Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Клебсиеллёз бройлеров

На правах рукописи

003473715

Ольховик Оксана Петровна

КЛЕБСИЕЛЛЁЗ БРОЙЛЕРОВ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с мико-токсикологаей и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискания учёной степени кандидата ветеринарных наук

Краснодар - 2009

1 в И ЮН 2000

003473715

Работа выполнена в Краснодарском научно-исследовательском ветеринарном институте Россельхозакадемии.

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, Басова Н.Ю.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор, академик РАЕ лауреат гос. премии РФ Шевченко А.А. кандидат ветеринарных наук, заслуженный вет. врач РФ Васильев В.Ф.

Ведущая организация:

Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки

Защита состоится 2009 г. в часов на заседании диссерта-

ционного совета Д 220.038.07 при Кубанском государственном аграрном университете (350044, Краснодар, ул. Калинина, 13).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета.

Автореферат разослан

» и^ССсуС. 2009 г.

Учёный секретарь диссертационного совета доктор ветеринарных наук, профессор

Родин И.А.

1. Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. В настоящее время серьезной проблемой промышленного птицеводства являются заболевания бактериальной этиологии, вызываемые ассоциациями патогенных и условно-патогенных бактерий.

Ассоциированные бактериальные болезни наносят огромный экономический ущерб птицеводческим хозяйствам в связи с широким распространением, сложностью клинической и лабораторной диагностики, отсутствием средств специфической профилактики и терапии (Ерастова Е.И., Киселева Б.С. (1985), Смоленская А.З. (1985); Нику-линова Т.С. (1992), Кузнецова Л.С. Воронин Е.С. (1994); Шишков В.П., Ставцева Л.Я. (2004).

Одним из ведущих агентов бактериальных ассоциаций, кроме эшерихий, стрептококков и сальмонелл, являются Klebsiella (Ковалева Е.П., Рейзис А.Р., 1993).

Широкое распространение Klebsiella в природе, их устойчивость к не благоприятным факторам внешней среды, дезинфектантам, резистентность по отношению к различным группам антимикробных препаратов и высокая степень адаптации выводит этот микроорганизм на передний план в этиопатогенезе развития заболеваний, как цыплят- бройлеров так и взрослого поголовья птицы (Жданов М.В., Львов Д.К. (1984); Brook I. (1986), Walker R.I. (1986); Gutman Laurent, Williomson Russeiii, Moreau Nicole (1985); Wifliams P., Lambert P.A., Haign C.G., Brown M.l. (1986).

В литературе приведены многочисленные данные об этиологической роли микроорганизмов рода Klebsiella в развитии различных патологических процессов у людей и сельскохозяйственных животных, однако исследований, касающихся клебсиеллёза домашней птицы практически не встречается (Халитова В.И., и др., 1991;Фдоров В.М.,1994; Красноголовец В.Н., Киселева Б.С., 1996; Бондоренко В.М., Петровская Г.В., Потатуркк-на-Нестерова Н.И., 1996; Черников A.A., Васильев Д.А., 1998; Шпанько Ю.Б., 2005; Deb M. étal, 1980; Frene J. et. al., 1984).

В доступной нам литературе не обнаружены сведенья об эпизоотологии, этиологической структуру, патогенезе, клиническом проявлении и патологической картине клебсиеллеза птиц, в том числе бройлеров, как за рубежом, так и в России.

В связи с изложенным, весьма актуально проведение комплексных исследований по изучению этиологической структуры клебсиеллеза бройлеров, биологических свойств возбудителя и поиску препаратов, для эффективной профилактики и терапии.

Цель н задачи исследования. Целью нашей работы является изучение этиологической структуры клебсиеллёза бройлеров, биологических свойств клебсиелл, выделенных при заболевании цыплят бройлеров и взрослого поголовья птицы, клинического проявления и патологоанатомических изменений при экспериментальном и спонтанном инфицировании, поиск эффективных препаратов для профилактики и терапии клебсиеллеза.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить этиологическую структуру, культурапьные и биологические свойства клебсиелл, выделенных от бройлеров;

- изучить факторы патогенности выделенных культур, степень их резистентности и адаптации к антимикробным препаратам различных групп, устойчивость к дезинфицирующим средствам;

- определить патогенность выделенных культур клебсиелл по отношению к лабораторным животным;

- изучить клиническое проявление и патологоанатомическую картину клебсиеллёза в экспериментальных и производственных условиях;

- определить эффективность фармакопрофилактики и терапии клебсиеллёза бройлеров.

Научная новизна. Впервые изучена этиологическая структура клебсиеллеза бройлеров в Краснодарском крае, определены источники и пути распространения заболевания, биологические свойства и серологический профиль возбудителя.

Выявлены факторы патогенности возбудителя клебсиеллеза бройлеров, его резистентность и степень адаптации к антимикробным препаратам.

Впервые экспериментально воспроизведено заболевание на эмбрионах и цыплятах. Изучено клиническое и патологоанатомическое проявление клебсиеллёза бройлеров в экспериментальных и производственных условиях.

Доказана профилактическая и терапевтическая эффективность комплексных антимикробных препаратов диоксинор и польодоксин при клебсиеллёзе бройлеров.

Практическая значимость. Изучены пути распространения, степень инфицированно-сти и этиологические особенности клебсиеллёза бройлеров. Определены основные биологические свойства и патогенность возбудителя. Изучена клиническая картина и патоло-гоанатомические изменения, характерные для клебсиеллеза бройлеров. Предложены эффективные антимикробные препараты для фармакопрофилактики и терапии клебсиеллёза бройлеров и активные дезинфицирующие средства. Разработаны методические рекомендации «Клебсиеллез бройлеров», утвержденные Управлением Россельхознадзора по Краснодарскому краю и Республике Адыгея 20.05.2009 г.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и получили одобрение на Ученом совете Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института в 2006 - 2008 гг.; V региональной научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса (Краснодар, 2004) и на VII региональной научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса (Краснодар, 2005 гг.), по итогам которой получена почетная грамота; 1-й научно-практической конференции « Современная ветеринарная защита коров высокопродуктивных пород» (Воронеж, 2005 г.); международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ (Краснодар, 2006 г).

Публикации. По материалам исследований опубликовано 5 научных работ, в том числе 1 в рецензируемом издании, рекомендуемом ВАК.

Основные положения диссертации выиосимые ча защиту:

- этиологическая структура и серологический профиль клебсиелл, выделяемых от бройлеров;

- культуральные и биологические свойства выделенных от бройлеров изолятов Klebsiella;

- факторы патогенности выделенных культур, степень их резистентности и адаптации к антимикробным препаратам различных групп;

- пути передачи, киническая и патологоанатомическая картина клебсиеллёза бройлеров в производственных и экспериментальных условиях;

- фармакопрофилактика и терапия клебсиеллёза бройлеров.

Обьём Ii структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста, иллюстрирована 18 таблицами, 8 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений. Список цитированной литературы включает 201 источник, из них 136 отечественных и 65 иностранных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы к методы исследования.

Работа выполнена в лаборатории терапии Краснодарского НИВИ, птицефабриках Краснодарского края: ИПС «Первомайская» Ленинградского района, «Кавказ» Динского района, «Новороссийская» г. Новороссийск. Объектом исследования служили инкубационное яйцо, эмбрионы, павшие и вынужденно убитые цыплята-бройлеры в возрасте (1-45 дней), взрослая птица, объекты внешней среды, вода.

При выполнении диссертационной работы было проведено 6 научно-производственных опытов, использовано 514 белых мышей, 54 беспородные крысы, 37880 цыплят, 360 инкубационных яиц, 90 куриных эмбрионов. В процессе работы проведено 1487 бактериологических, 257 серологических и биологических, 1285 клинических и 382 патологоанатомических исследований.

Частоту выделения клебсиелл от бройлеров в Краснодарском крае изучали путём анализа данных ФГУ Межобластной ветеринарной лаборатории Краснодарской и собственных исследований.

При выполнении работы было проведено 487 бактериологических исследований проб материала от птиц, 46 проб используемых кормов, 53 пробы воды и 38 проб смывов с поверхности клеток и оборудования инкубационного цеха. Из патологического материала было выделено 785 изолятов различных микроорганизмов, из них 257 изолятов Klebsiella.

Клинические, патологоанатомические исследования проводили по общепринятым методикам.

Бактериологические исследования проводили общепринятыми методами согласно «Методическим указаниям по диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями»(1999), «Методическим указани-

ям по диагностике колибактериоза животных и птицы» (2000), «Методическим указаниям по лабораторной диагностики стрептококкоза животных» (1990).

Из патологического материала готовили мазки- отпечатки, которые после фиксации окрашивали по Романоскому-Гимза и по Граму. Высевы из патологического материала проводили в МПБ (мясопептонный бульон), МПА (мясопептонный агар), висмут-сульфит агар, агар Эндо, кровяной агар и питательную среду «КЛЕБСИЕЛЛА 5-АСК-20».

Культуральные свойства выделенных микроорганизмов изучали в процессе их выращивания на плотных и жидких питательных средах. При этом учитывали интенсивность помутнения бульона, характер осадка, наличие или отсутствие пристеночного кольца и плёнки. Особое внимание обращали на форму, величину, структуру и консистенцию колоний.

Морфологические особенности выделенных бактерий оценивали исходя из данных микрокопирования мазков. Выделенные бактерии окрашивали по Граму, для обнаружения наличия капсулы - по методу Гисса.

Биохимическую активность выделенных штаммов определяли с использованием идентификационных тест-систем: пластин биохимических дифференцирующих энтеро-бактерий (ПБДЭ) Нижегородского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии Минздрава РФ, мультимикротестов для биохимической идентификации энтеробактерий (ММТ Е1 и ММТ У2) производства НПО «Аллерген» (г. Ставрополь), системы индикаторных бумажных дисков (СИБ), среды Гисса с углеводами, многоатомными спиртами и индикатором Андродэ.

Идентификацию выделенных культур осуществляли, используя официальные бактериологические справочники (Биргера М.О., 1982; Берджи, 1997), программное обеспечение для интерпретации результатов биохимического тестирования энтеробактерий на ПБДЭ

Серотипизацию выделенных изолятов Klebsiella проводили в РА по общепринятой методике с типоспецифическими сыворотками, изготовленными фирмой «Илья Мечников», НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова Российской АМН.

Вирулентные свойств Klebsiella изучали на беспородных белых мышах массой тела 18-20 грамм, путём внутрибрюшинного введения оттитрованной взвеси суточной агаровой культуры Klebsiella на физиологическом растворе (рН - 7,2) и суточной бульонной культуры Klebsiella, с последующим определением LD50. Повышение степени вирулентности клебсиелл в результате пассажа in vivo изучали на беспородных крысах массой тела 150- 170 г.

Антилизоцимную активность (АЛА) клебсиелл определяли экспресс - методом в концентрациях от 1 до 10 мкг/мл лизоцима, по методике, описанной В.Ю. Соколовым (105,18).

Для индентификации энтеротоксинов выделенных культур клебсиелл применяли тест отёка лапки белых мышей.

Оценку токсинообразования выделенных культур клебсиелл проводили методом биотестирования с использованием инфузорий рода стилоиихия. Трёх суточный культу-ральный клебсиеллёзный фильтрат получали с помощью стерильного фильтра «Minisart г».

Чувствительность выделенных штаммов бактерий к антимикробным препаратам, определяли методом диффузии в агаровом геле (среда АГВ) с использованием дисков, лунок, где оценку чувствительности осуществляли по диаметру зоны ингибиции роста тест-культуры и методом серийных разведений в жидкой питательной среде, определяя минимальную подавляющую концентрацию, выраженную в мкг/мл. Плотность посевного материала составляла 1 миллиард/мл.

Адаптацию к антимикробным препаратам изучали методом 30-кратного пассирования в бульон Хотингера с суббактериостатическими концентрациями препарата. Через каждые пять пассажей методом серийных разведений определяли чувствительность тест культуры к антибиотикам.

Экспериментальное воспроизведение клебсиеллёза проводили в условиях лаборатории терапии Краснодарского НИВИ на 30 12-13 суточных куриных эмбрионах, кросса ROSS - 308, в трёхкратной повторности.

Экспериментальное воспроизведение клебсиеллёза проводили на 30 2-х суточных цыплятах кросса ROSS - 308, в тройной повторности, разделённых по принципу аналогов на 3 группы:

1 группа-контрольная;

2 группа - 1-я опытная, цыплята не инфицированные, но содержались вместе с заражёнными (контактная группа);

3 группа - 2-я опытная, цыплят интранозадьно и перорально заразили суточной бульонной культурой К. rhinoscleromatis, в дозе 0,5 мл.

За цыплятами велось наблюдение в течение 45 дней. Через 15, 30 и 45 дней после инфицирования проводили убой 2-х цыплят, из каждой группы, для проведения бактериологического исследования. Бактериологическому исследованию подвергали и павших в течение опыта цыплят. Посевы проводили из носовой полости, воздухоносных мешков, легких, крови сердца, паренхиматозных органов, костного и головного мозга.

Возможность инфицирования цыплят в инкубатории возбудителем, находящимся на поверхности скорлупы изучали в лаборатории терапии Краснодарского НИВИ в трехкратной повторности, для чего провели аэрозольную дезинфекцию 120 инкубационных куриных яиц, разделенных на 3 группы:

1-я группы - 40 штук яиц заражали К. rhinoscleromatis;

2-я группа - 40 штук яиц заражали К. ozaenae;

3-я группа - 40 штук яиц заражали К. oxytoca для чего на поверхность скорлупы наносили взвесь агаровых суточных культур К. rhinoscleromatis, К. ozaenae, К. oxytoca на стерильном физиологическом растворе, рН-7,2, концентрацией 1 млрд.м.т./мл в дозе 0,15 мл. После высыхания культуральной взвеси определяли количество КОЕ на поверхности скорлупы в каждой группе методом аппликации по методике H.H. Клемпарской и Г.А. Шальновой в нашей модификации.

После заражения клебсиеллёзными культурами по 20 яиц, из каждой группы подвергали аэрозольной дезинфекции по схеме, применяемой в инкубаторах: смесью формалина с марганцовокислым калием га расчёта на 1 м1: формалина - 30мл, марганцовокислым калием - 20 гр., дистиллированной воды - 15 мл, при температуре +28 - 30°С, которая соответствует температуре инкубатория. Время экспозиции 30 минут. По истечении срока дезинфекции пары формалина в течение 20 минут нейтрализовали путём распыления 25%-ного раствора аммиака в количестве, равном половине использованного формалина.

Оставшиеся 20 яиц из каждой группы инкубировали в течение 30 минут при аналогичной температуре. По истечении времени дезинфекции (30 минут) на поверхности инкубационных яиц подсчитывали количество КОЕ клебсиелл, в каждой группе после аэрозольной обработке и на яйцах, не подвергшихся дезинфекции.

Бактериологические исследования воды проводили по ГОСТу 2874-73, комбикорма, смывов с оборудования.

Профилактическую эффективность химиотерапевтических препаратов определяли на базе п/ф «Кавказ» Динского района на 32000 цыплят-бройлеров суточного возраста. Препараты задавали с питьевой водой в течение 5 дней из расчета 1 мл/ Л1ггр.

Терапевтическую эффективность комплексных препаратов диоксинор и польодок-сином изучили на 5760 12-и суточных цыплятах с признаками клебсиеллёза.

Определение экономической эффективности применения препаратов проводили согласно «Методическим рекомендациям по определению общего экономического эффекта от использования результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ в агропромышленном комплексе» Москва, 2007.

Математическую и биометрическую обработку полученных цифровых и экспериментальных данных осуществляли с помощью программы Microsoft Excel 2000 на компьютере Пентиум 4, степень достоверности устанавливали по распределению Стьюдента.

3. Результаты исследований

3.1. Этиология клебсиеллеза бройлеров.

При исследовании 3-х птицефабрик 2 - «Кавказ», Динского района и ИПС «Пер-вомайска» Ленинградского района были не благополучны по клебсиеллёзу.

Процент выделения клебсиелл из замерших эмбрионов колебался от 20,8% до 50,0%, от цыплят в возрасте до 30 дней - ¡6,6% - 50%, цыплят старше 40 дней и взрослой птице -11,2%-55,5% (рисунок 1). Количество положительных результатов за период исследования с 2006 по 2008 года возрастал по всем исследованным группам от 19,3% в группе цыплят 1 -10 дневного возраста до 44,3% в группе птицы старше 40 дней.

2006 год 2007 год 2003 год

я эмбрионы, инкубационные нйца

ш цыплята 1 -10 дней

цыплята 11-17 дней л цыплята 18-20 дней а цыплята 21-30 дней и цыплята старше 40 дней

Рисунок 1 - Процент выделения Klebsiella от бройлеров в Краснодарском крае в 2006 -

2008 годах

Из эмбрионов и инкубационных яиц процент выделения возбудителя увеличился с 20,8% в 2006 г. до 50% в 2008 году; от цыплят 1 - 10 дневного возраста возрос с 25,5% до 44,8%; цыплят 11-17 дневного возраста - с 20,5% до 50,0%; цыплят 18-20 дневного возраста с 16,6% до 41,7%; цыплят 21 - 30 дневного возраста с 22,2% до 44,5%, а цыплят старше 40 дневного возраста и взрослой птицы - с 11,2% до 55,5% соответственно. Кроме клебсиелл изолировали возбудителен: Streptococcus faecalis - 5,1% - 16,7%, Streptococcus avium в 11,4% - 22,5%, Staphylococcus - 11,5% - 26,6%, Proteus - 2,6% -18,0%. Культуры Klebsiella от цыплят различных возрастных групп и замерших эмбрионов были изолированы в 15,2% - 43,7% к количеству выделенной микрофлоры.

В большенстве случаев выделяли К. rhinoscleromatis- 13,9 - 43,7%, К. ozaenae изолировали только от цыплят 21 - 30 дневного возраста - 3, 1%, а К. oxytoca от 18 - 20 дневных цыплят - 1,3%

Процент выделения монокультур клебсиелл составлял в среднем 12,4%. В 33,7% проб клебсиеллы выделялись в ассоциации со стрептококками (Streptococcus faecalis, Streptococcus группы D, Streptococcus avium), в 43,1% - вместе со стрептококками и бактериями кишечной группы (эшерихии, протеи, энтеробактеры, кливера, шигелла), в 10,8% - в ассоциации с энтеробактериями.

При этом наибольший процент монокультур клебсиелл изолировали из замерших эмбрионов - 52,9%. С возрастом бройлеров этот показатель снижался и от птицы старше 40 дней монокультуры не изолировали.

3.2. Выделение клебсиелл из объектов внешней среды.

Основным резервуаром возбудителя клебсиеллеза на птицефабриках, не благополучных по данному заболеванию, являются поверхность клеток и питьевая вода, инфицированные выделениями больных цыплят.

Из воды распределительного водяного бачка корпуса №13 п/ф «Кавказ» Динского района количество изолированных клебсиелл составило 6390 КОЕ/мл., из ниппельных поилок - 7000 КОЕ/мл. Выделение клебсиелл из ниппельных поилок было выше, чем из распределительного бачка на 619 КОЕ/мл или 9,7%.

В смывах с поверхности клеток в корпусе №6, в котором содержались цыплята 1 -10 дневного возраста, выделили 80500 КОЕ/мл клебсиелл, а из смывов с поверхности клеток корпуса №4, где содержались 11-18 дневные цыплята - 57000 КОЕ/мл, что в 1,5 раза меньше, чем из смывов корпуса № 6. При исследовании смывов с клеток, в которых содержались 19-20-дневные цыплята, количество выделенных клебсиелл снизилось до 15048 КОЕ/мл.

В кормах «стар», «рост», «финиш», используемых на птицефабрике, количество клебсиелл было примерно одинаковым и составляло соответственно 220 КОЕ/гр., 130 КОЕ/гр. и 193 КОЕ/гр.

3.3. Биологическая характеристика клебсиелл, выделенных от бройлеров.

3.3.1. Морфологические, культуральчые, биохимические свойства и серологический профиль клебсиелл.

Морфокультуральные и биохимические свойства 257 выделенных от птиц культур клебсиелл соответствовали видовым характеристикам.

9

У 77% или 197 культур регистрировали наличие фимбрий, 54,9% - образовывали слизистые колонии. Штаммы К. гЫповскготапз и К. огаепае формируют выпуклые, гладкие колонии 8 формы, а К. охуЮса - плоские и шероховатые - Я формы.

252 культуры К. гЫпо5с1еготаП5 (98,1%) были лактозапозитивными, все культуры К. охушса - лактозонегативными.

Все культуры клебсиелл, изолированные от бройлеров продуцировали 5-аминосалицилатдекарбоксилазу, на скошенном агаре были прозрачны в проходящем свете и имели розово-дымчатый или оранжево-дымато-зеленоватый тип свечения, обладали высокой биохимической активностью.

При серологической типизации все 252 культуры К.гЫгккскготаиз (100%) были отнесены к серогруппе К - 5, 75% культур К. огаепае - к К - 68 и 25% - к К - 25. Культура К. охуюса - к сероварианту К - 70 (таблица 1).

Таблица 1

Антигенная структура клебсиелл, выделенных от бройлеров, п=257

вид ЮеЬэ^еНа Тип К- антигена Положительно

реагировало:

культур %

К. гЫгккЫеготаШ К5 252 100,0

К.огаепае К68 3 75,0

К. огаепае К25 1 25,0

К. охуЮса К70 1 100,0

Наличия двух и более типов К-антигена у изученных клебсиелл не выявили. Ферментативная активность клебсиелл различных сероваров одного вида различалась: культуры К. огаепае, отнесённые к серологическому варианту К - 68, в отличие от серологического типа К - 25, отрицательно реагировали с цитратом натрия, не продуцировали ли-зиндекарбоксилазу и не сбраживали инозит, но активно ферментировали лактозу и сахарозу.

3.3.2. Вирулентность и факторы патогенности выделенных от бройлеров клебсиелл.

Все выделенные из инкубационных яиц, замерших эмбрионов, вынужденно убитых и павших цыплят бройлеров и взрослой птицы культуры клебсиелл патогенны для белых мышей при внутрибрюшинном введении. Заражение смывами агаровых культур вызывало гибель мышей через 18-24 часа, бульонной культуры - через 5-7 часов, что, по нашему мнению, свидетельствует о наличии экзотоксина

У 93,8% изолятов 1Л)5п находилась в пределах 400-600 млн. м. т./мышь, 6,2% -200-250 млн. м. т./мышь. Слизистые культуры К. гЫпо$с1еготаи8, К. огаепае обладающие мощной капсулой, оказались более вирулентными, чем бескапсульные и К. охуюса. Бактерионосительство у зараженных мышей регистрировали в течение 18-20 дней.

Одним из факторов патогеиности клебсиелл, является ццтотоксичность (гемолитическая активность). 100% культур клебсиелл лизировали эритроциты барана. Из них 79 культур (30,7%) продуцировали [5- гемолизины, а 178 культур (69,3%) - а - гемолизины.

Гемолитической активностью по отношению к эритроцитам кролика обладали 184 культуры или 71,5%, формируя вокруг колоний зону а - гемолиза. Не одна из изучаемых культур клебсиелл не гемолизировала эритроциты морской свинки (таблица 2)

Таблица 2

Гемолитическая активность Klebsiella, выделенных от бройлеров.

культуры МПА+ 1% глюкоза + 5% дефибринированной крови

барана кролика морс, свинки

тип гемолиза тип гемолиза тип гемолиза

Р а 7 р а Г Р а 7

I Klebsiella п = 257 79/ 30,7 178/ 69,3 184/ 71,5 73/ 28,5 - 257/ 100

В том числе:

К. rhinoscleromatis п = 252 79/ 31,3 173/ 68,7 184/ 73,0 68 27,0 ■ 252/ 100

К. ozaenae п = 4 - 4/ 100 - - 4 100 ■ 4 100

К. oxytoca п= 1 - 1/ 100 - 1 100 ■ 1 100

Примечание: в числителе - количество культур; в знаменателе - % соотношения.

Способность к токсинообразованию, по мнению ряда исследователей (Бондаренко В.М. и др., 1986; Jhanjee A., Asnani Р., 1982; Kahlich R. et al., 1982; Ivanof A. et al., 1983), является одним из основных факторов патогенности клебсиелл.

Экзотоксины, выявленные в тесте отека лапки, продуцировало 57,2% или 147 культур выделенных от бройлеров клебсиелл. Максимальное накопление токсинов в фильтратах культур клебсиелл отмечали на 3-5 сутки культивирования.

При выявлении токсигенкости на инфузориях стилонихиях, токсигекные свойства выявили у 64,6% или 166 культур Klebsiella, то есть 7,4% или 19 культур кроме экзотоксина продуцировали токсины других типов.

Антилизоцимный признак у клебсиелл способствует подавлению фагоцитоза, а также сохранению и возможно, размножению обладающих им штаммов в фаголизосоме. 100% выделенных от птиц культур клебсиелл обладали антилизоцимной активностью. Средняя величина АЛА составила 4,9 ± 0,2 мкг (концентрация лизоцима мкг/мл).

3.3.2.1. Повышение уровня вирулентности Klebsiella rhinoscleromatis

При изучении повышения уровня вирулентности полевого штамма 128 п К. rhinoscleromatis, на беспородных лабораторных крысах, массой тела 150-170 гр. установили, что в процессе последовательных пассажей через восприимчивый организм степень вирулентности клебсиелл значительно возрастает: уже к шестому пассажу летальная доза снизилась в 4 раза: с 4 млрд м.т./голову до 1 млрд м.т/голову, при этом в 6 пассаже регистрировали гибель 88,9%. крыс.

3.4. Резистентность и адаптация выделенных от бройлеров культур клебсиелл

к антимикробным препаратам различных групп.

Нами изучена чувствительность 257 изолятов 3 видов клебсиелл выделенных от бройлеров: К. rhinoscleromatis, К. ozaenae и К. oxytoca.K 24 антибактериальным препаратам различных групп фармакологических средств.

Препаратов, активных в отношении всех выделенных культур не установлено. 100% культур, выделенные из инкубационных яиц и замерших эмбрионов были чувствительны к 3 комплексным препаратам - квиноколу, польодоксину и диоксигену. Культуры клебсиелл, изолированные от бройлеров 11-17 и 21 -30-и дневного возраста проявили высокую резистентность к антимикробным средствам: были чувствительны только к диоксигену и польодоксину соответственно, а клебсиеллы, выделенные от цыплят 1-10 -дневного возраста не были в 100% случаев чувствительны не к одному из тестируемых средств.

Препараты диоксиген, польодоксин, витроцил эффективны в отношении 75,2 -84,8% культур.

Количество препаратов, активных в отношении антибиотикочувтвительных культур клебсиелл, выделенных от цыплят различного возраста и взрослой птицы, варьировало от 5 до 9.

Степень адаптации К. rhinoscleromatis, К. ozaenae и К. oxytoca, выделенных от бройлеров и К. pneumoniae, выделенной от теленка к 7 антимикробным препаратом основных групп: тетрациклины, сульфаниламиды, нитрофураны, всех тестируемых клебсиелл достаточно велика: уже к 11 пассажу их чувствительность снизилась 2-128 раз. К 30 пассажу чувствительность к тетрациклину была ниже в 16 - 320 раз, норсульфазолу - в 8 - 641 раз, нитрофурану - 8 - 320 раз, клафорану - 16 - 1111раз, абактану и неомицину -4 - 128 раз и ампициллину - 5 - 64 раза.

Степень адаптации зависит не только от группы антимикробных препаратов, но и от вида возбудителя.

3.5. Устойчивость клебсиелл к дезинфицирующим средствам.

При изучении in vitro устойчивости выделенных от бройлеров культур К. rhinoscleromatis к 7 дезинфицирующим средствам установили, что наиболее эффективные в отношении возбудителей были роксацин и катомин, бактерицидная концентрация которых находилась в пределах 0,008% - 0,02%, а бактериостатическая - 0,004% - 0,006%. Растворы хлорной извести и форманта ингибировали рост клебсиеллы в концентрации 0,125% а их бактерицидная активность была в пределах 0,6% или в 4,8 раз выше, чем бактериостатическая концентрация, Seiko pH и септабик были менее активны, чем роксацин и катомин но более - в сравнении с формалином, хлорной известью, соляной и молочной кислотами, ингибирующая концентрация которых препаратов была, соответственно 0,125% и 0,016%, а бактерицидная - 0,5% и 0,032%.

Для изучения возможности инфицирования цыплят возбудителем, находящимся на поверхности скорлупы, провели дезинфекцию поверхностно инфицированных в дозе 0,15

млрд.м.т. Klebsiella rhmoscleromatis, К. ozaenae и К. oxytoca инкубационных яиц парами формальдегида по применяющей в инкубаториях схеме.

Установили, что 100% дезинфекции не происходит: на поверхности сохраняется до 1,5% КОЕ К. oxytoca.

3.6. Клиническое проявление и патологоанатомическая картина клебсиеллеза в экспериментальных и производственных условиях.

При трансовариальном заражении эмбрионов клебсиеллой вывод цыплят на птицефабрике снижается до 54 - 60%, что на 30,2% - 37,2% ниже, чем при инкубировании не инфицированных яиц.

Количество не жизнеспособных цыплят, выведенных из инфицированных клебсиеллой яиц, погибающих в первые 4-5 дня жизни, увеличивается в 2 - 2,5 раза, что составляет 7 - 8%.

При экспериментальном заражении 12 - 13 дневных эмбрионов в аллантонсную полость установили снижение вывода на 26,6% и 100% гибель цыплят в первые 3-4 дня жизни. При бактериологическом исследовании павших цыплят и замерших эмбрионов опытной группы во всех случаях выделили ретрокультуру К. rhmoscleromatis.

От клинически здорового племенного поголовья бройлеров 25 - 36 недельного возраста, кроссов Flex и F - 15 на стационарно неблагополучной по клебсиеллезу птицефабрики возбудителя выделили из костного, головного мозга и гонад. Клинически клебсиеллёз птиц, в производственных условиях, протекает в 2-х формах:

1 - респираторная - наблюдается у цыплят младшего возраста, с первого по 18-20 дни жизни, как правило, на 5-7 сутки. При такой форме течения клебсиеллёзной инфекции отмечается угнетение птицы, внезапная потеря аппетита, снижение прироста массы тела, затруднённое дыхание, одышка, кашель, риниты и коньюктивиты, сопровождающиеся слезо- и слюнотечением.

При патологическом вскрытии у цыплят отмечается риниты - слизистая носовой полости гиперимирована, усеяна геморрагиями, набухшая и отёчная, студневидна вследствие инфильтрации толщи слизистой оболочки серозным экссудатом;

Регистрируются серозно-фибринозные аэросаккулиты, с начала межключичных воздухоносных мешков. Воспаление воздухоносных мешков развивается вследствие перехода на них воспалительного процесса с носоглотки.

Серозно-фибринозное воспаление сопровождается скоплением серозно-фибринозного выпота в полость межключичного воздухоносного мешка, затем воспаление переходит на шейные мешки, поражая главный бронх, краниальные и каудальные грудные мешки, а в последствие и брюшные воздухоносные мешки. Аэросаккулиты характеризуются отложением на воспалённых стенках воздухоносных мешков серозно-фибринозного экссудата, вначале в виде едва заметного, нежного паутиноподобного налёта серо-белого или серо-желтого цвета. В дальнейшем развивается фибринозная пневмония, характеризующаяся лобарным поражением лёгких, сразу распространяясь на целую долю или несколько долей, поражая преимущественно передние отделы легкого. Культуры К. rhinoscleromatis при респираторной форме течения изолировали от цыплят из носовой полости, пораженных воздухоносных мешков, легких, из паренхиматозных органов, крови сердца, но не из головного и костного мозга.

2 - кишечная форма течения клебсиеллеза, как правило, отмечается у цыплят старше 20-ти дневного возраста, характеризующаяся поражением желудочно-кишечного тракта. При этой форме течения клебсиеллёзной инфекции отмечается усиление жажды, потеря аппетита, понос. Патологоанатомическая картина при кишечной форме характеризуется развитием геморрагическим воспалением железистого желудка, регистрируется се-розно-геморрагический отёк подслизистон оболочки мышечного желудка. Выражено катаральное воспаление слизистой оболочки тонкого кишечника. Печень и почки увеличены в объёме, печень глинистой окраски. При такой форме течения клебсиеллеза от бройлеров

выделяли не только К. гЫпо5с1еготаПз, как при респираторной форме болезни, но и К. огаепае. Возбудителя изолировали из паренхиматозных органов, крови сердца, головного и костного мозга. Кроме клебсиелл при кишечной форме часто выделяли ассоциации эше-рихий и условно-патогенных энтеробактерий.

Для подтверждения роли К. гЫповсЬгошайз провели экспериментальное воспроизведение клебсиеллёза на 30-и 2-х суточных цыплятах, разделённых по принципу аналогов на 3 группы: 1 - интактный контроль; 2 - опытная группа, инфицированная интрано-зально и перорально суточной бульонной культурой К. гЫпояЫегота^ в дозе 0,5 мл; 3 -контрольная, находилась на контакте с инфицированными.

Перед началом и в конце опыта провели взвешивание цыплят. Наблюдение вели в течение 10 дней, регистрировали клиническое состояние, заболевание и отход.

При экспериментальном воспроизведении клебсиеллеза путем интранозального и перорального инфицирования 2-х суточных цыплят установили, что заболеваемость инфицированных цыплят была 40%, что на 50% ниже, чем в группе, цыплята которой находились в непосредственном контакте с инфицированными. Сохранность была, соответственно 90% и 70%, что свидетельствует о наличии горизонтального пути передачи. Клинические признаки клебсиеллеза у экспериментально инфицированных цыплят соответствовали респираторной форме, проявились на 5 - 8 день после инфицирования.

При бактериологических исследованиях павших цыплят ретрокультуру К. гЫпов-с1егота0$ изолировали из паренхиматозных органов, крови сердца, легких и воздухоносных мешков. От бройлеров опытных групп, вынужденно убитых в 45-и дневном возрасте, клебсиеллу изолировали га головного и костного мозга, что свидетельствует о длительной персистенции возбудителя в организме птицы.

3.7. Профилактическая и терапевтическая эффективность комплексных препаратов

диоксипор и польодоксин.

Профилактическую эффективность комплексных препаратов изучали на базе птицефабрики «Кавказ», Динского района.

Для проведения опыта в корпусе клеточного содержания сформировали 3 группы цыплят - 2 опытные по 15000 голов (размещенных в 2-х батареях) и контрольная - 2000 голов.

Цыплятам опытных групп препараты задавали с питьевой водой из расчёта 1,0 мл/л воды, ежедневно, в течение 5 дней с суточного возраста.

За 5 дней наблюдения установили, что при применении польодоксина сохранность была выше на 4,1%, заболеваемость ниже на 18,5%, среднесуточный прирост массы тела возрос на 7,24 гр. или 42,5% по сравнению с контрольной группой. При применении ди-оксинора эти показатели были соответственно - 4,4%, 18,8% и 8,33 гр. или 48,8% (таблица 3).

Лечебную эффективность препаратов диоксинор и польодоксин (таблица 4) изучали в период вспышки клебсиеллёзной инфекции, на 2-х группах цыплят-бройлеров 15-и дневного возраста, подобранных по принципу аналогов, по 2880 голов в группе. Птица содержится в клеточных 4-х рядных батареях типового корпуса, водопой - ниппельные поилки. В подготовительный период (14 дней) ежедневно проводили учёт сохранности. Препараты в опытном периоде задавали с питьевой водой в течение 8 дней, из расчёта 1,0 мл/л воды. После прекращения дачи препаратов наблюдение вели еще на протяжении 6 дней.

Таблица 4

Эффективность фармакотерапии при клебсиеллезе бройлеров.

№ п/п препараты количество голов падёж голов / %

1-й период 2-й период 3-й период

14 дней 8 дней 6 дней

1. диоксинор 2880 82 / 2,8 41 / 1,7 27 / 0,98

2. польодоксин 2880 81 / 2,8 64 / 2,3 32 / 1,17

Анализ полученных результатов свидетельствует, что терапевтическая эффективность применения диоксинора при клебсиеллезе бройлеров на 0,6% выше, чем польодок-сина в период лечения и на 0,19% - последующие 6 дней.

Экономическая эффективность профилактического применения польодокина- 18,9 рублей на 1 рубль затрат, диоксинора - 43,6 рублей на 1 рубль затрат.

Экономическая эффективность терапевтического применения польодокина - 4,18 рублей на V рубль затрат, диоксинора - 6,3 рубля на 1 рубль затрат.

Таблица 3

Эффективность фармакопрофилактики клебсиеллеза бройлеров.

№ п/п группы количество цыплят в группе препарат, доза мл/л масса цыплят в начале опыта, г. масса цыплят в конце опыта, г. средн. су-точ. прирост массы тела, г./ к контролю заболело пало % сохранности

цыплят % цыплят %

1. опытная 15000 польодоксин 1,0 40,2 162 24,36/ +7,24 375 2,5 165 1,1 98,9

2. опытная 15000 диоксинор 1,0 40,6 168 25,48/ +8,33 330 2,2 120 0,8 99,2

3. контрольная 2000 - 40,4 126 17,12/- 420 21,0 104 5,2 94,8

4. ВЫВОДЫ

1. На неблагополучных по клебеиеллезу птицефабриках возбудитель выделяется от всех возрастных групп бройлеров, из инкубационных яиц и эмбрионов. Частота выделения зависит от возраста птицы. Из замерших эмбрионов клебсиеллу изолировали в 20,8% до 50,0% случаев, от цыплят 1- 30 -дневного возраста - 16,6% - 50%, цыплят старше 40 дней и взрослой птице - 11,2% - 55,5%. Количество положительных проб за период с 2006 по 2008 годы возросло во всех обследованных группах с 11,2-25,5% до 41,7-55,5%.

2. Основным этиологическим агентом при клебсиеллезе бройлеров является К. rhi-noscleromatis - 98% культур от числа всех изолятов клебсиелл. Средний процент выделения К. rhinoscleromatis составил 13,9 - 43,7%, из эмбрионов - 30,8%, от цыплят младшего возраста-43,7%, от взрослой птицы - 23,1%. К. ozaenae и К. oxytoca играют второстепенную роль, их изолировали в 1,6% и 0,4% случаев соответственно.

3. В среднем процент выделения монокультур клебсиелл составил 12,4%. В 33,7% проб клебсиеллы выделялись в ассоциации со стрептококками (Streptococcus faecalis, Streptococcus группы D, Streptococcus avium), в 43,1% - вместе со стрептококками и бактериями кишечной группы (эшерихии, протеи, энтеробактеры, кливера, шигелла), в 10,8% - в ассоциации с энтеробактериями. С увеличением возраста бройлеров процент бактериальных ассоциаций возрастал с 47,1% из эмбрионов по 97,6% - от птицы старше 45 дней.

4. Основным резервуаром возбудителя клебсиеллеза на птицефабриках, не благополучных по данному заболеванию, являются поверхность клеток и питьевая вода, инфицированные выделениями больных цыплят. Количество клебсиелл, изолированных из воды составляло 6397 - 7000 КОЕ/мл, из смывов с поверхности клеток - 15048 - 80500 КОЕ/мл.

5. Культуры клебсиелл, выделенные от бройлеров обладали значительной вариабельностью биохимических свойств. В подавляющем большинстве случаев - 99,6% формировали колонии S - типа, 100% культур имели капсулу и активно сбраживали сахара. Все 252 культуры K.rhinoscleromatis (100%) относились к серогруппе К - 5, 75% культур К. ozaenae - к К - 68 и 25% - к К - 25. Культура К. oxytoca - к сероварианту К -70.

6. Все выделенные культуры клебсиелл были вирулентными для белых мышей в дозе LD50 200 - 600 млн. м. т./мышь, 69,3% культур продуцировали а - гемолизины и 30,7%- ß-гемолизины. 100% изолятов гемолизировали эритроциты барана, 71,5% кролика и ни одна культура не гемолизировала эритроциты морской свинки. 64,6% культур Klebsiella продуцировали токсины: 57,2% - экзотоксины, 7,4% - токсины других типов, 100% клебсиелл обладали антилизоцимной активностью в концентрации 4,9 ± 0,2 мкг/мл.

7. Большинство культур клебсиелл высокорезистентны к антимикробным препаратам. Из 24 испытуемых препаратов активных в отношении всех выделенных культур не установлено. 37,5% были высоко эффективны по отношению к клебсиеллам - преимущественно комплексные соединения. Степень адаптации клебсиелл к антимикробным препаратам достаточно высока: к 30 пассажу чувствительность снизилась в 4 - 1111 раз. Наиболее эффективными дезинфицирующими средствами, при клебсиеллезе являются рокса-цин и катомин.

8. Клебсиеллез у бройлеров протекает в двух формах - респираторной и кишечной. Респираторная форма болезни развивается у цыплят до 18-и дневного возраста и ассоциируется с К. rhinoscleromatis. В старшем возрасте регистрировали кишечную форму клеб-

сиеллсза, при которой кроме К. гЫгккЫеготаИз изолировали К. огаепае в ассоциации с эшерихиями и условно-патогенными энтеробактериями.

9. Профилактическая эффективность применения препарата польодоксин была в пределах 98,9%, диоксинор - 99,2%. Экономическая эффективность профилактического применения польодоксина - 18,9 рублей на 1 рубль затрат, диоксинора - 43,6 рублей на 1 рубль затрат. Экономическая эффективность терапевтического применения польодоксина - 4,18 рублей на 1 рубль затрат, диоксинора-6,3 рубля на 1 рубль затрат.

6.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕЖДЛОЖЕНИЯ

Для профилактики клебсиеллеза бройлеров рекомендуется проводить бактериологический контроль поступающих яиц и не допускать к инкубации, инфицированные клебсиеллой яйца из неблагополучных родительских стад.

Необходимо проведение качественной дезинфекции инкубационного яйца с последующим контролем качества дезинфекции на наличие клебсиелл, а затем бактериологических исследований замерших 18-и суточных эмбрионов с подтитровкой чувствительности выделенной микрофлоры к антимикробным препаратам.

Рекомендуется применение высокоэффективных комплексных антимикробных препаратов польодоксин и диоксинор для профилактики клебсиеллеза бройлеров в 1-5 и 28-33-дневном возрасте, с питьевой водой в дозе 0,5 -1,0 мл/л, в течение 5 дней, с лечебной целью - 1,0 мл/л в течение 5-7 дней.

На основе результатов исследований разработаны методические рекомендации «Клебсиеллез бройлеров», утвержденные Управлением Россельхознадзора по Краснодарскому краю и Республике Адыгея 20.05.2009 г.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 .Клебсиеллёзная инфекция телят / соавт.: Н.Ю. Басова // Материалы 1-ой научно -практической конференции «Современная ветеринарная защита коров высокопродуктивных пород». Всероссийский научно - исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии. Воронеж, 2005. - С. 7 - 8.

2. Роль клебсиедлы в развитии желудочно-кишечных и респираторных болезней телят / соавт.: Н.Ю. Басова // Материалы 7 региональной научно - практической конференции молодых учёных «Научное обеспечение агропромышленного комплекса». Краснодар, 2005. - С. 222 - 223.

3. Видовой состав бактерий, выделяемых в хозяйствах краснодарского края / соавт.: Н.Ю. Басова И Материалы международной научно - практической конференции, посвященной к 60 - летию ГНУ Краснодарского НИВИ «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях». Краснодар, 2006. - С. 188 - 189.

4. Видовой состав и чувствительность к антибиотикам бактерий, выделенных от телят с респираторными и кишечными инфекциями / О.П. Ольховик // Научный журнал «Труды Кубанского Государственного Аграрного Университета». Краснодар, 1 (16), 2009. -С. 176- 178.

5. Клебсиеллёз птиц / Методические рекомендации, утверждённые Управлением Рос-сельхознадзора по Краснодарскому краю и Республике Адыгея 20.05.2009 г.

Подписано к печати: 27.05.2009 г. Формат 60x84/16. Усл. леч. л. 1,33. Уч. изд. л. 1,33. Тираж 100 экз. Заказ № 58

I

ООО «Световод» Краснодар, ул. Калинина, 126/1 корп. 57

Актуальность проблемы. В настоящее время серьезной проблемой промышленного птицеводства являются заболевания бактериальной этиологии, вызываемые ассоциациями патогенных и условно-патогенных бактерий.

Ассоциированные бактериальные болезни наносят огромный экономический ущерб птицеводческим хозяйствам в связи с широким распространением, сложностью клинической и лабораторной диагностики, отсутствием средств специфической профилактики и терапии (Ерастова Е.И., Киселева Б.С., 1985; Сельникова О.П. с соав., 1992; Петровская В.Г. с соав., 1983; Фло-ров А.Ф., Зарецкий A.M., Фельдман Ю.М., 1986).

Одним из ведущих агентов бактериальных ассоциаций, кроме эшери-хий, стрептококков и сальмонелл, является род Klebsiella (Ковалева Е.П., Рейзис А.Р., 1993).

Широкое распространение клебсиелл в природе, их устойчивость к не благоприятным факторам внешней среды, дезинфектантам, резистентность по отношению к различным группам антимикробных препаратов и высокая степень адаптации выводит этот микроорганизм на передний план в этиопа-тогенезе развития заболеваний, как цыплят - бройлеров так и взрослого поголовья птицы (Журавлёв П.В., 1991; Трухина Г.М., 1985; Мойсеенко Н.Н., 1990; Кукулянский А.А., 1984; Шарга Б.М., Туряница А.И., 1993; Casewell M.W., Phillips J., 1981; Kaur К., Kaul M., Chhibber S., 1988).

В литературе приведены многочисленные данные об этиологической роли микроорганизмов рода Klebsiella в развитии различных патологических процессов у людей и сельскохозяйственных животных, однако исследований, касающихся клебсиеллёза домашней птицы практически не встречается (Ха-литова В.И., 1991; Флоров В.М., 1994; Красноголовец В.Н., Киселева Б.С., 1996; Бондоренко В.М., 1996; Черников А.А., Васильев Д.А., 1998; Шпонько Ю.Б., 2005; Deb М. et.al., 1980; Freney J. et. al., 1984).

В доступной нам литературе не обнаружены сведенья об эпизоотологии, этиологической структуре, патогенезе, клиническом проявлении и пато логической картине клебсиеллёза птиц, в том числе бройлеров, как за рубежом, так и в России.

В связи с изложенным, весьма актуально проведение комплексных исследований по изучению этиологической структуры клебсиеллеза бройлеров, биологических свойств возбудителя и поиску препаратов, для эффективной профилактики и терапии. Цель и задачи исследования.

Целью нашей работы является изучение этиологической структуры клебсиеллёза бройлеров, биологических свойств клебсиелл выделенных при заболевании цыплят бройлеров и взрослого поголовья птицы, клинического проявления и патологоанатомических изменений при экспериментальном и спонтанном инфицировании, поиск эффективных препаратов для профилактики и терапии клебсиеллеза.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить этиологическую структуру, культуральные и биологические свойства клебсиелл, выделенных от бройлеров;

- изучить факторы патогенности выделенных культур, степень их резистентности и адаптации к антимикробным препаратам различных групп, устойчивость к дезинфицирующим средствам;

- определить патогенность выделенных культур клебсиелл по отношению к лабораторным животным;

- изучить клиническое проявление и патологоанатомическую картину клебсиеллёза в экспериментальных и производственных условиях;

- определить эффективность фармакопрофилактики и терапии клебсиеллёза бройлеров.

Научная новизна.

Впервые изучена этиологическая структура клебсиеллеза бройлеров в Краснодарском крае, определены источники и пути распространения заболевания, биологические свойства и серологический профиль возбудителя.

Выявлены факторы патогенности возбудителя клебсиеллеза бройлеров, его резистентность и степень адаптации к антимикробным препаратам.

Впервые экспериментально воспроизведено заболевание на эмбрионах и цыплятах. Изучено клиническое и патологоанатомическое проявление клебсиеллеза бройлеров в экспериментальных и производственных условиях.

Доказана профилактическая и терапевтическая эффективность комплексных антимикробных препаратов диоксинор и польодоксин при клебси-еллёзе бройлеров.

Практическая значимость.

Изучены пути распространения, степень инфицированности и этиологические особенности клебсиеллеза бройлеров. Определены основные биологические свойства и патогенность возбудителя. Изучена клиническая картина и патологоанатомические изменения, характерные для клебсиеллеза бройлеров. Предложены эффективные антимикробные препараты для фармако-профилактики и терапии клебсиеллеза бройлеров и активные дезинфицирующие средства. Разработаны методические рекомендации «Клебсиеллез бройлеров», утвержденные Управлением Россельхознадзора по Краснодарскому краю и Республике Адыгея 20.05.2009 г.

Апробация работы.

Основные положения диссертационной работы доложены и получили одобрение на Ученом совете Краснодарского научно - исследовательского ветеринарного института в 2006 - 2008 гг.; V региональной научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса (Краснодар, 2004) и на VII региональной научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса (Краснодар, 2005 гг.), по итогам которой получена почетная грамота; 1-й научно-практической конференции « Современная ветеринарная защита коров высокопродуктивных пород» (Воронеж, 2005 г.); международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ (Краснодар, 2006 г).

Публикации.

По материалам исследований опубликовано 5 научных работ, в том числе 1 в рецензируемом издании, рекомендуемом ВАК.

Основные положения диссертации выносимые на защиту:

- этиологическая структура и серологический профиль клебсиелл, выделенных от бройлеров;

- культуральные и биологические свойства выделенных от бройлеров изоля-тов Klebsiella;

- факторы патогенности выделенных культур, степень их резистентности и адаптации к антимикробным препаратам различных групп;

- пути передачи, клиническая и патологоанатомическая картина клебсиеллё-за бройлеров в производственных и экспериментальных условиях;

- фармакопрофилактика и терапия клебсиеллёза бройлеров.

Объём и структура диссертации. I

Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста, иллюстрирована 18 таблицами, 8 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений. Список цитированной литературы включает 201 источник, из них 136 отечественных.и 65 иностранных авторов.

5. ВЫВОДЫ

1. На неблагополучных по клебспеллезу птицефабриках возбудитель выделяется от всех возрастных групп бройлеров, из инкубационных яиц и эмбрионов. Частота выделения зависит от возраста птицы. Из замерших эмбрионов клебсиеллу изолировали в 20,8% до 50,0% случаев, от цыплят 130 -дневного возраста - 16,6% — 50%, цыплят старше 40 дней и взрослой птице - 11,2% - 55,5%. Количество положительных проб за период с 2006 по 2008 годы возросло во всех обследованных группах с 11,2 - 25,5% до 41,7-55,5%.

2. Основным этиологическим агентом при клебсиеллезе бройлеров является К. rhinoscleromatis - 98% культур от числа всех изолятов клебсиелл. Средний процент выделения К. rhinoscleromatis составил 13,9 - 43,7%, из эмбрионов - 30,8%, от цыплят младшего возраста - 43,7%, от взрослой птицы - 23,1%. К. ozaenae и К. oxytoca играют второстепенную роль, их изолировали в 1,6% и 0,4% случаев соответственно.

3. В среднем процент выделения монокультур клебсиелл составил 12,4%. В 33,7% проб клебсиеллы выделялись в ассоциации со стрептококками (Streptococcus faecalis, Streptococcus группы D, Streptococcus avium), в 43,1% - вместе со стрептококками и бактериями кишечной группы (эшери-хии, протеи, энтеробактеры, кливера, шигелла), в 10,8% - в ассоциации с эн-теробактериями. С увеличением возраста бройлеров процент бактериальных ассоциаций возрастал с 47,1% из эмбрионов по 97,6% - от птицы старше 45 дней.

4. Основным резервуаром возбудителя клебсиеллеза на птицефабриках, не благополучных по данному заболеванию, являются поверхность клеток и питьевая вода, инфицированные выделениями больных цыплят. Количество клебсиелл, изолированных из воды составляло 6397 — 7000 КОЕ/мл, из смывов с поверхности клеток - 15048 - 80500 КОЕ/мл.

5. Культуры клебсиелл, выделенные от бройлеров обладали значительной вариабельностью биохимических свойств. В подавляющем большинстве случаев - 99,6% формировали колонии S - типа, 100% культур имели капсулу и активно сбраживали сахара. Все 252 культуры K.rhinoscleromatis (100%) относились к серогруппе К — 5, 75% культур К. ozaenae - к К-68 и 25%- к К —25. Культура К. oxytoca— к сероварианту К-70.

6. Все выделенные культуры клебсиелл были вирулентными для белых мышей в дозе LD50200 - 600 млн. м. т./мышь, 69,3% культур продуцировали а - гемолизины и 30,7% - |3- гемолизины. 100% изолятов гемолизи-ровали эритроциты барана, 71,5% кролика и ни одна культура не гемолизи-ровала эритроциты морской свинки. 64,6% культур Klebsiella продуцировали токсины: 57,2% - экзотоксины, 7,4% - токсины других типов, 100% клебсиелл обладали антилизоцимной активностью в концентрации 4,9 ± 0,2 мкг/мл.

7. Большинство культур клебсиелл высокорезистентны к антимикробным препаратам. Из 24 испытуемых препаратов активных в отношении всех выделенных культур не установлено. 37,5% были высоко эффективны по отношению к клебсиеллам - преимущественно комплексные соединения. Степень адаптации клебсиелл к антимикробным препаратам достаточно высока: к 30 пассажу чувствительность снизилась в 4 — 1111 раз. Наиболее эффективными дезинфицирующими средствами, при клебсиеллёзе являются роксацин и катомин.

8. Клебсиеллез у бройлеров протекает в двух формах - респираторной и кишечной. Респираторная форма болезни развивается у цыплят до 18-и дневного возраста и ассоциируется с К. rhinoscleromatis. В старшем возрасте регистрировали кишечную форму клебсиеллеза, при которой кроме К. rhinoscleromatis изолировали К. ozaenae в ассоциации с эшерихиями и условно-патогенными энтеробактериями.

9. Профилактическая эффективность применения препарата польодоксин была в пределах 98,9%, диоксинор - 99,2%. Экономическая эффективность профилактического применения польодоксина - 18,9 рублей на 1 рубль затрат, диоксинора - 43,6 рублей на 1 рубль затрат. Экономическая эффективность терапевтического применения польодоксина — 4,18 рублей на 1 рубль затрат, диоксинора - 6,3 рубля на 1 рубль затрат.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для профилактики клебсиеллеза бройлеров рекомендуется проводить бактериологический контроль поступающих яиц и не допускать к инкубации, инфицированные клебсиеллой яйца из неблагополучных родительских стад.

Необходимо проведение качественной дезинфекции инкубационного яйца с последующим контролем качества дезинфекции на наличие клебсиелл, а затем бактериологических исследований замерших 18-и суточных эмбрионов с подтитровкой чувствительности выделенной микрофлоры к антимикробным препаратам.

Рекомендуется применение высокоэффективных комплексных антимикробных препаратов польодоксин и диоксинор для профилактики клебсиеллеза бройлеров в 1-5 и 28-33-дневном возрасте, с питьевой водой в дозе 0,5 -1,0 мл/л, в течение 5 дней, с лечебной целью - 1,0 - 1,5 мл/л в течение 5-7 дней.

На основе результатов исследований разработаны методические рекомендации «Клебсиеллез бройлеров», утвержденные Управлением Россель-хознадзора по Краснодарскому краю и Республике Адыгея 20.05.2009 г.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Не смотря на то, что микроорганизмы рода Klebsiella известны научному миру в течение полутора столетий, данных о видах клебсиелл, изолированных от птиц, практически нет. Не изучены морфологические, тинктори-альные и биологические свойства изолятов, выделяемых при различных патологиях кур, в том числе и бройлеров.

По нашим данным, от птицы, из инкубационных яиц и замерших эмбрионов на птицефабриках, неблагополучных по клебсиеллезу возбудитель выделяется достаточно часто - в 11,2 — 55,5%. Из трех обследованных птицефабрик, занимающихся выращиванием цыплят - бройлеров и содержанием маточного стада 2 - «Кавказ», Динского района и ИПС «Первомайска» Ленинградского района были не благополучны по клебсиеллезу.

При этом процент выделения клебсиелл из замерших эмбрионов колебался от 20,8% до 50,0%, от цыплят в возрасте до 30 дней - 16,6% - 50%, цыплят старше 40 дней и взрослой птице - 11,2% — 55,5%. Количество положительных результатов за период исследования с 2006 по 2008 года возрастал по всем исследованным группам от 19,3% в группе цыплят 1-10 дневного возраста до 44,3% в группе птицы старше 40 дней.

По нашим данным ведущее место в этиологической структуре клебсие-елеза бройлеров можно отвести К. rhinoscleromatis, которая была изолирована в 98% случаев. Полученные данные существенно отличаются от результатов, приведенных Dessouky M.I., Moursy A., Niari Z.M. (1982), которые основную роль отводили К. pneumoniae, К. oxytoca, К. ozaenae.

Этиологическая структура клебсиеллеза бройлеров существенно отличается от профиля возбудителей, выделяемых от млекопитающих и человека.

По антигенному составу все выделенные от бройлеров культуры К. rhinoscleromatis были отнесены к типу К-5 по капсульному антигену. Из 4 изолированных культур К. ozaenae 3 - или 75% - относились к сероварианту К-68, и 1 культура - 25% - к К-25. Единственный изолят вида К. oxytoca реагировал с антисывороткой группы К-70. В отличие от культур клебсиелл, изолированных от млекопитающих и человека, ни одна из выделенных от бройлеров культур не имела более одного капсульного антигена.

Orajaka, L.J.E., and К. Mohan (1985), Plesser, О. A. Even-Shoshan, and U. Bendheim (1975), Sarakbi T. (1989) доказали, что клебсиеллы в птицеводстве приводят к смертности эмбрионов, а так же чрезмерной потере среди молодняка индеек и кур.

Приведенные сведения согласуются с полученными нами результатами: при трансовариальном заражении эмбрионов клебсиеллой вывод цыплят на птицефабрике снижается до 54 - 60%, что на 30,2% - 37,2% ниже, чем при инкубировании не инфицированных яиц.

Количество не жизнеспособных цыплят, выведенных из инфицированных клебсиеллой яиц (погибающих в первые 4 — 5 дня жизни), увеличивается в 2 — 2,5 раза, что составляет 7 - 8%.

При экспериментальном заражении 12-13 суточных эмбрионов в условиях научно-исследовательской лаборатории вывод цыплят снизился до 70%, что на 20% ниже, чем в контроле, которым инъецировали стерильный физиологический раствор и на 30% - чем в чистом контроле.

В отличие от условий промышленного инкубатора, гибель инфицированных клебсиеллой эмбрионов в эксперименте в первые 5 суток жизни достигла 100%. По - видимому, это связано с тем, что в инкубаторе не все яйца инфицированы возбудителем, процент спонтанного инфицирования колеблется в пределах 7-9%.

Hinz, К. - Н., М. Ryll, U. Heffels-Redmann, М. Poppel (1992) установили, что инфицирование молодняка индеек микроорганизмами Klebsiella pneumonia увеличивает тяжесть болезни органов дыхания, вызванной инфекциями Bordetella avium и Chlamydia psittaci.

В наших исследованиях культуры клебсиелл изолировали в ассоциации со стрептококками, эшерихиями, условно-патогенной микрофлорой семейства энтеробактерий. Процент выделения монокультур клебсиелл от бройлеров, из инкубационного яйца и замерших эмбрионов составлял в среднем 12,4%. В 33,7% проб клебсиеллы выделялись в ассоциации со стрептококками (Streptococcus faecalis, Streptococcus группы D, Streptococcus avium), в 43,1% - вместе со стрептококками и бактериями кишечной группы (эшерихии, протеи, энтеробактеры, кливера, шигелла), в 10,8% - в ассоциации с энтеробактериями.

В раннем возрасте от цыплят чаще изолировали монокультуры, в более старшем - ассоциации. С увеличением возраста птицы эта тенденция сохранилась: кокковую микрофлору от цыплят 11 — 17 дневного возраста изолировали в 29,7% случаях, кишечную - в 35,9%, цыплят 18 — 20 дневного возраста — 30,4% и 53,1%, цыплят 21 - 30 дневного возраста - 35,7% и 47,3%, цыплят старше 40 дней и взрослой птицы — 23% и 53,9%. При этом процент изолятов кишечной палочки от цыплят старше 18 дней был выше, чем от цыплят младшего возраста, эмбрионов и яиц и составлял в среднем 25,7% с колебанием от 24,8% до 26,6%.

Для предотвращения ущерба, S.G. Liu, М.Н. Gan, Z.M. Zhao (1988) рекомендуют строго соблюдать нормы гигиены в работе с инкубационными яйцами и санитарные условия в инкубаторном цехе.

По нашим данным при обработке инкубационных яиц парами формальдегида по применяемой в инкубаториях схеме не наступает 100% гибели возбудителя. Таким образом, инкубаторные шкафы, зараженные клебсиеллой, могут служить фактором передачи инфекции.

Нами было установлено, что процент изолятов клебсиелл при заболеваниях бройлеров увеличивается с каждым годом. Так, если в 2006 году культуры клебсиелл выделяли в 19,5% случаях, то в 2008 году — в 47,8%.

Сложившаяся ситуация может обьяснятся длительным выживанием и накоплением возбудителя во внешней среде на территории птицефабрик, неблагополучных по данному заболеванию.

И. В. Голубева, (1982); Б.С. Киселева, (1985); Н.Н. Моисеенко, (1985); Г.М. Трухина, (1985); Bagley S.T., SeidlerK.J., Brenner D.J., (1981); Soncini G., Fergonzi D., (1986); Mahalingam P., (1988); Sarakbi T.M.B. (1986) установили, что микроорганизмы рода Klebsiella способны длительное время выживать в почве, питьевой и морской воде, молочных продуктах, растениях, семенах, овощах, в организме иксодовых клещей, на различных объектах внешней среды, в организме животных, птицы и человека.

В своей работе мы получили аналогичные данные: при исследовании проб воды на птицефабрике «Кавказ» Динского района, неблагополучной по клебсиеллезу бройлеров, клебсиеллу изолировали из 2-х проб воды ( накопительные бачки в корпусах и ниппельные поилки), всех проб смывов с поверхности клеток и 3-х проб кормов. Количество КОЕ в воде — 6390 — 7000 в мл, смывах - 15048 - '80500 в мл, кормах - 130 - 220 в грамме. При этом из смывов клеток цыплят старшего возраста процент изолятов клебсиелл снижался, не смотря на увеличение выделения общего количества микроорганизмов.

Клебсиеллы относятся к условно-патогенным бактериям. Этот род микроорганизмов может поражать бройлеров при различных неблагоприятных условиях кормления и содержания.

По данным Sarakbi Т.М.В., (1986); Bagley Susan Т., Seidler К.J., Brenner D.J., (1981); Soncini G., Fergonzi D., Mahalingam P., (1986) в естественных условиях клебсиеллы могут поражать как взрослую птицу, так и молодняк.

Данные по увеличению частоты выделения клебсиелл от кур были приведены Sarakbi Т.М.В. в 1986 году, процент поражения птицы клебсиеллами достигал от 14,6% до 16,1%.

Клинически в условиях птицефабрик клебсиеллёз бройлеров протекает в 2-х формах:

1. респираторная - наблюдается у цыплят младшего возраста;

2. кишечная — как правило, отмечается у цыплят старше 20-ти дневного возраста.

Наличие респираторной формы клебсиеллеза у цыплят младшего возраста, у которых отмечаются первоначально поражения верхних воздухоносных мешков - межключичных, шейных, а затем процесс опускается на грудные, брюшные и поражает легкие, может свидетельствовать о преимущественном аэрогенном пути инфицирования. Такую точку зрения подтверждают и наблюдаемые у больных респираторной формой бройлеров клинические признаки: слабость, нарушение дыхания, кашель, риниты и кератоконъюкти-виты, сопровождающиеся слюно- и слезотечением. Респираторная форма клебсиеллеза ассоциируется с К. rhinoscleromatis. S.G. Liu, М.Н. Gan, Z.M. Zhao (1988), при патологиях указывали о вспышке болезни глаз, вызванной микроорганизмами рода Klebsiella и поразившей молодняк кур 4-недельного возраста. О наличие признаков, характеризующих поражение респираторного тракта у цыплят, исследователи не упоминали. По их данным у зараженных К. pneumoniae цыплят отмечали понос. Судя по тому, что кишечная форма клебсиеллеза у бройлеров нами регистрировалась в возрасте старше 20-и дней, а авторы изучали клиническую картину у птицы 4-х недельного возраста, они просто не обращали внимания на клиническую картину респираторной формы у цыплят младшего возраста, или же не ассоциировали таковую с клебсиеллой.

Поскольку в старшем возрасте, когда у бройлеров клебсиеллез проявляется в кишечной форме, изолировали большое количество бактериальных ассоциаций, в том числе с эшерихиями, протеями, шигеллами, которые вызывают поражения органов пищеварения, кишечная форма течения болезни может, в большей степени вызываться именно этими бактериями, которые наслаиваются на клебсиеллезную инфекцию.

При патологическом вскрытии у цыплят, в начальной стадии респираторной формы клебсиеллёза, отмечаются риниты - слизистая носовой полости гиперимирована, усеяна геморрагиями, набухшая и отёчная, студневидна вследствие инфильтрации толщи слизистой оболочки серозным экссудатом;

Регистрируются серозно-фибринозные аэросаккулиты, с начала межключичных воздухоносных мешков. Воспаление воздухоносных мешков развивается вследствие перехода на них воспалительного процесса с носоглотки.

Серозно-фибринозное воспаление сопровождается скоплением сероз-но-фибринозного выпота в полость межключичного воздухоносного мешка, затем воспаление переходит на шейные мешки, поражая главный бронх, краниальные и каудальные грудные мешки, а в последствие и брюшные воздухоносные мешки. Аэросаккулиты характеризуются отложением на воспалённых стенках воздухоносных мешков серозно-фибринозного экссудата, вначале в виде едва заметного, нежного паутиноподобного налёта серо-белого или серо-желтого цвета. В дальнейшем наблюдается значительное утолщение фибринозных отложений, вследствие чего развивается фибринозная пневмония, характеризующаяся лобарным поражением лёгких, сразу распространяясь на целую долю или несколько долей, поражая преимущественно передние доли легкого.

Культуры К. rhinoscleromatis при респираторной форме течения изолировали от цыплят из носовой полости, пораженных воздухоносных мешков, легких, из паренхиматозных органов, крови сердца, но не из головного и костного мозга.

Патологоанатомическая картина при кишечной форме течения клебсиеллёзной инфекции у цыплят бройлеров, сопровождается развитием геморрагическим воспалением железистого желудка, которое выражается гиперемией, кровоизлияниями, набуханием и серозно-геморрагической инфильтрацией толщи слизистой оболочки. Одновременно с этим регистрировали сероз-но-геморрагический отёк подслизистой оболочки мышечного желудка, благодаря чему сравнительно легко отделяется эпителиальный покров.

Выражено катаральное воспаление слизистой оболочки тонкого кишечника. Слизистая оболочка кишечника покрыта нелегко смываемым, густым, тягучим, полупрозрачным слизистым отделяемым налётом, несколько разрыхлена, мутновата, набухшая, отёчна, окрашена в серо- или ярко красный цвет и усеяна мелкими кровоизлияниями. В редких случаях замечали поверхностные потери веществ слизистой оболочки, катаральные эрозии и язвы.

Печень увеличена в объёме. Паренхиматозное воспаление печени сопровождается множественными, различной величины кровоизлияниями, ломкой консистенции, глинистой окраски.

Почки увеличены в объёме, капсула напряжена, снимается легко, окрашена в бледно-красный цвет, с влажной, сочной поверхностью на разрезе.

При такой форме течения клебсиеллеза от бройлеров выделяли не только К. rhinoscleromatis, как от цыплят младшего возраста при респираторной форме болезни, но и К. ozaenae. Возбудителя изолировали из паренхиматозных органов, крови сердца, головного и костного мозга. Кроме клебсиелл при кишечной форме часто выделяли ассоциации эшерихий и условно-патогенные энтеробактерии.

По литературным данным род клебсиелл характеризуется следующими показателями - это грамотрицательные мелкие, неподвижные палочки, окружены капсулой. Растут на твёрдых питательных средах прозрачные блестящие круглые колонии, как слизистые, так и не слизистые, размером от 0,3 до 2,5 мм (Савельев В.Н., 1973; Голубева В.А., 1982; Киселева Б.С. 1985).

При изучении культуральных свойств культур, установили, что клебсиеллы выделенные от бройлеров, хорошо растут на обычных питательных средах, на МПБ образуют обильный слизистый осадок, пристеночное кольцо и плёнку при интенсивном помутнении среды. На МПА — средние и крупные слизистые прозрачные колонии S форма у К. rhinoscleromatis и К. ozaenae, а у К. oxytoca - плоские и шероховатые - R формы.

Проведённые исследования по изучению культуральных, морфологических и биохимических свойств выделенных клебсиелл позволили нам отнести 252 культур к виду К. rhinoscleromatis, 4 культуры — К. ozaenae, 1 культуру - К. oxytoca. В доступной нам литературе не обнаружили данных о видовом составе клебсиелл, выделенных от птицы, в частности, бройлеров. Однако, известно, что от млекопитающих при различных патологиях изолировали в основном К. pneumoniae, К. oxytoca, К. mobilis, К. terrigena (Pod-schun R., Przondo-Hessek A., Rennie R.P., Riser E., 1980; Qrskon L, 1984; Березина JI.A., 1993; Бондаренко B.M., 1987; Брилис В.И., 1986; Вертячих А.Н., 1987; Гедзе Г.И., 1985; Гозиев Г.М., 1986; Ерастова Е.И., Киселева Б.С., 1984; Красноголовиц В.Н., 1996; Романова Н.А., 1985; Савелье В.Н., 1978; Самохина З.Ф., 1974), которые, по всей видимости, являются ведущими этиологическими агентами при патологиях, ассоциируемые с этим возбудителем.

Просто факт изоляции микроорганизма из патологического материала не может свидетельствовать о его этиологическом значении в патологическом процессе. Одной из характеристик патогенности возбудителя является наличие у него факторов патогенности, способствующих не только его существованию в организме хозяина, но и возможности противостоять защитным силам макроорганизма.

По мнению Бондаренко В.М., (1996); Брилис В.И., (1986); Гостиева В.В., (1984); Маслова Э.И.,(1980); Похил С.И,(1992); Руднев И:А.,(1993); Хоменко И.М., Конюхова Н.А., (1985); Ярков А.Н.,(1989); Asnani P., Jhanjee (1982); A., Kaur К., Kaul М., Chhibber S., (1988), факторы патогенности обеспечивают микроорганизму возможность не только проникать в организм хозяина, но и вызывать патологический процесс.

Этиологическое значение К. rhinoscleromatis подтверждено наличием у возбудителя факторов патогенности: гемолитической активности, способностью продуцировать токсины, антилизоцимной активностью.

Одним из факторов патогенности выделенных от птиц штаммов клебсиелл, является цитотоксичность (гемолитическая активность). Гемолизины состоят из полипептидов и липополисахаридов, обладающих способностью лизировать эритроциты (В.М. Бондаренко, 1987; К.В. Калнин, 1992; А.П. Красиков, Д.В. Конин, 1998; И.Э. Маслова, Петровская В.Г., 1984; С.И. Похил, 1992; И.А. Руднев, 1993; З.П. Васюренко, 1980; Cryz S.J., 1986). Способность клебсиелл продуцировать гемолизин изучили, при использовании 5 % кровяного агара. Для этого пользовались дефибринированной кровью барана, кролика и морской свинки, поскольку эритроциты этих животных наиболее чувствительны к гемолизинам.

Было установлено, что 100% культур клебсиелл лизировали эритроциты барана, 79 культур (30,7%) обладали (3 — гемолитической активностью, а 178 культур (69,3%) дают а - гемолиз с эритроцитами барана. Наблюдался наиболее интенсивный гемолиз при использовании крови барана, менее активный с эритроцитами кролика, а при использовании дефибринированной крови морской свинки культуры не проявляли гемолитической активности.

Гемолитической активностью по отношению к эритроцитам кролика обладали 184 культуры или 71,5%, формируя вокруг колоний зону а - гемолиза. Не одна из изучаемых культур клебсиелл не гемолизировала эритроциты морской свинки.

Способность к токсинообразованию, по мнению ряда исследователей (Бондаренко В.М. и др., 1986; Jhanjee A., Asnani Р., 1982; Kahlich R. et al., 1982; Ivanof A. et al., 1983), является одним из основных факторов патогенности клебсиелл.

Экзотоксины, выявленные в тесте отека лапки, продуцировало 57,2% или 147 культур выделенных от бройлеров клебсиелл. Максимальное накопление токсинов в фильтратах культур клебсиелл отмечали на 3-5 сутки культивирования.

При выявлении токсигенности на инфузориях стилонихиях, токсиген-ные свойства выявили у 64,6% или 166 культур Klebsiella, то есть 7,4% или 19 культур кроме экзотоксина продуцировали токсины других типов.

Антилизоцимный признак у клебсиелл способствует подавлению фагоцитоза, а также сохранению и возможно, размножению обладающих им штаммов в фаголизосоме. 100% выделенных от птиц культур клебсиелл обладали антилизоцимной активностью. Средняя величина АЛА составила 4,9 ± 0,2 мкг (концентрация лизоцима мкг/мл).

По данным, представленным Судаковым Н.В., 1966; Красиковым А.П., Кониным Д.В., 1998; Тереховым В.И., Гугушвили Н.Н., 1995; Тереховым В.И., Тельновым С.Н., 1999 году, при изучении степени вирулентности возбудителей, выделенных от сельскохозяйственных животных (телята, поросята), клебсиеллы патогенны для лабораторных животных в дозах 350 — 800 млн.м.т./мышь. Выделенные нами из инкубационных яиц, замерших эмбрионов, вынужденно убитых и павших цыплят бройлеров и взрослой птицы культуры клебсиелл, были также патогенны для белых мышей при внутри-брюшинном введении. Заражение смывами агаровых культур вызывало гибель мышей через 18-24 часа, бульонной культуры - через 5-7 часов, что, по нашему мнению, свидетельствует о продукции экзотоксина

У 93,8% изолятов LD50 находилась в пределах 400-600 млн. м. т./мышь, 6,2% - 200-250 млн. м. т./мышь. Слизистые культуры К. rhinoscleromatis, К. ozaenae обладающие мощной капсулой, оказались более вирулентными, чем бескапсульные и К. oxytoca. Бактерионосительство у зараженных мышей регистрировали в течение 18-20 дней.

Степень вирулентности К. rhinoscleromatis при пассаже на беспородных белых крысах повысилась к 6 пассажу в 4 раза - с 4 млрд м.т./голову до 1 млрд м.т./голову.

Судаков Н.В. (1966) по биохимической активности клебсиелл отнес к разряду умеренных ферментаторов.

При изучении биохимических свойств выделенных от бройлеров культур клебсиелл все ферментировали глюкозу, арабинозу, миннит, отмечена незначительная вариабельность в отношении мальтозы, лактозы, сорбита. 0,8% культур клебсиелл ферментировали лизиндекарбоксилазу и 1,2% Р — галактидазу, 98,0% - малонат натрия.

Считается, что клебсиеллы обладают высокой устойчивостью к большинству широко используемых в практике антибиотиков (Кащуба Э.Ф., 1992; Кукулянский А.А., 1984; Мойсеенко Н.Н., 1990; С.М. Навашин, Фомина И.П., 1986; Casewell M.W., Phillips J., 1981; Cryz S.J., 1985; Kaur К., Kaui M., Chhibber S. 1988), что подтверждается и нашими исследованиями. Из 24 тестированных препаратов активных в отношении всех выделенных от бройлеров культур не установлено. Все активные препараты в отношении клебсиелл (квинокол, киноэкс, колмик - Е, польодоксин, диоксинор, диоксиген) являлись комплексными соединениями.

Доксициклин, витроцил, квинокол, тилан, энрофлоксацин, киноэкс, колмик - Е, польодоксин, энроксил, диоксинор, диоксиген, тилозин — активные в отношении антибиотикоустойчивых культур, выделенных от цыплят различного возраста и эмбрионов.

При культивировании клебсиелл в суббактериостатических концентрациях тетрациклина, норсульфазола, фуразолидона, клафорана, абактана, не-омицина, ампициллина возможно быстрое и в значительной степени проявляемое привыкание к данным антибиотикам. Так, к 30 пассажу к тетрациклину чувствительность снижалась в 16 - 320 раз, норсульфазолу в 8-641 раз, нитрофуранам 8 - 320 раз, клофорану -16 — 1111 раз, абактану и неомицину - 4 - 128 раз и ампициллину - 5 -64 раза. Быстрое привыкание клебсиелл к антибиотикам отмечали Киселева Б.С., Красноголовец В.М., 1983; Cryz S.J., 1985; Kaur К., Kaui М., Chhibber S., 1988. Это связывают, в первую очередь с наличием в структуре клетки R - плазмид.

По данным Sarakbi Т.М.В. (1986) в пыли птичников клебсиеллы сохраняют жизнеспособность более 300 дней. Они могут распространяться от больных птиц горизонтальным и вертикальным (через инфицированные яйца) путями.

Для подтверждения вертикального пути передачи клебсиеллеза провели бактериологические обследования клинически здорового племенного поголовья бройлеров 25 — 36 недельного возраста. При этом, установили, что от взрослой птицы культуры клебсиелл выделяются только из костного и головного мозга и гонад, но не из паренхиматозных органов и крови, как от цыплят в 1 — 20 дневном возрасте. Что указывает на длительное носительство и латентную форму течения клебсиеллёзной инфекции.

Так же подтвердили вертикальный путь передачи клебсиеллёза трансо-вариальным заражением эмбрионов, при этом вывод цыплят снижался до 54

- 60%, количество не жизнеспособных цыплят, погибших впервые 4 — 5 дней жизни увеличивалось в 2 — 2,5 раза (7 — 8%).

Высокая устойчивость клебсиелл к антимикробным препаратам и высокая степень адаптации к ним делает поиск высокоэффективных фармакологических средств профилактики и лечения клебсиеллезной инфекции актуальным и своевременным.

При изучении активности антимикробных препаратов по отношению к изолятам клебсиелл установили, что наиболее эффективными являются комплексные препараты, в том числе польодоксин и диоксинор.

Профилактическую эффективность комплексных препаратов изучали на базе птицефабрики «Кавказ», Динского района на 32 тысячах бройлеров.

Цыплятам опытных групп препараты задавали с питьевой водой из расчёта 1,0 мл/л воды, ежедневно, в течение 5 дней с суточного возраста.

За 5 дней наблюдения установили, что при применении польодоксина сохранность была выше на 4,1%, заболеваемость ниже на 18,5%, среднесуточный прирост массы тела возрос на 7,24 гр. или 42,5% по сравнению с контрольной группой. При применении диоксинора эти показатели были соответственно - 4,4%, 18,8% и 8,33 гр. или 48,8%.

Лечебная эффективность препарата диоксинор в период вспышки клебсиеллёзной инфекции, на 0,6% выше, чем польодоксина в период лечения и на 0,19%- последующие 6 дней.

Экономическая эффективность профилактического применения польодоксина — 18,9 рублей на 1 рубль затрат, диоксинора - 43,6 рублей на 1 рубль затрат.

Экономическая эффективность терапевтического применения польодоксина - 4,18 рублей на 1 рубль затрат, диоксинора — 6,3 рубля на 1 рубль затрат.