Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эффективность применения лактобрила и биобактона при сальмонеллезах молодняка животных

\

На правах рукописи

с, г*

/

ПОТАПОВА ОЛЬГА АЛЕКСЕЕВНА

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ЛАКТОБРИЛА И БИОБАКТОНА ПРИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗАХ МОЛОДНЯКА ЖИВОТНЫХ

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Ставрополь -1998

Работа выполнена в Ставропольской государственной сельскохозяйственной академии

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук,

профессор ТУТОВ Иван Кириллович

Официальные оппоненты - доктор биологических наук,

МАЙСКИЙ Виктор Григорьевич

кандидат ветеринарных наук, ЗАЕРКО Виктор Иванович

Ведущая организация - Управление ветеринарии правительства

Ставропольского края

Защита диссертации состоится " 10 " ДГЦЩЯ 1998 года в ^ часов в ауд. N 43 на заседании диссертационного совета Д.120.53.02 при Ставропольской государственной сельскохозяйственной академии по адресу: 355017, РФ, г.Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольской государственной сельскохозяйственной академии.

Автореферат разослан " я.. Шщ. .1998 года

А.П.Боголюбова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. В последние годы разукрупнение животноводческих хозяйств и одновременное формирование мелких крестьянских и фермерских структур привело к. увеличению перемещений животных. В этих условиях становится реальным опасность возникновения новых инфекционных заболеваний и повышения неблагополучия по имеющимся заразным болезням у животных. К числу последних относятся сальмонеллезы.

Сальмонеллезы сельскохозяйственных животных имеют широкое распространение в мире. В России на сальмонеллезы и эшерихиозы приходится 30,6% эпизоотических очагов (Ю.Е.Шатохин, 1996). Вопросам эпизоотологии, эпидемиологии сальмонеллезов, разработки методов диагностики, специфической профилактики и терапии, технологии приготовления и применения различных специфических антибиотических, химиотерапевтических препаратов посвящены исследования многих отечественных и зарубежных ученых (Б.М.Матвиенко, 1973;

A.М.Ахмедов, 1983; Б.Ф.Бессарабов,1983; П.И.Притулин, Н.В.Привалова, 1987; А.Ф.Карышева, С.В.Карышев, 1989; Б.Ю.Шустер, Ю.А.Малахов, В.В.Кириллова, 1994; Г.И.Макарова, 1996; Э.Г:Потиевский,

B.М.Бондаренко, 1997;' И.К.Тутов, В.И.Ситьков, 1997; P.Stadler,-J.W.Wesbit, 1990 и другие).

Несмотря на это, сальмонеллезы не имеют тенденции к снижению. Это связано с тем, что ряд вопросов остались недостаточно изученными. В частности, не во всех регионах страны изучены вопросы краевой и зональной эпизоотологии. Нет достаточно обоснованных технологий получения новых и совершенствования существующих биологических и химиотерапевтических препаратов, не разработаны высокоэффективные питательные' среды для выявления минимальных количеств микроорганизмов в объектах внешней среды и микробиологи- ' ческой оценки применения лекарственных средств при кишечных инфекциях. Не достаточно изучены причины ятрогенной патологии при этих инфекциях. Практически отсутствуют разработки комплексного применения бактерицидных препаратов и пробиотиков для инактивации в организме патогенных, условно-патогенных микроорганизмов семейства Enterobacter!асеае и последующего восстановления нормального кишечного микробюценоза.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось определение эффективности комплексного применения лактобрила и

биобактона при сальмонеллезах животных.

Для реализации указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить распространение и этиологическую структуру сальмо-неллезов сельскохозяйственных животных и птиц в Ставропольском крае за период с 1991 по 1997 годы;

- обосновать в опытах in vitro и in vivo бактериостатическое и бактерицидное действия лактобрила и конкурентную способность биобактона по отношению к сальмонеллам, условно-патогенной и нормальной микрофлоре кишечника, разработать технологию комплексного их применения при лечении больных сальмонеллезом телят и поросят;

- получить более эффективную питательную среду для выявления минимальных количеств сальмонелл и условно-патогенных микроорганизмов кишечника и качественной оценки бактерицидного и бактери-остатического действий изучаемых препаратов;

- совершенствовать технологию получения более активного про-биотика биобактона;

- изучить влияние лактобрила и биобактона на отдельные кли-нико-гематологические показатели и факторы резистентности организма здоровых и больных сальмонеллезом телят;

- оценить лечебную и экономическую эффективность применения лактобрила и биобактона при лечении животных, больных сальмонеллезом.

1.3. Научная новизна работы. Впервые в Ставропольском крае изучены эпизоотическая ситуация и этиологическая структура саль-монеллезов, составлена картосхема их распространения.

Экспериментально обоснована возможность комплексного применения "Лактобрила", включающего противомикробные компоненты (фу-рацилин, бриллиантовый зеленый, калий йодид), и пробиотика "Биобактона" , содержащего чистую культуру молочнокислых бактерий для лечения молодняка животных, суть которого заключается в санации желудочно-кишечного тракта от патогенной, условно-патогенной и, частично, типичной микрофлоры с помощью лактобрила и последующей нормализации кишечного микробиоценоза - с помощью биобактона. Установлено, что указанные препараты являются безвредными для организма здоровых телят. Они улучшают и стабилизируют у больных сальмонеллезом телят в пределах физиологических границ такие показатели, как температуру, пульс, дыхание, уровень общего белка,

количество гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов, повышают фагоцитарную активность лейкоцитов, бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови.

Для оценки лечебной эффективности применения лактобрила и биобактона при лечении животных, больных сальмонеллезом, впервые получена высокоэффективная питательная среда путем включения в рецептуру обычных сред 3 7. стимулятора роста микроорганизмов (СРМ) ТС-1.

В опытах in vitro выявлено, что лактобрил обладает бактери-остатическим и бактерицидным действием по отношению к Salmonella dublin, S.typhimurium, S.cholerae suis, Staphylococcus aureus, a также представителей нормального кишечного микробиоценоза (Proteus vulgaris, Bacillus subtilis, Bacillus anthracoides, Escherichia coli). В опытах in vivo установлено, что биобактон, обладая способностью к конкурентному вытеснению из кишечника сальмонелл и условно-патогенных микробов, постепенно восстанавливает нормомик-робиоценоз кишечника.

1.4. Практическая значимость. Составлена картосхема распространения сальмонеллезов животных и птиц с учетом этиологической структуры,которая используется Управлением ветеринарии правительства Ставропольского края (УВПСК) в работе по прогнозированию заболевания, составлению плана мероприятий по профилактике и лечению больных животных.

Для микробиологической оценки результатов применения лактобрила и биобактона предложена новая высокоэффективная питательная среда, позволяющая выявить микроорганизмы из объектов внешней среды в минимальных концентрациях.

Разработано "Наставление по комплексному применению лактобрила и биобактона при лечении молодняка сельскохозяйственных животных, больных сальмонеллезом (утверждено НТС Минсельхозпрода ПСК 6 января 1998 г.)

Основные положения совершенствования технологии приготовления биобактона, а также комплексного применения данного препарата и лактобрила используются в учебном процессе на кафедре эпизоотологии и микробиологии Ставропольской госсельхозакадемии. Материалы научной работы вошли в учебное пособие "Основы биотехнологии ветеринарных препаратов", рекомендованное Департаментом кадровой политики и образования Министерства сельского хозяйства и продо-

вольствия Российской Федерации (02.06.1997).

1.5. Основные положения, выносимые на защиту

1. Лактобрил обладает бактерицидной и бактериостатической активностью по отношению к сальмонеллам, условно-патогенным микробам кишечника, а биобактон - конкурентной способностью вытеснения их из- кишечника. Комплексное применение лактобрила и биобак-' тона показало, что они безвредны для организма здоровых телят, а у больных нормализуют клинико-биохимический статус, гематологические показатели и основные факторы резистентности.

2. Предложенные тактика и технология комплексного применения лактобрила и биобактона обеспечивают высокий лечебный уровень и экономическую эффективность при лечении животных, больных сальмо-неллезом.

3. Введение в состав производственной питательной среды СРМ ТС-1 при получении биобактона обеспечивает не только высокое накопление общей биомассы и количества живых Lactobacterium.acidop-hilum, но и повышает их резистентность при лиофильной' сушке, а также сокращает время генерации микроорганизмов до их максимальной (М) концентрации, снижает затраты энергоресурсов и себестоимость препарата.

1.6. Апробация. Материалы диссертации доложены на Международных (Воронеж, 1995; Москва, 1997), Всероссийской биотехнологической (Ставрополь,' 1996), зональных (г.Ставрополь, СГСХА, 1995-1997; г.Краснодар, 1996) научных конференциях.

1.7. Пубякацнм. По теме диссертации опубликовано 11 научных работ.

1.8. Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы, включающего 139 работ отечественных и 42 работы зарубежных авторов, и приложений. Работа изложена на страницахмашинописи, иллюстрирована 23 таблицами и 8 рисунками.

2. соесгвЕШЕ игад-яшшя 2.1. Материалы м методы исследований. При исследованиях использованы зпизоотологические, клинические, бактериологические, гематологические, биохимические, серологические и иммунобиологические методы. Материалами и объектами исследовании служили: культуры микроорганизмов (Salmonella dublin, S.typhimurium, S.cho-

lerae suis, Escherichia coli, Micrococcus lyzodeicticus, Bacillus anthracoides, Bac.subtilis, Proteus vulgaris, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa); 134 пробы фекалий от живых и патологический материал от 78 павших животных; , 250 телят, 302 поросят, больных сальмонеллезом, препараты лактобрил и биобактон; питательные среды - мясо-пептонный агар (МПА), мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), среды Сабуро, Чапека, среды со СРМ ТС-1, дифференциально-диагностические среды, молочная сыворотка; оборудование и приборы: микроскопы, термостаты, суперцентрифуги, сублимационные установки LZ - 45.27.У, и реакторы для промышленного культивирования Lactobacterium acidophi-lum.

Объем и основные виды исследований представлены на схеме и в таблице 1.

Объем и основные виды исследований

Таблица 1

NN пп

Наименование

Количество

1. Подвергнуто клиническому обследованию и лечению больных сальмонеллезом животных, всего в том числе: телят поросят

2. Отработана технология комплексного применения лактобрила и биобактона, хозяйств

3: Проведено исследований по приготовлению высокоэффективной питательной среды

4. Проведено бактериологических исследований, всего

в том числе: патологического материала проб фекалий • выделено микроорганизмов, всего из них сальмонелл др.исследования

5. Проведено иммунобиологических исследований, всего

в том числе: у здоровых телят

у телят, больных сальмонеллезом

6. Проведены лабораторные и промышленные культивирования Ьаси>Ьа^ег1ит а^ор1й1ит

552 250 302

98

1240 70 134 56 50 980

1080 720360

Схема проведения исследований

')пюоотнчсское состояние по сальмонелл?-им-СС.'|ЬСКОХОЗЯЙСТВСНИЫХ животных и _птиц в Ставропольском крае_

Картосхема распространения сальмонеллеэов животных н гтш

'Этиологическая структура сальмонеллсзов животных и птиц

Еактернолошческие исследования

1 ![шж1гшенныс Посмертные

Фекалии Патологический материал

Тк

Испытание стимулятора роста мнкрооргаинз -мов ТС -1 для:

А получения высокоэффективной питательной

выявлении минимальных количеств микрооргв -нюмов из объектов внешней среды_

определении ростостимулируюшей активности сальмонелл

изучении стабильности основных свойств микро___пргянишпп_;__

вылелении сальмонелл из патологического ма -териала и чистых культур

1

Б повышения активности пробиотика бнобакто»

X

лабораторное культивирование 1Ляп. acidophilum

1

промышленное культивирование ЬЬт. аЫ()орЫ1ит

\ I

продолжение схемь

Экспериментальное обоснование эффективности применения лекарственных препаратов при сальмоиеллёэах животных

Представителей рода Salmonella (in vitro)

Представителей гишечвого иихро-биоценоза(т vitro)

Конкурентная способ ilocn. вытеснения

Кишечную кнхро-флору здорозых и бОЛЫШХ ' ttSSD

(in vivo)

Отработка технологии применения ластобрнла и биобактоиа в эксперименте и в производственны* ппытат

Тактика применения препаратов

2

Санация кишечника ла ктобрилом от патогенных и условно-ттоген пых микробов

Нормализация микрофлоры кишечника с помощью биобак-

Технология применения препаратов

Лагтобршш

Биобактона

✓

утром вечером утром вечером

0,4 г 0,4 г 20 млрд.м.т 20 млрд,м.т

1 1 ■ 1 I

I

СО I

первый день второй день

третий день

первый день второй день третий день

Изучение влияния препаратов на отдельные показатели естественной резистентности организма телят

Производственное 1хпытанис прешратгл " чюяйствах неблагополучных по сальыонгллез) —члных

При изучении эпизоотической ситуации и этиологической структуры сальмонеллезов сельскохозяйственных животных и птиц за период 1991-1997 годы использованы материалы статистических отчетнос-тей краевой и . районных ветеринарных лабораторий, ветеринарных станций по борьбе с болезнями сельскохозяйственных животных, УВПСК, а также данных собственных наблюдений и бактериологических исследований.

Степень распространения заболеваний животных сальмонеллезами определяли методом картографирования по Я.В.Нуйкину (1967).

Бактериологические исследования патологического материала и фекалий проводили по триаде Генле-Коха.

Видовую принадлежность выделенных микроорганизмов определяли в соответствии с рекомендациями, изложенными в "Определителе микробов по Берги" (1984).

Идентификацию выделенных культур проводили по биохимическим показателям и с применением типоспецифических сывороток по схеме Кауфмана-Уйта, изложенной в методических указаниях под редакцией Г.А.Зайцева (1990).

Бактериостатическую и бактерицидную активность Лактобрила определяли по В.С.Бузламу, А.Р.Шахову (1996) путем серийных двукратных разведений препарата в стерильном физиологическом растворе от 80 до 0,75 мг/мл, 10-минутной выдержки в таких разведениях по 0,1 мл стандартных одномиллиардных взвесей микроорганизмов с последующим дозированным высевом из каждого разведения препарата в пробирки со стерильными МПА, МПБ и выявлением минимальных бакте-риостатических и бактерицидных концентраций лактобрила (МБсК и МБцК), обеспечивающих задержку и подавление роста микроорганизмов.

Конкурентную способность биобактона к вытеснению сальмонелл и другой микрофлоры из кишечника определяли в опытах in vivo путем подсчета количества микробов в высевах из проб фекалий животных. Отсутствие роста микроорганизмов свидетельствовало об указанной способности препарата.

Приготовление высокоэффективных питательных сред "осуществлялось по нашей методике путем- определения оптимальных доз СРМ ТС-1, добавляемого к МПБ и МПА, доведением рН среды до 7,2-7,4 и её стерилизации при 120 °С в течение 30-40 минут.

Оценку эффективности питательных сред производили с исполь-

званием общепринятых методов микробиологических исследований,' 'Методических рекомендаций к контролю питательных сред по биологическим показателям", утвержденных Минздравом СССР 19.02.1980г., \ "Методических рекомендаций по физико-химическому и биологическому контролю белковых гдцролизатов для' бактериологических питательных сред", утвержденных Главным управлением биологической лромышленности МСХ СССР'ЗО.12.1982 г". .

Вопросы совершенствования технологии получения более активного пробиотика биобактона осуществляли при лабораторном и промышленном культивировании Lbm.acidophilum в средах с добавлением :РМ ТС-1 в соответствии с ТУ 9229-032-07532800-96 от 01.07.1996г.

• При определении влияния лактобрила и биобактона на организм здоровых, и больных телят учитывали наиболее важные для этих целей клинико-гематологические ,(температура, пульс, дыхание, количество гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, лейкограмма), биохимические показатели (общий белок) согласно общепринятых методик и некоторые показатели естественной резистентности: фагоцитарную активность лейкоцитов, лизоцимную и бактерицидную активность сыворотки крови по П.Н.-Никонорову (1974); С.И. Плященко (1976)-.

Технология применения лактобрила и биобактона нами отрабатывалась на. экспериментальных группах здоровых и больных, телят и в производственных опытах в хозяйствах, неблагополучных по сальмо-неллезам телят и поросят.

Экономическую эффективность применения лактобрила и биобактона при лечении животных, больных сальмонеллезом, проводили в соответствии с "Методическими рекомендациями по определению экономической эффективности ветеринарных мероприятий" (М.К.Шайхама-нов, В.Т.Гришин и А.Н.Ильченко, 1987).

Обработка результатов эксперимента осуществлялась биометри* чески по. методикам H.A. Плохинского (1996), Е.К. Меркурьевой' (1970) с использованием микрокалькулятора МК-52 и персонального компьютера IBM PC. ,

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Распространение и этиологическая структура сальыонел-лез ов животных и птиц в Ставропольском крае. В Ставропольском крае за период с 1991-1997 годы сальмонеллезы животных регистрировались повсеместно - во всех четырех природно-климатических зонах: крайне-засушливой, засушливой, зонах неустойчивого и доста-

- is -

точно увлажнения.' Обобщенные статистические данные о заболеваемости сальмонеллезом, собственные исследования, проводившиеся в условиях неблагополучных хозяйств, свидетельствуют о широкой циркуляции разнообразных серовариантов сальмонелл среди животных самых различных видов.

• За последние семь лет этиологическую структуру сальмонеллё-зов у разных видов сельскохозяйственных животных и птиц составили десять различных серовариантов: Salmonella dublin, S.typhimurium, S.enteritidis, S.cholerae suis. S.typhi suis, S.abortus ovis, S.abortus bovis, S.gallinarum-pullorum, S.abortus equi, S.paratyphi B. .

При этом выявлено, что у различных видов животных этиологическая структура сальмонеллезов неодинакова. Например, у крупного рогатого скота ведущее место занимает Salmonella dublin (83 X) и S.typhimurium (10,3 X), a S. abortus bovis и S.enteritidis регистрируются лишь в 3,6 и 3.2 процентах соответственно. У мелкого рогатого скота (овец) почти все выделенные штаммы сальмонелл (81,9 X) относятся к S. abortus ovis, второе место занимает S. dublin (10,7 X), реже - S.enteritidis (3,0 X), S.typhimurium (2,6 X), S.abortus bovis (1,8 X). -У.свиней наибольшее распространение получила S.cholerae suis (77,5 X), второе место занимает S.typhi suis (14,7 X), реже выделялась S.typhimurium (4,6 X), S.dublin (2,2 X) и S.enteritidis (1,0 X).

У птщ ведущее значение имеет S.gallinarum-pullorum - у отряда куриных и S.typhimurium - у водоплавающих.

Этиологическую структуру сальмонеллезов у пустых зверей составляют те же сальмонеллы, что и у крупного рогатого скота и свиней, а именно S.dublin (43,0 X), S.typhimurium (33,2 X), S, ente-ritidls (22,1 X). Отсюда следует полагать, что источником сальмонелл для пушных зверей являлось мясо от вынужденно убитых животных, инфицированных возбудителями сальмонеллезов.

-Таким образом, проблема, обусловленная сальмонеллезами, актуальна и на Ставрополье. Практически, за указанный период не встречалось ни одного животноводческого хозяйства, где не было бы сальмонеллезов

2.2.2. Соавряеистваваиш технологии приготовления пробиотика биобмясоа. При лечении животных, больных желудочно-кишечными заболеваниями, зачастую применяют антибиотики и химиотерапеввичес-

кие препараты, которые приводят к ятрогенной патологии, заключающейся в возникновении антибиотико-резистентных и антибиотике-зависимых штаммов микроорганизмов, а в худшем варианте - к дисбак-териозам животных.

В специальной литературе вопросам восстановления зволюционно сложившегося биоценоза между макро- и микроорганизмами после ан-тибиотико- и химиотерапии практически не уделяется внимания. В связи с этим логически напрашивается необходимость нормализации нарушенного равновесия в указанном симбиозе. Это возможно при применении "заместительной терапии", получившей широкое развитие в нашей стране и за рубежом. Главной её научной предпосылкой является применение пробиотиков, состоящих из живых культур молочнокислых и бифидо-бактерий, свойственных для молодняка животных.

В качестве пробиотика, восстанавливающего нарушенный симбиоз нормальных, кишечных микробов молодняка животных, после применения им лактобрила, мы использовали биобактон, содержащий чистую культуру Пэт. ас1с!орМ1т1. Данный препарат с высоким биологическим эффектом изучен и проверен в педиатрии. Биобактон обладает высокими антибиотическими, кислотообразующими свойствами и конкурентной способностью вытеснения патогенных и условно-патогенных микроорганизмов из кишечника.

Считаем, что особо важным при сочетанном применении лактобрила и биобактона является активность последнего. В целях повышения активности данного препарата были проведены исследования по совершенствованию технологии приготовления биобактона. В основу этого было положено включение в состав производственной питательной среды для культивирования ЬЬт.ас1с1орМ1ит 3 % СРМ ТС-1, представляющего комплекс продуктов метаболизма одной из природной ассоциации микроорганизмов.

В предварительных лабораторных опытах было установлено, что в питательной среде со СРМ ТС-1 М-концентрация микробных клеток Шп.ас1(1орЬ11ил1 наступала через 14 часов, а в контрольной - через 16-18 часов, что сокращало сроки культивирования указанных, микроорганизмов на '2-4 часа и снижало затраты энергоресурсов.

Всего было проведено три серии производственных опытов. При этом установлено, что в среднем выход биомассы живых микробных клеток иот.асК^орЬПш, выращенных на среде со СИЛ ТС-1, был на 50,8 7. выше, чем в контрольной среде. Важным моментом является

то, что после сублимационной сушки выход живых микробных клеток в сухой биомассе, полученной из культур, выращенных в опытной среде, был на 36,2 % выше, чем в контроле. Это указывает на повышение резистентности микроорганизмов,- ■ выращенных в среде со СРМ ТС-1, к процессам сублимационной сушки (таблица 2).

Таблица 2

Результаты испытания активности СИИ ТС-1 на рост Шп.ас1с1орЬ:11шп при промышленном изготовлении биобактона

[Количество живых микробных клеток | | Выход живых мик-

Средние 1-:- 1 | робов после суб-

данные | в нативной массе|в сухой массе | лимации, %

| млрд/мл . | млрд/мл | 1

Опыт 8.04 7,47 92,4

Контроль 5,33 , 4,07 56,2

Разница к

контролю, % 50,8 • 83,5 36,2

2.2.3. Бактерицидное и бактериологическое действие лактобри-ла иа некоторых представителей кишечного микробиоценоза животных.

С учетом имеющихся сообщений о необходимости полной замены антибиотиков или отказе от них (хотя бы временном или частичном), мы в качестве препарата, обладающего санирующим действием по отношению к нежелательной микрофлоре кишечника, использовали лактобрил. Данные препарат апробирован в ветеринарной и медицинской практике при акушерско-гинекологических - (С.Н.'Слипченко, Л.Д.Тимченко, \1994), хирургических (А.З.Вафин, 1992, А.П.Пошеченков, Э.Х.Байчо-ров, А:З.Вафин и др., 1993), и некоторых заболеваниях с кишечной патолбгией у новорожденных телят (М.И.Немченко,' А.В:Борщевский, Ю.А.Алехин'и др., 1992). Нами установлено, что встречающиеся в желудочно- кишечном тракте патогенные, условно-патогенные микроорганизмы и представители облигатной микрофлоры в опытах .in vitro по-разному оказались чувствительными к лактобрилу (таблица 3).

Данные таблицы 3 свидетельствуют о том, что величины МБсК и МБцК данного препарата у большинства исследуемых культур микроорганизмов совпадали и составляли для S. dublin, S. typhimuriian, S.cholerae suis и Вас. subtilis - по 2,5, Вас. anthracoides -

Таблица 3

Спектр противомикробного действия лактобрила

Минимальные дозы бактериостатической *•

NN | Культура | и бактерицидной активности лактобрила

пп | микробов | 1 1 для микробов

1 1 МБсК, мг/мл |. МБцК, мг/мл

1. Salmonella dublin,

S. typhimurium

и S.cholerae suis ■ 2,5 2,5

2. Bacillus subtil is 2,5 2,5

3. Bacillus anthracoides 3,125 3,125

4. Staphylococcus aureus 0,781 0,781

5. Proteus vulgaris 0,312 0,312

6. Escherichia coli 50,0 -

7. Pseudomonas aeruginosa - -

3,125, Staphylococcus aureus - 0,781, Proteus vulgaris - 0,312. По отношению к Escherichia coli данный препарат обладал только бактериостатическими (Бс) свойствами (МБсК равна 50,0 мг/мл). Лактобрил не обладал ни Бс, ни бактерицидным (Бц) действием по отношению синегнойной палочки - Pseudomonas aeruginosa.

2.2.4. Влияние лактобрила и биобактона на кишечную микрофлору здоровых и больных сальмонеллезом животных при комплексном применении препаратов. Опытами in vivo по определению влияния лактобрила и биобактона на кишечную микрофлору здоровых и больных сальмонеллезом животных доказано, что под действием лактобрила происходит значительное снижение числа микробных клеток представителей нормального кишечного микробиоценоза у здоровых телят, а у больных, кроме того, и сальмонелл. Так, процент типичных (палочковидных и кокковых) микроорганизмов под воздействием -указанного препарата; снижался до 43,2, а сальмонелл - до 31,8. Под воздействием биобактона,- наоборот, происходило относительное увеличение представителей типичной микрофлоры у здоровых, .а у больных животных наблюдалось полное вытеснение сальмонелл из- кишечника (таблица 4).

Таблица 4

Количество микробов в фекалиях телят на фоне применения лактобрила и биобактона, млрд/г

Группа животных

До применения препаратов После курса применения лактобрила После курса приме нения биобактона

типичная микрофлора сальмонеллы типичная микрофлора сальмонеллы типичная микрофлора сальмо неллы

Здоровые 20600 8900 9400

(п = 5) - - - - -

100,0 43,2 45,6

Больные 12626 13200. 6375 4200 4300 не выяв-

(п = 5) --------- лялись

100,0 100,0 50,5 31,8 34,0

Примечание: числитель * - абсолютные числа; знаменатель - проценты

Таким образом, данные экспериментальных исследований, проведенных in vitro и in vivo,подтверждают,что лактобрил обладает бактериостатическими и бактерицидными свойствами, а биобактон -способностью конкурентно вытеснять условно-патогенную и патогенную микрофлору.

2.2.5. Приготовление высокоэффективной питательной среды и её испытание при выделении сальмонелл и кишечной микрофлоры у телят на фоне применения лактобрила и биобактона. Для оценки Бц и Бс действия лактобрила и конкурентной способности биобактона к вытеснению из кишечника патогенных, условно-патогенных микробов нами получена высокоэффективная питательная среда, обеспечивающая выявление указанных микроорганизмов при минимальном содержании их в объектах исследований. Она готовилась на основе общепринятых питательных сред (МПБ и МПА) с добавлением 3 % СРМ ТС-1. Её эффективность испытана в сравнении с контрольными средами, не содержащими СРМ, по отношению к типичной кишечной микрофлоре и сальмонеллам на фоне применения лактобрила и биобактона здоровым и больным телятам (таблица 5).

Таблица 5

Результаты сравнительного испытания различных сред для выявления типичной микрофлоры и сальмонелл в фекалиях телят

Количество микробных клеток в фекалиях,млрд/г

МПА МПА + 3 % СРМ ТС-1

всего типичных сальмонелл всего типичных сальмонелл

До применения препаратов 25825 12625 13200 30475 15425 15050

100,0 100,0 100,0 118,0 122,0 114,0

После курса лечения лак-тобрилом 10575 6375 4200 14150 6750 7400

100,0 100,0 100,0 133,8 106,0 176,2

После применения биобактона, через:

двое суток 4150 4025 125 5500 5125 375

100,0 100,0 100,0 132,5 127,3 300,0

трое суток 4575 4575 не выявлялись 5975 . 5900 75

100,0 100,0 130,6 129,0 -

четверо суток 4300 4300 не выявлялись 5750 5750 не выявлялись

100,0 100,0 133,7 133,7

Примечание: числитель - абсолютные числа; знаменатель - проценты

Данные таблицы ^свидетельствуют, что способность МПА со СРМ ТС-1 к выявлению общего количества микробов кишечного биоценоза при сальмонеллезе телят по сравнению с обычным МПА была выше на 18.0 - 34,0 %, а по отношению к сальмонеллам - на 14-200 Z, и последние обнаруживались даже в тех случаях, когда они не выявлялись при бактериологическом исследовании фекальных масс с применением обычной питательной среды - МПА. Кроме того, в опытах In vitro при высеваемости S.dublin и S.typhimurium из культуры и патологического материала отмечена более высокая эффективность агаровой среды со СРМ ТС-1.

Таким образом, получены результаты, подтверждающие более высокую высеваемость микроорганизмов из фекальных масс, патологического материала и культур сальмонелл на среде со СРМ ТС-1. Это позволяет считать данную среду накопительной.

2.2.6. Влияние , лактобрила и биобактона на отдельные клини-ко-геыатологические показатели и факторы естественной резистентности организма телят. Установлено, что лактобрил и биобактон не оказывают негативного влияния на организм здоровых телят. Некоторые выявленные нами показатели свидетельствуют о становлении естественной резистентности организма животных под действием данных препаратов. Например, у здоровых телят повышается количество общего белка на 7,4-12,6 г/л, гемоглобина - на 11-13 г/л. Отмечается тенденция к повышению активности клеточных и гуморальных факторов защиты организма: фагоцитарной активности лейкоцитов 'на 3-7, бактерицидной и лизоцимной активности сывороток крови - соответственно на 7-14 и 7-11 X. Применение препаратов больным телятам оказывало позитивное влияние по отношению многих гематологических и биохимических показателей уже с первых дней.Так, содержание общего белка увеличивалось к концу курса применения лактобрила и биобактона с 40,38+5,03 до 63,45+4,06 г/л (Р<0,05). Количество гемоглобина и эритроцитов в крови также увеличивалось, соответственно,от 47,50+4,35 г/л и 4,03+0,71х10^2/л до 87,34+3,08 г/л и 5,87+0,36х1012/л-, (Р<0,05).Уже через сутки после применения лактобрила лейкоцитоз постепенно затухал и после всего курса лечения число лейкоцитов снизилось с 19,56+0,79 до 12,34+Ь,82х109/л, а после применения биобактона показатели лейкоцитов стабилизировались и находились в пределах 9,58+3,06'- 11,78+1,68х109/л (Р < 0,05). У больных телят отмечалось: анэозинофилия, нейтрофилия с резким, регенеративным сдвигом ядра влево и появлением юных нейт-рофилов и миелоцитов, повышение палочкоядерных нейтрофилов, уменьшение сегментоядерных.лимфоцитопения. При применении лактобрила на вторые сутки в крови появились эозинофилы. После полного курса лечения данным препаратом миелоциты и юные нейтрофилы в крови не выявлялись, процент палочкоядерных нейтрофилов снизился с 27,70+0,08 до 8,50+0,21, а сегментоядерных - увеличился с 17,80+1,12 до 27,60+0,13 (Р < 0,05). После полного курса лечения биобактоном соотношение этих форменных элементов крови было в пределах 5,0+0,03 и 31,60+0,15 X. До уровня физиологической нормы

возрос процент лимфоцитов с 38,5+0,09.(до лечения) до 52,60+0,21 (после лечения). Данные показатели дейтаграммы свидетельствуют о благоприятном исходе болезни. У больных сальмонеллезом телят также наблюдалось резкое угнетение клеточных и гуморальных защитных приспособлений. После курса лечения животных лактобрилом и био-бактоном уровень фагоцитарной активности лейкоцитов повысился с 17,21+1.05 до 35,62+0,73 %, а бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови увеличились, соответственно, с 20,31+1,17 ДО 38,03+1,21 % И с 13,30+0,73 ДО 20,80+1,46 % (Р < 0,05).

2.2.7. Технология и результаты производственного применения лактобрила и биобактона в хозяйствах, неблагополучных по сальмо-неллёзаы животных. Высокие бактериостатические и бактерицидные свойства, безвредность лактобрила для организма животных позволили нам использовать его как препарат, санирующий кишечник от нежелательной.микрофлоры. В качестве препарата, восстанавливающего нарушенный симбиоз нормальных кишечных микробов молодняка животных после применения им лактобрила, мы использовали биобактон, содержащий чистую культуру Lbm. acidophil urn.

На основании исследований, проведенных в производственных условиях на телятах и поросятах, больных сальмонеллезом, нами предложена следующая технология комплексного применения указанных препаратов. В течение первых трех-четырех дней телятам и поросятам per os вводится свежеприготовленный раствор лактобрила по 10-20 мг на кг живой массы. После курса лечения животных лактоб-рилом. в последующие трое-четверо суток им выпаивали биобактон в виде водной суспензии молочнокислых микробов в дозах 0,5-1 млрд. микробных клеток на кг живой массы. Оба препарата применяли два раза в день за 20-30 минут перед утренним и вечерним кормлением. В некоторых случаях биобактон использовали в виде кисломолочного продукта, приготовленного путем заквашивания пастеризованного молока в течение 8-12 часов при 40-45 °С. Готовой простоквашей также выпаивали два раза в день по 100-200 мл на кг живой массы.

На примере хозяйств, неблагополучных по сальмонеллезам животных, в Благодарненском, Грачевском и Шпаковском районах установлено, что'предложенная технология комплексного применения лактобрила и биобактона обеспечивает достаточно высокую лечебную и экономическую эффективность. Так, при лечении 250 телят с острым

и 302 поросят с хроническим течением сальмонеллезов выздоровело, соответственно, 208 (83,2 %) и 193 (64 7.) от общего числа заболевших. При этом выявлена более высокая эффективность при лечении животных, больных сальмонеллезом с острым течением заболевания.

Экономическая эффективность комплексного применения лактоб-рила и биобактона при лечении телят и поросят, больных сальмонеллезом, в наших опытах составила, соответственно, 20,6 и 7,5 рублей на один рубль затрат.

ВЫВОДЫ

1. На примере Ставропольского края доказано широкое распространение сальмонеллезов сельскохозяйственных животных и птиц во всех четырех природно-климатических зонах, Этиологическая структура сальмонеллезов животных и птиц представлена 10-ю серо-вариантами: S.dublin, S.typhimurium, S.enteritidis, S.cholerae suis, S.typhi suis, S.abortus ovis, S.abortus bovis, S.gallina-rum-pulloran, S.abortus equi, S.paratyphi В. При этом ведущее место у крупного рогатого скота занимают S.dublin (83 %), S.typhimurium (10,3 X); мелкого рогатого скота (овец) - S.abortus ovis (81,9 %), S.dublin (10,7 X), у свиней - S.cholerae suis (77,5 Z), S.typhi suis (14,7 Z), y птиц отряда куриных - S.gallinarum-pul-lorum, y водоплавающих - S.typhimurium (99,5 Z).

2. С целью повышения активности биобактона усовершенствована технология промышленного приготовления препарата путем включёния в состав производственной питательной среды для культивирования Lactobacterium acidophilum стимулятора роста микроорганизмов ТС-1, что позволило повысить на 50,8 Z количество живых микробных клеток, их выживаемость при сублимационной сушке на 36,2 Z, сократить на 2-4 часа время генерации лактобактерий до их максимальной концентрации и тем самым улучшить качество и снизить себестоимость препарата.

3. В экспериментальных исследованиях in vitro доказан высокий уровень бактериостатического и бактерицидного действия лактобрила в пределах - 0,3-3,1 мг/мл по отношению к сальмонеллам, Staphylococcus aureus и представителям нормального кишечного микробиоценоза - Proteus vulgaris, Bacillus subtilis, Bacillus anthracoides, Escherichia coli.

4. В опытах in vivo установлена способность Lbrn. acidophi-

lum, содержащихся в препарате биобактон, к конкурентному вытеснению из кишечника больных животных представителей рода Salmonella и других-условно-патогенных микроорганизмов.

5. Для определения лечебной эффективности применения лактоб-. рила и биобактона использованы питательные среды со стимулятором роста микроорганизмов ТС 1, обеспечивающие более полное выявление сальмонелл и других микробов в исследуемых материалах, что позволяет рекомендовать данную среду, как наиболее эффективную для этих целей.

6. Установлено, что лактобрил и биобактон не оказывают негативного влияния на организм здоровых молодых телят. Некоторое повышение количества общего белка, гемоглобина, фагоцитарной активности лейкоцитов, бактерицидной и лизоцимной активности сывороток крови свидетельствуют об улучшении состояния организма животных.

7. Применение лактобрила и биобактона per os больным сальмо-неллезом телятам обеспечивает стабилизацию в пределах" физиологических границ таких показателей,, как температура, пульс, дыхание, уровень общего белка и гемоглобин, количества эритроцитов и лейкоцитов. В лейкограмме отмечено восстановление до физиологического уровня всех её составляющих клеток. Показатели фагоцитарной активности лейкоцитов, бактерицидной и лизоцимной активности сывороток крови также восстанавливались до уровня показателей здоровых животных.

8. На основании экспериментальных исследований разработана целесообразная лечебная тактика применения указанных препаратов животным, больным сальмонеллёзом. Применение лактобрила обеспечивает санацию желудочно-кишечного тракта от патогенной, условно-патогенной и,частично, типичной микрофлоры. Применение биобактона, помимо конкурентной способности вытеснения нежелательной микрофлоры, обеспечивает нормализацию кишечного микробиоценоза.

9. Технология применения препаратов включает введение per os телятам и поросятам свежеприготовленного раствора лактобрила в течение первых 3-4-х суток за 20-30 минут перед утренним и вечерним кормлением, в дозах по 10-20 мг на кг живой массы животного, а также последующее двукратное выпаивание в течение 3-4-х суток биобактона в виде водной суспензии в дозах по 0,5-1 млрд, микробных тел ацидофильной палочки на кг живой массы.

10. Производственными испытаниями указанных препаратов уста-

новлена их наибольшая эффективность при лечении больных животных с острым течением сальмонеллезов. Биологическая эффективность применения лактобрила и биобактона подтверждена отрицательными бактериологическими исследованиями на наличие сальмонелл в пробах фекалий. Экономическая эффективность применения данных препаратов при лечении телят и поросят, больных сальмонеллезом, составила, соответственно, 20,6 и 7,5 рублей на 1 рубль затрат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. При лечении молодняка животных, больных сальмонеллезами, рекомендуем с целью полной санации кишечника от патогенных, условно-патогенных микроорганизмов и нормализации кишечного нормо-биоценоза использовать л^ктобрил и биобактон в соответствии с разработанной нами технологией, изложенной в "Наставлении" и рекомендованной для практического применения в ветеринарии НТС МСХ ПСК (6 января 1998 года).

3. Для оценки лечебной эффективности применения химиотера-певтических препаратов, антибиотиков и пробиотиков рекомендуем использовать питательную среду со стимулятором роста микроорганизмов - СРМ ТС-1, как наиболее эффективную в выявлении сальмонелл и другой микрофлоры кишечного микробиоценоза в минимальных концентрациях.

3. При изготовлении пробиотика "Биобактон".предлагаем внести изменения в технологию.его приготовления путем добавления в производственную питательную среду для глубинного культивирования Lbm.acidophilum 3 X СРМ ТС-1 к общему объему.среды.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Веревкина М.Н., Потапова O.A. Испытания новой питательной среды-СГСХА для культивирования некоторых энтеробактерий и акти-но'бацилл ' /Повышение эффективности агропромышленного производства в условиях современных форм хозяйствования //Тезисы докладов. -Воронеж, 1995. - С.147-148.

2. Потапова O.A. Распространение сальмонеллезов животных и птиц в ставропольском крае //Диагностика, лечение и профилактика заболеваний с/х ж-х: Сб. науч. тр. /Ставроп.ГСХА, 1995. -С.23-25.

3. Потапова O.A. Этиологическая структура сальмонеллезов животных и птиц в Ставропольском крае //Диагностика, лечение и про-