Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эффективность ассоциированной инактивированной вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней в производственных условиях

775 ОД 2 5 ДЕК яг:]

На правах рукописи.

ЗАБОЛОЦКАЯ ТАТЬЯНА ВИТАЛЬЕВНА

ЭФФЕКТИВНОСТЬ АССОЦИИРОВАННОЙ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА, ПАСТЕРЕЛЛЕЗА И АКТИНОБАЦИЛЛЕЗНОЙ ПЛЕВРОПНЕВМОНИИ СВИНЕЙ В ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ УСЛОВИЯХ

16.00.03.- ветеринарная микробиология, вирусология, эпимотологин, микология и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

МОСКВА, 2000

Работа выполнена в Московской государственной академии ветеринарной медицины н биотехнологии имени К.И. Скрябина.

Научный руководитель:

доктор биологических наук Девришов Д.А.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, нрофессор Л.И. Никифоров доктор ветеринарных наук О.Б. Литвинов

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности.

Защита состоится " ^¿¿¿¿/^Л 2000 г. в ^часов на

заседании диссертационного совета Д120.36.02 в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина по адресу: 109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23, тел. 377-93-83

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МГАВМнБ им. К.И. Скрябина

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного сове'

ноября 2000 г.

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. В условиях промышленного животноводства большое значение приобретает профилактика инфекционных заболеваний. Однообразный рацион, гиподинамия маточного поголовья, перегруппировки способствуют снижению резистентности поголовья. Высокая коицешрация животных на ограниченных площадях комплексов создает идеальные условия для пассирования патогенных и условно-патогенных микроорганизмов на ослабленных животных. Основное место в борьбе с инфекционными заболеваниями в этих условиях приобретает активная иммунизация поголовья. Проблема профилактики смешанных инфекций связана с наличием нескольких возбудителей в хозяйстве. Для получения положительных результатов вакцинации необходимо конструировать ассоциированные вакцины против сочеташш возбудителей, имеющих этиологическое значение в том или ином регионе.

Такие заболевания как сальмонеллез, иастереллез, актинобациллезная плевропневмония свиней наносят хозяйствам значительный экономический ущерб. В настоящее время ассоциированной вакциной против пастереллеза, сальмонеллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней ветеринарная практика не располагает. Следовательно создание данного биопрепарата является актуальной задачей, имеющее научное и практическое значение.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ. Целью работы явилось изучение этиологии смешанных инфекций свиней вызываемых сальмонеллами, пастереллами и актшюбацнллезными бактериями, выделение и идентификация указанных возбудителей, изучение их биологических свойств, а также разработка и испытание в производственных условиях ассоциированной инактивированнои вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и актшгобациллезнон плевропневмонии свиней. Для этого необходимо было решить следующие задачи:

-изучить этиологические факторы смешанных бактериальных инфекций вызывающи патологию органов пищеварения и дыхания у поросят;

-выделить и идентифицировать возбудителей сальмонеллеза пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней

-изучить биологические и антигенные свойства штаммов возбудигелен сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней

-наработать серии ассоциированной инактивнровашюй вакцины против сальмонеллеза, пастереллсза и актинобациллезной плевропневмонии свиней и изучить ее безвредность, реактогеиность и 1шмуногенные свойства на лабораторных животных и свиньях разного возраста

-изучить напряженность иммунитета к сальмонеллезу, иастереллезу и актинобациллезной плевропневмонии у иммунизироваиных ассоциированной вакциной рвотных в динамике

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые установлена ведущая роль сальмонелл, пастерелл и актинобациллезных бактерий в возникновении смешанных инфекций свиней в различных регионах РФ. Разработана технология получения и схема применения ассоциированной инактивированной вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и актшюбациллезной плевропневмонии свиней.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ.

Разработана и испытана в производственных условиях инактивированная ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезой плевропневмонии свиней.

Для изготовления и применения инативированной вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней разработаны тех!шческие условия (ТУ) и наставления по ее применению.

Материалы исследований включены в ТУ на вакцину нрогив гемофилезной плевропневмошш свиней (ТУ-9538-003-46392258-00) и наставление по ее применешио, утвержденные Департаментом ветеринарии МСХиП 14 толя 2000г., а также в ТУ 93-85-022-00008064 на питательную среду на основе ферментативного гидролизата мясокостного фарша тушек пушных зверей для глубинного культивирования микробных культур возбудителей пастереллеза, клебсиеллеза, колибактериоза, сальмонеллеза и протейной инфекции (утверждены Департаментом ветеринарии МСХиП 15 июня 1999 г.).

. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на конференции молодых ученых МГАВМиБ им.К.И.Скрябина и Всероссийской конференции но биотехнологии посвященная 30-летию ВМИТИБП (Щелково, 2000г).

По материалам диссертации опубликовано 2 научные работы. Основные положения диссертационной работы выдвигаемые на защиту:

-изучение этиологических факторов кишечных и респираторных болезней поросят и роли в их возникновении возбудителей сальмонеллеза, пастереллеза и актшюбациллезной плевропневмонии;

-разработка и применение ассоциированной шшктивировалной вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмошш свиней на супоросных свиноматках и поросятах. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на -/О^ страницах машинописного текста. В работе имеются _/£_ таблиц, 1 рисунок и 2 диаграммы. Список использованной литературы включает 147 работ отечествешшх и зарубежных авторов. В приложении представлены копни документов, подтверждающих результаты отдельных этапов работы, их научную новизну и практическую значимость.

Собственные исследования Материалы и методы

Работа выполнена в научно-исследовательской лаборатории инфекционной патологии и биотехнологии МГАВМиБ им.К.И.Скрябина, а также на базе ФГУП "Покровский завод биопрепаратов". Производственные испытания проводили на базе свиноводческого комплекса совхоза "Дороничи" Кировской области, фермерского хозяйства "Дьаанда" и свинокомплекса ТОО "Кыталык-94" Республики Саха (Якутия) и в Ростовской области.

Исследование материала от больных и павших животных, с объектов внешней среды проводили с применением современных методов выделения и идентификации микроорганизмов, включающих бактериологические, серологические, биохимические, а также методы ускоренной идентификации - СИБ (системы индикаторные бумажные) и ПБДЭ ( пластины бактериологические дифференциальные энтеробак-терий) и количественный метод анализа (И.Н.Блохина , Е.С.Ворошш п др. 1990). Вирулентные свойства микроорганизмов определяли на белых мышах массой 16-18 гр. путем инфицирования их взвесью бактериальных культур в дозе 0,5 см3. Наработку экспериментальной серии вакцины производили в биологических ферментерах объемом 0,01 и 0,65м3. Глубшгное культивирование осуществляли в жидкой питательной среде на основе ферментативного гидролизата мясокостного фарша тушек пушных зверей. Для штктиващш штаммов использовали формальдегид, с таким расчетом, чтобы его концентрация в инактивируемом объеме взвеси составила 0,4% с последующей нейтрализацией. Инактивацию культуры проводили в течение 15-20 суток при температуре 37-3 8°С. Для адсорбции антигенов применяли гель гидроокись алюминия (ГОЛ).

Безвредность и реактогетше свойства экспериментальной вакцины изучали на лабораторных животных (белые мыши) и свиньях разного возраста

При изучении иммунологической реактивности у свиней определяли титры сальмонеллезных агглютининов в реакции непрямой агглютинации, превентивную активность сыворотки периферической крови

иммунизированных животных на белых мыщах, уровень в и М в реакции простой радиальной иммунодиффузии по методу Манчини.

Протективную активность ассоциированной вакциш>1 изучали на лабораторных моделях, супоросных свиноматках и поросятах. Полученных цифровой материал обрабатывали методами вариационной статистики в описании И.П. Ашмарина и Л.А. Воробьева (1962)

Результаты исследований Эпнзоотологические данные и этиологические факторы смешанных инфекций молодняка свиней.

Смешанная этиология пневмоэотеритов была подтверждена нашими исследованиями в хозяйствах различных регионов РФ. При проведении эпизоотологичсского обследования животноводческих комплексов и фермерских хозяйств установлено, что в патологии, как взрослого поголовья, так и молодняка свиней заболевания, протекающие с поражением органов пищеварения и дыхания, занимают ведущее место. В таблице 1 приведены данные уровня заболеваемости поросят кишечными и респираторными болезнями.

Табп.1. Уровень заболеваемости пневмоэшеритами поросят (в%)

Наименование хозяйства Заболеваемость поросят (%)

Всего Энтериты Респиратоные нфекции Смешанные респираторно-кишечны инфекции

Свинокомплекс совхоза "Дороничи" 62,3 23,2 12 27,1

Агрофирма "Белая дача" 58,7 21,6 7 30,1

Фермерское хозяйство "Дьаанда" 35,6 11 5,3 19,3

Анализ приведенных данных показывает, что в крупных промышлешгых комплексах уровень заболеваемости значительно выше, чем в мелких фермерских хозяйствах. При всех формах хозяйствования заболеваемость поросят находится на достаточно высоком уровне, при этом преимущественно у больных животных отмечаются одновременно поражения в органах, пшцевареши и дыхания. В большинстве случаев заболевание у поросят начинается диареей, и через 3-5 дней отмечали симптомы поражения органов дыхания (рннит, трахеит, бронхопневмония).

Выделение н идентификация возбудителей пневмоэнтеритов от больиых поросят.

С целью изучения этиологии и степени распространенности возбудителей сальмонеллеза, пастереллеза и актшюбациллезной

плевропневмошш свиней были проведены бактериологические исследования .материала от больных и павших поросят, а также из объектов внешней среды. Всего было обследовано 7 хозяйств, взято 387 проб материала для бактериологических исследований, (в т.ч. материал из неблагополучных хозяйств по сальмонеллезу, актинобациллезнон плевропневмошш и пастереллезу).

Таблица 2. Результаты бактериологического исследования _патологического материала _

Возбудитель Выделено культур Исследуемый материал

Органы павших животных от больных животных Смывы с объектов окр.среды

P.multocida (серовар В) 69 49 20 -

S.typhimurium В 8 - -

S.enteritídis 73 14 38 21

S.dublin 56 4 29 23

S. choleraesuis 7 - 7 -

Proteus 106 42 39 25

K.pneumoniea 67 21 37 9

S.pneumoniae 27 6 21 -

S.aureus 19 2 16 1

E.coli (EPEC) 105 46 45 14

A.pleuropneumoniae 98 17 78 3

Представленные данные свидетельствуют о многообразии этиологических факторов в патологии кишечных и респираторных болезней поросят. Наиболее часто от больных животных выделяли бактерии рода Salmonella, Actinobacillus, Escherichia, Proteus, Klebsiella, Pasteurella. При этом следует отмстить что бактерии рода Salmonella, Actinobacillus, Pasteurella выделяли в основном от павших животных, больных острыми формами инфекции и тяжелобольных.

Таким образом, результаты клшшко-эпизоотологических и бактериологических исследований свидетельствует об инфекционной этиологии кишечных и респираторных болезней у поросят. Значительная место в этиопатогенезе заболеваемости поросят занимают смешанные инфекции с преимущественным сочетанием ассоциаций бактерий рода Salmonella, Pasteurella и Actinobacillus, что иодтвержает актуальность разработки новых биологических препаратов, особенно комплексных и ассоциированных.

Разработка ассоциированной инактнвированной вакцины против сальмоиеллеза, пастерсллсза и акгннобацнллезной плевропневмонии

свиней.

Из многообразия выделенных культур с учетом эпизоотолошческих данных и клинических симптомов отмечающихся у животных при различных ассоциированных инфекциях нами для разработки вакцины были отобраны 6 наиболее часто встречающихся у больных животных штаммов Salmonella, Actinobacillus, Pasteurella - возбудителей пневмоэнтеритов, у которых наиболее полно были изучены биологические свойства с целью их использования для разработки ассоциированной вакцины. Биологические свойства штаммов использованных для разработка вакцины, представлены штаммов в табл.3

Таблица 3 Биологические свойства вакцшшых штаммов

Признак Возбудитель

P.multocida A.pleuiopneu moniae S.typhimuri um S.dublin S.enteritidi s

Окраска по Граму + + +

Подвижность - - + + +

Зависимость роста отДПН ±

Уреаза - + - - -

Индол + - -

Редукция нитратов + + + + +

Сероводород + - + + +

Глюкоза + + + -

Лактоза - + - - -

Маннит - + - + -

Р-галактози- даза +

Каталаза + ± - - -

Мальтоза - ± + + +

Вирулентность №50) внутрибрюшинно для белых мышей млн.микр.кл. 87 167 200 400 200

Адгезивные свойства Не иссл Не иссл. CFAL 1 тип 1 тип

Серологические свойства В 1,5 01,4,5,13: Hi:l,2 09,12: Hg,m,p 09,12 Hg,m

Вирулентные свойства (ЛД5о) всех штаммов определяли путем внутрибрюшинного заражения белых мышей весом 16-18 гр. кратными лозами 800, 400, 200, 100 и 50 млн. микробных клеток по оптическому стандарту мутности в объеме 0,5 см3. Расчет величины ЛД50 производили по методу Кербера в модификации И.П.Аншарина, А.Л.Воробьева.

Для проведения экспериментальных исследований по изучению протективних свойств вакцины были наработаны лабораторные и опытные серии ассоциированной вакцииы. На основании собственных исследований и с использованием общепринятых приемов изготовления вакцинных препаратов, а также методических приемов разработанных научными сотрудниками лаборатории инфекционной патологии и биотехнологии были отработаны режимы культиштрования и инактивации антигенов бактерий, разработаны методы контроля на этапах культивирования и готовой вакцины.

Состав вакцины приведен в таблице.4.

Таблица 4 Состав ассоциированной вакцины против сальмонеллеза,

настереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней.

Компоненты Концентрация млрд.микр.кл в 1 мл.

P.multocida 1 1,5±0,1

P.multocida 2 1,5±0,1

A.pleuiopneumoniae 3,0±0,1

A.pleuropneumoniae 3,0±0,1

Salmonella typhimurium 195 1,0±0,1

Salmonella enteritidis 197 1,0±0,1

Salmonella dubün 196 1,0±0,1

Оценку иммуногенных свойств экспериментальных серий вакцины с различными соотношениями компонентов проводили в опытах на белых мышах (массой 16-181') (табл.5). Из которой видно, что наибольший протективный эффект наблюдается при иммунизации ассоциированной вакциной куда входили все штаммы.

Таблица 5. Оценка иммуногенньгх свойств различных сочетаний компонентов ассоциированной вакцины

Сочетание бактерий, используемых для иммунизации Показатель эффективное™, %

Сальмоиеллезные штаммы 40

Пастереллезные штаммы 33

Актннобациллезные штаммы 26

Комбина1Щя всех компонентов вакцины 93

Контроль (животных не иммунизировали) 0

Также изучали минимальные, оптимальные и максимальные дозы. Вакцину в различных дозах вводили белым мышам однократно подкожно в дозе 0,5 мл.. Первой группе вводили минимальное количество вакцины, второй группе - среднее, третьей - максимальное значение (табл.6)

Таблица 6. Экспериментальные серии вакцины с различной концентрацией антигенов (в объемных процентах).

Компоненты вакцины min средн max

P.multocida 1 1,0 1,8 2,5

P.multocida 2 1,0 1,8 2,5

А. pleuropneumoniae 2,0 3,0 3,5

А. pleuropneuraoniae 2,0 3,0 3,5

Salmonella dublin 0,5 1,0 2,0

Salmonella typhimurium 0,5 1,0 2,0

Salmonella enteritidis 0,5 1,0 2,0

Было установлено отсутствие эдггагонистического действий компонентов вакцины, что обосновывает возможность их ассоциации и их иммунологическую эффективность. При этом протективная активность средней и максимальной концентрации существенно не отличались. Минимальная доза не обеспечивала требуемой активности.

Экспериментальное исаытаиие ассоциированной вакцины против сальмоиеллеза, пастереллеза и актииобациллезной плевропневмонии

свиней

Безвредность и присутствие эффекта суммирования реактогенных свойств в исследуемой ассоциированной вакцине определяли в сравнении с моноантигенами входящими в состав ассоциированной вакцины. С этой целью 50 белым мышам массой но 18-20 гр. подкожно вводили по 0.5 мл. препарата:

1 группа (10 голов) - ассоциировшшая инактивировшшая вакцина;

2 группа (10 голов) - инактивированный сальмонеллезный антиген;

3 группа (10 голов) - инактивированный пастереллезный антиген;

4 группа (10 голов) - инактивированный антиген актииобациллезной плевропневмонии;

5 группа (10 голов) - контроль, вводили стерильный физиологический раствор.

Все животные содержались в одинаковых условиях. Срок наблюдения составил 10 суток. За время наблюдения падежа животных не зафиксировано. Общая реакция организма на введение препаратов (угнетение, отказ от корма) также отсутствовала. У 3-х мышей 1 группы (ассоциировшшая вакцина), 3-х из 3 группы (пастереллезный антиген) и 2-х

из 4 группы (антиген актинобациллезной плевропневмонии) была отмечена местная реакция на введение препаратов - образование безболезненных тестоватых припухлостей размером 0,2-0,3 х 0,3-0,4 см., на месте которых через 5-7 дней образовались корочкн некроза кожи.

По окончании срока наблюдения по одному животному из каждой группы было умерщвлено. При вскрыпш незначительное увеличение регионарных но отношению к месту введения вакцины лимфатических узлов (кроме контрольной группы), изменения во внутренних органах отсутствовали.

Анализ полученных данных позволяет сделать вывод, что ассоциированная вакцина безвредна, суммирования реактогенных свойств не происходит, они остаются на уровне наиболее реактогенного компонента (в нашем случае пастереллезного антигена).

Степень реактогенного воздействия на организм супоросных свиноматок, сохранность и выживаемость потомства оценивали в сравнении с вакциной применяемой в данном хозяйстве ( ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят), одновременно проводили наблюдение за контрольными ( не вакцинированными животными). Иммуттацшо опытных групп проводили двукратно за 45 и 30 дней до опороса: ассоциированную вакцину против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней вводили подкожно в область верхней трети шеи, в объеме 7,0 см3; вакцину против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции - согласно наставлению по применению.

Срок наблюдения за свиноматками - до опороса. Оценивали клшшческое состояние здоровья иммунизированных животных, наличие общей и местной реакщш организма на введение препаратов, температурную реакцию. За время наблюдашя патологических отклонений в протекании супоросности отмечено не было. Опрос свиноматок опытной и контрольных групп прошел в ожидаемые сроки, без осложнений. Физиологическое развитие новорожденных поросят, их жизнеспособность в сравнении с контрольными группами - без отклонений. Количество поросят в помете в среднем на свиноматку 9 голов. Срок наблюдения за поросятами составил 30 дней. За этот период инфекционных заболеваний среди молодняка во всех грушах зарегистрировано не было. Естественный отход был наибольшим в группе контроля (8,5%), наименьшим - в опытной группе (4,2%). Результаты опыта представлены в таблице .7.

Таблица 7 Влияние исследуемой вакцины на организм супоросных

свиноматок

Кол-во Темпера- Местная Кол-во Естеств.

живот- турная реакция Поросят в отход

Вводимый препарат ных в реакция (гол.) помете в молод-няка

группе (гол.) СС.) среднем (гол.) (%)

Ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и АЛЛ 10 38,9 2 9 4,2

Ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции 5 39,0 I 9,2 5,4

Контроль 5 38,7 - 8,6 8,5

Таким образом, вакцина предложенного состава является безвредной для животных, была иммунологически активной и снижала уровень заболеваемости и отхода новорожденных поросят за счет более высоких защитных свойств колостральных антител по сравнению с данными полученными при иммунизации вакцшюй против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции.

Динамика иммуногенеза у привитых животных

Изучение показателей иммунитета у поросят привитых ассоциированной вакциной против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии осуществлялось путем определения уровня иммуноглобулинов классов в и М и динамики образования специфических антител к сальмонеллезному антигену.

Результаты определения уровня антител в динамике у животных иммунизированных ассоциировшшой инакгивированной вакцшюй против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии в сравнении с уровнем у животных вакцинировшшых вакциной ППД, а также не аммонизированных приведены на рис.1. Из представленных данных видно, что титр, антител на 28 день после вакцинации у животных вакцинированных вакциной Г111Д был выше чем при иммунизации опытной вакциной, но в динамике напряженность иммунитета в опытной группе была выше почти в 2 раза, а к 6 месяцам более чем в 2 раза.

Таким образом, при иммунизации животных ассоциировшшой инакгивированной вакциной против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии напряженность иммунитета более высока и к 6 месяцам после вакцинации тшр антител в периферической крови сохраняется на достаточно высоком уровне, что показывает на преимущество предлагаемой вакцины.

Рис. 1 Динамика титров противосальмоиеллезных антител (п=60)

Результаты определения уровня иммуноглобуллинов класса М и б методом радиальной иммунодиффузни в геле по Манчшш приведены на диаграммах 1-2. ~

Диаграмма ¡.Показатели динамики уровня С в сыворотке крови

поросят

25

до вакцинации ч-з14дн ч-э28дн Через 3 Через 6

после 1-й после 2-й мес.после 1-й мес.после 1-й вакцинац. вакцинац. вакц. вакц.

сроки исследований

Исходя из результатов, полученных при исследовании иммунологических реакций на введение ассоциированной инактивировшшой вакцины против сальмонсллеза, иастерсллеза и актинобациллезной плевропневмошш свиней, можно сделать вывод, что при двукратной иммунизации поросят 30 дневною возраста с интервалом в 14 дней в дозе 1,5 см3 не оказывает угнетающего воздействия на иммунологические реакции организма. Напротив, введение препарата вызывает перестройку иммунной системы, направленную на увеличение уровня иммуноглобулинов и повышение титра противосальмонеллезных антител.

Диаграмма 5 Средние показатели уровня 1ц М в сыворотке крови поросят

4,5

□ Ассоциированна я вакцина

□ Вакцина ППД

В Контроль

ч-з14дн. ч-з28дн. ч-зЗмес. ч-збмес.

посла 1-й после 2-й После 1-й После 1-й

вакцинац вакцинац вакц. вакц. сроки исследований

Протсктнвная эффективность ассоциированной вакцины при экспериментальном заражении поросят.

Невосприимчивость иммунных животных к возбудителю инфекции является результатом взаимосвязанного действ! и всех систем организма в целом. Поэтому метод экспериментального заражения наиболее полно выражает степень резистентности организма вакцинированного животного.

Протективную активность определяли к сальмонеллезу, пастереллезу и актинобациллезной плевропневмошш в опыте на поросятах 30-ти дневного возраста. С этой целью были отобраны животные в количестве 24-х голов

клинически здоровые, нормальной упитанности, физиолопгчески развитые, из которых было сформировано 8 групп: животных сформированных по приншшу аналогов были дважды, с интервалом в 14 дней, привиты ассоциированной инактивировашюй вакциной против сальмонелл сза, пастереллеза н актинобациллезной плевропневмонии свиней - в дозе 1,5 см3 подкожно, в область верхней трети шеи. Контрольным - вводили стерильный физиологический раствор в тех же дозах.. Контрольное заражение проводили на 30-е сутки после двукратной вакцинации. Каждым видом возбудителя заражали по схеме : группа опыта + группа контроля. В качестве контрольных штаммов использовали: Pasteurella multocida (серовариант В)-в дозе 13-15 тыс. микробных клеток, Salmonella typhimurium - 15-16 млрд. микробных клеток и Actinobacillus pleuropneumoniae (серовариант 5) - 7-8 млрд. микробных клеток. Срок наблюдения составил 10 дней. Учет результатов проводили по количеству выживших животных.

У животных контрольных групп в течение 24-36 часов после заражения развились резко выраженные клинические признаки соответствующих инфекционных заболеваний. Гибель наступала в течение 2-6 суток. Впоследствии диагноз на сальмонеллез, иастереллез и актинобациллезную плевропневмонию был подтвержден бактериологическими исследованиями патологического материала от павших животных. В группах иммунизированных животных отмечали повышение температуры, угнетение, отказ от корма. Падеж в данных группах был зарегистрирован: при заражешш возбудителем актинобащьчлезной плевропневмошш - одно животное; при заражении возбудителем пастереллеза, а также одно животное при инфицировании смешанными бактериальными культурами.

Результаты опыта представлены в таблице 8

Таблица 8. Результаты экспериментального заражения поросят

Возбудитель Группа Кол-во голов Заболело Пало Эффектов ность, %

А. р1еигорпештюшае 1 опыт 5 1 1 80

Контроль 3 3 3 0

Р. ти1Ьхпс!а II опыт 5 2 1 80

Контроль 3 ,з 2 66,6

Б. ТурЫтипит III опыт 5 1 0 100

Контроль 3 3 3 0

Смесь бактериальных культур lVom.iT 5 2 1 80

Контроль 3 3 3 0

Из результатов данного опыта видно, чго испытуемый препарат обладает высокой протективиой активностью как при моноинфекциях, так и при смешенной инфекции.

Испытание ассоциированном вакцины против сальмонеллеза, пастсреллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней в производственных условиях.

Производственные иснытшшя шшктивированноП ассоциированной вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней проводили в хозяйствах неблагополучных по данным заболеваниям. Всего эксперимиггальной вакциной было привито 658 голов поросят разного возраста,

Животным всех возрастных групп вакцину вводили подкожно, в область верхней трети шеи, двукратно с шгтервалом в 14 дней; поросятам 30-ти дневного возраста в объеме 1,5 и 1,5 см3 ; поросятам откормочной группы (3- мес. возраста) 3,0 и 3,0 см3; супоросным свиноматкам за 45 и 30 дней до опороса в объеме 7 см3.

Уровень заболеваемости и отхода поросят иммунизированных экспериментальной вакциной снижался в среднем в 2 раза по сравнению с группой животных привитых вакциной ППД (табл.9).

Таблица 9. Профилактическая эффективность ассощшрованной инактшвировашюй вакцшш против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии в производственных условиях _ (сводные данные)__

Препарат Количест во голов Заболеваемость (%) Летальность (%)

Всего энтсри там и респира торные

Ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней 658 16,6 7,9 8,7 4,2

&Сгои,ИИ(>0£ь акцина ППД 590 31,6 19 12,6 9

Таким образом, полученные результаты позволяют заключить, что ассоциированная инактивированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и акптобациллезной плевропневмонии свиней обладает достаточно высокой нротективной активностью в отношении возбудителей вызывающих симптомокомплекс пневмоэнтерита у поросят. Следовательно, применение данной вакцины является обоснованным и экономически более выгодным, чем применение вакцины ППД.

ВЫВОДЫ:

1. Энизоотологичеекими и бактериологическими исследованиями установлена ведущая роль при пневмоэитсритах у поросят возбудителей Р.ши1юс1с1а, А. Р1еигорпеитогнае, З.иЦепП'сИз, БЛиЫт и 8лур1птигшт.

2. Изучены биологические свойства (морфология, тинкториальные и культуральные свойства, ферментативная активность, вирулентность) и проведена типизация выделенных микроорганизмов.

3. Проведена оптимизация условий культивирования Б.етсгШ&з, Б.(1иЫш, ЯлурЫтипит, P.шultocida, А.р1еигорпсшпошае в ферментерах объемом 10 и 650 литров.

4. На основе выделенных штаммов получена экспериментальная серия ассоцшфованной шгактивированной вакщшы протш сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней.

5. В лабораторных и произволственных условиях проведено изучение безвредности, реактогенных свойств и иммуногешюй активности разработанной вакцины.

6. Па основе широких производственных испытаний показана высокая профилактическая эффективность разработанной вакщшы (80-90%).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основе данных, полученных при производственном испытании и подтвержденных соответствующими актами испытаний, разработанная инактивиропшшая ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней рекомендуется для внедрения в ветеринарную практику. Для производства и применения вакщшы нами разработаны технические условия и наставления по ее применения.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Заболоцкая Т.В., Девришов Д.А. Некоторые свойства ассоциированной вакщшы против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней// Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов: Тезисы докладов Всероссийской конференции, посвященной 30-летию института, г. Щелково, 2000г., С. 163-164.

2. Заболоцкая Т.В. Определение безвредности и реактогешюсти инактивированной ассоциированной вакщшы против сальмонеллеза пастереллеза и актинобацилезной плевропневмонии свиней в производствешшх условиях.// Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сборник молодых ученых/ Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им.К.И. Скряб1ша, 2000.-С.28-29.

Актуальность темы

В современных условиях промышленного свиноводства, особенно остро, стоит проблема борьбы с инфекционными заболеваниями. Значительная концентрация животных на ограниченной территории, интенсивная эксплуатация, однообразное кормление, отсутствие моциона, мероприятия по перегруппировке и т.п. способствуют понижению сопротивляемости организма, быстрому распространению инфекций на территории промышленного комплекса, усилению патогенных свойств микроорганизмов.

Основное место в профилактике инфекций занимает активная иммунизация поголовья. Вакцинация позволяет снизить заболеваемость и тяжесть течения болезни повысить устойчивость стада, сохранность животных а также уменьшить расход медикаментов затрачиваемых на лечение.

В оздоровлении стада основной задачей является своевременная профилактика часто встречающихся и наносящих большой экономический ущерб инфекций. Многократно усложняется задача ветеринарных работников при появлении в хозяйстве одновременно нескольких инфекций, так как раздельная иммунизация против каждой из них требует длительного времени, дополнительных трудозатрат а перегруппировки животных в процессе вакцинации, являются дополнительными стресс факторами, что отрицательно сказывается на состоянии животных. Следовательно, использование ассоциированных вакцин против нескольких инфекционных болезней, обусловлено необходимостью сокращения и облегчения труда практических ветеринарных врачей, экономической целесообразностью и возможностью при возникновении неблагополучной эпизоотической обстановки в хозяйстве, быстрого охвата прививками большого количества животных.

На территории РФ широко распространены и наносят огромный экономический ущерб такие заболевания свиней, как сальмонеллез, пастереллез, а в последние годы и актинобациллезная плевропневмония. В настоящее время ветеринарная практика не располагает ассоциированной вакциной против указанных инфекций, следовательно изучение возможности создания данного биопрепарата является актуальной задачей, имеющей научное и практическое значение.

Цель в задачи исследований

Целью работы явилось изучение этиологии смешанных инфекций свиней вызываемых сальмонеллами, пастереллами и актинобациллезными бактериями, выделение и идентификация указанных возбудителей, изучение их биологических свойств, а также разработка и испытание в производственных условиях ассоциированной инактивированной вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней. Для этого необходимо было решить следующие задачи:

-изучить этиологические факторы смешанных бактериальных инфекций вызывающих патологию органов пищеварения и дыхания у поросят;

-выделить и идентифицировать возбудителей сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней;

-изучить биологические и антигенные свойства штаммов возбудителей сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней;

-наработать экспериментальную партию ассоциированной инактивированной вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней и изучить ее безвредность, реактогенность и иммуногенные свойства на лабораторных животных и свиньях разного возраста;

-изучить напряженность иммунитета к сальмонеллезу, пастереллезу и актинобациллезной плевропневмонии у иммунизированных ассоциированной вакциной животных в динамике.

Научная новизна

Впервые установлена ведущая роль сальмонелл, пастерелл и актинобациллезных бактерий в возникновении смешанных инфекций свиней в различных регионах РФ. Разработана технология получения и схема применения новой ассоциированной инактивированной вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней.

Практическая значимость работы

Разработана и испытана в производственных условиях инактивированная ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней.

Для изготовления и применения инактивированной вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней разработаны технические условия и наставления по ее применению.

Материалы исследований включены в ТУ на вакцину против гемофилезной плевропневмонии свиней ( ТУ-9538-003-46392258-00) и наставления по ее применению, утвержденные Департаментом ветеринарии МСХ и П 14 июля 2000 года, а также в ТУ 93-85-022-00008064 на питательную среду на основе ферментативного гидролизата мясокостного фарша тушек пушных зверей для глубинного культивирования микробных культур возбудителей пастереллеза, клебсиеллеза, колибактериоза, сальмонеллеза и протейной инфекции ( утверждены Департаментом ветеринарии МСХ и П 15 июня 1999 года).

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены на конференции молодых ученых Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина и Всероссийской конференции по биотехнологии, посвященной 30-ти летию ВНИТИБП (Щелково, 2000 г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 2 научные статьи.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

-изучение этиологических факторов кишечных и респираторных болезней поросят и роли в их возникновении возбудителей сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии;

- разработка и применение инактивированной ассоциированной вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней на супоросных свиноматках и поросятах.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 103 страницах машинописного текста. В работе имеется 14 таблиц, 1 рисунок и 2 диаграммы. Список использованной литературы включает 147 работ отечественных и зарубежных авторов. В приложении представлены копии документов, подтверждающих результаты отдельных этапов работ, их научную новизну и практическую значимость.

5. ВЫВОДЫ:

1. Эпизоотологическими и бактериологическими исследованиями установлена ведущая роль при пневмоэнтеритах у поросят возбудителей Р.шиЬос1ёа, А. Р1еигорпешпошае, З.еЩегШсИз, 8.диЫт и ВЛурИтигшт.

2. Изучены биологические свойства (морфология, тинкториальные и культуральные свойства, ферментативная активность, вирулентность) и проведена типизация выделенных микроорганизмов.

3. Проведена оптимизация условий культивирования Б.еЩегШсНз, 8.с1иЬ1т, 8ЛурЫтигшт, Р.ти1Юс1ёа, А.р1еигорпеитотае в ферментерах объемом 10 и 650 литров.

4. На основе выделенных штаммов получена экспериментальная серия ассоциированной инактивированной вакцины против сальмонеллеза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней.

5. В лабораторных и производственных условиях проведено изучение безвредности, реактогенных свойств и иммуногенной активности разработанной вакцины.

6. На основе широких производственных испытаний показана высокая профилактическая эффективность разработанной вакцины (80-90%).

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании данных, полученных при производственном испытании и подтвержденных соответствующими актами испытаний, разработанная инактивированная ассоциированная вакцина против сальмонелл еза, пастереллеза и актинобациллезной плевропневмонии свиней рекомендуется для внедрения в биологическую промышленность и ветеринарную практику.

Для производства и применения вакцины разработаны технические условия и наставления по ее применению.