков с М.м. 60-14 кД. Для сравнения с иерсиниями был исследован штамм другого рода семейства Е^егоЬас1епасеа - Е.соН (В). Спектр ДСН-растворимых белков НМ этого штамма по крупным фракциям белков имел большое сходство со спектром иерсиний. В результате исследований установили, что по спектрам белков НМ и экзопродуктов можно дифференцировать штаммы бруцелл от штаммов иерсиний.

На основании сравнительного анализа белковых спектров эпизоотических штаммов бруцелл со спектрами референс-культур проведена идентификация и установлено, что эпизоотические штаммы характеризуются гомогенностью пептидных спектров и по качественному и количественному составу пептидных фракций отнесены к виду В.аЬогПи.

С целью установления принадлежности выделяемых от животных культур бруцелл к вакцинным или эпизоотическим штаммам, нами были изучены белковые спектры вакцинных штаммов В.аЬоЛш -19, В.аЬоЛш - 82, Вг.те1иеш18 Яеу-1. Спектры белков ДСН-растворимых белков НМ этих штаммов были составлены 22-24 фракциями. Большинство фракций распределялось в анодной части геля, в зоне относительной подвижности белков с М.м. 80-13 кД, крупные же фракции белков находились в области Ш=68-85, соответствующей белкам с М.м. 46-32 кД. Штаммы В.аЬогПдБ - 19 и Вг.аЬоЛш - 82 имели по две идентичные крупные фракции с М.м. 45-47 кД и 35 кД, а белковый спектр штамма В.те1иеп51з Яеу-1 содержал три крупные фракции с М.М. 45 кД, 43 кД и 32 кД. Таким образом, в результате проведенных исследований и сравнительного анализа электрофореграмм установлена возможность дифференциации вакцинных штаммов бруцелл по белковым спектрам НМ.

Определение чувствительности и специфичности полученных фракций антигенов бруцелл проведено с использованием метода радиальной иммунодиффузии (РИД). Из 60-ти антигенов, экстрагированных разными методами, установлена чувствительность и специфичность 6-ти антигенов: липополисахарида (ЛПС) водной фракции фенольной экстракции, два антигена солевой экстракции, периплазматическая фракция штамма В.аЬоЛш-54 и два ДСН-экстракта (из В.аЬоПш 19 и -54). Установили также, что ЛПС, полученный с помощью этилендиаминатетраацетата (ЭДТА) является комплексным антигеном. Специфическая часть его идентична ЛПС водной фракции, а неспецифическая - фенольной фракции ЛПС, полученных методом водно-фенольной экстракции. При сравнительном анализе всех шести антигенов установлено, что идентичные фрагменты содержались в солевых и ДСН-экстрактах. Не отмечена идентичность липополисахаридных

антигенов с антигенами солевыми, периплазматическими и ДСН-экстрактами, что указывает на то, что эти антигены не содержат своем составе ЛПС-фрагментов.

Совершенствование системы антропогенного воздействия

(противоэпизоотических мероприятий) на разных этапах функционирования ПС бруцеллеза.

Установили, что положительные показатели иммунологического скрининга с бруцеллезным антигеном не всегда обусловлены функционированием паразитарной системы бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота, а являются следствием заражения микроорганизмами, имеющими антигенное родство с бруцеллами отдельными сероварами Yersinia еп-terocolitica. С целью дифференциации функционирующих паразитарных систем разработали (в соавторстве) научно обоснованную систему (рекомендации) по дифференциальной диагностике бруцеллеза и иерсиниоза, которая апробирована на НТС МСХ РФ, утверждена и издана 10 тыс. тиражем, внедрена в ветеринарных и медицинских диагностических лабораториях.

Осуществляя эпизоотологический мониторинг за функционированием паразитарной системы бруцеллеза, установили, что в зоне повышенного риска бруцеллеза выявляемость бруцелл за период с 1981 года снизилась более чем на порядок, что подтверждает загухание эпизоотического проявления паразитарной системы и переход ее в межэпизоотический этап. За весь период 52,1% изолятов бруцелл идентифицированы как вакцинные, что подтверждает постепенное вытеснение эпизоотических штаммов бруцелл из популяции облигатного хозяина.

Для дифференциации спонтанного бруцеллеза и поствакцинальных исследований (на фоне применения вакцины из штамма Br.abortus-82) в эпизо-отологических экспериментах в сравнительном аспекте проведен анализ изучения разрешающей способности РСК с R-бруцеллезным антигеном (г.Казань) и установили, что в 7,4% районов на территории изучаемого региона иммунологические показатели паразитарной системы бруцеллеза являются поствакцинапьными последствиями. 50 из 142 хозяйств, значившимися благополучными по бруцеллезу, переведены в число неблагополучных, а в 189 хозяйствах зоны иммунологические показатели бруцеллезной инфекции расценены как поствакцинальные и подтверждена возможность использования метода в качестве иммунологического контроля за вакцинированными против бруцеллеза животными.

В ходе эпизоотологического мониторинга за функционированием паразитарной системы бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота, установили, что эффективность слежения во многом зависит от комплексности и оперативности диагаостики бруцеллеза на организменном и популяционном уровнях. В сравнительном аспекте изучили разрешающую способность методов прижизненного контроля (диагностики) за состоянием паразитарной системы бруцеллеза и установили, что разрешающая способ-

ность клинико-эпизоотологического обследования животных в свежих и затухающих эпизоотических очагах бруцеллезной инфекции неодинакова. Манифестные формы бруцеллеза чаще регистрируются среди взрослых животных в свежих эпизоотических очагах (в 13,3±0,61% от их количества), при повторных эпизоотических вспышках в 2,3 раза реже. Результаты исследований подтверждают, что манифестное проявление на разных этапах паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота, хотя и не позволяет судить о широте вовлеченности облигатного хозяина в функционирование данной системы, своевременно «сигнализирует» о тенденциях эпизоотического проявления данной патологии. В производственных контролируемых экспериментах подтвердили, что при повторных вспышках бруцеллеза под воздействием активизации факторов передачи возбудителя в популяции не всегда удается остановить нарастание напряженности паразитарной системы, а применение средств специфической профилактики приводит к провокации латентных форм бруцеллезной инфекции.

Разработали линейно-радианные схемы-модели клинико-эпизоотологических и иммунологических показателей бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота на разных этапах функционирования паразитарной системы.

Разработали схемы-модели эпизоотологического мониторинга за развитием паразитарной системы бруцеллеза и эффективностью противоэпизо-отических мероприятий.

Изучая противоэпизоотическую эффективность системы мер с применением различных противобруцеллезных вакцин в зонах с различной степенью риска паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота, провели анализ эффективности применения вакцины из штамма Вг.аЬоПиз-19 и установили, что применение данной вакцины на крупном рогатом скоте в благополучных хозяйствах у части животных вызывает длительные иммунологические последствия, затрудняющие диагностику спонтанного бруцеллеза в регионе. В неблагополучных же по бруцеллезу хозяйствах ее применение приводит к обострению скрытых форм бруцеллезной инфекции у крупного рогатого скота, к длительным многочисленным (до 3 и более лет) проявлениям иммунологических реакций в поствакцинальный период.

Провели анализ результатов многолетнего (с 1974 по 1997 гг.) применения вакцины из штамма Вг.аЬоПиБ-82 в системе противобруцеллезных мероприятий в хозяйствах с различной степенью риска паразитарной системы бруцеллезной инфекции и установили, что применение данной вакцины способствовало снижению заболеваемости крупного рогатого скота бруцеллезом, ограничивало распространение и сокращало сроки ликвидации эпизоотических очагов. Так, за этот период в Астраханской области объем вакцинации возрос в 4,4 раза, инцидентность бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота снизилась в 3,2 раза, а показатель неблагополучия в 8,0 раз. Несколько лучше результаты получены при оценке системы противобруцеллезных мероприятий с применением вакцины из штамма В.аЬоПш-82 в хозяй-

ствах Волгоградской области. Результаты исследований, принятые по ним коррективы в системе противобруцеллезных мероприятий позволили изменить тенденцию в многолетней динамике эпизоотического проявления паразитарной системы бруцеллезной инфекции на территории Нижнего Повол-. жья, снизить территориальные и популяционные ее границы.

Провели серию эпизоотологических экспериментов по испытанию системы мероприятий с использованием противобруцеллезной вакцины «БИВ» первоначально в одном, а в последующем в 15 районах Волгоградской области и установили, что в самом неблагополучном по бруцеллезу районе за 6 месяцев после применения новой системы в 39% стадах получены многократные групповые отрицательные результаты при исследованиях животных на бруцеллез. Инцидентность паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота снизилась в 4,1 раза. В хозяйствах 16 районов с незначительным распространением паразитарной системы бруцеллезной инфекции в 1996 г. привито вакциной «БИВ» 79267 коров и 13169 телок. 8124 телки 4-5 месяцев исследованы на проявление иммунологической толерантности. При повышенном риске эпизоотического проявления паразитарной системы бруцеллеза здесь не возникли новые эпизоотические очаги бруцеллезной инфекции, а за 1996-1997 годы в целом по области ликвидировано 45 эпизоотических очагов бруцеллеза, на 19,6% возросла надежность оздоровления области от бруцеллеза крупного рогатого скота.

За последние года антиген «БИВ» испытан с положительным эффектом для распознавания (провокации) латентных форм бруцеллезной инфекции и после государственной комиссионной экспертной оценки результатов рекомендован для производственного испытания (Наставление, 2003).

Разработана в соавторстве, одобрена Департаментом ветеринарии и издана массовым тиражом и внедрена научно обоснованная система по управлению эпизоотическим проявлением паразитарной системы бруцеллеза в популяции облигатного и факультативных хозяев в регионах Поволжского экономического района РФ (1999, Н.Новгород, 376с.).

Эпизоотологический надзор за развитием паразитарной системы описторхоза в условиях Нижнего и Среднего Поволжья.

Изучили природно-географические и хозяйственно-экономические предпосылки формирования и функционирования паразитарной системы описторхоза и установили, что в этом регионе и на сопредельных с ним водных территориях существуют природно-географические и хозяйственные предпосылки формирования экологических паразитарных систем на многоступенчатом, межпопуляционном уровне, возбудители которых на разных стадиях своего биологического развития переживают в различных хозяевах: гидробионтах, млекопитающих, в т.ч. человеке. Многие из них имеют при-родно-очаговый характер и развиваются по законам саморегуляции.

' Изучили роль и место паразитарной системы описторхоза в нозологическом профиле инфекционной и инвазионной патологии животных

в условиях Нижнего Поволжья, Северного Каспия и сопредельных территорий и установили, что среди всех видов рыб здесь функционируют 34 паразитоза, в 92,8% случаев это гельминтозы, в 1,3% - протозоозы и 5,8% -арахноэнтомозы. Из общего числа исследованных рыб в 16,23% случаев установлена вовлеченность в различные паразитарные системы. Среди рыб карповых пород здесь регистрируется 19 инвазионных паразитарных систем, в т.ч. 16 (84,2%) гельминтозы.

На основании ретроспективного эпизоотологического анализа разработали линейно-графическую и линейно-радианную схемы-модели нозологического профиля по основным инвазионным паразитарным системам с вовлечением в них карповых рыб. Подтвердили высокую степень вовлеченности карповых рыб в паразитарную систему описторхоза на долю которого приходится 55,3% всей инвазионной патологии карповых рыб.

В серии эпизоотологических экспериментов изучили хозяннный состав паразитарной системы описторхозе в регионе и установили, что описторхии на стадии маритогонии переживают в организме дефинитивных хозяевах (различные виды млекопитающих, в т.ч. и человек, а также птицы), на стадии эмбриогонии - частично в дефинитивных хозяевах и во внешней среде и частично в промежуточном хозяине. На стадии партеногонии - в промежуточном хозяине (моллюске р. СосИеИа), на стадии цистогонии - во внешней среде и в рыбах семейства карповых (дополнительном хозяине).

При изучении функционирования паразитарной системы описторхоза на стадии партеногонии возбудителя проанализировали материалы многолетних исследований Астраханского государственного биосферного заповедника, любезно предоставленных нам главным научным сотрудником кандидатом биологических наук Н.Н.Семеновой, и установили, что излюбленным и практически постоянным местом обитания моллюсков рода СскИ-е11а является авандельта (открытая зона) и водоемы нижней зоны надводной дельты (слабопроточные ерики и ильмени) р.Волги, что обусловлено благоприятными гидрологическими и кормовыми условиями этого уникального района. Установлено, что в силу климатических условий, в авандельте ежегодные сроки пробуждения гидробионтов к активной жизни начинается гораздо раньше, а количество моллюсков гораздо больше и сохраняются они до ледостава.

Зараженность моллюсков партениками и церкариями описторхий в авандельте р.Волги гораздо выше (2,2%), чем в надводной дельте, здесь значительно выше и вовлеченность в паразитарную систему карповых рыб (23,2%). Из анализа материалов заповедника следует, что суточная плодовитость мариты описторхий достигает 600 яиц, а зараженность церкариями описторхозного типа моллюсков р.Со<Ие11а в среднем составляет 4,5±0.2%. Выход церкариев из моллюсков происходит в основном на свету и достигает максимума в 14 часов.

На основе изучения многолетних исследований заповедника разработали линейно-графическую схему-модель суточного ритма высвобождения

церкариев описторхисов из моллюсков в зависимости от степени освещенности.

Изучили хозяиниый состав паразитарной системы описторхоза на стадии цистогонии возбудителя и разработали линейно-графическую схему-модель функционирования паразитарной системы описторхоза на этой стадии. Установили, что в изучаемом регионе вовлеченность в паразитарную систему рыб разных видов не одинакова: лещ - на 15,9%, вобла - на 32,3%, чехонь - на 20,2%, густера - на 13,2%, линь - на 34,3, красноперка - на 46,7%, тарань - на 57,1%.

Изучили хозяиниый состав паразитарной системы описторхоза на стадии маритогонии возбудителя и построили его линейно-графическую схему-модель. Установили, что в эпизоотическое проявление паразитарной системы описторхоза вовлечены: кошки - на 75%, собаки - на 14,3%, енотовидные собаки - на 79%, волк - на 30%, лиса - на 28,4%, американская норка - на 21,1%, кабан - на 5%, тюлень каспийский (на 40% - в 1990г., и 3,8% - в 2000г.), человек на 42,8 случаев в расчете на 100000 тыс. населения - в 1990г. и 3,72 - в 2000г.

Результаты исследований подтверждают необходимость осуществления постоянного эпизоотологического мониторинга за функционированием паразитарной системы описторхоза на всех стадиях развития паразита.

Изучили территориальные границы паразитарной системы описторхоза в условиях изучаемого региона и разработали их линейно-графические схемы - модели. Установили, что границы эпизоотического проявления паразитарной системы описторхоза в популяциях отдельных видов рыб семейства карповых в условиях Нижнего Поволжья совпадают с основным ареалом их постоянного обитания и границами «проходных», миграционных (весенне-осенних) процессов. Так, лещ, вобла поражаются опистор-хозом на 88,9% площади региона, чехонь и тарань - на 22,2%, синец и сопа -на 11,1%, линь - на 33,3%, красноперка - на 44,5% и густера - на 55,5%.

Изучили эпизоотическое проявление паразитарной системы описторхоза в регионе и установили, что она функционирует как моноинвазия в 32,8% и 43,3% - как микстинвазия в сочетании РзеиёаатрЫзЮтит ЦитсаШт. Впервые сконструировали и представили линейно-радианную схему-модель паразитарной системы как моно- и микстинвазии описторхоза в семействе карповых рыб.

Установили, что паразитарная система описторхоза в популяции воблы в 50% случаев протекает как 3-х членная и в 50%, как 4-х членная микстинвазия в сочетании с РовШосПрЬвЮТшт, Рагасоепо£отш и ВоНэоАэгш, а в популяции лещей - в форме 3-х членной - в 47,9%, в 4-х членной - в 29,9% и в 5-и членной микстинвазии в 22,2% случаев. В популяции густера паразитарная система описторхоза в 100% случаев функционирует как 3-х членная микстинвазия.

Разработали линейно-радианные схемы-модели функционирования паразитарной системы описторхоза в популяциях леща, воблы, густеры.

Изучили годовую и многолетнюю динамику функционирования паразитарной системы описторхоза на стадиях партено-, цисто- и марито-гонии и установили, что годовая динамика описторхоза в первом промежуточном хозяине совпадает с активизацией его жизнедеятельности. На стадии метацеркарий отмечается отклонение в инстенсивности и экстенсивности описторхозной инвазии различных видов рыб семейства карповых в сторону нарастания - при осенних экспертных оценках.

Разработали линейно - радианпую модель многолетней динамики паразитарной системы описторхозной инвазии в популяции рыб по интенсивным и экстенсивным показателям. Наивысшая ИИ была установлена в 1998 году, ЭИ в 1997-1998 годах. Однако четкой математической зависимости экстенсивных и интенсивных показателей в функционировании паразитарной системы описторхоза на стадии цистогонии возбудителя не установлено.

Изучили эпидемическую проекцию паразитарной системы описторхоза в России, и конкретно в Нижнем Поволжье. Наивысший уровень вовлеченности человека в паразитарную систему описторхозной инвазии по данным Госсанэпиднадзора установлен в Красноярском и Алтайском краях, в Тюменской, Свердловской, Омской и Курганской областях. В Республике Хакасия количество заболевших описторхозом за последние 10 лет возросло в 10,7 раза. Уровень заболеваемости населения описторхозом в Астраханской области снизился с 497 в 1991 до 14 случаев в 1998 годах или в 35,5 раза.

Сконструировали линейно-графическую схему-модель функционирования паразитарной системы описторхоза в различных зонах Российской Федерации и эпидемической ее проекции в условиях дельты р. Волги, Северного Каспия и сопредельных территорий.

Эпизоотическим надзором за функционированием паразитарной системы описторхоза установили территориальные, временные, популя-ционные и межпопуляционныс границы ее эпизоотического проявления и составили схему-карту аппликации степени ее риска среди населения в условиях Астраханской области.

Результаты исследований явились основой совершенствования системы противоописторхозных мероприятий в условиях Нижнего Поволжья, определения и апробации основных направлений корректировки противоописторхозных мероприятий адекватно изменениям степени риска этой инвазии.

Подтвердили, что главным направлением противоописторхозных мероприятий и в первую очередь для осуществления постоянного эпизоотического мониторинга и периодических экспертных оценок являются структурно-организационное укрепление ветеринарного обеспечения рыбоводства и рыболовства в регионе.

На базе госветслужбы создана областная противоэпизоотическая экспедиция по борьбе с болезнями рыб с сетью профильных районных ветеринарных участков по болезням рыб. Разработаны цели, предмет деятельности, права и обязанности этой экспедиции.

Вторым направлением совершенствования противоописторхозных мероприятий является оптимизация диагностики описторхоза на стадии цистогонии. Подтвердили, что диагностика является методом противоэпизо-отического обеспечения при описторхозе, направленным на выявление источника возбудителя этой инвазии. Установили, что только комплексная диагностика описторхоза, включающая экспресс-микроскопию материала от пораженных рыб при экспедиционном изучении и биологические исследования на интактных котятах позволила значительно повысить разрешающую способность методов контроля паразитарной системы этой инвазии.

Впервые разработали схему-модель контроля разрешающей способности экспресс-микроскопического и биологического исследований при описторхозе в условиях изучаемого региона.

В условиях контролируемого эксперимента в сравнительном аспекте изучили разрешающую способность ИФА-стрип с набором реагентов для выявления антител к антигенам гельминтов-описторхисов (ЗАО «Вектор-Бест», г.Новосибирск) и установили, что в организме зараженных описторхисами котят иммунтела образуются и выявляются к 34-40 дням после заражения. Диагностическим убоем зараженных животных подтвердили результаты иммунологических исследований, что позволило рекомендовать ИФА-стрип с вышеуказанным набором диагностикумов, как дополнительный метод диагностики описторхоза у домашних плотоядных на стадии марито-гонии возбудителя.

Провели корректировку региональной научно-обоснованной системы противоописторхозных мероприятий в регионе и представили, как целевую программу борьбы с описторхозом в условиях Нижнего Поволжья. В целевую программу включены нормативные ссылки и методические обоснования, указания Департамента ветеринарии по профилактике гельминтозов, передающихся через рыбу и других гидробионтов (23.09.96 N 13-753), Сан-ПиН 3.2.569-96, а также область их применения, сведения о причинах и условиях заражения описторхозом людей и животных, модель специальных и организационно-хозяйственных мероприятий при выявлении описторхоза на поднадзорной территории, схема мероприятий по недопущению заражения описторхозом людей, комплекс мероприятий специального направления, а также медицинские мероприятия. Целевая программа утверждена Администрацией Астраханской области, а 21.06.2000г. введены повышенные требования по лицензированию рыболовства, реализации, хранения и переработки рыбы и рыбопродуктов в условиях Астраханской области (пр. № 45). Целевая программа внедрена на всей территории региона, что позволило усилить контроль над качеством и безопасностью рыбы и рыбопродуктов. Только в 2000 году проведено 199386 ихтиопатологических исследований и в 13473 случаях установлено поражение рыб паразитами. С целью охраны здоровья людей и защиты прав потребителей на качественные и безопасные продукты питания Госветнадзором в течение 2000 года введено ограничение на свободную реализацию рыбы в количестве 8,9 тыс.тонн. Из них направлено на предреализационное потрошение 3,34 тыс.тонн, в кулинарную обработку в

сети общепита 2,42 тыс. тонн, в переработку на пищевой фарш 1,84 тыс. тонн, в переработку на консервы 32 тонны, 863,1 тонн рыбы исключено из числа пищевой и направлено на утилизацию. Внедрение целевой программы борьбы с описторхозом в условиях Нижнего Поволжья подтвердило ее эффективность, значительно снижены напряжение эпизоотического проявления паразитарной системы и эпидемический риск описторхозиой инвазии в регионе. Заболеваемость людей описторхозом в 2000 году составила 3,72 заболевших на 100 тыс. населения или в 11,5 раза ниже, чем в 1990 году.

Подготовлена, отрецензирована, одобрена МСХ РФ и рекомендована к изданию как методическое пособие монография «Функционирование открытых паразитарных систем на примере описторхоза» Н.Новгород, 2003г.

ВЫВОДЫ

1. В условиях Нижнего Поволжья, Северного Кавказа и отдельных регионов Нечерноземной зоны РФ сформировалась и укоренилась паразитарная система бруцеллезной инфекции с конца 50-х годов прошлого столетия. Облигатным хозяином В.abortus является крупный рогатый скот, на его долго приходится более 87% установленных случаев бруцеллезной инфекции в АПК. Факультативными хозяевами этого вида бруцелл установлены другие виды с.-х. животных и свободноживущие млекопитающие, а тупиковым хозяином - человек. Самостоятельного эпизоотического проявления паразитарной системы бруцеллезной инфекции B.abortus среди этих животных и людей не установлено, однако за последние годы возросла роль B.abortus в бруцеллезной патологии людей.

2. В течение последних 50 лет в зону повышенного риска проявления паразитарной системы бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота в РФ входят Волгоградская и Астраханская области. В 1998 году 20,7% эпизоотических очагов бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота, значившихся в РФ, приходилось на Волгоградскую область.

3. Паразитарная система бруцеллезной инфекции играет важную роль и место в формировании нозологического профиля инфекционной патологии крупного рогатого скота в изучаемом регионе. На ее долю приходится 30,1% эпизоотических очагов и 41,5% заболевших инфекционными болезнями животных в Волгоградской области, соответственно в 15,8 и в 3,4 раза больше общероссийских показателей.

3.1. Эпизоотическое проявление паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота в условиях Волгоградской области отличается территориальной неравномерностью (показатель неблагополучия варьирует от 0 до 0,727 (М=0,276±0,029), временной устойчивостью и разнообразием популяционных границ (заболеваемость скота бруцеллезом здесь варьирует от 41,4 до 104,5 заболевших в расчете на 10 тыс. поголовья (М=78,2±3,9). Наивысшая инцидентность проявления паразитарной системы бруцеллезной инфекции B.abortus в пйЩ^Щц^дщвдщо хозяина имела место в Даниловском районе Волгогр гдсковмюпмтаю 1991 г. (601,8 забо-

СПетерСярг J OS ЭМ

левших на 10 тыс. поголовья). Наивысшая очаговость паразитарной системы бруцеллезной инфекции - в Киквидзенском районе (348,5±17,2), в 4,5 раза превышающая среднеобластную (М=77,7±3,9).

3.2. В многолетней динамике территориальных границ эпизоотического проявления паразитарной системы бруцеллезной инфекции наметилась тенденция неравномерного сокращения, за последние 5 лет территориальные ее границы сократились в 17,5 раз.

3.3. Паразитарная система бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота функционирует круглогодично с выраженными сезонными эпизоотическими надбавками в январе-марте и июне-июле, в 19,2% случаев проявляется манифестно (клинически), в 81,2% - в форме ретроспективных иммунологических последствий. В 12,5% случаев показатели иммунологического и клинического проявления паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота совпадают.

3.4. Функционирование паразитарной системы бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота отличается неравномерностью поражения сочленов популяции. Наиболее часто бруцеллезная инфекция диагностируется среди коров старших возрастов (85,8±0,75% случаев), в 7,4% случаев - среди коров-первотелок, в 6,0% - среди телок случного возраста и только в 0,7% случаев среди телок 4-5 месячного возраста. Мужские особи среди заболевших бруцеллезом животных составляют всего лишь 0,1%. У телят, родившихся от коров неблагополучных и «оздоровленных» от бруцеллеза стад в 5,2 - 10,6% (М=8,5±0,4%) развивается иммунолог ическая реактивность (толерантность).

4. В условиях Волгоградской области функционирование паразитарной системы бруцеллеза поддерживается сформировавшимся региональным механизмом передачи возбудителя бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота. Новые эпизоотические вспышки бруцеллезной инфекции в 43,8% случаев обусловлены прямым или опосредованным контактом здоровых и зараженных животных на пастбищах, в 17,1% - завозом зараженных животных из других регионов и хозяйств, в 39,1% - без завоза возбудителей извне.

4.1. Активация паразитарной системы и, в частности, факторов передачи возбудителя бруцеллезной инфекции отмечалась в регионе в период концентрации и специализации скотоводства (темп нарастания территориальных границ увеличился в 18,4 раза) при формировании фермерских и крестьянских хозяйств (в 4,8 раза), а также под воздействием функционирующих пунктов передержки больного бруцеллезом скота (Клетский и Серафимович-ский районы), а также технологических отступлений при формировании основного стада животноводческих ферм (13,2% эпизоотических вспышек паразитарной системы бруцеллезной инфекции оказались повторными из-за пополнения стад молодыми животными с латентными формами бруцеллезной инфекции).

5. Комплекс да^н^с^ическщ'-исследований на завершающем этапе оздоровления базкруется ? накзпииютолбгическом мониторинге за развитием

• 1 "«Г й • . О

эпизоотического проявления паразитарной системы бруцеллезной инфекции с использованием бактериологического и иммунологического скрининга, клинико-эпизоотологических исследований, дифференциальной диагностики бруцеллеза и иерсиниоза во вновь возникающих эпизоотических очагах, дифференциации спонтанного проявления ИПС бруцеллезной инфекции от поствакциналъных последствий, в т.ч. и возникающих па фоне гетерогенных воздействий.

5.1. Нетрадиционные методы идентификации и дифференциации бру-целл на основе изучения их жирно-кислотного и белкового спектра значительно повышает надежность эпизоотологической диагностики паразитарной системы бруцеллеза.

6. На территориях, заведомо благополучных по бруцеллезу, инфицирование крупного рогатого скота иерсиниями, имеющими антигенное родство с бруцеллами, может имитировать развитие паразитарной системы бруцеллезной инфекции в этой популяции животных. Применение разработанной комплексной диагностики по дифференциации и идентификации этих патологий позволяет своевременно вносить ясность в эпизоотическую ситуацию региона.

7. В условиях низовья Волги, Северного Каспия и сопредельных территориях на фоне экологических, природно-климатических и традиционно-хозяйственных предпосылок, эволюционно сформировалась и функционирует многоступенчатая паразитарная система на межпопуляционной основе -описторхоз.

8. В паразито-хозяинные межпопуляционные отношения паразитарной системы описторхозной инвазии в этом регионе вовлечены трематода С^зАогсЫб 5еНпеиз, моллюски рода СоШеИа, рыбы семейства карповых (лещ, вобла, тарань, линь, красноперка, сопа), рыбоядные млекопитающие (кошка, собака, енотовидная собака, свинья, кабан, волк, американская норка, ондатра, каспийский тюлень) и человек.

9. Популяционные, территориальные и временные границы функционирования паразитарной системы описторхозной инвазии на межпопуляци-онном уровне обусловлены экологической нишей первого промежуточного хозяина (моллюска рода СосКеНа), наличием условий для жизненного пространства (размножения и выращивания) рыб семейства карповых, обилием представителей фауны, постоянно или периодически обитающих в регионе, а также благоприятными природно-климатическими условиями для биологического цикла развития трематоды - О.ГеНпеш.

В условиях Дельты р.Волги и Северного Каспия зараженность моллюсков рода СосПеПа церкариями О^еНпеиэ в среднем составляет 4,5 ± 0,2%.

Пробуждение гидробионтов (моллюсков рода СосНеИа) к активной жизнедеятельности в силу климатических условий в изучаемом регионе начинается в марте и сохраняется до ледостава, наивысшая их встречаемость отмечается в авандельте р.Волга (открытая зона) и в водоемах нижней зоны надводной дельты ( слабопроточные ерики и ильмени).

Пораженность метацеркариями описторхисов рыб семейства карповых в регионе не одинакова: лещ - 15,9%, вобла - 32,3%, чехонь - 20,2%, линь -34,3%, густера - 13,2%, красноперка - 46,7% и тарань - 57,1%.

В эпизоотический процесс описторхоза и изучаемом регионе вовлечены кошки в 75%, собаки в 14,3%, енотовидные собаки в 79%, волки в 30%, лисы в 28,4%, американская норка в 21,1%, каспийский тюлень от 3,8 до 40%.

10. Описторхоз на стадии цистогонии в условиях изучаемого региона функционирует как моно - 2-3-4-х членная микстинвазия рыб семейства карповых, на стадии партеногонии, как моно и 2-х членная инвазия моллюска рода Codiella, на стадии маритогонии - как эпизоотический процесс с вовлечением широкого перечня популяций млекопитающих в т.ч. и человека.

11. Функционирование паразитарной системы описторхоза - процесс управляемый. Антропогенными факторами, сдерживающими эпизоотическое проявление паразитарной системы описторхоза в регионе являются - своевременная и безошибочная диагностика паразитарной системы на всех стадиях развития возбудителя, воздействие (разрушение) всеми доступными средствами и способами механизма передачи возбудителя по всей природной пищевой цепочке, освобождение облигатных хозяев паразита на стадии ма-рито- и эмбриогонии, обеззараживание продуктов рыбоводства и др. гидро-бионтов в местах вылова и переработки.

12. В многолетней динамике паразитарной системы описторхоза выяв-,, лены периоды нарастания и спада напряженности эпизоотического процесса,

обусловленные воздействием антропогенных и биологических факторов.

Описторхоз, как паразитарная система в регионе функционирует круглогодично, с выраженным периодическим нарастанием степени риска, обусловленным особенностями биологического цикла развития O.filinrus, сезонным характером рыболовства, либерализацией формирования и наполнения продовольственного рынка в регионе.

13. Оптимизация диагностики описторхоза на стадии цистогонии достигается комплексным сочетанием морфологических и биологических исследований, а также применением иммунологических исследований (ИФА^спользование набора реагентов для ИФА - стрип с целью дифференциации антител к антигенам гельминтов у плотоядных позволяет диагностировать описторхозную инвазию на стадии мариты у котят.

Формирование марит O.felineus в организме котят завершается к 34 дню после заражения, приживаемость метацеркариев в организме интактных животных варьирует от 11,4 до 32,4%.

14. Разработанная целевая региональная программа борьбы с опистор-хозом в условиях Нижнего Поволжья включающая организационно структурные укрепления ветеринарного обеспечения рыболовства и рыбоводства в

■ регионе, усиление государственного ветеринарного, санитарно-эпидемиологического надзора за развитием эпизоотического проявления паразитарной системы этой инвазии, за качеством и безопасное шо рыбы и рыбопродуктов при отлове, хранении, переработке и реализации, оказалась на-

учно-обоснованной, востребованной и высоко эффективной. Ее апробация и внедрение в условиях Астраханской области позволила значительно снизить напряженность эпизоотического проявления паразитарной системы и за последние годы в 11,5 раз снизить зараженность людей описторхозом в регионе.

Рекомендации производству:

1. Схемы-модели противобруцеллезных мероприятий в зонах минимального, среднего и повышенного риска развития паразитарной системы бруцеллезной инфекции на завершающем этапе оздоровления субъекта федерации.

2. Научно-обоснованная система дифференциальной диагностики бруцеллеза и иерсиниоза животных, утвержденная НТС МСХ РФ, (1991).

3. Наставление по применению антигена БИВ для провокации скрытых (латентных) форм бруцеллезной инфекции, утвержденное Департаментом ветеринарии МСХ РФ (2003г.).

4. Целевая программа противобруцеллезных мероприятий на завершающем этапе оздоровления Волгоградской области с учетом степени риска бруцеллезной инфекции (утверждена Упр.ветеринарии Администрации Волгоградской области, 2002 г.).

5. «Функционирование паразитарных систем на примере описторхоза», монография, одобрено и рекомендовано в качестве учебно-методического пособия МСХ РФ, 2003г., Н.Новгород, 2003г., 176 с.

6. Эпизоотологический надзор при бруцеллезе в условиях Европейской части РФ (функционирование паразитарной системы), рекомендовано МСХ РФ в качестве учебно-методического пособия для ВУЗов ветеринарного и биологического профиля, Н.Новгород, 2003г., 273с.

7. Линейно-графические модели сравнительной оценки электрофоре-грамм белкового спектра различных клеточных структур микробной клетки бруцелл различных видов и штаммов (при молекулярных методах идентификации и дифференциации бруцелл) (одобренные Департаментом ветеринарии МСХ РФ, 2003).

8. Нетрадиционные методы дифференциации и идентификации бруцелл и иерсиний (одобрено департаментом ветеринарии МСХ РФ, Н.Новгород. 1994,86 с.; 1997, 76 с.

9. Целевая программа по борьбе с описторхозом в условиях Нижнего Поволжья (Утвержденная Управлением ветеринарии Администрации Астраханской области, 2000г.)

10. Оптимизация диагностики описторхоза у дефинитивных хозяев (котят) с использованием набора реагентов для ИФА-стрип с целью дифференциации антител к антигенам гельминтов, в том числе и описторхоза.

11. Линейно-радианные модели измерения территориальных, временных и популяционных границ эпизоотического процесса описторхозной инвазии в зонах ее повышенного риска.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Тунгусова В.И., Горчакова Н.Г. Изучение микрофлоры кишечника карпа. Мат. Всесоюзн.совещан. «Организация мероприят. по борьбе с инфекц. бол.рыб» М., 1981, с.73 - 75.

2. , Иммунологические реакции в дифференциальной диагностике бруцеллеза и иерсиниоза крупного рогатого скота /В.Сочнев, А.Б.Тебекин, Н.Г.Горчакова и др. // Матер.Всесоюзн, конф. «Современ. Проблемы иммун., биотехн., генной и клеточной инженерии в вет, медицине», Н.Новгород, 1990, с.112

3. Дифференциальная диагностика бруцеллеза и иерсиниоза и меры по их профилактике./Сочнев В.В., Тебекин А.Б., Горчакова Н.Г. и др.// Рекомендации, М, Госагропромиздат, 1991,27 с.

4. Нетрадиционные методы исследований при дифференциальной диагностике бруцеллеза животных. /Сочнев В.В., Горчакова Н.Г., Старунова Н.П. // Рекомендации,ННовгород, 1994,85 с.

5. Газохроматографический метод идентификации микроорганизмов -возбудителей болезней животных. / JI.А.Лазовская, В.В.Сочнев, Л.М.Пинчук, Н.Г.Горчакова, А.Б.Тебекин//Рекомендации, П.Новгород, 1993, 40 с.

6. Эпизоотология бруцеллеза крупного рогатого скота в условиях современной Мещеры. /Н.Н.Старунова, В.В.Сочнев, Н.Г.Горчакова //Сб.науч.тр. «Проблемы профил. И лечен. Заболев. С.-х. жив», Н.Новгород, 1993, с.23-29.

7. Горчакова Н.Г., Старунова Н.П., Сочнев В.В. Идентификация и дифференциация микрооорганизмов методом электрофореза белков Сб.науч.тр. «Проблемы профил. и лечен, заболев, с.-х. жив», Н.Новгород, 1993, с.36—44.

8. Нетрадиционные методы исследований при дифференциальной диагностике бруцеллеза животных. /Сочнев В.В., Горчакова Н.Г., Старунова Н.П. и др.//Рекомендации, Н.Новгород, 1994, 85 с.

9. Экологическая ниша бактерий рода Yersinia /Сочнев В.В., Тебекин А.Б., Старунова Н.П.Горчакова Н.Г. и др. //Матер.междунар. славян,-Евраз.конгр. деятелей науки, культуры, Н.Новгород, 1994, с. 14-15.

10. Горчакова Н.Г., Сочнев В.В., Старунова Н.П. Идентификация эпизоотических штаммов бруцелл по спектрам жирных кислот. / Материалы науч. конф. «Инфекц. и инваз,бол,жив, и меры борьбы», Н.Новгород, 1994, с.27 -31.

11. Горчакова Н.Г., Сочнев В.В., Старунова Н.П. Видовые особенности жирнокислотного состава бруцелл /Сб.науч.тр. «Прогнозир и диагност., меры профилакт. и меры брьбы с разл. заболев, жив. в условиях НЗ РФ», С.Петербург-Пушкин, 1994, с. 12- 13.

12. Нозологический профиль инфекционной патологии крупного рогатого скота в отдельных регионах Российской Федерации /Сочнев В.В.Старунова Н.П., Тебекин А.Б., Горчаковва Н.Г.// Сб.науч.тр. «Прогнозир и диагност., меры профилакт. И меры брьбы с разл. заболев, жив. в условиях НЗ РФ», С.Петербург-Пушкин, 199.-С. 14- 15.

13. Комбинированные химиотерапевтические препараты в системе мер по адаптации и повышению продуктивности крупного рогатого скота в условиях Северного региона России / Сочнсв В.В.,Старунова Н.П., Елезов М.П.,Горчакова Н.Г. и др.//Сб. «Гигиена, ветеринарияя и экология животноводства»: Матер.Всероссийск.научно-производств.конф. Чебоксары», 1994, С.408 -409.

14. Научно обоснованная система противобруцеллезных мероприятий в Нечерноземной зоне Российской федерации /В.В.Сочнев, В.А.Душкин, НП.Старунова, Н.Г.Горчакова, А.Б.Тебекин //Рекомендации, Н.Новгород, 1995,33 с.

15. Научно обоснованная система противоиерсиниозных мероприятий в животноводческих хозяйствах /В.В.Сочнев, В.А.Душкин, Н.П.Старунова, А.Б.Тебекин, Н.Г.Горчакова и др. // Рекомендации, Н.Новгород, 1995,37 с.

16. Горчакова Н.Г., Сочнее В.В., Старунова Н.П. Жирнокислотный спектр бруцелл и иерсиний /Сб.иауч.тр. «Диагностика, лечен., профилактика болезней с.-х..жив», Н.Новгород, 1996, С.41 - 47.

17. Горчакова Н.Г. Оптимизация способов фракционирования. /Сб.науч.тр. «Диагностика, лечен., профилактика болезней с.-х..жив», Н.Новгород, 1996, С.56 - 62.

18. Нетрадиционные методы исследования при дифференциальной диагностике бруцеллеза животных /Сочнев В.В., Григорьева Г.И., Горчакова Н.Г. и др. // Учебно-методич. пособие, ННовгород, 1997, с.76.

19. Противоиерсиниозные мероприятия в животноводческих хозяйствах. /Сочнев В.В., Сабурин В.А.,Старунова Н.П., Горчакова Н.Г. и др.// Сб.науч. тр. «Ветеринарная и биологическая науки сельскохоз. Производству». Матер. Всероссийск. науч.ироизводств. конфер., Н.Новгород, 1997,65 - 66 .

20. Пути усовершенствования лабораторной диагностики иерсиниоза животных. /Тебекин А.Б., Сочнев В.В., Сабурин В.А., Горчакова Н.Г. и др.// Сб.науч. тр. «Ветеринарная и биологическая науки сельскохоз. Производству». Матер. Всероссийск. науч.производств. конфер., Н.Новгород, 1997, с.68 -71.

21. Изучение белковых спектров бруцелл и иерсиний в сравнительном ас-пекте./Горчакова Н.Г., Сочнев В.В., Старунова Н.П., Тихонов В.К.// Сб.науч. тр. «Ветеринарная и биологическая науки сельскохоз. Производству». Матер. Всероссийск. науч.производств. конфер., ННовгород, 1997, с.71 - 73.

22. К организации противоэпизоотических мероприятий в свежих очагах бруцеллеза./Сочнев В.В., Авилов В.М.0 Старунова Н.П., Горчакова Н.Г. и др.// Сб.науч. тр. «Ветеринарная и биологическая науки сельскохоз. Производству». Матер. Всероссийск. науч.производств. конфер., Н.Новгород, 1997, с.231 -237.

23. Бактериологическая экспресс-диагностика как фактор экологического благополучия при антропонозных инфекциях. /Григорьева Г.И., Горчакова Н.Г., Сочнев В.В., Старунова Н.П.// Сб.науч. тр. «Ветеринарная и биологическая науки сельскохоз. Производству». Матер. Всероссийск. Науч.производств. конфер., Н.Новгород, 1997, с.277 - 281.

24.,-'j'Защита окружающей среды при возникновении иерсиниоза в животноводческих хозяйствах /Сочнев В.В., Тебекин А.Б.,Сабурин ВА., Горчакова Н.Г,. и* др.// Сб.науч. тр. «Ветеринарная и биологическая науки сельскохоз. Производству». Матер. Всероссийск. Науч.производств. конфер., Н.Новгород, 1997, с.313 -317.

25. Экологическая защита окружающей среды при возникновении иерсиниозов животных / Сочнев В.В., Душкин В.А, Аринкин A.B. Горчакова Н.Г.//Рекомендации, Н.Новгород, 1999, 36 с.

26. Управление эпизоотическим процессом на модели бруцеллеза крупного рогатого скота в Нижнем Поволжье /В.В.Сочнев, Н.В.Филиппов, Г.И.Григорьева, В.П.Быков, Н.ПБацанов, Н.Г.Горчакова // Монография, Н.Новгород, 1999. 375 с.

27. Гельминтозы рыб Нижегородской области. / Н.Г.Горчакова, И.Е.Зюзин, Е.А.Смирнова и др.// Матер. Международной науч.конф., Казань, 2000, С.44 -45.

28. Григорьева Г.И.,Горчакова Н.Г. Белковые системы бруцелл в сравни-тельномаспекте /Матер. Международной науч.конф., Казань, 2000, С.46 - 47.

29. Система эпизоотологического надзора профилактических и лечебно-реабилитационных мероприятий при болезнях телят в раннем постнатальном периоде /Сочнев В.В., Сисягин П.Н., Аринкин A.B., Горчакова П.Г./ Научно обоснованная система, Н.Новгород, 2000, 88 с.

30. Быков В.П., Горчакова Н.Г., Зюзин И.Е. Гельминтозоопозы рыб Астраханской области /Журнал «Ветеринария», 2001, № 6, 15-17.

31. Идентификация бруцелл по особенностям динамики их роста на жидких питательных средах /Л.Б.Тебекин, В.В.Сочнев, Н.Г.Горчакова и др.// Сб.статей «Проблемы ветеринарии на рубеже веков», Н.Новгород, 2001, с. 18 х-'22.

32. Горчакова Н.Г. Иммунохимические показатели антигенов бруцелл / Сб.статей «Проблемы ветеринарии на рубеже веков», Н.Новгород, 2001, с. 50 - 53.'

33. Горчакова Н.Г., Сочнев В.В., Старунова Н.П. Идентификация микроорганизмов по спектрам жирных кислот / Сб.статей «Проблемы ветеринарии на рубеже веков», Н.Новгород, 2001, с. 143 - 147.

34. Способ идентификации бруцелл. Тебекин А.Б., Горчакова Н.Г.,Старунова Н.П., Сочнев В.В.// Патент № 2081917 на изобретение 20.06.1997,9 с.

35. Положительное решение на выдачу патента РФ на изобретение по заявке № 94036309/13 от 28.09.94 «Способ идентификации и дифференциации бруцелл». Горчакова Н.Г., Сочнев В.В., Старунова Н.П., Тебекин А.Б.

36. Усовершенствованная система иротивоэпизоотических мероприятий при бруцелле?е крупного рогатого скота в условиях дельты реки Волги и сопредельных территорий /В.В.Сочнев, В.ПБыков, А.В.Сочнев, Н.Г.Горчакова //Научно-обоснованная система, Н.Новгород, 2001, 39 с.

37.' Система эпизоотологического надзора при лейкозе крупного рогатого скота в услошях. хозяйств о различной формой собственности (в схемах и

моделях) / В.В.Сочнев, В.А.Душкин, А.В.Аринкин Н.Г.Горчакова // Учебно-методическое пособие, Н.Новгород, 2001, 38 с.

38. Бруцеллы и бруцеллез (микробиология, иммунология и биотехнология) / Г.И.Григорьева, В.В.Сочнев, Н.П.Бацанов, Н.В.Филиппов, Н.Г.Горчакова и др. // Монография. Н.Новгород, 1998. - 246с.

39. Горчакова Н.Г., Быков В.П., Усенков A.B. «Функционирование паразитарных систем на примере описторхоза» Монография, Н.Новгород,2003,176с.

40. Горчакова Н.Г., Быков В.П., Усенков A.B. «Эпизоотологический надзор при бруцеллезе в условиях Европейской части РФ (функционирование паразитарной системы)» Монография, Н.Новгород, 2003, 273 с.

41. Горчакова Н.Г. Определение чувствительности и специфичности антигенов бруцелл / Матер.междунар.науч.практич.конф. актуаль.проблемы ин-ваз., инфекционной и незаразн. патологии ж-х. Ставрополь, 2003. - 166-174.

Горчакова Наталья Григорьевна

Эпизоотологический надзор при инфекционных и инвазионных болезнях • на примере бруцеллеза и описторхоза (функционирование паразитарных систем)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Компьютерный набор и верстка Т.В.Овсюхно

Корректор О.Ф.Костина Лицензия ЛР № 040284 от 6.05.98г.

Подписано в печать 9.10.2003 г. Форма т 60/84 1/16. Печать офсетная. Бумага офсетная. Усл. печл. - 2,0. Тираж -100 экз. Заказ № 369

Типография НГСХА, 603107, Н.Новгород, пр.Гагарина,97

1

/

I

I

I

I !

i t

2c>og -Д

P 1672 8

i

i

I

i

Организационно-структурные и экономические преобразования в АПК РФ, выраженный диспаритет цен оказали существенное влияние на развитие животноводства России. Возникшее энергетическое и экономическое давление на сельскохозяйственный сектор страны явилось сдерживающим фактором в развитии отраслей животноводства на современном этапе. Практически во всех экономических районах РФ произошло сокращение численности поголовья с./х. животных, в значительной степени разрушены промышленные технологии в скотоводстве, свиноводстве и птицеводстве. Снижены и интенсивные показатели развития животноводства.

Реструктуризация сельскохозяйственного производства страны неоднозначно отразилась на эффективности традиционных систем противоэпизоотического обеспечения животноводства и на характере формирования продовольственного рынка России в целом и ее отдельных регионов. Разработанная для социалистического строя система ветеринарно-санитарного контроля в современных условиях оказалась недостаточно действенной и надежной. В отдельных регионах РФ возросла эпизоотическая и эпидемическая значимость болезней, общих для человека и животных, участились случаи рецидивов хронических болезней животных.

К числу опасных зоонозных болезней в России по-прежнему щ продолжают оставаться бруцеллез и описторхоз, а за последние годы проявилась неравномерность распространения этих болезней, выявлены регионы с их территориальной приуроченностью. Не однозначными оказались и эффективность противобруцеллезных и противоописторхозных мероприятий, а оздоровление регионов весьма ненадежным. # Вторая половина XX столетия ознаменовалась бурным развитием методологии в эпидемиологии и эпизоотологии, сформирован и внедрен «эпидемиологический и эпизоотологический надзор», органически включающиеся в систему противоэпидемических и противоэпизоотических мероприятий. Важное значение приобрели молекулярная эпидемиология и эпизоотология,. эпидемиологическая и эпизоотологическая диагностика. Исследователи уделяют должное внимание совершенствованию эпизоотологической диагностики и эпизоотологического надзора (В.П.Урбан, 1998; С.И. Джупина, 1983, 1991; И.А.Бакулов, 1986; В.В.Макаров, 1999; В.В.Сочнев, 1998 и многие др.).

В настоящее время в науке сложилось мнение о том, что инфекционные (инвазионные) болезни необходимо рассматривать не как случайное явление, а как отражение фило- и онтогенетически обусловленного взаимоотношения макро- и микроорганизма (В.В.Макаров, 1999).

В настоящее время, по мнению исследователей, весьма актуальным вопросом для ветеринарной науки является разработка карт эпизоотологического надзора и их внедрение. Особенностью этого метода является его специфичность для каждой нозоединицы, системный подход к нозоединице, как к сформировавшейся и функционирующей паразитарной системе. В большинстве случаев болезни животных, в т.ч. и общие для животных и человека, не всегда рассматриваются с позиции паразитарных систем и комплексного подхода в их изучении и профилактике. В связи с этим и учитывая накопленный нами многолетний исследовательский материал, мы поставили цель изучить и рассмотреть на примере бруцеллеза и описторхоза формирование и развитие эпизоотического проявления паразитарных систем в конкретных экологических и хозяйственно-экономических условиях и на этой основе усовершенствовать систему противоэпизоотических мероприятий при бруцеллезе и описторхозе.

На разрешение были поставлены следующие задачи:

- изучить экологические, хозяйственно-экономические предпосылки формирования и функционирования паразитарных систем бруцеллеза и описторхоза в условиях отдельных регионов Европейской части РФ;

- изучить нозологический профиль инфекционной и инвазионной патологии животных и определить роль и место конкретных паразитарных систем (бруцеллеза, описторхоза) в формировании общей патологии животных;

- на основе эпизоотологического надзора и методов современной прогностики изучить характер эпизоотического проявления этих паразитозов ф и их территориальные, временные и популяционные границы в регионах с различной степенью риска;

- изучить возможные случаи имитации активности эпизоотического проявления функционирующей паразитарной системы бруцеллеза крупного рогатого скота под воздействием гетерогенных и родственноантигенных раздражителей;

- в сравнительном аспекте изучить разрешающую способность и эффективность нетрадиционных методов диагностики эпизоотического проявления функционирующих паразитарных систем (бруцеллеза и описторхоза) в зонах с различной степенью их риска и определить роль и место нетрадиционных методов в общем комплексе эпизоотологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в Европейской части РФ;

- изучить потенциальную и реальную эпидемическую проекцию паразитарных систем бруцеллеза и описторхоза в зонах с различной степенью их риска;

- усовершенствовать систему управления эпизоотическим проявлением щ паразитарных систем на примере описторхоза и бруцеллеза крупного рогатого скота, с использованием нетрадиционных методов диагностики и профилактики.

Научная новизна. В настоящей работе впервые в условиях Европейской части РФ в сравнительном аспекте и в динамике изучены Ф процессы развития эпизоотического проявления паразитарных систем бруцеллеза крупного рогатого скота и описторхоза, их роль и место в общей патологии животных, а также основные факторы экологического и хозяйственно-экономического воздействия на их территориальные, временные и популяционные границы. Изучена разрешающая способность нетрадиционных методов диагностики паразитарной системы бруцеллеза крупного рогатого скота и имитации активности ее эпизоотического проявления под воздействием гетерогенных и родственноантигенных раздражителей. Усовершенствована научно-обоснованная система управления эпизоотическим проявлением паразитарных систем описторхоза и бруцеллеза крупного рогатого скота в зависимости от степени риска этих болезней.

Практическая ценность. Научно обосновано и доказано, что паразитарные системы описторхоза и бруцеллеза крупного рогатого скота в изучаемом регионе - системы управляемые.

Результаты исследований составили основу для разработки научных рекомендаций: «Дифференциальная диагностика бруцеллеза и иерсиниоза и меры борьбы», утвержденных НТС МСХ РФ, М.,1991; «Нетрадиционные методы исследований при дифференциальной диагностике бруцеллеза животных», одобренные МСХ РФ (Н.Новгород, 1994; 1997); «Газохроматографический метод идентификации микроорганизмов -возбудителей болезней животных», Н.Новгород, 1993; «Научно-обоснованная система противоиерсиниозных мероприятий в животноводческих хозяйствах», одобренная МСХ РФ, Н.Новгород, 1995; «Научно обоснованная система противобруцеллезных мероприятий в НЗ РФ», одобренная МСХ РФ, ф Н.Новгород, 1995; «Экологическая защита окружающей среды при возникновении иерсиниозов животных», Н.Новгород, 1999; «Управление эпизоотическим процессом на модели бруцеллеза крупного рогатого скота в Нижнем Поволжье» (монография), Н.Новгород, 1999, 375 е.; «Усовершенствованная система противоэпизоотических мероприятий при # бруцеллезе крупного рогатого скота в условиях дельты реки Волга и сопредельных территорий», одобрена МСХ РФ, Н.Новгород, 2000; «Функционирование паразитарных систем на примере описторхоза» (монография), Н.Новгород, 2003, 174 с. (одобрена МСХ РФ и рекомендована в качестве учебно-методического пособия для ветеринарных вузов, № 27 - 6 и

- 39/150 от 23,01.02); «Эпизоотологический надзор при бруцеллезе в условиях Европейской части РФ (функционирование паразитарной системы)» Монография, (одобрена МСХ РФ и рекомендована к изданию в качестве учебно-методического пособия для ветеринарных вузов, № 27 - 6 -39/150 от 23.01.02), Н.Новгород, 2003, 273 с.

Приоритетность исследований подтверждена Патентом РФ на изобретение №2081917 «Способ идентификации бруцелл» (20.06.97); положительным решением на выдачу патента РФ на изобретение по заявке № 94036309/13 от 28.09.94 «Способ идентификации и дифференциации бруцелл».

Основные положения, выносимые на защиту:

- эпизоотическое проявление паразитарной системы описторхоза и бруцеллеза крупного рогатого скота является постоянной составляющей нозологического профиля заразной патологии животных в условиях Европейской части РФ;

- паразитарная система бруцеллеза B.abortus в различных регионах Европейской части РФ функционирует в четко очерченных территориальных, временных и популяционных границах адекватно степени ее риска,

- под воздействием гетеро- и родственноантигенных раздражителей происходит активация паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота даже в отдаленные сроки после вакцинации противобруцеллезными вакцинами; нетрадиционные методы идентификации бруцелл являются дополнительными методами объективной оценки эпизоотической ситуации и эффективности проводимых противоэпизоотических мероприятий;

- описторхоз в условиях Поволжского региона и Северного Каспия функционирует как многоступенчатая паразитарная система;

- управление эпизоотическим проявлением паразитарных систем описторхоза и бруцеллеза путем воздействия на источник возбудителей и восприимчивых животных, а также разрушения механизма передачи возбудителей является востребованным и эффективным мероприятием в системе ветеринарного обеспечения конкретных регионов.

Пути реализации: Результаты исследований используются при разработке и усовершенствовании эпизоотологического надзора при других паразитарных системах в регионе, а также в учебном процессе при подготовке специалистов ветеринарной профессии.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на заседаниях методической комиссии и совета ветеринарного факультета НГСХА (1994 -2002), на Всероссийских и региональных научно-практических конференциях: Н.Новгород, 1993, 1994,1997, 1999, 2001; С.Петербург, 1994; Волгоград, 1996; Казань, 2000; Чебоксары, 1994; Свердловск, 1995; Новочеркасск, 1995, 1997; на Международном славянском Евро-Азийском конгрессе деятелей науки и культуры, Н.Н.вгород,1994; На заседаниях издательского Совета НГУ им.Лобачевского, 1999; НГСХА, 1995,1997,1999, 2001, 2003 гг.; На межкафедральном заседании кафедр эпизоотологии и инфекционных болезней, паразитологии, общей биологии и ветсанэкспертизы, микробиологии, вирусологии и биотехнологии (2003), на ученом Совете НГСХА, 2003 г.

Материалы диссертации опубликованы в 57 научных статьях, рекомендациях, монографиях, учебно-методических пособиях, а также в научных отчетах НИВИ НЗ РФ и НГСХА.

Внедрение. Результаты исследований в 1994 - 2003 гг. под авторским надзором с положительным эффектом внедрены в хозяйствах Нижегородской, Рязанской, Свердловской, Волгоградской, Астраханской, Архангельской областях, а также республики Удмуртия. Подготовлены (в соавторстве), утверждены НТС МСХ РФ, Департаментом ветеринарии и Департаментом образования и кадровой политики МСХ РФ и изданы массовым тиражом: 7 рекомендаций, 4 учебно-методических пособий и 3 монографии: Дифференциальная диагностика бруцеллеза и иерсиниоза и меры борьбы», утвержденных НТС МСХ РФ, М.,1991; «Научно обоснованная система противобруцеллезных мероприятий в НЗ РФ», одобренная МСХ РФ, Н.Новгород, 1995;»Научно обоснованная система по управлению эпизоотическим процессом бруцеллеза в зоне его повышенного риска (1998); «Функционирование паразитарных систем на примере описторхоза» (монография) (2003); «Бруцеллы и бруцеллез (микробиология и биотехнология) (монография) (1997); «Нетрадиционные методы исследований при дифференциальной диагностике бруцеллеза животных» (1994; 1997; 2003); «Эпизоотологический надзор при бруцеллезе (функционирование паразитарной системы) в условиях Европейской части РФ» (монография), (2003); Временное наставление по применению инактивированной противобруцеллезной вакцины «БИВ», утв. Департаментом ветеринарии МСХ РФ (1996); Временное наставление по применению антигена «БИВ» для провокации латентных форм бруцеллезной инфекции, утв. Департаментом ветеринарии МСХ РФ, 2003); получен один патент (№ 2081917) и одно положительное решение на изобретение.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений, списка использованной литературы и приложений.

ВЫВОДЫ

1. В условиях Нижнего Поволжья, Северного Кавказа и отдельных регионов Нечерноземной зоны РФ сформировалась и укоренилась паразитарная система бруцеллезной инфекции с конца 50-х годов прошлого столетия. Об-лигатным хозяином B.abortus является крупный рогатый скот, на его долю приходится более 87% установленных случаев бруцеллезной инфекции в АПК. Факультативными хозяевами этого вида бруцелл установлены другие виды с.-х. животных и свободноживущие млекопитающие, а тупиковым хозяином - человек. Самостоятельного эпизоотического проявления паразитарной системы бруцеллезной инфекции B.abortus среди этих животных и людей не установлено, однако за последние годы возросла роль B.abortus в бруцеллезной патологии людей.

2. В течение последних 50 лет в зону повышенного риска проявления паразитарной системы бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота в РФ входят Волгоградская и Астраханская области. В 1998 году 20,7% эпизоотических очагов бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота, значившихся в РФ, приходилось на Волгоградскую область.

3. Паразитарная система бруцеллезной инфекции играет важную роль и место в формировании нозологического профиля инфекционной патологии крупного рогатого скота в изучаемом регионе. На ее долю приходится 30,1% эпизоотических очагов и 41,5% заболевших инфекционными болезнями животных в Волгоградской области, соответственно в 15,8 и в 3,4 раза больше общероссийских показателей.

3.1. Эпизоотическое проявление паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота в условиях Волгоградской области отличается территориальной неравномерностью (показатель неблагополучия варьирует от 0 до 0,727 (М=0,276±0,029), временной устойчивостью и разнообразием популяционных границ (заболеваемость скота бруцеллезом здесь варьирует от 41,4 до 104,5 заболевших в расчете на 10 тыс. поголовья (М=78,2±3,9). Наивысшая инцидентность проявления паразитарной системы бруцеллезной инфекции B.abortus в популяции облигатного хозяина имела место в Даниловском районе Волгоградской области в 1993 г. (601,8 заболевших на 10 тыс. поголовья). Наивысшая очаговость паразитарной системы бруцеллезной инфекции - в Киквидзенском районе (348,5±17,2), в 4,5 раза превышающая среднеобластную (М=77,7±3,9).

3.2. В многолетней динамике территориальных границ эпизоотического проявления паразитарной системы бруцеллезной инфекции наметилась тенденция неравномерного сокращения, за последние 5 лет территориальные ее границы сократились в 17,5 раз.

3.3. Паразитарная система бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота функционирует круглогодично с выраженными сезонными эпизоотическими надбавками в январе-марте и июне-июле, в 19,2% случаев проявляется манифестно (клинически), в 81,2% - в форме ретроспективных иммунологических последствий. В 12,5% случаев показатели иммунологического и клинического проявления паразитарной системы бруцеллеза в популяции крупного рогатого скота совпадают.

3.4. Функционирование паразитарной системы бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота отличается неравномерностью поражения сочленов популяции. Наиболее часто бруцеллезная инфекция диагностируется среди коров старших возрастов (85,8±0,75% случаев), в 7,4% случаев - среди коров-первотелок, в 6,0% - среди телок случного возраста и только в 0,7% случаев среди телок 4-5 месячного возраста. Мужские особи среди заболевших бруцеллезом животных составляют всего лишь 0,1%. У телят, родившихся от коров неблагополучных и «оздоровленных» от бруцеллеза стад в 5,2 - 10,6% (М=8,5±0,4%) развивается иммунологическая реактивность (толерантность).

4. В условиях Волгоградской области функционирование паразитарной системы бруцеллеза поддерживается сформировавшимся региональным механизмом передачи возбудителя бруцеллезной инфекции в популяции крупного рогатого скота. Новые эпизоотические вспышки бруцеллезной инфекции в 43,8% случаев обусловлены прямым или опосредованным контактом здоровых и зараженных животных на пастбищах, в 17,1% - завозом зараженных животных из других регионов и хозяйств, в 39,1% - без завоза возбудителей извне.

4.1. Активация паразитарной системы и, в частности, факторов передачи возбудителя бруцеллезной инфекции отмечалась в регионе в период концентрации и специализации скотоводства (темп нарастания территориальных границ увеличился в 18,4 раза) при формировании фермерских и крестьянских хозяйств (в 4,8 раза), а также под воздействием функционирующих пунктов передержки больного бруцеллезом скота (Клетский и Серафимович-ский районы), а также технологических отступлений при формировании основного стада животноводческих ферм (13,2% эпизоотических вспышек паразитарной системы бруцеллезной инфекции оказались повторными из-за пополнения стад молодыми животными с латентными формами бруцеллезной инфекции).

5. Комплекс диагностических исследований на завершающем этапе оздоровления базируется на эпизоотологическом мониторинге за развитием эпизоотического проявления паразитарной системы бруцеллезной инфекции с использованием бактериологического и иммунологического скрининга, клинико-эпизоотологических исследований, дифференциальной диагностики бруцеллеза и иерсиниоза во вновь возникающих эпизоотических очагах, дифференциации спонтанного проявления ИПС бруцеллезной инфекции от поствакцинальных последствий, в т.ч. и возникающих на фоне гетерогенных воздействий.

5.1. Нетрадиционные методы идентификации и дифференциации бруцелл на основе изучения их жирно-кислотного и белкового спектра значительно повышает надежность эпизоотологической диагностики паразитарной системы бруцеллеза.

6. На территориях, заведомо благополучных по бруцеллезу, инфицирование крупного рогатого скота иерсиниями, имеющими антигенное родство с бруцеллами, может имитировать развитие паразитарной системы бруцеллезной инфекции в этой популяции животных. Применение разработанной комплексной диагностики по дифференциации и идентификации этих патологий позволяет своевременно вносить ясность в эпизоотическую ситуацию региона.

7. В условиях низовья Волги, Северного Каспия и сопредельных территориях на фоне экологических, природно-климатических и традиционнохозяйственных предпосылок, эволюцнонно сформировалась и функционирует многоступенчатая паразитарная система на межпопуляционной основе -описторхоз.

8. В паразито-хозяинные межпопуляционные отношения паразитарной системы описторхозной инвазии в этом регионе вовлечены трематода Opisthorchis felineus, моллюски рода Codiella, рыбы семейства карповых (лещ, вобла, тарань, линь, красноперка, сопа), рыбоядные млекопитающие (кошка, собака, енотовидная собака, свинья, кабан, волк, американская норка, ондатра, каспийский тюлень) и человек.

9. Популяционные, территориальные и временные границы функционирования паразитарной системы описторхозной инвазии на межпопуляци-онном уровне обусловлены экологической нишей первого промежуточного хозяина (моллюска рода Codiella), наличием условий для жизненного пространства (размножения и выращивания) рыб семейства карповых, обилием представителей фауны, постоянно или периодически обитающих в регионе, а также благоприятными природно-климатическими условиями для биологического цикла развития трематоды - O.felineus.

В условиях Дельты р.Волги и Северного Каспия зараженность моллюсков рода Codiella церкариями O.felineus в среднем составляет 4,5 ± 0,2%.

Пробуждение гидробионтов (моллюсков рода Codiella) к активной жизнедеятельности в силу климатических условий в изучаемом регионе начинается в марте и сохраняется до ледостава, наивысшая их встречаемость отмечается в авандельте р.Волга (открытая зона) и в водоемах нижней зоны надводной дельты ( слабопроточные ерики и ильмени).

Пораженность метацеркариями описторхисов рыб семейства карповых в регионе не одинакова: лещ - 15,9%, вобла - 32,3%, чехонь - 20,2%, линь -34,3%, густера - 13,2%, красноперка - 46,7% и тарань - 57,1%.

В эпизоотический процесс описторхоза и изучаемом регионе вовлечены кошки в 75%, собаки в 14,3%, енотовидные собаки в 79%, волки в 30%, лисы в 28,4%, американская норка в 21,1%, каспийский тюлень от 3,8 до 40%.

10. Описторхоз на стадии цистогонии в условиях изучаемого региона функционирует как моно - 2-3-4-х членная микстинвазия рыб семейства карповых, на стадии партеногонии, как моно и 2-х членная инвазия моллюска рода Codiella, на стадии маритогонии - как эпизоотический процесс с вовлечением широкого перечня популяций млекопитающих в т.ч. и человека.

11. Функционирование паразитарной системы описторхоза - процесс управляемый. Антропогенными факторами, сдерживающими эпизоотическое проявление паразитарной системы описторхоза в регионе являются - своевременная и безошибочная диагностика паразитарной системы на всех стадиях развития возбудителя, воздействие (разрушение) всеми доступными средствами и способами механизма передачи возбудителя по всей природной пищевой цепочке, освобождение облигатных хозяев паразита на стадии ма-рито- и эмбриогонии, обеззараживание продуктов рыбоводства и др. гидробионтов в местах вылова и переработки.

12. В многолетней динамике паразитарной системы описторхоза выявлены периоды нарастания и спада напряженности эпизоотического процесса, обусловленные воздействием антропогенных и биологических факторов.

Описторхоз, как паразитарная система в регионе функционирует круглогодично, с выраженным периодическим нарастанием степени риска, обусловленным особенностями биологического цикла развития O.filinrus, сезонным характером рыболовства, либерализацией формирования и наполнения продовольственного рынка в регионе.

13. Оптимизация диагностики описторхоза на стадии цистогонии достигается комплексным сочетанием морфологических и биологических исследований, а . применение, иммунологических исследований (ИФА } использование набора реагентов для ИФА - стрип)с целью дифференциации антител к антигенам гельминтов у плотоядных позволяет диагностировать описторхозную инвазию на стадии мариты у котят.

Формирование марит O.felineus в организме котят завершается к 34 дню после заражения, приживаемость метацеркариев в организме интактных животных варьирует от 11,4 до 32,4%.

14. Разработанная целевая региональная программа борьбы с описторхозом в условиях Нижнего Поволжья включающая организационно структурные укрепления ветеринарного обеспечения рыболовства и рыбоводства в регионе, усиление государственного ветеринарного, санитарно-эпидемиологического надзора за развитием эпизоотического проявления паразитарной системы этой инвазии, за качеством и безопасностью рыбы и рыбопродуктов при отлове, хранении, переработке и реализации, оказалась научно-обоснованной, востребованной и высоко эффективной. Ее апробация и внедрение в условиях Астраханской области позволила значительно снизить напряженность эпизоотического проявления паразитарной системы и за последние годы в 11,5 раз снизить зараженность людей описторхозом в регионе.

Рекомендации производству:

1. Схемы-модели противобруцеллезных мероприятий в зонах минимального, среднего и повышенного риска развития паразитарной системы бруцеллезной инфекции на завершающем этапе оздоровления субъекта федерации.

2. Научно-обоснованная система дифференциальной диагностики бруцеллеза и иерсиниоза животных, утвержденная НТС МСХ РФ, (1991).

3. Наставление по применению антигена БИВ для провокации скрытых (латентных) форм бруцеллезной инфекции, утвержденное Департаментом ветеринарии МСХ РФ (2003г.).

4. Целевая программа противобруцеллезных мероприятий на завершающем этапе оздоровления Волгоградской области с учетом степени риска бруцеллезной инфекции (утверждена Упр.ветеринарии Администрации Волгоградской области, 2002 г.).

5. «Функционирование паразитарных систем на примере описторхоза», монография, одобрено и рекомендовано в качестве учебно-методического пособия МСХ РФ, 2003г., Н.Новгород, 2003г., 176 с.

6. Эпизоотологический надзор при бруцеллезе в условиях Европейской части РФ (функционирование паразитарной системы), рекомендовано МСХ РФ в качестве учебно-методического пособия для ВУЗов ветеринарного и биологического профиля, Н.Новгород, 2003г., 273с.

7. Линейно-графические модели сравнительной оценки электрофоре-грамм белкового спектра различных клеточных структур микробной клетки бруцелл различных видов и штаммов (при молекулярных методах идентификации и дифференциации бруцелл) (одобренные Департаментом ветеринарии МСХ РФ, 2003).

8. Нетрадиционные методы дифференциации и идентификации бруцелл и иерсиний (одобрено департаментом ветеринарии МСХ РФ, Н.Новгород. 1994,86 с.; 1997, 76 с.

9. Целевая программа по борьбе с описторхозом в условиях Нижнего Поволжья (Утвержденная Управлением ветеринарии Администрации Астраханской области, 2000г.)

10. Оптимизация диагностики описторхоза у дефинитивных хозяев (котят) с использованием набора реагентов для ИФА-стрип с целью дифференциации антител к антигенам гельминтов, в том числе и описторхоза.

11. Линейно-радианные модели измерения территориальных, временных и популяционных границ эпизоотического процесса описторхозной инвазии в зонах ее повышенного риска.