Эффективность модифицированной инактивированной адъювант-вакцины "ЭВАК" при инфекционном эпидидимите баранов

Павлова, Анна Владимировна

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эффективность модифицированной инактивированной адъювант-вакцины "ЭВАК" при инфекционном эпидидимите баранов

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Павлова, Анна Владимировна Москва 2006 г.

Ученая степень: кандидата ветеринарных наук

ВАК РФ: 16.00.03

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Эффективность модифицированной инактивированной адъювант-вакцины "ЭВАК" при инфекционном эпидидимите баранов

На правах рукописи

ПАВЛОВА АННА ВЛАДИМИРОВНА

ЭФФЕКТИВНОСТЬ МОДИФИЦИРОВАННОЙ ИНАКТИВИРОВАННОЙ АДЪЮВАНТ-ВАКЦИНЫ «ЭВАК» ПРИ ИНФЕКЦИОННОМ ЭПИДИДИМИТЕ БАРАНОВ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва - 2006

Работа выполнена в лаборатории микобактериозов ГНУ Всероссийский научно- исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук

Альбертян Мкртич Погосович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ Караваев Юрий Дмитриевич,

кандидат ветеринарных наук Скляров Олег Дмитриевич

Ведущая организация - ФГОУ ВПО Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина

Защита диссертации состоится « » декабря 2006 г. в м часов на заседании диссертационного совета Д 006.033.01 при ГНУ Всероссийский научно- исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко по адресу: 109 428, Москва, Рязанский проспект, д. 24, к.1, ВИЭВ им. Я. Р. Коваленко.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ им. Я. Р. Ко-

валенко.

Автореферат разослан

2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Н.П. Овдиенко

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность темы. В последние годы важной проблемой в овцеводстве является борьба с инфекционным эпидидимитом баранов (ИЭ), вызываемым Brucella ovis. Инфекционный эпидидимит баранов наносит значительный экономический ущерб овцеводству, обусловленный недополучением приплода, преждевременной выбраковкой маточного, в т.ч. племенного поголовья овец и баранов- производителей, уничтожением большого количества спермы, предназначенной для искусственного осеменения, затратами на проведение профилактических и оздоровительных мероприятий.

Борьба с инфекционным эпидидимитом баранов в большинстве случаев недостаточно эффективна изтза отсутствия средств специфической профилактики, включение которой в комплекс противоэпизоотических мероприятий значительно повысит ее эффективность (Г. Ш. Абулхаиров, В. А. Ромахов 1991; А.Ф. Руденко 1987; В. Аманжолов, 1981; Б. Н. Афанасьев, 1980; В.И. Ким, 1978; M.Afsal, С. V. Kiniberling, 1986).

С учетом возможности перекрестной иммунизации животных бруцеллами разных видов для специфической профилактики ИЭ используют те же вакцины, что и для профилактики бруцеллеза у овец (А. Н. Касьянов, В. А. Ромахов, 1980).

Вместе с тем установлено, что. при бруцеллезе иммунитет непродолжительный и может быть преодолен массивной дозой возбудителя, даже после естественного переболевания, однако применение вакцин при одновременном выполнении ветеринарно-санитарных мер дает положительный результат. Поэтому многие исследователи за рубежом и в нашей стране занимаются изысканием более современных противобруцеллезных вакцин (Е. С. Ортов, П. С. Уласевич и др., 1976).

Часть из предлагаемых на сегодняшний день вакцин не соответствует требованиям, предъявляемым к препаратам подобного рода по показателям безвредности - вакцины 45/20, 53Н38 (Т. К. Касымов, 1985. 1988), часть -по резко выраженным агглютиногенным свойствам - штаммы 19, 104-М (Е. Biderstein, Me. Cowan, R. Harzold, 1962; L. Kater, V. Hartley, 1963; Т. К. Касымов, 1988) и некоторые по недостаточно выраженным иммуногенным свойствам.

В лаборатории по изучению бруцеллеза ВИЭВ совместно с лабораторией биохимии была разработана инактивированная адъювант- вакцина против инфекционного эпидидимита баранов. В качестве адъюванта была использована смесь, содержащая 84% минерального масла ПЭС-3 и 16% безводного ланолина. Исследования показали, что препарат обладает сильно выраженной реакто-генностью. У 8-10 процентов привитых животных на месте введения вакцины наблюдалось образование инкапсулированных соединительно- тканных гранулем, а у части животных - асептические абсцессы.

В связи с этим для конструирования вакцины, лишенной этого недостатка, масляно- ланолиновый адьювант заменили гелью гидроокиси алюминия, изменили концентрацию микробных клеток антигена. Поэтому оценка эффективности этой модифицированной вакцины является актуальной.

1.2 Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы являлась оценка модифицированной, инактивированной, экологически безопасной адъювант- вакцины «ЭВАК» из штамма 64/2 Бруцелла овис против инфекционного эпидидимита баранов. В задачи исследований входило:

1. Изготовить опытные серии модифицированной вакцины «ЭВАК.

2. Изучить безвредность вакцины и ее реактогенные свойства.

3. Изучить антигенные свойства модифицированной инактивированной адьювант- вакцины «ЭВАК».

4. Изучить иммуногенные свойства вакцины в лабораторных условиях.

5. Изучить эффективность вакцины «ЭВАК» при инфекционном эпидидимите баранов в неблагополучных по инфекционному эпидидимиту хозяйствах.

1.3 Научная новизна. Впервые в лабораторных и производственных опытах па баранах, овцах, морских свинках, кроликах и белых мышах изучены безвредность, антигенные, иммуногенные свойства, а также профилактическая эффективность модифицированной инактивированной адъювант- вакцины «ЭВАК» в профилактике и борьбе с инфекционным эпидидимитом баранов. Показана ее безвредность, антигенные, иммуногенные свойства, эффективность в производственных условиях. Ее применение позволяет оздоровить неблагополучные стада от инфекционного эпидидимита в течете 1,5-2 лет.

1.4 Практическая ценность. Внедрение вакцины в ветеринарную практику позволит значительно сократить сроки оздоровления неблагополучных хозяйств по инфекционному эпидидимиту баранов и снизить экономический ущерб, наносимый этой болезнью.

Применение модифицированной инактивированной адъювант- вакцины «ЭВАК» в общем комплексе мер в Астраханской области позволило оздоровить от инфекционного эпидидимита баранов 2 хозяйства в течение 2-х лет.

1.5 Личный вклад соискателя заключается в организации и проведении опытов по изучению антигенных, реактогенных и иммуногенных свойств модифицированной адъювант- вакцины «ЭВАК», испытание вакцины в неблагополучных по инфекционному эпидидимиту хозяйствах, анализ и обобщение полученных результатов.

1.6 Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены па:

- заседаниях Ученого совета Всероссийского научно- исследовательского института экспериментальной ветеринарии им Я.Р. Коваленко (ВИЭВ) в 2003, 2004, 2005 гг.;

- межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ в 2006 г.

1.7 Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в 4-х научных работах.

1.8 Основные положения, выносимые на защиту.

- результаты изучения безвредности, реактогенных, антигенных, и имму-ногенных свойств модифицированной адъювант- вакцины «ЭВАК»;

- результаты испытания вакцины в неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов хозяйствах.

1.9 Объем и структура диссертации. Диссертационная работа представлена в одном томе, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и практических предложений. Диссертация изложена на 117 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 19 таблицами. Список использованной литературы включает 197 наименований, в т.ч. 51 иностранных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы.

Работа выполнена в лаборатории микобактериозов Всероссийского научно- исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко и на опытной базе Вышневолоцкого отдела ВИЭВ (Тверская область) и в 2-х неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов хозяйствах Астраханской области в соответствии с утвержденными планами научно- исследовательских работ в период 2002 - 2005 гг. согласно Российской научно-

технической программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по заданию 02.01.03.01.

Опытные серии вакцины «ЭВЛК» готовили по следующей схеме:

1. Приготовление питательных сред для культивирования штамма Бру-целла овис 64/2.

2. Получение и накопление бактериальной массы.

- Высев из ампул лиофилизированной культуры штамма Бр. овис 64/2 на скошенный МППТТА или эритритагар в пробирках и на этот же агар в чашках Петри (1-я генерация). Контроль чистоты культур (микроскопический и макроскопический).

- Выращивание материала на МППГГА или эритритагаре в пробирках для получения матричной культуры (2-я генерация).

- Засев и выращивание культуры в четвертях (3-я регенерация) и смыв бактериальной массы физиологическим раствором с добавлением 0,5% формалина.

- Контроль инактивации полученного антигена.

3. Приготовление вакцины.

Вакцину готовили в соответствии с «Временной инструкцией по изготовлению и контролю инактивированной адъювант- вакцины «ЭВАК» против инфекционного эпидидимита баранов (ИЭ)», утвержденной директором ВИЭВ.

- В качестве адъюванта использовали гель гидроокиси алюминия.

- Разлив гидроокиси алюминия в стеклянные флаконы по 67 мл и автокла-вирование в течение 30 минут при температуре 115 + 2 °С

- Контроль стерильности адъюванта путем высева на МПБ, МПА, МППБ под вазелиновом маслом и агар Сабуро.

- Приготовление смеси (антиген + адьювант) в соотношении 3,2 : 1.

- Контроль качества смеси антиген — адъювант.

- Расфасовка смеси антиген - адьюваит во флаконы емкостью 100, 50 и 20 мл и их маркировка.

Для определения безвредности смесь вакцины из 5 флаконов в равных количествах вводили подкожпо по 0,4 мл 10 белым мышам, в область спины и 2 кроликам, массой 2 — 2,5 кг по 0,5 мл подкожно в боковую стенку туловища слева и справа (всего 1 мл). За животными вели наблюдение в течение 10 дней.

Реактогенность модифицированной адъювант вакцины «ЭВАК» изучали на баранчиках в экспериментальных условиях и в неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов хозяйствах.

В лабораторном опыте вакцину вводили баранчикам подкожно за локтевым суставом слева в бесшерстную часть в дозе 5 млрд. м.к., в объеме 0,5 мл.

Реакцию организма подопытных животных на введение вакцины определяли по общему состоянию баранчиков и по степени воспалительной отечности на месте инъекции. Проводили ежедневную термометрию в течение 10 дней.

В колхозах «Рассвет» и «Родина» вакцину «ЭВАК» применяли по следующей схеме: перед иммунизацией баранов- производителей, бараков- пробников и баранчиков старше 6-и месяцев исследовали на инфекционный эпиди-димит баранов серологическим (РДСК) и дополнительно клиническим методами.

Оставшихся в отарах условно здоровых баранов колхоза «Рассвет» разделили на две группы. Животных первой группы (50 голов), иммунизировали вакциной «ЭВАК», серия №11, контроль 11. Вакцину вводили подкожно в бесшерстную поверхность грудной клетки за локтевым суставом в дозе 0,5 мл (5 млрд. микробных клеток), а баранов второй группы (49 голов), оставили непривитыми, в качестве контроля. В колхозе «Родина» все условно здоровые животные (223) головы, были привиты аналогично 1-й группы колхоза «Рассвет».

У иммунизированных животных в течение 10 дней ежедневно проводили термометрию и измеряли воспалительную припухлость на месте инъекции.

Изучение антигенных свойств модифицированной инактивированной адьювант- вакцины «ЭВАК» проводили на морских свинках и баранчиках.

Для иммунизации морских свинок использовали вакцину Кеу -1 Вг. теШ-епБ^э. Вакцину вводили 10 морским свинкам подкожно, в область паха слева, в дозе 100 млн. микробных клеток в объеме 0,2 мл.

Для введения вакцины «ЭВАК», серия Лг» 11 готовили общую пробу из 3-х флаконов с вакциной. Иммунизировали 10 морских свинок. Вакцину вводили подкожно, в область паха, в дозе 250 млн. микробных клеток в объеме 0,2 мл.

На баранчиках испытали вакцину «ЭВАК» в дозе 5 млрд. м.к. Провели два опыта, в первом опыте использовали 6 баранчиков, которым вводили вакцину 11 серии, во втором опыте - 4 баранчика, которым вводили вакцину 12 серии. Для введения вакцины «ЭВАК», готовили общую пробу из 3-х флаконов с вакциной. Вакцину вводили подкожно слева за локтевым суставом в бесшерстную часть в дозе 5 млрд. м.к., в объеме 0,5 мл.

В целях выяснения иммунологического ответа на введение вакцины - сыворотку крови привитых животных исследовали в РБП, РА, РСК на бруцеллез и в РДСК на инфекционный эпидидимит баранов.

Иммуногенные свойства вакцины изучали на морских свинках и баранчиках.

В опыт было взято 30 морских свинок, которых разделили на 3 группы по 10 животных. Первую группу вакцинировали вакциной «ЭВАК», вторую -11еу-1, третья - контрольная (не вакцинированная). Через 4 месяца после вакцинации морских свинок заражали вирулентной культурой Вг. оу1в 8406. Культура вводилась в дозе 5 млн. микробных клеток (5ИДюо)- Через 38 дней после заражения подопытных и контрольных животных убили для бактериологического и патанатомического исследований. Бактериологические и патанатомические исследования проводили согласно действующего наставления.

Критерием иммунного состояния служило отсутствие выделения вирулентной культуры Вг. оу1з из организма животных при бактериологическом исследовании.

У баранчиков иммунитет проверили через 10 и 12 месяцев после вакцинации. С этой целью в первом опыте, в котором баранчики были привиты вакциной «ЭВАК» (серия 12) через 10 месяцев после иммунизации, опытную и контрольную (не вакцинированную) группы заразили вирулентной культурой 8406 Вг. оу1з. в дозе 5 млрд. м.к. (10 ИД10о).

Убой, патологоанатомическое и бактериологическое исследование проводили через 35 дней после заражения.

Иммунитет у баранчиков вакцинированных «ЭВАК» (серия №11) проверили через 12 месяцев после прививки, путем подкожного заражения их вирулентной культурой Вг. 8406 в дозе 2,5 млрд. микробных клеток (5 ИДюо).

Убой и бактериологическое исследование животных проводили через 50 дней после заражения согласно действующего наставления.

До иммунизации животных провели ретроспективный анализ эпизоотической ситуации в этих хозяйствах.

В колхозе «Рассвет» условно здоровых баранов разделили на две группы. Животных первой группы иммунизировали вакциной «ЭВАК», серия № 11, контроль 11. Вакцину вводили подкожно в дозе 0,5 мл (5 млрд. микробных клеток), а баранов второй группы оставили непривитыми, в качестве контроля. В колхозе «Родина» были иммунизированы все условно здоровые животные.

С целью определения иммунологического ответа на введение вакцины через 15 дней, а в дальнейшем через каждые 30 дней после вакцинации, прово-

дали исследование сывороток крови привитых баранов в РДСК с овисным антигеном. Одновременно животных исследовали на бруцеллез (РА, РСК, РБП). Серологические исследования проводили согласно действующего наставления . Животных контрольной группы исследовали по этой же схеме.

Полученные в процессе работы цифровые показатели обрабатывали общепринятыми методами вариационной статистики.

Методики отдельных исследований изложены в соответствующих разделах диссертации.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Определения безвредности модифицированной вакцины «ЭВАК».

Для определения безвредности готовили смесь вакцины одной серии из 5 флаконов в равных количествах, которую испытали на белых мышах и кроликах.

Десяти белым мышам, массой 25-30 гр, вакцину вводили подкожно по 0,4 мл в область спины. Двум кроликам, массой 2 - 2,5 кг, вакцину вводили по 0,5 мл подкожно в боковую стенку туловища слева и справа (всего 1 мл). За животными вели наблюдение в течение 10 дней. Результаты исследований показали, что все мыши и кролики остались живыми, аппетит и температура тела находились в пределах физиологической нормы. При убое на месте введения вакцины не было никаких патологических изменений, что свидетельствует о безвредности препарата.

2.2.2. Результаты изучения реактогенности адьювант -вакцины «ЭВАК».

Реактогешюсть изучали в лабораторном опыте на баранчиках и в неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов хозяйствах.

В лабораторном опыте баранчикам вакцину вводили подкожно за локтевым суставом слева в бесшерстную часть в дозе 5 млрд. м.к., в объеме 0,5 мл.

Реакцию организма подопытных животных на введение вакцины определяли по общему состоянию животных и по степени воспалительной отечности на месте инъекции. Проводили ежедневную термометрию.

Установлено, что на месте введения вакцины образуются незначительные соединительно- тканные гранулемы, размером с горошину (от 0,1 до 0,8 см2), которые за 30 - 40 дней после иммунизации полностью рассасываются.

Аппетит у привитых животных за весь период наблюдения (10 дней) нормальный. Температура тела в пределах нормы.

В колхозах «Рассвет» и «Родина» вакцину вводили подкожно за локтевым суставом слева в бесшерстную часть в дозе 5 млрд. м.к., в объеме 0,5 мл.

Исследования показали, что на месте введения вакцины образуются подкожные воспалительные гранулемы в размере так же с горошину (0,3 - 0,8 см2), которые за 30 — 40 дней после иммунизации полностью рассасываются.

Аппетит и температура тела у вакцинированных животных сохранялись в пределах нормы.

Таким образом, результаты исследований показали слабую реактоген-ность вакцины «ЭВАК» для баранов.

2.2.3. Изучение антигенных свойств модифицированной инактивирован-ной адъюваит- вакцины «ЭВАК».

Антигенные свойства вакцины изучали на морских свинках и баранчиках. В целях выяснения иммунологического ответа организма животных на введение вакцины «ЭВАК» сыворотки крови привитых животных исследовали серологически в РА, РСК на бруцеллез с единым бруцеллезным антигеном, в РЕП с цветным бруцеллезным антигеном и в РДСК с овисным антигеном на инфекционный эпидидимит.

Результаты серологического исследования сывороток крови привитых морских свинок приведены в таблице 1.

Таблица 1 - Результаты серологического исследования морских свинок в

разные сроки после иммунизации

Сроки исследования Количество Реагировало положительно на:

бруцеллез инфекционный эпидидимит

ных в РА РСК РБП РДСК

группе 1:10 1:20 1:40 1:80 1:5 1:10 1:5 1:10 1:20

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Вакцинированные «ЭВАК» 250 млн. м.к.

15 10 - - . - - - - 8 8

30 10 - - - - - 10 10 -

60 10 • . - - - - - 10 10 -

90 10 - - - - - - - 10 10 -

120 10 - - - - - - - 10 10 -

Вакцинированные Кеу -1 100 млн. м.к.

15 10 10 10 10 10 8 7 9 -

30 10 10 10 10 10 10 9 10 - - -

60 10 10 10 9 8 10 10 10 - - -

90 10 10 9 9 5 10 10 10 - - -

120 10 10 9 9 5 10 10 10 - - -

Из приведенных в таблице 1 данных видно, что во все сроки исследования проб сывороток крови в РА, РСК и РБП с бруцеллезным антигеном у животных, привитых вакциной Яеу-1, были положительные, а у животных, привитых вакциной «ЭВАК», - отрицательные показания.

Сыворотки крови животных, привитых вакциной Кеу-1, во все сроки исследования в РДСК были отрицательны. У морских свинок, привитых вакциной «ЭВАК», на 15-й день исследования дали положительные показания РДСК с сывороткой крови 8 животных (80%), а в период с 30-го по 120-й день исследования- все 10 морских свинок.

Результаты серологических реакций баранчиков представлены в таблице 2.

Таблица 2 -Результаты серологического исследования баранчиков

Сроки исследования в днях Количество животных в группе Реагировало положительно (голов) на:

бруцеллез в: инфекционный эпидидимит в:

РА РСК РБП РДСК

_ 1:25 1:50 1:100 1:200 1:5 1:10 1:5 1:10 1:20 1:40

Вакцинированные «ЭВАК» 5 мл] ж м.к.

15 6 - - - - - - 4 2 1 -

30 6 - - - - - - - 6 6 б 2

60 6 - - - - - - - 6 6 5 1

90 6 - - - - - - - 6 6 2 -

120 6 - - - - - - - 6 6 2 -

150 6 - - - - - - - 4 4 1 -

180 6 - - - - - - - 4 2 1

210 6 - - - - - - 4 4 - -

240 6 - - - - - - - 2 1 - -

270 6 - - - - - - - 1 1 - -

300 б - - - - - - - 1 1 - -

330 б - - - - - - - 0 0 - -

360 6 - - - - - - - 0 0 - -

Во все сроки исследования от всех животных были получены отрицательные результаты в РА, РСК и РБП при исследовании с бруцеллезным антигеном. Постепенно уменьшалось количество животных с положительными показаниями РДСК с овисным антигеном. Так, до 4 месяцев все животные давали положительные показания. Через 150, 180 и 210 дней положительные показания были у 4 из 6 животных, через 240 - у 2-х и через 270 - у одного. Через 11 месяцев все животные дали отрицательные показания РДСК с овисным антигеном. Аналогичные результаты были получены во втором опыте с вакциной 12 серии. Таким образом, все вакцинированные животные активно вырабатывают антитела в течение 4-х месяцев к овисному антигену.

2.2.4. Результаты изучения иммуногенных свойств вакцины «ЭВАК».

Для определения иммуногенных свойств модифицированной инактивиро-ванной адъювант- вакцины «ЭВАК», было необходимо провести титрацию штамма Вг. 8406 и выяснить минимальную инфицирующую дозу Вг. оучэ. Исследования проводили на морских свинках и баранчиках.

Результаты серологического и бактериологического исследований убитых морских свинок представлены в таблице 3.

Таблица 3- Результаты титрации Вг. оу^э штамма 8406 на морских

свинках

№ груп Кол-во живот- Доза Вг. сгеЬ Выделено культур: Зарази- Положительно реагировало в РДСК (голов)

пы ных 8406 всего из из орга- лось 10-й 20-й 30-й

в группе гол. в м.к. лимф, узлов нов (голов) день день день

1 5 10 0 0 0 0 0 0 0

2 5 100 0 0 0 0 0 0 5

3 5 1тыс. 7 7 0 3 0 5 5

4 5 Ютыс. 12 7 5 3 2 5 5

5 5 ЮОтыс. 15 9 6 4 5 5 5

6 5 1млн. 35 25 10 .5 5 5 5

7 5 Юмлн. 32 21 11 5 5 5 5

8 5 ЮОмлн. 42 29 13 5 5 5 5

9 5 1млрд. 33 26 7 5 5 5 5

Обозначения: м.к. - микробная клетка

Представленные в таблице 3 данные свидетельствуют о высокой вирулентности и антигенности взятого нами для заражения штамма Вг. о\тз 8406. Так, на дозу 1 тыс. микробных клеток из 5 морских свинок заразилось уже 3, на дозу 100 тыс. м.к. - 4 и на дозу 1 млн. м.к. - 5.

Полученные результаты исследований показали, что минимальная доза культуры, которая вызвала заражение всех животных в группе составляет 1 млн. микробных клеток (ИДюо). Эта доза при подкожном введении вызывала заражение всех свинок с генерализованной формой, что подтверждается во всех случа-

ях выделением исходной культуры Вг. оу1б (выделено 35 культур, в т.ч. 10 из паренхиматозных органов).

Результаты бактериологического и серологического исследований баранчиков на инфекционный эпидидимит баранов приведены в таблице 4.

Таблица 4- Результаты титрации Вг. Ovis штамма 8406 на баранчиках

Кол-во животных в группе Доза Вг. ovis 8406, в м.к. Выделено культур Заразилось Положительно реагировало в РДСК

всего из лимфоузлов из органов 10-й день 20-й день 30-й день

3 50млн. 8 6 2 1 2 3 3

3 500млн. 24 19 5 3 3 3 3

3 5млрд. 32 21 11 3 3 3 3

3 50млрд. 44 27 17 3 3 3 3

ИТОГО: 108 73 35

Полученные результаты в опыте по определению минимальной инфицирующей дозы штамма Вг. оу1з 8406 на баранчиках дают основание считать, что минимальная инфицирующая доза (ИД](Ю) для данного вида животных составляет 500 млн. микробных клеток, так как в этом случае заразились все баранчики в группе с выделением исходной культуры как из лимфатических узлов, так и из органов (генерализованная инфекция). У этих же животных отмечен антигенный ответ (положительные показания РДСК с сывороткой крови всех баранчиков на 10-й, 20-й и 30-й дни после заражения).

Иммуногенные свойства вакцины изучали на морских свинках и баранчиках.

В опыт было взято 30 морских свинок, которых разделили на 3 группы по 10 животных. Первую группу вакцинировали вакциной «ЭВАК», вторую -11еу-1, третья — контрольная (не вакцинированная). Через 4 месяца после вакцинации морских свинок заражали вирулентной культурой Вг. штамма 8406. Культуру вводили в дозе 5 млн. микробных клеток (5ИДюо). Через 38 дней по-

еле заражения подопытных и контрольных животных убили для бактериолога-ческого и патанатомического исследований.

Результаты бактериологического исследования приведены в таблице 5. Таблица 5 - Результаты бактериологического исследования паренхиматозных

органов и лимфатических узлов от морских свинок

IS о И ^ s ее сз Иммунных Выделено культур

Количество животных в группе в том числе из:

я с с >ч & Какой вакциной привиты Доза вакцины, м.к. и £ s S К * О, о а а с а о а- S « и 0 fe в 1 а 8 о W ^Заразилось, голов 1 £ всего лимф, узлов паренхиматозных органов Индекс инфицированносп по группе

1 10 «ЭВАК» 250 млн. 120 5 млн. 2 8 80 . 2 2 0 2,0

2 10 Rev-I 100 млн. 120 5 млн. 4 6 60 6 5 1 6,0

3 10 - - - 5 млн. 10 0 0 41 28 13 41,0

Из таблицы 5 видно, что иммуногенная активность изучаемых вакцин была различной.

Более иммуногенной для морских свинок является вакцина «ЭВАК» - так как из 10 животных - 8 оказались иммунными (80%), в то время как в группе морских свинок, привитых вакциной Rev -1, было только 6 иммунных животных (60%).

Все контрольные (не привитые) морские свинки заразились. У них развился генерализованный инфекционный процесс.

У баранчиков иммунитет проверили через 10 и 12 месяцев после вакцинации. С этой целью в первом опыте, в котором баранчики были привиты вакциной «ЭВАК» (серия 12) через 10 месяцев после иммунизации, опытную и контрольную (не вакцинированную) группы заразили вирулентной культурой Вг. оу1з штамма 8406 в дозе 5 млрд. м.к. (10 ИДюо).

Убой, патологоанатомическое и бактериологическое исследование проводили через 35 дней после заражения.

Иммунитет у баранчиков, вакцинированных «ЭВАК» (серия №11), проверили через 12 месяцев после прививки, путем подкожного заражения их вирулентной культурой Вг. оу15 штамма 8406 в дозе 2,5 млрд. микробных клеток (5 ИДюо).

Убой и бактериологическое исследование животных проводили через 50 . дней после заражения.

Результаты бактериологического исследования приведены в таблице 6. Таблица 6 - Результаты бактериологических исследований баранчиков через 10

месяцев после иммунизации вакциной «ЭВАК».

Им- Выделено культур

мун- Е

ных к

£ м Срок проверки иммунитет (мес.) Доза заражающего штамм; млрд.(м.к.) В том числе из: 1

1 * 1 к * о са Й о в-к ч о « Вакцина 1 Доза вакцины в млрд. 1 Заразилось(голов) £ £ | всего лимфатических узлов паренхиматозных органов семенников, придатков Индекс инфицирован группе

1. 4 «ЭВАК» 5 10 5 1 3 75 4 4 0 0 4,0

2. 3 контроль - - 5 3 - - 46 26 8 12 61,2

Из данных таблицы 6 видно, что в первой группе, где животные были привиты модифицированной инактивированной адъювант- вакциной «ЭВАК» (серии №12), иммунных баранчиков оказалось 3 (75%).

В контрольной группе заразились все 3 баранчика. Выделено культур всего 46 (в среднем по 15,3 культуры на животное).

Следует отметить, что от заразившегося вакцинированного баранчика было выделено значительно меньше культур (4), чем от контрольных (17; 19; 10).

Иммунитету баранчиков, вакцинированных «ЭВАК» (серия №11), проверили через 12 месяцев после прививки.

Результаты бактериологического исследования опытной и контрольной групп приведены в таблице 7.

Таблица 7 - Результаты бактериологического исследование баранчиков через 12 месяцев после иммунизации вакциной «ЭВАК».

Иммунных Выделено

о 5 и культур

S в том числе из:

cd Ё н К s а Л 2 г 1 2 X в

X 3 § ж И всего tü о 3 15 « о

N° группы 1 <и во И ^Закцина Ш к Щ я m * § с. 0> ffi О & а о о. О 1 2 ее К Г) я о с=Г Заразилось, голе гол £ м ■е- 5 S ч органов Индекс инфици] по группе

1 6 «ЭВАК» . ä V-» 12 2,5 млрд. 1 5 83,0 3 3 0 3.1

2 3 контроль т 2,5 3 0 0 42 29 13 87,5

млрд.

Из данных таблицы 7 видно, что в группе, где животные были иммунизированы вакциной «ЭВАК» в дозе 5 млрд. микробных клеток, оказалось 83,0 % иммунных животных. В контрольной группе заразились все баранчики, от которых было выделено 42 культуры Вг. оу1з штамма 8406. Таким образом, эти результаты показали высокие иммуногенные свойства испытуемой вакцины.

2.2.5. Результаты испытания эффективности модифицированной вакцины «ЭВАК» в производственных условия.

Перед применением вакцины, провели ретроспективный анализ эпизоотической ситуации в этих хозяйствах за последние 5 лет. Установлено, что поголовье баранов в этих хозяйствах исследовали на инфекционный эпидидимит в РДСК с овисным антигеном. Положительно реагирующих животных сдавали на убой.

Результаты представлены в таблице 8. Таблица 8 - Результаты серологического исследования на инфекционный эпи-

дидимит баранов в хозяйствах за 1999-2003 гг.

Годы к-з «Рассвет» к-з «Родина»

исследовано голов реагировало положительно исследовано голов реагировало положительно

голов % голов %

1999 116 13 11,2 146 9 6,1

2000 137 18 13,1 283 7 2,4

2001 88 8 9,0 244 25 10,2

2002 101 11 10,8 341 17 4,9

2003 140 13 9,2 289 32 11,0

Как видно из таблицы 8, распространенность инфекционного эпидидими-та среди баранов была значительной. В разные годы заболеваемость баранов составляла от 9 % до 13,1 % в колхозе «Рассвет» и 2,4 % - 11,0 % в колхозе «Родина».

Условно здоровых баранов колхоза «Рассвет» разделили на две группы. Животных первой группы иммунизировали вакциной «ЭВАК», серия № 11, контроль 11. Вакцину вводили подкожно в бесшерстную поверхность грудной

клетки за локтевым суставом в дозе 0,5 мл (5 млрд. микробных клеток), а баранов второй группы оставили непривитыми, в качестве контроля.

Всех условно здоровых баранов колхоза «Родина» иммунизировали вакциной «ЭВАК», серия №11, подкожно в бесшерстную поверхность грудной клетки за локтевым суставом в дозе 0,5 мл (5 млрд. микробных клеток).

Результаты клинического осмотра и серологических исследований представлены в таблице 10.

В группе вакцинированных животных колхоза «Рассвет» на 15-й день после прививки в РДСК на ИЭ реагировало 41 животное (82%), на 30-й, 60-й и 90-й дни положительные показания РДСК были с сыворотками крови всех 50 баранчиков (100%). Начиная с 4-го месяца опыта количество животных с положительными показаниями РДСК начинает постепенно снижаться. Через 11 месяцев после вакцинации положительно реагирующих животных в этой реакции не выявлено. Положительные реакции в РДСК у вакцинированных животных объясняются тем, что инактивированная адьювант- вакцина «ЭВАК», изготовленная из штамма 64/2 Вг. ovis, является препаратом достаточно высокой анти-генности.

Баранов с клиническими признаками инфекционного эпидидимита за весь период наблюдения не установлено.

В группе контрольных животных в течение всего опыта положительная РДСК получена с сыворотками крови 15 баранов. При клиническом исследовании было выявлено 5 животных с клиническими признаками.

У иммунизированных баранов колхоза «Родина» положительная РДСК на инфекционный эпидидимит с сыворотками крови получено на 15-й день у 23,7 %, а на 30-й - 99,1%. На 60-й день исследования, все животные реагировали положительно. Затем процент положительно реагирующих животных стал снижаться, и к 11-му месяцу исследования животных, положительно реагирующих на инфекционный эпидидимит с овисным антигеном в РДСК не выявлено.

Таблица 10- Результаты применения вакцины «ЭВАК» в хозяйствах, неблагопо-

лучных по инфекционному эпидидимиту баранов

Вакцинированные Контрольные

1 Выявлено: Выявлено:

1 о и с положитель- клинически с положитель- клинически

1 а о ными показа- больных 'в ными показа- больных

§ 1 О ^ ! ? ниями РДСК § ъ О о ниями РДСК

15 сп & § § о 5 и к Количество (голов) % Количество "в 0 1 % 8 2 О ' о к Количество « 0 1 % Количество — о ц о и %

Колхоз «Рассвет»

15 50 41 82 - - 49 0 0 0 0

30 50 50 100 0 - 49 0 0 -

60 50 50 100 - - 45 2 4,4 2 4,4

90 50 50 100 0 - 43 1 2,3 1 2,3

120 50 47 94 - - 42 0 0 - -

150 48 34 68 - - 42 4 9,5 - -

180 48 30 62,5 0 - 38 0 0 1 2,6

210 42 18 42,9 - - 38 2 5,2 - -

240 37 7 18.9 - - 36 3 8,3 - -

270 37 3 8.1 0 - 33 0 0 0 0

300 37 2 5.4 - - 33 0 0 - -

330 37 0 0 - - 33 3 7 - -

360 37 0 0 0 - 30 0 0 1 3,3

Колхоз «Родина»

15 223 53 23,7 0 - - - - - -

30 223 221 99,1 0 - - - - -

60 223 220 98,6 0 - - - - - -

90 220 217 98,6 0 - - - - - -

120 220 220 100 0 - - - - - -

150 220 202 91,8 0 - - - - -

180 218 216 99,0 0 - - - - - -

210 218 201 92,2 0 - - - - -

240 215 179 36,7 0 - - - - - -

270 215 31 14,4 0 - - - - - -

300 210 10 4,7 0 - - - - - -

330 210 0 0 0 - - - - - -

360 201 0 0 0 - - - - - -

Дальнейшие четырехкратные клинические исследования, проведенные через год после вакцинации, показали, что баранчиков с клиническими признаками инфекционного эпидидимита и реагирующих в РДСК с овисным антигеном не выявлено, что говорит о полном оздоровлении отары баранов от данной болезни.

Таким образом, иммунизация животных модифицированной инактивиро-ванной адъювант- вакциной «ЭВАК» в двух хозяйствах, неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов, показало эффективность данной вакцины в борьбе с указанной болезнью.

ВЫВОДЫ

1. Модифицированная инактивированная адъювант- вакцина «ЭВАК» безвредна, обладает незначительными реактогенными свойствами, выражающимися образованием воспалительной припухлости на месте введения препарата размером с горошину (0,3 - 0,8 см2', которая полностью рассасывается в течение 30 — 40 дней после иммунизации.

2. Установлено, что модифицированная адъювант- вакцина «ЭВАК» предохраняет от заражения вирулентной культурой 8406 Вг. оу1з 80% морских свинок через 4 месяца после прививки, 75% баранов через 10 месяцев и 83% баранчиков через 12 месяцев после вакцинации.

3. Показано, что модифицированная адъювант- вакцина «ЭВАК» вызывает у привитых баранчиков образование комплементсвязывающих антител, улавливаемых в РДСК с овисным антигеном в течение 10 месяцев после иммунизации.

4. Выявлено, что модифицированная адъювант- вакцина «ЭВАК» не вызывает у привитых баранов образование противобруцеллезных антител,

что позволяет исследовать животных на «классический» бруцеллез с единым антигеном, в любые сроки после вакцинации. 5. Иммунизация баранов вакциной «ЭВАК» в общем противоэпизо-

отическом комплексе мер, позволяет оздоровить неблагополучные по ин-

фекционному эпидидимиту баранов хозяйства.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

С учетом результатов экспериментальных исследований и производственного испытания модифицированной инактивированной адьювант- вакцины «ЭВАК» против инфекционного эпидидимита баранов в 2-х хозяйствах Астраханской области мы предлагаем ее внедрить в практику и применять для оздоровления неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов хозяйств. Результаты исследований использованы при разработке «Временной инструкции по применению вакцины «ЭВАК» против инфекционного эпидидимита баранов (ИЭ)», представленной к рассмотрению нз Ученом Совете ВИЭВ.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Павлова А. В. Иммуногенные свойства инактивированной

адьювант -вакцины «ЭВАК» в опыте на морских свинках \ А. В. Павлова, М. П. Альбертян\\ «Ветеринарная патология», №1, 2006, стр. 102-105.

2. Павлова А. В. Опыт по титрации штамма Вг. ovis 8406

на морских свинках и баранчиках\ А. В. Павлова, М. П. Альбертян\\ «Ветеринарная патология», №1, 2006, стр. 105-107.

3. Павлова А. В. Изучение вирулентных свойств культуры из штамма Вг. ovis 8406 на морских свинках и баранчиках \М.П. Альбертян, М.И. Искандеров,

А.И. Федоров, А. В. Павлова\\ Материалы международной научно- практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных», М., 2006г., с. 145-147.

4. Павлова А. В. Основные биологические свойства усовершенствованной инак-тивированной адъювант- вакцины «ЭВАК»\ М.П. Альбертян, М.И. Искапда-ров, А.И. Федоров, А. В. Павлова\\ Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных», М., 2006 г., с. 148-150.

Принято к исполнению 27/10/2006 Исполнено 30/10/2006

Заказ № 824 Тираж: 100 экз.

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 Москва, Варшавское ш., 36 (495) 975-78-56 www.autoreferat.ru

Оглавление диссертации Павлова, Анна Владимировна :: 2006 :: Москва

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Историческая справка и распространение инфекционного эпидидимита баранов.:.

2.2 Характеристика возбудителя.

2.3 Диагностика инфекционного эпидидимита баранов.

2.4 Специфическая профилактика.

2.5 Меры борьбы.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.2 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.2.1 Определение безвредности модифицированной вакцины «ЭВАК».

3.2.2 Результаты изучения реактогенности адъювант- вакцины «ЭВАК».

3.2.3 Результаты изучения антигенных свойств модифицированной инактивированной адъювант- вакцины «ЭВАК».

3.2.4. Результаты изучения иммуногенных свойств вакцины «ЭВАК».

3.2.5. Результаты испытания эффективности модифицированной вакцины

ЭВАК» в производственных условиях.

5.ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

6. ВЫВОДЫ.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕННЫХ НАЗВАНИЙ

М.к. - микробные клетки

РА - реакция агглютинации

РСК - реакция связывания комплемента

РДСК - реакция длительного связывания комплемента

РБП - Роз Бенгал проба

ГОА - гидроокись алюминиевый

ИЭ - инфекционный эпидидимит

РНГА - реакция непрямой гемоагглютинации

РДП - реакция диффузной преципитации

РНИФ - реакция непрямой иммунофлуорисценции

ИФА - иммуноферментный анализ

РИД - реакция иммунодиффузии

РП - реакция преципитации

МППГГА - мясо- пептонный печеночный глюкозо- глицериновый агар МППГТБ - мясо- пептонный печеночный глюкозо- глицериновый бульон Млрд. - миллиард

ИДюо - минимальная инфицирующая доза

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Павлова, Анна Владимировна, автореферат

Актуальность темы. В последние годы важной проблемой в овцеводстве является борьба с инфекционным эпидидимитом баранов (ИЭ), вызываемым Brucella ovis. Инфекционный эпидидимит баранов наносит значительный экономический ущерб овцеводству, обусловленный недополучением приплода, преждевременной выбраковкой маточного, в т.ч. племенного поголовья овец и баранов- производителей, уничтожением большого количества спермы, предназначенной для искусственного осеменения, затратами на проведение профилактических и оздоровительных мероприятий.

Борьба с инфекционным эпидидимитом баранов в большинстве случаев недостаточно эффективна из-за отсутствия средств специфической профилактики, включение которой в комплекс противоэпизоотических мероприятий значительно повысит ее эффективность (Г. Ш. Абулхаиров, В. А. Ромахов 1991; А.Ф. Руденко 1987; В. Аманжолов, 1981; Б. Н. Афанасьев, 1980;

B.И. Ким, 1978; M.Afzal, С. V. Kimberling, 1986).

Вместе с тем установлено, что при бруцеллезе иммунитет непродолжительный и может быть преодолен массивной дозой возбудителя, даже после естественного переболевания, однако применение вакцин при одновременном выполнении ветеринарно-санитарных мер дает положительный результат. Поэтому многие исследователи за рубежом и в нашей стране занимаются изысканием более современных противобруцеллезных вакцин (Е.

C. Орлов, П. С. Уласевич и др., 1976).

Biderstein, Mc. Gowan, R. Harzold, 1962; L. Kater, V. Hartley, 1963; Т. K. Касымов, 1988) и некоторые по недостаточно выраженным иммуногенным свойствам.

В лаборатории по изучению бруцеллеза ВИЭВ совместно с лабораторией биохимии была разработана инактивированная адъювант- вакцина против инфекционного эпидидимита баранов. В качестве адъюванта была использована смесь, содержащая 84% минерального масла ПЭС-3 и 16% безводного ланолина. Исследования показали, что препарат обладает сильно выраженной реактогенностью. У 8-10 процентов привитых животных на месте введения вакцины наблюдалось образование инкапсулированных соединительно- тканных гранулем, а у части животных - асептические абсцессы.

В связи с этим для конструирования вакцины, лишенной этого недостатка, масляно- ланолиновый адъювант заменили гелью гидроокиси алюминия, изменили концентрацию микробных клеток антигена. Поэтому оценка эффективности этой модифицированной вакцины является актуальной.

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты изучения безвредности, реактогенных, антигенных, и иммуногенных свойств модифицированной адъювант- вакцины «ЭВАК»;

- результаты испытания вакцины в неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов хозяйствах.

Цель работы. Целью настоящей работы являлась оценка модифицированной, инактивированной, экологически безопасной адъювант-вакцины «ЭВАК» из штамма 64/2 Бруцелла овис против инфекционного эпидидимита баранов.

Основные задачи исследований:

1. Изготовить опытные серии модифицированной вакцины «ЭВАК.

2. Изучить безвредность вакцины и ее реактогенные свойства.

3. Изучить антигенные свойства модифицированной инактивированной адъювант- вакцины «ЭВАК».

4. Изучить иммуногенные свойства вакцины в лабораторных условиях.

Научная новизна. Впервые в лабораторных и производственных опытах на баранах, овцах, морских свинках, кроликах и белых мышах изучены безвредность, антигенные, иммуногенные свойства, а также профилактическая эффективность модифицированной инактивированной адъювант- вакцины «ЭВАК» в профилактике и борьбе с инфекционным эпидидимитом баранов. Показана ее безвредность, антигенные, иммуногенные свойства, эффективность в производственных условиях. Ее применение позволяет оздоровить неблагополучные стада от инфекционного эпидидимита в течение 1,5-2 лет.

Практическая ценность. Внедрение вакцины в ветеринарную практику позволит значительно сократить сроки оздоровления неблагополучных хозяйств по инфекционному эпидидимиту баранов и снизить экономический ущерб, наносимый этой болезнью.

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты изучения иммуногенных, антигенных, реактогенных свойств усовершенствованной инактивированной адъювант- вакцины «ЭВАК» в лабораторных опытах на морских свинках, баранах, а также безвредности препарата на кроликах и белых мышах; противоэпизоотическая эффективность усовершенствованной инактивированной адъювант- вакцины «ЭВАК» из штама Вг. оу1б 64/2 в профилактике и борьбе с инфекционным эпидидимитом баранов.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на:

- межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ в 2006 г. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа представлена в одном томе, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и практических предложений. Диссертация изложена на 111 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 19 таблицами. Список использованной литературы включает 169 наименований, в т.ч. 81 иностранных авторов.

Заключение диссертационного исследования на тему "Эффективность модифицированной инактивированной адъювант-вакцины "ЭВАК" при инфекционном эпидидимите баранов"

5. ВЫВОДЫ

1. Модифицированная инактивированная адъювант- вакцина «ЭВАК» безвредна, обладает незначительными реактогенными свойствами, выражающимися образованием воспалительной припухлости на месте введения препарата размером с горошину (0,3 - 0,8 см2), которая полностью рассасывается в течение 30 - 40 дней после иммунизации.

2. Установлено, что модифицированная адъювант- вакцина «ЭВАК» предохраняет от заражения вирулентной культурой 8406 Вг. оу1б 80% морских свинок через 4 месяца после прививки, 75% баранов через 10 месяцев и 83% баранчиков через 12 месяцев после вакцинации.

4. Выявлено, что модифицированная адъювант- вакцина «ЭВАК» не вызывает у привитых баранов образование противобруцеллезных антител, что позволяет исследовать животных на «классический» бруцеллез с единым антигеном, в любые сроки после вакцинации.

5. Иммунизация баранов вакциной «ЭВАК» в общем противоэпизоотическом комплексе мер, позволяет оздоровить неблагополучные по инфекционному эпидидимиту баранов хозяйства.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

С учетом результатов экспериментальных исследований и производственного испытания модифицированной инактивированной адъювант- вакцины «ЭВАК» против инфекционного эпидидимита баранов в 2-х хозяйствах Астраханской области мы предлагаем внедрить ее в практику и применять для оздоровления неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов хозяйств. Результаты исследований использованы при разработке «Временной инструкции по применению вакцины «ЭВАК» против инфекционного эпидидимита баранов (ИЭ)», представленной к рассмотрению на Ученом Совете ВИЭВ.

Заключение.

Таким образом, из обзора литературы по диагностике и специфической профилактике инфекционного эпидидимита баранов следует, что среди иследователей нет единой точки зрения о роли специфической профилактики в борьбе с этим заболеванием, о наиболее иммуногенной вакцине и методов их применения. Противоречивость литературных данных указывает на целесообразность совершенствования специфической профилактики болезни, и необходимость внедрения экологически безопасной и высокоиммуногенной инактивированной вакцины.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Вакцина «ЭВАКСТ» на базе адъюванта, состоящего из минерального масла ПЭС - 3 и безводного ланолина была разработана профессором В.А. Ромаховым в соавторстве с кандидатом биологических наук Г.И. Устиновой.

Исследования показали, что вакцина на основе данного адъюванта сильно реактогенна. На месте введения она вызывает образование подкожных воспалительных гранулем и асептических абсцессов от 20 - 60 см2 до 80-100 л см . У 8 - 12 % привитых животных гранулемы сохранялись до конца их эксплуатации.

Работу по усовершенствованию вакцины «ЭВАК» проводили доктор ветеринарных наук М.П. Альбертян и кандидат ветеринарных наук М.И. Искандаров. В качестве адъювантов были испытаны французское минеральное масло «Маркол» и адъювант Института защиты животных. Исследования показали, что серии вакцины «ЭВАК», изготовленные на основе указанных адъювантов также сильно реактогенны. В связи с этим масляный адъювант заменили на гель гидроокиси алюминия. Лабораторные опыты и производственное испытание показали, что усовершенствованные серии вакцины «ЭВАК», изготовленные на базе гидроокиси алюминия обладают незначительной реактогенностью. На месте введения препарата образовались гранулемы величиной с горошины. Производственное испытание вакцины в 20 неблагополучных по инфекционному эпидидимиту хозяйствах 4-х районов Астраханской области проводили М.П. Альбертян и В.И. Мельниченко.

Лабораторные опыты проводили на морских свинках массой 300-350 г, кроликах массой 2-2,5 кг, баранчиках 5-6 месяцев и белых мышах массой 18 -20 гр. Всего было проведено 4 опыта с использованием 75 морских свинок, 41 баранчиков, 2 кроликов и 10 белых мышей.

Для иммунизации подопытных животных были использованы:

1. Вакцина из штамма Вг. теШег^Б Рев-1.

2. Усовершенствованная инактивированная адъювант- вакцина «ЭВАК» (серии № 10,11,12).

Схема приготовления вакцины «ЭВАК».

1. Приготовление питательных сред для культивирования штамма Бруцелла овис 64/2.

2. Получение и накопление бактериальной массы.

- Высев из ампул лиофилизированной культуры штамма Бр. овис 64/2 на скошенный МШИ ГА или эритритагар в пробирках и на этот же агар в чашках Петри (1-я генерация). Контроль чистоты культур (микроскопический и макроскопический).

- Выращивание материала на М11111 ГА или эритритагаре в пробирках для получения матричной культуры (2-я генерация).

- Контроль инактивации полученного антигена.

3. Приготовление вакцины.

- В качестве адъюванта использовали гель гидроокиси алюминия.

- Разлив гидроокиси алюминия в стеклянные флаконы по 67 мл и автоклавирование в течение 30 минут при температуре 115 + 2 °С

- Контроль стерильности адъюванта путем высева на МПБ, МПА, МППБ под вазелиновом маслом и агар Сабуро.

- Приготовление смеси (антиген + адыовант) в соотношении 3,2 : 1.

- Контроль качества смеси антиген - адъювант.

- Расфасовка смеси антиген - адъювант во флаконы емкостью 100, 50 и 20 мл и их маркировка.

- Контроль вакцины «ЭВАК» на безвредность, реактогенность, антигенность и иммуногенность.

Для определения безвредности смесь вакцины из 5 флаконов в равных количествах вводили подкожно по 0,4 мл 10 белым мышам, в область спины и 2 кроликам, массой 2 - 2,5 кг по 0,5 мл подкожно в боковую стенку туловища слева и справа (всего 1 мл). За животными вели наблюдение в течение 10 дней. Данную серию вакцины считали безвредной, если за период срока наблюдения все животные оставались живыми. При гибели любого количества животных, проверку проводили на удвоенном количестве препарата данной серии и удвоенном количестве животных. При гибели хотя бы одного животного при повторной проверке серию препарата браковали.

В лабораторном опыте вакцину вводили 16 баранчикам подкожно за локтевым суставом слева в бесшерстную часть в дозе 5 млрд. м.к., в объеме 0,5 мл.

В колхозах «Рассвет» и «Родина» вакцину «ЭВАК» применяли по следующей схеме: перед иммунизацией баранов- производителей, баранов-пробников и баранчиков старше 6-и месяцев исследовали на инфекционный эпидидимит баранов серологическим (РДСК) и дополнительно клиническим методами.

Оставшихся в отарах условно здоровых баранов колхоза «Рассвет» разделили на две группы. Животных первой группы (50 голов), иммунизировали вакциной «ЭВАК», серия № 11, контроль 11. Вакцину вводили подкожно в бесшерстную поверхность грудной клетки за локтевым суставом в дозе 0,5 мл (5 млрд. микробных клеток), а баранов второй группы (49 голов), оставили непривитыми, в качестве контроля. В колхозе «Родина» все условно здоровые животные (223) головы, были привиты аналогично 1-й группы колхоза «Рассвет».

Изучение антигенных свойств модифицированной инактивированной адъювант- вакцины «ЭВАК» проводили на морских свинках и баранчиках.

Для введения вакцины «ЭВАК», серия № 11 готовили общую пробу из 3-х флаконов с вакциной. Иммунизировали 10 морских свинок. Вакцину вводили подкожно, в область паха, в дозе 250 млн. микробных клеток в объеме 0,2 мл.

Для сравнения была взята вакцина Яеу - I Вг. теШегшБ, которую вводили 10 морским свинкам подкожно, в область паха слева, в дозе 100 млн. микробных клеток в объеме 0,2 мл.

В целях выяснения иммунологического ответа на введение вакцины -сыворотку крови привитых животных исследовали в Роз бенгал проба (РБП), реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента (РСК) на бруцеллез и в реакция длительного связывания комплемента (РДСК) на инфекционный эпидидимит баранов.

Реакции на «классический» бруцеллез и на инфекционный эпидидимит ставили в соответствии с «Наставлением по диагностике бруцеллеза животных» (утверждено Департаментом ветеринарии 29.09.03 г.), «Наставлением по диагностике инфекционной болезни овец, вызываемой бруцелла овис (инфекционный эпидидимит баранов)», утвержденным 13.11.1999 г. с использованием антигена Вг. оу!з Щелковского биокомбината.

Перед постановкой РБП исследуемые сыворотки выдерживали 30 мин при комнатной температуре. Затем на сухие пластинки с лунками наносили исследуемые сыворотки крови в дозе 0,03 мл. Рядом с сывороткой вносили 0,015 мл антигена. Ручным смесителем смешивали антиген и сыворотку до получения однородной жидкости. Пластинку ставили на 4 мин на специальный автоматический смеситель. Учет реакции проводили в течение 4 мин после смешивания сыворотки с антигеном. Реакцию считали положительной при наличии выраженных окрашенных бруцелл антигена в виде хлопьев розового цвета.

Серологические исследования проводили с постановкой контроля, соответствующего каждой реакции.

Для определения иммуногенных свойств модифицированной инактивированной адъювант- вакцины «ЭВАК», было необходимо провести титрацию штамма Вг. оу1б 8406 и выяснить минимальную инфицирующую дозу Вг. оу1з. Исследования проводили на морских свинках и баранчиках.

Для опыта на морских свинках взяли 45 животных весом 300 - 350 гр.

Предварительно все морские свинки были проверены на бруцеллез (РА, РСК, РБП) и на инфекционный эпидидимит (РДСК). Положительно реагирующих ни в одной реакции не выявлено.

Морские свинки были разделены на 9 аналогичных групп по 5 животных в каждой.

Двухсуточную агаровую культуру Вг. оу1б 8406 вводили подопытным животным подкожно в область левого паха в дозах 10, 100, 1 тыс., 10 тыс., 100 тыс., 1 млн., 10 млн., 100 млн. и 1 млрд. микробных клеток.

Перед заражением культуру штамма Вг. оу1б 8406 проверяли на чистоту роста, а затем смывали стерильным физиологическим раствором. Провели последовательное 10-ти кратное разведение в 10-ти пробирках и по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л. А. Тарасевича, подогнали под стандарт 10 единиц (1,7 млрд. м.к./мл).

Для проверки правильности введенной дозы культуры Вг. оу1б 8406, из взвеси, содержащей 1 тыс. микробных клеток сделали посев на 3 чашки Петри с сывороточно- декстрозным агаром по 0,1 мл. Посевы инкубировали в термостате в течение 4-х суток при температуре 37 - 38 °С. После подсчета колоний, выросших на 3-х чашках, вычислили среднее количество, которое составило 103 колонии. Это соответствует 1030 живым бруцеллам, содержащимся в 1 мл испытуемой взвеси. Таким образом, количество фактически введенных живых микробных клеток при заражении морских свинок составило 10,3, 103, 1 тыс. 30, 10 тыс. 300, 103 тыс., 1 млн. 30 тыс., 10 млн 300 тыс., 103 млн. и 1 млрд. 30 млн.

Через каждые 10-11 дней после заражения от животных брали кровь для серологического исследования на инфекционный эпидидимит (РДСК) и на бруцеллез (РА, РСК, РБП).

Убой, патологоанатомическое и бактериологическое исследование подопытных морских свинок проводили через 30-35 дней после заражения.

Для проведения бактериологического исследования брали материал: от морских свинок - паховые, шейные, подчелюстные лимфоузлы, печень, селезенку (2 посева), костный мозг.

Посевы делали на одну пробирку мясо-пептонно-печеночно-глюкозо-глицериновый бульон (МППГГБ) и на 2 пробирки МППГГА с добавлением 10 нормальной сыворотки животных. Посевы инкубировали в термостате при температуре 37-38 °С 30 суток. Проверяли рост культур каждые 6-7 дней.

Полученные вторичные культуры проверяли в РА на стекле с Б -бруцеллезной сывороткой и Я - сывороткой против Вг. оу!з. Проводили микроскопию мазков, окрашенных по Козловскому. Использовали реакцию термоагглютинации и пробу с трипофлавином. Исследование вторично выделенных культур показало, что с овисной сывороткой и в растворе трипофлавина (1: 500) культуры давали ярко выраженную агглютинацию, а также положительную реакцию термоагглютинации, в то время как с бруцеллезной Э - сывороткой ни одна культура не агглютинировалась.

Для исследования колоний по Уайт - Вильсону каждую выделенную культуру засевали на две чашки с сывороточно- декстрозным агаром так, чтобы получить рост 100 - 200 отдельных колоний. Чашки с посевами инкубировали в термостате в течение 3-4 суток. Окраску выросших колоний проводили в течении 30 секунд раствором кристалл- виолета 1 : 2000. После окраски колонии просматривали под лупой. Все выросшие колонии были окрашены в темный цвет (Я - форма). Колоний неокрашенных (8 - форма) или находящихся в промежуточной форме (ЯБ - БЯ) мы не обнаружили. В качестве контроля использовался гладкий штамм Вг. теШе^Б 16 М, который не окрашивался в течение 30 секунд.

Для опыта на баранах взяли 12 животных в возрасте 5-6 месяцев. Перед началом опыта баранчиков проверили на бруцеллез (РБП, РА, РСК) и на инфекционный эпидидимит (РДСК). Ни в одной реакции животные не дали положительный результат. Животных разделили на 4 аналогичные группы по 3 головы в каждой.

Двухсуточную агаровую культуру штамма Вг. оу1б 8406 вводили подкожно за локтевым суставом с левой стороны в бесшерстную часть в дозах: 50 млн., 500 млн., 5 млрд. и 50 млрд. микробных клеток. Для заражения животных дозой 50 млрд. микробных клеток изготовили отдельную, более концентрированную взвесь культуры.

Кровь для серологических исследований на бруцеллез с единым бруцеллезным антигеном в РА, РСК, в РБП с цветным антигеном и на инфекционный эпидидимит с овисным антигеном в РДСК брали через каждые 10 - 11 дней после заражения. При исследовании сывороток крови на бруцеллез положительных реакций не было.

Убой, бактериологическое и патологоанатомическое исследования животных проводили через 30 - 35 дней после заражения.

От каждого животного посевы делали из предлопаточных, подчелюстных, заглоточных, тазовых, паховых, надвымянных, средостенного лимфатических узлов, семенников, придатков семенников, селезенки (2 посева), печени.

Результаты посевов учитывали через 30 дней, просматривая каждые 5-6 дней.

Из каждого объекта посевы делали на 3 пробирки - на одну пробирку МППГГБ и две пробирки МППГГА.

Посевы инкубировали в термостате при температуре 37-38 °С в течение 30 суток. Просматривали посевы каждые 5-6 дней.

Проверку морфологических свойств выделенных культур в мазках, приготовленных из 2-х суточной агаровой культуры проводили путем окраски по Граму, Козловскому и по Шуляку-Шин.

Иммуногенные свойства вакцины изучали на морских свинках и баранчиках.

В опыт было взято 30 морских свинок, которых разделили на 3 группы по 10 животных. Первую группу вакцинировали вакциной «ЭВАК», вторую -Яеу-1, третья - контрольная (не вакцинированная). Через 4 месяца после вакцинации морских свинок заражали вирулентной культурой Вг. оу1б 8406. Культура вводилась в дозе 5 млн. микробных клеток (5ИДюо)- Через 38 дней после заражения подопытных и контрольных животных убили для бактериологического и патанатомического исследований. Бактериологические и патанатомические исследования проводили согласно действующего наставления.

Критерием иммунного состояния служило отсутствие выделения вирулентной культуры Вг. из организма животных при бактериологическом исследовании.

Убой, патологоанатомическое и бактериологическое исследование проводили через 35 дней после заражения.

Иммунитет у баранчиков вакцинированных «ЭВАК» (серия №11) проверили через 12 месяцев после прививки, путем подкожного заражения их вирулентной культурой Вг. оу1б 8406 в дозе 2,5 млрд. микробных клеток (5 ИДюо).

Испытание эффективности модифицированной вакцины «ЭВАК» в производственных условиях проводили в колхозе «Рассвет» Наримановского района и в колхозе «Родина» Харабалинского района Астраханской области, неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов. Мероприятия по профилактике и борьбе с инфекционным эпидидимитом проводили в соответствии с «Инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации инфекционной болезни, вызываемой Бруцелла овис (инфекционный эпидидимит баранов)», утвержденной Главным Управлением ветеринарии РФ в 1992 г. и «Наставлением по диагностике инфекционной болезни овец, вызываемой Бруцелла овис (инфекционный эпидидимит баранов)» от 13 ноября 1991 г.

До иммунизации животных провели ретроспективный анализ эпизоотической ситуации в этих хозяйствах.

С целью определения иммунологического ответа на введение вакцины через 15 дней, а в дальнейшем через каждые 30 дней после вакцинации, проводили исследование сывороток крови привитых баранов в РДСК с овисным антигеном. Одновременно животных исследовали на бруцеллез (РА, РСК, РБП). Серологические исследования проводили согласно действующего наставления . Животных контрольной группы исследовали по этой же схеме.

Методики отдельных исследований изложены в соответствующих разделах диссертации.

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2006 года, Павлова, Анна Владимировна

1. Абдулаев У. К эпизоотологии и диагностике инфекционного эпидидимита баранов в Таджикистане// Сельское хозяйство Таджикистана, 1973, 10, 37-39.

2. Абдулаев У. Распространение инфекционного эпидидимита в хозяйствах Таджикистана и эффективность мер по их оздоровлению//Автореф. дисс. на соиск. уен. степени канд. вет. наук, Москва, 1975.

3. Абулхаиров Г.Ш. Антигенные и иммуногенные свойства инактивированной эмульсин-вакцины против инфекционного эпидидимита баранов//Автореф.дис.канд.вет.наук; ВИЭВ М., 1994.

4. Альбертян М.П., Степнова С.Н., Разиков Ш.Ш., Быков В.П., Павлов Н.С., Устаев В.М. Адъювант-вакцина ЭВАК против инфекционного эпидидимита баранов Ветеринария, 2003,12, 20-22.

5. Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И. Свойства протективного антигена из разных штаммов бруцелл //Ветеринария, 2006, 10, 30-32

6. Альбертян М.П., Искандаров М.И., Федоров А.И. Иммунобиологические свойства бруцеллезного антиген полимерного конъюгата // Ветеринарная патология, 2006,3,122-127

7. Аманжодов Б.А. Иммуногенные свойства противобруцеллезных вакцин при инфекционном эпидидимите баранов. Тр. ВИЭВ. М., 1978, т. 47, 84-87.

8. Аманжолов Б.А. Изучение возможности ревакцинации овцематок вакциной из штамма Рев-1 Вопр. профилактики инфекционных болезней с.-х. животныхв условиях промышленных комплексов, 1986, 24-26.94 ^

9. Андреевский В.Я. Заболевания семенников, как причина бесплодия у барановю // Всесоюзн. науч. инженерно- техн. общества жив-ва. Ростоблхозиздат, 1937, 42.

10. Андреевский В.Я. Влияние заболеваний машонки на спермопродукцию у баранов//Доклады ВАСХНИЛ, 1939, вып. 13, 45-48.

11. Андреевский В.Я. К изучению орхито- эпидидимитов у баранов// Советская ветеринария, 1940,10, 38-41.

12. Андреевский В.Я. Орхито- эпидидимиты у баранов как симптомы бруцеллеза// Бруцеллез сельскохозяйственных животных, Москва, 1940.

13. Афанасьев Б.Н Изучение этиологии орхито- эпидидимитов баранов-производителей на Ставропольской станции искусственного осеменения. -Сборник науч. трудов Ставропольской н.-и. веет, станции, 1971, вып.5, 179-181.

14. Афанасьев Б.Н Бактериологическая диагностика инфекционного эпидидимита баранов, вызываемого бруцелла овис. Сборник науч. трудов Ставропольской н.-и. веет, станции, 1974, вып.№ 7, 89-92.

15. Афанасьев Б.Н Диагностика инфекционного заболевания овец, вызываемого Бруцелла овис, и меры борьбы с ним// Автореф. дис. канд. вет. Ставрополь, 1974.

16. Афанасьев Б.Н Оценка серологического и клинического методов диагностики инфекционного эпидидимита баранов, вызываемого бруцелла овис// Сборник науч. трудов Ставропольской н.-и. веет, станции, 1974, вып.№ 7, 81-85.

17. Афанасьев Б.Н. Сравнительное изучение в РДСК антител, вызываемых Br.melitensis, Br.abortus и Br.ovis //Сб. науч. работ СевероКавказский зональный науч.-исследовательский ветеринарный институт, 1979, Т. 21, 29-35.

18. Афанасьев Б.Н.; Таран И.Ф.; Щедрин В.И.; Локтев H.A.; Лунина Е.И. Изучение иммуногенности некоторых вакцин при инфекционном эпидидимите баранов// Диагностика, профилактика и лечение болезней с.-х. животных в зоне Северного Кавказа, 1984, 14-23

19. Вершилова П.А.// Бруцеллез, 2-е перераб. и допол., Москва, «Медицина», 1972.

20. Гаврилов П.П. К изменчивости Br. ovis (сообщение второе)// Вестник сельскохозяйственной науки, Алма-Ата, 1972,9, 85.

21. Гаврилов П.П. К изменчивости Br. ovis (сообщение третье)// Вестник сельскохозяйственной науки, Алма-Ата, 1973,2,113-114.

22. Гинзбург В.В. Соматический антиген в S и R вариантах бруцелл//Сборник науч. трудов Лен. НИВИ, 1963, вып. 10,20-33.

23. Гинзбург В.В. Исследование природы Brucella ovis// Сборник работ Ленинградского вет. ин-та, 1967, вып.28,20-25.

24. Глотов Г.Н., Степанова К.Е., Волченко A.A., Паутов В.В., Турова Р.И. К эпизоотологии заболевания овец, вызываемого Бруцелла овис. Ветеринария. 1975. - 3 7. - с. 50-52.

25. Далгат М.М. Инфекционный эпидидимит баранов и меры борьбы с ним в Дагестане//Сборник науч. работ Дагестанского НИ вет. ин-та, 1968, т.2,421-423.

26. Драновская JI.B., Кайтмазова Е.И. Метаболические тесты в дифференциации бактерии рода Brucella и их оценка//Материалы международной конф. по бруцеллезу, 1971.

27. Иванов М.М. Складиков Р.В. Сравнительная иммуногенная оценка применения бруцеллезных вакцин//Ветеринария, 1970,4, 53-57.

28. Иванов М.М., Глонти Т.М. Сравнительная оценка иммуногенных свойств вакцины против бруцеллеза овец//Труды ГНКИ вет. препаратов, 1973, 91-97.

29. Иванов М.М., Кириллов JI.B. Материалы по изучению живых вакцин против бруцеллеза овец//Труды науч.- контрольного ин-та вет. препаратов, 1967, т. 14,126-133.

30. Иванов Н.П. Новые подходы к изготовлению диагностических препаратов при бруцеллезе и инфекционном эпидидимите баранов Совершенствование систем и методов в борьбе с бруцеллезом и туберкулезом животных, 1987, 16-26/

31. Игнатов П.Е., Федоров А.И., Григорьева Г.И. Способ профилактики бруцеллеза // Соврем.пробл.профилактики зооноз.болезней и пути их решения.-Минск,1987,102.

32. Касьянов А.Н. Инфекционный эпидидимит//Болезни овец и коз, Москва, Колос, 1973.

33. Касьянов А.Н., Ромахов В.А. Результаты изучения эпизоотологии, диагностики и специфической профилактики инфекционного эпидидимита баранов// Материалы Всесоюз. науч. конф. По диагностике и профилактике бруцеллеза и туберкулеза. Омск, 1980,290-292.

34. Ким В.И., Вождаев Н.С. Инфекционный эпидидимит баранов в хозяйствах Киргизии//Инфекционные болезни овец, Фрунзе, 1976, 204207.

35. Колычев Н.М., Трофимов И.Г. Казеозный лимфаденит (псевдотуберкулез) овец // Омский гос. ин-т вет. медицины, 1993.

36. Косилов И.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных// Новосибирск., 1992,226-249.

37. Косилов И.А.; Аракелян П.К.; Клочков Г.С.; Барабанова Е.Б.; Эпельдимов JI.C. Диагностика латентных форм инфекционного эпидидимита баранов Ветеринария, 1995; N 9, С. 26-29 .

38. Косилов И.А., Аракелян П.К., Хлыстунов А.Г. Оптимальная схема иммунизации баранов против инфекционного эпидидимита с применением вакцины из штамма РЕВ-1 //Состояние, пробл. и перспективы развития вет. науки России. -М., 1999, Т.1, 178-179.

39. Косилов И.А., Аракелян П.К. Оптимизация противоэпизоотических мероприятий при инфекционном эпидидимите баранов // Ветеринария, 2000,4, 15-18.

40. Махамбетов К. Материалы по изучению заболевания овец, вызываемого Brucella ovis в Казахской ССР//Автореферат дисс. на соиск. учен, степени канд. вет. наук, Фрунзе, 1973.

41. Махамбетов К., Студенцов К.П. К вопросу об инфекционном эпидидимите баранов в Казахстане// Вестник с.-х. Науки, Алма-ата, 1972, 11,51-55

42. Мельниченко В.И.; Ромахов В.А.; Устинова Г.И.; Ягудин Р.Г.; Быков В.П.; Павлов Н.С.; Пономарь И.Д. Инактивированная эмульсин-вакцина с иммуностимулятором против инфекционного эпидидимита баранов// Ветеринария, 1998, 3, 15-20.

43. Николаев В.А. О запоздалых и выпавшихреакциях на бруцеллизат у баранов//Советская ветеринария, 1939, 7, 48.

44. Николаев В.А.//Бруцеллез, Сельхозгиз, 1954.

45. Ниязов У.Э.; Шумилов К.В.; Ромахов В.А.; Косилов И.А.; Иванов Н.П. Состояние и перспективы диагностики инфекционного эпидидимита баранов Бюл. ВИЭВ, 1983; Т. 51, с. 56-60

46. Огородникова Т.Н. Характеристика Щ- антигена Вг. оу1б в РДСК с сыворотками овец и кроликов в сравнении с другими О- антигенами бруцелл//сборник раюот Ленинградского вет. ин-та, 1974, в. 39, 321-326.

47. Орлов Е.С., Уласевич П.С., Иванов М.М. Изучение иммунитета у овец, вакцинированных различными штаммами бруцелл// Труды ВИЭВ, 1962, т.29,31.

48. Орлов Е.С., Уласевич П.С., Касьянов А.Н. Инфекционный эпидидимит баранов//ветеринария, 1970,7, 53-54.

49. Орлов Е.С., Уласевич П.С., Шумилов К.В., Касьянов А.Н., Клочков A.A., Ромахов В.А. Усовершенствование средств и методов диагностики и специфической профилактики бруцеллеза// Труды ВИЭВ, 1976, т.44, вып. 1,40-50.

50. Ощепков В.Г. Распространенность и свойства Br.ovis на территории Сибири и Дальнего Востока// Диагностика,лечение и профилактика незараз.и инфекц. болезней с.-х.животных Зап.Сибири. -Омск, 1994, 5461.

51. Передереев Н.И., Касьянов А.Н., Клочков A.A., Бесполько И.Г., Ноздрина Б.М., Алексеев И.А. О природе и свойствах Brucella ovisZ/Материалы нау. произ. конференции по профилактике и личению болезней птиц и с.-х. животных, псков, 1970, 276-281.

52. Петропавловский В.В. Авроров A.A. Хронический кистозный эпидидимит у племенных баранов и связанное с этим бесплодие// Сборник рефератов науч.- произв. Конференции, Ульяновск, 1950, вып.1.

53. Плотников Э.С. Передереев Н.И., Касьянов А.Н. Эпизоотология, диагностика и мероприятия по борьбе с инфекционным эпидидимитом баранов//Материалы нау. -произв. конференции по профилактике и лечению болезней птиц и с.-х. животных, Псков, 1070,305-310.

54. Ромахов В.А. Реакция непрямой гемагглютинации и реакция нейтрализации антител для диагностики инфекционного эпидидимита баранов//Автореф. дис. канд. Веет. Москва 1977.

55. Ромахов В.А. Аллергическая диагностика инфекционного эпидидимита баранов// Бюлл. ВИЭВ Вып. 73-74. М. 1990, 118-128.

56. Ромахов В.А., Ниязов У.Э. Эффективность РНГА и РДП при диагностике инфекционной болезни овец, вызываемой возбудителем бруцелла овис (инфекционный эпидидимит баранов) //Соврем, пробл. профилактики зооноз. болезней и пути их решения. -Минск, 1987,109110.

57. Руденко А.Ф. Эпизоотология и обоснование мер борьбы с инфекционным эпидидимитом баранов Совершенствование мер борьбы с болезнями с.-х. животных, 1987, с. 21-29.

58. Рягузов B.C. Диплококковая инфекция половых органов у овец// Труды Новочеркасскоко зооветеринарного ин-та, 1949, вып. 8, 77.

59. Таран И.Ф. Рыбасов H.A. О возможных путях распространения и эволюции бруцелл// Микробиология, эпидемиология и иммунология, 1971,5.

60. Триленко П.А. Инфекционный эпидидимит баранов// Ветеринария, 1970,7,51-56.

61. Триленко П.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных.-Л.: Колос, 1976.

62. Триленко П.А., Гинзбург В.В., Огородникова Т.Н. Инфекционный эпидидимит баранов вызываемый Brucella ovis// Ветеринария, 1968, 10, 49-52.

63. Триленко П.А., Огородникова Т.Н., Комиссарова Л.И., Фишбейн В.Я. Пескова В.А. специфическая профилактика инфекционного заболевания овец, вызываемого Бр. Овис//сборник науч. трудов Ленинградского вет. ин-та, 1976, в. 43,183-187.

64. Троицкая Л.И., Ощепко В.Г., Клочков Г.С. Сравнительно испытание в РДСК антигенов из Бр. Овис//Сборник науч. работ СибНИВИ, 1975, вып. 25,13-17.

65. Уласевич П.С., Аливердиев A.A., Юсупов О.Ю. Иммунизация овец вакциной из штамма Br. melitensis Rev-1. Ветеринария. 1975. -№ 12. - с. 57-59.

66. Усманова Ф.И., Гаврилов П.П., Бжевская А.Н. Иммунитет у овец привитых вакциной из штамма 19, к заражению культурой бруцелла овис//Вестник с.-х. науки Казахстана, 1973,10,60-62.

67. Усманова Ф.И., Гаврилов П.П., Бжевская А.Н. О специфичноти и чувствительности бруцеллина и бруцелоовина ВИЭВ при инфекционном эпидидимите баранов// Труды Казахского НИ вет. ин-та, 1976, т. 16, 129.

68. Халимбеков М.М., Фарзалием М.М., Панков A.A., Далгат М.М. Псевдотуберкулез баранов с явлениями орхито- эпидидимита// Ветеринария, 1961,9,40-43.

69. Хлыстунов А.Г. Противоэпизоотическая эффективность разных средств и методов специфической диагностики и профилактики инфекционного эпидидимита баранов// Автореф. дис.канд. вет. Наук. М., 1984.

70. Хлыстунов А.Г. Инфекционный эпидидимит баранов (эпизоотический процесс и противоэпизоотическая система) Актуал.пробл.ветеринарии.-Барнаул, 1995, 104.

71. Холицкий Ф.В., Дроздов П.Н. Заболевание семенников, как причина бесплодия у племенных баранов// Труды НЗВИ, 1937, в.4.

72. Шумилов К.В., Альбертян М.П., Клочков А.А.,Ромахов В.А. Биологические свойства вакцинного штамма бруцелла абортус 104-М//Проблемы ветеринарной иммунологии: Труды ВИЭВ.- М.-1983.-Т.57.-с.42-47.

73. Шумилов К.В., Саморуков Ю.А., Бондаренко В.З. Изучение иммуногенных свойст эталонных серий бруцеллезных вакцин//Биологические препараты против инфекционных болезней животных: Сб.науч. трудов.-М.,1981.-с.37-39.

74. Шумилов К.В., ниязов У.Э., Михайлов Н.А. Эталонная серия вакцинного штамма бруцелла мелитенсис Рев-1// // Разработка методов проверки биологических свойств производства штаммов микроорганизмов и диагностических препаратов.-М., 1983.-с.3-5.

75. Юсковец М.К. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. -Москва, 1960.

76. Adams L.G. Enhancement of the Brucella AMOS PCR assay for differentiation of Brucella abortus vaccine strains S19 and RB51. Journal of Clinical Microbiology, 06 1995, Vol. 33, No. 6, p.75-78.

77. Afzal M.; Kimberling C.V. How to control Brucella ovis-induced epididymitis in Veter. Med. (Edwardsville), 1986; T. 81. N 4, p. 364-370

78. Afzal M.; Tengerdy R.P.; Ellis R.P. Protection of rams against epididymitis by a Brucella ovis -vitamin E adjuvant vaccine Veter. Immunol. Immunopathol, 1984; T. 7. N 3/4, p. 293-304.

79. Alton G.G. Brucellosid in goats and sheep. World anim. Rv., 1973, № 5, p. 16-20.

80. Бакърджиев К., Кокошаров Т. Сравнительны диагностични изследования при епидидимит по кочовете, предизвикан от Brucella ovis. -Ветерю. Мед. Науки, 1976, № 2, с. 78-82.

81. Бакърджиев К., Пандъров С., Дмитров А. Жеков Г. Изследования върхя инфекциозния епидидмит по кочовете, причинен от Brucella ovis. -Ветер. Мед. Науки, 1963, г.11,№1, с. 25-38.

82. Baynes J.D. Simmons G.C. Detectio of Actinobacillus seminis in sheep, -the Austral. Veter., 1966, vol. 42, p. 225-228.

83. Bibirstein E.L., McGowan B. Epididymitis in rams. Stuies on laboratory diagnosis. cornelln Veter., 1958, vol.48, № 1, p. 31-44.

84. Bibirstein E.L., McGowan В., Harzold R. Epididymitis in rams. Studies on immunity/ Cornell Veter.,1962, vol. 52, № 2, p. 214.

85. Bibirstein E.L. et el. Epididymitis in rams. Studies in pathogenesis. -Cornell Veter., 1964, vol. 54, № 1, p. 27-41.

86. Buddie M.B. Studies of Brucella ovis, a cause of genital disease of shep in New Zelaand and Australia. hygiene, 1956, vol. 54, № 3, p. 351-364.

87. Buddie M.B. Infection a Brucella ovis cher le montonen Newelle-Zelande. Bull. Off. Internat. Epizoot., 1959, vol.52, p. 328-336.

88. Buddie M.B. Prduction of mmuniti in rams against Brucella ovis infection. -New Zealand Veter., 1962, vol.10, № 5, p. 111-115.

89. Buddie M.B., Boyes B.W. A Brucella mutant causing genital disease of sheep in New Ziland. Aust- Veter., 1953, vol. 29, № 6, p. 144.

90. Cameron R.D.A., Lauerman L.N., Carles A.B. The incidence of Brucella ovis in some Kenya Flocks and its relation ship to clinical and semen quality. -Vet. Rec., 1971, vol.89, № 21, p. 552-557.

91. Carpenter, T.E., Berry S.L., Glenn J.S.-Economics of Brucella ovis control in sheep: Epidemiologic simulation model. J. Amer. Vet. Med. Assoc., 1987, 190(8), p. 977-982.

92. Cassas Olascoaga R. Infections epididymitis of sheep due to Br. Ovis The firsts reported outbreak in Uruguay. An. Fac. Vet. Urug., 1968, vol.11, №9, p. 71-91.

93. Cedro V.C.F., Cisale H.O., Benedetti L.M.E. Inhibición be hemoagglutinacion en el diagnostico de la brucellosis genital ovina a Brucella ovis. Rev. investing. Agropecuarias, 1965, vol.2, № 1, p. 27-34.

94. Clapp K.H. a comparisi of various antigens used in the compliment fixation test fr ovine brucellosis. the Aust. Veter., 1961, vol.37, № 5, p. 188190.

95. Claxton P.D. Brucella ovis of rams. A comparion of two commercial vaccines and two metodes of vaccination. The Austral. Veter., 1968, vol. 44, p. 48-54.

96. Collier J.R/ Molello J.A. Comparative distribution of Brucella abortus, Brucella melitensis and Brucella ovis in experimentally infected pregnant sheep. Am. Veter., Res., 1964, vol. 25, № 107, p. 930-934.

97. Crawford R.C. Some observations on how the veterinary profession can help meat roduction. Proc. N.Z. Soc. Anim. Prod., 1949, № 9, p. 141-152.

98. Cuba-Caparo A., Myers D.M. Pathogenesis of epididymitis caused by Brucella ovis in laboratory animals. Amer. Veter. Res., 1973, vol. 34, № 8, p. 1077-1085.

99. Дмитров А., Бакърджиев К. Спонтанско начение на заболяванията причинен от Brucella ovis. Ветеринарна Сбирка, 1972, г. 69, № 10, с. 2527.

100. Diaz R., Jones L.m. wilsonJ. Antigenis relation ship of Brucella ovis and Brucella melitensis. Bacteriol., 1967, vol.3, № 4, p. 1262-1268.

101. Drimmelen G.C. Diagnosis of brucellosis in sheep annnd goads. South Africa veter. Med. Assoc., 1966, vol.30, № 3.

102. Drimmelen G.C. Brucellosis of sheep and owine. Bull. Off. Internat. Episoot., 1966, vol. 66, № 1, p. 815-824.

103. Estein S.M. A DNA Vaccine Encoding Lumazine Synthase from Brucella abortus Induces Protective Immunity in BALB/c Mice. Infection and Immunity, May 1999, Vol. 70, No. 5, p. 27-33.

104. Гелев И.Върху специфичносста на РСК при бруцеллозата по овцете с отлед на антиенното родство между Br. ovis и Br. melitensis. -Ветеринарно- медицинские науки, 1971, г. 8, № 5, с. 39-42.

105. Гелев И., Думанов И. Серодиагностични изследования при инфекция на овце с Brucella ovis. Ветеринарно- медицинские наукиБ 1971, г. 8, №2, с. 51-54.

106. GamcikP. Epididymitis der Schaf bocke in derSlowake. -Ruchthygiene, 1961, bd. 5, № 2, s. 81-91.

107. Gdowin Т., Hrudka F., Hladecky F., Koppel L.Infeceni epididymida baranow na Strednom Slovensku. Sb. Cs. Akad. Vet. Rada Livocisna Vyrala Veter. Med., 1955, r. 28, c.8.

108. Gdowin Т., Hrudka F., Koppel L. Infekcna epididymida baranow na Strednom Slovensku. Veter. Casopsis, 1956 vol.5,3, p. 161-181.

109. Gianffret A. Epididymite contagiouse du belier a "Brucella ovis" daus le sud Est la France. - BullAcad.Veter., 1972, vol. 45, № 9, p. 469-473.

110. Gianffret A., Sanchis R. Etue d'un foyer d'epididymite contagiouse du belier. Eradiocation de la maladie. Bull. Office int. epizoot., 1974, 82, p. 581586.

111. Gorrie C.I.R. Ovine Brucellosis. Rep- Confer. South. Australis Dept., Agriculture, 1953.

112. Gedro V. Antibody response to Brucella ovis outer membrane proteins in ovine brucellosis. Infect. Immun., 1965, Feb; 58(2), p. 489-494.

113. Gunn R.M., Sanders R.N., Granger W. Studies in fertility in sheep. -Bull. Council for Sei. Industr. Res. Australia, 1942, № 148, p. 1-133.

114. Hajdu S. Etiología hromadne sa vyskytujucich epididymited baranow na Slovensku. Veter. Caspis, 1961, vol.10, № 13, s. 222-236.

115. Hajdu S. Ergevnisse der serologuschen intershung von Scafen auf Brucelloidose innder Slovakei und die Bakamfung dieser krankneif. Arkhiv for exper. Veter. Med., 1962, Bd. 16, H.l, s. 19-28.

116. Hall W.T.K. Epididymitis of rams. Syudies on sensitivityand pathology. The Austral, veter., 1955, vol.31, № 1, p. 7-9.

117. Irache J.M., Esteban M., Murillo M., Garcia G. Brucella ovis antigenic complex bearing poly-£-caprolactone microparticles confer protection against experimental brucellosis in mice.- Vaccine, 2001,19, p. 40 41.

118. Jones L.M., Dubray G., Marly J. Comparison of methody of diagnosis of brucella ovis infection of rams. Ann. Rech. Vet., 1975, vol.6, № 1, p. 11-22.

119. Jow I.C., Graham M.M. Epididimite dei montoni:Prima segnalazione sulla presenza di Brucella ovis in Italia Selez.veter., 1985; Vol.36,N 4, P. 285-291

120. Kimberling C.V. Polymerase chain reaction amplification of the constant and variable regions of the Bacteroides nodosus fimbrial gene. Clin. Microbiol., 1990, Nov; 28(11), p. 2456-2461.

121. Kimberling C., Schweitzer D., Butler J., Bulgin M., Bagley C., Ellis R. A new way to eradicate ram epididymitis. Veterinary Medicine, 1987, April, p. 424-429.

122. Lawrence W.E. Ovine brucellosis. A review of the disease sheep manifested by epididymitis and abortion. Brit. Veter., 1961, vol. 117, № 10, p. 435-447.

123. Lee A.M., Sorivner L.H. An investigation of sever from abortion in ewes. Amer. Vetr. Med. Asson., 1938, vol.2, №1.

124. Lozano G.A. Evalution of a PCR test for the diagnosis of Brucella ovis infection in semen samples from rams //Veterinary Microbiology, 2003,1-2, 65-72.

125. Масалски H. Серологични методы в диагностиката инфекциозния епидидимит по кочовете, причинен от Brucella ovis. Ветеринарна сбирка, 1971, г. 68, № 8, с. 5-8.

126. McFarlane D., Salsbury R.M., Osborne H.G., Jebson J.L., Investigation into sheep abortion in New Zealand during the 1950 lambing season. the Austral. Veter., 1952, vol.28, p. 221-226.

127. Meyer M.E. Phenotipic comparison of Brucella ovis to the DNA-homologous Brucella species. American veter. Res., 1969, vol.30, № 10, p. 1757-1764.

128. Meyer M.E. Cameron H.S. Studies on The Etiological agent of epididymitis in rams. American Veter. Res., 1956, vol. 17, № 64, p. 495-497.

129. Moule G.R. Some problems of sheep breeding in semiarid tropical/ the austral. Veter., 1969, Vol.42, №2, p. 63-67.

130. Murrey R. Scrotal abnormalities in rams in tropical Queesland with particular reference to ovine brucellosis and its control. The Austral. Veter., 1969, vol.42, №2, p. 63-67.

131. Nicoletti P. Further evaluations of serologic test procedures useg to iagnose brucellosis. Am. Vet. Res., 1969, vol. 30, № 10, p. 1811.

132. Nicoletti P. Radial immunodiffusion test with a Brucella polysaccharide antigen for differentiating infected from vaccinated cattle. Clin. Microbiol., 1990, Jul; 10(1), p. 37-41.

133. Nisnasky F. Infekcne zapaly prisimennikov baranov na slovensku a vlastnosti izolovanych brucelovych kmenov. Pol. Nohospodarstvo, 1961,R.S, c.l, s.29-40.

134. Рашев X., Гелев И., Попов Т. Принос към проучването на заразния епидидимит по кочовете. Ветеинарно- Медицинские науки, 1966, г. 9, № 9, с. 917-924.

135. Рашев X., Гелев И., Попов Т. Инфекционный эпидидимит баранов. -Ветеринария, 1969, №1, с. 116-117.

136. Ramos A.A., Mies Pilho A. Epididymitis in rams. A clinical survey in the State of Rio Grande do Sul, Brazil. Vet. Bull., 1968, Abs. 870.

137. Ris D.R. The persistence of antibodies against Brucella ovis and Brucella abortus in rams following vaccination : a field study. New Zealand veter., 1967, vol. 15, № 6, p. 94-98.

138. Ris D.R. The bacteriology and serology of ewes incculated wth viable Brucella ovis organisms. New Zealand Veter., 1970, vol.18, № 1\2, p. 2-7.

139. Ris D.R., Punda W. An indirect haemagglutination test for the detection of Brucella ovis antibodies. New Zealand Veter., 1963, vol.11, № 4, p. 94-97.

140. Sanchis R.; Abadie G. Application d"une technique immunoenzymatique (ELISA) au sérodiagnostic de T'epididymite contagieuse du belier (infection a Brucella ovis) Ree. Med. veter, 1986; T. 162. N 4, p. 477-484

141. Simmons G.C., Hall .T.K. Epididymitis in rams. Preliminary studies on the cocurence and pathogenicity of a brucella -lake organism. The Austral. Vet., 1953,vol. 29,№ 2, p. 33-40.

142. Socel A., Sizanell J., Husar L. Etiologic und das Wesen Epididymita dei Schafboceken in er Slowakei und der Voschlag zur verringrung der Okonomi eher verlucte. Veter. Foc. Kosice, 1958.

143. Ssifres B., Chappel R. Bacteriological diagnosis of infection epididymitis of sheep in Argentina. Rev. Vet. Vener., 1963, vol. 15, p. 328-334.

144. Szabo I., Nyiredy I. A kosok fertozo mellekgerees heregy u lladasanak elofordusala hazankban. Magyar allatorv. Lapja, 1967, vol. 22, № 10, p. 439443.

145. Tengerdy R.P., Ameghino E., Reiman H. Protection of rams against epididymitis by a Brucella ovis-vitamin E adjuvant vaccine. Vet. Immunol. Immunopathol., 1991, Oct; 7 (3-4), p. 293-304.

146. Tudoriu C.D. Sur la nature de Br. Ovis. Bull. Off. Internat. Epizoot., 1965, vol.63, № 7/8, p. 1313-1317.

147. Tudoriu C.D., Andrei D., Draghici D., Moldoveanu P. Stidiu asupta epididymitei berbecilor. Ann. Inst. Patol. Anim. (Bucharest), 1958, vol.8, № 5, p. 5-22.

148. Tudoriu C.D., Andrei D., Cambir S., Moldoveanu P., Iónica C. Studiu epizootologic asupta epididymei infectioase.- Locrarile stiintifice ale Inst. Patol. Si Igiena Anim., 1959, vol. 9, p. 59-69.

149. Tudoriu C.D., Iónica C., Andrei D., Cambir S., Moldoveanu P., Predoriu I. Diagnnnsticul epididymitei infectioase a berbeoilor prin reactil serologice. -Lucradle stiintifice aze Inst. De Patol. Si Igiena anim., 1960, vol. 10, p. 3-8.

150. Tudoriu C.D., Iónica C., Cambir S. Cercetari pentru isolareasitipiazea tulpiniler brucelcide (Br. Ovis) de la beroeci eu epididymita infectiasa. Lur. Inst. Pat. Hygiena. Anim. Bucharesti, 1959, № 9, c. 71-87.

151. Tudoriu C.D., Iónica C., Cambir S., Predoriu I. As peotele infectiei cu Brucella ovis la berbecii reproductitori. Rav. Zootehn. Med. Veter., 1963, an. 13, №9, p. 74-80.

152. Van heerden K., Van Rensburg S., Snyders A., Roux D. Infections infertility in sheep. S. African Vet. Med. Assn., 1958, vol. 29, № 3, p. 223233.

153. Veler L.N. Ameghino C.E. Diagnstico serologico de la Brucellosis ovina caused porla Brucella ovis onediante la prueba de fijaction de complemento. -Rev. Invest. Pecnar, № 1, 1972.

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Эффективность модифицированной инактивированной адъювант-вакцины "ЭВАК" при инфекционном эпидидимите баранов

Оглавление диссертации Павлова, Анна Владимировна :: 2006 :: Москва

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Павлова, Анна Владимировна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Эффективность модифицированной инактивированной адъювант-вакцины "ЭВАК" при инфекционном эпидидимите баранов"

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2006 года, Павлова, Анна Владимировна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций