Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Антимикробная активность и лечебная эффективность фуракрона при колибактериозе, сальмонеллезе и бронхопневмонии поросят

РГБ 01

М^1?И^ТЕРСГВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ВОРОНЕЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

им.КД.ГЛИНКИ

На правах рукописи

СКОГОРЕВА Аппа Михайловна

«АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ И ЛЕЧЕБНАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ФУР АКРОНА ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ, САЛЬМОНЕЛЛЕЗЕ И БРОНХОПНЕВМОНИИ ПОРОСЯТ »

16.00.03 - ветеринарная микробиолопш, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени кандидата ветерштрных наук

ВОРОНЕЖ-1998

Работа выполнена на кафедре эпизоотологии и вирусологии ВГ/ им.К.Д .Глинки и в лаборатории микробиологии, вирусологии и иммунол гии ВНИВИПФиТ.

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ,

доктор ветеринарных наук, профессор Шахов А.Г.

Официальные оппоненты:

Длз.н., профессор Т.Н.Ракова

Кандидат ветеринарных наук,

старший научный сотрудник А.И.Пьявкин

Ведущая организация - Курская государственная сельскохозяйств« ная академия им. проф. И.И.Иванова

Защита диссертации состоится «//?» _ в « часов

на заседании диссертационного совета № Д.120.54.04. при Воронежско] государственном аграрном университете им.К,Ц .Глинки (394087, Вороне» ул. Ломоносова, 114-а. Ветклиники ВГАУ)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета

Автореферат разослан ^ 1998г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Л.И.Ефанова

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Желудочно-кишечные болезни поросят, из-за их широкой распространенности, представляют собой значительную проблему для ветеринарной науки и практики. На их долю прихо -дится 60-70% от общего числа заболеваний поросят (В.Ф.Романенко, 1984, 1992,1994). Известно несколько инфекционных агентов, вызывающих гастроэнтериты: эшерихии, сальмонеллы, хламидии, грибы, вирусы и др. (В.П.Урбан с соавт.,1984; М.А.Сидоров с соавт.,1986).

Наряду с желудочно-кишечньми болезнями большой удельный вес в патологии свиней занимает и респираторная патология. Пневмонии свиней - обширная группа малоизученных заболеваний незаразной и инфекционной этиологии, характеризующаяся поражением респираторного тракта (А.Г.Шахов с соавт., 1986-,1993,1996,1997; В.П.Урбан с соавт.,

1991).

Особую опасность представляют инфекционные пневмонии свинь . Ведущая роль в их возникновении отводится хламидиям (Р.В.Душук, 1982,1997), ассоциации эшерихий, протея и палочки сине-зеленого

гноя (А.Я.Мияанко с соавт., 1986,1990), микоплазмам, вирусам гриппа (А.Г.Шахов с соавт., 1990,1993,1997), адено- и энтеровирусам (В.Ф.Романенко, 1984).респираторному коронавирусу (В.Ф.Романенко,

1992), возбудителю репродоктивно-рестгоаторного сэдцрою». свиней идр Вышеприведенное создает трудности при диагностике и проведении

оздоровительных мероприятий (Л.Я,Мкяанко,1990). Для терапии животных, больных желудочно-кишечными и респираторными болезнями,широко используются антибиотики, сульфаниламиды и др.

Широкое применение антибиотиков и сульфаниламидных препаратов снизило их эффективность из-за изменения биологических свойств микроорганизмов, появления резистентности и повынения их вирулентных свойств.

® связи с создавшейся ситуацией при проведении терапии больных

животных особое значение приобретают антимикробные препараты, обладающие иным, чем антибиотики и сульфаниламиды механизмом действия на микробную клетку. К таким препаратам относятся нитрофураны (В.СДоменко с соавт.,1988,1991; Л.И.Ефанова,1997). Лекарственная устойчивость к ним развивается медленно и нэ достигает высоких пределов.

Перспективным в этом направлении является новый нитрофурановый препарат фуракрон, синтезированный в Научно-исследовательском институте химии Саратовского Государственного университета в октябре-ноябре 1393" г.

1.2. Цель и задачи исследований. Цель настоящих исследований - разработать и внедрить в практику препарат фуракрон для лечения желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить 1П 1/1 ¿ГО антимикробную активность фуракрона в отношении потенциальных бактериальных возбудителей желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят.

2. бучить специфическую активность фуракрона на моделях эше-рихиозной и сальмонеллезной инфекций белых мышей.

3. Изучить влияние препарата на ультраструктуру бактерий.

4. Изучить лечебную эффективность фуракрона при колибактерио-зе, сальмонеллезе и бронхопневмонии поросят.

1.3. Научная новизна. Впервые изучены ¡П и на моделях инфекций белых мышей антимикробная активность фуракрона в отношении потенциальных бактериальных возбудителей желудочно-кишечных и

Респираторных болезней поросят, его влияние на ультраструктуру зшерихии коли и сальмонеллы холерасуис и общую неспецифическую резистентность поросят, лечебная эффективность при колибактериозе, сальмонеллезе и бронхопневмонии поросят.

1.4. Практическая значимость. В ветеринарную практику для терапии желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят предложен

препарат фуракрон.

1.5. Внедрение результатов исследований. Материалы исследований вошли в Нормативно-техническую документацию на препарат фура-крон (НТД рассмотрена и одобрена решением ученого совета ЕШВШФиТ 7 октября 1998 г., протокол $ 8).

1.6. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на отчетных научных конференциях и ученом совете Всероссийского НИШ патологии,фармакологии и терапии в 1996-1998 г.г.

1.7. Публикация. Материалы диссертации опубликоваш в 3-х научных статьях.

1.8. Объём и структура диссертации. Диссертация изложена ка 130 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и список литературы.

Работа иллюстрирована 13 таблицами и 26 рисунками. Список литературы включает 222 источника, в том числе 203 отечественных ; 19 иностранных авторов.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Об антимикробной активности фуракрона в отношек>;и потенциальных бактериальных возбудителей желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят.

2. О лечебной эффективности фуракрона при колибактериозе,саль-

монеллезе и бронхопневмонии поросят.

3. О стимулирующем влиянии фуракрона на общую неспецифическую резистентность больных желудочно-кишечными и респираторными болезнями поросят.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЩОВАШЙ

Настоящая работа выполнена в лаборатории микробиологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии в 1996Л998 г.г. при выполнении плановой тематики по задании 04,02 Российской НТП фундаментальных и приоритетных прикладных исследований, № гос.регистрации 01,9.40 007588 и на кафедре эпизоотологии и вирусологии Воронежского аграрного университета им.К.Д.Глинки в соответствии с тематикой кафедры "Разработать и внедрить научно-обоснованные, экологически безопасные методы диагностики, лечения и профилактики массовых болезней животных в условиях Центральной Черноземной Зоны'.'

Антимикробную активность фуракрона изучали методом серийных разведений в жидкой питательной среде. В качестве тест-культур использовали референтные и полевые штаммы потенциальных возбудителей желудочно-кишечных и респираторных болезней свиней. Минимальную бактериостатическую концентрацию определяли методом серийных разведений в мясо-пептонном бульоне, минимальную бактерицидную концентрацию - путем высева из пробирок, содержащих минимальную бактериостатическую концентрацию препарата на плотные питательные среды. Результаты учитывали в течение V дне"1.

¿ля электронно-микроскопического изучения действия Фуракрона в опытах in vitro использовали культуры эшерихии коли (штамм 0141) и сальмонеллы холерасуис в фазе логарифмического роста, выращенные на МПБ, из расчета 200 тыс. микробных клеток на I мл среды, в условиях усиленной аэрации на качалке. Фуракрон добавляли к 5 часовой культуре в б минимальных бактерицидных концентрациях и в концентрациях, в 8 раз превышающихМБцК. Контролем служили культуры без препарата. Опытные и контрольные образцы отбирали через 3 и Ь часов, центрифугировали 5 минут при 3000 об/мин. на центрифуге ОПн-3 УХЛ 4.2. Осадок дважды отмывали в физиологическом растворе.

Затем бактериальные клетки помещали на I час в 2,5$ глутараль-дегид на 3 -коляидиновом буфере,центрифугировали в течение Ю минут при 3000 об/мин,отмывали осадок 1ОД раствором сахарозы 5 раз по 20 минут.

Постфиксаций проводили четырехокисью осмия.Фиксированный материал обезвоживали в восходящих концентрациях этилового спирта, после чего осадок заключали в смесь эпоновых смол. Срезы готовили на! ультратоме 1КВ-380А и контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца. Просмотр производили в электронном микроскопе гезьа _500 при ускоряющем напряжении 90 кВт.

Изучение адаптации эшерихии коли 0141 и сальмонеллы холер- гуис к фуракрону проводили путем культивирования бактерий на мясо-поп-тонном бульоне, содержащем возрастающие суббактер'иостатические концентрации препарата. Всего было проведено 60 пассажей.

Степень увеличения устойчивости микроорганизмов оценивали по коэффициенту резистентности - отношению максимальной,не препятствующей росту бактерий концентрации препарата к исходной.

Специфическая активность препарата была изучена на моделях эшерихиозной и сальмонеллеэной инфекций белых мышей,массой 18-20 гр, после проверки их на носительство сальмонелл. В опытах было использовано 108 белых мыл]ей.

Индекс защиты (эффективности) фуракрона определяли по формуле В.Д.Белякова (1961).

Опыты по изучению лечебной эффективности препарата проведены

на поросятах 3-7 дневного и 2-4 месячного возраста в зимне-весенний период в хозяйственных условиях содержания и кормления в ТОО "Тихий Дон" Острогожского района и ТОО- "Вишневское" Верхнехавского рг.г она Воронежской области.Поросята-сосуны содержались совместно со свиноматками в станках типовых свинарников-маточников, а поросята 2-4 месячного возраста содержались группами (15-20 голов) в станках, безвыгульно, в типовых помещениях. Микро-

климатические условия содержания не всегда отвечали зоогигиеническм, нормам. Кормление - механизированное, сухим кормом, водопой вволю. Рационы сбалансированы по основным питательным веществам, витаминам, макро- и микроэлементам согласно существующим нормам.

Опыты проводили в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту (И.Т.Фропов, 1965) по постановке контроля,

подбору аналогов, соблюдения одинаковых условий кормления и содержания животных в период исследования. Для исключения случайных результатов опыты проведены в нескольких повторностях.

Для характеристики клинического состояния у животных измеряли температуру тела (ректально), определяли частоту пульса, дыхания, характер испражнений и носовых выделений.

Изучение действия фуракрона на морфологические и иммунобиохимические показатели крови и общую неспецифическую резистентность организма было проведено на больных " . сальмонеллезом и пневмонией поросятах 3-7 дней - 2-4 месячного возраста.

В крови определяли содержание эритроцитов и лейкоцитов на

счетчике частиц Культер Каунтер (Франция), количество гемоглобина - гемоглобинцианиднкм методом. Определение яейкограммы проводили

путем подсчета 200 лейкоцитов, окрашенных по Романовскому-Гкмза,

с вычислением процентного содержания каждого вида.

Для оценки уровня неспецифической резистентности определяли:

бактерицидную активность сыворотки крови - по методу О.В.Смирновой

и Т.П.Кузьминой (1966), комплементарную' активность - по О.В.Бухарину (1974), фагоцитарную активность лейкоцитов, фагоцитарный индекс

и фагоцитарное число - по В.С.Гостеву (С.И.Плященко с соает.,1979). Общий белок - рефрактометрически ,белковые фракции - методом Оляа и Маккорда в модификации С.П.Каргаока (1962), качественное определение иммуноглобулинов по Манчини (1974). Содержание суммарных иммуноглобулинов по А.Д.Мак Юан с соавт. (1970).

Диагноз на колибактериоз и сальмонеллез устанавливали комплексно на основании эпизоотологических, клинических, патологоанато-мических данных с учетом бактериологических и серологических ; следований.

Для проведения бактериологических исследований использовали кровь из сердца, паренхиматозные органы, брыжеечные лимфоузлы от 5 убитых с диагностической целью животных, больных колибактериозом и сальмонеллезом.

Посевы патологического материала проводили на МПБ, МПА, среды Эндо, Левина, Олькеницкого, Сшмонса, Плоскирева. После 18-24 часовой инкубации при 37°С учитывали характер роста микроорганизмов.

По 3-5 колоний каждого вида бактерий отсеивали на скошенный агар в пробирки с МПА для дальнейшего изучения.

У выделенных чистых культур бактерий изучали морфологические, тинкториальные, куяьтурально-биохимические свойства общепринятыми в бактериологии методами. Патогенность выделенных культур определяли на белых мышах.

Видовую принадлженость бактерий устанавливали с помощью определителя Д. Вегёеу'з (1974).

Идентификацию энтеробактерий проводили с учетом "Наставлс гия по бактериологической диагностике колибактериоза сельскохозяйственных, промысловых животных и птиц" (1974). Серологическую типизацию сальмонелл и эшерихий проводили в реакции агглютинации с 0- и Н-агглютинирующими сальмонеллезными сыворотками и О-колисыворотками согласно "Наставлению по применению агглютинирующих 0_коли сывороток" (1960) и "Методическим указаниям по применению сальмонеллеэных монорецепторных 0- и Н-агглтатинирукнцих адсорбированных сывороток для идентификации сальмонелл (1978).

Диагноз на пневмонию и её этиологию устанавливали на основании

эпизоото логических, клинических, патологоанатомических данных с учетом бактериологических, вирусологических и серологических исследований . I

Для проведения бактериологических исследований использовали пораженные легкие, кровь из сердца, печень, селезенку, почки от

5 убитых с диагностической целью животных и 5 проб носовых ввделе-)

ний от больных пневмонией поросят. Пробы из носовой полости брали стерильными ватными тампонами и помещали в пробирки с питательной средой ВЮВ для микоплазм.

Патологический материал исследовали не позднее 4-6 часов после его взятия. Посевы патологического материала проводили на ЬПТБ с глюкозой, МПА с сывороткой крови лошади, МПА с Ш крови барана, казеино-угольный агар (КУА), среду Эндо. После 18-24 ч. инкубации при 37°С учитывали характер роста микроорганизмов. По 3-5 типичных колоний каждого вада бактерий отсеивали на скошенный агар в пробир-. ки МПА, МПА с №%> сывороткой крови и 1% глюкозы для дальнейшего изучения.

У выделенных чистых культур бактерий изучали морфологические, тинкториальные, куяьтурально-биохимические свойства общепринятыми в бактериологии методами. Патогенность выделенных культур определяли на белых мышах.

Видовую принадлежность бактерий устанавливали с помощью определителя В.Ве^еу'в (1974). Типизацию кокковой микрофлоры проводили согласно"Рекомендациям по индикации и идентификации стафилококков и стрептококков, . пастерелл и бордетелп" (1976), "Методическим

рекомендациям по лабораторной диагностике инфекционных пневмоний евшей, вызванных микоплазмами, пастереллами и бордетеллами" (1983).

Чувствительность выделенных культур к антибиотикам (пенициллин,

калиевая соль, тетрациклин, стрептомицин, неомицин, канамицин, мо-номицин, гентамицин, эритромицин, левомицетин,цефазолин,цефалексин, полимиксин) определяли методом индикаторных бумажных дисков.Результаты оценивали по величине зоны задержки роста.

Исследование сывороток крови от больных желудочно-кишечными и

респираторными болезнями поросят проводили дву-трехкратно с интервалом в две недели в реакции агглютинации с сальмонеллезным, пас-тереллезным, эшерихиоэным и стафилококковым антигенами.

Пастереялезный антиген готовили из референтных штаммов,поnv-генных из Украинского НИВИ. Посевы культуры проводили на МПА с 1ОД сывороткой крови лошади, инкубировали в термостате 18-24 -иаса и при 37°С. После проведения микроскопии культуры смывали стерильным 0,85% физиологическим раствором и по оптическому стандарту мутности концентрацию взвеси доводили до Ю млрд. м.к.

Сальмонеллезный, эшерихиозный и стафилококковый антигены готовили из культур эпизоотических штаммов. Посев культур проводили на МПА. Взвесь культур на физиологическом растворе доводили до 2 млрд. м.к. концентрации в I мл по оптическому стандарту мутности.

Изучение токсичности препарата проведено в отделе патологии и фармакологии ВНИВИПФиТ. Была изучена острая и хроническая токсичность фуракрона, эмбриотоксическое и тератогенное действие.

Статистическая обработка полученных данных проведена общепринятыми методами (Е.К.Меркурьева, 1964).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Антимикробная активность фуракрона

Наиболее высокую чувствительность к препарату проявили кул* туры эшерихии коли (0141, 0147, 0149), выделенные от больных поросят из ТОО "Вишневское" и эшерихии коли 035, 0142. Минимальная бакте-риостатическая концентрация фуракрона в отношении этих культур составила 0,39-0,78 мкг/мл. В концентрации 1,56-6,25 препарат задерживал рост_музейных штаммов Е.соИ (866, А20, 0141).

В отношении сальмонелл минимальная бактериостатическая концентрация фуракрона составила 1,56-6,25 мкг/мя.

Для культур пастереллы ыультоцида активность препарата составила 6,25 мкг/мл.

Для задержки роста стафилококка была необходима концентрация препарата 1,56 мкг/мя.

Бактерицидное действие фуракрона проявилось в концентрациях, в два-четыре раза превышающих бактериостатические: в отношении музейных штаммов эшерихий она составила 1,56-12,5 мкг/мл, полевых штаммов 1,56-3,12 мкг/мл, сальмонелл - 6,25-25,0 мкг/мл, стафилококка 3,12 мкг/мл.

Таким образом, фуракрон обладает широким спектром антимикробного действия.

3.2. Изучение адаптации микроорганизмов к фуракрону.

Дня определения возможности повыпения устойчивости эшерихии коли 0141 и сальмонеллы холерасуис к фуракрону было проведено их культивирование на питательном бульоне, содержащем возрастающие количества суббактериостатических концентраций препарата. Установлено, что минимальная бактериостатическая концентрация фуракрона в отношении E»coli 0141 в процессе серийных пассажей на МПБ с фура-кроном повысилась в 8 раз (с 6,25 до 50,0 мкг/мл), а в отношении сальмонеллы в 4 раза (с 6,25 до 25,0 мкг/мл). В процессе возникновения резистентности происходили изменения типичной морфологии клеток, на питательных средах удлинялись сроки образования колоний, отмечалось снижение биохимической активности.

Для решения вопроса о стабильности приобретенных культурами свойств под действием фуракрона были проведены последовательные пассажи полученных вариантов на питательном 'бульоне, не содержа -щем препарат. При этом установлено, что к 20 дню пересева приобретенная устойчивость у B.coli 0141 снижалась до исходной, а у саль-

монеллы холерасуис к 15 дню пересева. Полученные культуры эшери-хий и сальмонелл в указанные сроки по своим морфологическим и биохимическим свойствам не отличались от ^контроля.

3.3. Изучение ультраструктуры бактерий под влиянием фуракрона

Были изучены субмик^оскопические изменения бактерий - эшес-лсин коли и сальмонеллы холерасуис под влиянием различных концентраций и длительности воздействия фуракрона. Эшерихия коли до воздействия препарата имела трехслойную клеточную стенку с внутренним электронно-плотным слоем. Цитоплазматическая мембрана плотно прилегала к клеточной стенке. Цитоплазма была заполнена гранулярным компонентом. Ядерный материал был четко дифференцирован, представлен фибриллами ДНК.

В норме поверхность клеточной стенки у сальмонелл имела извилистый профиль и была представлена трехслойной мембраной и внутренним слоем разной оптической плотности. Цитоплазма была заполнена гранулярным компонентом, с включениями двух видов. Одни из них осмиофильные, локализованы вблизи нуклеоида, другие крупнее и имели мелкозернистое строение. Нуклеоид расположен в центральной части клетки, представлен осмиофобной зоной.

Под влиянием фуракрона в концентрации 37,5 мкг/мл в течение

3 часов изменялась морфологическая структура эшерихии коли. Поверхностный электронно-плотный слой- местами теряя четкие очер:. лия.

Цитоплазма имела повышенную осмиофобность. Цитоплазматическая мембрана местами отделялась от клеточной стенки. На срезах бактерий сальмонелл, находившихся в контакте с препаратом в концентрации 75 мкг/мл в течение того же времени, клеточная стенка местами утрачивала осмиофияьный внутренний слой. Цитоплазматическая мембрана теряла четкие очертания. Цитоплазма становилась менее элект-

ронно-плотной. В ней отчетливо были видны крупные мелкозернистые включения- Между клеточной стенкой и цитоплазматической мембраной

появилось большое электронно-прозрачное пространство. Нуклеоид бь

виден в^вцце отдельных осмиофильных нитей.

При увеличении экспозиции действия препарата до 6 часов в то же концентрации у эшерихии коли истончался наружный слой клеточно стенки. Цитоплазматическая мембрана местами разрушалась. Образовы вались кольцевидные мембранные структуры. Цитоплазма имела электронно-прозрачные зоны. Ядерное вещество не дифференцировалось. У сальмонелл, обработанных фуракроном при этой экспозиции, клеточ ная стенка теряла четкие очертания. Цитоплазма местами имела повышенную осмиофобность. Зона нуклеоида дифференцировалась нечетко.

При увеличении концентрации до 50 мкг/мл при экспозиции 3 часа у эшерихии коли клеточная стенка утрачивала внутренний слой. Цитоплазма имела вед крупнозернистой структуры. Нуклеоид не дифференцировался. Вестах образования перегородок наблюдались инваги-наты клеточной стенки с образованием вакуолей и выходом кольцевых мембранных структур наружу. У сальмонелл, обработанных фуракроном в концентрации ЮО мкг/мл при этой экспозиции, наблюдалась деформация клеточной стенки. Остатки цитоплазматической мембраны сохранились по периферии клетки. В месте перегородок был истончен средний электронно-пяотный слой, обеспечивающий расхождение клеток Нуклеоид располагался диффузно, в виде отдельных кусочков осмиофильных нитей. Крупные мелкозернистые включения располагались в центре и по периферии клетки.

При увеличении экспозиции действия препарата до 6 часов у эшерихии коли происходила деформация клеточной стенки с образованием вакуолей. Цитоплазма была лизирована, в ней были ввдны мелкие осмиофильные включения. На месте нуклеоида выявлялась электронно-прозрачная зона, не имеющая структуры.

Воздействие фуракрона-'на сальмонеллы в течение 6 часов вызывало глубокие деструктивные изменения. Клеточная стенка теряла четкие очертания. В месте перешнуровки клетки она образовала большую электронно-прозрачную вакуоль. Цитоп лаз магическая мембрана разрушалась, образуя петлеобразные инвагинаты внутрь клетки. На месте нуклеоида обнаруживалась электронно-прозрачная зона.

Исследования ультратонких срезов эшерихий, обработанных Д?<1С0 в концентрации, аналогичной применяемой для растворения фуракрона и создания рабочего раствора препарата не свидетельствовали об ультраструктурных изменениях.

Таким образом, фуракрон при взаимодействии с бактериальным клетками необратимо связывается с белками и нуклеиновыми кислотами, дезинтегрирует цитоплазму, препятствует их росту и размножению.

3.4. Изучение токсичности фуракрона

Изучение токсичности препарата проведено в отделе патологии и фармакологии ВШВШФцТ. Были изучены следующие параметры: острая и хроническая токсичность фуракрона, а также эмбриотоксическое и тератогенное действие препарата.

При изучении острой токсичности было установлено, что фуракрон в дозе 1500 мг/кг не вызывал летальньй исход у животных. ЛДд- для фуракрона составила 1500 мг/кг, ДД50- 2162 мг/кг, а ДДюСГ 3100 мг/кг, что характеризует фуракрон как малотоксичный препарат.

При изучении хронической токсичности были использованы дозы препарата 20 и 60 мг/кг. Препарат применяли 21 день однократно с кормом. За крысами вели ежедневное наблюдение, учитывали клиническое состояние, аппетит, сохранность. Установлено,что длительное назначение фуракрона в дозах 20 и 60 мг/кг белым крысам не оказывает отрицательного влияния на основные морфологические и биохимические показатели крови, что говорит об отсутствии хронического такси-

ческого действия препарата на организм животных.

Для изучения эмбриотоксического и тератогенного действия фура-крона были использованы белые крысы,получавшие препарат в дозе 20 и 60 мг/кг с кормом за 7 дней до случки и на протяжении беременности (21 день). Часть самок убивали декапитацией на 20 день беременности, при этом учитывали количество желтых тел в яичнике, число мест имплантации в матке, количество мертвых и живых зародашей, их массу, процент беременных самок. У остальных самок после родов устанавливали количество живых и мертвых плодов, наличие аномалий и Уродств. Часть потомства после окончания лактации убивали и исследовали внутренние органы. Проведенными исследованиями установлено,что фуракрон,назначаемый в вышеуказанных дозах, не оказывает токсического действия на процесс оплодотворения и течения беременности.Число желтых тел в яичниках и среднее количество имплантированных эмбрионов не отличалось от контроля (12,1^,9 и 12,1+1,1 и в контроле 12,8+0,6 и 12,9+0,5). Процент предимплантационной гибели у животных опытной группы практически не отличался от контроля (5,0 и 4,8%). Число резорбировелных эмбрионов и погибших плодов было равным. Анома^ лий внутренних органов и скелета плодов не наблюдалось.

Таким образом, фуракрон в дозе 20 к 60 мг/кг не оказывает токсического и тератогенного воздействия.

3.5, Специфическая активность фуракрона при экспериментальных инфекциях белых мышей

Проведенные исследования показали, что наиболее высокую специфическую активность фуракрон проявил при эшерихиозной инфекции.Однократное введшие препарата за 3 часа до заражения и применение его в течение 7 дней через 6 часов после инфицирования обеспечивало 83,0^_ный индекс защиты. Несколько ниже (66$) этот показатель был при введении фуракрона одновременно с заражением и через 3 часа

после него (8Э£).

В отношении еальмонеляезной инфекции наибольший защитный эффект (83$) был получен при назначении фурах рока через 6 часов после заражения в течение ? дней. Несколько ниже индекс защиты был при введении препарата за 3 часа до заражения (66%) и одновременно с ним (50$). Самый низкий индекс защиты был при применении препарата через '3 часа после заражения, он составил 33-50$.

Исследования показали, что более выраженный защитный эффект при изученных инфекциях фуракрон проявил при назначении его за 3 часа до заражения и при ежедневном однократном применении в течение 7 суток (первое введение через 6 часов после инфицирования). Величина индекса защиты зависела и от дозы препарата. Более выраженный эффект был получен при назначении фуракрона в дозе 60 мг/кг массы тела в сравнении с применением препарата в дозе 30 мг/кг.

З.б. Лечебная эффективность фуракрона при , колибактериозе поросят

Лечебная эффективность фуракрона была изучена в двух сериях опытов на больных кояибактериозом поросятах 3-7 дневного возраста. При клиническом исследовании больных поросят отмечали: угнетение, отсутствие аппетита, фекалии жидкие, желто-серого цвета со слизью, цианоз кожи ушных раковин, живота, паха. Характерным симптомом являлся профузный понос.

При патологоанатомическом вскрытии павших и убитых с диагностической целью поросят с указанными клиническими признаками наводили в кишечнике катарально-геморрагическое воспаление, брыжеечные лимфоузлы увеличены, на разрезе сочные с покраснением. Печень увеличена, слегка желтовато-серого цвета. Почки бледно-серого цвета. Под эпикардом и на эндокарде точечные кровоизлияния. При бактериологическом исследовании патматериала (нровь из сердца,

паренхиматозные органы, брыжеечные лимфоузлы) от 2-х убитых с диагностической целью поросят 3-х дневного возраста из желчного пузыря и легких, крови сердца, желчного пузыря была выделена культура E.ooli (DI4I), патогенная для белых мышей.

Вцделенная эшерихия была чувствительна к канамицину, гентами-цину, рифампицину, фурадонину и проявила резистентность к бенэ^л-пенкциллин калиевой сопи, карбенициллину, оксациллину, ампициллину, тетрациклину, стрептомицину, эритромицину, яевомицетину.

Для первого опыта было подобрано две группы поросят. Животным I группы (п = Ю) ежедневно с кормом в течение 7 дней подряд применяли фурактзон в дозе 30 мг/кг массы тела, 2-й (п=Ю) - фураэонал

(базовый вариант) по аналогичной схеме.

За' подопытными животными в течение 30 дней вели клиническое наблюдение, учитывали выздоровление, падеж и скорость роста. Лечебная эффективность фуракрона (90$} превосходила фупаяонал (80$). В опытной группе был и более высокий среднесуточный прирос^' массы тела 175,0, в базовом варианте он составил 133,3 г.

Во втором опыте препараты применяли также, как и в первом эксперименте. Из крови сердца, печени, желчного пузыря, почки, селезенки были выделены культуры эшерихий (0141, 0147, 0149). Проведенные клинические исследования в течение месяца подтвердили высокую терапевтическую эффективность фуракрона. По этому показателю (87,Щ) он превосходил фураэонал (75,0й),

Таким образом, фуракрон в дозе 30 мг/кг при двукратном применении в течение 7 дней обладает выраженной терапевтический эффективностью при колибактериозе поросят.

3,7. Лечебная эффективность фуракрона при сальшзнеллезе поросят

Терапевтическая эффективность фуракрона была изучена:в двух сериях опытов на больных острым и подострым сальмонеялезом поросятах 2-4 месячного возраста. При клиническом исследовании у больных поросят отмечали: угнетение, отсутствие аппетита, учащенное дыхание, повышение температуры тела до 41-42°С, понос с примесью крови. Выражен катаральный конъюнктивит. Подострое течение характеризовалось лихорадкой перемежающего типа, чередованием поноса и запора, одышкой, кашлем, учащенным дыханием.

При вскрытии павших и убитых с диагностической целью породят при остром течении болезни отмечали следующие патологоанатомк*-геские изменения: катаральный энтерит, увеличение и гиперемию брыжеечных лимфоузлов, увеличение селезенки с зернистостью на разрезе. При подостром течении болезни были отмечены более характерные патологоанатомические признаки: подострый катаральный гастрит, в ободочной кишке очаговые фибринозные поражения в виде струпьев, дистрофические изменения печени, селезенки, почек, катаралъно--гнойную бронхопневмонию. В печени обнаруживали серые очажки некроза.

При бактериологическом исследовании патматериала (кровь из сердца, паренхиматозные органы, брыжеечные лимфоузлы) была вьще-лена культура s.chalerae suis , патогенная для белых мышей.

При изучении чувствительности возбудителя инфекции к наиболее часто применяемым антибактериальным препаратам установлено, что сальмонеллы были чувствительны к гентамицину.фурадонину, фура-гину, но устойчивы к ампициллину, канамицину, эритромицину, лово-мицетину, цефазолину, рифампицину.

При серологическом исследовании 20 сывороток крови больных поросят с сальмонеляезным антигеном выявлены антитела к нему в титрах 1:150.

Для первого опыта было подобрано 2 группы поросят. Животным I группы (п = 15) с кормом в течение V дней двукратно применяли фуракрон в дозе 30 мг/кг, П-й (п = 15) - фуразонад (базовый вариант) по аналогичной схеме. За подопытными животными в течение 20 дней вели клиническое наблюдение, учитывали выздоровление, падеж и скорость роста.

Лечебная эффективность фуракрона (80%) превосходила фуразо-нал (73,36).

В опытной группе был и более высокий среднесуточный прирост массы тела 310 г, в базовом варианте он составил - 150 г.

Применение препарата снижало титры нормальных агглютининов с 1:28 до 1:16. 4

Применение препарата снижало содержание эозинофияов (с 3,0+ +0,96 до 2,6+0,81%, а также способствовало достоверному повышению комплементарной активности сыворотки крови с 17,78+1,43 до 22,59+1,75% гем. Под влиянием препарата увеличивалось содержание альбуминов с 43,93+2,86 до 45,56+3,21$, альфа-глобулинов с 27,37+1,68 до 31,49+2,37%, бета-глобулинов с 11,46+0,63 до 13,14+ ¿0,61$, что свидетельствует о нормализующем действии фуракрона на протеинограмму крови.

Во втором опыте препараты применяли также, как и в первом эксперименте. Проведенные клинические исследования в течение месяца подтвердили высокую терапевтическую эффективность фура!ф0на. По этому показателю (86,6$) он превосходил фуразонал (80,0$).

Прирост массы тела был практически одинаков260 г в опыте, а

в базовом варианте он составил 250,0 г.

Применение фуракрона благоприятно сказалось и на некоторые показатели крови поросят. Назначение фуракрона сопровождалось увеличением количества эритроцитов с 5,2+0,25 до 5,62+0,34, Препарат оказал стимулирующее влияние на гуморальные и клеточные факторы неспецифического иммунитета, о чем свидетельствовало повышение бактерицидной активности сыворотки крови с 23,52+4,20 до 30,23+1,67$, фагоцитарной активности лейкоцитов с 76,66+1,61 до 80,8+2,05$, фагоцитарного числа с 6,79+0,29 до 8,22+0,06% и фагоцитарного индекса с 5,22+0,35 до 6,63+0,16%.

Отмечено также увеличение содержания иммуноглобулинов класса в с 10,57+0,7 до 11,66+1,34 мг/мл, иммуноглобулинов класса Ы с 1,49+0,27 до 1,71+0,09 мг/мл. Наблюдалось снижение и титров антител к сальмонеллезному антигену с 1:150 до 1:70.

Таким образом, фуракрон в дозе 30 мг/кг при применении в течение 7 дней двукратно с кормом обладает выраженной терапевт1-ческой эффективностью при сальмонеллезе поросят.

3.8. Лечебная эффективность фуракрона при бронхопневмониях поросят

Терапевтическая эффективность фуракрона была изучена в двух сериях опытов на больных острой и подострой пневмонией поросятах 2-4 месячного возраста. У больных с острьм течениш болезни отмечали: угнетение, повышение температуры тела на 0,5-1,0°С, сухой болезненный кашель, серозно-слизистое истечение кз носовых отверстий, конъюнктивит. При подострой форме болезни наряду с выаеопи-сэнными признаками отмечали: снижение упитанности, отставание в

росте и развитии, усиление одышки, периодический кашель.

При патологоанатомическом вскрытии больных поросят неходили острый катар слизистой трахеи, бронхов и бронхиол, на фоне гипе-

ремии и отека легочной ткани в верхних сегментах сердечных и диаф-рагмальных долей легких отмечали сливную форму очаговой катаральной бронхопневмонии.

При бактериологическом исследовании патматериала от 2 убитых с диагностической целью поросят вьщелены культуры Pasteurella , multooida и Streptococcus pneumoniae , патогенные ДЛЯ белых мышей.

При изучении чувствительности выделенных патогенных бактерий к антибиотикам установлено, что пастереллы устойчивы к оксацилли-ну, пояимиксину, линкомицину и высокочувствительны к ампициллину, цефалотину, цефалексину; стрептококк был устойчив к цефалотину, чувствителен к бензилпенициллин калиевой соли, карбенициллину, тетрациклину, эритромицину, цефалексину.

При вирусологическом исследовании патматериала от убитых с диагностической целью поросят цитопатогенный агент не выявлен.

Для первого опыта было подобрано две группы поросят. Животным I группы (п=15) ежедневно с кормом в течение Ю дней подряд 2 раза в день применяли фуракрон в дозе 30 мг/кг,массы тела, 2-й (п=15) _ фуразонал по аналогичной схеме. За подопытными животными в течение 30 дней вели клинические наблюдения, учитывали выздоровление, падеж и скорость роста. Лечебная эффективность фуракрона (86,7%) превосходила фуразонал (80,0$). В опытной группе был и более высокий среднесуточный прирост массы тела - 200,0 г, в базовом варианте он составил 183,3 г. Наблюдалось снижение титров нормальных антител с 1:38 до 1:5,6.

Применение фуракрона снижало содержание лейкоцитов с 16,7+ +0,98 до 14,48+2,09 тыс/мкл и палочкоядерных нейтрофияов до нормы (с 6,0+0,76 до 4,2+1,1$), что указывало на благоприятный исход болезни.Отмечено увеличение содержания лимфоцитов с 39,7+2,81 до

43,8+4,74%, моноцитов с 1,87+0,76 до 2,4+0,88%. После лечения у животных наблюдалось повышение комплементарной активности сыворотки крови с 36,92+1,93 ДО 40,68+24,18$ гем, фагоцитарной активности лейкоцитов с 74,0+1,19 до 74,4+1,16%, иммуноглобулинов о с 10,8+0,6 до 12,9+0,9 мг/мл, иммуноглобулине М с 1,12+0,22 до 1,27+0,31 мг/мл. ,

Во втором опыте препараты применяли также, как и в первом эксперименте.

Проведенные клинические исследования в течение месяца подтвердили высокую терапевтическую эффективность фуракрона (93,Э&). Препарат обеспечивал более высокий среднесуточный прирост массы тела - 227,0 г. При применении фурззонала он составил 183,3 г. Фуракрон снизил титр нормальных агглютининов с 1:14,67 до 1:10,4.

Назначение фуракрона сопровождалось увеличением содержат".¿х эритроцитов с 4,8+0,24 до 5,42+0,39 млн/мл, уменьшение содержите« эозинофилов с 5,5+2,14 д0 4,4+1,1%.

Под влиянием препарата также происходила нормализация содержания палочкоядерных нейгрофилов. Препарат оказал стимулирующее . влияние на гуморальные и клеточные факторы неспецифического иммунитета, о чем свидетельствовало повышение бактерицидно!) активности сыворотки крови с 26,01+8,21 до 37,42+3,36$, фагоцитарного числа с 7,18+0,38 до 7,24+0,44%. Под влиянием препарата повысился уровень альбуминов с 47,2+3,82 до 52,98+2,08% (На 30 день), иммуноглобулинов 0 с 8,75+0,46 до 11,1+1,19 мг/мл и иммуноглобулинов М с 1,53+0,15 до 1,74+0,19 мг/мл. ■

Таким образом, фуракрон обладает выраженной терапевтической эффективностью при бронхопневмонии поросят бактериальной этиологии, благоприятно влияет на многие показатели крови и может быть рекомендован в качестве этиотропного средства при этом заболевании.

ВЫВОДЫ

■ I. Нитрофурановый препарат фуракрон in vitro в концентрации 0,39-25,0 мкг/мл обладает выраженной антимикробной активностью в отношении потенциальных бактериальных возбудителей желудочно-ки -шечных и респираторных болезней свиней.

2. Повышение устойчивости эшерихий и сальмонелл при культивировании их на средах, содержащих суббактериостатические концентра.-ции фуракрона, не достигает высокого уровня. Коэффициент резистентности в процессе 60 пассажей в отношении культуры эшерихии коли 0141 составил 8, а у сальмонеллы холерасуис - 4. Чувствительность к фуракрону у микроорганизмов восстанавливается в течение 20 дней у эшерихии, и в течение 15 дней у сальмонеллы при ежедневных пересевах на среды, не содержащие препарат.

3. При ультрамикроскопическом исследовании эшерихии коли 0141 и сальмонеллы холерасуис, подвергнутых воздействию фуракрона, установлены морфологические изменения, характеризующиеся деструкцией внутриклеточных структур, нуклеоида, нарушением роста и размножения.

4. Однократное применение фуракрона за 3 часа до заражения и введение его в течение 7 дней после инфицирования обеспечивало высокий индекс защиты белых мышей при эшерихиозной (83$) и саль-монелиезной (66 и 83%) инфекциях. При назначении препарата одновременно с заражением и через 3 часа после него индекс защиты был несколько ниже и составил при эшерихиозной - 66$ и 83% и сальмо-неллезной - 50%.

5. Применение фуракрона в дозе 30мг/кг 2 раза в день с кормом в течение 7 дней при колибактериозе поросят обеспечивает выздоровление животных в 87,5-90,0% случаев.

6. Применение фуракрона в дозе 30 мг/кг двукратно в течение дней групповым способом с кормом при сальмонеллезе поросят повы-ает комплементарную, бактерицидную активность сыворотки крови, кгоцитарную активность лейкоцитов и обеспечивает выздоровление ивотнызс в 80,0$-86,6$ случаев.

7. Двукратное применение фуракрона в дозе 30 мг/кг в течение О дйей групповым способом при бронхопневмонии поросят баятериаяь-ой этиологии повышает бактерицидную активность сыворотки крови, агоцитарное число и обеспечивает выздоровление животных в 86,7$

93,3$ случаев.

8. Производственная апробация фуракрона свидетельствует о фактической возможности и целесообразности его применения в про-шшленных свиноводческих хозяйствах для терапии поросят при желу-ючно-кипечных и респираторных болезнях бактериальной этиологии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты проведенных исследований вошли в Нормативно-техническую документацию на фуракрон (рассмотрена и одобрена зешением ученого совета ШЙВШФиТ 7 октября 1998 г., протокол К5 8).

2. Для терапии больных колибактериозом поросят фуракрон применять в дозе 30 мг/кг два раза в сутки в течение ? дней.

3. Для терапии больных саяьмонеллезом поросят фуракрон применять в дозе 30 мг/кг два раза в день в течение 7 дней.

4. Для терапии больных бронхопневмонией поросят бактериальной этиологии фуракрон применять в дозе 30 мг/кг два раза в сутки в течение 10 дней подряд.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ .ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шахов А.Г., Скогорева A.M. Изучение адаптации микроорганизмов к фуракрону// Сб.науч.тр. "Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных", Воронеж, 1987._ С.161Л62.

2. Скогорева A.M. Специфическая активность фуракрона при экспериментальном колибактериозе белых мыпей// Тез.докл.Межрегион, науч.-прак.конф.молодых ученых и спец. "Обеспечение стабилизации АПК в условиях рыночных форм хозяйствования", Воронеж, 1997. -

С. 50-51.

3. Скогорева A.M., Сашнина Л,Ю. Антимикробная активность фуракрона// Тез,докл. Межрегион, н&учуно-практич. конф. молодые ученых и спец. "Обеспечение стабилизации АПК в условиях рыночных форм хозяйствования", Воронеж, 1997,- С. 51-52,