Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Аллергическая диагностика при парагриппе-3 телят

"7 И 9 2

I '

В1ПЕБСХИЙ ОРДЕНА. "ЗЙЙ ПОЧЕТА" ВЕТЕРКЗАРНЫй ИНСТИТУТ. И.ШНИ ОКТЯБРЬСКОЙ РЕЗОЖЦЖ

На правах рукописи

Зелёный Игорь Васильевич

УдК 618 :'616.988.7-084:631.15:636.2.053

АЛЛЕРГИЧЕСКАЯ ДЩШЖВД. ПРИ ПАРАГРИШ1Е-3 ТЕЛЯТ

16.00.03 - ветеранарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иглнунологпя

Авто.реферат

диссертации на сопс::ание учёной степени кандидата ветерипарннх наук

Витебск - 1592

Работа выполнена б Кишиневском Государственном Аграрием Укяверститете Республики Молдова

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор

КАРШЕВА А.§.

Официальные оппоненты - доктор ветеринарных наук, старший

научный сотрудник

АБДРОСЕК H.H.

кандидат ветеринарных наук, доцент СШЩА Н.В.'

Ведущее учреждение - У1СРАШСХАЯ 'СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВШШАЯ

' штш:

Защита диссертации состоится

.. ((/• cM&tL 1992 г.

е "ff" часов па заседании специализированного Совета_

К I20.0S.0I в Витебском ордена "Знак Почета" ветеринарном

институте илсяп Октябрьской рСВСЩЗЦИИ

(2I0GIS г.Витебск, ул. 1-я Доватора, д. 7/II)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института Автореферат разослан " " сIS92 г.

Учений секретарь спецкализ ир ова ш шг о Сове та доктор ветеринарных наук,

пг оГ,ессор Арестов И.Г.

>СТШИЕ!

'ГШ

дел

> I. ШЦАЯ ХШЛСШ>ЖТИКА РАБОТЫ

• ' Актуальность. теш» Болезни респираторного тракта у молодняка крупного рогатого скота составляют одну из слозкнейшях проблем дая современной ветеринарии. В связи с'этим организация мероприятий по профилактике, диагностике и ликвидации в хозяйствах различных инфекционных'болезней, особенно вирусной этиологии, до сих пор является наиболее актуальной.

В республике Молдова зкачителъноз распространение получили острые респираторные вирусные болезни телят, протекающие в виде вспышек при комплектовании стада сборни/ поголовьем из хозяйств с различной эпизоотической ситуацией, в том числе и парагрнпл-3.

По данным Е.В.Авдеева и соавт. (1375,1379), Р.Арсова и соавт. (1980), выявление а удаление скрытых вирусоносителей при комплектовании стада позволяет надекно защитить телят от вепшек вирусных респираторных болезней.

Однако, существующие в настоящее время метода исследований не обеспечивают такой возмонности. В этом' отношения аллергическая диагностика является перспективной, так как ока позволяет быстро и непосредственно в условиях производства прокз вести кассовое обследование животных, прогнозировать их благополучие по инфекционным болезням.

В связи с 'тем, что в нашей стране аллергическая диагностика острых респираторных вирусных болезней не разработана, нами проведены исследования по приготовлен:® л испытании аллер^ гена для выявления телят, инфицированных вирусом парзгршша-3.

Дель работа,. Разработать метод приготовления парагрпшоз-ного аллергепа посредством "щадацей" анакгавадаи вируса пара-

гриппа-3 электроишульснш разрядом, использовании полученного аллергена -для выявления состояния сенсибилизации и егтгсщи-рованностд животных вирусом оарагрипяа-3.

Задачи исследований:

а) изготовить экспериментальные полупроизводственные образцы электроимпульсной установки и камера енсокого давления для инактивации вируса иарагрипла-3, фильтрационную установку дая его концентрации;

б) разработать и предлоидть оптимальные режима инактивации вируса гшраграпда-3 электроипульснши разрядами, установить достоверные тесты'контроля степени инактивации;

в).приготовить посредством электроимпульсных разрядов парагришгозный аллерген, провести его «Зиояогическую оценку;

г) разработать.и предложить оптимальные схемы искусственной сенсибилизация лабораторных зкивотных и телят вирусом пара-грилпа-3, методы их контроля;

д) изучить возможность аллергической диагностика состояния искусственной сенсибилизации морских свинок и телят, экспериментальной шйлцированноетя их вирусом парагршша-З;

е) изучать активность и специфичность парагриппозного аллергена на спонтанно больных телятах паратошпом-З в производственных условиях.

Научная довдзт. Ъпервые выявлены режимы инактивации культуралького вируса парагршпа-3 посредством электроимпульсных разрядов. Разработаны тесты контроля инактивации, определены оптимальные схемы сенсибилизация-вирусом парагриппа-3 лабораторных кивотиых и телят. Установлена высокая активность я специфичность препаратов, приготовленных электр оишульсныш. разрядами, для вгявлекня сенсибилизированных вирусш парагрип-

па-З животных (морских свинок, телят), а также экспериментально и спонтанно инфицированных вирусом иарагриппа-З телят в ■ зроизводетвенных условиях.

' Практическая ценность работы. Для эффективного разрушена вируса иарагриппа-З и экстрагирования из него биологически жтивного комплекса рекомендуется использование 30 электроям-[ульснкх разрядов при напряжении тока 3000 Б, энергией 6400 Jts, роизводикнх в герметической камере высокого давления.

Предлагается способ получения аллергена иарагриппа-З из нактивированного электрокмиульсныыи разрядами вируса парагрип-а-3, использование его для аллергической диагностика эхспера-знтальноЁ и спонтанной инфекции телят.

Аппобзция работа. Основные положения диссертационной рз-)ты долонены на научно-практической конференции "Научно-тех-гееские проблемы повышения эффективности сельскохозяйственно производства" (Кишинев, IS84)., на Первом Всесоюзном сове-нш "Применение физического а химического мутагенеза в сель-ом хозяйстве" (Кишинев, 1987), на" Третьей Всесоюзной конйе-. нции "Научные основы технологии промышленного производства геринарннх биологических препаратов" (Москва, 1987), Ученнх зетов ветеринарного факультета ГАУ (1983, 1985, 1986, 1987), ;ширекнш заседании сотрудников кафедры эпизоотологии (1989).

Реализация результатов исследования. Натериалн диссертации ой -работы вошш в отчеты о научно-исследовательской рабо-кафедры эпизоотологии Кишиневского Государственного агро-верститета по теме.

Проведен научно-цроизводствешшй опыт по выявлению спон- ' но инфицированных парагриппом-З телят с помощью внутрисог.-аллергпческой пробы в производственных условиях.'

~в -

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 статей.

Объем.и структура диссертации. Диссертация изложена на 161 странице машинописного текста, иллюстрирована 13 рисунками, 21 таблицей и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы (173 источника, аз них 52 иностранных).

На зазиту выносятся следующие положения:

а) режимы инактивации и экстрагирования биологически активного комплекса культурального вируса парагриппа-3 телят посредством электроимпульсных разрядов в камере высокого давления на экспериментальной полупроизводственной электроишульской установке; - '

б) биотехнология приготовления и контроля парагриппозногс аллергена с использованием физического фактора инактивации вируса элеятрошшульснвди разрядами;

в) схемы искусственной сенсибилизация морских свинок и телят вирусом парагршша-3, методы контроля аллергизации организма этим вирусом;

г) результаты испытания парагрзшпозннх аллергенов ддя выявления искусственной сенсибилизации морских свинок и телят вирусом парагршша-3, а такле экспериментальной и спонтанной шйяцированностя телят.

2. СОБСТВЕННЫЕ ЖС13Д0ВАНИЯ: • 2.1. Материал а метода исследования

Работа выполнена в 1978-1291 г.г. на ксюедрэ эпизоотологии Знилюзояаго сельскохозяйственного института, в Республиканской

ветеринарной лаборатории и"учхозе "Криулчны", совхозе "Оницка-ны" Криулянского района республики Молдова.

В экспериментальных (лабораторных) и производственных условиях использовано 2454 головы телят, 420 морских свинок и 300 белых мышей. Для ретроспективно® диагностики исследовано 1678 проб сывороток крови.

Для приготовления иарагриппозного аллергена использовали культуралъный натлзннй и концентрированны!! вирус парагриппа-3 штамма -4, выращенный в культуре клеток почки эмбриона коровы. Репродукцию вируса проводили на первично-трипсинизиро-езнной культуре клеток почки эмбриона коровы (НЭК) по методикам, составлению,! сотрудниками лаборатории культур тканей и питательных сред ВЮМ.

Концентрации вируса проводила с использованием полиэтилеп-глжоля-6000 (ПЭГ-6000) или ультрафильтрацией.

Промышленность нашей страны не выпускает электроимпульс-них установок для инактивация инфекционных свойств вируса. Поэтому нами были сконструированы полупронзродственные образцы электроилпульсной установка и камеры высокого давления.

. 3 42 опытах по определению оптималышх ре;-:азлов инактивации вируса парагрипиа-З электротлпульсннма разрядами применялось различнее количество разрядов - 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35.

Тестами контроля инактивации вируса служили - отсутствие ЦПД в культуре клеток, а' тачже отрицательная реакция гемад-сорбцип при наличии гемадсорбции в культуре клеток, зараженной исходными образцами вируса.

Парагрячшознне аллергены готовили из натизкого культураль-

п —7 5

ного вируса парагритша-3 с титрами 10~ТЦД5цдш-1О ' ^50/мл' г таете из концентрированного пмиэтдлекглпколем-бООО пли

удьтрафильтрацией вируса с титром Ю.^ТДПддДщ.

Исследование парагршпозных аллергенов на стерильность осуществили путем посева их на питательные среды: бульон п агар Хогтингера, Сабуро и Китт-Тровди.

Безвредность препарата1определяли путем введения его белым мышам и телятам.

Активность парагрнплозного аллергена определяла на морских свинках а в серологических реакциях.

Сенсибилизация морских свинок проводилась натпвнш куль-туральным вирусом парагршша-З (титр ХО^'^ТЦД^ДуР по схеме приведенной в таблице-1.

Испытание активности и специфичности парагряппозного аллергена проводилось 'на 39 телятах 2,5-3-месячнсго возраста, экспериментально сенсибилизированных вирусом парагриппа-3 по схеме приведенной в таблице 2.

Внутрикоаная аллергическая проба проводилась через 35 дней от начала сенсибилизации и учитывалась через 3, 9, 12, 24, 48 и 72 часа.

Изучение активности и специфичности парагрдппозного аллергена проводилось также на спонтанно больных телятах 2,5-3-месячного возраста.

Подопытный телятам в 1-10 день болезни с диагностической целью вводили внутриконно парагрипдозннй аллерген в дозе 0,2 мл. После исчезновения клинических признаков болезни с II по 20 день вводили аллерген на противоположной стороне шеи в тех не дозах. Одновременно отбирали .пробы крови для серологического исследования.

Результаты кожной аллергической реакции у морских ов"нок .в зависимости от способа сенсибилизации их вирусом парагриппа-3

!!Й : Кол-во груп-ыоро-пы :ких :свинок :в труп ; ле

Способ сенсибилизации

ПредельтПоказатели конной аллергической реакции на меоше внутри-ныо тит4_кожного введения парагриппозного аллергена_

агглютй^—_Через 84 часа_|_Через 48 часов

ионов ¡Размер '.Характер ¡Утолщение по РТГА.'отечиооти: воспали-¡кожной ( Щ р): (им) :тельной ¡складки в « ¡реакции ¡сравнении

: : ¡с исходи.

Размер ¡Характер¡Утолщение отечности¡воспали-¡кожной, (мм) ¡тельной ¡складки в ¡реакции '.сравнении ; ¡о исходи.

Я-

м2 н

я «

о «

о

и J и

О?

м нТ

Чй а ^ О. (Ч

м

14 Введение вируса по 2 мл через 7 дней

35 Введение вируса по I ил в I, 4, 7, 10 дни

23 Введение вируса по 0,5, I, 2, 2 мл через 7 дней

14 Введение культураль-ной жидкости (без вируса) по 2 мл через 7 дней

5x6-7x9 ГО

I 5x7-8x10 ГО

8x11-13x16 ГОБ I 9x12-14x17 ГОБ

6x7-8x10 ГО

I 7x8-10x12 ГБО

признаки воспалительной реакции отсутствовали

Обозначение: Г-гинеремия, О-отечнооть, Б-болезне^нность

1,5

Таблица 2

Зависимость показателей коиной аллергичеокой реакции, титра специфических гемагглютининов, реакция торможения, миграции лейкоцитов (РТМЛ) и теота повреждения нейтрофилов (ПЛН) у телят экспериментально сенсибилизированных вирусом

парагриппа-3 телят

¡.й

группы

телят

Кол-во телят в груп не

Способ сенсибилизации телят

.'Показатели кон- ^Средне-.' ;ной реакции Ггсоиет-:

:чарез 24:через481Жео~ :

гаппи • ,,яг,п-в .кии

Показатели

ППН

РТМЛ

чаоов ' чаоов :До оен.'Дни исследо

чаоов . часов ;1Итр аитоибили; вания

:эации • •-■ *

¡Величина охечноогтител . :ти (мм) . . :( • ¡Утолщение кожной,- с . ¡складки (мм) : ;

До сен-?Дни исследо-

сибили-г вания_

зации :

14 :бо 71

о

<в

я к

Рн

а к

о «

о с

к

ет «

и

о р-

е-1 и о . м

15

Вирус интраназально 1.3,5,7,10 дн. по 3,3,5,5,7 мл

Вирус подкожно: 1.3,5,7,10 дн. по 3,3,5,5,7 ил

Вирус внутривенно: 5,7,10 дн. по 3, 3,5,5,7 мл.

Культуральная кидкосгь

(без вируса) по схеме Кожная аллергич.

1-3 подопытных гр. реакция отсутст.

22 х 25 25x27 . 6 0,07

2,0 2,5

16x19 18x20 ■ 5 0,05

1,5 2,0

29x32 32x35 7 0,05

2,5 3,0-

0,23 0,07

0,23 0,07

0,30 0,15

0,46 0,75

0,65 0,70 0,50 0,70

0,60 0,67 0,42 0,70

0,05 0,05 0,06 0,05 0,07 0,07 0,75 0,75 0,05 0,'05 0,74 0|?5

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Концентрацм вируса парагриппа-3 при изготовлении аллергёна

Наиболее перспективным методом концентрация вируса по икеннзо многих исследователей (С.Ю.Клзэиник, Б.М.Мчедаипгаили и пр.,1975) латается ультрафильтрационный. Этим методом мы , в основном, и концентрировали вирусодеряащуп суспензию. Нами быта сконструирована и изготовлена экспериментальная йильтрацион-13я установка, которая состоит из прибора фильтрации, воздуш-¡ого фильтра, насоса и шлангов. До начала работы прибор йяль-■рзцик стерилизовали раствором тишертиояята в разведении :5000 в течение 18 часов. Ультрафильтр стерилизовали водным аствором 3% перекиси водорода в течение 18 часов. Воздушный мьтр-в автоклаве в течение 1,5 часа.

Качество фильтрации определяли лабораторно, титрацией слученного концентрата и наивного вируса методом десятикрат-IX разведений л заражения пробирочных культур клеток почки

ту С

¡брпона коровы. Титр вируса повышался с 10" ' ТД%о/га д0

2.2.2. ¡-шактивация вируса парагрзшяа-З электро-пшудьснши разрядами для изготовления

, аллергена

В настоящее зрсг:я прог,мшгенность ке выпускает электроим-ьскые установки и галеры высокого давления, которые бы до-гяли производить элехтронипульсные разряды з впруссодержа-хидкостях с получать активные биологические прэпараты.

- l'¿ -

Нами была разработана и изготовлена электроимяульская установи и камера высокого давления дая инактивации вируса.

В разрядную камеру высокого давления вносила 120-140 мл

П С

культурального вируса парагриипа-3 с титром 10" ' Tií%oAw Аппарат подключали, к источнику высокого напряжения. В серии опытов провели различное количество - 5, 10, 15, 2G, 25, 30, 35 разрядов. Инактивации вируса во всех опытах контролировал! следующими тестами: отсутствие 1Щ в субкультуре клеток почк! эмбриона коровы, отрицательной реакции геыадсорбцш с вирусес двриащей жидкостью и реакции гемагглютинацш.

В результате 42 серии опытов по разрушению вируса пара-грашза-3 было установлено, что инактивация вируса в камере вы сокого давления достигается после 30 элекгроишульсных разрядов энергией 6400 Дес при напряжении 3000 в.

2.2.3. Биологическая характеристика аллергенов

парагриша-^3, полученных электроимпульсныш разрядами

Каадая из 58 серий препаратов, приготовленных из вируса парагриппа-3 инактивированннх электроимпульсннма разрядами проверялась на активность и специфичность, стерильность и безвредность. У отдельных серии изучался и химический состав.

Стерильность всех серий аллергена проверяли путем посеЕа его на бульон и агар Хоттингера, Сабуро и Китта-Тароцца. Пробирки выдерживала в течение 10 дней в термостате при 37°С. Посевы на агаре Сабуро выдергивались при комнатной температуре. Реет микрофлоры д грибков на питательных средах зо всех пробпр кзх отсутствовал.

.Безвредность аллергенов проверяли путем внутрибршштного его введения селил глышаи в дозе 0,5 мл, а тагепе телятам под-

кокно в дозе 5 мл. За подопкгныг/н алвоткымп зела клиническое наблюдение в течение 20 дней.

3 результате опытов, проведенных на белых мышах и телятах, установлено, что все серии аллергенов безвредны.

Активность парагриппозных препаратов проверяли путем выявления аллергии у экспериментально сенсибилизированных морских свинок. Состояние сенсибилизации определяли знутри-кояной аллергической пробой внугрисердечнш введением разрезающей дозы-антигена (вируса ПГ-З), пспользуеюого для сенсибилизации, методом пассивного переноса Т~лим£оцятоз.

.В результате опыта было установлено, что оптимальной схемой сенсибилизации морских свинок является внутрибршинное введение I мл куяьтурального вируса в татре Ю^'^ТЦД^д^ в I, 4, 7, 10 дни.

Препараты, приготовленные аз вируса дарагршша-З, концентрированные путем ультрасолльтрацяи, являются более активными по сравнению' с аллергенами, приготовленными другими методами.

2.2.4. Испытание активности и специфичности пара-гриппозных аллергенов па телятах экспериментально сенсибилизированных вируса) парагршша-З

Результаты проведенного опыта (табл. 2) свидетельствуют о том, что наиболее четко аллергическая реакция проявлялась у телят 3-й подопытной группы, сенсибилизированных внутрц-эекннм введением вируса. У этой группы телят полсг-нггелъная коякая аллергическая реакция была установлена на 7 день от начала сенсибилизации н сохранилась 50 д-ай (срок наблзденняО,

Отечность коне сопровождалась рядом признаков воспалительно! реакции, гиперемией и болезненностью, а толщина кожное складки на месте введения аллергена превыпала толщину складка нормальной кока на 2,5 цц.

Более слабая внутри* окная аллергическая реакция отмечалась на телятах, сенсибилизированных вирусом парагриипа-З, штраназально. Толщина конной складки б I.. зте введения гялер-гена превышала толщину кокной складки нормальной коки на 2 ш.

При сенсибилизации телят вирусом парагриппа-3 подконнкк метод см реакции бнли менее выражены.

Проявление аллергических реакций начиналось на 14-18 часу с момента введения аллергена, достигала глаксшука к 48-алу часу, несколько снизалось к 72-ому час,/, а затем к 80-36-шу часу исчезало.

Из вниеизлскенного мсано сделать вывод, что лучгшм способом сенсибилизация телят является внутривенное введение вируса параграпла-З. Это подтверждают четкие ахчерглческие реакции с ярко выракенккм воспалительным комплексом.

2.2.5. Изучение активности и специфичности вара— гриппозного аллергена на спонтанно больных парагрипп к.5-3 телятах

По данных-; ряда исследователей (0.А.Васильева с соавт., 1977; ИЛ1.Архакгельск2й с соазт., 1979 и др.) сенсибилизация оргакизг-а при некоторых ик£екцлях оиереглает появление в крови специфических антител.

В связи с этп.: гл прозелл исследования по установлению сроков зЕявлендя: аьгехпяеасого состояния у больных пара-

гриппом-3 телят с поиощыо концентрированного аллергена, приготовленного электрошпульсными разрядами.

В опытах на телятах наг.;и установлено, что при аллергическом исследовании у телят 1-5 групп в первые 5 дней болезни конная аллергическая реакция на месте введения препарата отсутст-ствовала. Затем количество положительно реагирующих животных, по мере увеличения продолжительности бсшезни начало возрастать. На 6-IO день болезни поетгательная кокная реакция была зарегистрирована у 185 телят, ка 11-15 день - у 60^, на 16-20 день-у 821, что свидетельствует о высокой его активности после развития в организме состояния сенсибилизации, вызванной вирусом парагриппа-3. .

3 контрольной группе аллергическая реакция не была зарегистрирована, что свидетельствует о высокой специфичности ал-чергена..

Из приведенных данных опытов видно, что шрагрнпдознш ¡ллергеном представляется возмошшм выделить 71% серопозитяз-1ых телят.

2.2.6. Испытание активности и специфичности парагрял-позного аллергена для выявления в стадах, неблагополучных по тарагршпу-3 ТОЛЯ Т—2ИТ>уС С— носителей

, Большой интерес представляют аллергические исследования, эзвшшвдие быстро :х непосредственно з хозяйствах-поставках зред завозом телят на комплексы выявлять вирусспасителей, зэтоыу перед камл была постаатека цата - испытать пг;п?отсчлен-1й Hc.:viii аллерген при парагрилпе-3.

3 опытах на 1462 телятах установлено, что при аллергии:-с-

коп ксеной пробе было выявлено 231 инфицированное парзгрип-погл-З кнвотное, что составило 15,8% от поступивших в хозяйство.

В ряде груш телят, поступающих в хозяйство, наблюдали более частые совпадения аллергических данных с результатам РДЭ. В I группе положительные показатели в КЗ? составила 7,S£, при koshok аллергической пробе 6,2^. В 4 и 5 группе по реагировало пачонигельно 11%, а назван аллергическая проба выявила 10,1$ пояснительно реагирующих. В 6 группе по РИФ реагировало 22,85?, а по конной аллергической пробе - 21,4р.

Однако во 2 л 3 группах отмечены больше расхождения. Зо 2 группе по К® реагировало 24,6^ животных, по аллергической пробе всего лишь 11,6^, в 3 группе соответственно 42,1% и 21,3>'. Эти расхождения результатов объясняются наличием свелсе-пнфицнрова>шнх животных не прошедших сенслбвлззацпа.

Частые случаи совпадения реакций об oía методов дпагности-х-си свидетельствует о высокой эффективности аллергической диагностики. Её доступность 'л быстрота дает возмоглиость проводить прогностические исследования по благополучно когллектуацих групп.

3 Ы 5 О д Ы

1. Слец2ф^чесш1й ла_>.гриппозный аллерген получен в лабораторных условиях с дшощыа электропмпульскых разрядов, энергией в 6400 Ja:. Установлено, что он обладает высокой активностью я спец11ф::чкостьа з отношении эксперт7,ментально секснби-лиз:.тозан.чкх вгруса: парагршша-3 ггпзоткых, а такие спонтанно бс.:ьных парггриппсм-З телят.

2. Выявление и лзсляцгя з хозя^ствах-пеставднхах :*_зот-:-:ы::-2::русскгсдс£лег гарагрпг-а-З с яксзьэ ?.szboZ а.ухршчес-

пробы обеспечивает профилактику парагриша-3 при комплектования специализированных хозяйств "сборным" поголовьем телят.

3. Наиболее оптимальная сенсибилизация вирус0.1 парагрип-

па-3 морских свинок достигалась посредством 4-кратного внутри-

брюшинного введения культурального вируса параграппа-3 {титр 7 Ч

10" • "Щ^боДд) в объеме I мл на I, 4, 7 и 10 день, телят -посредством 5-кратного внутривенного введения вируса в I, 3, 5, 7 я 10 дни.

4. У сенсибилизированных морских свинок наиболее четкие кокные аллергические реакции наблюдались через 24 часа после внутршсожного введения 0,2 мл аллергена и характеризовались образованием разлитой воспалительной отечности размерил 8x11-13x16 ш, утолщением коккой складки на 1-1,5 мл в сравнении

с исходной; гиперемией и болезненностью кожи на месте введения аллергена, которая исчезала через 72 часа.

' 5. У сенсибилизированных телят кожная аллергическая реакция появлялась через 12 часов после внутрикокного введения аллергена в дозе 0,2 мл, достигала своего максимального развития к 48 часам, а затем постепенно исчезала к 72 часам. В пе-жод максимального развития коаной реакции отмечалось образ о-йние разлитой воспалительной отечности -размером 32x35 ш, •толщением коиной складки на 3 ш а более.

6. У контрольных (не сексиб-щызированннх) иивоткых на есте введения парагриппозного аллергена, а таете у сенсибц-язпрованных нивотных ка месте внутрико:шого введения яульту-альной жидкости, подвергшейся воздействию электрсцглпудьспых ззрядов, воспалительная реакция отсутствовала.

7. Установлена прямая корреляция ыеэду уровне:.: секепбн-1зацла организма и вграгенкостью хсеной аллергической рс-з:;-

ции на шрагрдппозный аллерген, титров геыагглотишшов, индексом ППН и показателями РВ.Ш. Аллергическая проба дает возможность выявить спонтанное заболевание парагриппоы-З - у 64,8^ телят с 6 дня болезни до 62 дня (срок наблюдения).

8. В производственных условиях метод аллергической диагностики парагриппа-3 испытан на 1462 телятах. При этш установлено, что до 15,8$ телят, поступающих н.; комплексы специализированного предприятия по цроизводству говядины, являются вирусоносителяш парагриппа-3.

Практические предложения

Для внедрения в производство предлагается:

1. Оптимальный режим воздействия электрошлпульоных раз-, рядов на вирус парагриппа-3 с целью инактивации и экстрагирования биологически активных компонентов в специальной герметической какере високого давления 30-тыэ электроиыпульсними разрядами энергией в 6400 Да. "

2. Способ получения активного и специфического парагрип-позного аллергена на основе препарата, инактизярованного электрошпуяьсныш! разрядами.

3. Аллергическая диагностика парагриппа-З телят-вирусоно-сителей осуществляется посредством внутр:1кокного введения парагршшозного аллергена в дозе 0,2 ид. У инфицированных телят через 24-48 часов на «есте введения аллергена появляется разлитая воспалительная отечность размером 11x13-22x24 ш, утолщение коляой складки на 1,5-3,5 мм с гиперемией и болезненностью в первые 24 часа. 7 здоровых телят реакция отсутствует«

Опубликованные статьи

. Зелёный И.В., Чикала Н.И. Парагрнпп-З телят в учхозе "Криу-хяны" //Пути дальнейшей гштенсификации сельского хозяйства Молдавской ССР: Тезисы докладов республиканской научно-производственной конференция, - Кишинев, -IS8I, -G.144-145. Карышева А.Ф., Зелёный И.В., Шербан Е.К. Ретроспективная диагностика парагриппа-3 //Пути дальнейшей интенсификация сельского хозяйства Молдавской ССР: Тезисы докладов республиканской научно-производственной конференции. -Кзшнев, -1981. -С.143-144.

Зелёный Й.В., Егаради Дигамбай Инактивация вируса парагриппа -3 телят алектрошлпульснкмн разрядами //Научно-технпчес-кае проблемы повышения эффективности сельскохозяйственного производства. -Кишинев. - 1984. -C.I59-IGÛ. Нгаради Дигамбай, Зелёный И.В. Испытание препаратов, полученных электроямпульсвыга разрядами для диагностики парагриппа-3 телят//Научяо-т8хническпе проблемы повышения эффективности сельскохозяйственного производства. -Кишинев. -IS84. -С.156-157.

Зелёный Й.В., Дигамбай Н., Карыаев C.B. Использование физических факторов при изготовления антигенов для диагностики и профилактики вирусных инфекций янвотннх //Примелете физического и химического мутагенеза в сельском хозяй-;тве: Тезисы первого Всесоюзного совещания. -Кллпнев.-1987. - С.123-124..

'.арышева А.Ф., Спатарь <5.3., Дигамбай Нгаради, Заленый Л.З. ркготовление и испытание инактизпрованной бавакцшш прост парагриппа-3 и инфекционного ракотрахепта //Вопросы

шмевеиоакацщ и научно-обоскованкого ветеринарного обслуживания промышленного кивотнозодства: Тезисы докладов конференции. -Кишинев. -1987. -С.17.

7. Карыаева А.Ф., Спагарь S.B., Дигаибак Егаргди, Зелёный К.В. Использование лазерного излучения и злектроапульсного разряда при изготовлении инактивнрованной бивалентной вакцнкв против парагриппа-3 и инспекционного ринотрахепта крупного рогатого скота //Научные основы технологии приименного производства ветеринарных препаратов: Тезисы докладов третьей Всесоюзной конференции. -М.: -1987. -С.175-176.

8. Зелёный И.В. Экспериментальная аллергия при парагпипне-3. //Диагностика и специфическая аройилактша инфекционных болезней животных и птиц. -Кишинев. -1989. -С.17-20.

9. Зелёный И.В. Приготовление и испытание аллергена для выявления парагршпа-З телят в эксперименте и в производственных условиях// Диагностика и специфическая-профилактика инбек- . ционннх болезней гсивбтных и птиц. -Кишинев. -1989. -С.20-24.