Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Специфическая активность и лечебно-профилактическая эффективность иммуноглобулина-С аллогенного при пневмонии поросят

лшнистерство сельского хозяйства и продовольствия российской федерации

п <- - А П -----~-'СКГ

воронежский государственный аграрный университет имени к. д. глинки

2 п

На правах рукописи

МАГОМЕДОВ Ибрагим Магомедэминович

СПЕЦИФИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ И ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИММУНОГЛОБУЛИНА-С АЛЛОГЕННОГО ПРИ ПНЕВМОНИИ ПОРОСЯТ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

воронеж 1994

Работа выполнена в лаборатории микробиологии Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института ¡патологии, фармакологии и терапии.

Научный руководитель — доктор ветеринарных наук, профессор Д. Г. Шахов.

Официальные оппоненты:

д. в. и., профессор А. И. Ануфриев,

к. в. п., ст. научный сотрудник Н. Г. Жмуров.

Ведущая организация — Белгородское отделение Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии имели Я. Р. Коваленко.

Защита состоится « ^ » 199 {/ г. в 1% часов

па заседании специализированного совета К 120.54.03 при Воронежском государственном аграрном университете имени К. Д. Глинки по адресу: 394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-а. Ветклиника ВГАУ.

С диссертацией 'можно ознакомиться в библиотеке аграрного университета по адресу: 394087, г. Воронеж, ул. Мичурина, 1.

Автореферат разослан 1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат ветеринарных паук

Н. А. Чаплыгина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. В условиях промышленного свиноводства, особенно в специализированных хозяйствах по до-ращиваншо и откорму сборного поголовья, большую актуальность приобрели респираторные болезни поросят, среди которых наиболее широко распространены пневмонии.

В комплексе причин их возникновения и развития ведущее значение ¡принадлежит смешанным и ассоциированные инфекциям (Т. В. Пашов с соавт., 1977; В. Д. Настепко с со-авт., 1979; С. Г. Павлов, 1979, 1983; Л. П. Собко, 1979, 1983; В. Ф. Ромапепко с соавт., 1985; Л. Г. Шачов, 1986; Л. Я- А\н-лаико, 1990; А. Я. Пустовар, 1991, и др.). В такой ситуации применение с профилактической п лечебной целями различных специфических моповалептиых сывороток, а также хи-миотерапевтпчеекпх препаратов не всегда даст желаемый результат.

В связи с этим наряду с совершенствованном технологии выращивания животных возникает необходимость разработки! наиболее универсальных средств профилактики и терапии респираторных болезнен поросят. Для этой цели рекомендовано применение сыворотки крови рекопвалесцентов (II. II. Аидроснк, 1989, и др.), гипериммупных сывороток, нсспеци-фпческого гаема- и полиглобулина, полученных из сыворотки крови убойных свиней (В. П. Урбан, 1964; А. И. Луцспко с соавт., 1979, и др.).

С положительным эффектом па новорожденных поросятах попытана аллогепиая иммунная сыворотка свиней для профилактики смешанных желудочно-кишечных и респираторных инфекций в промышленных комплексах (П. Н. Смирнов с соавт., 1978, 1985; II. X. Засепокнй, 1984, и др.).

Обнадеживающие результаты получены при ¡применении аллогенной иммунной сыворотки евпнеп для профилактики ¡пневмонии поросят в межхозяпственпых предприятиях, вызванных комплексом предрасполагающих факторов и инфекционным агентом, представленным ассоциацией микроорганизмов (А. Г. Шахов с соавт., 1989, 1991, и др.).

Основным недостатком аллогешюй сыворотки является необходимость применения ее в относительно больших ло объему дозах, что не исключает появления анафилаксии и аллергии.

В связи с изложенным разработка новых эффективных средств для лечения и профилактики пневмоний поросят, обладающих широким спектром антимикробного действия и повышающих естественную и специфическую резистентность организма животного, имеет ¡большое теоретическое и практическое значение. Перспективным в этом направлении, на наш взгляд, является аллогенный иммуноглобулин.

Цель и задачи исследований. Цель настоящих исследований — разработать способ терапии и -профилактики респираторных болезней поросят с применением аллогенного иммуноглобулина свиней .(ИГС—А).

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить спектр антител в 5 сериях аллогенного шмму-псглойулина-С, полученного из сыворотки крови переболевших респираторными болезнями свиней, принадлежавших ^крупным свиноводческим .хозяйствам с различной технологией производства.

2. Изучить специфическую активность ИГС—Л в отношении инфекций белых мышей, вызванных сальмонеллами, па-стереллами, бордетеллами, стафнло:ко;кка.ми.

3. Изучить влияние различных доз аллогенного иммуноглобулина на общую неспецифическую резистентность поросят.

4. Изучить эффективность НГС—А при парентеральном и аэрозольном применении его с целью профилактики пневмоний поросят.

5. Изучить лечебную эффективность аллогенного иммуноглобулина в отдельности и в комбинации с антимикробным препаратом при пневмониях ¡поросят.

Научная новизна. Впервые из аллогешюй иммунной сыворотки свиней получен аллогенный иммуноглобулин. Изучены спектр его антител, биохимические свойства, специфическая активность в отношении потенциальных 'бактериальных возбудителен пневмоний поросят, влияние па морфологические и иммунобнохимические показатели крови животных, профилактическая п лечебная эффективность при пневмониях поросят с учетом их этиологии.

Практическая значимость. Для повышения общей иеопе-цифической резистентности организма, профилактики и терапии лневмопий поросят предложен иммупоглобулип-С алло-генный.

Внедрение результатов исследований. Разработана и утверждена нормативно-техническая документация на препарат (1993 г.).

Апробация результатов исследований. Материалы диссертации доложены на Республиканской научно-производственной конференции «Профпл актнка п ;меры оорьоы с оолезня-ми молодняка сельскохозяйственных животных» (р. Минск, 1990); Всесоюзной научно-технической конференции «Профилактика и лечение болезнен „молодняка сельскохозяйственных животных» (г. Москвва, 1991).

Публикация. Материалы диссертации опубликованы в 4 статьях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и включает: введение. обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований, анализ результатов исследований, выводы, практические предложения и список литературы.

Работа иллюстрирована 31 таблицей. Список литературы включает 209 источников, в том числе 1Г>8 отечественных и 41 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛ И Л1ЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Настоящая работа выполнена в лаборатории микробиологии Всероссийского научно-исследовательского, ветеринарного института патологии, фармакологии п терапии в 1989—1993 гг. в соответствии с планам НИР института ¡по теме: «Разработать и внедрить в производство 'препараты естественных иммуноглобулинов для повышения резистентности новорожденных телят и лоросят и лечения мастита у 'коров» (№ гос. регистрации 01890075846) и заданием Главного управления ветеринарии Госагропрома СССР: «Разработать и внедрить иммуноглобулин-С аллогенныи (ИГС—А) для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных болезней ■поросят» (1989).

Аллогенный иммуноглобулин получали в условиях Моги-левского завода ветпрепаратов и лаборатории микробиологии

Института. В качестве исходного сырья использовали аллоген-ную иммунную сыворотку крови от клинически здоровых свиней из группы откорма, ранее ¡переболевших респираторными болезнями.

Сыворотку получали методом отстоя, основанным па свертывании крови (переход фабринотена в фибрин), и постепенного уплотнения сгустка, который удерживает (форменные элементы жрови. После проверки сыворотки на стерильность (путем посева на питательные среды МПБ, МП А, среду Кит-та — Тароцци, элективную питательную среду для мико-ллазм), безвредность (токсичность) на «белых мышах и специфическую активность с бактериальными и вирусными антигенами методам осаждения полиэтнленгликолем (ПЭГ-115) из нее изготавливали иммуноглобулин.

Всего изучено 5 серий аллогенного. иммуноглобулина, полученного от животных, (принадлежавших межхозяйственным (предприятиям «Победа» (2 серии) и «9-я пятилетка» (1 серия), гос плслгзаводу «Масловский» (1 серия) Воронежской и совхозу «Лазаревский» (1 серия) Тульской областей.

В каждой серии .препарата определено наличие антител в РА ¡к антигенам из эшерихий, сальмонелл, ¡бордетелл, пасте-релл, стафилококков, в РТГА iK гриппозному и парагриппоз-ному, в PC К к орнитозному антигенам и в реакции нейтрализации — к коронавирусу. Все реакции ставили общепринятыми в микробиологии и вирусологии методами с биофабричными или приготовленными в условиях лаборатории антигенами.

Количественное содержание иммуноглобулинов классов А, G, M определяли на анализаторе белков «Арраи» фирмы «Веокман» (США).

Изучение влияния иммуноглобулина на течение пастерел-лезной, бордетеллезной, сальмонеллезной и стафилококковой инфекций было проведено на 520 (белых мышах с массой тела 18—20 г после проверки их на носительство сальмонелл и ¡пастерелл. Индежс защиты (эффективности) иммуноглобулина определяли по формуле В. Д. Белякова (1961).

Опыты по изучению профилактической и лечебной эффективности шроведены на 680 поросятах в возрасте 2—4 месяцев в знмлс-весешше ¡периоды в хозяйственных условиях содержания и (кормления на >базе МХЛ «Победа» Воронежской области. Животных содержали группами (14—18 гол.) в станках, безвыгульно, в типовых .помещениях. Микроклиматические условия содержания поросят не всегда отвечали зооги-

сценическим нормам. Кормление — ..механизированное сухим кормом, водопои вволю. Рационы были сбалансированы по основным питательным веществам, витаминам, шакро- и микроэлементам согласно существующим нормам.

Исследования выполнены в соответствии с требованиями к врачсбно-бпологпчес-кому эксперименту (И. Т. 'Фролов, 1965) по постановке контроля, подбору аналогов, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период исследования. Для исключения случайных результатов опыты .проведены в нескольких повторпосгях.

Изучение влияния иммуноглобулина на морфологические и биохимические показатели к ровп и общую неспеиифиче-екую резистентность организма проведено на 102 клинически здоровых и 30'больных пневмонией шоросятах в возрасте 2—4 месяцев.

В 'крови определяли содержание эритроцитов и лейкоцитов на счетчике частиц Культер Каунтср (Франция), »количество гемоглобина — гемоглобшпшанилным методом.

Для оценки уровня общей неспецифической резистентности определяли бактерицидную активность сыворотки крови по методу О. В. Смирновой и Т. А. Кузьминой (1966), комплементарную активность —'по О. В. Бухарину (1974), лизо-цнмнуго активность — по К- А. Каграмановой и 3. В. Ермольевой (1966), фагоцитарную активность лейкоцитов — по В. С. Гостеву (С. И. Плящеико с соавг., 1979), общий белок — рефрактометрически, белковые фракции — ¡методом Олла и Маккорда в модификации С. А. Карпкжа (1962), качественное определение иммуноглобулинов — .но А\анчнни (1974), содержание'суммарных иммуноглобулинов — по А. Д. Мак Юан с соавт. (1970).

Диагноз и этнологию пневмонии устанавливали комплексно на основании эпизоогологических, клинических данньих с учетом результатов бактериологических, вирусологических и серологических исследований.

Для характеристики клинического состояния у животных измеряли температуру тела (роктальпо), определяли частоту пульса и дыхания, характер носовых выделений.

Для проведения 'бактериологических исследований использовали пораженные легкие, кровь из сердца, печень, селезенку, почки от 10 убитых с диагностической целью животных н 16 проб носовых выделений от больных пневмонией поросят. Последние получали из носовой полости с помощью стерильных тампонов, которые помещали в пробирки с элективной

питательной средой ВИЭВ для микоплазы. Патологический материал исследовали не позднее 4—6 часов после взятия. Посевы патологического материала проводили на МПБ с глюкозой, МГ1А с 5% крови барана, казеино-угольный агар, среду Эидо. По 3—5 типичных колоний каждого вида ¡бактерий отсевали па скошенный в пробирки МПА, МПА с 10% сыворотки крови и 1 °/0 глюкозы для дальнейшего изучения.

У выделенных чистых культур ■бактерий изучали .морфологические, культур а лыю-биохимические и тннкторнальные свойства оощспрп пятыми в бактериологии методами.

Патогенпость культур определяли на белых мышах. Типизацию кокковой микрофлоры проводили согласно «Рекомендациям по индшкацнп и идентификации стафилококков и стрептококков» (1976), а пасгсрелл и бордетелл — согласно «Методическим рекомендациям по лабораторной дпагностп-«с инфекционных пневмоний свиней, вызванных ¡мпжошлазма-мн, пастсрелламп и бордетеллами» (1983). Серологическую типизацию сальмонелл и эшерихин проводили в РА с О- и Ы-агглкшширующшмн сальмонеллезньими сыворотками и Онколи сыворогка;.ип согласно «Наставлению ио применению агглюгшшрующих Онколи сывороток» (1980) и «Методическим указаниям но применению сальмопеллезных монорецеп-ториых О- и Н-агплюгинирующих адсорбированных сывороток для идентификации сальмонелл» (1978).

Исследование сывороток крови ог 147 больных пневмонией п 165 клипнчеекп здоровых животных проводили трехкратно с интервалом в 2 недели в реакции агглютинации с сальмо-неллезпым, пастереллезным, бордетеллезным и эшерихио'зньгм антигенами.

■ПастереллеЗ'Ный и бордетеллезный антигены готовили из референтных штаммов, ¡полученных из Украинского НИВИ. Посевы указанных культур проводили на МПА с 10% сывороткой лошади, инкубировали в термостате 18—24 часа при 37°С. После (.микроскопии культуры омывали стерильным 0,85% физиологическим раствором, доводили концентрацию взвеси до 10 млрд. \з. к. по оптическому стандарту мутности.

Сальмонсллезнып и эшерихиозный антигены готовили из культур эпизоотических штаммов. Посев сальмонелл н эше-рихпй проводили на МПА. Взвесь ¡культур на физиологическом растворе доводили до 2 ¡млрд. концентрации в 1 ¡мл по оптическому стандарту мутности.

Статистическая обработка полученных данных проведена общепринятыми методами (Е. К- Меркурьева, 1964).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИИ

Технология получения аллогенного иммуноглобулина

Для изготовления ИГС—А использовали аллогепную иммунную сыворотку «рови свиней из группы откорма, консервированную 5% раствором фенола. Перед фракционированием сыворотку ¡крови фильтровали через 2 слоя марли. Профильтрованную сыворотку загружали в емкость из нержавеющей стали, оборудованную мешалкой. Измеряли и доводили рН сыворотки до 7.8—8,5. Корректировку рН проводили при помощи 1 % раствора соляной кислоты и едкого натра.

Затем в сыворотк\т добавляли полнзтилепгликоль-115 (ПЭГ-115) из расчета 7—9 «г на 100 литров сырья.

После растворения ПЭГ-115 при постоянном перемешивании (20—-10 мин) выплдалн хлопья белка, состоящего г> основном из бета- и гамма-глобулинов. Для отделения осадка глобулинов смесь сыворотки с ПЭГ оставляли па 2-1 часа и холодильнике при Ц-4°0.

При этом взвесь оседала, надосадочиуго жидкость сливали, а осадок собирали и взвешивали. Выход осядка пз 100 л сыворотки составлял 4,8—5,6 кг.

Полученную белковую пасту растворяли в стерильном 0,85% физиологическом растворе в соотношении 1:2. Полученную смесь сливали в емкость из нержавеющей стали. В растворе рефрактометрически определят содержание белка и доводили его физраствором до 10—12%. Из 1 кг насты в соеднем было получено 2,8—3,3 л раствора глобулина.

Раствор 'глобулина фильтровали через мезгу различной плотности: «белая» мезга — размоченная в дистиллированной воде и измельченная в виде кашицы белая фильтровальная бумага; «серо-белая» мел г а — размоченная и измельченная фильтровальная бумага и пластины «Ф» в соотношении 1:1. Наименее плотная '— «белая» мезга.

Фильтрацию через мезгу ¡проводили па фильтрах Путча. При этом на его сопку клали лист фильтровальной бумаги, на который помещали мезгу, затем -под вакуумом удаляли избыток воды. После фильтрации через мозгу раствор глобулина фильтровали нп наборных миогорамных фильтрах (фильтры Сальникова) 'последовательно через пластины «Ф», а затем через пластины <СФ». Перед -каждой фильтрацией следили, чтобы рН была в пределах 6,8—7,2, Выход готового

препарата (ИГС—Л) от исходного объема сыворотки (АИСС) составлял 10—'15% в зависимости от концентрации белка в сыворотке.

1. Иммунологическая и биохимическая характеристика аллогенпого иммуноглобулина

В 5 сериях аллогенпого иммуноглобулина, полученного от животных из хозяйств с различной технологией производства, изучено наличие антител к потенциально патогенным возбудителям респираторных инфекции, содержание общего белка, его фракции и иммуноглобулинов классов А, в и М.

Проведенные исследования показали, что во всех сериях препарата выявлены антитела ко многим возбудителям респираторных болезней н, в частности, к сальмонеллам, пасте-реллам, стафилококкам, этермхням, бордетеллам, вирусам гриппа и трансмиссивного гастроэнтерита свиней. В ИГС—А не выявлены комплементсвязываюшие антитела к орнптоз-нсму и аптигемагглютпннны к ларагриппозному антигенам.

Все серии препарата в большей степени содержали иммуноглобулин С, в меньшей — иммуноглобулин М и очень незначительное количество иммуноглобулина А.

'Полученные результаты свидетельствуют о возможности применения ИГС—А для профилактики и терапии респираторных болезнен поросят различной этнологии.

2. Специфическая активность ИГС—А при экспериментальных инфекциях белых мышей

Проведенные исследования ¡наказали, что наиболее высокую специфическую активность ИГС—А проявил при стафилококковой инфекции. Введение препарата за 3 часа до заражения и одновременно с ним индекс защиты в среднем составил 76,7%.

Несколько ниже (70%) этот (показатель был при введении ИГС—А через 3 часа после заражения. Наиболее высокий индекс защиты при стафилококковой инфекции 'был установлен при назначении иммуноглобулина двукратно в день в течение 4 суток (в среднем он составил 93,3%).

Сравнительно высокий профилактический эффект (66,7%) получен при введении ИГС-т-А за 3 часа до заражения мышеи сальмонеллами. Несколько ниже индекс защиты был при

впадении препарата одновременно с заражением (36,7 и 43,3%) п через 3 часа после инфицирования (53,3%).

В отношении бордстеллезнон инфекции наиболее высокий (63,3%) индекс защиты был получен прп введении ИГС—А до заражения п при двукратном 'Применении препарата в течение 4 суток (46,7%). Значительно ниже этот показатель был )Прп введении ИГС—А одновременно с заражением (26,7%) и через 3 часа после инфицирования (6,7%).

Аналогичная картина отмечена и при пастереллезной инфекции. Более выраженный защитный эффект ¡получен при введении иммуноглобулина до заражения (56,7%) и при двукратном сто применении в течение 4 суток (60%), значительно ниже — при введении препарата одновременно с заражением (26,7%) н через 3 часа после него (23,3%).

Исследования показали,'что наиболее выраженный защитный эффект при всех инфекциях ИГС—А проявил лри введении егоза 3 часа до заражения и прп двукратном назначении в день в течение 4 суток, проводя первое введение препарата одновременно с инфицированием. Величина индекса защиты зависела и от дозы препарата. Более выраженный эффект был толучен при назначении ИГС—А в дозах 0,01 и 0,015 мл.

2.1. Влияние иммуноглобулина-С лллогеиного на неспецифическую резистентность поросят

Влияние ИГС—А на общую неспецпфическую резистентность было изучено на клинически здоровых животных после транспортировки в период адаптации их к новым условиям содержания и кормления и больных пневмонией поросятах в возрасте 2—4 месяцев.

Иммуноглобулин животным вводили внутримышечно или применяли в форме аэрозоля двукратно с интервалом в 14 дней.

Проведенные исследования показали, что в период адаптации к новым условиям у пнтактных клинически здоровых животных отмечена тенденция к снижению содержания ¡гемоглобина и эритроцитов на 3,6 и 6,7%; 3,9 и 0,9% соответственно на 15 и 30-й дни, но возросло число лейкоцитов на 45,7 и 25,2% и процент нейтрофилов при снижении (в 2,3 п 2,8 раза) содержания эозинофилов, ¡бактерицидной на 18,2% (15-й день) и комплементарной на 19,3 и 6,7 % (15 и 30-й дни) активности сыворотки крови и повышению ее лизоцимной активности на 48,8% и в 2,1 ра;за (15 и 30-й дни), произошло

снижение альфа-глобулинов на 40,2 и 31,3% при увеличении содержания (^-глобулинов па 00,5 и 79,1 % (15 и 30-й дни). Все это свидетельствует о том, что животные преодолевают начальные стадии генерализации адаптационного стресса.

Применение аллогепного иммуноглобулина оказывало стабилизирующее или нормализующее влияние на содержание эритроцитов л темоглобина. Количество лейкоцитов в крови животных как в опытных, так и в контрольной группах увеличивалось, но у поросят, обработанных иммуноглобулином, увеличение происходило без резких колебаний.

Существенное влияние ИГС—А оказал на содержание эозинофилов. Если у контрольных животных количество их уменьшалось на 56,5% и в 2,88 ряза (15 и 30-й дни), что свидетельствует о фазе шока стадии тревоги при стрессе, то у поросят опытных групп отмечено увеличение содержания эозинофилов на 27,0% и в 2,63 раза (15 и 30-й дни), что свидетельствует о фазе противотока и стадии резистентности.

Биохимическими исследованиями крови установлено, что как внутримышечное, тане и аэрозольное применение всех доз иммуноглобулина клинически здоровым животные в период адаптации к новым условиям сопровождается увеличением содержания гамма-глобулинов в сыворотке чкрови на 28,6 и 34,8% за счет 'уменьшения количества альбуминов на 23,4 и 30,6% и р-глобулинов на 3,6 и 11,2% (45 и 30-й дин). Увеличение содержания гамма-глобулинов свидетельствует о развитии многосторонних защитных реакций, ¡которые возникают в ответ па действие стрессовых факторов.

Благоприятное влияние аллогенный иммуноглобулин оказал на такие гуморальные факторы иеспецифичеакого иммунитета, как лизоцимная, ¡комплементарная и бактерицидная активность сыворотки крови. Если у поросят контрольной группы в период адаптации к новым условиям происходило достоверное повышение лизоцимной активности, предшествующей (клиническому шроявлению лепкой формы пневмонии, то у животных опытных ¡групп этот показатель увеличивался незначительно (на 8,4 и 13,2%) на 15 и 30-и дни, кроме того, повышалась комплементарная активность на 28,7% и в 3,2 раза (15 и 30-й дни). Поскольку комплемент является основным фактореш регуляции уровня иммунных чсомплексов и их образования (I. А. ЭНИТегН, 1987), то при его ¡увеличении, как правило, снижается восприимчивость организма к инфекции ОН. А. УегЬгидЬ а!., 1982).

Под .действием иммуноглобулина повышается и бактерицидная активность сыворотки-крови на 8,7 и 13,6% (15 и 30-и дни опыта), отражающая суммарное действие гуморальных факторов защиты.

Благоприятное влияние аллогеииыи иммуноглобулин оказал на морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови больных пневмонией поросят.

При внутримышечном введении препарата у них отмечены по сравнению с фоновыми данными тенденция к увеличению количества эритроцитов и достоверное повышение содержания гемоглобина на 10,2 и 10,6% (1'5 и 30-и дни), тенденция к снижению ¡количества лейкоцитов на 20,8% (15-й день) и на 18,8% (30-и день).

Под действием ИГС—А происходило также увеличение содержания альбуминов (особенно на 15-и день) и бета-глобулинов на 18,6% и в 2,9 раза при достоверном снижении уровня гамма-глобулинов в 2 раза, высокий показатель которых постоянно отмечается при пневмониях.

Введение препарата больным животным сопровождалось повышением неопецпфнчеокого гуморального и 'клеточного иммунитета.

Таким образом, применение ИГС—А клинически здоровым поросятам в период адаптации к новым условиям н больным пневмонией животным стабилизирует или нормализует многие морфологические и биохимические показатели крови и повышает гуморальные и клеточные факторы неспецифического иммунитета.

3. Профилактическая и лечебная эффективность аллогенного иммуноглобулина

Изучение профилактической и лечебной эффективности ИГС—А проведено в специализированном хозяйстве по до-ращиванию и откорму сборного поголовья «Победа» Ссми-лукского района Воронежской области с производственной мощностью 30 тыс. свиней в год.

3.1. Эпизоотическая ситуация хозяйства и этиология респираторных болезней поросят

Заболеваемость поросят респираторными болезнями в 1986—1992 гг. колебалась от 31,5 до 60,7%. Наиболее выраженное клиническое проявление патологии отмечали в 1-й

месяц после транспортировки и комплектования технологических групп доращн'вания.

Для изучения этиологии респираторных болезней поросят были проведены 'клинические, бактериологические, серологические и иммунобиохнмические исследования.

У больньгх животных отмечали повышение температуры тела до 40,3—41,5°С, учащение дыхательных движений до 35—40 и пульса до 90—100 в 'минуту, угнетение общего состояния, снижение аппетита, кашель, напряженное дыхание, одышку, серозное истечение из носовых отверстий.

В крови больных животных (было установлено снижение содержания гемоглобина, эритроцитов, общего белка, альбуминов, альфа- и бета-тлобулипов и увеличение содержания гамм а-глобу'линов.

Результаты бактериологических исследований патологического материала от животных, убитых с диагностической целью, .показали, лто из пораженных легких выделяются ассоциации бактерий, ¡представленные сальмонеллами (100%), эшернхиями (50°/о), пастереллами (100%), >бордетеллами (50%); р-гемолитпчсскими стрептококками (50%) и стафилококками |(25%).

Патогенными свойствами обладали сальмонеллы в 100%, эшерихии — в 100%, стрептококки — в 50%, пастереллы — в 100%, бордетеллы — в 100% п стафилококки — в 100% случаях.

При изучении чувствительности выделенных патогенных бактерий к антибиотикам установлено, что сальмонеллы устойчивы или сла'бочувствительны к тетрациклину, гентамицину и полимвксину, эшерихии — к стрептомицину, левомице-тину, подимикенну, тептамицнну; пастереллы — к тетрациклину, левомнцетипу, тентамицину; стафилококки — к пенициллину, левомицетину, мономицину н гентамицину; стрептококки — высокочувствительны к пенициллину и тетрациклину и чувствительны к гентамицину; бордетеллы чувствительны « гентамицину.

Наиболее высокую антимикробную активность в отношении всех «ультур бактерии проявлял генташицин.

Приведенные в разделе 2.1. данные свидетельствуют о том, что транспортировка, перегруппировка, смена условий 'кормления н содержания и др. неблагоприятные факторы на длительное время снижают общую неспецифнческую устойчивость организма животных п на этом фоне у них часто отме-

чают патологию респираторного тракта, вызываемую вышеуказан иылш мнкроорга1шз;.ма!ми.

Таким образом, в специализированных свиноводческих хозяйствах по доращпвашио п откорму сборного поголовья массовые респираторные болезни поросят возникают, распространяются и проявляются по типу смешанных факторно-пн-факцпоппых -болезнен, для которых свойственна полиэтиоло-гпчпость.

В связи с этим для терапии и профилактики таких болезней наряду с совершенствованием технологии выращивания животных необходимо применение комплексных препаратов, обладающих широким спектром антимикробного действия и повышающих естественную резистентность организма.

Всем этим требованиям отвечают препараты естественных пм'мупоглобулинов п, в частности, аллогеппын иммуноглобулин.

:3.2. Профилактическое действие препарата

Профилактическая эффективность аллогенпого иммуноглобулина изучена в трех опытах на 'клинически здоровых поросятах 2—3,5-месячпого возраста после перевода их на лоращпвагше.

В первом опыте препараты применяли двукратно с интервалом в 14 дней: ИГС—А — внутримышечно в дозе 0,25 мл/кг (п = 15) и в форме аэрозоля из "расчета 0,25 ¡мл/м3 камеры (п = 24), АИСС — внутримышечно 40 мл/кг (п=14) и аэрозолъпо 2,0 мл/м3 (камеры (п=24).

За ¡подопытными животными в течение 30 дней вели клинические наблюдения, учитывали заболеваемость, падеж, скорость роста.

При внутримышечном введении ИГС—А больных животных не отмечено, а при 'применении его в форме аэрозоля заболеваемость пневмонией составила 7,1%, что в 3,3 раза меньше, чем в контроле (23%). По профилактической эффективности ИГС—А несколько превосходил АИСС. .Заболеваемость животных, обработанных сывороткой, составила 14,3 и 16,6% -

Иммлпоглобудпп обеспечивал 'более высокую скорость роста (240,0 и '233,0 г), лом АИСС (213,0 и 156,0 г). В контроле среднесуточный прпрост массы тела животных составил 153,0 г.

После одно- п двукратного внутримышечного введения препарата у животных отмечена тенденция к увеличению количества эритроцитов на 11,7% (15-й день) п 10,06% (30-й день) и содержания в них гемоглобина соответственно на 7,8 и 8,1%.

Благоприятно сказалось применение ИГС—А на показателях общей несиецнфплеокон резистентности организма, отмечено повышение лцзоцнмной активности на 29,3 (15-й день) п 33,6% (30-й день), ¡комплементарной — в 1,8 раза (30-й день) и бактерицидной активности сыворотки крови — соответственно на 4,2 и 5,6% (15 и 30-й дни).

Внутримышечное введение иммуноглобулина сопровождалось увеличением содержания общего белка па 15,6 (15-й день) и 11,0% (30-й день) и тамма-глобулииов — соответственно на 42,9 и 73,2%.

При аэрозольной обработке отмечена тенденция к увеличению содержания гемоглобина на 2,4 и 3,5% на 15 и 30-н дни, повысились лизоцимпая активность в 2,6 раза (15-й день) и на 33,1% (30-н день), комплементарная — на 79,7% (30-й день), бактерицидная активность — на 3,9% '(30-н день), фагоцитарное число — на 25,8%, фагоцитарный индекс — на 21,8% (на 15-й день), содержание общего белка—• па 25,1 (15-й день) н 72% (30-й день) и гамма-глобулинов — соответственно на 6,3 и 10,3%.

При исследовании сывороток крови животных, обработанных ИГС—А, на наличие антител к бактериальным антигенам установлено, что три внутримышечном введении ИГС—А происходило повышение титра антител к сальмонеллезному антигену в 3,05 и 5 раз па 15 и 30-й дни, эшерихиозпому — в 8 и 10 раз, стафилококковому — в 2,18 п 2,5 раза, пастерел-лезному — в 2 и 1,66 раза, бордетеллезнаму — в 4,2 и 2 раза на 15 и 30-й дни.

Применение с профилактической пелыо аллогепной иммунной сыворотки крови свиней также благоприятно сказалось на многих .морфологических и иммунобиохимических показателях крови поросят.

Во втором опыте 'клинически здоровые животные .после транспортировки были разделены на 2 группы. Поросятам Г группы (п=(15) двукратно с интервалом в 14 дней внутримышечно вводили иммуноглобулин в дозе 0,25 мл/кг. Интакт-ные-животные (п = 15) служили контролем.

Заболеваемость животных в опытной ¡группе (6,7%) была в 3 раза меньше, чем в контроле (20%). Падеж одного жи-

вотиого (6,7%) зарегистрирован только в контрольной группе.

Введение ИГС—Л обеспечивало 'получение -более высокого прироста массы те.:¿1 — 2.33,3 г, в контрольной группе он составил 203,3 г.

В третьем опыте профилактическая эффективность ИГС—А была изучена в сравнении с АНСС и технологическим контролем. ИГС—А животным (п=14) вводили внутримышечно в дозе 0,25 -мл/кг, АИСС — в дозе 1 мл/кг (п = 14). Повторно биопрепараты применяли через 14 дней в тех же дозах.

Заболеваемость поросят пневмонией п опытной группе была в 3 раза ниже, чем в контроле. Поросята опытной трудны лучше росли. Среднесуточный прирост массы тела у них за период опыта составил 225,0 г, в то время как в группе, где применяли АПСС, — 205,0 г, в контроле 121,0 г.

Проведенные исследования свидетельств уют о выраженной 'профилактической эффективности ИГС—А.

3.3. Лечебное действие препарата

Терапевтическая эфф ектпвность аллогенного иммуноглобулина была изучена в трех опыта>х па больных острой и под-острой пневмонией поросятах в возрасте 2,5—4 месяцев.

В первом опыте было попользовано 4 группы поросят. Животным 1-й группы (п=14) внутримышечно вводили ИГС—А (0,5 мл/кг), 2-й :(п= 14) — АИСС (2,0 шл/кг), 3-й (п=13) — ИГС—А (0,5 ¡мл/кг) в комбинации с теграолеаном, 4-й (п = 16) — тетраолеан.

ИГС—А и АИСС применяли один раз в день в течение 5 суток, а тетраолеан в соответствии с наставлением но его применению.

Антимикробный препарат тетраолеан, содержащий в своем составе в качестве активно действующего вещества антибиотик тетрациклин, был выбран как наиболее активный в отношении -микроорганизмов (сальмонелл и стафилококков), выделенных из легких больных пневмонией поросят.

За .подопытными животными в течение 30 суток вели клинические наблюдения, учитывали выздоровление, падеж и скорость роста.

По лечебному эффекту ИГС—А (85,7%) превосходил АИСС (71,4%) и тетраолеан (66,7%). Наиболее выраженный терапевтический эффект (92,3%) получен при применении

аллогеиного иммуноглобулина в комбинации с тстраолеаном.

Введение ИГС—А и отдельности и в комбинации с тетраолеан 0'.ч обеспечивало более высокий прирост ¡массы тела (200,0 и 190,0 г соответственно), при ¡применении тетраолеана он составил 100,0 г, а при введении АИСС — 120,0 ¡г. Падеж ,(12,5%) зарегистрирован только в группе, где применяли антибиотик.

Во втором опыте прешараты 'применяли гак же, как и в первом.

Проведенные клинические исследования в течение месяца подтвердили высокую терапевтическую эффективность ИГС—А, полученную в первом опыте. По этому показателю (87,5%) он .превосходил АИСС (78,6%) и тетраолеан (78,6%). Наиболее выраженный лечебный эффект получен при ¡применении ИГС—А в комбинации с антибиотиком (92,3%).

Иммуноглобулин в отдельности и в комбинации с тетра-олеаном обеспечивал более высокий прирост массы тела (253,0 и 246,4 г соответственно). При применении тетраолеа-на он составил 153,5, а АИСС — 182,0 г.

Введение ИГС—А животным сопровождается увеличением количества эритроцитов на 12,4% (15-й день) и 17,2% (30-й день), содержания в них гемоглобина — соответственно на 7,2 н 12,4%, снижением количества лейкоцитов на 11,8 и 41,9% (15 и 30-й дни).

ИГС—А оказал стимулирующее влияние на гуморальные и клеточные факторы несшецифичеокого иммунитета, о чем свидетельствовало повышение лизоцимиой в 3,0 раза (30-й день), комплементарной — на 36,2% (4 5-й день), бактерицидной активности сыворотки крови — на 5,1% (15-й день) и 5,7% (30-й день), фагоцитарного числа — па 43,3 и 46,5% и фагоцитарного индекса — на'37,5 и 42,6%.

Под влиянием препарата уменьшилось на 15 и 30-й дни содержание гамма-глобулинов соответственно на 27,9 и 35,3% и ,повысился уровень альфа-глобулинов па 29,6 и 49,2%, бета—• на 6,6 и 23,6%, а также альбуминов — на 15,4 и 38,0%.

Комплексная терапия с применением ИГС—А и антибиотика также оказала нор1мализующее и стимулирующее влияние на многие морфологические и иммунабиохтмичеокие показатели крови больных животных.

В третьем опыте ИГС—А (п = 12), АИСС (п=>10) и тетраолеан (п=41) ¡применяли в тех же дозах и по тон же схеме, ¡что и в опытах 1 и 2.

Клинические наблюдения показали, что Л ГС—А обладал высокой лечебной эффективностью (91,7%) и превосходил но этому показателю АИСС (80,0%) и теграолеан.

Кроме того, Г1ГС—А обеспечивал более высокий прирост массы тела (325,0 г) по сравнению с теграолеаном (260,0 г) и АИСС (218,0 г).

Падеж одного животного (10%) отмечен только во второй грунте, где с лечебной целью применяли АИСС.

Таким образом, ИГС—А в дозе 0,5 мл/кг при применении в течение 5 суток в отдельности и в комбинации с антимикробным препаратом обладает выраженной терапевтической эффективностью при пневмониях поросят, вызванных ассоциацией микроорганизмов.

ВЫВОДЫ

1. В специализированных свиноводческих, хозяйствах по доращиванию и откорму сборного поголовья массовые пневмонии поросят (проявляются по типу смешанных факторно-инфекционных болезней.

2. Клинические и эпизоотолотические проявления пневмонии поросят обусловлено, воздействием предрасполагающих факторов (транспортировка, перегруппировки, смена условий кормления, содержания и др.), снижающих общую неспеци-фпчеокую устойчивость организма и инфекционного агента, представленного ассоциацией микроорганизмов, как правило, слабо чувствительных или устойчивых к широко применяемым в ветеринарной практике антибиотикам.

3. Иммуноглобулин-С аллогенный, полученный из сыворотки крови откормочных свиней, .представляет собой поливалентный биологический препарат, состоящий из бета- и гамма-глобулинов и содержащий набор антител, адекватных вирусно-бактериальному фону хозяйства. Препарат содержит преимущественно иммуноглобулин класса вив меньшей степени иммуноглобулины М и А.

4. Однократное применение алло генного иммуноглобулина за 3 часа до заражения и одновременно с ним обеспечивало защиту белых мышей от стафилококковой инфекции в 76,7%, от сальмонеллезной — в 66,6 и 36,6%, бордетеллез-ной — в 63,3 и 26,6% и пастереллезной инфекции — в 56,6 и 26,6% случаев.

11рл введении препарата /через 3 часа после заражения индекс защиты снижался я составил соответственно 70%, 53,3, 6,66 и 23,3%. Двукратное применение иммуноглобулина в день в течение 4 суток зараженным животным предупреждало их гибель от стафилококковой инфекции в 93,3%, саль-шонеллезнон — 43,3, бордегеллезной — 46,6 и насгереллез-нон инфекции — в 60% случаев.

5. Двукратное с интервалом в 14 диен применение алло-тенного иммуноглобулина как при внутримышечном назначении в дозе 0,25 мл/жг, так и в форме аэрозоля из расчета 0,25 мл па 1 м3 сектора (камеры) 1клшшчеакн здоровым животным в териод стресса и адаптации повышает общую и специфическую устойчивость организма, в значительной степени обеспечивает увеличение прироста массы тела и предупреждает возникновение бронхопневмоний в 92,9—'100% случаев.

6. Применение аллогенного иммуноглобулина в дозе 0,5 мл/кг в течение 5 дней больным бронхопневмонией поросятам 'бактериальной этиологии повышает их общую устойчивость и способствует выздоровлению в 85,7—91,7% случаев. При назначении иммуноглобулина в комплексе с антибактериальный! препаратам терапевтический эффект повышался на 4,8-6,6%.

7. Производственная апробация аллогенного иммуноглобулина свидетельствует о реальной ¡практической возможности и целесообразности его широкого .'Применения в промышленных свиноводческих хозяйствах как одного из технологических звеньев плановой системы борьбы с респираторными болезнями свиней в период комплектования их в группы до-ращивашгя.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты проведенных исследований вошли в Нормативно-техническую документацию на аллогенный иммуноглобулин свиней, утвержденную ГУ В МСХ России (1993 г.).

2. Для профилактики респираторных болезней свиней рекомендуем применять ИГС—А двукратно с интервалом в 14 дней внутримышечно в дозе 0,'25 мл/да или в форме аэрозоля из расчета 0,25 мл/м3 сектора (камеры) в период комплектования пх в группы доращивания.

3. Для терапии больных бронхопневмонией поросят бактериальной этиологии рекомендуем применение аллогенного иммуноглобулина в дозе 0,5 мл/кг в течение 5 суток в отдель-

ности или в комбинации с антимикробным препаратом, активным в отношении микроорганизмов, вызвавших заболевание.

Список опубликованных работ

1. Шахов А. Г., Бригадиров 10. Н., Болгова В. И., Магомедов И. М. Применение аллогелпого иммуноглобулина для терапии респираторных болезнен свиней // Тезисы докладов Республиканской научно-производственной конференции «Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка сельскохозяйственных животных». Минск, 1990. — С. 110—111.

2. Шахов А. Г., Бригадиров 10. Н., Болгова В. И., Магомедов И. М. Аэрозолепрофилактпка респираторных болезней свиней аллогенньгм иммуноглобулином //, Тезисы докладов Республика некой научно-производственной конференции «Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка сельскохозяйственных животных». Минск, 1990. — С. 120—121.

3. Шахов А. Г., Бригадиров 10. Н., Болгова В. П., Магомедов И. М. Иммунопрофилактика респираторных болезней свиней // Тезисы докладов Всесоюзной научно-технической конференции «Профилактика и лечение болезней молодняка сельскохозяйственных животных». Москва, 1991. — С. 114—

4. Шахов А. Г., Магомедов И. М. и др. Терапия и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят с применением иммуноглобулина-С аллогенного // При-стендовый материал. Воронеж, 1991,—13 с.

.115.

(Тип. В|ГАУ, зак. 451-94 г,, тир, 100. Объем 1 п. л.