Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Диагностика и специфическая профилактика стрептококкоза собак

На правах рукописи^.

Матвеев Андрей Валерьевич

Диагностика и специфическая профилактика стрептококкоза

собак

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертация

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

□□3457200

Москва-2008

003457200

Работа выполнена на кафедре иммунологии и научно-исследовательской лаборатории инфекционной патологии и биотехнологии ФГОУ ВПО Московской Государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина

Научный руководитель: Доктор биологических наук,

профессор, член-корр. РАСХН Девришов Давуд Абдулсемедович

Официальные оппоненты: Доктор ветеринарных наук

Субботин Владимир Викторович

Кандидат ветеринарных наук Селиверстов Василий Витальевич

Ведущая организация: Федеральное государственное учреждение «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ ВГНКИ).

Защита состоится «24» декабря 2008 г. в «16» часов на заседании диссертационного совета Д 220.042.01 при ФГОУ ВПО «Московская Государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» по адресу. 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23; тел. (495) 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская Государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина»

Автореферат разослан 24 ноября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Т.Н. Грязнева

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Стрептококки являются повсеместно распространенными микроорганизмами и составляют определенную часть нормальной флоры кожного покрова и слизистых оболочек животных. Широкому распространению болезни способствует постоянное обитание стрептококков в верхних дыхательных путях, в кишечнике здоровых животных и человека, постоянное инфицирование внешней среды больными и бактерионосителями.

Однако в последнее время повысилась их роль как этиологических факторов при целом ряде патологий. Наблюдается существенный рост распространенности стрептококковых инфекций, а также как осложняющий фактор при ряде заболеваний.

К селекции штаммов бактерий с высокой резистентностью и патогенностью привело: ухудшение экологической ситуации и иммунной реактивности организма; нерациональное и несбалансированное кормление; близкородственное скрещивание; широкое бесконтрольное использование антибиотиков и гормональных препаратов для лечения больных животных.

Стрептококкозы наиболее распространены в больших городах, где происходит усиление вирулентности в результате многократного пассирования через организм человека и животных, вызывая воспалительные заболевания и очаговые поражения на месте травм, а также аллергоподобные болезни. Постоянно протекающие горизонтальные генетические обмены при стрептококкозах между животными и человеком, приводят к обогащению биологических видов и формированию новых животных патогенов, представители которых могут оказаться патогенными для человека.

В мире ежегодно регистрируется свыше 100 млн. случаев первичной стрептококковой инфекции у людей. По данным ВОЗ около 50% бактериальных заболеваний сердца, связанны со стрептококковой инфекцией.

Ежегодно в России 10 млн. детей переносят стрептококковую респираторную инфекцию (J. Rotta, Е. Tikhomiro, 1987).

Зарегистрировано появление новых синдромов и инвазивных инфекций, вызванных стрептококками, трудно-поддающиеся лечению антибиотиками (синдром токсического шока, некротический миозит и фасциит, первичный перитонит). С этими заболеваниями связано более тяжелое клиническое течение и отмечается рост инфекционной заболеваемости стрептококковой инфекции (J. М. Musser et al., 1988; Н. Lomholt, 1995).

Широкое использование лабораторных методов исследования позволило установить, что возврат инвазивных заболеваний связан со сменой циркулирующих в популяциях серотипов возбудителя, известные как ревматогенные и токсигенные.

В последние годы получены доказательства внутриклеточной локализации стрептококков (La Penta et al, 1994; Fluckiger et al., 1998; R.L. Greco et al., 1995; Jadoun J. Et al., 1998; G.S. Molinary et al., 1997). Механизмы внутриклеточной персистенции стрептококка в настоящее время не ясны. Отсутствие лечебного эффекта при инвазивных инфекциях, связывают с нахождением возбудителя внутри клеток (A.S. Markowitz, C.F. Lange, 1964; М.Е. Pichichero, 1991).

При изучении устойчивости к антибиотикам штаммов стрептококков серогрупп С, изолированных от больных с инвазивной инфекцией более половины изолятов были толерантны к ванкомицину. Минимальная подавляющая и минимальная бактерицидная концентрация антибиотиков могла различаться в 32 раза и более (Т. Zaoutis et al., 1999). Это затрудняло лечение инвазивных инфекций и делало этиотропную терапию малоэффективной и диктовало необходимость разработки альтернативных средств лечения и профилактики заболеваний, вызванных стрептококкозом.

Одним из наиболее перспективных направлений в разработке эффективных средств борьбы со стрептококкозом в крупных мегаполисах

является использование специфических средств и средств иммуностимуляции.

По данным института проблем экологии и эволюции им. А. Н. Северцева, на декабрь 2006 года, в г. Москве содержалось около 2 млн. домашних и более 30000 бездомных собак. В этой связи актуальным является изучение эпизоотической обстановки и уровня заболеваемости собак инфекционными болезнями в г. Москве.

Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы является совершенствование профилактических мероприятий против стрептококкоза собак с использованием вакцины и средств иммунокоррекции. Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучение эпизоотической обстановки в г. Москве по бактериальным инфекциям;

2. Изучение динамики эпизоотического процесса при стрептококковой инфекции у собак;

3. Определение иммуногенной и протективной активности вакцины «Стрептоевак» и иммуномодулятора «Полиоксидоний» при стрептококкозе у собак.

Научная новизна полученных данных. Впервые изучена эпизоотическая обстановка по бактериальным инфекциям в г. Москве за период 2000-2006 гг. Установлено эпизоотическая значимость Б^.еяш 8иЬБр.2ооер1с1е1тсиз и выявлена сезонная и возрастная динамика стрептококкоза у собак.

Применение инактивированной вакцины «Стрептоевак» обеспечивает выработку достаточного уровня защитных антител у собак, предохраняющих их от заболевания.

В лечебно-профилактических мероприятиях использование иммуномодулятора «Полиоксидоний», способствует активации защитных сил организма направленных на предотвращение клинических форм заболевания,

а у инфицированных животных элиминации патогена и снижения интоксикации.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследований дают новые сведения о патогенезе стрептококковой инфекции и динамике эпизоотического процесса в крупном городе. Результаты исследования позволили усовершенствовать профилактические и лечебные мероприятия при стрептококковой инфекции у собак с использованием вакцины и иммуномодулятора.

Результаты исследований приняты Департаментом ветеринарии МСХ РФ для включения в «Правила профилактики и лечения стрептококковой инфекции у животных».

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы доложены на Международном ветеринарном конгрессе практикующих ветеринарных врачей (г. Москва 2006, 2007), научной конференции молодых ученых МГАВМиБ (2007).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации изложены в 2 научных статьях, рекомендованных ВАК.

Личный вклад соискателя. Автором непосредственно выполнены все исследования по эпизоотологическому анализу, проведению испытаний специфических и неспецифических иммунотропных препаратов на собаках и обобщению полученных результатов.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 115 страницах компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список использованной литературы включает 98 источников, в том числе 55 зарубежных авторов; материал иллюстрирован 9 таблицами и 27 рисунками.

Основные положения и результаты, выносимые на защиту:

- результаты эпизоотического анализа по бактериальным инфекциям у собак в г. Москве и роль стрептококкозов в структуре инфекционной патологии;

- результаты совершенствования профилактических мероприятий с использованием инактивированной вакцины «Стрептоевак»;

- результаты изучения терапевтической эффективности иммуномодулятора «Полиоксидоний» при стрептококковой инфекции у собак.

2. Материалы и методы исследования

Работа выполнена в период с 2002 по 2008 год на кафедре иммунологии и научно-исследовательской лаборатории инфекционной патологии и биотехнологии ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».

В работе использовали статистические, клинические, гематологические, биохимические, серологические и бактериологические методы исследований.

Для оценки эпизоотической ситуации по бактериальным инфекциям животных в г. Москве использованы материалы ветеринарных отчетов Комитета ветеринарии г. Москвы и результаты экспертиз бактериологического отдела Московской городской ветеринарной лаборатории ГУ «Московское объединение ветеринарии» и собственных исследований.

При определении уровня поствакцинальных антител, исследовании протективной активности вакцины «Стрептоевак» и иммуномодулятора «Полиоксидоний» в опытах использовались щенки метисов 3-х месячного возраста в количестве 22 голов, клинически здоровые, не содержащие противострептококковых антител.

Для определения патогенных свойств выделенных изолятов и контрольных штаммов использовали белых мышей массой 16-18 г.

Материалом для бактериологических исследований служили: головной и костный мозг, кровь, селезенка, печень, суставная жидкость, содержимое

абсцессов павших и вынужденно убитых животных; головной мозг и кровь сердца абортированного плода; сперма, молоко, при метрите — истечения из шейки матки.

Кровь и сыворотку крови для проведения гематологических, биохимических и серологических исследований получали общепринятыми методами. Морфологические и биохимические показатели крови исследовали с использованием аналитического оборудования кафедры иммунологии Cobas Micros и Olympus AU 400, Abacus Vet (Diatron) и Unico PowerSpin™ Lx centrifuge. Статистическую обработку результатов проводили в программе STATGRAFF.

При работе с патологическим материалом и проведении исследований использовали методические материалы: Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкоза животных и лабораторным исследованиям на пневмококковую инфекцию животных. (1984), «Рекомендация по индикации и идентификации стрептококков» (1976), «Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкоза животных» (1987).

Серологические исследования сыворотки периферической крови проводили в РА, РДП и ИФА.

Для установления серогрупповой принадлежности стрептококков использовали стрептококковые хрупповые преципитирующие сыворотки с использованием капиллярного метода.

Для специфической профилактики применяли инактивированную вакцину «Стрептоевак» изготовленную ООО «Бионит». Вакцину вводили щенкам двукратно внутримышечно с интервалом 14 дней, в объеме 0,5 и 1,0 см*. Для заражения щенков использовали суточную культуру Str.equi subsp.zooepidemicus в дозе 5,0х106микр. клеток, культуру вводили подкожно в области правой стороны грудной клетки.

При изучении неспецифической протективной активности иммуномодулятор «Полиоксидоний» применяли в дозе 250 мкг/кг

внутримышечно двукратно с интервалом 48 ч, до заражения щенков патогенной культурой БЬчеяш 8иЬзр.гооер1с1е1шсиз

3. Результаты собственных исследований 3.1 Результаты эпизоотологических исследований по стрептококковой инфекции среди домашних животных в г. Москве

Данные об эпизоотической ситуации по бактериальным инфекциям в г. Москве за период 2001-2006гг. приведены в табл. 1, из которой видно, что бактериальные инфекции от общего уровня заболеваемости занимают 31,7%.

Табл. 1. Эпизоотологические данные по заболеваемости собак в _г.Москве (%)_

Наименование инфекций % положительных бактериологических результатов

2001 год п=1210 2002 год п=3103 2003 год п=1324 2004 год п=1393 2005 год п=1505 2006 год п=3256 ИТОГО п=11791

Колибактериоз 6,4 1,1 22,8 13,8 5,9 0,9 3,4

Пастереллёз 2,9 0,4 4,3 4,3 3,3 0,6 1,2

Псевдомоноз 9,3 0,7 5,4 3,8 3,3 2,2 2,1

Сальмонелез 12,3 0,8 4,3 8,1 7,1 1,9 2,7

Стафилококкоз 26,5 94,8 29,9 42,9 43,1 90,2 80,5

Стрептококкоз 36,3 2,1 32,6 25,2 37,2 3,8 9,4

Туберкулез 6,4 0,2 0,5 1,9 0,1 0,6

Клебсиеллез 0,3 0,1

Количество положительных экспертиз 204,0 1939,0 184,0 210,0 239,0 971,0 374 7,0

Полученные результаты исследований, свидетельствуют о достаточно высокой распространенности бактериальных инфекций в г. Москве. Процент установленных диагнозов на стрептококкоз среди больных животных был существенно выше (9,4%) по сравнению с другими и уступал по уровню положительных случаев стафилококковой инфекции (80,5%).

Уровень заболеваемости стрептококкозом подтвержденный бактериологическими исследованиями среди обследованного поголовья

колеблется в пределах от 2,1 до 37,2%.. При этом установлено, что у животных, от которых выделяли стрептококки, клиническая картина характеризовалась множественными поражениями - одновременно отмечали патологический процесс в органах дыхания, пищеварения, кожных покровов.

Рис.1. Клиническое проявление стрептококковой инфекции

Рис. 1а Некротический фасциит

Рис. 16 Некротический миозит

Рис.1 в Поверхностная пиодермия (осложнение паразитарного

заболевания).

Рис.1 г Поверхностный аллергический дерматит

Рис.1д Межпальцевый дерматит

Рис. 1е Серозно-фибринозная пневмония.

Процентное соотношение выделения стрептококков среди других микроорганизмов составляет 47,6%, далее следует колибактериоз (17,8%), сальмонеллез (14%) и псевдомоноз (11%) (рис. 2). Небольшое количество обнаружения возбудителя приходится на пастереллез (6,1%), туберкулез (3,1%) и клебсиеллез (0,4%).

Рис. 2. Структура бактериальных инфекций (в % к стрептококкозу)

11,0%

□ Стрептококкоз В Колибактериоз П Пастерелёз

□ Псевдомоноз ■ Сальмонелез

□ Туберкулез В Клебсиелеэ

17,8%

Несмотря на удовлетворительные условия содержания домашних животных в г. Москве за период 2000-2006 гг., были зарегистрированы случаи выделения от больных возбудителя туберкулеза в 13 случаях.

В целом можно отметить относительное благополучие г. Москвы по опасным инфекционным заболеваниям животных.

При относительном анализе динамики выделения кокковой инфекции, установлено даже некоторое превалирование выделения патогенных стрептококков в 2001 и 2005гг. (рис. 3).

11

н

Рис. 3. Выделение возбудителей кокковых инфекций (стрептококков и стафилококков в %)

□ стафилококкоз ■ стрептококкоз

2001 гоог гооз 2004 2005 2006

ГОДЫ

Известно, что патогенность стрептококков определяется наличием гемолитических свойств. За период 2000 — 2006 гг. было проведено 878 лабораторных исследований по изучению патогенных стрептококков, из которых 471 дало положительный результат на гемолитическую активность, что составило 54%, а в 407 исследованиях были выделены условно-патогенные стрептококки (46%). При этом выделение патогенной микрофлоры от трупов составило 237 (29%) и от больных животных 234 (26%) (табл.2).

Таб. 2. Результаты исследований гемолитической активности стрептококков.

Годы Количество исследований Выделено 81г. зиЬзр. из патматериала

всего Гемолитические % Негемолитические %

2000 171 118 69 53 31

2001 99 74 74 25 26

2002 82 40 44 42 51

2003 166 60 50 106 64

2004 137 53 44 84 61

2005 162 89 71 73 45

2006 61 37 61 24 39

Итого 878 471 54 407 46

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что стрептококковая инфекция достаточно широко распространена среди домашних животных в г. Москве. Более 50% больных животных

12

инфицированы патогенными стрептококками и лабораторно доказано, что в 27% случаев они явились причиной гибели.

При изучении эпизоотологической обстановки по стрептококкозу собак, за период 2000-2006 г., Московской городской ветеринарной лаборатории подтвержден диагноз на 351 случай болезни стрептококкозом, из которых 165 приходилось на щенков (47%) и 186 (53%) на взрослых животных. То есть к стрептококкозу восприимчивы как молодняк, так и взрослые животные.

При сравнении результатов изучения патогенности выделенных культур стрептококков установлено, что в 2002,2003 и 2004 годы, преобладала условно-патогенная микрофлора. В 2000 и 2001 2005, 2006 годы патогенная микрофлора существенно превалировала (рис. 4).

Рис. 4. Динамика выделения патогенных и условно-патогенных стрептококков (в %).

Рис. 5. Сезонная динамика стрептококковой инфекции у собак (средние данные за 2000-2006 годы).

месяцы

При сравнительном анализе положительных экспертиз на стрептококкоз от трупов и больных животных, прослеживается превалирование положительных результатов выделений патогенных стрептококков, от трупов животных - 2000г (69%), 2001г (74%), 2005г (55%) и 2006г (61%).

Данные исследований и эпизоотологического анализа, свидетельствуют о широкой циркуляции возбудителя стрептококковой инфекции среди собак,

Шпгогеная микрофлора Вусловжнтатогенная

и при снижении резистентности вызывают тяжелые формы заболевания. Клиническими наблюдениями установлено, что стрептококки в большинстве случаев вызывают вторичную инфекцию осложняющие течение патологического процесса и определяющие исход заболевания.

При анализе заболеваемости в г. Москве сезонной динамика стрептококковых инфекций, можно отметить, что пик заболеваемости собак с 2000-2006 годы приходится в основном на январь-апрель и август-ноябрь месяцы. Что видимо, связано с факторами окружающей среды (повышенная влажность в весенне-осенний периоды, применение реагентов в зимний период и т.д.) (рис. 5).

3.2 Результаты экспериментальных исследований применения инактивированной вакцины «Стрептоевак»

В эксперименте по применению инактивированной вакцины «Стрептоевак» исследования проводились на беспородных щенках 3-х месячного возраста. Эксперимент проводили в течение 180 дней.

Иммунизацию щенков опытной группы проводили вакциной «Стрептоевак» двукратно с интервалом 14 дней между инъекциями, в объеме 0,5 и 1,0 см3. Вакцину вводили внутримышечно в область правого бедра, предварительно. Щенкам контрольной группы в те же сроки вводили мясопептонный бульон в том же объёме и кратности.

Табл. 3. Данные по иммунизации щенков вакциной «Стрептоевак».

Группа Количество Общая Местная Заболело Пало

животных реакция реакция Всего % Всего

Опытная 5 отсут отсут Нет 0 0

Контрольная 5 отсут 2 нет 0 0

У всех животных для контроля физиологических показателей проводили специальные исследования (гематологические, биохимические и серологические), с утра натощак до вакцинации, на 7, 14, 21, 30 дни, и каждые последующие месяцы в течение 180 дней.

У вакцинированных щенят общее состояние было удовлетворительным в течение всего срока наблюдения. Аппетит был сохранен, прием воды, стул, мочеиспускание, температура в пределах физиологической нормы, реакция на месте введения вакцины отсутствовала. У двух контрольных щенят на месте введения мясопептонного бульона на 3 и 5 дни отмечали безболезненную припухлость, эритему диаметром до 1 см, которая исчезала к 7 дню исследования.

При гематологическом исследовании отмечали что, количество эритроцитов и лейкоцитов у всех наблюдаемых щенков имело общую тенденцию изменений характерную для динамического возрастного развития. Аналогичная динамика отмечается в величине гематокрита и насыщенности эритроцитов гемоглобином, данные показатели имели тенденцию достоверного роста в течение всего срока наблюдения, что свидетельствовало о нормальном формировании процессов кислородного обмена и отсутствии воспалительных процессов. Сравнительные изменения показателей опытных и контрольных групп были не существенными (Р<0,5).

По данным анализа лейкограммы у иммунизированных животных отмечается существенные колебания отдельных субпопуляций лейкоцитов. В первые 10-15 дней после вакцинации происходит активация клеточных механизмов защиты организма проявляющийся повышении количества клеток нейтрофильного ряда, моноцитов и эозинофилов по сравнению с показателями у контрольных животных, что свидетельствует о раздражении антигеном, его фагоцитозу и презентации лимфоцитам. Данное положение подтверждается выраженным лимфоцитозом после ревакцинации с 14 дня.

Динамика изменений биохимических показателей сыворотки крови у опытных и контрольных щенят имели общую тенденцию и были не существенными (Р<0,5). Некоторое увеличение отдельных биохимических показателей, такие как креатинин, КФК, ЛДГ, щелочная фосфатаза у молодняка связано с физиологическим развитием и повышением мышечной массы животных.

Уровень специфических антител определяли в реакциях агглютинации, диффузной преципитации, иммуноферментного анализа. Результаты представлены в табл. 4.

Табл. 4. Динамика антителообразования к Str. equi subsp.zooepidemicus в

ELISA, РА и РД Д у контрольных и щенков, привитых вакциной "Стрептоевак"

Дни исследования крови до и после вакцинации Результаты, средний титр (М±т)

Опытная группа контрольная

ИФА (1:10) РА (1:2) РДП (1:2) ИФА (1:10)

1 <1:10 - - <1:10

7 79,37±16,67 4±1.76 2.53±0.67 <1:10

14 1269.92±266.6 50.8±10.67 20.16±5.33 -<1:10

30 1600±705,53 64±28.22 50.8±10.67 <1:10

60 317,48±6б,67 25.4±16 10.08±2.67 <1:10-

90 251,98±66,67 20.16±5.33 6.35±1.33 <1:10

При серологическом исследовании сывороток крови до иммунизации у щенят титры антител к стрептококкам были фоновым (1:10) и ниже. После иммунизации на 7 день у животных появляются антитела в ИФА, РДП, а в РА еще не регистрируются в связи с ее недостаточной чувствительностью. После ревакцинации на 14 день уровень антител достоверно возрастает, достигая максимума на 30 сутки и, сохраняются на защитном уровне к 90 дню.

3.3 Результаты исследования протективной активности инактивированной вакцины «Стрептоевак» В эксперименте по определению протективной активности вакцины «Стрептоевак» исследования проводились на шести беспородных щенках 3-х месячного возраста, четыре из них были в опытной и два в контрольной группах. Эксперимент проводили в течение 90 дней.

Щенков опытной группы иммунизировали вакциной «Стрептоевак» двукратно с интервалом 14 дней между инъекциями, в объеме 0,5 и 1,0 см3.

Вакцину вводили внутримышечно в область правого бедра, предварительно место инъекции дезинфицировали. Щенкам контрольной группы вводили мясопептонный бульон в том же объеме и кратностью. На 30 день опыта проводили заражение щенков опытной и контрольной групп суточной культурой Str.equi subsp.zooepidemicus в дозе 5,0х10б микр. клеток, подкожно в области правой стороны грудной клетки. Клинические признаки оценивали по общему состоянию, температуре тела, кожным изменениям на месте введения антигена. Наблюдение за животными проводили в течение 10 дней.

При клиническом исследовании после заражения у опытной группы на 3 день отмечали субфебрильную температуру тела (39,1-39,3), снижение аппетита, безболезненная припухлость и эритему диаметром до 2 см на месте введения возбудителя; к 5 дню нормализовался аппетит, температура в пределах физиологической нормы, у 2 щенков сохранялась безболезненная припухлость на месте введения заражающей культуры и на 7-ой 10-ый день все показатели нормализовались.

У контрольной группы отмечали угнетение, гипертермию до 40,1 °С до 5 дня и далее сохраняющуюся субфебрильную температуру до 10 дня. С 3-го дня образовывалась болезненная припухлость на месте введения антигена и на 5 и 7 день происходило вскрытие сформировавшегося абсцесса с гнойно-геморрагическим отделяемым; также с 3 дня отмечались диспептические расстройства, которые сохранялись до 10 дня.

Гематологические и биохимические показатели после заражения существенно не отличались от данных после при вакцинации.

Таким образом, вакцина «Стрептоевак» обладает защитным эффектом, предохраняет от заболевания стрептококкозом при заражении в дозе ЕД 50% (доза обеспечивающая клиническое проявление инфекционного процесса).

3.4. Изучение защитного эффекта иммуномодулятора «Полиоксидоний» при экспериментальном заражении Str. zooepidemicus

В связи с отсутствием в собаководстве практики вакцинопрофилактики против инфекций не представляющих большую опасность, практикующие

ветеринарные врачи широко используют различные лекарственные средства повышающих резистентность организма (иммуномодуляторы и др.). Нами были проведены опыты по изучению протективной активности в экспериментальных условиях иммуномодулятора «Полиоксидоний».

Щенкам опытной группы применяли препарат «Полиоксидоний» двукратно, в дозе 250 мкг/кг внутримышечно, с интервалом 48 ч. Щенкам контрольной группы перед инфицированием вводили стерильный физиологический 0,85% раствор в том же объеме и кратностью. Заражение щенков Б^.гооер^сЬпнсиз проводили на шести беспородных щенках трех месячного возраста, четыре в опытной группе и две в контрольной. Срок наблюдения 10 дней.

Заражение опытной и контрольной групп проводили на 2 день опыта суточной культурой 81г.еяш 5иЬБр.гооер1(1е1шси8 в дозе 2,0x106 микр. клеток. Культуру вводили внутривенно в поверхностную вену предплечья. Кровь исследовали до заражения и на 3, 7 и 10 дни. Визуально оценивали общее состояние щенков и проводили термометрию.

При клиническом исследовании у опытной группы отмечали незначительное повышение температуры до 39,1-39,5, в первые три дня, вялость, снижение аппетита и кашицеобразный стул, которые нормализовались к 5-му дню после заражения. У контрольной группы гипертермия до 40,1 С0, с 3-го дня температура снижалась и оставалась субфебрильной до 10 дня опыта; а также снижение аппетита, жидкий стул в течение 5-7 дней.

Гематологические показатели у щенят опытной группы изменялись несущественно, хотя в первые дни отмечали лейкоцитоз и лимфоцитоз. У щенков контрольной группы отмечали лейкоцитоз, повышение количества нейтрофилов со сдвигом ядра влево, моноцитоз. Результаты оценки неспецифической резистентности свидетельствовали о достоверном повышении бактерицидности сыворотки крови у опытных животных при несущественной активации лизоцимной активности.

При биохимическом исследовании сыворотки крови отмечали более выраженные увеличения показателей у контрольной группы особенно AJIT, щелочной фосфатазы с последующей нормализацией показателей.

Таким образом, при экспериментальном заражении щенят патогенной культурой Str.equi subsp.zooepidemicus препарат «Полиоксидоний» оказывает положительное воздействие на организм животных, повышая общую неспецифическую резистентность, тем самым, снижая патогенное воздействие инфекционного агента.

4. Выводы

1. Стрептококкоз у собак имеет широкое распространение в г. Москве и занимает второе место по инцидентности среди зарегистрированных бактериальных инфекций. За период 2000—2006 г. положительные результаты на стрептококкоз получены у 878 животных, в т.ч. у 351 собаки: 165 щенков (47 %) и 186 (53 %) взрослых.

Эпизоотический процесс при стрептококковой инфекции носит сезонный характер с пиком заболеваемости у собак в январе—апреле и августе—ноябре.

2. Результаты клинических наблюдений, исследований периферической крови (гематологические, биохимические и серологические) вакцинированных и интактных щенят в течение длительного времени (до 180 дней), на фоне применения вакцины «Стрептоевак» свидетельствует о ее безвредности, ареактогенности, и иммуногенной активности. Защитный уровень поствакцинальных антител сохраняется в течение 90 дней.

3. При экспериментальном заражении патогенной культурой Str.equi subsp.zooepidemicus у вакцинированных щенков симптомов заболевания не отмечается, у контрольных животных наблюдаются признаки характерные для стрептококковой инфекции.

4. Иммуномодулятор «Полиоксидоний» при применении с профилактической целью обеспечивает защиту от клинического проявления стрептококковой инфекции без существенного повышения титров антител.

Иммуномодулятор «Полиоксидоний» можно рекомендовать для ранней защиты от инфицирования и в комплексной терапии стрептококковой инфекции собак в дозе 200-250 мкг/кг внутримышечно с интервалом 48 часов 5-7 инъекций.

Практическое использование полученных научных результатов

1. Результаты исследования по применению иммуномодулятора «Полиоксидоний» применяются в учебном процессе кафедры иммунологии МГАВМиБ.

2. По результатам исследований внесены предложения по совершенствованию мер профилактики и лечения стрептококковой инфекции, которые приняты Департаментом ветеринарии МСХ РФ для включения в «Правила борьбы со стрептококковыми инфекциями животных».

Рекомендации по использованию научных выводов 1. Для профилактики стрептококковой инфекции рекомендуется проводить вакцинацию взрослых собак и щенков с 2-х возраста.

Для повышения неспецифической резистентности и ранней профилактики от инфицирования и как средство комплексной терапии стрептококковой инфекции собак применять «Полиоксидоний» в дозе 200-250 мкг/кг внутримышечно с интервалом 48 часов 5-7 инъекций.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Матвеев А.В. Эпизоотическая ситуация по стрептококкозу собак в г. Москве // Российский ветеринарный журнал. - 2007.- №4.- С. 20-22.

2. Матвеев А.В. Биологические и антигенные свойства вакцины «Стрептоевак» // Ветеринарная медицина. -2008.- №2-3.- С. 16-17.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано з печать 24.11.08. Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1 Печать авторефератов: 730-47-74, 778-45-60

Актуальность темы. Стрептококки являются повсеместно распространенными микроорганизмами и составляют определенную часть нормальной флоры кожного покрова и слизистых оболочек животных. Широкому распространению болезни способствует постоянное обитание стрептококков в верхних дыхательных путях, в кишечнике здоровых животных и человека, постоянное инфицирование внешней среды больными и бактерионосителями [6,43, 54].

Однако в последнее время повысилась роль стрептококков как этиологических факторов при целом ряде патологий. Наблюдается существенный рост распространенности стрептококковых инфекций, а также их роль как осложняющего фактора при ряде заболеваний [10, 66, 67].

К селекции штаммов бактерий с высокой резистентностью и патоген-ностью привело: ухудшение экологической ситуации и иммунной реактивности организма; нерациональное и несбалансированное кормление; близкородственное скрещивание; широкое бесконтрольное использование антибиотиков и гормональных препаратов для лечения больных животных.

Стрептококкозы наиболее распространены в больших городах, где происходит усиление вирулентности в результате многократного пассирования через организм человека и животных, что вызывает воспалительные заболевания и очаговые поражения на месте травм, а таюке аллергоподобные болезни. Протекающие горизонтально генетические обмены стрептококков, обитающих в организме животных и человека, приводят к формированию возбудителей с новыми патогенными потенциями, представители которых могут оказаться патогенными для человека [8, 44].

В мире ежегодно регистрируется свыше 100 млн. случаев первичной стрептококковой инфекции у людей. По данным ВОЗ, около 50% бактериальных заболеваний сердца связаны со стрептококковой инфекцией. Ежегодно в России 10 млн. детей переносят стрептококковую респираторную инфекцию [81, 86].

Зарегистрировано появление новых синдромов и инвазивных инфекций, вызванных стрептококками, трудно поддающиеся лечению антибиотиками (синдром токсического шока, некротический миозит и фасциит, первичный перитонит). С этими заболеваниями связано более тяжелое клиническое течение и отмечается рост инфекционной заболеваемости стрептококковой инфекции [76, 80].

В ветеринарной практике стрептококки все чаще становятся причиной более тяжелых инвазивных инфекций, таких как менингиты, артриты, нефриты, пневмонии, которые могут приводить к летальному исходу или хроническому течению процесса. Не выявленный этиологический фактор болезни, зачастую эмпирическое лечение в ветеринарии приводят к появлению более устойчивых и резистентных штаммов стрептококков.

Широкое использование лабораторных методов исследования позволило установить, что возврат инвазивных заболеваний связан со сменой циркулирующих в популяциях серотипов возбудителя, известных как ревматоген-ные и токсигенные.

В последние годы получены доказательства внутриклеточной локализации стрептококков [43, 56, 62]. Механизмы внутриклеточной персистенции стрептококка в настоящее время не ясны. Отсутствие лечебного эффекта при инвазивных инфекциях связывают с нахождением возбудителя внутри клеток [59, 67].

При изучении устойчивости к антибиотикам штаммов стрептококков серогрупп С, изолированных от больных с инвазивной инфекцией, более половины изолятов были толерантны к ванкомицину. Минимальная подавляющая и минимальная бактерицидная концентрация антибиотиков могла различаться в 32 и более раза [65]. Это затрудняло лечение инвазивных инфекций и делало этиотропную терапию малоэффективной и диктовало необходимость разработки альтернативных средств лечения и профилактики заболеваний, вызванных стрептококками.

Одним из наиболее перспективных направлений в разработке эффективных средств борьбы со стрептококкозом в крупных мегаполисах является использование специфических средств и средств иммуностимуляции.

По данным института проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северце-ва, на декабрь 2006 г., в г. Москве содержалось около 2 млн. домашних и более 30000 бездомных собак. В этой связи актуальным является изучение эпизоотической обстановки и уровня заболеваемости собак инфекционными болезнями в г. Москве.

Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы является совершенствование профилактических мероприятий против стрептококко-за собак с использованием вакцины и средств иммунокоррекции.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучение эпизоотической обстановки в г. Москве по бактериальным инфекциям.

2. Изучение динамики эпизоотического процесса при стрептококковой инфекции у собак.

3. Определение иммуногенной и протективной активности вакцины «Стрептоевак» и иммуномодулятора «Полиоксидоний» при стрептококкозе у собак.

Научная новизна результатов исследований. Впервые изучена эпизоотическая обстановка по бактериальным инфекциям в г. Москве за период 2000-2006 гг. Установлена эпизоотическая значимость S.equi subsp.zooepide-micus и выявлена сезонная и возрастная динамика стрептококкоза у собак.

Применение инактивированной вакцины «Стрептоевак» обеспечивает выработку достаточного уровня защитных антител у собак, предохраняющих их от заболевания.

В лечебно-профилактических мероприятиях использование иммуномо-дулятора «Полиоксидоний», способствует активации защитных сил организма, направленных на предотвращение клинических форм заболевания, а у инфицированных животных элиминации патогена и снижения интоксикации.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследований дают новые сведения о патогенезе стрептококковой инфекции и динамике эпизоотического процесса в крупном городе. Результаты исследования позволили усовершенствовать профилактические и лечебные мероприятия при стрептококковой инфекции у собак с использованием вакцины и иммуномо-дулятора.

Выводы, сделанные на основе результатов исследований, приняты Департаментом ветеринарии МСХ РФ для включения в «Правила профилактики и лечения стрептококковой инфекции у животных».

Личный вклад соискателя. Автором непосредственно выполнены все исследования по эпизоотологическому анализу, проведению испытаний специфических и неспецифических иммунотропных препаратов на собаках и обобщению полученных результатов.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы доложены на Международном ветеринарном конгрессе практикующих ветеринарных врачей (г. Москва 2006, 2007), научной конференции молодых ученых МГАВМиБ (2007).

Публикация результатов исследований. По результатам диссертации Основные положения диссертации изложены в 2 научных статьях, рекомендованных ВАК.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 115 страницах компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список использованной литературы включает 98 источников, в т. ч. 55 зарубежных авторов; материал иллюстрирован 9 таблицами и 24 рисунками.

1. Результаты исследования по применению иммуномодулятора «Полиоксидоний» применяются в учебном процессе студентами дисциплины «Иммунология» ФГОУ ВПО МГАВМиБ.

2. По результатам исследований внесены предложения по совершенствованию мер профилактики и лечения стрептококковой инфекции, которые приняты Департаментом ветеринарии МСХ РФ для включения в «Правила борьбы со стрептококковыми инфекциями животных».

7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Для профилактики стрептококковой инфекции рекомендуется ветеринарным специалистам, заводчикам и владельцам собак проводить вакцинацию щенков с 3-х мес. возраста и взрослых собак.

2. Для повышения неспецифической резистентности и ранней профилактики от инфицирования и как средство комплексной терапии стрептококковой инфекции собак применять «Полиоксидоний» в дозе 200-250 мкг/кг внутримышечно с интервалом 48 часов 7-10 дней.