Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Антигенная активность вакцин против парвовирусной болезни свиней

Ф'впя Эй

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ СТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ имени Я.Р.КОВАЛЕНКО

На правах рукописи УДК 619•'616.98:578.822—078'634.4

ПОЛИТОВ Олег Юрьевич

АНТИГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ ВАКЦИН ПРОТИВ ПАРВОВИРУСНОЙ БОЛЕЗНИ СВИНЕЙ

16.00.03-ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москна-1992

Работа выполнена во Всесоюзном ордена Ленина научно-ийСле-довэтельском институте экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко.

Научный руководитель:

доктор ветеринатных наук, профессор Б.Г.Орлянкин. Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор К.П.Юров (ВИЭВ)

2. Кандидат ветеринарных наук Е.Ю.Зеленов (ВГНКИ ветпрепа-

Ведущая организация - Московская ветеринарная академия им. К.И.Скрябина

К 020.28.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук при Всесоюзном ордена Ленина научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарки им. Я.Р.Коваленя по адресу: 109472, Москва Кузьминки, ВИЭВ.

ратов)

Защита диссертации состоится " _1992 г.

часов на заседании Специализированного Совета

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ. Автореферат разослан " 1992 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета, кандидат ветеринарных ;:пук

¿.Г'.Терешков

ij&CWSKSi I, С ЕЗДЯ ШШВЕОЯШ РАБОТЫ

■ ■ •• гтудльмость темн. Существенную роль среди знрусных и бахте-

^гй&ыг.к агентов, т^зивакшпс нарушение воспроизводительной гук::-■хсрт-щик I

c:,:Hov;aTo:c. г.гг;зо7 парвопирус свинеЯ. Епервые Еозбудотэдь был в 1557 г. в Великобритании из плодоз абортировавших сви-г;:/.аток <Caxtr»ri3?v5 aad nuci,IS67).3 настоящее аремя заболеззннс . ~сгис1р.::руят ¿слео t:s:.i d £0 странах ыара, □ том числе и d казеЯ стране.

"одезпъ клинически проявляется только у супоросных свинома-vo;t н'хз^йктеризуется гибелъя смбриеноз и плодоа, мумиЗикаапеЛ •тадоз» рождением уертзкх и слабых поросят» уменьезниеч числа по-дсс.т? з nc:te?e г: абортами. У г.лвот:шх других половозрастных г^упл заболевание протекает з латентно?! форме 193$).

"злязкь i:?.hoc:.:t значительный экономический уцерб рспродук-тчзному свиноводству, зоторый оценивается з СИ в размере 25-75

долларов п год (»allaeeo ?агядг, 1S31), в Великобритании 15 млн, -/нтов стерлингов (Tot.Р.ас., 1534) , до Зранции экономический ^дерй на одну. _сзинеаптку в год составляет около 700 франков (Д1яз,

ti'o;), з

При возникновении заболевания в ранее благополучных хозяйст-"IX рождение гивых поросят на одну свиноматку в год снижается на а в стационарно неблагополучных - на 10-20^5.

Специфическая профилактика парвовирусноЯ болезни свиней в стране и за рубеже:* осуществляется с ясмоцьго инактнзирозан-вакцин, обладайдих достаточной эффективностью и предохраняп-дих свиноматок от заражения и трансплацентарного инфихрфозання енбрионоэ и плодов. Однако, оптимизация способов приготовления за"-цкн и методов их применения в хозяйствах, неблагополучии:' по пар-^овирусной болезни свиней, остается актуальной задг.чей.

"г":, ?ту>дг:'»кссЕе1Рг.'.чгЯ. Цедьу нгзтсядей тзебота язллось ;геучек;те антигенной активности вакцин против пзрзозидусноЯ болоз-н>: свиней при раоличнис способах нмцупнзашт т.г!БО?них. 3 соствет-^тЪпп с поставленной цоль:э в задач:; исследований ьхоч/ыо:

- изучить репродуктивную активность пьрвозируса свиной при :г'1ь?:1Е;шосанки его различными способами;

- изучить антигенную активность лабораторных образцов вакцин лабораторных и естественно-восприимчивых хивотннх;

- определить длительность сохранения у поросят пассивно приобретенных с молозивом антител к парвовирусу свиней;

- определить зависимость иммунного ответа свиноматок на вакцинацию от исходного уровня антител к парвовирусу свиней;

- изучить антигенную активность аттенуированного штамма пар-вовируса свиней при аэрозольном способе иммунизации;

- изучить влияние вида адьеванта и количества антигена на активность парвовирускых закцин.

гЬучнпя новизна. Определена репродуктивная активность парво-• вирус а свиней при культивировании стационарным и суспензионным способами. Установлена антигенная активность парвовирусных вакцин при различных способах иммунизации животных. Показана перспективность внутрикожного способа вакцинации против парвов!грусной болезни свиней. Определена длительность персистирования пассивно приобретенных с молозивом антител к парвозирусу свиней у поросят.

П-актп^ес'-'пя ценность работы. 3 результате проведенных исследований по изучению гнтигенной активности парвовирусных вакцин было определено влияние вида адтлованта, количества антигена в вакцш-л способа введения на их активность. Полученные нами данные были •'спгчьзовиа при составлении "Временного наставления по применении :;:;а::тиз:;рованной, концентрированной вакцина против парвовирусной бслознн, лсптсспироза, болезни Ауесгш и хламэдиоза сг-г.шей.

Атаобацу.яработы. Осксзнме полс~екия диссертационно" рабоп: дологенн и обсугдены на конференции молодых ученых ЕИЭЗ (IS3I г.), заседслитт Ученого совгта Е'ЛЗВ (19Э1 г.) к г'еглабораторном ссвеяа-нтг сотрудников ВИЭВ (1932 г./.

0У0ли2а^я_рээУльт£тов_иссле^ван!?Я. Основные материалы дис-сзртплчи опубликоцсни з 3 нау-пплт работе;..

Диссертация изложена на 108 страницах ьгазинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собстзеншк исследования, обсуждение результатов, выводи» практические предложения, список литература. Работа илластрировь-на 22 таблицам. Слисок используемся литературы вклочает 199 источников, из них 29 отечественных и Г70 зарубезмых авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЩСВАН1И

2.1. .1.!ате риалы и методы исследований

Работа выполнена в I989-I99I гг. в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики вирусных болезней свиней ВИЭВ, а такзе в ряде свиноводческих хозяйств, неблагополучных по парвови-русной болезни свиней.

Еир^с. В опытах использовали эпизоотический штамм И-82 парво-вируса свиней, выделенный из плодов абортиров^влих свиноматок в 1962 г. Исходная гемагг.тотишфущая активность вируса составляла 10 Юs2.

Е^^ьтура_клеток_и_среяа. Для культивирования парвовируса свиней (ПВС) использовали перевиваемую культуру клеток почек эмбрионов свиньи (линия С-ПС). Культуру клеток вырглргеали з среде, содержащей 0,3« сухого ферментативного гкдролиззта шеечных белков, с добавлении 10? нормальной стерильной сызоротхи крови крупного рогатого скота н пнтпбкоткков {пеипцмтан 100 Щ'кх, стрептсотцкп

- б -

зольно. Кроликам 1т морским свинкам инактивированные вакцины вводила внутримышечно в дозе I мл и внутрккоясно в дозе 0,2 мл. Вну-трикожную иммунизации свиней проводили безыгольным иньектором типа "Овод" у основания ушной раковины, а лабораторным животным с псмоцыз туберкулиновых игл а область паховой складки.

•Статистическую обработку результатов исследований проводили, используя учебное пособие "Биометрия" Г.Ф.Лакина (1990 г.).

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Репродуктивная активность парвозируса свиней при

культивировании стационарным и суспензионным способами

Стационарное культивирование ПВС проводили з 250 мл яульту-ральных флаконах в перевиваемой культуре клеток эмбрионов свиньи (линия С-ПС) с использованием среды, содержащей 0,3% сухого ферментативного гидролизата мышечных белков (ЗГМ-с) и Iöf° нормальной стерильной сыворотки крупного рогатого скота. Исходная геиагглю-тинирупцая активность парвовируса евшей составляла 10 а

гч л ____

инфекционная активностью » ИЩ^ф/ил. Birpyc вносили в суспензию клеток з момент посева в соотношении 1:50, посевная концентрация клеток составляла 5-10-10^ в Г ил. Суспензионное культивирование ПВС проводили совместно со старшим научным сотрудником лаборатории технологии культур тканей и питательных сред ВИЗВ кандидатом биол.наук Бахаревым В.Н. Накопление ПЕС, выращенного различными способами, определяли по гемагглптинирутацей активности и цитопа-тическому действии.

■ Как видно иэ результатов, представленных в таблице I, ПВС хорошо размножался в культуре клеток при различных способах культивирования, однако его накопление было не одинаковым. Суспензионный способ культивирования способствовал накоплению вируса в

Тит20вадие_ПВС_в_1^льту2е_клеток. Инфекционную активность парвовируса свиней определяли титрованием по ЦПД в однословной гомологичной культуре клеток по общепринятой иетодине. Расчет титра инфекционности вируса проводили по методу Рида и Ыенча и выражали в тканевых цитопатических дозах (ТЦЦ до/шг).

Инактивация_ПВС. Вирус инактивировали формалином, содержащим не менее 37^ формальдегида. Инактивацию проводили при 37°С в течение 72 ч в конечной концентрации формалина 0,25%. Полноту инактивации ПВС определяли путем серийного пассирования инактивкрован-ного вируса (3 пассажа) в культуре клеток почки поросенка. Наличие вируса контролировали по ЦПЭ и РТА. Отсутствие ЦПЭ и гемаггл»-тинации свидетельствует о полной инактивации вирусе..

Адъгованты. В опытах использовали следущие адысванты: гидроокись алгминия Щелковского биококбкната, смесь минерального масла Ангарского нефтеперерабатызапцего завода, и ланолина (4:1), неполный адъюзант ВНИЯИ 3310, неполний адъгвант БНИЯИ 3404, синтетическое касло № 3 + Т7% ланолина, синтетсческое масло Щ + 17% ланолина, минеральное масло ЕГМ-бИ + 17% ланолинг..

По^путные_животныо. Оценку антигенной активности вакцин против парвовирусной болезни сыгнсй (ПВБС) проводили на лабораторию: к естественко-посприю.яив1с: ктзотчы::. Б качестве лабораторных животных кепользеваг.;: кролштов массой 3-3,5 кг и морских сеиног. массой 0,3-0,4 кг. Из естественно-восприимчивых гивотнкх в опытах использовали основных к ремонтных евкнокаток массой 100-150 кг и подсвинков б возрасте 3—4 месяца.

Ин активированные вакцины вводили свиньям подкожно и внутримыпечно в дозе 5 и 2 кл соответственно и внутриксг-но в дозе 0,2 и 0,4 мл. Аттенуированный штамм парвовиру.а свиней И-82, прошедший 65 пассажей в культуре клеток ППК. применяли аэрс-

- f -

.сультуре клетов в более высоких титрах, чем стационарный. Гемаг-глвтинкрупзая активность вируса, ьыратценного суспензионным способом, была в 1Ь раз выяе, чем у Еируса, выращенного стационарным способом.

Таблица I

Репродуктивная активность ПВС-(п=3; х±и)

! Титр ! Титр инфекционной Способ культивирования ? гемагглвтининов ! активности ______________________[___(logg) _ __ I___( ___

'Стационарный 10,1 + 0,21 7,5 + 0,34

Суспензионный 13,9 + 0,38 9,5 + 0,25

В дальнеЛзем ПВС, полученный при культивировании стационар-ннм и суспензионным способами был использован для приготовления лабораторных образцов вакцин.

'¿.2.2. Изготовление инактквкровакных вакцин

Для инактивации ПВС испольэовани химически чистый форцалик, который добавляли к вирусной суспензии в конечной концентрации 0,25% и ввдертгоали в течение 72 ч при тестературе 37°С.

Для приготовления вакцин нами были использованы в качестве адъпвантоз: гидроокись алтаиния (ГОА), минеральные и синтетические масла с добавлением ланолина, а такяе неполные адъюванты

знияи.

"'чсллннЯ адъзовант готовили путем смешивания минерального >.'ас-/а Ангарского кефтеперсрабатьзалцего завода (ТУ 38-I0I634-B4) и ланояхна з соотношения 4:1. Полученную csxecb стерилизовали при 120°С 2 тсчзниа 1,5 ч. Пркготозленный едъязант перед использовании охлаждали до1В-24°С л сгеятаали с зируссодерпса^ей жидкостью з соотнозекхя 2:1 с псиозрл гомогенизатора в течение 3 мин при

15 тыс.об/мин. Готовая вакцина представляла собой белую эцульстс, сливкообразной консистенции, без запаха.

При изготовлении сорбированных вакцин в качестве адъюванта использовали ГОА, которую предварительно дважды стерилизовали ~ течение I ч с интервалом 24 ч при 120°С. Адъювакт добавляли к кнак-тивкрованному вирусу в конечной концентрации 15 иг/ил. Готовы.!; препарат имел бело-розовый цвет, жидкую консистенцию, без запаха.

Подученные из ВНИЯИ неполные адъюванты 3310 и 3404, а такж-з синте-ические масла № 3 и ИЦ и минеральное масло ЕГК-64 стерилизовали прк 120°С в течение 93 мин и для приготовления вакцин смешивали с вирусе оде ржавей суспензией в соотношении 1:1. Готовые вакцк-ны стерильно разливали по флаконам, плотно закрывали стерильным:! пробками и хранили пря 4-6°С до использования.

2.3. Определение антигенной активности лаборатории: образцов вакцин против парвовирусной болезш: свиней на лабораторных кивотньп:

Необходимым »талом работы перед испытанием лабораторных образцов вакцин в производственных условиях является определение кг активности г безвредности на лабораторных животных. В сикая с этг-; в этой серка опытов накя были проведены исследования по кзученк ■ анткгенной активности приготовленных вакцкн при р&злкчных способах кх введения лабораторным хшвотным. Определено влияние виде едъгзаита к количества антигена в вакцине на иммунологическую реактивность кквотных.

2.3.1. Антигенная активность сорбированной г. эмульгированное вакцтш пря различных способах введенш:

Б опыте Сиг» использованы по 20 голов кролккоэ п кореккх ев? -нсх. Еквотных касдого сада раздел-.ик на 4 группы по 5 гслов в каждой. Илгдткзкровангеге раЕцкки.праготовленныз кз вкруса, обладал^.—

го гемзгглстинирувчей актиЕностьп 10 вводили животным вну-

тргаестечно в дозе I мл и ьнутркксгно в дозе 0,2 мл. Сыворотки крови ча наличие специфических антител у животных исследовали перед тонизацией и через 21 день после. Перед вакцинацией у животных ьчтител и ПЗС не обнаружено.

Таблица 2

Антигенная активность инактивирэванных вакцин против ПВЕС на кроликах (с=5; Х+я)

Вакцина

Сорбированная

лульгирозанная

! ! Среднегеометрические титры

! Спосо6 Еведенля ! а^ткгемагггитининов (юф

внутримышечно внутрикожно

внутримышечно внутрикогшо

6,4 + 0,25 6,2 + 0,20

8,3 + 0,24 7,6 + 0,32

Таблица 3

Антигенная аятизнс.ть кнактивирсранных вакцин против ПЗБС на морских свинках (п=5; ^¿а)

=,„„,„„ ' „„^ „„,,,,„ ! Среднегеометрические титры

оакцина , Способ введения , ^гемагглстининов ао/2)

Согбиоованная

Эмульгированная

внутримышечно внутриксжно

внутримышечно внутгикохно

5,4 + 0,25 9,9 + 0,45

12,2 + С,24 10,9 + С,45

Л&нные таблиц свидетельствует, что приготовленные закцины обладали выраженной антигенной алтивностьв и индуцировали образование антител в высоких титрах, их наибольшие среднегесметричес-кие значения достигали 8,3 1о22 у кроликов и 12,2 1°гг У ко?-

сгих свинок при иммунизации эмульгированной вакциной внутримышечным способом. Титры антител, вызываемые вакцинами при внутримышечном и вкутрккоЕном способах иммунизации, были примерно одинаковы и достоверной разницы между их уровнями не установлено (Р > 0,05). Таким образом, в результате проведение исследований установлено, что кролики и морские свинки обладают выраженной иммунологической реактивностью к ПВС при введении га инантиЕировелных вакцин вну-трикожным споссбом.

2.3.2. Антигенная активность кнактивированных вакцин в зависимости от количества антигена

В спыте были использованы сорбированная и эмульгированная вакцины, приготовленные из вируса, обладапцего гемагглютинирупцей активностью 14 1ое2. Вакцинами игмунизировали хфоликов и морских свинок внутришпечным и внутрикоаэтым способами. Лабораторные животные, используемые в опыте, перед иммунизацией антител к ПВС но содержали. Результаты исследований сравнивали с предыдущими дантам.

Таблица 4

Антигенная активность парвовирусных вакцин на морских свинках (п-5; Х±т)

____^дкна | Способ введения |

Сортированная

лульпгоованнйп

внутрккыгачно 10,5 + С, 25

внутрнкозно 10,3 + 0,25

внутримышечно 12,4 + 0,25

гнутрикагно 11,6 + 0,25

Антигенная активность парвозирусних вакцин на кроликах ( с=5;

Вакцина , Способ введения ;

! Среднегеометрические титры ! антигемагглютининов (1063)

Сорбированная

внутримышечно знутриксжно

7,5 + 0,25 7,9 + 0,32

Эмульгированная

внутримышечно внутрикожно

9,4 + 0,25 8,8 + 0,20

При сравнен™ полученных результатов с предыдущими отмечено, что увеличение количества парвовирусного антигена в 15 раз повысило антигенную активность вакцин против ПВЕС примерно в 2 раза.

2.3.4. Влияние вида адъюзанта на антигеннуя

На антигенные и иммуногенные свойства вакцин большее влияние оказывает вид адъвЕанта. Поэтому следующим этапом налей работы было определение антигенной активности парвовирусных вакцин, содержащих разный вид адысванта. Вакцины готовили с адъвзантами ВН1Ш из вируса, выраженного стационарным способом культивирования и обладающего гемагглвтинирусщей актизностьп 5 1с<г2* Антигеннуя активность лабораторных образцов вакцин против ПББС изучали на морских свинках. Вакцины вводили внутримышечно и внутрикожно. Лабораторные животные перед иммунизацией антител к ПВС не содержали.

2.3.5. Сравнительная сценка антигенной активности ксммерчес-

Для иммунизацта морских свинок в спыге использовали инаятиви-рсванчув ассоциированнув вакцину ПЛАХ против парвсз^уснсЯ бедезки, лептоспироза, болезни Ауески я хламидиеза свиней и икактизирзаннуг:

активность вакцин

ких вакцин против парзовирусной болезни свиней

. Таблица б Антигенная активность вакц;гн против ПЗЕС в зависимости от вида адьсванта (п=5; 2+п)

Вид адызванта ! Способ 'Среднегеометрические титры в вакцине ! введения !антигекагглатининсв (1с£г)

Неполный адъювант в/м 9,1 0,37

ЕКИЛИ 3310 в/к 9,0 0,32

Неполный адъовант в/м 9,5 + 0,50

БШШ 3404 в/к 5,8 + 0,37

Синтетическое масло в/м 7,6 0,37

.¥> 3 * 17% ланолина в/к 7,4 + 0,24

Синтетическое масло в/м 8,3 + 0,40

МЦ +■ 17*о ланолина в/к 7,5 + 0,40

Минеральное масло в/м 8,3 о. 0,50

ЕГМ-БМ + 11% ланолина в/к 8,0 + 0,31

мсновакцину против ПВЕС. Вакцины вводили морск;..-«- свинкам внутримышечно и внутрикохно; на каждый способ введения вакцины использовали по 5 животных. Морские свинки перед вакцинацией антител к ПВС не содергдяи.

Обе коммерческие вакцины при различных способах введения индуцировали образование гуморальных антител в высоких титрах (7,46,4 1ое0 ). Ассоциированная Еакцина ПЛАХ в отношении парвовирус-ного компонента вызузала образование антител в титрах з 1,5-2 рапа ниже, чем мснов&кцина. Однако, при статистической обработке результатов эта разница сказалась недостоверной (Р > 0,05).

Таким образом, при доведении сравнительной оценки антигенной активности вакцин против ПВБС на лабораторных животных отмечено, что все приготовленные образцы вакцин обладали зараженной антигенной активностью. Лабораторные животные^ используемые в опытах, в

ответ ка вакцинацию синтезировали антитела з достаточно высоких титрах. Однако, морские свинки обладали больней иммунологической реактивностью к ПЕС, чем кролики.' Бнутрикстаьй способ иммунизации лабораторных животных пара с вирусными вакцинами не уступает по силе иммунного ответа знутркмьггечному.

2.4. Определение антигенной активности лабораторных образцов вакцин против парвовирусной болезни свиней на естественно-восприимчивых животных

2.4.1. Иммунный ответ у свиноматок на вакцинацию з зависимости от исходного уровня антител к парзовирусу свиней

Работа проводилась в с/к "Туртапский" Нижегородской области, где для постановки опыта были сформированы 9 групп животных по 10 голов в каждой. Четыре группы свиноматок иммунизировали вакциной с эмульгированным адъювантсм, четыре - с сорбированным и одна группа служила контролем. Сорбированную и эмульгированную вакцины, приготовленные из В1фуса, обладающего гемагглптинирупцей активностью 10 1оЕ2>о вводили внутримышечно и подкожно в дозе 5 и 2 ил соответственно и внутрикожно з дозе 0,2 и 0,4 ил. Сыворотки ¡грози животных на наличие антител к ПВС исследовали до иммунизации и через три недели после нес з РТГА. В результате проведенного опыта было установлено, что псе ппзотныз перед иммунизацией с еде слали высокие урозни спецзфпзских антител от 6,2 до 9,2 Через

21 день после вакцинации титры антител я ПЗС увеличились незнг.та-тельно <до 8,7 и 9,9 1оз2). Разница м^гду пре- л постзакцикальн-:*-ми титрами антител была статистически недостоверна (Р > 0,05). Высокие уровни антител к ПВС у свинсматок до вакцинации препятствовали га:звит:га постзакцкнального иммунитета. В связи с невсзмсж'с-стью интерпретации результатов вакцинации на свиньях, содэрглгзпс

высокие уровни специфических антител до иммунизации, перед нами была поставлена задача по выявлению животных, свободных от них или содержащих их в низких титрах.(не более 5 log2).

2.4.2. Длительность сохранение у поросят пассивно приобретенных с молозивом антител к парво-вирусу свиней

Известно, что антитела к ПВС поросята приобретают пассивно с молозивом от свиноматок. Они надежно защищают животных от инфицирования вирусом в первые месяцы жизни. Однако, через определенный период времени антитела полностью распадаются, и животные становятся свободными от них. В это время они восприимчивы к заражению парвовирусом. Работа по изучен;® длительности сохранения у.поросят пассивно приобретенных с мслбзивом антител проводилась в трех свиноводческих хозяйствах - "ТуртапскиЯ", "Волынский" "и "Боровое расположенных в Нижегородской, Карагандинской и Ивановской областях соответственно. Сыворотки крови на наличие специфических антител определяли у животных через 2-3 дня после рождения и затем ежемесячно до 9-мескчного возраста в РТГА. От каждой возрастной группы животных исследовалось по 10-15 проб сывороток крови. Наибольшие титры антител к ПВС обнаруживали в сыворотках крови животных в возрасте 2-3 дня, их среднегеометрические значения достигали от 9,4 до 11,5 log2. Уровни специфических антител максимально снижались у подсвинков 3-4-месячного возраста. В этот период у 5Cf% обследованных животных они не были обнаружены. В 5-7-месячном возрасте у 70-9СЙ животных наблюдалось повышение титров антител к ПВС в сыворотках крови, вероятно это связано с их естественным инфицированием после окончания пассивного иммунитета. Антитела к ПВС в возрасте 9 месяцев не имели 1СЙ обследованных животных только одного хозяйства ("Волынский"), тогда как в двух других у 100% ремонт-

ного мслоднлка в этом возрасте имелись выеспие'уровни специфических антител. В результате анализа полученных результатов было установлено, что длительность персистировси-.ия пассивно приобретенных с молозивом антител к ПЗС у БС& обследованных животных составляет 12-20 недель. В сеязи с этим для изучения антигенной активности вакпин против ПВЕС нами были выбраны подсвинки в Еозрасте 3-4 месяца, содержали? в этот период специфические антитела в низких титрах или вообще свободные от них.

2.4.3. Ант:ггекнал активность эмульгированной и сорбированной вакцин в зависимости от способа введения

Изучение антигенной активности инактивнрованных вакцин проводилось на подсвинках 3-4-месячного возраста в с/к "Туртапский" Нижегородской области. Животные перед иммунизацией содержали антитела к ПЗС в низких титрах ( <5 log2). Вакцины, приготовленные из вируса, обладающего гемагглютинирутцей активностью 10 log2, применяли внутрттмкзечно, подкожно и внутрикожно. На каждый способ введен™ вакцины использовали по 10 еизотных.

Таблица 7

Антигенная активность эмульгированной вакцины в зависимости от способа введения (п=Ю; х+а)

Способ введения * вакцины

Доза (мл)

Среднегеометрические титры антител "(loip)

до

после

знуттпвльпзчно Подколио

Внутриксото

2 2

0,2 0,4

__!?ммуннз адии_1_^(унизадки__

4,5 z 0,31 9,5 - 0,27

Контроль

\

4,6 + 0,37

4,1 * 0,35 4,5 + 0,37

4,9 + 0,43

9,2 ; 0,31

У,7 + С,33 9,6 + 0,33

5,0 + 0,42

Антигенная активность сорбиробанкой вакцины в зависимости ст способа введения (п=10; 1+ш)

Способ введения ! Доза ! Среднегесуетпические титры

вакцины ! (ил) !___антител По^-О

! до "Т после

_____________________________1__^^унЦ^Ыз^__

Внутрнмыпечно 5 4,2 + 0,30 8,2 + 0,20

Подкожно 5 4,1 + 0,25 7,0 + 0,33

Внутрнкокно

0,2 4,1+0,25 6,2+0,13 0,4 4,0 + 0,29 8,5 + 0,23

Контроль - 4,9 + 0,43 5,0 + 0,42

Антигенная активность параовирусних вакцин при внутрикожном • ¡в дозе 0,2-0,4 ил), подксенои и внутримышечном способах иодуни-зацик О^а примерно одинакова <Р >0,05), однако вкутрикозкная инъекция позволяла значк.ельно сократить расход вакцины. Таким образом, в ходе проведенного опыта было установлено, что свиньи облвдагт выраженной иммунологической реактивностью к ПВС при иммунизации кх парэоБ1фусными вакцинами внутрикояным способом.

2.4.4. Антигенная активность аттенуированного штамма И-62

парвов!фуса свиней при аэрозольном способе иммунизации

В опыте использовали еттенукрованный птамм И-82 парвовкруса свиней, прсардзий 65 пассажей в культуре клеток ППК и сессий титр 10 • ЩДдг/ил. Работе проводилась в с/к "Туртапский" Нижегородское* области, где на участке дорадивания был выбран сектор с животными б возрасте 3,5 месяца. Каиерой для аэрозольной вакцинации служило само поыоленпе, его объем составлял 1500 мэ. Аттенукрованный хтгиал парвовирус« свиной пргагеняли езроэольным способом из расчета

т

на I »г5 пе»яг;ения. В момент вакцинации в секторе находилось

512 голов животных. Высокодисперснуп аэрозоль создавали с помощью струйного аэрозольного генератора САГ-1. Для стабилизации аэрозольных частиц в воздухе к вирусной суспензии добавляли глицерин в конечной концентрации ICß. Время экспонирования животных в помещении, где была создана аэрозоль вакцины, составило 40 мин. Сыворотки крови на наличие специфических антител исследовали у 10 животных до иммунизации и через 21 день после нее. В результате проведенных исследований было установлено, что агтенуированный штамм И-82 парво-вируса свиней при аэрозольном способе иммунизации индуцировал образование антигемагглЕТининов у подсвинков в достаточно высоких титрах - от 8 до II logg. Разница между пре- и поствакциналькыми титрами антител в среднем составила 4,6 log2 (Р <0,05). Анализируя полученные результаты можно сделать вывод, что свиньи обладают выраженной иммунологической реактивностью к ПВС при иммунизация itz аэрозолъныя способ«;.

2.4.5. Влияние вида адъгванта на антигенную активность парвовирусных вакцин

Изучение антигенной активности парвовирусных вакцин, содержащих различккз адъетанты, проводили на подсвинках 3-4-иескчного возраста, в сыворотках хррзи которых были обнаружены низкие уровни специфических антител ( <5 logj). В опыте были использованы семь лабораторных образцов вакцин, из них пять с добавлением едъвзантов ВКИЯИ, одна с ГОД адъюзантом и одна с масляным. liait видно из результатов таблицы 9, наибольшей антигенной активностью обладала вакцина с масляным адъггзантсм. Титры антител, вызываемые этой вакциной, г

4-8 раз превышали показатели титров антител, вызываемые вакцинами >

с адксвпятами ВНИлИ (Р <0,05). Антигенная активность вакцин с Г0А-адъпвантсм Выла тагзэ вызэ, чем у вакцин с адъсзанта:ш ВНИЯИ, однако достоверной разтгцы кеяду гэс уровнями антител нэ установлено

Антигенная активность парвовкрусных вакцин в зависимости от вида адъвванта в вакцине (г,= 5; Х+ш)

Бид адъг)ванта ь ! Способ ! ваяцине !введения!

Эмульгированный (минеральное масло и ланолин 1:4)

Сорбированный (ГОА)

Неполный адъювант ВНИЛИ 2310

Неполный адъювант ВНИЛИ 3404

Синтетическое масло Р 3 + 17% ланолина

Синтетическое пасло Щ + 17% ланолина

Минеральное масло БПа-бУ»-17% ланолина

Доза ! Среднегеометрические титтзы

(мл) ! „антител \iogp)___

до ~ Т после _ ! иммуниэауии_ 1_имм\гмизации_

Контроль

в/м 2 <5 9,5 + 0,27

в/к 0,2 <5 9,6 + 0,30

в/ы 5 <5 8,2 + 0,20

в/к 0,2 <5 8,5 + 0,23

в/м 2 7,4 + 0,24

в/к 0,2 <5 , 7,2 + 0,37

в/м 2 <5 7,6 ± 0,40

в/к 0,2 <5 7,4 + 0,40

в /и 2 <5 6,7 + 0,58

в/к 0,2 <5 6,8 ± 0,37

в/м 2 <5 7,2 + 0,37

в/к 0,2 <5 6,6 + 0,40

в/ы 2 <5 7,3 + 0,50

в/к 0,2 6,8 + 0,24

_ • <5

(Р -- 0,05). Среди вакцинных препаратов, содетасацих пднованты ВНИЛИ, наибольшей антигенной активностью обладали вакцины с неполными адъю-вантаии 3310 и 3404. Наименьшей активностью, как и в опыте на морских свинках, обладала вакцина с синтетическим маслом Р 3 в качестве адышантв.

2.4.6. Едякняе количества внтигена на антигенную активность вакцин

В предварительных опытах на лабораторных животных было установлено, что ув&пгчекяо содерпшкя парвосирусного антигена в вая-

шдаах в 15 раз повьзиало их антигенную активность примерно з 2 раза. Далее по аналогичной схеме предстояло изучить актизность этих же вакцин на естественно-восприимчивых тавотных. Работа проводилось в с/к "Искра" Рязанской области на подсвинках, предварительно обследованных на наличие антител к ПЕС и содержащих их в низких титрах (■с 51о<52). Сорбированные и эмульгированные вакцины, приготовленное из вируса, сбладащего гемагглютинирупцей активностью 10 и 14 log, , вводили животным внутримышечно и внутрикогно. На каждый способ введения использовали по 5 свиней.

Таблица 10

Антигенная активность инактивированных вакцин, приготовленных из вируса гемагглютинирупцей активностью 10 (и»5{ Х+ш )

Езкцина

! Способ ! Доза! Среднегеометрические титрь

!введения ! ! ! t I

!

(мл)! !-I i

антител (

)

до

иммтнизяции

после иммуниза!:!'и

•мульгировакная 'орбированнэя

в/м з/к

в/м в/к

Z 0,4

4 5 0,4

ситроль

<5 <3

<5 <5

<5

12,3 ± 0.-Ю 12,2 ±0,20

9,8 ± 0,37 9,8 ± 0,37

Таблица II

Антигенная активность инактивировенных вакцин, приготовленных из вируса с гемагглютинирущей активностью 14 lc^ ( п»5 ! Х+о)

сгкцикз

| _ ! Среднегеометрические титры

Способ | Щ j_ актител( leg ,

введения ! VMJI' I----1---2--------

! Т до ! после

! ! иммунизации ! иммунизации

гмуль гиро ванная в/м 2 <5 13,0 + С, 20

в/к 0,4 « 5 12,С + 0,25

¡орбированная S/M 5 <5 II.7 0,37

в/к 0,4 II,С" 0,-2

контроль - о

примечание: в/м - гнутримнгечно, в/я - гнутр; .'.когно .

Результаты исследований, приведенные в таблицах 10 и II, оказались сходными с данными, полученными на лабораторных животных. Инактивированные образцы вакцин, приготовленные из вируса, облада-сцего гемагглвтикирувщей активность 14 l°g2, индуцировали образование гуморальных антител в титрах в 2 раза выше, чем соответствующие вакцины, приготовленные из вируса с гемагглттинирупцей актиь-ностыо 10 los, (Р > 0,05).

2.4.7. Антигенная активность коммерческих вакцин

против парвовирусной болезни свиней в зависимости от способа введения

Антигенную активность 4-компонентной вакцины ПЛАХ против парвовирусной болезни, лептоспироза, болезни Ауески и хламидиоза свиней изучали в отнопении парЕОвируснсго компонента. Активность вакцины ПЛАХ сравнивали с активностью моновакцины против ПЕБС'по титрам индуцируемых антител при вакцинации животных внутримышечным и внутриколтым способами. В опыте было использовано 30 подсвинков, из них 12 иммунизировали вакциной ПЛАХ, 12 - мсновакциной и 6 голов служили контролем.

Таблица 12

Антигенная активность коммерческих еакции претив ПВЕС (n=6-; z+n)

Наименование EuJTL^ViriVI ! Способ ! (введения! j i Доза U'-rJ ! Соеднегеокотричссг.не thtcü !_~____антител (1о£о) ! до" ~ ~Т после ' иммунизации ! иммунипацик

ПЛАХ в А; в/к 2 0,4 <5 <5 7,9 + 0,49 8,1 + 0,43

Моновакцина в/м в/к 2 0,4 ¿5 <5 8,6 + 0,21 9,3 + 0,36

Контроль - - <5 <5

Примечание: в/м - внутримышечно, в/к - внутрипижно.

:".к1Г.м. Одняго, морские свинки обладают Сользсй илгг.'нолопгаеско:. г-?аг?:':.г!сс:тьп плрвовирусу свине...

Ь. Высокие тктри антител ;: лсрвоыфусу свиней, содезкогиес. у гивотпих перед иммугкгацисй, затрудняют интерпротац;;..

рспультатог папглнлци;:. В связи с этим для изучешх ьчтигенно,'. С::т"гн0С7;'. мкцин требуются глвотше, свободно от специфически;. г::?!:т:-г. ;:-:! содрргад;:е их в низших титра::.

6. А?тс::ул7 . п.аннпГ! птг.мм И-82 парвовирусп свиней, прозюдт:::. п^сспт.ей г 'ультурс клето:: ППК, обладает Бырапсннс^ а.чтш'С1шо,':

шггкгногтьв при пмгугиззци:: г.ивотних аэрозольнта спосооо;...

7. Ассоци'.фовзнняя вшгцина ПЛАХ в отнозен:::: парвов:фусиого компонаггг и монсгткцина против парвов.'фусной болезня свиней обладает сходной антигенной активностью при вакцинации еиеотных внутри-¡/¿.•зочным г. внутиркокшм способами.

8. Антигенная активность инактивировпнных вакцин пробив парво-пфусной болезни свиней пр;; пнутрикошом (в дозе 0,2-0,4 кл), под-гсяюм и внутримышечном (в дозе 2-5 кл) способах пощинпции одинакова, однако внутрикокная тгьекция позволяет сократить расход вак-цинч п 5-12 раз. .

практически?: прадоЕэш

Результаты проведенных исследований использован;: при составлен!:;; "Временного наставления по применению ина.чтипярованной кон-цог1трл7Ч)Р11нной ьакц;:ны против парьоипрусной болезни, лсг.тоспироза, болезни Ауески и хлаицд;;озь свиней" (утверждено ГУВ при Гос:;ом/сс;:;: Сог^ина СССР по продоводьстБОТ >: закупкам 12 1990 г.).

.. Эолитов 0,Ю. Антигеннул а;:т:;: чость г^гцлн про?;:? с.:: -'215 2С-91

2. Ь'олктов О.й., Орлянкин Б.Г. Антигенная активность ::'л-пнм против парвовирусноЯ болезни сзпнеЯ в зависимости ст способ;. лгл-гжкеийя // Бюллетень ВИЗВ. (з печати).

о. Пелитов 0.13. Впутрипоткная иммунизация скипеЛ пар^оьпрус:'.;; :ул вакцина! гл // КАЗШПСГИ - Ингорм. листок - 1992. - ? uj.-il.-il -Я 5-92