Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Экспериментальное обоснование лечения адъювантного артрита церулоплазмином

На правах рукописи

РГВ од

ГЛАДКОВА ЕКАТЕРИНА ВЯЧЕСЛАВОВНА

^ 5 ДЕК 2000

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ЛЕЧЕНИЯ-' АДЫОВАНТНОГО АРТРИТА ЦЕРУЛОПЛАЗМИНОМ

16.00.02- патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

г<-

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наух

САРАТОВ -2000

Работа выполнена в Саратовском научно- исследовательском институте

травматологии и ортопедии

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ: профессор, академик АПК РФ '.

; Жадёнов И.И.

доктор медицинских наук Каряккна Е.В.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: Академик МАНВШ, заслуже-ный

деятель науки РФ доктор медицинских наук, профессор Киричук В.Ф. кандидат ветеринарных наук, доцент Шишонков Н.й.

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского

Защита состоится «22 » декабря 2000 года в 13 00 часов на заседании диссертационного совета К 120.72.04 института ветеринарной медицины и биотехнологии (аудитория кафедры патологической анатомии) Саратовского государственного аграрного университета им. Н.Г. Вавилова (410005, г. Саратов, ул. Соколовой, 335).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института ветеринарном • медицины и биотехнологии Саратовского государственного аграрного университета км. Н.И. Вавилова

Автореферат разослан «__»____ 2000 года

Ученый секретарь диссертационного совета

к.в.н., доцент • . В.В.Салаутин

РН1

/

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. ,

Ревматоидный артрит (РА)- одна из центральных проблем современной ревматологии, что обусловлено его значительной паспространенностыо сре-' ди заоолевании опорно- двигательного аппарата, тяжестью клинической картины и высоким процентом инвалндизации наиболее трудоспособных групп населения и (Сигидин Я.А. и соавт., 1994; Насонова В.А. и соавт., 1996). Углуби 'иый анализ патогенетических механизмов аутоиммунного воспаления, в том числе в условиях эксперимента, может послужить серьезной научной базой для расширения программы лечения и повышения ее эффективности.

В последние годы в терапии больных РА все большее значение придается препаратам антиоксидантного действия, обладающим активностью основного клеточного антиоксидантного фермента- супероксндцисмутазы (СОД) (Керимов З.А.,1988; Зборовская И. А., ¡995), снижающим интенсивность процессов перекисного окисления лииидов (ПОЛ) за счет нормализации состояния эндогенной антиоксиданпюй системь' ( АОС) (Денисов Л.Н. н соавт., 1994; Лобырева JI.C и соавт., 10Г>4; Носхов С.М., 1993; Зборовская И. А., 1995 и др.).

В СарНИИТО предложено и усиленно разрабатывается в эксперимента и клинике новое направление медикаментозной коррекции метаболических и иммунных нзпушепий в ус ювкях аутоиммунного воспаления с помощью оснозного сывороточного ферментного антиокенданта- церулоплазмина (ЦП) (Карякина Е.В. 1998; Белова C.B., 1999; Горячг з В.И., 1999).

ЦП- медьсодержащий гликопротеин альфа-2- глобулиновон фракции плазмы крови человека и животных относится к тон немногочисленной группе ферментов, которые катализируют восстановление кислорода непо-. срсдстЕснно до воды, минуя стадию образования перекиси водорода (Секюк ' О. Ф. н соавт., 1994).. ЦП является перехватчиком свободных кислородных радикалоз, нормализуя таким образом процессы перекиснош окисления ли-пидоз. Вышесказанное позволило примен'ятъ ЦП ь лечебных целях в онкологической практике, а также в лечении острого и хронического остеомиелита (Ларионосз В г>., 1990; Щепотин И.5 . • и соавт., 1991; Берлинских Н.К. и соавт., 1992; Шишкин М.Н., 1992; Машковский М.Д., 1993 и др.).

Описано использование ЦП в лечении экспериментального адьювант-шго артрита ( АА) у кроликов путем внутривенных введений препарата (Белова C.B., 1999) и внутрибрюшшшого использования его у мышей линии MRL-1 со спонтанным аутоиммунным артритом (Карякина Е.В., 199В). В вышеупомянутых работах подробно исследовались возможности коррекции особенностей системных проявлений ревматоидного воспаления у больных, а также аутоиммунного артрита у экспериментальных животных, однако, особенности воздействия ЦП на суставные структуры животных,детально не рассматривались.

-"Учитывая- существенные локальные изменения в пораженных суставах, сопровождающиеся нарушением - процессов липопероксидацяи в синовиальной среде животных с АА (Керимов З.А.,1988) и несостоятельностью локальной ферментной АОС у больных PA (Corrado Е.М. et. al.,1995), было бы логично ожидать положительного воздействия экзогенного ЦП на

выраженность аутоиммунного воспаления при его внутрисуставном использовании. .

Все вышесказанное побудило нас предпринять настоящее экспериментальное исследование, направленное на, изучение возможности и оценку эффективности локального (внутрисуставного) введения ЦП у кроликов с АА. Учитывая важность объективной оценки состояния экспериментальных животных, что необходимо для верного суждения об эффективности проводимого лечения и отсутствие в доступной литературе соответствующих сведений, одной из задач было поставлено детальное комплексное изучение суставных структур кроликов в норме и в условиях аутоиммунного воспаления.

1.2. ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

ПРЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Экспериментальное обоснование внутрисуставного применения ЦП для лечения аутоиммунного воспаления у кроликов с АА на основе изучения изменений в суставных структурах.

ЗАЛАЧИ ИСС ШгПОВ АНИ Я

1.Комплексное изучение состояния суставных структур кролика в норме и в условиях аутоиммунного воспаления (АА) с помощью клинического, термографического, гистоморфометрического, лабораторного общеклинического, биохимического и иммунологического исследований.

2.Изучение состояния суставных структур и общих метаболических нарушений у кроликов с АА при воздействии внутривенно вводимого ЦП.

3. Изучение состояния суставных структур и общих метаболических нарушений у кроликов с АА при внутрисуставном использовании ЦП.

4.Разработка схемы' внутрисуставного использования ЦП для коррекции состояния суставных структур и общих метабсличес.лх нарушений у кроликов в условиях АА. '

13. НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые проведенное комплексное сравнительное исследование суставных структур кроликов в норме и в условиях аутоиммунного воспаления ( АА) установило, что воспалительно- деструктивные процессы в тканях коленных суставов экспериментальных животных сопровождаются выраженными изменениями количественного и качественного состава содержимого суставной полости, что находит свое отражение в изменениях цитологических параметров, а также перераспределении фракционного состава глико-заминогликанов (ГАГ) и изменении активности эндогенного ЦП.

Впервые предложен и применен новый принцип локальной терапии АА путем внутрисуставного введения ЦП.

Внутрисуставное введение препарата позволило осуществить коррекцию как локальных, так и системных проявлений АА, что сопровождалось снижением активности ПОЛ за .счет снижения гапряженности неклеточного звена АОС, нормализацией обмена ПГ и иммуннопатологических реакций, общерезорбтивному действию (снижению уровня эндогенной интоксикации по показателям циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК)).

1.4. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Предложено внутрисуставное введение церулоплазмина у кроликов для лечения аутоиммунного воспаления (Способ лечения адьювантного артрита) Патент РФ Кг 2(56617 по заявке № 99111811, приор, от.03.06.1999, публ. 27.09.2000, БЮЛЛЕТЕНЬ № 27.,RU 2156617 (13) С 1 7А 61 К 35/16.

Материалы и положения диссертации внедрены в практику работы следующих учреждений: Саратовский НИИ травматологии и ортопедии, РКБ г. Нальчика.

Теоретические положения и практически значимые результаты диссертационного исследования включены в пособнедля научных работников

« Комплексная оценка состояния суставных структур лабораторных животных» и методические рекомендации для враче!! « Церулоплазмин в комплексном хирургическом лечении ревматоидного артрита», находящиеся на утверждении в МЗ РФ.

1.5. НА ЗАЩИТУ ВЫНОСИТСЯ:

1 .АА у кроликов приводит к выраженным изменениям в синовиальной системе коленных суставов, которые объективно могут быть охарактеризованы с помощью гистоморфометрического, исследования тканей коленных суставов, а также косвенных лабораторных тестов, определяемых в биологических жидкостях. • '

2. В качестве нового принципа терапии АА у кроликов предлагается внутрисуставное введение ЦП с целью коррекции локальной недостаточно-" сти неклеточного ферментного звена АОС.

3. Наиболее рациональным способом коррекции местных проявлений АА у кроликоч является еженедельное четырехкратное внутрисуставное введение ЦП в разовой дозе 2.5 мг/кг веса животного, что позволяет также снизить и общую активность воспалительного процесса.

1.6. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Основные положения работы доложены на: 1 Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 1996 ), « Национальных днях лабораторной медицины России «(Москва, 1997), Юбилейной конференции, посвященной 70-л'тиго ассоциации ревматологов России и 40-летию Института ревматологии ,-РАМН ( Москва, 1998), «Национальных днях лабораторной медицины Рос-сии»( Москва.-1998 ), Научно-практической конференции "Современные аспекты глгококортикоидной терапии резматических заболезаний"( Москва, 1999),-VI Российском национальном Конгрессе «Человек и лекарство», ( Москва, 1999), У1Г Национальном кокгерссе «Человек и лекарство» (Москва, 2000 );-на конференции молодых ученых в Саратовском государственном медицинском университете (2000).

1.7. ПУБЛИКАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ По теме диссертации опубликовано 11 работ.

1.8. ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ Диссертационная работа изложена на 16] страницах машинописи, иллюстрирована 32 таблицами, 16 рисунками. Диссертационная работа состоит из введения, 7 глав, включая обзор литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственник исследований и обсуждения, полученных данных, а также выводов и практических рекомендаций. Указатель литературы включает 222 -источников (149 отечественных и 73 ино-странпыхУ

га^шлзш^ХЕж^кдс^агхя

2.1. МАТЕРИАЛЫ К МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1.1. УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА Обследовано 166 половозрелых кроликов породы « Шиншилла», весом не менее 3.5 кг. 10 интакгных животных составили серию контроля. У 156 кроликов был .воспроизведен .аутоиммунный артрит, из них 76-кивотиых составили серию сравнения, в которой лечение не проводилос;.. 80 животных составили опытную серию, в которой проводилось лечение ЦП.

. Кролики серии сравнения была разделены на следующие группы: Вторая группа -156 животных" перед началом курса инъекций.

' Третья группа - 20 кроликов, пролеченных с использованием г.кти знутривенчых шгьекиин 8.мл изотонического раствора катр:;я хлорида, вводимого через день, начиная с десятых суток с момента введения разрешающей дозы антигена в коленный сустав; „

Четвертая группа - 46 жлпотных, получивших четыре еженедельные внутрисуставные инъекции 1 мл изотопического раствора натрия хлорида, начинал с десятых суток с момента введения разрешающей дозы антигена в коленный сустав;

Пятая группа - 20 кроликов, получивших куре лечения, "состоящий из шести еженедельных внутрисуставных инъекций 1 мл изотонического раствора натрия хлорида, начиная с десятых суток с момента введения разрешающей дозы антигена в сустав;

■ Шестая группа - 20 кроликов, получивших четыре еженедельные внутрисуставные инъекции 1 мл изотонического раствора натрия хлорида, начиная с четвертого месяца с момеота введения разрешающей дозы антигена в коленный сустав;

Кролики, опытной серии были разделены на следующие группы: Седьмая группа - 25 животных, получивших пять внутривенных инъекций ЦП, вводимых через день, в дозе 2.5 мг/кг веса, начиная с десятых суток с момента введения разрешающей дозы антигена в опытный коленный сустав.

Восьмая группа: 35 кроликов, получивших четыре еженедельные внутрисуставные инъекции ЦП в разовой дозе 2,5 мг/кг веса, начиная с десг суток с момента введения разрешающей дозы антигена в сустав.

Девятая группа: 10 кроликов, получивших шесть еженедельных внутрисуставных инъекций ЦП в разовой дозе 2,5 мг/кг веса, начиная с девятого дня заболевания.

Десятая группа: 10 кроликов, получивших четыре внутрисуставные ¡шъекцш; ЦП в разовой дозе 2,5 мг/кг веса, начиная с четвертого месяца заболевания с момента введения разрешающей дозы антигена в сустав.

2.1.2. МЕТОДЫ И МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЙ '

1. Экспериментальные: создание смешанного антигено- адъювантного артрита с помощью полного адъюванта Фрейнда и озальбумина с целью изучения состояния суставных структур у кроликоз с АА при использовании ЦП для коррекции метаболических нарушений.

В работе использовали смешанную антчгенно-адъюгантную (аутоиммунную) модель артрита с полным адъговантом Фрейнда, содержащего убитые при нагревании микобактерии (сухая вакцина БЦЖ, производства ГП «Аллерген» в растительном масле). В качестве антигена использовался оваль бумин (Б!пса А.С-., СЬет.'ТгЬг.). Форм1грование модели осуществлялось согласно методу, описанному Е.К. Ре'.прЬег е1. а1., (1988).

2. Клинические: оценка общего состояния -сивотных, подвижность; активность, масса тела, болезненность при пальпации коленных суставов, измерение объема активных и пассивных движений в области коленных суставов, измерение окружности коленных суставов/

4 . Инструментал:.ные:дистанщюнное термографическое обследование ' изменений температуры кожных покровов в области коленных суставов с использованием дистанционного термографа «Радуга-ТМ», совмещенного с компьютером.

3.Морфологические исследования были представлены оценкой состояния макро- и микроструктуры тканей коленного сустава (параартикуляр-ные ткани, синовиальная оболочка, мениски, суставной хрящ, субхондраль- . нал кость).

Гистоморфометрическое исследование включало в себя:

1. Окраску пироксилин-эозином, выявляющую структуру тканей.

2. Окраску пнрофукенном по Ван Гизону для выявления'коллагеновых волокон и оценки их внеклеточной деградации.

3. Окраску по методу С.П. Шуенинова для выявления фибрина, яв-. ' ляющегося одним из признаков экссудатшзного характера воспаления.

4: Окраску толуидиновьш голубым при различных значениях рН для выявления ГАГ, основного структурного компонента -межклеточного мат-риксасое^ шителыюй ткани.

5. Окраску по методу Бргше для выявления рибонуклеопротеидов- показателя биосинтетической функции клеток.

s

Гистологические проявления патологических изменений тканей сустава определяли с применением морфометрического анализа в баллах, учитывая общепринятые признаки поражения. Определение основных признаков поражения у кроликов с АА осуществлялось согласно методике, предложенной А:Б. Шехтер, A.A. Крель, З.П. Расщупкияой (1982).

4.Гематологические: измерение СОЭ, гемоглобина, подсчет лейкоцитарной формулы и др." для оценки общей активности воспалительного процесса. »

5. Цитологические: определение общего цитоза содержимого суставной полости с целью изучения активности локальных воспалительных проявлений АА осуществляли в камере Горяева по методике подсчета лейкоцитов крови по методу, описанному Б.В.Меньшиковым (1987), а также проводили исследование клеточного состава содержимого суставной полости с целью определения особенностей иммунокомплексного воспаления в препаратах, окрашенных по Романовскому-Гимза.

6. Биохимические методы исследования включали: изучение показателей кислотно-основного равновесия крови с определением pH, рОз, а также с учетом расчетного показателя BEvv для осуществления косвенной оценки общей, выраженности метаболических нарушений с помощью иом-селективных электродов (анализатору 23 S-Ciba-Corrung); общее содержания и фракционный состав гликозампнопшканов (ГАГ) с целью оценки общей интенсивности процессов деструкции соединительнотканных образований по методу Е.В. Каряющой, Д.В. Косагина (1982), а также общее содержание и фракционный состав ГАГ .синовиальной жидкости для оценки интенсивности процессов дезорганизации соединительнотканных- элементов пораженного сустава по методу Е.В. Карякикой, Д.В. Косыгина (1982); уровень малоновего диальдегида (МДА), маркера ПОЛ крови с целью изучения состояния процессов лигюпероксидации по методу Э.И.Корабейниковой (1989); изменения активности ЦП крози для оценки состояния неклеточного ферментного звена АОС,. а также в содержимом суставной полости для оценки ^особенностей состояния неклеточного звена АОС синовиальной системы с использованием метода, предложенного В.Г.Колбом, В.С.Камышниковым (1976), выражая активность ЦП в соответствии с указанием В-П.Пишак, .Г.М.Ярмольчук (1998) в условных единицах.

7. Нтгувдлсшчсские методы исследовании были представлены: определением циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) для оценки интенсивности иммунопатологических реакций (IG.A. Гриневич; А.И.Алферов, 1984) и определение гемолитической активности комплемента по 50% гемолизу, что служило дополнительным методом исследования активности воспалительных проявлений аутоиммунного процесса (Ю.А. Гриневич. АД.Алферов, 19S4).

9. Статистические: обработка полученных результатов проводилась с вычислением средней арифметической (М), средней ошибки средней арифметической (т), коэффициента достоверности (t), показателя вероятности (р) (А.М.Мерков, Л.Е.Поляков, 1974).

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2. ¡.СОСТОЯНИЕ СУСТАВНЫХ СТРУКТУР КРОЛИКОВ В НОРМЕ ИЗ УСЛОВИЯХАА.

С целью изучения состояния суставных.структур кроликов в норме и в условиях АА нами были обследовано 82 здоровых животных, а также 82 кролика с АА.

Клинически формирование АА сопровождалось снижением активности животных, необратимой лотереи в весе в среднем на 300-400 г. Отмечалась болезненность при пальпации, увеличение окружности опытных коленных суставов в среднем на 8-9 мм за счег развития отека околосуставных тканей, повышение местной температуры на 1,0-1,2"С.

Проведенные гистоморфометрические исследования свидетельствовали о выраженных воспапигель но-деструктивных изменениях, которые были в основном представлены зоспалительной клеточной инфильтрацией и деградацией соединительнотканных компонентов сустава. Признаки дезорганизации соединительной ткани сопровождались потерей ГАГ гиалиновым хряшом.(рисл).

У кроликов с АА, по мере прогрессировать заболевания, наблюдалось статистически достоверное (р<0.05) повышение общего цитоза до (2.25±0,60 хЮ^/'л) на десятые сутки заболевания, тогда как нормальные показатели не превышали в среднем (0,11=0,40 х 107.1} (Ряс2).

X 10 "I Л

2 1.5

0.5 О

Рис.2 Показатели общего цитоза содержимого коленного сустава кроликов в норме и при АА

тд

Но

рма

- АА

Ркс. i. Микрофото синовиальной г.болачс! опытного коленного сустава с гдъю-ваиткым артритом (группа сравнения без лечения). Выраженная воспалительная клеточ-ная< инфильтрация синовиальной оболочки с пролиферацией сосудов. У в. об. 20. ск. 10.

Качественный состав клеточных элементов содержимого опытного коленного сустава кроликов с АА был представлен нейтрофилами (57.80±4.93% всех клеточных элементов), макрофагами (7.78±2,24%), а также лимфоцитами и рагоцитолодобными клетками ( нейтрофилами с включениями в цитоплазму). Присутствие и численность рагоцитов в составе синовиальной жидкости является одним из важных диагностических и прогностических признаков и у больных РА, как характеризующих степень местной воспалительной активности процесса (Сигидин Я.А. и соавт., 1994; Насонова В.А., Бунчук Н.В., 1997 и др.). В составе суставного содержимого здоровых кроликов были обнаружены лишь, единичные нейтрофшш.

Согласно полученным данным, у животных с АА по сравнению с ив-тактными кроликами было обнаружено значительное снижение общего содержания ГАГ, определяемых по уроновым кислотам в составе воспалительного экссудата правого коленного сустава на десятые сутки заболевания. Оно снижалось в среднем до 55,02±6,80%. Одновременно происходило возрастание содержания сульфатированных ГАГ до 332,0±18,6% к норме (Рис.4). Выявленная нами направленность метаболических изменении согласуется с известными воспалительно-деструктивными изменениями тканей суставов, животных с АА (Плесковская Г.Н., 1991; Синяченко О.В. и соавт.,1991; Каряки-

u-

на E.B., 1998; Белова C.B., 1999; Homandberg G. et. al., 1993; Jafari H. et. al., 1993; Lewthwaite J., et. al. 1994 и др.), сопровождающимися прогрессирующей потерей ГАГ у экспериментальных животных.

Обнаруженные нами изменения состояния процессов ПОЛ и АОС у кроликов с АА, заключающиеся в статистически достоверном ( р < 0.05) повышении МДА (маркера интенсивности процессов ПОЛ) и активности ЦП в крови (показателя состояния неклеточного ферментного звена АОС) были аналогичны описанным ранее (Карякина Е.£.: 1988; Белова C.B., 1999). Однако, в данных литературы мы не обнаружили сведений, касающихся состояния антиоксидантной защиты в синовиальной системе коленных суставов экспериментальныхживотных(Ркс Ъ;ч). '

Нами впервые изучена активность основного неклеточного ферментного антиоксиданта ЦП в содержимом суставной полости у кроликов. Было обнаружено значительное (р<0,05) повышение активности ЦП в воспалительном экссудате у кроликов с АА (5,64±0,20 у.е.) по сравнению с нормальными показателями (3,45±0,1 ! у.е) у интактных животных, что свидетельствовало о появлении напряженности в системе антиоксндантной защиты синовиальной

среды (Таел. !.).

Выраженные воспалителыго-деструктизные изменения в области суставных структур приводят к накоплению-ГАГ в крови, что списано у биологических моделей АА (Карякина Е.В., 1998; Белова C.B., 1999).

Таблица 1. •

Активность ЦП е содержимом сустазных ййлостей (М±т)

Показатели Норма (иитгктные животные) АА- десятке сутки (правый коленный сустав) АА- девятые сутки ( левый коленный сустав)

Активность ЦП, у.е. 3,45±0,11 . (п=72) 5,64±0,20* Г) (п=60) . 3,52x0,17** ■ (п=10)

Примечание:

* - означает статистически достоверную разницу похаза-теяей между нормой- и сформированным АА на десятые сутки с момента введения раз» ' решающей дозы антигена в сустав (р<0,05);

** - означает статистически достоверную разницу показателей.между правым к левым коленным суставом у животных с ЛА(р<0,05).

Рис. 3 Содержание 1. Сульфатированных ГАГ в полости опытного I ленного сустава: А. При АА. Б. В норме. 2. Общее содержание ГАГ. В. И АА. Г. В норме.

Мы также обнаружили статистически достоверное (р<0,05) повышение содержания в сыворотке крови ГАГ, определяемых по входящим в их соста) уроновым кислотам (4.23±0.23- при АА и 1.84±0.09- в норме ) и гексозан (6.04± 0.30- при АА и 3.31^0.15- в норме ) ( х 10"2г/л) у животных с АА, на чиная с десятого дня с момента введения разрешающей дозы антигена в сус тав по сравнению с интактными кроликами.

Отмечено статистически достоверное (р<0,05) повышение СОЭ у крс ликов с АА (6.09±0.22- при А А и 3.00±0.16- в норме) (мм/час), а также нал« чие «левого» сдвига в лейкоцитарной формуле.

Нами, подобно Е.В. Кархкиной (1998), уже на десятые сутки с начал заболевания обнаружено развитие метаболического ацидоза у животных АА, что. проявлялось в статистически достоверном (р<0,05) снижении уровн рН (7.35±0.01- при АА и 7.42±0,01- в норме) и напряжения кислород (51.40±5.15- при АА и 74,30±8.03- в норме) ( гаш Hg) к резком возрастани дефицита буферных оснований (-2.53 ±0.45 и -12.04^1.50)( шшо! /!) по ера» нению с показателями у здоровых кроликов.

РИС.4. СОДЕРЖАНИЕ МДА И АКТИВНОСТЬ ЦП В КРОВИ КРОЛИКОВ В НОРМЕ И В УСЛОВИЯХАА

МДА, мшоль/л, активность ЦП, у.е. 40

15

Содержание МДА

в норме 9 в условиях АА^

Выраженные воспалительно- деструктивные процессы в тканях пораженных коленных суставов приводили к изменению иммунологических показателей: уже через десять дней с начала заболевания уровень ЦИК в крови кроликов с АА был достоверно (р<0,05) более высоким (20,30±1,60 у.е.), чем у интактных животных (10,31=1,16 у.е), а показатели комплементарной активности статистически достоверно снижались (р<0,05).

СОСТОЯНИЕ СУСТАВНЫХ СТРУКТУР И ОБЩИЕ МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ У КРОЛИКОВ С АДЪЮВАНТНЫМ АРТРИТОМ ПРИ ВНУТРИВЕННОМ ¡¡ВЕДЕНИИ ЦЕРУЛОГШАЗМИНА.

Оценка состояния суставных структур после завершения внутривенного лечения показала, что несмотря на значительное увеличение подвижности н высокую двигательную активность, окружность опытного коленного сустава оставалась несколько повышенной практически у всех животных седьмой группы. Кроме того, у единичных животных, получивших курс внутривенных инъекций ЦП, к окончанию эксперимента отмечалось появление незначительного отека и в области коллатерального коленного сустава, что свидетельствовало о вовлечении его в патологический процесс.

При проведении гиетоморфометраческого исследования состояния тканей коленных суставов у кроликов седьмой группы отмечалось статистически достоверное снижение проявлений воспалительно- экссудативиых и пролиферативиых признаков поражения по сравнению с данными, полученными у кроликов третьей группы серии сравнения. Несмотря на то, что сумма баллов всех признаков порагкенил у кроликов, получивших курс лечения ЦП (4.28=0.56) была значительно ниже, чем у кроликов третьей группы (10.90±0.35), существенной разницы между седьмой и третьей группами в. проявлении иммуяо- морфологических признаков поражения не выявлялось.

1 В составе выпота из правого коленного сустава отмечалось присутствие рагоцитолодобных клеток и макрофагов у части кроликов седьмой группы. У 14,3% животных данной группы обнаруживались рагоцитоподобные клегхи и в содержимом суставной полости коллатерального коленного сустава.

Определение ГАГ в содержимом суставных полостей выявило нормализацию их общего содержания (97.2-8.7 % к норме). Однако, содержание сульфатированных ГАГ значительно превышало нормальные показатели и составляло около (126.6±12.8 % к норме), что являлось свидетельством нали-' чая выраженных деструктивных процессов.

. Таким образом, данные сшгавиацитограммы и результаты биохимического исследозанйя подтверждали наличие активных проявлений аутоиммунного процесса в области коленных суставов у части животных, получивших курс внутривенных инъекций препарата.

Снижение общей -воспалительной активности процесса характеризовалось уменьшением (р<0,05) уровня СОЭ по сравнению с данными, имевшимися до начала лечения (5.45±0.13 и 6.36±0.28 мм/час).

В группе леченых животных отмечалось статистически достоверное (р<0,05) повышение уровня pH (7.42±Ö.G1) по сравнению с длшымн. имевшимися у кроликов группы сравнения (7.33=0.02). Кроме того, у кроликов опытной группы происходило повышение (р-^0,05) напряжения кислорода до (71.20+1.18 mmHg), тогда как в группе сравнения показатели приближались к (58.70i4.15 mmHg). Уровень дефицита буферных основании снижался до (-1,96±0.53 ммсль/л), до начала лечения он был статистически достоверно (р<0,05) выше (-9.30i0.89 ммоль/л).

Выявлялась положительная динамика изменений содержания ГАГ в крови, определяемых по входящим.в их состав гексозам, содержание которых у кроликов опытной группы после лечения (3.10±0.30 х 10'2 г/л) была значительно (п<0,05) ниже, чем у животных группы сравнения (б.76±1.03 х 10"2г/л). ' '

Рисунок 5. Мнкрофото синовиальной оболочки опытного коленного сустава кролика с адъгошшткым артритом после завершения курса внутривенных инъекций г.ерулсь плаэмииа. Выраженный фиброз коллагено- эластических слоев с умеренной воспалитель-" ной клеточной инфильтрацией. Окраска гематоксилином и эознноч. Ув. об. 20, ок. 10.

После завершения курса лечения содержание МДА в крови кроликов; седьмой группы оставалось значительно выше (р<0,05). чем у шггактаых животных (4.34±0.21 и 3.13±0.21) (мкмоль/л), Активность ЦП в крови после

проведенного лечения (29.00±1.90) (у.е.) также оставались существенно (р<0,05) выше нормального уровня(23.50±1.00)(у.е.). Вышесказанное являлось свидетельством несостоятельности ферментного неклеточного звена АОС, выявленное ранее и другими авторами как у экспериментальных животных, так и у больных РА (Карякина Е.В.,1998; Белова С.В.,1999).

У кроликов после завершения курса инъекций ЦП наблюдалось значительное снижение (р<0,05) содержания ЦИК в крови по сравнению с данными. имевшимися до начала лечения. Кроме того, повышались (р<0,05) показатели комплементарной активности (9.94±0.86 СН50 у.е.) по сравнению с данными, имевшимися до лечения(6.12±0.83 СН50 у.е.), что свидетельствовало о снижении напряженности иммунопатологических реакций.

2.2.3. СОСТОЯНИЕ СУСТАВНЫХ СТРУКТУР И ОБЩИЕ МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ У КРОЛИКОВ С АДЪЮВАНТНЫМ АРТРИТОМ ПРИ ВНУТРИСУСТАВНОМ ВВЕДЕНИИ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА.

Учитывая воспалительно- деструктивные изменения в тканях коленных суставов, а также общие метаболические нарушения, сохраняющиеся после завершения курса внутрнвенных инъекций ЦП, нами была предпринята попытка медикаментозной коррекции проявлений АА при помощи внутрисуставного введения ЦП.

После завершения лечения происходило устранение всех клинических проявлений АА у кроликов обеих опытных групп (восьмой и девятой).

Гистомрфометрическое исследование тканей коленных суставов выявило значительное снижение пролиферации синовиоцитов, признаков воспалительной экссудации, дезорганизации соединительной ткани, иммуно-морфологических признаков поражения, что представлено в таблице г и на рис. 6.

Отмечалось статистически достоверное снижение общего цитоза в' составе содержимого суставной полости правого коленного сустава (Рис.7) у кроликов обеих групп (восьмой и девятой) по сравнению с показателями, полученными у животных четвертой и пятой групп (0.22±0.04 и 0,28±0,12 х 107л) (1.93±0.97 и 13,70±4,4 х Ю'/л). Кроме тога наблюдалась нормализация качественного состава клеточных элементов.

Происходила нормализация общего содержания ГАГ в содержимом опытных коленных суставов у кроликов обеих опытных групп (93,40*7,50 и 90,10±6,70 % к норме) и сульфатированных ГАГ (103,00*11,20 % к норме) у животных восьмой группы опытной серии. Однако, содержание сульфатированных ГАГ у кроликов девятой группы превышало нормальные значения (13830± 12,90 % к норме).

• ' и , Таблица 2

Динамика морфологических признаков поражения синовиальной обо-_ лочкн правого коленного сустава кроликов с АЛ под влиянием прсвс-__д;:шого лечения (в баллах и в процента'' от общего числа наблюдений)

Сумма баллов признаков поражения . (по группам) Четвертая группа (п=15) Восьмая группа (п=16)

Пролиферация скновирцитов 100% 2Д8±0,17 60% 0,50+0,07*

Воспал;ггельная экссудация 100,00% 1,9±0,09 31,25% 0,56±0Д1 *

Дезорганизация соединительной ткани 100,00% 1,63+0,09 6,25% 0,12+0 *

Иммуно-морфологические признаки поражения 100,00% , 336±0,38 62.50% 2.18+0,29*

Пролиферативные признаки поражения 100,00% 1,18+0,19 43,75% 1,25+0,36

Сумма всех баллов поражения 10,90+0,38 5,75+0,65*

Примечание: * - означает статистически достоверную разницу показателен мезэду обследованными группами.

Рис. 6, Миь-рофото сшюзмлыюй оболочки опьгпюго келейного сустяза кролика с адък?-ваптиым артритом после згвершешш курса внутрисуставных иягекций церулоплашнпа. Скудная поспапнгельиа» клеточная ¡шфипьтрадия н слабо выраженный фиСрса кмлаге!-.:-элаегччеекпх слоев. Окраска гематахенлинам к змниом. Ув. об. 20, ох. 10...

общий цитсз; х10а/л

18 14 12 10

3 6

4 2 0

' [Очетзартая группа Зпятаз группа Ваесьыап группа - Идазятая группа]

- _ 13,7

I_

, ' - '

Й

ййЛНЙвйР

' ,, ч

1 т«1,&3

11§|1Й1Я||

не |11й111Я т 0,22 ' , 0,28 _

Рис. 7. Показатели общего птоза содержимого опытного коленного сустава после завершения курса ез^утрисуставных инъекций. А-четвертая группа, Б- пятая группа, В- восьмая группа, Г- девятая группа.

Имелась тенденция (р<0,05) к снижению активности ЦП в содержимом суставной полости у кроликов восьмой группы (4.13±0.81 у.е.) по сравнению с ктюликами четвертой группы (6.71 ± 0.9 у.е.), что свидетельствовало о снижении напряженности неклеточного ферментного звена антиоксидаитной зашиты коленного сустава.

Вышеск.ззаниос подтвср'.адало выраженное снижение местных воспалительно- деструктивных проявлений аутоиммунного артрита у кроликов опытных групп. Однако, отмечалось более высокое содержание сульфатиро-ванных ГАГ у животных девятой группы, что свидетельствовало о нарастании выраженности деструктивных процессов.

После завершения лечения наблюдалось статистически достов -рное (р<0,05) снижение СОЭ и содержания палочкоялерных клеточных элементов, а также возрастание содержания лимфоцитов у кроликов опытных групп (восьмой и девятой) по сравнению с показателями, имевшимися у животных четвертой и пятой групп.

Активность ЦП а крови после проведенного лечения была достоверно ниже (р < 0.05) в восьмой (31.2±1.02 у.е.) и девятой группе (23.1±1.09 у.е.), чем соответственно в четвертой (43.23± 3.5 у.е.) и пятой (47.25±4.6 у.е.). В то же время, у кроликов четвертой и пятой групп активность ЦП не только значительно превышала (р < 0.05) показатели здоропых животных, составляющие в среднем ( 24.2± 1.12 у.е.) , но также и данные, имевшиеся до начала лечения у кроликов с АА (23.7; 1.20 у.е.).

Уровень МДА после завершения курса инъекций был ниже у кроликов восьмой (3.36 ± 0.10) (мкмоль/л) группы, чем у животных четвертой (4.35 ±0.15) (мкмоль/л). В то же время статистически достоверной разницы показателей между девятой и пятой группами выявлено не было.

Уровень напряжения кислорода в крови животных восьмой группы после проведенного курса инъекций статистически достоверно (р<0.05) превышал аналогичные показатели у кроликов четвертой группы. Данный параметр у кроликов восьмой н девятой групп значительно превышал значения, имевшиеся до начала лечения (р<0,05). Следует отметить значительное, статистически достоверное (р<0,05) снижение дефицита буферных оснований в крови у кроликов восьмой по сразнению с животными четвертой группы. Несмотря на то, что показатели BE w не нормализовались окончательно у кроликов восьмой и девятой групп, они были существенно ниже, чем до начала лечения (р<0,05).

Наблюдалось снижение напряженности иммунопатологических реакций у животных восьмой и девятой групп после завершения курса внутрисуставных инъекций ЦП, которое проявлялось уменьшением (р<0,05) содержания ЦИК в крови по сравнению с данными, имевшимися до начала лечения (22,1 ±1,1 у.е.), а также нормализацией комплементарной активности.

Таким образом, курс из четырех внутрисуставных введений ЦП оказывал положительное воздействие на состояние суставных структур и общие метаболические нарушения у животных с АА. Увеличение курса до шести

введений ЦП не только не давало дополнительных преимуществ, по и приводило к ухудшению ряда параметров (увеличению содержания сульфатнро-ванных ГАГ в содержимом суставной полости и МДА в крови), что свидетельствовало об интенсификации процессов деструкции и липопероксида-ции.

2.2.4.СОСТОЯНИЕ СУСТАВНЫХ СТРУКТУР И ОБЩИЕ МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ У КРОЛИКОВ С ДЛИТЕЛЬНОСТЬЮ АДЪЮ-ВАНТНОГО АРТРИТА СВЫШЕ ТРЕХ МЕСЯЦЕВ ПРИ ВНУТРИСУСТАВНОМ ВЗЕДГНИИ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА.

С целью изучения возможности коррекции состояния суставных структур и общих метаболических нарушений у . кроликов с длительностью АА свыше трех месяцев, нами был проведен курс из четырех внутрисуставных инъекций ЦП (10 группа опытной серии). 10 животным группы сравнен™ было проведено внутрисуставное введение изотонического раствора натрия хлорида (шестая группа серии сравнения).

К моменту завершения лечения кролики обеих групп были адинамнч->!ыми, они явно избегали двигательной активности. Животные с трудом сохраняли нормальное положение тела в пространстве. При движении «щадили» как правую, так и левую конечность. Целостность наружных кожных покровов была повреждена, имелись незаживающие трофические язвы с иекро-тизированным содержимым. Видимые слизистые оболочки дыхательных путей были гнперемнрованы, отмечалось истечение гнойного содержимого из носовых ходов и кашель с отделением мокроты. "У животных имелся коиыок-. тивят с гиперемией слизистой оболочки и незначительным гнойным отделяемым. Отмечалось увеличение окружности коленных суставов аа 6-7 мм, отек прилегающих к суставу тканей и наличие плотных инфильтратов в об-, ласти обоих коленных суставов с наибольшей выраженностью справа. Йме-лис1 стойкие контрактуры е области правого коленного сустава и вынужденное полусогнутое положение в левом коленном суставе. Отмечалось наличие болезненности при пальпации обоих коленных суставов.

После завершения курса лечения гистоморфомстрическое исследование .данстатиуовало наличке гранулематозного воспаления тканей поражен-нг.'х коленных суставов. Отмечалось появление обширных полей пролиферации эпителиальных клеток, местами формирующих гранулемы. В периферических зонах последних имелись значительные скопления' лимфоцитов, макрофагов, фибробластов и плазматических клеток. Кроме того, имелись и едниичные очаги фибриноидного некроза.

Отмечалась некоторая положительная динамика абсолютных значений всех исследуемых лабораторных показателей, однако статистически достоверными данные изменения н? были.

Таким образом, изучение возможностей использования внутрисуставного введения препарата у-кроликов при длительности АА свыше трех месяцев выявило неэффективность данного способа лечения.

3. ВЫВОДЫ:

. 1. Выраженная воспалительная деструкция суставных тканей у кроликов с АА приводит к метаболическим нарушениям, проявляющимся как локально,' в синовиальной системе пораженных суставов, 'так и во всем организме в селом.

2. Воспалительно-деструктивные процессы в синовиальной системе пораженных суставов у кроликов с АА, протекающие на фоне интенсификации процессов липопероксидашш (повышение уровня МДА до 4.62±0.17-при АА, 3.15±0.11 мкмоль/л- в норме), а также недостаточности неклеточного ферментного звена AGC (повышение активности ЦП до 34.93±1.90- при А А, 23.80±0.65 у .е.- в норме), требуют направленной локальной медикимен- • тозной коррекции антиоксидантными препаратами.

3. С целью снижения локальных и общих проявлений АА целесообразно внутрисуставное использование экзогенного ЦП, обладающего выраженным противовоспалительным и антиоксидантным действием, начиная с десятых суток заболевания. . ■

4. ЦП не оказывает существенного влияний на основные проявления АА в случае ьнесуставных проявлений аутоиммунного процесса при длительности заболевания свыше трех месяцев.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. С целью объективизации состояния суставных структур коленных суставов кроликов со сформированным АА и оценки эффективности проводимого лечения наряду с гистоморфометрнческими методами рекомендуется использовать комплексную схему исследования цитологических, биохимических и .иммунологических параметров содержимого суставной полости и крови.

2. С целью снижения выраженности местных проявлений и общей активности аутоиммунного воспаления у кроликов с АА рекомендуется внутрисуставное введение ферментного неклеточного антноксиданта- ЦП. Препарат назначается в виде курса из 4 еженедельных внутрисуставных инъекций в разовой дозе 2,5 мг/ кг веса животного.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Новая модель адъювантного артрита в оценке перекисно- антиоксн-дантного дисбаланса в условиях иммунокомплексного воспаления // Сб. «Биохимические механизмы физиологических функций « -С.- Петерб., 1995. С. 20 (соавт.: C.B. Белова, В.И. Горячев).

2. Медикаментозная коррекция выраженности ревматоидного воспаления с помощью сывороточного ферментативного антноксиданта в эксиериме нте и клинике// 1 Росснйск. конгресс по патофизио'л.: тез. докл.-М., 1996,-С.226-227 (соавт.:. C.B. Белова, В.И. Горячев, Е.В. Карякина, Е.Е. Колобкова, Н.М Овчинникова, Л .С. Невенчанная).

3. Церулоплазмин в лечении больных ревматоидным артритом //111

Междунар. Конгресс "Иммунореабилитацня i. реабилитация в медицине":тез. докл.-Изранль,1997.- С.365 (соавт.: 3. C.B. Белова, В.И. Горячев, Е.В. Каря-кгша, Е.Е. Колобкова, Б.Л. Позднякова).

4. Синовиальная система-кроликов в норме и при адъювантном артрите // Сборник научных трудов молодых ученых. Саратов.-1998.-С.23-26.

5. Церулоплазмин в коррекции аутоиммунного воспаления // VI Российский национальный Конгресс .(Человек и лекарство»: тез. докл.- Москва. -1999.-С.35 (соавт.: Е.В. Карякина, С.П. Шабанова, C.B. Белова, В.И. Горячев, Е.Е Колобкова).

6. Операционная травма у больных ревматоидным артритом // Рос. ревмат. Тез. Науч.-практич. Конф. "Современные аспекты глюкокортикоидной терапии ревматических заболеваиий".-1999.-Л»5.-С.57 (соавт.: Е.В. Карякина, C.B. Белова, Е.В. Гладкова, В.И. Горячев, Е.Е. Колобкова).

7. Мониторинг эндогенной интоксикации в услое шх операционного стресса у больных резматоидным артритом// Клин.лаб .диагностика. «Национальные дни лабораторной медицины России»: тез. докл.- Москва. -1999.Л». 11 -С. 35 (сЬавт.: Е.В. Карякина, C.B. Белова, В.И. Горячев, Е.Е. Колобкова).

8. Экспериментальная оценка противовоспалительного действия ЦП при его внутрисуставном использовании // VI] Российский Национальный конгресс « Человек и лекарство»: тез. докл.- .Москва 10-14 апреля.-2000г.-С.503 (соавт.: Е.В. Карякина).

9. Возможности лабораторного мониторинга состояния суставных структур лабораторных животных '! 61 -ая научная конференция молодых ученых и студентоь Саратовского государственного медицинского университета: тез. докл.-Саратов. -2000.-С.43-44.

10. Лабораторная оценка состояния синовиальной системы коленного сустава при наличии ревматоидного гонита // Клин. Лаб. диагностика. 2000.-jNï 10.- С 38 (соавт.: Е.В. Карякина, G.B. Белова, Н.С Воробьева).

11. Новый способ локальной терапии ревматоидного воспаления // Всероссийская конференция с международным- участием «Медико-социальные проблемы костно-мышечных заболеваний в XXI веке»:тез докл.-Москэа.-2000 //Научно-практическая ревматология.- 2000,- № 4.-С. 55 (соавт.: Е.В. Карякина, C.B. Белова).

СПИСОК ИЗОБРЕТЕНИЙ:

Л. Способ лечения адъювантного артрита (Патент РФ № 2156617 по заявке № 99111811, приор, от 03.06.1999, публ. 27.09.2000 , БЮЛЛЕТЕНЬ №> 27.,RU 2156617 (13) С 1 7А 61 К 35/16.

дающих активностью СОД. Кандидатская диссертация З.А. Керимова (1988) посвящена внутрисуставному использованию орготеина и фрагмент докторской диссертации И.А. Зборовской (1995)- пероксинорма.

В последние годы в СарНИИТО предложено и усиленно разрабатывается в эксперименте и клинике новое направление медикаментозной коррекции метаболических и иммунных нарушений в условиях аутоиммунного воспаления с помощью основного сывороточного ферментного антиоксиданта- церулоплазмина (ЦП) (Карякина Е.В. 1998; Белова C.B., 1999; Горячев В.И., 1999).

ЦП- медьсодержащий гликопротеин альфа-2- глобулиновой фракции плазмы крови человека и животных относится к той немногочисленной группе ферментов, которые катализируют восстановление кислорода непосредственно до воды, минуя стадию образования перекиси водорода (Сеток О. Ф. и соавт., 1994). ЦП является перехватчиком свободных кислородных радикалов, нормализуя таким образом процессы перекисного окисления липидов.

К настоящему времени накоплен значительный клинический и экспериментальный материал, являющийся основанием для применения ЦП в лечебных целях в онкологической практике, а также в лечении острого и хронического остеомиелита (Ларионова В.Б., 1990; Щепотин И.Б. и соавт., 1991; Бердинских Н.К. и соавт., 1992; Шишкин М.Н., 1992; Машков-ский М.Д., 1993 и др.). Известно, что ЦП обладает противовоспалительным и гемостимулирующим действием. Кроме того, следует отметить, что длительное применение ЦП не оказывает вредного влияния на жизненно важные органы и системы (Санина O.A., Бердинских Н.К., 1986; Сенюк О.Ф. и соавт., 1994).

В ревматологии, у больных РА, препарат назначается в виде курса из десяти внутривенных капельных вливаний по 100-200 мг на введение, проводимых через день, на фоне продолжающегося приема противовоспали7 тельных препаратов (Карякина Е.В., 1998). Данный способ лечения позволяет достигнуть значительного клинического эффекта, сопровождающегося положительной динамикой лабораторных показателей. Внутривенное введение ЦП используется в комплексе предоперационной подготовки больных РА с целью снижения активности воспалительного процесса, а также в раннем послеоперационном периоде для оптимизации послеоперационной реабилитации данного контингента больных (Горячев В.И., 1999).

Описано использование ЦП в лечении экспериментального адъю-вантного артрита ( АА) у кроликов путем внутривенных введений препарата (Белова C.B., 1999) и внутрибрюшинного использования его у мышей линии MRL-1 со спонтанным аутоиммунным артритом (Карякина Е.В., 1998). В вышеупомянутых работах подробно исследовались возможности коррекции системных проявлений ревматоидного воспаления у больных, а также аутоиммунного артрита у экспериментальных животных, однако, особенности воздействия ЦП на суставные структуры животных детально не изучались.

Известна несостоятельность локальной ферментной АОС в синовиальной среде суставов больных РА (Corrado Е.М. et. al., 1995). Кроме того, обнаружена также интенсификация процессов ПОЛ в синовиальной среде' животных с АА (Керимов З.А.,1988)

Учитывая существенные локальные изменения в пораженных суставах, сопровождающиеся нарушением процессов липопероксидации, было бы логично ожидать положительного воздействия экзогенного ЦП на выраженность аутоиммунного воспаления при его внутрисуставном использовании. Следует отметить, что внутрисуставное введение неклеточного антиоксидантного фермента- ЦП представляется более физиологически обоснованным, чем использование препарата на основе клеточного антиоксидантного фермента (СОД), поскольку известно, что синовиальная 8 жидкость в нормальных условиях отличается минимальным количеством клеточных элементов.

Все вышесказанное побудило нас предпринять настоящее экспериментальное исследование, направленное на изучение возможности и оценку эффективности локального (внутрисуставного) введения ЦП у кроликов с АА. Учитывая важность объективной оценки состояния экспериментальных животных, что необходимо для верного суждения об эффективности проводимого лечения и отсутствие в доступной литературе соответствующих сведений, одной из задач было поставлено детальное, комплексное изучение суставных структур кроликов в норме и в условиях аутоиммунного воспаления.

1.2. ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальное обоснование внутрисуставного применения ЦП для лечения аутоиммунного воспаления у кроликов с АА на основе изучения изменений в суставных структурах.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Комплексное изучение состояния суставных структур кролика в-норме и в условиях аутоиммунного воспаления (АА) с помощью клинического, термографического, гистоморфометрического, лабораторного общеклинического, биохимического, иммунологического исследований.

2. Изучение состояния суставных структур и общих метаболических нарушений у кроликов с АА при воздействии внутривенно вводимого це-рулоплазмина.

3. Изучение состояния суставных структур и общих метаболических нарушений у кроликов с АА при внутрисуставном использовании ЦП.

4. Разработка схемы внутрисуставного использования ЦП для коррекции состояния суставных структур и общих метаболических нарушений у кроликов в условиях АА. 9

1.3. НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Впервые проведенное комплексное сравнительное исследование суставных структур кроликов в норме и в условиях аутоиммунного воспаления ( АА) установило, что воспалительно- деструктивные процессы в тканях коленных суставов экспериментальных животных сопровождаются выраженными изменениями количественного и качественного состава содержимого суставной полости, что находит свое отражение в изменениях цитологических параметров, а также перераспределении фракционного состава гликозаминогликанов (ГАГ) и изменении активности эндогенного ЦП.

Впервые предложен и применен новый принцип локальной терапии АА путем внутрисуставного введения ЦП.

Внутрисуставное введение препарата позволило осуществить коррекцию как локальных, так и системных проявлений АА, что сопровождалось снижением активности ПОЛ за рчет уменьшения напряженности неклеточного звена АОС, нормализацией обмена ПГ и иммунопатологических реакций, общерезорбтивному действию (снижению уровня эндогенной интоксикации по показателям циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК)).

1.4. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

Предложено внутрисуставное введение ЦП у кроликов для лечения аутоиммунного воспаления (Способ лечения адъювантного артрита). Патент РФ № 2156617 по заявке № 99111811, приор, от 03.06.1999, публ. 27.09.2000,БЮЛЛЕТНЬ № 27., ЬШ 2156617 (13) С 1 7 А 61 К 35/16.

Материалы и положения диссертации внедрены в практику работы следующих учреждений: Саратовский НИИ травматологии и ортопедии, РКБ г. Нальчика.

Теоретические положения и практически значимые результаты диссертационного исследования включены в пособие для научных работников

10

Комплексная оценка состояния суставных структур лабораторных животных» и методические рекомендации для врачей «Церулоплазмин в комплексном хирургическом лечении ревматоидного артрита», находящиеся на утверждении в МЗ РФ.

1.5. НА ЗАЩИТУ ВЫНОСИТСЯ:

1. АА у кроликов приводит к выраженным изменениям в синовиальной системе коленных суставов, которые объективно могут быть охарактеризованы с помощью косвенных лабораторных тестов, определяемых в биологических жидкостях.

2. В качестве нового принципа терапии А А у кроликов, позволяющего провести коррекцию локальной недостаточности неклеточного ферментно-' го звена АОС, предлагается внутрисуставное введение ЦП.

3. Наиболее рациональным способом коррекции местных проявлений АА у кроликов является еженедельное четырехкратное внутрисуставное введение ЦП в разовой дозе 2,5 мг/кг веса, что позволяет также снизить и общую активность воспалительного процесса.

1.6. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Основные положения работы доложены на: 1 Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 1996), «Национальных днях лабораторной медицины России «(Москва, 1997),. Юбилейной конференции, посвященной 70-летию ассоциации ревматологов России и 40-летию Института ревматологии РАМН (Москва, 1998), «Национальных днях лабораторной медицины России» (Москва, 1998), Научно-практической конференции "Современные аспекты глюкокортикоидной терапии ревматических заболеваний" (Москва, 1999), VI Российском национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1999), VII Национальном конгерссе «Человек и лекарство» (Москва, 2000), на конференции молодых ученых в Саратовском государственном медицинском университете (2000), Национальных

11 днях лабораторной медицины России-2000, II (VI) Конгрессе специалистов клинической лабораторной диагностики России (Москва, 2000).

1.7. ПУБЛИКАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

По теме диссертации опубликовано одиннадцать работ.

1.8. ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертационная работа изложена на 168 страницах машинописи, иллюстрирована 32 таблицами, 16 рисунками.

Диссертационная работа состоит из введения, 7глав, включая обзор литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и обсуждения полученных данных, а также выводов и практических рекомендаций. Указатель литературы включает 222 источника (149 отечественных и 73 иностранных).

3. ВЫВОДЫ:

1 .Выраженная воспалительная деструкция суставных тканей у кроликов с АА приводит к метаболическим нарушениям, проявляющимся как локально, в синовиальной системе пораженных суставов, так и во всем организме в целом.

2.Воспалительно-деструктивные процессы в синовиальной системе пораженных суставов у кроликов с АА, протекающие на фоне интенсификации процессов липопероксидации (повышение уровня МДА до 4,62±0,17-при АА, 3,15±0,11 мкмоль/л - в норме), а также недостаточности неклеточ-' > ного ферментного звена АОС (повышение активности ЦП: до 34,93±1,90-при АА, 23,80±0,65 у. е. - в норме), требуют направленной локальной медикаментозной коррекции.

3.С целью снижения локальных и общих проявлений АА целесообразно внутрисуставное использование экзогенного ЦП, обладающего выраженным противовоспалительным и антиоксидантным действием, начиная с десятых суток заболевания.

4.ЦП не оказывает существенного влияния на основные проявления АА в случае внесуставных проявлений процесса при длительности заболевания свыше трех месяцев.

139

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. С целью объективизации состояния суставных структур коленных суставов кроликов со сформированным АА и оценки эффективности проводимого лечения наряду с гистоморфометрическими методами рекомендуется использовать комплексную схему исследования цитологических, биохимических и иммунологических параметров содержимого суставной полости и крови.

2. С целью снижения выраженности местных проявлений и общей активности аутоиммунного воспаления у кроликов с АА рекомендуется внутрисуставное введение ферментативного неклеточного антиоксиданта -ЦП. Препарат назначается в виде курса из 4 еженедельных внутрисуставных инъекций в разовой дозе 2,5 мг/ кг веса животного.

140