Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Экспериментальное обоснование и использование биомассы мутантов Saccharomyces cerevisiae в птицеводстве

На правах рукописи

СОКОЛОВА Лидия Николаевна

ЭКСПЕРЕМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БИОМАССЫ МУТАНТОВ ЭАССНАКОМУСЕЭ СЕИЕУШАЕ В ПТИЦЕВОДСТВЕ

16 00 04- фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Санкт-Петербург 1998

Работа выполнена на кафедре болезней птиц, рыб, пчел и пушных зверей С-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины

Научный консультант : заслуженный деятель науки РФ, академик академии аграрного образования, доктор ветеринарных наук, профессор В.Д.Соколов

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

Э.П.Зацепин доктор биологических наук, профессор А.Е.Хованских доктор ветеринарных наук, профессор И.Г.Арестов

Ведущая организация - Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства

Защита состоится «Л>С/сУ'//1998г. в ^/часов на заседании диссертационного совета Д. 120.20.02 при Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (196084, Санкт-Петербург, ул.Черниговская д.5)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской академии ветеринарной медицины. /

Автореферат разослан" / л/?у,/«-►/!998г.

/

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор ветеринарных наук М.В.Шустрова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Основной задачей профилактической ветеринарии является повышение жизнеспособности или выносливости животных и птицы на уровне популяции. Особенно актуальной эта задача становится в условиях интенсивного промышленного птицеводства; так как у птицы, изолированной от воздействия естественных природных стимуляторов и регуляторов жизнедеятельности в условиях замкнутой искусственной среды и односторонней эксплуатации, снижается устойчивость к различным внешним воздействиям (В.И.Фисинин,1991). Физиологические потребности птицы с высокими потенциальными возможностями продуктивности существенно отличаются от потребностей животных со средней продуктивностью как в качественном, так и в количественном отношениях. Особое место занимает проблема белка (Л.К.Эрнст, 1986; В.И.Фисинин,1986), так как бройлеры и куры яичных пород как конверторы энергии по отложению белка уступают лишь рыбам, которые тратят энергию на терморегуляцию, являясь пойкилотерными (Г.Т.Черепанов, 1992). Влияние на продуктивность, рост, развитие, иммунобиологический статус птицы оказывают не только сбалансированность кормов по питательности, но и структура смесей, подбор компонентов по содержанию аминокислот, витаминов и провитаминов, микроэлементов, жирных кислот и других биологически активных веществ (А.Маслобоев,1976; М.Лемешева, 1991). Но эта проблема остается во многом нерешенной для нашей страны и на сегодняшний день. Острой проблемой является

3

сбалансированное кормление птицы по периодам роста. Кроме того низкое качество кормов отражается на здоровье и продуктивности птицы.

Достижения биохимии последних лет в значительной мере расширили наши представления о биологических функциях и взаимном влиянии аминокислотного и витаминного состава кормов (А.Р.Вальдман, В.Ф.Бекер,1982). Полноценное белково-кислотное питание имеет непосредственное отношение к всасыванию и транспорту витаминов. Дефицит витаминов, в свою очередь, тормозит синтез белков, от которых зависит усвоение витаминов. Изучение биохимии пищеварительного процесса на уровне транспорта веществ показало ту роль, которую выполняют белки- акцепторы и рецепторы витаминов. С другой стороны показано значение витаминов в синтезе белков и их посттрансляционной модификации (А.Р.Вальдман, В.Ф.Бекер,1982) . Взаимная связь двух важнейших составных частей корма (аминокислот и витаминов) определила их значение в организации полноценного кормления и его экономике. Если учесть, что промышленное птицеводство получает только 35-40% витаминов от потребности, то становится ясной проблема разработки дешевых кормовых препаратов, содержащих поливитаминные композиции и активные метаболиты витаминов в сочетании с белком со сбалансированным аминокислотным составом. Поиск решения этой проблемы ведется постоянно во всем мире и один из путей уже определен - производство белка и биологичеки активных веществ микробным синтезом.

Создание нового продукта биотехнологии и внедрение его в широкую практику требует комплексного

4

биологического и фармакологического подхода и изучения, начиная с создания штамма-продуцента с заданными свойствами; его биосинтетической способности, химического состава и биологической ценности биомассы и отдельных продуктов и влияния их на различные стороны обмена веществ и физиологию организма птицы. Изложенное и явилось предпосылкой для наших исследований.

1.2. Цель и задачи исследований. Цель работы - создание комплексного метода изучения биологической ценности и безвредности кормовой добавки или отдельных биологически активных веществ, входящих в ее состав, являющихся продуктом биосинтеза мутантных дрожжей-сахаромицетов с измененным метаболизмом стеринов. Достижение поставленной цели предусматривает решение следующих задач:

изучение культуральных и биологических свойств, особенностей культивирования в промышленных условиях штаммов дрожжей БассЬаготусез сегеУ1$1ае, накапливающих индивидуальные стерины -провитамины группы О и другие биологически активные вещества, как продуцента продукта "Витаминные дрожжи";

изучение биохимического состава и биологических свойств биомассы мутантных штаммов дрожжей-сахаромицетов и антирахитического действия их стеринов;

изучение переваримости и усвояемости биомассы мутантных дрожжей и их влияние на качество мясной продукции птицеводства;

изучение ростостимулирующих свойств витаминных дрожжей и их влияния на иммунобиологическую

5

реактивность бройлеров; изучение влияния витаминных дрожжей на жизнеспособность и резистентность молодняка птицы; изучение влияния витаминных дрожжей на обмен веществ организму бройлеров и возможности их применения в терапии гиповитаминозов, патологии опорного аппарата и инфекционных заболеваний; изучение безвредности витаминных дрожжей для организма бройлеров.

1.3. Научная новизна. Впервые получены мутантные штаммы - продуценты дрожжей ЗассЬагошусеэ сегеу1з1ае с измененным метаболизмом стеринов, накапливающие холеста-производные (провитамины ЭЗ и Э4) с высокой антирахитической активностью (авторское свидетельство № 1499915 от 8 апреля 1989 г. "Штамм дрожжей БассЬагошусез сегеу1$1ае - источник провитаминов О" , патент № 92012371/13 от 16.12.93 ."Способ получения аналогов витамина ЭЗ" . Проведено полномасштабное изучение их культуральных свойств, физиолого-биохимических характеристик, а также особенностей культивирования в промышленных условиях.

Впервые получен белково-витаминный препарат ("Витаминные дрожжи"), обладающий высокой антирахитической активностью, достигающей 120-140 МЕ вит. Б (штаммы ПТ-42 и ПТ-15) и содержащей не менее 43% белка со сбалансированным аминокислотным составом и полным комплексом витаминов группы В (авторское свидетельство № 1352937 от 15 июля 1987 г. "Штамм дрожжей ЗассЬаготусев сегеу1з1ае, используемый в качестве кормовой витаминной добавки").Доказаны безвредность

витаминных дрожжей, отсутствие эмбриотоксического и тератогенного действия при использовании их в качестве кормовой добавки.

Важное приоритетное значение имеют исследования, характеризующие ростостимулирующие влияние витаминных дрожжей, улучшение иммунобиологической реактивности организма птицы, нормализацию фосфорно-кальциевого обмена и проявления патологии опорного аппарата.

1.4. Практическая ценность работы заключается в разработке промышленной технологии получения препарата "Витаминные дрожжи" (ТУ № 2290-004-13189938-93. Дрожжи витаминные (кормовой препарат витамина ЭЗ). В научном обосновании применения препарата в бройлерном птицеводстве (Временное наставление по применению витаминных дрожжей в промышленном птицеводстве при выращивании бройлеров от 26.02.90.№ 034-26).

В условиях длительного производственного эксперимента на бройлерных птицефабриках "Русско-Высоцкая" (Ленинградская область) и "Нарышкинская" (Орловская область) показано улучшение переваримости и усвояемости кормов при использовании витаминных дрожжей. Повышение сохранности и продуктивности птицы, в том числе за счет увеличения съедобной части тушек, увеличения содержания белка в мясе и улучшения его аминокислотного состава. Отмечена высокая профилактическая эффективность препарата при гиповитаминозах, нарушениях обменных процессов и при использовании в комплексе лечебно - профилактических мероприятий инфекционных заболеваний. Важное практическое значение имеет разработанный метод

7

контроля общей иммунобиологической реактивности родительского стада и жизнеспособности и продуктивности молодняка, полученного от него.

На защиту выносится концепция комплексной биологической и фармакологической оценки новых продуктов биотехнологии.

1.5. Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных научных конференциях профессорско-преподавательского состава СПбГАВМ с 1987 по 1996 гг. включительно, на межвузовских научно - практических конференциях "Новые фармакологические средства в ветеринарии" (Ленинград, 1989, 1990, 1993, 1995 гг.), на 2-й межвузовской научно-методической конференции по программе "Птица" (Симферополь, 1990 г.), Всесоюзной научно-производственной конференции "Комплексная система ветеринарных мероприятий в птицеводстве - резерв повышения эффективности птицеводства" (Ленинград, 1989 г.), на научной сессии "Научные и практические аспекты увеличения мяса в нечерноземной зоне России" (С-Петербург - Пушкин, 1993 г.), на 2-м всесоюзном симпозиуме "Научные основы витаминного питания с.х. животных (Юрмала, 1987 г.), на 3-й всесоюзной конференции "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов" (Москва, 1987 г.), на всесоюзной научно-технической конференции "Совершенствование ветеринарного обслуживания животноводства в условиях интенсификации" (Махачкала, 1987 г.).

1.6. Публикация научных исследований. Основные положения диссертации опубликованы в 44-х печатных работах.

1.7. Реализация результатов исследований.

Материалы диссертации использованы в промышленном птицеводстве, фермерских и домашних хозяйствах РФ для повышения продуктивности и качества продукции, учебном процессе и проведении НИР в вузах РФ, вошли в рекомендации по улучшению минерального обмена у птицы и домашних животных, и наставления по применению препаратов содержащих витаминные дрожжи.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 367 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, рекомендаций производству, списка использованной литературы. Список литературы включает 509 источников, в том числе 354 работы отечественных и 155 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 21 рисунком и 68 таблицами.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Исследования проведены на кафедрах болезней птиц, рыб, пчел и пушных зверей и фармакологии и токсикологии Санкт - Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины, в птицеводческих хозяйствах, согласно открытой госбюджетной тематике научно-

9

исследовательских работ.

В эксперименте в промышленных условиях использовали птицу отечественного кросса "Бройлер - 6". В производственных и лабораторных экспериментах было использовано 80000 кур-несушек родительского стада, 900000 инкубационных яиц, полученных от них; 2800000 бройлеров, 120 белых крыс.

В работе использовали дрожжи ЗассЬаготусеБ сегеу1$1ае.

Эффективность определяли по показателям продуктивности (прирост массы, качество мясной продукции) и сохранности поголовья, учитывая иммуннобиохимические показатели, используя общепринятые методики.

Безвредность (токсичность) определяли согласно Инструкции по проведению ветеринарно - токсикологических исследований стимуляторов роста сельскохозяйственных животных и гигиенической оценки продуктов животноводства (1985), Методических указаний по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве (утвержденных ГУВ Госагропрома СССР, 1988), где изложены тесты характеризующие эффективность и токсичность препарата (влияние на общее состояние организма, иммунологические показатели, различные виды обмена веществ, патологоанатомические и морфологические данные, а также эмбриотропное и мутагенное действие).

О состоянии иммунной системы судили по активности лизоцима, бактерицидной активности сыворотки крови, активности фагоцитов, количеству иммуноглобулина в.

Из биохимических показателей учитывали общий белок в сыворотке крови, количество гемоглобина, кальция и фосфора, витаминов, СасЬ, зольность костей. Так же

10

учитывали гематологические показатели, подвергали гистологическим исследованиям паренхиматозные органы, эмбрионы.

Использовали общепринятые методики определения переваримости и усвояемости питательных основных и минеральных веществ корма.

Качественный анализ стеринов дрожжевой биомассы проводили методами тонкослойной хроматографии (ТСХ), газожидкостной хроматографии (ГЖХ), УФ-спектрофотометрии. Аминокислотный анализ дрожжей и мяса птицы проводили на аминокислотном анализаторе.

Витамины группы В в дрожжах и мясе птицы определяли флуориметрическими методами. Морфология и культурально-биохимические свойства дрожжей продуцентов изучались общепринятыми микробиологическими методами.

2.2. Обоснование выбора штаммов - продуцентов витаминных дрожжей

Исходным штаммом послужил БассЬаготусез сегеу1$1ае ЛВ-7 (2 - ПТ12), заводского производства, который относится к 12-й расе хлебопекарных дрожжей, источник эргостерона. Штамм ЛВ-7 происходит из лаборатории промышленной микробиологии ВНИИ Гидролиз, имеет высокую бродильную активность, пригоден для пшеничного тестоведения. Путем мутагенного воздействия на него были получены мутантные штаммы, отличающиеся стериновым составом и устойчивостью к нистатину. Для работы были отобраны три мутантных штамма: ПТ-15, ПТ-42, ПТ-60. Штамм ПТ-15 (ВКПМ У-489) -МАТа/МАТсСпуз 1-9 /пуэ 1-9, имеет блок по гену N¥81, контролирующий синтез

11

фермента С24 -метилтрансферазы. Штамм накапливает холеста -5, 7, 24 -триен ЗЬ-ол -70% от общего содержания стеринов. Штамм ПТ- 42 (ВКПМТУ -702) -МАТа his 7-1 lys 9-А12 nys 1-3. Имеет мутацию в гене NYS1. Накапливает холеста -5, 7, 24 -триен -ЗЬ-ол-48% и холеста -5, 7, 22, 24 -тетраен -ЗЬ-ол -22%' от общего содержания стеринов. Штамм ПТ-60 (ВКПМ Y-609)-MAT<6idi -2-163 his 7-1 lys 2-12,nys -х-147.Имеет мутацию в гене NYSx, которая приводит к нарушению синтеза эргостерина на уровне 22, 28 -дегидрогеназы. Накапливает эргоста -5, 7-диен -ЗЬ-ол- 87% от общего содержания стеринов.

Мутантные штаммы: ПТ-15,ГГГ-42 и ПТ-60 были получены путем воздействия жесткого УФ -облучения на штамм ЛВ- 7. Они отличаются от исходного устойчивостью к нистатину и стериновым составом. Штаммы дрожжей-сахаромицетов, селективно накапливающие различные предшественники эргостерина, могут заменить дефицитное и дорогостоящее сырье растительного и животного происхождения, используемое для получения препаратов стероидной природы. Мутанты, у которых нарушена модификация боковой цепи, всегда накапливают стерины с 5-7 системой сопряженных двойных связей. Такие стерины являются провитаминами Группы D, так как наличие 5-7 системы является необходимым условием превращения провитамина в витамин. Хотя штаммы -продуценты, накапливающие провитамины D, полумены без введения в геном клетки чужеродной ДНК, все же интродукция модифицированного микроорганизма и его продукта в промышленное производство обязательно включает в себя изучение морфологического постоянства, устойчивого наследования физиологических и биохимических признаков,

12

испытания патогенности.

При сравнении морфологических особенностей мутантных и исходного штаммов определяли характер роста на плотных и жидких питательных средах, способность к движению, форму и размер клеток, количество спор в аске. Так как стерины являются структурными компонентами клеточных мембран, можно было ожидать, что изменение их состава будет влиять на процессы, связанные с функционированием мембранного аппарата; морфологию клеток и колоний, синтез и экскрецию экзоферментов дрожжей. Все исследуемые штаммы на плотных средах имели вид гладких круглых колоний с ровными или неровными краями и выпуклым центром, пастообразных, белого или нежно-кремового цвета. Отличия наблюдались по размеру колоний -мутантные штаммы образовывали колонии большего размера, по сравнению с исходным. На жидких средах мутантные и исходный штаммы вызывали их помутнение и образовывали пленку. Микроскопирование клеток показало, что клетки мутантных штаммов не приобрели новых свойств, не изменилось их отношение к окраске по Граму. При росте на средах с добавлением метиленового синего исходный и мутантные штаммы образовывали неокрашенные колонии, что свидетельствует об отсутствии дефекта клеточных мембран. Не обнаружено различий и по активности кислой фосфатазы 1 у исходного и мутантных штаммов. Также не оказалось различий по осмотической устойчивости и отношению к сахарам у исходного и мутантного штаммов. Не изменилась чувствительность к активной кислотности среды, наиболее интенсивный рост штаммов наблюдался при рН -4,5 и диапазоне рН 2,5-10,0 , что совпадает с требованиями к рН

13

среды при производстве основных рас хлебопекарских дрожжей. Температурный оптимум роста штаммов ПТ-15, ПТ-42 и ПТ-50 незначительно снизился по сравнению с ЛВ-7 и составил 28+2 С.

Дрожжи вида ЗассЬагошусез сегеу1з1ае не обладают патогенными свойствами для человека и животных. Но мутагенное воздействие, вызвавшее модификацию в синтезе стеринов, могло повлечь изменение этих свойств. Были проведены сравнительные испытания на патогенность для белых мышей исходного и мутантных штаммов. Все штаммы не вызывали гибели мышей при внутрибрюшинном введении как нативных, так и убитых дрожжевых клеток, не влияли на поведение и внешний вид, на температуру тела и количество дыхательных движений белых мышей. Не изменились и находились в пределах физиологической нормы морфологические и биохимические показатели крови. Во внутренних органах белых мышей дрожжевые клетки обнаруживали в течение 20 дней после заражения. При этом не выявлено макро- и микроскопических изменений цвета, размеров, внешнего вида и структуры органов.

Таким образом, сравнительный фенотипический анализ исходного и мутантных штаммов дрожжей позволяет заключить, что изменения стеринового состава у мутантов не сказываются на ростовых, физиологических, биохимических характеристиках и жизнеспособности, не приводят к изменению патогенных свойств. Так как конечной целью фенотипического анализа мутантов является выбор штаммов, перспективных в качестве продуцентов различных стеринов, то можно рекомендовать штаммы ПТ-15, ПТ-42, ПТ-60 в качестве таковых, обладающих необходимыми технологическими свойствами.

14

Анализ стериновых фракций исходного и мутантных штаммов, проведенный различными методами, позволил подтвердить, что исходный штамм ЛВ-7 содержит эргостерин (эргоста -5, 7, 22, 24(28) -тетраен -ЗЬ-ол) или провитамин 02 - 2% и зимостерин (холеста -8,24-диен-ЗЬ-ол) -98%, который не имеет О-витаминной активности.

Анализ стериновых фракций мутантов по гену N¥81 (ПТ-15, ПТ-42), показал в них наличие трех стеринов, один из которых определен как зимостерин, два другие были идентифицированы как холеста -5, 7, 24 -триен - ЗЬ -ол и холеста -5, 7, 22, 24-тетраен -ЗЬ-ол. Стерины, имеющие 5, 7-и 7,8-диеновую систему в ядре молекулы, являются структурными аналогами 7-идрохолестерина и могут иметь антирахитическую активность.

Стериновая фракция мутанта по гену КУБ4 состоит из четырех стеринов. Три их них представлены эргостерином, зимостерином и эргоста-5, 7, 22, 24(28)-тетраен-ЗЬ-олом, которые содержатся в минорном количестве. Мутант по гену N¥84 в основном (66-86%)накапливают эргоста-5,7-диен-ЗЬ-ол, известный по литературным источникам как витамин 04.

Анализ стеринового состава мутантных штаммов выявил три соединения, которые могут обладать антирахитической активностью: аналоги провитамина 03 (холеста-5, 7,24-триен-ЗЬ-ол и холеста-5, 7, 22, 24 -тетраен -ЗЬ-ол) -у мутантов по гену N¥81 и витамин 04(зргоста-5, 7-диен-ЗЬ-ол) -у мутанта по гену N¥84.

Для подтверждения этой гипотезы определили О-витаминную активность УФ - облученной биомассы этих штаммов. Сравнили эффективность обученной и необлученной биомассы в сравнении с витамином ОЗ биологическим методом, который основан на количественном

15

определении О -витамин- зависимого -Са-связывающего белка (СаСБ) по Бауман В.К. Кроме того использовали косвенные показатели (табл.1). При использовании необлученной биомассы всех исследуемых штаммов у цыплят наблюдали признаки рахита: низкий прирост массы тела, гипертрофия паращитовидной железы, слабая минерализация костной ткани (зольность 29,9% и 25,2%), в сыворотке крови низкий уровень Са и неорганического фосфора, резко повышена активность щелочной фосфатазы, СаСБ в слизистой двенадцатиперстной кишке практически отсутствует.

Применение облученной биомассы всех исследуемых штаммов позволило определить, что у цыплят получавших витамин D2 (шт.ЛВ-7) развивался слабый рахит, а при использовании шт.ПТ-15 и ПТ-42 и ПТ-60 признаки рахита не наблюдались. САСБ у них вырабатывался в значительном количестве. На основании зависимости между содержанием САСБ и дозой витамина ИЗ в рационе была установлена О-витаминная активность мутантных штаммов, которая составила для штаммов ПТ-15 и ПТ-42 140 МЕ в /г биомассы и 120 МЕ в/г биомассы для штамма ПТ-60 в расчете на витамин ЭЗ. В связи с меньшей О-витаминной активностью штамма ПТ-60, а также в связи с тем, что из-за отсутствия природных источников витамина 04 в медицинской и ветеринарной практике не применяется, в дальнейших исследованиях решено было остановиться на штаммах ПТ-15 и ПТ-42.

Использование дрожжевой биомассы, облученной УФ -лучами для активации аналогов витамина Б, более экономично, так как позволяет остановиться на стадии

получения дрожжей и избежать достаточно дорогих стадий извлечения и очистки стериновых фракций холеста-5, 7, 24-триен-ЗЬ-ол и холеста-5, 7,22, 24-тетраен -ЗЬ-ол.

Таблица 1

Д — витаминная активность облученной и необлученной биомассы дрожжей,

§ живой 3 * в >8 а 3 и 1 £ сыворотка крови лкг/мг

- Р и Я а. 3 | и Й 1 « 5 3 1

§ § 1 5 - а -5 | 3 < • о б!

(т А Я § О. 3 £ 1. Я V В 1 ш 3 § 5 о- < 1 и 1 а.'

1 2 3 4 5 6 7 8 9

1 ОР 45,6+6,3 5,82+0,40 25,17+0,35 2,20+ 0,50 1,4+0,3 37,2+ 0,7 Нет

2 ОР+500 МЕ вит. оз 149,5+6,7 1,7+0,42 35,15+0,50 2,90+ 0,33 2,0+0,4 20,4+ 0,7 37,2+ 0,4

3 ОР+750 МЕ внт. ОЗ 154,2+7,8 1,40+0,25 35,62+0,47 2,91 + 0.31 2,2+0,3 18,7+ 0.5 38,5+ 0,4

4 ОР+необ- лученные дрожжи (аналоги провит.П)3) 42,7+7,8 4,56+0,53 25,71+0,62 2,12+ 0,48 1.4+0,4 35,6+ 0.6 Нет

5 ОР+облу- 95,2+4,5 6,7+0,3 25,31+0,53 1,89+ 1,96+ 39,42+ 10,07

ченные 0,21 0,21 1,40 ±1,62

дрожжи

содерж. вит. 02

6 ОР+необ- лученные дрожжи, содерж. провит.04 60,8+5,1 8,6+0,9 23,32+0,78 1,55+ 0,23 1,80+ 0,21 39,42+ 1,4 Нет

7 ОР+об лученные дрожжи (аналоги вит. ИЗ) 152,0+9,3 1,44+0,23 36,13^0,32 2,88+0, 37 2,2+0,2 19,6+0, 8 37,8+ 0,5

8 ОР+облу- 174,6+6.7 1,0+0,1 38,62+0,29 2.81 + 2,36+ 12.63+ 51,29

ч.дрожжи. 0,26 0.11 0,48 + 1,50

содерж.

вит. Э4

Примечание:АЩФ - единнцы-активностъ щелочной фосфаты. выражают количество неорганического фосфора в мг, о+щеплснного от глицерофосфата натрия при инкубации 100мл сыворотки крови при 37 С в течение 30 мин; ПЩЖ - паращитовидная железа; ОР -основной рацион.

Дрожжи содержат значительное количество белка, поэтому добавка облученной дрожжевой биомассы в корм птице не только восполнит дефицит витамина Э в рационе, но и будет дополнительой белковой добавкой, позволяющей сбалансировать рацион птицы по белку и улучшить усвоение кормов, так как известно, что сбалансированное по аминокислотному составу питание птицы имеет существенное значение для ее продуктивности.

Чтобы выявить перспективность использования дрожжевой биомассы штаммов-мутантов по гену и как

белковой добавки провели количественную оценку содержания белка и оценку аминокислотного состава облученной и необлученной биомассы мутантных и исходного штаммов.

Биомасса проанализированных штаммов содержит 4243% белка. Аминокислотный состав белка изучаемых штаммов в качественном отношении не отличается. Из незаменимых для птицы аминокислот во всех случаях присутствуют аргинин, гистидин, лейцин, изолейцин, лизин, валин, глицин, метионин, треонин, фенилаланин, тирозин, цистин, пролин, серин, аланин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты. Причем содержание многих аминокислот в мутантных штаммах значительно выше, чем у исходного: лизина - на 0,6 г/100 г биомассы, фенилаланина - на 0,3 г/100 г, глицина - на 0,4-0,6 г/100 г биомассы, валина - на 0,2-0,4

18

г/100 г биомассы. Более высоким у мутантов является содержание треонина, серина, пролина, аргенина, что повышает биологическую ценность белка. О биологической ценности белка биомассы свидетельствуют данные по аминокислотному скору незаменимых аминокислот (табл.2). Следует отметить, что УФ - облучение дрожжевой биомассы на качественный и количественный состав аминокислот не изменяет.

Таблица 2

Данные скора незаменимы! для птицы аминокислот

исследуемьч штаммов

Аминокислота Содержание аминокислоты в стандартном белке ФАО, г/100 г белка Аминокислотный скор, %

Штамм ЛВ-7 Штамм ПТ-15 Штамм ПТ -42

Лизин 4,2 96,2 112,1 109,7

Треонин 2,8 79,3 108,2 119,6

Валин 4,2 53,1 57,1 62,6

Цисгин 2,0 15,5 23.0 17,5

Изолейцнн 4,0 65,2 56,0 62,5

Лейцин 4,8 65,0 65,2 69.4

Тирозин 2,8 39,6 44,3 40.0

Метионин 2,2 15,9 10,4 15.9

Фенилаланин 2,8 65,0 75,0 78,6

Примечание. Штаммы - ЛВ - 7 - без облучения, содержит витамин 02-.ПТ - 15-без облучения, содержит аналоги витамина Ш; ПТ - 42-УФ-облученнные. содержит аналоги витамина ЭЗ.

Известно, что пекарские дрожжи, к которым относятся исследуемые штаммы, широко используются как источники витаминов группы В. В биомассе исходного и мутантных штаммов были обнаружены следующие биологически активные вещества, относящиеся к водо-растворимым витаминам группы В: тиамин, рибофлавин, холин, пиридоксин, биотин, цианкобаламин, пантотеновая, никотиноваяифолиевая кислоты. Причем содержание тиамина, рибофлавина и особенно цианкобаламина было

19

существенно выше, чем у исходного штамма (табл.3).

Таким образом, учитывая наличие в биомассе мутантных штаммов ПТ-15 и ПТ-^2 достаточного количества белка, имеющего сбалансированный аминокислотный состав и высокое содержание незаменимых аминокислот, значительное количество витаминов группы В, а также высокое содержание аналогов витамина ЭЗ (60% от общего содержания стеринов) и их высокую антирахитическую активность (140 МЕ на 1г)5 мутантные дрожжи перспективно использовать не только как источник получения витамина ОЗ, но и как комплексный витаминный препарат, обогащенный полноценным белком.

Внедрение в широкую производственную практику нового биологически активного кормового препарата "Витаминных дрожжей"предполагает и обязательное изучение его возможных токсиколоических свойств в сязи с тем, что продуцент этого микробиологического препарата представляет собой мутантную форму. Было проведено тщательное токсикологическое исследование витаминных дрожжей с изучением хронической токсичности, влияния на организм лабораторных животных (крыс) и птиц, их продуктивности, воспроизводительной функции,

эмбриотропного действия при длительном скармливании витаминных дрожжей. При изучении хронической токсичности белым крысам в течение 24 месяцев скармливали добавку витаминных дрожжей в дозе 3% и 6% к рациону. Контрольная группа получала только основной рацион. Клинических признаков интоксикации и падежа в течении 24 месяцев наблюдения не отмечалось. Морфологические и биохимические показатели крови крыс опытных и конрольных групп (количество форменных

20

элементов крови, гемоглобин, общий белок, глюкоза, холестерин, бета-липопротеиды, количество кальция и фосфора, витамина А, бактерицидная и лизоцимная активность) были в пределах физиологической нормы. У опытных крыс отмечалась более высокое содержание общего белка, витамина А, бактерицидная и лизоцимная активность была 6,2% и 2,1% выше, чем у контрольных. Убой крыс проводили через 18 и 24 месяца от начала эксперимента. Макро- й микроскопических изменений во внутренних органах не обнаружили. Уровень развития и типичное состояние клеточных элементов, состав клеток, цитологический рисунок и структура клеточных элементов во всех исследованных органах опытных и контрольных крыс хорошо дифференцируется и соответствует характеру этих органов в норме.

Таблица 3

Содержание витаминов в биомассе исследуемых штаммов

Витамины Исследуемые штаммы

Витамины гр.В, мг/г сухого вещества ЛВ-7 ПТ- 15 ПТ - 42

Тиамин - В1 5,80-6,10 7,00 7,00

Рибофлавин - В2 180,00 200,00 200,00

Пантотеновая кислота - ВЗ 19,00 19,80 19,80

Холин - В4 310,00 310,00 310.00

Никотиновая кислота - В5(РР) 29,00 28,00 29.00

Пиродоксин - В 5,00 5,00 5,00

Биотин - Н 0,57 0,57 0,57

Фолиевая кислота -Вс 3,00 3,00 3,00

Цианкобаламин -В12 5,00 120,00 120,00

Инозит 350,00 350,00 350,00

Витамины гр.Э, %от общего содержания стеринов

02(зргосга-5, 7, 22, 24( 28)-тетрасн-ЗЬ-ол) 92.00

03(сфук1-уриые аналоги): холеста-5, 7. 24-триин-ЗЬ-ол - 18,00 48.00

Холеста-5. 7, 22, 24-триен-ЭЬ-ол - 70,00 22.00

При изучении влияния ВД на воспроизводительную функцию было получено три поколения белых крыс. Общее состояние всех животных было хорошим, об этом свидетельствовали масса тела, морфологические и биохимические показатели крови, индексы осеменяемости.

Оценивая, влияние ВД на развитие плодов установили, что добавки 3% и 6% ВД снижают предимплантационную гибель плодов и общую эмбриональную смертность в 1,3 и 1,95 раза по сравнению с контролем. Генез периферического скелета (изучено 3000 тотальных плоскостных препарата костей) у плодов крыс опытных и контрольных групп происходил равномерно, синхронно, с соблюдением динамической симметрии, без достоверных различий. Онтогенез внутренних органов изучен на 2665 тотальных срезах. Анатомическое строение органов их топография у плодов опытных и контрольных групп было идентичным. В то же время было обнаружено слабовыраженное гепатотоксическое действие у 9,1% плодов при добавке 3% ВД в рацион матерей и 22,6% плодов при добавке 6% ВД и 0,74% плодов второй контрольной группы. Гепатотоксическое действие ВД на организм крыс связано с особенностями обмена витамина В у крыс. Известно, что гидроксилирование витамина ЭЗ в митохондриях печени у крыс значительно более активно и приводит к его выраженному токсическому действию при передозировках (Бауман, 1993), что является косвенным свидетельством активности аналогов витамина ОЗ в составе ВД .

Чтобы выявить не наблюдается ли подобный

22

гепатотоксический эффект у куриных эмбрионов взяли три группы кур-несушек по 50 голов, двум группам добавляли соответственно 3% и 6% ВД к рациону, третья - добавки ВД не получала и служила контролем. От каждой группы получили и проинкубировали по 100 яиц, которые вскрывали на И, 16,21 сутки инкубации. Проводили макроскопическое и гистологическое исследование печени. Было установлено, что анатомическое и гистологическое строение печени, ее топография во всех случаях идентичны. Цитологический рисунок, клеточный состав и структура клеточных элементов одинаковы у эмбрионов всех трех групп. Сосудистых изменений в печени эмбрионов опытной и контрольной групп нет, таким образом, добавки ВД не оказывают гепатотоксическое влияние на куриные эмбрионы.

Проведенные исследования позволили прийти к заключению, что добавка до 6% ВД к рациону не оказывает токсического, тератогенного и эмбриотоксического действия и может использоваться в качестве витаминной кормовой добавки в птицеводстве.

2.3. Использование витаминных дрожжей в рационах бройлеров и их влияние на активизацию обменных

процессов

Для оценки способности организма птицы переваривать и усваивать витаминные дрожжи проследили влияние ВД в качестве кормовой добавки взамен части комбикорма. Для чего учитывалась масса живой птицы, уровень и качество мясной продуктивности бройлеров, степень переваримости и использовании питательных веществ корма под влиянием замены 1; 1,5; 2; 2,5; 3% комбикорма дрожжевой добавкой.

23

Научно-хозяйственные и балансовые опыты проводились в производственных условиях. Использовали цыплят отечественного кросса "Бройлер - 6" из одой партии вывода, кондиционных, массой 55-70 г. Использовали 44322 бройлера разделенных на 6 групп, продолжительность опыта составила 56 суток. Выбирая дозу ВД, руководствовались нормами введения белковых добавок из дрожжевой и микробной биомассы в промышленном птицеводстве, которые позволяют вводить в рацион птицы от 1 до 15% такого белка, в зависимости от возраста и продуктивности. А также принимали во внимание, что биомасса содержит значительное количество витаминов группы В и витамина D3. Так как введение избытка витамина D3 наиболее опасно для организма птицы, то биомассу использовали в такой дозе, чтобы количество витамина D3 не превышало возрастной потребности.

Исследования показали, что применение витаминных дрожжей обеспечивает высокую на 1-5% выше, чем в контрольной группе сохранность и массу бройлеров. Средняя масса цыплят к концу выращивания была большей на 8,1-66,3 г, среднесуточный прирост массы составлял 28,2-29,1 г в опытных группах. Использование дрожжевой добавки повышала переваримость протеина на 1,1-2,3%, клетчатки на 0,1-0,6%, жира на 1,2-3%, а также лучше усваивался Ca и Р.

Оценивая качество мясной продукции, выявили, что в опытных группах был выше убойный выход при полупотрошении на 1,2-2,5% и полном потрошении на 1,22,1% относительно контрольных групп. Дрожжевая добавка способствовала большему выходу мышечной ткани, как белых так и красных мышц, увеличению массы внутренних органов, тушки от цыплят опытных групп характеризовались

24

меньшей массой костей, головы, ног, что свидетельствует о том, что прирост массы тела был обусловлен увеличением мышечной массы и массы внутренних органов. Органолептические свойства мяса были лучшими в опытных группах, а показатели рН, пробы на первичные продукты распада белков, пероксидазу, аминоамиачный азот соответствовали нормативным требованиям для мяса здоровой птицы.

Анализируя химический состав мяса, выявили, что применение витаминных дрожжей увеличивает содержание сухого вещества и протеина, не влияет на содержание жира, улучшает его аминокислотный состав. Не только повышается содержание незаменимых аминокислот, но и их соотношение приближается к оптимальному стандарту ФАО/ВОЗ. Значительно повышается количество лимитирующих аминокислот: треонина на 2,3-2,4 мкмоль/г, метионина на 1,71,8 мкмоль/г, триптофана на 3,5 мкмоль/г.

Применение витаминных дрожжей активно стимулировало жизнеспособность птицы, о чем свидетельствует большее содержание общего белка, гемоглобина, фосфора, кальция в сыворотке крови. Более активное кроветворение и лучшее состояние защитных сил цыплят опытных групп подтверждается увеличением количества форменных элементов крови и приближением к оптимальному возрастному физиологическому показателю, большей бактерицидной активности сыворотки крови и активности лизоцима в ней.

2.4. Влияние витаминных дрожжей на иммунобиологическую реактивность здоровых и переболевших бройлеров

Адаптационная пластичность и иммунологическая реактивность организма бройлеров наиболее подвержена влиянию качества кормления и условий содержания. При проведении научно - хозяйственных экспериментов было установлено нарушение микроклимата: повышенное содержание N11 иБО, запыленность и повышенная микробная загрязненность воздуха, которое сочеталось с низким качеством кормов: дефицит протеина от 6 до 16%, недостаток витаминов А и Б, группы В в отдельных партиях комбикорма несбалансированность Са и Р, иногда других макроэлементов. При оценке защитных сил организма бройлеров по продуктивности, жизнеспособности, гематологическим и биохимическим показателям выявили, что показатели сохранности колеблются в хозяйстве от 80,2% до 83,9% и значительно отстают от плановой - 94%, также редко достигается плановый показатель по приросту массы - 26,0 г, а составляет 20,0-23,9 г. Снижена бактерицидная (21,3-23,4), лизоцимная (13,4-19,3) активность, общий белок (30,0-34,0 г/л), понижено содержание витамина А (2,26-2,40 мкмоль/л), гемоглобина (9,7-10,0 г/л), снижена бактерицидная активность клеток крови, фагоцитарная активность зернистых лейкоцитов; количество форменных элементов крови приближено к нижней границе физиологической нормы. После плановой вакцинации против НБ, напряженность поствакцинального иммунитета составила всего 1:8 - 1:128, всего в нескольких пробах поднималась до 1:256. Улучшив кормление добавкой ВД в количестве 1-3% от

26

суточного рациона птицы удалось скорректировать недостатки рациона в отношении витаминов D,группы В, аминокислотного состава и количества сырого протеина. Это сказалось на сохранности птицы, которая поднялась до 86,4%, среднесуточный прирост массы увеличился на 7,0 г, что повлияло на качество мясной продукции (тушки 1 категории составили 56,3, количество нестандартной продукции уменьшилось в 2 раза). В сыворотке крови увеличилось содержание общего белка до 35,0+0,03 г/л, гемоглобина до 13,0+0,1 г/л, витамин А - до 2,60+0,14 мкмоль/л, улучшалась лейкограмма, повысились такие показатели как бактерицидная (23,4+0,2), лизоцимная (21,3+0,5) активность сыворотки крови, возросла фагоцитарная активность (содержание Л.К.Б. - 1,84+0,9; % завершенность фагоцитоза - 21,8). Напряженность поствакцинального иммунитета при НБ возросла от 1:32 до 1:512, причем титр 1:32 был обнаружен только в 2-х пробах сыворотки.

Применяли ВД и в системе лечебно-профилактических мероприятий против колибактериоза, подострое течение которого регистрировалось в 30-40 дневном возрасте бройлеров. Были выделены серотипы Е.colli 0,2; 0,3; 078; 05; 025; 017; 0138 с положительными титрами в РА 1:32001:6400, которые оказались чувствительными полимиксину, неомицину, мономицину и стрептомицину. Эти антибиотики, вакцину из выделенных серотипов, приготовленную по методу Н.А.Радчука применяли для лечения и профилактики колибактериоза, а также препараты йода (йодинол, йодтриэтиленгликоль) для дезинфекции воздуха в птичниках. Оценивая, эффективность лечебно-профилактических мероприятий учитывали сохранность, прирост массы,

27

биохимические показатели крови: общий белок, белки адсорбированные на зимозане, бактерицидную и лизоцимную активность крови, активность фагоцитов; гематологические: СОЭ, гемоглобин, количество форменных элементов и лейкограмму. Все примененные лечебные средства были достаточно эффективны и купировали заболевание. Однако наиболее стабильные и оптимальные результаты были получены при использовании ВД. Сохранность увеличивалась до + 13,2%, уменьшалось количество положительно реагировавших на колибактериозный антиген с 60% до 26-15%, уменьшалось количество погибших от колибактериоза при вскрытии. Добавка ВД повышает эффективность иммунизации. Напряженность

поствакцинального иммунитета в РА составляет от 1:80 до 1:640, причем титр антител 1:640 при использовании ВД составляет 67%, а у не получивших добавку ВД только 10%. При использовании ВД все учтенные биохимические и гематологические показатели крови имеют тенденцию к восстановлению до физиологической нормы в течение 2-3 недель, становятся более стабильными и высокими, приближаются к верхней границе физиологической нормы для контролируемого возраста.

2.5. Использование витаминных дрожжей при гиповитаминозах и патологии опорного аппарата у

бройлеров

В промышленном птицеводстве значительное распространение имеют гиповитаминозы и патология опорного аппарата, которые возникают при действии комплекса факторов, в котором ведущее значение

28

приобретает дефицит биологически активных веществ, нарушение соотношения между макро- и микроэлементами, присутствие антипитательных факторов. В хозяйстве, где проводились производственные испытания витаминных дрожжей, также регистрировались гиповитаминозы группы В, рахит, патология конечностей. Исследования крови подтверждали эти состояния: так содержание тиамина составляло 543,28+0,04 мкмоль/л, гемоглобина 10,8+0,1 г/л, Са - 2,5+0,2 ммоль/л, Р - 2,2+0,4 ммоль/л, активность щелочной фосфатазы - 35,6+0,6 ед., зольность бедренных костей - 30,6+0,7.

Для коррекции рационов была использована добавка 35% ВД от общей массы рациона с 10 - дневного до 50 -дневного возраста. Это позволило снизить отход от гиповитаминозов В1 и В2 до 1% против 6% у контрольной птицы, нарушение минерального обмена до 3%, (у контрольных групп - 6%), жировой дистрофии печени и почек до 5% (в контроле - 10%). Значительно улучшились показатели крови при применении ВД: гемоглобин повысился до нормы - 13,0+0,1 г/л, тиамин составил 761,12+0,06 мколь/л, Са - 2,8+0,4 ммоль/л, Р- 2,3+0,4 ммоль/л, активность щелочной фосфатазы снизилась до 18,7+0,4 ед., улучшилась зольность бедренных костей и составила 36,4+0,4 ед. У бройлеров, получавших ВД, сохранность составила 89,4+0,8, повысился среднесуточный приросте 17,6+0.4 г до 21,6+0,2 г, выход продукции по категориям составил: 1 - 56,3%, 2 -37,7%, н/с - 6,3%. В контроле эти показатели значительно хуже: сохранность - 80,6+0,8%, среднесуточный прирост массы - 17,06+0,4 г, продукция 1 категории - 46,6%, 2 -40,8%, н/с - 12,6%.

2.6. Применение витаминных дрожжей для повышения жизнеспособности и резистентности молодняка

Качества инкубационного яйца имеют непосредственное влияние на жизнеспособность и адаптационные возможности молодняка. В свою очередь качество инкубационного яйца впрямую зависит от кормления кур-несушек и их общей резистентности. К тому же общая резистентность птицы передается по наследству и поддается селекции, поэтому, влияя на показатели общей резистентности родительского стада и качество инкубационного яйца можно повысить жизнеспособность и резистентность молодняка. Для этой цели использовали в кормлении родительского стада 3-5% ВД к общему рациону. Провели сравнение по морфологическим и биохимическим показателям инкубационного яйца от кур-несушек получавших ВД, содержавшихся на обычном рационе и получавшим добавку к рациону тривита. Сравнили также показатели по выводимости, сохранности молодняка за 1 месяц жизни и за весь период выращивания. А также проанализировали показатели общей резистентности у кур-несушек. Показатели резистентности организма кур-несушек были лучшими при использовании ВД. Наиболее благоприятным для развития эмбрионов было содержание биологически активных веществ в яйце. Морфологически показатели инкубационного яйца: индекс формы яйца, пористость скорлупы, индекс массы желтка и белка, мраморность скорлупы и насечка, наличие включений, масса яйца, были лучшими при использовании ВД. Показатели по выводимости и сохранности молодняка также были наилучшими (табл.4) .

Таблица 4

Показатели резистентности кур-несушек к жизнеспособность __молодняка, полученного от ннх_

Группа Общий белок, г/л 1 5 о S ч и ^ U Ч Активность люоцима, % лизиса Й 5 ! о-; 5 s - я III я чо ¡2 8 IS i J ii f U в о. 8 S £ § 3 я s a и* S*E a 6 33

1 ОР 38,3^0,3 9,7+0,09 10,2+0,1 8,7+0,08 150000 80,3 80,6+ 0,8

2 ОР+ви-тамины 42,0+_0,4 10,83+ 0,10 13,8+0,2 10,1+0,1 150000 84,9 84,4+ 0,8

3 ОР+ВД 50,0+0,5 13,8+ 0,13 24,8+0,4 22,6+0,2 150000 88,6 89,4+ 0,8

Так как прослеживается взаимосвязь между такими показателями как общий белок, гемоглобин, активность лизоцима крови кур-несушек и выводимостью яиц и сохранностью молодняка, то эти показатели крови кур-несушек рекомендованы для использования как информативный тест для определения жизнеспособности молодняка, полученного от них. Исследования этих показателей не реже одного раза в месяц поможет выявить уровень общей резистентности кур родительского стада, определить выбор и сроки назначения биологически-активных и лекарственных препаратов для повышения активности защитных сил организма кур-несушек, тем самым улучшая результаты промышленного выращивания бройлеров.

3. Выводы

1.Сравнительный фенотипический анализ исходного и мутантного штаммов дрожжей рода БассЬаготисеэ позволяет заключить, что изменение стеринового состава не сказывается на ростовых, физиологических, биохимических

31

характеристиках и жизнеспособности, не приводит к изменению патогенных свойств. Фенотипический анализ мутантов позволяет рекомендовать в качестве продуцентов стеринов - провитаминов Б штаммы ПТ-15, ПТ-42 и ПТ-60 как обладающие необходимыми технологическим свойствами. ■

2. Анализ стеринового состава мутантных штаммов и изучение их антирахитического действия позволяет установить, что штаммы ПТ-15 и ПТ-42 накапливают структурные аналоги витамина активность которых составляет 120 МЕ (штамм ПТ-42) и 140 МЕ (штамм ПТ-15) в расчете на 1 грамм дрожжей по витамину Е^. Штамм ПТ-60 накапливает структурные аналоги витамина активность которого составляет 120 МЕ на 1 грамм дрожжей по витамину О. В связи с меньшей Э-витаминной активностью штамма ПТ-60 и тем, что витамин Ц^в ветеринарной и медицинской практике не используется, рекомендовать для использования в практике штаммыПТ-42 и ПТ-15.

3. Изучение биохимического состава этих штаммов показывает наличие в биомассе белка (не менее 43%), имеющего достаточно сбалансированный аминокислотный состав и высокое содержание незаменимых аминокислот, полный комплекс витаминов группы В, что позволяет использовать биомассу не только как источник получения витамина Е^ но и как комплексный витаминный продукт, обогащенный белком.

4. Использование витаминных дрожжей от 1 до 3% от общего рациона бройлеров в качестве кормовой добавки улучшает переваримость и усвояемость корма, активизирует обменные процессы у бройлеров, что приводит к ускорению роста и развития, повышает жизнеспособность. Применение

32

витаминных дрожжей обеспечивает повышение мясной продуктивности за счет увеличения съедобной части тушек, повышения количества белка в мясе бройлеров и улучшения его аминокислотного состава.

5. Применение витаминных дрожжей в количестве от 1 до 3% от общего рациона бройлеров повышает иммунобиологическую реактивность их организма при воздействии стрессовых факторов, инфекта и лечебно-профилактических обработок. При этом повышается содержание общего белка, гемоглобина, витамина А; бактерицидная и лизоцимная активность; количество специфических антител в сыворотке крови; улучшается лейкограмма; возрастает фагоцитарная активность гранулоцитов.

6. Витаминные дрожжи способствуют нормализации фосфорно-кальциевого обмена, предотвращают гиповитаминозы группы В, улучшают качество протеинового питания бройлеров, снижая тем самым проявление патологии опорного аппарата.

7. Использование витаминных дрожжей в рационе родительского стада в количестве 3-5% нормализует обменные процессы, стимулирует функцию печени, тем самым повышает иммунобиологическую реактивность кур-несушек, качество инкубационного яйца и жизнеспособность молодняка, полученного от них. Разработан способ контроля общей резистентности родительского стада с использованием теста на резистентность, состоящего из показателей общего белка, гемоглобина и активности лизоцима в сыворотке крови. Применяя этот тест резистентности, можно прогнозировать жизнеспособность и продуктивность молодняка, иммунобиологическую реактивность организма

33

кур-несушек и качество инкубационного яйца.

8. Изучение безвредности витаминных дрожжей показало, что их применение в дозе 3% и 6% к общему рациону в течение 2-х месяцев не оказывает токсического действия на организм. Витаминные дрожжи в исследованных дозах не обладают эмбриотоксическим и тератогенным действием и могут использоваться в качестве кормовой добавки.

9. Комплексный метод изучения конечного продукта микробиологического синтеза - витаминных дрожжей, включающий в себя оценку генотипа и фенотипичесих свойств штамма-продуцента, биохимического состава и биологических свойств продукта на его основе, и его безвредности для организма птицы может быть рекомендован для научного обоснования применения продуктов микробного синтеза, предназначенных для промышленного птицеводства.

4. Практические предложения

Научные разработки вошли в следующие утвержденные нормативно-технические документы:

1. Авторское свидетельство № 1352937 от 15 июля 1987г. "Штамм дрожжей БассИагошусез сегеУ181ае, используемый в качестве кормовой витаминной добавки".

2. Авторское свидетельство № 1499915 от 18 апреля 1989г. "Штамм дрожжей БассЬагошусез сегеу1$1ае источник провитамина ЭЗ".

3. Патент № 92012371/13 от 16 декабря 1993г. "Способ получения аналогов витамина ОЗ".

4. ТУ № 2290-004-131899338-93. Дрожжи витаминные (кормовой препарат витамина 03)

34

5. Временное наставление по применению витаминных дрожжей в промышленном птицеводстве при выращивании бройлеров. Утверждено 26.02.1990г.Главным управлением госинспекций СССР.

6. Рекомендации по применению минерально-витаминной добавки для птиц. Утверждена 4 июля 1995 г. Начальником отдела ветеринарии Министерства сельского хозяйства Ленинградской области.

А также учебно-методическую литературу:

1. "Незаразные болезни птиц" Методические указания для самостоятельной работы студентов.Л., 1987г.

2. Методические указания лабораторной диагностики гиповитаминозов и кальциево-фосфорного обмена у птиц.Л., 1987г.

3. "Заразные болезни птиц" Методические указания для слушателей ФПК и самостоятельной работы студентов ветеринарного факультета.Л., 1988г.

5. Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Соколова Л.Н., Михайлова Н.П., Вьюнов К.А. и др. Действие дрожжевой добавки к кормам на цыплят бройлеров /Ветеринария, 1986.-№ 10.-С.36-37.

2. Соколова Л.Н., Михайлова Н.П., Жаковская З.А. и др. Изучение процесса культивирования мутантного штамма дрожжей БассЬягошусез сегеу1з1ае, накапливающего холеста-5,7,24 триен-ЗЬ-ол и холеста 5,7,22,24 тетраен-ЗЬ-ол / Биотехнология, 1986.-№ 6.-С.56-61.

3. Соколова Л.Н., Михайлова Н.П., Жаковская З.А. и др. Использование УФ-облученных дрожжей для профилактики рахита у цыплят / Сельскохозяйственная биология, 1986.35

№ 12.-С.76-79. 4. Соколова Л.Н., Михайлова Н.П.,

Жаковская З.А. и др. Штамм дрожжей БассЬагошусез сегеу1$1ае, используемый в качестве кормовой витаминной добавки / Авторское свидетельство за № 1352937 от 15.06.87г.

5. Соколова Л.Н., Михайлова Н.П., Валиниеце М.Ю. и др. Перспективы использования дрожжей с измененным метаболизмом стеринов для витаминизации рациона птицы // Научные основы витаминного питания с.х.животных:Тез.докл.2-го всесоюзного симп.-Юрмала,1987.

6. Соколова Л.Н., Соколов В.Д, Михайлова Н.П. и др. Источник витамина БЗ / Птицеводство, 1987.-№ 3.-С.29-30.

7. Соколова Л.Н., Соколов В.Д., Голикова Е.Г. Незаразные болезни птиц / Методические указания для самостоятельной работы студентов. - Л., 1987.

8. Соколова Л.Н., Соколов В.Д., Голикова Е.М. Методические указания лабораторной диагностики гиповитаминозов и кальциево-фосфорного обмена у птиц. -Л.,1987.

9.Соколова Л.Н., Огородникова Т.Е., Михайлова Н.П.и др. Получение витаминов Э для птицеводства микробиологическим синтезом // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов: Тез. докл. 3-й Всесоюзн. конф.-М.,1987.-С.261.

10. Соколова Л.Н., Ширяев С.П., Чепуро И.В. и др. Перспективы использования Д-витаминных препаратов на основе дрожжевой биомассы // Там же.-С.262.

11. Соколова Л.Н., Соколов В.Д., Малыхин В.А. Профилактика колибактериоза при интенсивном выращивании бройлеров // Совершенствование

ветеринарного обслуживания животноводства в условиях интенсификации: Тез.Всесоюзн.научн.техн.конф,-

Махачкала,1987.-С.136.

12. Соколова Л.Н., Соколов В.Д., Домнина Г.В. и др. Профилактика колибактериоза бройлеров аэрозолями антибиотиков // Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных и птиц: Сб.науч.тр.ЛВИ,-Л.,1987.-№87.

13. Соколова Л.Н., Соколов В.Д., Никитин Г.И. Заразные болезни птиц / Методические указания для слушателей ФПК и самостоятельной работы студентов ветеринарного факультета. - Л. 1988.

14. Соколова Л.Н., Домнина Г.В., Малыхин В.А. Клиническое исследование крови у бройлеров для оценки профилактического действия аэрозолей антибиотиков / Информационный листок: Ленинградский ЦНТИ.-Л.,1988.-№ 856-88.

15. Соколова Л.Н., Домнина Г.В., Чепуро И.В. Использование дрожжевой добавки для повышения резистентности организма бройлеров / Информационный листок: Ленинградский ЦНТИ.-Л.,1988.-№ 851-88.

16. Соколова Л.Н., Лудинова И.С., Лукьянова A.A. Подбор антимикробных препаратов против респираторных инфекций /Информационный листок: Ленинградский ЦНТИ,-Л.,1988.-№ 862-88.

17. Соколова Л.Н., Лудинова И.С., Малыхин В.А. Повышение эффективности аэрозольной иммунизации птиц против колибактериоза / Информационный листок: Орловский ЦНТИ.-Орел.,1988.-№ 216-88.

18. Соколова Л.Н., Малыхин В.А., Соколов В.Д.

Использование биофарма для профилактики респираторных инфекций у бройлеров / Информационный листок: Орловский ЦНТИ.-Орел.,1988.-№ 187-88.

19. Соколова Л.Н., Андреева H.A., Домнина Г.В. и др. Влияние качества протеинового кормления бройлеров на сохранность и некоторые показатели неспецифической резистентности // Труды Кубанского СХИ.,1988.-вып.290-С.318-324.

20. Соколова Л.Н., Михайлова Н.П., Огородникова Т.Е. и др. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae -источник провитамина ДЗ / Авторское свидетельство № 1499915 от 08.04.89г.

21. Соколова Л.Н., Малыхин В.А. Препарат йода против колибактериоза/ Птицеводство., 1989.-№ 8.

22. Соколова Л.Н., Домнина Г.В., Никитин Г.И. и др. Изучение изменения некоторых биохимических и клинических показателей крови у бройлеров под влиянием лечебно-профилактических обработок // Комплексная система ветеринарных мероприятий в птицеводстве - резерв повышения эффективности производства: Тез.докл.Всесоюзн.науч.произв.конф.ЛВИ.-Л.,1989.

23. Соколова J1.H., Андреева Н.Л., Вьюров К.С. и др. Влияния дрожжевой добавки на некоторые показатели неспецифической резистентности организма бройлеров // Там же.

24. Соколова Л.Н., Чепуро И.В., Андреева Н.Л. и др. Дрожжевая добавка для профилактики нарушения обмена веществ у бройлеров // Новые фармакологические средства в ветеринарии: Тез. 1 межвуз.науч.практ.конф.-Л.,1989.

25. Соколова Л.Н. Исследование состояния естественной резистентности бройлеров при интенсивном

38

выращивании // Физиологические и биохимические основы повышения продуктивности с.х. животных, птиц и пушных зверей: Сб.науч.тр.ЛВИ.-Л.,19В9.-С. 103-106.

26. Соколова Л.Н., Чепуро И.В., Домнина Г.В. Дрожжевые добавки в профилактике аномалий опорного аппарата у бройлеров //Профилактика незаразных болезней и терапия с.х. животных и пушных зверей: Сб.науч.тр. ЛВИ-Л.,1989.-С.151-155.

27. Соколова Л.Н., Андреева Н.Л., Соколов В.Д. и др. Изучение безвредности белково-витаминных дрожжей // Фармакология и токсикология новых лекарственных средств и кормовых добавок в ветеринарии: Сб.науч.тр. ЛВИ.-Л.,190,-С.151-154.

28. Соколова Л.Н., Чепуро И.В., Домнина Г.В. и др. Использование беоково-витаминной дрожжевой добавки для стимуляции роста и естественной резистентности бройлеров //Тамже. - С.163-166.

29. Соколова Л.Н., Чепуро И.В., Домнина Г.В. Способ профилактики аномалии опорного аппарата у бройлеров / Информационный листок: Ленинградский ЦНТИ.-Л., 1990.

30. Соколова Л.Н., Домнина Г.В., Малыхин В.А. Использование аэрозолей в системе профилактических мероприятий колибактериоза птиц / Информационный листок: Ленинградский ЦНТИ.-Л., 1990.

31. Соколова Л.Н., Домнина Г.В., Чепуро И.В. и др. Использование добавки биомассы хлебопекарных дрожжей для повышения качества мяса цыплят-бройлеров / Информационный листок: Ленинградский ЦНТИ.-Л., 1990.

32. Соколова Л.Н., Чепуро ИВ. Влияние качества кормления бройлеров на рост, развитие и продуктивность // Птица: Тез.2-й межвуз.конф.-Симферополь., 1990.

39

33. Соколова Л.Н., Михайлова Н.П., Рисепницкий С.И. Аминокислотный состав и биологическая ценность биомассы дрожжей, обогащенной аналогами витамина Д /Сельскохозяйственная биология., 1990.-№ 4.-С. 146-151.

34. Соколова 4 Л.Н. Влияние естественной резистентности кур-несушек родительского стада на качество инкубационнго яйца и жизнеспособность молодняка // Профилактика незаразных болезней и терапия с.х. животных и пущных зверей. Сб.тр.ЛВИ.-Л., 1990.-№108.-С. 152-156.

35. Соколова Л.Н. Витаминные дрожжи - новый кормовой препарат витамина Д и перспективы его использования в птицеводстве // Научные и практические аспекты увеличения мяса в Нечерноземной зоне России: Тез.докл.участн.науч.конф.-С.-Петербург - Пушкин.,1993.-С. 106-108.

36. Соколова Л.Н., Хохрин С.Н., Смирнова A.B. Влияние витаминных дрожжей на использование питательных веществ корма у цыплят-бройлеров // Новые фармакологические средства в ветеринарии: Тез.докл.к 5-й межгос.межвуз.науч.практ.конф.-С-Петербург., 1993 .-С.93.

37. Соколова Л.Н., Михайлова Н.П., Синицкая H.A. Использование витаминов группы В в биомассе витаминных дрожжей, обогащенных аналогами витамина ДЗ // Там же-С.125.

38. Соколова Л.Н., Узюмова О.В. Изучение тератогенного и эмбриотоксического действия витаминных дрожжей //Там же.-С.126.

39. Соколова Л.Н., Михайлова Н.П., Огородникова Т.Е. и др. Способ получения аналогов витамина ДЗ / Патент от 16.12.1993 №92012371/13.

40. Соколова Л.Н. Использование витаминных дрожжей

40

для повышения естественной резистентности кур родительского стадаи жизнеспособности молодняка // Актуальные проблемы ветеринарии:

Мат.науч.конф.проф.преп.сост., науч.сотр. и асп..-С-Петербург., 1994.-С.43-44.

41. Соколова Л.Н., Зачиняев Я.В., Узюмова О.В. Продукты биотехнологии в промыщлениом птицеводстве и некоторые его экологические проблемы / Актуальные вопросы химической науки и технологии экологии в химической промышленности.НИИТЭХИМ.-М., 1994.-вып.1.

42. Соколова Л.Н. Использование витаминных дрожжей для корреляции иммунобиологической реактивности родительского стада и жизнеспособности молодняка // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: Сб.тр. СПбГАВМ. -С-Петербург., 1996.-№ 125.-С.66-69.

43. Соколова Л.Н. Влияние витаминных дрожжей на эффективность лечебно-профилактических мероприятий при колибактериозе птиц // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: Там же.-С.69-71.

44. Соколова Л.Н. Изучение фенотипических свойств мутантных штаммов ЗассЬагошусеБ сегеу1$1ае // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: Сб.тр. СПбГАВМ.-С-Пегербург., 1998.-№ 128.-С.116-118.