Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Аллергическая диагностика микобактериальных инфекций крупного рогатого скота

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ им. Я. Р. КОВАЛЕНКО (ВИЭ8)

РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ

НАУК (РАСХН)

На правах рукописи

НАЙД\АНОВ Али Хусинович

АЛЛЕРГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА МИКОБАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

¿Москва — 1993

Работа выполнена в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики туберкулеза и паратуберкулеза Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко, в лаборатории иммунохимии и имму-ногенетики Центрального научно-исследовательского института туберкулеза АМН Российской Федерации.

Научные консультанты: доктор ветеринарных наук, профессор ОВДИЕНКО Н. П., доктор медицинских наук, профессор ЛИТВИНОВ В. И.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор БУРЛАКОВ В. А., доктор ветеринарных наук, профессор КАССИЧ Ю. Я., доктор медицинских наук ЧЕРНО-УСОВ А. Д.

Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных.

Защита диссертации состоится «-(5"* • . . 1993 г.

в 14 час. на заседании специализированного совета Д.020.28.01 по защите диссертаций па соискание ученой степени доктора наук при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я- Р. Коваленко: 109472, Москва, Кузьминки, ВИЭВ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ.

Автореферат разослан « ^ » . ЛЛХХЯ. . . 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат ветеринарных наук

Ф. Г. Терешков

1. ВВЕДЕНИЕ

1.1. Актуальность проблемы. Проблема микобактериальных инфекций — одна из важнейших в ветеринарии и медицине. При значительной распространенности туберкулеза крупного рогатого скота, наличии паратуберкулеза животных, отмечается рост других микобактериальных инфекций, обусловленных разными-видами атипичных микобактерий.

В патогенезе всех микобактериальных инфекций весьма существенное значение аллергии. При диагностике туберкулеза и паратуберкулеза имеются две основные и противоположные проблемы: выявление «параспецифических» реакций в благополучных хозяйствах, и недовыявлсние больных животных в неблагополучных по туберкулезу и паратуберкулезу хозяйствах.

В целях повышения эффективности диагностики микобактериальных инфекций необходимо более глубоко изучить причины этих явлений, усовершенствовать существующие, изучить и предложить новые методы дифференциации «параспецифических» реакций и выявления «энергичных» к внутрикожному введению туберкулина животных.

Для дифференциации специфических и параспецифических реакций одновременно вводят несколько аллергенов или несколько доз одного препарата, проводят переисследование реагирующих на туберкулин животных с применением монетеста или симультанной пробы с сенситинами из микобактерий разных видов. Их значение не оспаривается и в настоящее время, однако накопились факты, характеризующие недостатки этих методов.

Несмотря на большое число опубликованных работ, остаются предметом дискуссий методы выявления состояния микобактери-алыюй аллергии, ее патогенетическая роль . Неясен вопрос о влиянии одновременной постановки нескольких проб на интенсивность внутрикожной реакции. Противоречивы данные о влиянии повторных исследований на ее выраженность. Еще сложнее вопрос о возможности изменений характера интенсивности реакции при повторных введениях туберкулина в одно и то же ме^ сто. Этот вопрос имеет особое практическое значение, так как животных неблагополучных по туберкулезу и паратуберкулезу стад исследуют неоднократно.

Животноводство нашей страны преобразуется. С одной, стороны— сохраняются крупные животноводческие комплексы и .фер>

мы, с другой — образуются сравнительно мелкие арендные, подсобные, акционерные и фермерские хозяйства.

В этих условиях необходимо уточнить значение и подобрать комплекс различных диагностических исследований для контроля за благополучием стад и оздоровления неблагополучных ферм от туберкулеза и паратуберкулеза крупного рогатого скота.

Все вышеизложенное свидетельствует об актуальности дальнейшего совершенствования системы диагностики микобактери-альных инфекций.

1.2. Цель и задачи исследований. Основной целью проведенных исследований являлось изучение особенностей проявления гиперчувствительности замедленного типа при микобактериаль-ных инфекциях разной этиологии и совершенствование системы аллергической диагностики туберкулеза и паратуберкулеза крупного рогатого скота.

В число поставленных задач входили:

— изучение белкового и гликопротеидного состава ППД-ту-беркулинов для млекопитающих и для птиц, комплексного аллергена из атипичных микобактерий и синтетического туберкулина;

— морфологическая характеристика местной реакции на внутрикожное введение ППД-туберкулина для млекопитающих, ППД-туберкулина для птиц и KAM у больных туберкулезом или сенсибилизированных атипичными микобактериями животных;

— влияние многократных повторных, внутрикожных введений туберкулина на проявление реакций клеточного и гуморального иммунитета у крупного рогатого скота;

— влияние на интенсивность проявления реакций при одновременном внутрикожном введении нескольких аллергенов или ППД-туберкулина для млекопитающих в разных разведениях;

— изменения интенсивности проявления реакций на внутрикожное введение туберкулина для млекопитающих при повторных исследованиях крупного рогатого скота;

— зависимость показателей выявления реагирующих животных от дозы ППД-туберкулина для млекопитающих;

— выявление гиперчувствительности замедленного типа методом усовершенствованной офтальмопробы;

— влияние тубазида на проявление аллергических реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих;

— сравнительное изучение методов выявления больных туберкулезом животных, не реагирующих на внутрикожное введение туберкулина;

— изучение возможности использования «booster effect» («эффекта повышения чувствительности к туберкулину») для выявления больных туберкулезом животных;

— применение БЦЖ-теста для выявления животных в состоянии «инфратуберкулиновой» или «латентной» аллергии;

2

— совершенствование методов дифференциации специфических и параспецифических реакций на туберкулин для млекопитающих;

— изучение возможности дифференциации поствакцинальных реакций на туберкулин у иммунизированного вакциной БЦЖ крупного рогатого скота;

— совершенствование аллергической диагностики паратубер-кулеза, крупного рогатого скота; , .. ,

— коррекция комплекса методов диагностики, в зависимости от эпизоотического статуса стад крупного рогатого скота.

1.3. Научная новизна. Изучен белковый и гликопротеидный состав ППД-туберкулинов для млекопитающих и птиц, комплексного аллергена из атипичных микобактерий и синтетического туберкулина «Интрамакс» (Франция). Выявлены особенности проявления аллергических реакций при микобактериальных инфекциях разной этиологии. Впервые дана сравнительная морфологическая характеристика местных реакций на внутрикожное введение ППД-туберкулинов для млекопитающих и птиц, комплексного аллергена из атипичных микобактерий у больных туберкулезом и сенсибилизированных атипичными микобактериями животных.

Впервые изучено влияние на интенсивность проявления внут-рикожиых реакций одновременного введения нескольких аллергенов и ППД-туберкулина для млекопитающих в разных разведениях, влияние многократных повторных внутрикожных введений туберкулина на проявление реакций клеточного и гуморального иммунитета у крупного рогатого скота. '

Показана зависимость выявления реагирующих животных 'и интенсивности проявлений внутрикожных реакций от дозы ППД-туберкулина для млекопитающих. Установлено влияние тубазида на проявление аллергических реакций.

Впервые изучены возможность использования «booster eftecf» («эффекта повышения чувствительности к туберкулину») для выявления больных туберкулезом животных и возможность использования БЦЖ-теста для выявления животных в состоянии «ин-фратуберкулиновой» или «латентной» аллергии. Показана возможность применения ИФА в целях определения уровня ' антител при дифференциации специфических и параспецифических- реакций на туберкулин. Установлена возможность дифференциации поствакцинальных реакций на туберкулин у иммунизированного вакциной БЦЖ крупного рогатого скота. Усовершенствована методика применения симультанной пробы. На авторские свидетельства «Способ дифференциальной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота» и «Способ диагностики туберкулеза крупного рогатого скота» получены положительные решения ВНИИГПЭ от 30.XI.90 г. и 24.07.92 г.

Усовершенствован метод аллергической диагностики парату-беркулеза крупного рогатого скота. ' > .

1.4. Практическая ценность. Результаты исследований учтены при разработке Инструкции о мероприятиях по профилактике и ликвидации туберкулеза животных (утверждена Главным Управлением ветеринарии в 1988 г.), Наставления по диагностике туберкулеза животных (1986 г.), проектов Инструкции о мероприятиях по профилактике и оздоровлению от паратуберкулеза животных, Наставления по диагностике паратуберкулеза животных, Наставления по диагностике туберкулеза животных, представленных Главветупру МСХ РФ (1992 г.).

1.5. Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета ВИЭВ (1980—1991 г.); на Всесоюзной научной конференции «Состояние и перспективы научных исследований по диагностике и профилактике туберкулеза и бруцеллеза и мерам борьбы с этими болезнями сельскохозяйственных животных» (Омск, 1980); на научно-методическом семинаре «Методы и системы оздоровления хозяйств от туберкулеза животных с учетом эпизоотической ситуации, зональных особенностей ведения и специализации животноводства» (Москва, 1983); на Всесоюзной научно-методической конференции «Состояние и перспективы научных исследований по туберкулезу сельскохозяйственных животных» (Новосибирск, 1985), на III республиканской научно-практической конференции «Современные проблемы профилактики зоонозных болезней и пути их решения» (Гродно, 1987); на 1-й Всесоюзной конференции «Проблемы патологии и экологической взаимосвязи болезней диких теплокровных и сельскохозяйственных животных» (Новосибирск, 1988); на совместной конференции Всесоюзного и Республиканского медицинских обществ фтизиатров (Самарканд, 1989); на научной конференции, посвященной 70-летию лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики туберкулеза и паратуберкулеза ВИЭВ (Москва, 1992).

1.6. Публикация результатов исследования. Основные научные положения и практические рекомендации изложены в 36 научных статьях, опубликованных в трудах и бюллетенях ВИЭВ, журнале «Ветеринария», журнале «Проблемы туберкулеза», Материалах Всесоюзных научных конференций и в других научно-производственных изданиях.

1.7. Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые на защиту:

— результаты изучения белкового и гликопротеидного состава ППД-туберкулинов для млекопитающих и птиц, KAM и синтетического туберкулина «Интрамакс» (Франция);

— влияние многократных повторных внутрикожных введений туберкулина на проявление реакций клеточного и гуморального иммунитета у здоровых животных, и их десенсибилизирующее воздействие на больных туберкулезом коров;

— сравнительная характеристика эффективности разных методов прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота;

— способы выявления больных туберкулезом животных «энергичных» к внутрикожному введению туберкулина;

— сравнительная характеристика способов дифференциации специфических и «параспецифических» реакций на туберкулин;

— способы дифференциации поствакцинальных реакций на туберкулин у иммунизированного вакциной БЦЖ крупного рогатого скота;

— совершенствование аллергической диагностики паратубер-кулеза крупного рогатого скота.

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на . 5 6"Ч- страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения и список использованной литературы. Содержание соответствует оглавлению. Работа иллюстрирована 48 таблицами и 6 рисунками. Список использованной литературы включает 325 работ отечественных и зарубежных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики туберкулеза и паратуберкулеза Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко, в лаборатории иммунохимии и имму-ногенетики Центрального научно-исследовательского института туберкулеза АМН Российской Федерации, на опытной базе Вышневолоцкого отдела ВИЭВ и в хозяйствах 16-ти областей Российской Федерации, Украины, Эстонии, Таджикистана и Казахстана в соответствии с утвержденными планами научно-исследовательских работ в период 1976—1992 гг.

Исследование биохимического состава ППД-туберкулинов для млекопитающих и для птиц, комплексного аллергена из атипичных микобактерий производства Курской биофабрики и синтетического туберкулина (HCSM), производства фирмы «Рон-Мерье» (Франция) провели методом вертикального электрофореза в по-лиакриламидном геле (ПААГ).

Для сравнительного изучения морфологической характеристики мест внутрикожного введения ППД-туберкулинов для млекопитающих и для птиц, АТК для птиц и KAM, от убитых (реагировавших на туберкулин) коров, через 72, 96, 120 и 144 ч. после введения туберкулинов, брали кусочки кожи и регионарные поверхности шейные лимфатические узлы. Отобранный материал фиксировали 10% раствором формалина.. Вырезанные из мест

введения туберкулинов кусочки кожи уплотняли в целлоидине, готовили гистосрезы, которые окрашивали гематоксилин-эозином.

При изучении влияния частоты внутрикожного введения туберкулина на сенсибилизацию и состояние реакций клеточного и гуморального иммунитета крупного рогатого скота исследования провели на 18-ти 6—10-месячных телках. После месячной акклиматизации, животных разделили на три группы, по 6 те-лой в группе. ППД-туберкулин для млекопитающих в дозе 10 000 МЕ/0,2 мл вводили телкам десять раз, с интервалом между введениями 45—60 дней. Туберкулин вводили животным: 1 группы двукратно, 2 группы — однократно, 3 — контроль (туберкулин не вводили).

Для установления сенсибилизации к туберкулину и оценки специфического клеточного иммунитета кровь от каждой телки йсследовали до введения туберкулина, через три и семь суток после его введения реакцией торможения миграции лейкоцитов под слоем агара (РТМЛ), реакцией специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ). Состояние функции Т-системы лимфоцитов определяли реакцией бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) при инкубации с фитогемаглютинином (ФГА). Состояние функциональной активности Т-системы клеточного иммунитета определяли in vivo кожной пробой с ФГА. Оценку состояния специфического клеточного иммунитета проводили РБТЛ при инкубации лимфоцитов с ППД-туберкулином для млекопитающих.

Для определения специфического гуморального иммунитета сыворотки крови от подопытных телок исследовали до, через трое й семь суток после введения туберкулина методом РСК и ИФА.

В качестве контролей ИФА использовали пул сывороток здоровых коров из благополучных по туберкулезу хозяйств (отрицательный контроль) и пул сывороток экспериментально зараженных М. bovis телок (положительный контроль). Учет результатов проводили визуально и спектрофотометрически. При спектрофо-тометрической оценке результаты реакции выражали в единицах оптической плотности при длине волны 492 нм (ОП4д2). Положительной считали реакцию, при которой оптическая плотность была на 0,2 больше, чем в отрицательном контроле.

Реакцию торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ проводили "под слоем агарозы по методикам F. Morlex (1978), В. М. Никитина (1982), Г. Фримеля (1987). Учет реакции проводили под малым увеличением микроскопа. Определяли диаметр зоны миграции у каждой лунки. Измерения проводили в разных направлениях, вычисляя средний диаметр миграции отдельно в опытных и контрольных пробах.

Результаты реакции выражали в индексе миграции (ИМ), площадь зоны миграции в присутствии антигена площадь зоны миграции в пробе без антигена

' ИМ -

Клинически значимыми считали показатели <0,8 и >1,2.

Реакцию специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) ставили по методике Г. А. Гертманец (1976). Показатель лизиса лейкоцитов рассчитывали по формуле:

РСЛЛ = Лк-Ло х100 где Лк

Лк—абсолютное количество лейкоцитов в контрольной пробе;

Ло—абсолютное количество лейкоцитов в опыте.

При этом считали, что у несенсибилизированного животного показатель РСЛЛ не должен превышать 10,0%.

Реакцию бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) и непрямой твердофазный иммуноферментный анализ проводили по методикам, изложенным в «Методических рекомендациях по проведению иммунологических исследований при туберкулезе и других заболеваниях легких» (М., 1984).

Положительным результатом РБТЛ считали, когда число бластов достоверно превышало контрольный уровень (не менее, чем в 2 раза).

Влияние на интенсивность проявления реакций при одновременном внутрикожном введении нескольких аллергенов или ППД-туберкулина для млекопитающих в разных разведениях изучали на крупном рогатом скоте неблагополучных по туберкулезу хозяйств. Туберкулины или разведения ППД-туберкулина для млекопитающих вводили внутрикожно в области средней трети шеи в политестах (каждому животному — несколько испытуемых ту-беркулинов) и в монотестах (каждому животному — один туберкулин). Препараты вводили с разных сторон шеи или на одной стороне на расстоянии 10—12 см.

При офтальмопробе туберкулины наносили на конъюнктиву левого или правого глаза и учитывали реакцию через 3, 6, 9, 12 и 24 часа после первого и повторного введения.

Туберкулины испытывали и на экспериментально сенсибилизированных и зараженных телятах. Сенсибилизацию проводили убитыми в течение 30 минут при температуре 120° С культурами М. bovis, М. tuberculosis, М. avium, М. paratuberculosis, М. gor-donae, М. scrofulaceum, М. szulgai, М. fortuitum, М. intracellula-гас. Культуры вводили подкожно, однократно в область подгрудка в дозе 200 мг в 1 мл вазелинового масла. Заражение животных проводили культурой М. bovis, per os, четырехкратно с интервалом 7 дней.

При сравнительном изучении туберкулинов для птиц при диагностике паратуберкулеза препараты вводили с разных сторон шеи.

В хозяйствах, где у реагирующих на туберкулин животных не подтверждался туберкулез, исследования проводили ППД-ту-беркулинами для млекопитающих и для птиц в различных дозах, комплексным аллергеном из атипичных микобактерий (KAM).

Другие методики исследований изложены в соответствующих разделах диссертации.

Показания аллергических реакций подтверждали результатами послеубойного осмотра, бактериологическим и гистологическим исследованиями биоматериала от убитых животных.

Бактериологические исследования провели совместно с кандидатом ветеринарных паук В. И. Косенко, гистологические — с профессором В. А. Шубиным, кандидатами ветеринарных наук О. В. Якушевой и В. С. Суворовым.

Полученные в процессе работы цифровые показатели обрабатывали методами вариационной статистики в зависимости от поставленной цели исследования (Ашмарии И. П., Воробьев А. А.,

.1962;" Меркурьева Е. К., 1964; Рокицкий П. Ф., 1967). Рассчиты-

— —

вали выборочные средние арифметические х:х =-.Достоверность различий между средними арифметическими определяли с помощью критерия Стьюдента (t) (Шмидт В. М., 1984):

, м,—м2 t= , где

У m^ + m^

Mi и М2 — средние арифметические;

Ш] и ш2 — стандартные ошибки.

Оценка достоверности разницы производилась с помощью сравнения полученного значения t со стандартным (tst )■ Наряду со средней арифметической, для оценки различий между центральными параметрами, использовали — критерий Манна-Уитни (Рунион Р., 1982), а также критерий Вилкоксона (МерковА.М., Поляков JI. Е., 1974). Оценку полученных результатов для L = 0,05 (критерий двусторонний) проводили с помощью специальной таблицы (Рупион Р., 1982).

Статистическая обработка экспериментальных данных проведена совместно с кандидатом биологических наук В. Е. Земляно-вой.

. : ' Коррекция комплекса методов диагностики в зависимости от эпизоотического.статуса стад крупного рогатого скота проведена на основе результатов собственных исследований и данных других авторов.

2.2. Изучение белкового и гликопротеидного состава туберкулинов и KAM

При электрофоретическом анализе образцов сравниваемых туберкулинов в ППД-туберкулине для млекопитающих выявили 21 белковую полосу, в туберкулине «Интрамакс» — 6 белковых полос, в ППД-туберкулине для птиц — 9, в KAM — 16 белковых полос. Окраска геля по методу Шиффа выявила в ППД-туберкулине для млекопитающих 4 гликопротеидные полосы, в

«Интрамакс» — 1, в ППД-туберкулине для птиц — 2, в KAM — 3 гликопротеидные полосы.

Проведенные' исследования показали наличие более широкого спектра белков и гликопротеидов в туберкулинах отечественного производства. Сравнительное изучение туберкулинов для млекопитающих на 18 экспериментально зараженных М. bovis бЫчка^, на 100 сенсибилизированных атипичными микобактериями коровах и 229 больном туберкулезом крупном рогатом скоте показало их одинаковую специфическую активность. . ; !'■'■■

Полученные результаты позволяют полагать, что примесь других антигенов в составе отечественного туберкулина' не оказывает побочных эффектов. . ■ "

2.3. Морфологическая характеристика местной реакции на введение аллергенов у животных, больных туберкулезом или инфицированных атипичными микобактериями

Гистологические изменения в месте внутрикожного введения ППД-туберкулинов для млекопитающих и для птиц, АТК'для птиц и KAM развивались по одному и тому же типу и были характерны для гиперергической реакции замедленного типа.

При гистологическом исследовании места введения ППД-ту,-беркулина для млекопитающих в центре утолщения кожной складки изменения характеризовались в основном образованием клеточных гранулем, состоящих из лимфоидных клеток и макрофагов или формированием диффузных клеточных пролифератов из аналогичных клеток.

В месте введения у реагирующих на KAM, ППД- и АТК для птиц больных туберкулезом и сенсибилизированных атипичными микобактериями коров, реакция развивалась по тому же типу, что и на введение ППД-туберкулина для млекопитающих.

В регионарном месту введения туберкулина поверхностно шейном лимфатическом узле лимфатические фоликулы чаще были в спокойном состоянии, реже гиперплазированы, корковое плато, в том числе парокортикальный слой хорошо выражены. Центральные синусы — нередко расширены, содержали- большое количество макрофагов и клеток лимфоидного ряда. МакрофагалЬ' ные гранулемы находили также у некоторых животных в' корковом плато. ;

Выраженность коркового плато, в том числе парокортикаль-ной зоны, в регионарных месту введения туберкулина лимфатических узлах, отсутствие у большинства животных активации лимфофолликулярного аппарата свидетельствует о мобилизации Т-лимфоцитов, принимающих участие в реакциях гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ).

2.4. Влияние многократных повторных внутрикожных введений туберкулина на проявление реакций клеточного и гуморального иммунитета у здорового крупного рогатого скота

Изучение.значения десятикратного внутрикожного введения ППД-туберкулина для млекопитающих, с интервалом между введениями туберкулина 45—60 дней, мы проводи на 18 здоровых телках. Установлено, что в начале эксперимента у телок ИМ в РТМЛ составил 0,9±0,34, процент лизированных лейкоцитов по РСЛЛ — до 8,6±0,58, в РБТЛ установлено отсутствие специфической реакции на ППД-туберкулин для млекопитающих — до 2,1 ±0,3% бластов, отсутствие спонтанной реакции (без антигена)— до 1,9±0,6% бластов. Реакция на митоген ФГА была достаточно высокой (до 60,2±6,3% бластов), что свидетельствует о функционировании иммунной системы телок в пределах нормы.

Показатели специфического гуморального ответа также были в пределах нормы. ИОП в ИФА составил 10,3±2,4—12,3±3,9%, РСК — во всех группах отрицательные показания.

После десятикратного внутрикожного введения ППД-туберку-лина для млекопитающих и многократных иммунологических исследований крови и сывороток крови показатели иммунологического состояния организма телок оставались в пределах физиологической нормы и примерно соответствовали результатам исследований до первого введения туберкулина. В конце опыта на внутрикожное введение ФГА реагировали все 18 телок с интенсивностью реакций 4,2±0,34—6,5±0,68 мм, что свидетельствует о функциональной активности Т-системы клеточного иммунитета.

Таким образом, десятикратное внутрикожное введение ППД-туберкулина для млекопитающих с интервалом 45—60 дней, не влияет на состояние клеточного и гуморального иммунитета у здоровых телок, то есть не вызывает у них сенсибилизацию организма к туберкулину.

2.5. Интенсивность проявления реакций при одновременном

внутрикожном введении нескольких аллергенов или одного аллергена в разных разведениях

Установили, что одновременное применение двух или трех туберкулинов в разных разведениях снижает количество реагирующих животных и интенсивность внутрикожных реакций на разбавленный туберкулин. Используя критерии Вальда-Вольфо-вица при сравнении интенсивности проявления реакций на аллергены, введенные в политесте и монотесте установили существенность различий при введении туберкулинов в политесте и монотесте.

При применении ППД-туберкулина для млекопитающих в четырех разведениях установлено, что с снижением дозы туберку-10

липа снижалось количество реагировавших животных и интенсивность внутрикожных реакций. Практически отсутствовали различия в количестве животных, реагировавших на ППД-туберку-лин для млекопитающих в дозах 10 000 МЕ/0,2 мл и 5000 МЕ/0,2 мл. Но на туберкулин в дозах 2500 МЕ/0,2 мл и 1000 МЕ/0,2 мл реагировало несколько меньше животных.

Интенсивность реакций уменьшилась по мере снижения дозы туберкулина. При одновременном введении туберкулина в четырех разведениях утолщение кожной складки на дозу 20 000 МЕ/0,2 мл составило 10,6±0,7 мм, на дозу 10 000 МЕ/0,2 мл—9,5±0,6 мм, на дозу 5000 МЕ/0,2 мл—7,4±0,6 мм и на дозу 2500 МЕ/0,2 мл—7,4±0,7 мм. Разница была нагляднее при применении туберкулинов в монотесте.

Сравнение средних значений утолщения кожной складки на одновременное введение разных разведений туберкулина показало подавляющее влияние высокой концентрации туберкулина на более слабую. При применении туберкулина в дозах 20 000 МЕ/0,2 мл, 10 000 МЕ/0,2 мл, 5000 МЕ/0,2 мл и 2500 МЕ/0,2 мл установили отсутствие различий в средних значениях в опыте и контроле на дозу 20 000 МЕ/0,2 мл, не существенные различия в средних значениях на дозы 10 000 МЕ/0,2 мл и 5000 МЕ/0,2 мл, и существенные различия между средними значениями на дозу 2500 МЕ/0,2 мл (достоверность 95%). При применении туберкулина в дозах 10 000 МЕ/0,2 мл, 5000 МЕ/0,2 мл и 1000 МЕ/0,2 мл различия между средними величинами опытных и контрольных групп животных на дозы 10 000 МЕ/0,2 мл и 5000 МЕ/0,2 мл не существенны, а в средних значениях на дозу 2500 МЕ/0,2 мл — существенны (достоверность 95%). Также не существенны различия в средних величинах в опыте и контроле при одновременном введении туберкулина в дозах 5000 МЕ/0,2 мл и 2500 МЕ/0,2 мл (L<0,05).

При введении ППД-туберкулина для млекопитающих в 4 разведениях с одной стороны средней трети шеи (10 000 МЕ/0,2 мл, 7500 МЕ/0,2 мл, 5000 МЕ/0,2 мл и 2500 МЕ/0,2 мл) и в 4 разведениях с другой стороны средней трети шеи (10 000 МЕ/0,1 мл, 7500 МЕ/0,1 мл, 5000 МЕ/0,1 мл и 2500 МЕ/0,1 мл) установили существенные различия средних величин утолщения кожной складки опытной и контрольной групп животных на дозы 10 000 МЕ/0,2 мл, 7500 МЕ/0,2 мл и 2500 МЕ/0,1 мл (достоверность 95%).

При одновременном применении ППД-туберкулинов для млекопитающих и для птиц в трех разведениях (10 000 МЕ/0,2 "мл, 5000 МЕ/0,2 мл и 2500 МЕ/0,2 мл) в стаде, где животные сенсибилизированы М. avium, различия средних значений утолщения кожной складки опытной и контрольных групп были не значимы, т. е. одновременное введение нескольких доз не влияло на результаты исследования животных ППД-туберкулином для млекопитающих.

2.6. Изменения интенсивности проявления реакций на внутрикожное введение туберкулина для млекопитающих при повторных исследованиях крупного рогатого скота

При изучении динамики проявления аллергических реакций на туберкулин установлено, что у сенсибилизированных атипичными микобактериями коров наибольшее число реагирующих на туберкулин животных выявляется через 24—12 ч. (13,4—8,0%), затем количество реагирующих резко снижается (до 4,1—0,2%), т. е. у большинства реагирующих коров реакции выпадают при учете через 120 ч. Указанная закономерность снижения числа реагирующих животных сохраняется и при применении симультанной пробы с ППД-туберкулином для птиц и KAM.

У больных туберкулезом коров наибольшее количество реагирующих животных (81,5—95,1%, в некоторых группах до 100%) выявляется через 24—72 ч., затем к 96—120 ч. идет некоторое снижение числа реагирующих животных (до 74,6%), то есть аллергические реакции сохраняются при учете реакции через 120ч. у 74,6—87,0% реагировавших коров.

Закономерность максимального проявления внутрикожной аллергической реакции к 72 ч. после введения туберкулина характерна и при введении различных доз ППД-туберкулина для млекопитающих, при введении туберкулина как в монотесте, так и в политесте.

При изучении частого внутрикожного введения туберкулина на десенсибилизацию организма и проявление аллергических реакций у больного туберкулезом скота установили, что при ше-стиразовом, двухкратном внутрикожном введении ППД-туберкулина для млекопитающих, с интервалом между исследованиями 30—45 дней, из 89 исследованного больного туберкулезом скота на первое внутрикожное введение туберкулина реагировало 87 (97,7%), на второе — 81 (91,0%), на третье — 71 (78,7%), на четвертое — 75 (84,2%), на пятое — 54 (61,4%), на шестое — 65 (73,0%) коров. Интенсивность проявления аллергических реакций снижалась соответственно от 11,1 ±0,9 мм до 4,9±0,6 мм, то есть интенсивность реакции снизилась более, чем в два раза.

Полученные результаты исследований показали, что при частом (через 30—45 дней) внутрикожном введении туберкулина больным туберкулезом коровам до 36,3% снижается количество реагирующих животных и более, чем в два раза уменьшается интенсивность проявления аллергических реакций у этих животных.

2.7. Зависимость показателей выявления реагирующих животных от дозы ППД-туберкулина для млекопитающих

Исследования провели на 53 экспериментально сенсибилизированных различными видами микобактерий телятах, на 35 зараженных М. bovis бычках, на 2164 коровах четырех благополучных

хозяйствах, на 4492 коровах семи хозяйств, где 'животные сенсибилизированы атипичными микобактериями, на 3500 головах крупного рогатого скота восьми неблагополучных по туберкулезу хозяйств.

Установлено, что в благополучных по туберкулезу стадах на введение туберкулина в дозе 20 000 МЕ реагировало до 5,4%, 10 000 МЕ — до 1,5% исследованных животных.

В стадах крупного рогатого скота, инфицированного атипичными микобактериями реагировало на туберкулин в дозе 10 000 МЕ/0,2 мл от 0,8 до 41,9% исследованных коров, в дозе 5000 МЕ — от 3,5 до 33,3% животных, в дозе 2500 МЕ — от 2,6 до 8,7% животных.

Экспериментально зараженные и больные туберкулезом животные реагировали на туберкулин в дозах 20 000, 10 000, 7500 и 5000 МЕ/0,2 мл в равной степени. На дозы 2500 и 1000 МЕ реагировало несколько меньше животных.

В зависимости от эпизоотического статуса хозяйств (района) аллергическую диагностику туберкулеза следует проводить разными дозами туберкулина.

2.8. Применение усовершенствованной офтальмопробы для выявления гиперчувствительности замедленного типа

Работу по усовершенствованию глазной туберкулиновой пробы провели на 532 больных туберкулезом коровах. Каждому животному одновременно вводили ППД-туберкулин для млекопитающих: внутрикожно и на коньюнктиву нижнего века (дважды с интервалом 5 дней). Группе животных (270 коров) повторную глазную пробу проводили через 72 ч. после первого введения, т. е. одновременно с учетом внутрикожных реакций.

В группе передержки больного туберкулезом скота при повторном глазном введении туберкулина через 72 ч. после первого введения, реагировало 72,9% коров, а при повторном введении туберкулина через 5 дней реагировало 49,6% исследованных животных. Полученные результаты исследований показывают, что при двукратном глазном введении туберкулина через 72 ч. после первого введения чувствительность глазной пробы повышается на 23,3%. Кроме того, в два раза сокращается время проведения двукратной глазной пробы. Установлено, что глазная проба эффективна только при двукратном введении туберкулина, причем на первое введение туберкулина реагирует до 51,7%, а на второе — от 16,5 до 90,0% больных коров. В связи с тем, что реагирующие на первое введение коровы реагируют и на повторное введение туберкулина, то нет необходимости проводить учет аллергических реакций на первое введение туберкулина. Учет реакции на двукратную глазную пробу следует проводить через 3, 6, 9, 12 и 24 ч. после повторного введения туберкулина.

.. -л. - 2.9. Влияние тубазида на проявление аллергических ......... реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих......

Исследования по изучению влияния тубазида на проявление аллергических реакций мы провели в восьми неблагополучных хозяйствах Акмолинской области, Казахстана.

Установлено, что в хозяйствах, где оздоровление проводят с применением химиопрофилактики тубазидом, при относительно небольшом количестве реагирующих на туберкулин животных, выявляется 34,5—38,4% больных туберкулезом коров с характерными для туберкулеза изменениями. Характерные для туберкулеза изменения обнаруживаются у реагирующих на первое, второе, а также у нереагирующих на двукратное внутрикожное введение туберкулина животных.

Полученные результаты исследований подтвердились и в Мен-ском районе Украины, где в период 1980—1981 гг. в 11 неблагополучных по туберкулезу хозяйствах применяли тубазид. После проведенных 2—3 курсов применения тубазида в этих хозяйствах прекращалось выделение реагирующих па туберкулин животных и хозяйства были признаны оздоровленными.

Через год девять хозяйств были вновь объявлены неблагополучными. Эти данные свидетельствуют о подавлении' тубазидом чувствительности животных к туберкулину. Так, при убое 2431 реагирующей на туберкулин коровы, туберкулезные изменения ■выявлены у 96 животных. После окончания применения тубазида при убое 422 реагирующих на туберкулин коров из этих же хозяйств, туберкулезные изменения обнаружили у 95 животных. Таким образом, после проведения химиопрофилактики тубазидом количество реагирующих на туберкулин животных уменьшилось более чем в 5 раз, а количество выявляемых животных с туберкулезными изменениями осталось на прежнем уровне.

2.10. Сравнительное изучение методов выявления больных туберкулезом животных, находящихся в состоянии •: анергии к внутрикожному введению туберкулина

В двух длительно неблагополучных по туберкулезу хозяйствах исследовали различными методами 389 коров, провели убой 165 животных, реагирующих и нереагирующих на различные тесты. На внутрикожное введение ППД-туберкулина для млекопитающих в дозе 10 000 МЕ/0,2 мл реагировало до 87,4% в дозе .1000 МЕ/0,2 мл — 67,0% животных, на пальиебральную пробу — 79,6%, на офтальмопробу — 55,9%, на внутривенную пробу— 51,4% животных. При исследовании сывороток крови в РСК с КТА УНИИЭВ положительные показания получили 16,6% животных.

Результаты убоя показали, что даже проведенным комплексным исследованием недовыявляются больные туберкулезом жи-14

вотные. Так, в нашем опыте выявлено 9 животных,- которае не реагировали ни на один из тестов, и тем не менее у них обнаружены характерные для туберкулеза изменения.

Таким образом, длительно неблагополучные по туберкулезу и со значительным поражением скота хозяйства можно оздоровить только методом полной замены всего поголовья скота.

2.11. Изучение возможности использования «booster effect» для выявления больных туберкулезом животных

Исследовали 9 телят, экспериментально зараженных разными видами микобактерий, 968 коров четырех благополучных хозяйств, где установлена сенсибилизация атипичными микобакте-риями, 2018 коров четырех неблагополучных по туберкулезу хозяйств.

При аллергическом исследовании 9 экспериментально зараженных телок на первое введение туберкулина реагировало — 6, на второе — 4, на третье — 1 животное.

В благополучном по туберкулезу хозяйстве при трехразовом введении туберкулина 160 коровам, реагирующих животных не выявили ни на одно введение туберкулина.

В хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, на второе и третье введения туберкулина выявляли реагирующих животных в незначительном количестве. Так, при исследовании 968 коров на первое введение реагировало 15 (1,5%), на второе — 8 (0,8%), на третье — 3 (0,3%) коровы. Реагирующие на первое введение не реагировали на второе и третье введения туберкулина. В четырех благополучных хозяйствах из 26 реагировавших на туберкулин животных только одна корова реагировала на все три введения туберкулина. Из полученных результатов следует, что реакции у сенсибилизированных коров как правило выпадают на второе и третье введение туберкулина, т. е. реакции не стабильные.

В неблагополучных по туберкулезу хозяйствах при исследовании 2018 коров на первое введение туберкулина реагировало 146 (7,2%), на второе — 40 (1,9%), на третье — 23 (1,1%) животных. При убое 57 реагировавших на второе и третье введейия туберкулина коров, туберкулез подтвержден в 17 (29,8%) случаях.

Установлено, что у больных туберкулезом коров реакции на трехразовое введение туберкулина более стабильные. Так, из 209 реагировавших коров — 69 (33,0%) реагировали на все три введения туберкулина.

Полученные результаты исследования показывают, что способ «повышения чувствительности к туберкулину» следует применять в оздоравливаемых от туберкулеза хозяйствах, как дополнительный метод для довыявления зараженных туберкулезом животных.

..j. i?2.12. Применение БЦЖ-теста для выявления животных "... в состоянии «инфратуберкулиновой» или «латентной»

аллергии

- Изучение эффективности БЦЖ-теста провели в сравнении с внутрикожной туберкулиновой пробой на 19 телках, иммунизированных вакциной БЦЖ и экспериментально зараженных культурой М. bovis на ,387 коровах и 216 иммунизированных БЦЖ телках' двух неблагополучных по туберкулезу хозяйств. Из 19 экспериментально зараженных телок реагировали на ППД-туберку-лин для млекопитающих 16 (89,2%) с утолщением кожной складки; на 4,6±0,4 мм, на БЦЖ-тест — 9 (47,3%) с утолщением кожной складки на 4,0±0,3 мм, на KAM — 14 (73,6%) с утолщением кожной складки на 4,6±0,5 мм.

'В группе передержки больного туберкулезом скота на внутри-кожное введение ППД-туберкулина для млекопитающих реагировало на 14,6—17,7% больше животных, чем на БЦЖ-тест. Однако на БЦЖ-тест дополнительно реагировало .12 коров (3,26%), которые не реагировали на внутрикожную туберкулиновую пробу.

При исследовании иммунизированных вакциной БЦЖ телят на ППД-туберкулин для млекопитающих реагировали 32 (14,8%) я<ивотнЫх с интенсивностью аллергических реакций 7,8±0,6 мм, на БЦЖ-тест — .22 телки (10,2%) с интенсивностью реакций 5,4 .±0,1 мм.

:-'"'-2'.13. Совершенствование методов дифференциации 1ZJ.Z." . специфических и параспецифических реакций ~ на туберкулин для млекопитающих

->::„Исследования скота симультанной пробой с ППД-туберкулина-Л11т>для;Млекопитающих и для птиц провели на 516 животных двуях стад , крупного рогатого скота, инфицированного М. avium, на 5504 животных шести стад крупного рогатого скота, инфицированного, атипичными микобактериями.

о' ;В;, хозяйствах, где установлена сенсибилизация скота птичьим видом Микобактерий туберкулеза достоверно выраженные реакции^ на: туберкулин для птиц получены в 5 группах животных из девятиВ четырех группах получены недостоверные результаты. Применение этих аллергенов в равных дозах и разных комбинациях (дозы от 10 000 до 2500 ME) позволяет дифференцировать аллергические реакции в 55,5% случаев.

. В хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, во всех случаях получали недостоверные результаты исследований.

, Таким образом, симультанная проба с ППД-туберкулином для млекопитающих и для птиц при исследованиях скота сенсибилизированного атипичными микобактериями не выявила своего дифференцирующего значения. ¿6

Исследования скота симультанной пробой с ППД-туберкули-ном для млекопитающих и KAM провели на 355 животных хозяйства, в котором крупный рогатый скот инфицирован М. avium, на 1146 животных 20 хозяйств, где крупный рогатый скот инфицирован атипичными микобактериями. Усовершенствованную методику симультанной пробы с KAM сравнили с обычной на 3479 коровах четырех хозяйств.

При применении в двадцать одном благополучном ' хозяйстве симультанной пробы по обычной методике достоверно выраженные реакции на KAM получили в 7 стадах (33,3%).

При исследовании 3479 коров в четырех хозяйствах симультанной пробой с KAM по обычной методике, достоверно выраженные реакции на KAM установлены в одном хозяйстве.

Применение симультанной пробы с KAM по усовершенствованной методике (в этих хозяйствах и на этом же поголовье скота) позволило получить достоверно выраженные реакции на KAM в трех хозяйствах.

Проведенные исследования показывают, что предлагаемая методика применения симультанной пробы более эффективна. Кроме того, ускоряется и облегчается проведение симультанной пробы, так как перенсследуются только реагирующие на туберкулин животные, сокращается время проведения и расход аллергенов.

Считаем, что в целях повышения эффективности возможно применение симультанной пробы через 72 ч. после внутрикожной туберкулиновой пробы, так как проведенные нами исследования, а также литературные данные показывают, что частым внутри-кожным введением туберкулина невозможно вызвать сенсибилизацию у здоровых животных, т. е. аллергены не обладают сенсибилизирующими свойствами.

Пальпебральную пробу с ППД-туберкулином для млекопитающих испытали одновременно с внутрикожной на 35 экспериментально зараженных М. bovis бычках, на 136 коровах благополучного по туберкулезу совхоза, на 3112 коровах 7 хозяйств, в которых установлено инфицирование животных атипичными микобактериями, на 120 иммунизированных вакциной БЦЖ телятах и на 2468 больных туберкулезом коровах 6 неблагополучных по туберкулезу хозяйств.

Из 35 бычков па внутрикожную пробу реагировало 24 (68,7%), на пальпебральную — 22 (62,9%) животных.

Здоровые животные не реагировали на внутрикожное и паль-пебральное введения туберкулина.

Иммунизированные БЦЖ телята реагировали на внутрикожную пробу в 42,5%, на пальпебральную пробу — в 34,2%.

В неблагополучном по туберкулезу хозяйстве на внутрикожную туберкулиновую пробу реагировало несколько больше животных, чем на пальпебральную. При убое 148 коров туберкулез 2 17

подтвержден у 80,0% реагирующих на внутрикожную и у 75,3% — на пальпебральную пробу.

В хозяйствах, где выявляются реагирующие на туберкулин животные, на внутрикожное введение ППД-туберкулина для млекопитающих реагировало от 2,8 до 9,4% исследованных животных, а на пальпебральное — до 1,9%, то есть у сенсибилизированных атипичными микобактериями животных на пальпебральное введение туберкулина реакции не наблюдали или же выявляли лишь единицы реагирующих коров.

Полученные результаты исследований показывают, что одновременное применение внутрикожной и пальпебральной пробы можно использовать для дифференциации специфических и пара-специфических реакций на туберкулин.

Указанный эффект достигается при пальпебральном введении только ППД-туберкулина для млекопитающих. При одновременном внутрикожном и пальпебральном введении KAM сенсибилизированные атипичными микобактериями животные реагируют на оба введения равноценно. При исследовании 70 коров на внутрикожную пробу с ППД-туберкулином для млекопитающих реагировало 2 (2,8%), па внутрикожную пробу с KAM — 54 (77,1%), на пальпебральную с KAM — 39 (55,7%) исследованных животных. При исследовании другой группы (55 коров), на внутрикожное введение ППД-туберкулина для млекопитающих реагирующих не выявили, на внутрикожное введение KAM реагировало 47 (85,5%), на пальпебральное введение KAM — 36 (66,5%) исследованных животных.

Изучение внутривенной туберкулиновой пробы провели на 18 здоровых нетелях, на 19 иммунизированных вакциной БЦЖ телятах, на 47 экспериментально зараженных М. bovis телках, на 53 реагирующих на туберкулин коровах в стадах, где животные инфицированы атипичными микобактериями и на 49 коровах неблагополучного по туберкулезу хозяйства.

На внутрикожное введение ППД-туберкулина для млекопитающих здоровые животные не реагировали, а на внутрикожное введение ФГА реагировали все 18 нетелей с интенсивностью внутрикожных реакций 5,4±0,57 мм. После внутривенного введения туберкулина повышение темепратуры тела на один градус выше максимальной нормальной температуры тела (39,5°) не наблюдали ни у одного животного.

Иммунизированные БЦЖ телки не реагировали на внутривенную туберкулиновую пробу. Из 47 зараженных М. bovis телок — 20 (42,5%) реагировали на внутривенную туберкулиновую пробу. '-' В хозяйствах, где установлена сенсибилизация атипичными микобактериями, реагирующих животных на внутривенную пробу не выявили.

Больные туберкулезом коровы реагировали на внутрикожное введение туберкулина в 94,3%, на пальпебральную пробу — в

80,0%, на глазную пробу — в 68,5%, на внутривенную пробу — в 51,5% случаев.

Учитывая положительные и отрицательные показания внутривенной туберкулиновой пробы считаем возможным применять эту пробу в целях отбора животных для диагностического убоя из числа реагирующих на туберкулин животных в благополучных по туберкулезу хозяйствах.

Изучение ИФА с целью дифференциации специфических и параспецифических реакций на туберкулин провели на 18 здоровых телках, 16 экспериментально зараженных М. bovis телках, 40 реагировавших на туберкулин коровах двух неблагополучных хозяйств и 208 реагировавших на туберкулин коровах четырех хозяйств, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями.

При исследовании здоровых телок получены отрицательные результаты.

У экспериментально зараженных М. bovis телок выявлен высокий уровень антител (минимальная ОГ1 492 = 0,73, максимальная ОП 499= 1,5, при колебании ОП492 в контрольной группе от 0,21 до 0,30).

В двух неблагополучных по туберкулезу хозяйствах, при исследовании сывороток крови от 40 реагировавших на туберкулин коров, положительные показания в ИФА получили у 12 коров (ОП 492 от 0,38 до 0,73, при отрицательном контроле 0,19 и положительном контроле 0,72).

Из патологического материала животных, реагировавших на туберкулин и давших положительные показания ИФА, в четырех случаях выделили М. bovis.

В хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями при исследовании сывороток крови от 208 наиболее интенсивно реагировавших на туберкулин животных, положительные показания в ИФА выявили у 7 коров. При диагностическом убое и лабораторном исследовании материала от этих коров, туберкулез не подтвержден ни в одном случае.

Полученные результаты исследований показывают, что дополнительное исследование методом ИФА сывороток крови реагирующих на туберкулин коров, значительно снижает число «пара-специфических» реакций.

2.14. Изучение возможности дифференциации поствакцинальных реакций на туберкулин у иммунизированного вакциной БЦЖ крупного рогатого скота

Исследования провели на 2097 головах молодняка крупного рогатого скота и 360 коровах, иммунизированных вакциной БЦЖ.

Установлено, что в различных группах животных на различные аллергены и методы их введения реагируют на: внутрикож-ное введение ППД-туберкулина для млекопитающих в дозе 10 000 МЕ/0,2 мл — от 14,8 до 88,9%, в дозе 1000 МЕ/0,2 мл — 24,3%, ППД-туберкулин для птиц в дозе 2500 МЕ/0,2 мл — от 2,7 до 21,6%, KAM в дозе 1350 МЕ/0,2 мл — от 22,3 до 41,2%, БЦЖ-тест — в 10,2% случаях, пальпебральную пробу с ППД-туберкулином для млекопитающих в дозе 10 000 МЕ/0,2 мл — 34,2% животных. Большие расхождения в количестве реагирующих в различных группах животных объясняются различным промежутком времени после иммунизации вакциной БЦЖ и проведением исследований. Чем больше проходит времени после иммунизации БЦЖ, тем меньше выявляется реагирующих животных.

Результаты исследований показывают, что иммунизированные БЦЖ животные на одновременное внутрикожное введение ППД-туберкулина для млекопитающих в различных дозах, на симультанную пробу с ППД-туберкулинами для млекопитающих и для птиц, KAM, БЦЖ-тест и пальпебральную пробу реагируют примерно также, как и зараженные туберкулезом животные.

При исследовании сывороток крови РСК с КТА УНИИЭВ положительно реагировало 10,0% иммунизированных телок, то есть серологическим методом также невозможно дифференцировать инфекционные и поствакцинальные реакции.

Таким образом, мы не выявили дифференцирующего значения ни одного, отдельно взятого, испытанного метода. Тем не менее, при изучении интенсивности и характера проявления реакций установили, что поствакцинальные реакции обычно плотноватые, тестоватые, ограниченные, утолщение кожной складки, в основном, составляет 3—5 мм, в редких случаях реакция достигает 7 мм. Известно, что больные туберкулезом животные также могут реагировать с небольшим увеличением кожной складки, однако как правило реакции у них больше, чем 3—5 мм. Поэтому мы считаем, что в какой-то мере по интенсивности и характеру проявления аллергических реакций можно дифференцировать поствакцинальные реакции у отдельных животных.

Применением всего комплекса испытанных методов можно дать заключение об этиологии аллергических реакций в целом по группе (стаду) животных.

2.15. Совершенствование аллергической диагностики паратуберкулеза крупного рогатого скота

В ВИЭВ разработан оригинальный способ выделения активных протеинов из бактериальной массы микобактерий (Малахов А. Г., Газарх 3. С., Устинова Г. И., 1972). Используя этот метод мы приготовили и изучили четыре серии ионина из бактериальной массы М. paratuberculosis. 20

Биологическую активность ионина испытали в сравнении с АТК и ППД-туберкулинами для птиц на сенсибилизированных морских свинках и телятах, на крупном рогатом скоте неблагополучных по паратуберкулезу хозяйств. Результаты исследований не показали преимущества ионина перед АТК и ППД-туберкулинами для птиц при диагностике паратуберкулеза крупного рогатого скота. Поэтому дальнейшие исследования были направлены на сравнительное изучение АТК и ППД-туберкулинов для птиц для диагностики паратуберкулеза крупного рогатого скота.

Работу провели на 48 экспериментально сенсибилизированных телятах, на 402 коровах благополучных хозяйств, на 5423 коровах хозяйств, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, 375 иммунизированных вакциной БЦЖ телках, 309 коровах неблагополучного по туберкулезу хозяйства, на 2961 корове шести неблагополучных по паратуберкулезу хозяйств.

Все экспериментально зараженные различными видами мико-бактерий бычки реагировали на внутрикожное введение ППД- и альттуберкулинов для птиц. У телят, сенсибилизированных М. avium и М. intracellularae, аллергические реакции на оба туберкулина проявлялись интенсивнее, чем у животных, сенсибилизированных другими видами микобактерий.

Интенсивность проявления аллергических реакций на альтту-беркулин для птиц в дозе 0,2 мл и на ППД-туберкулин для птиц в дозе — 10 000 ME в 0,2 мл была примерно одинаковой. На ППД-туберкулин для птиц в дозах 5000 и 2500 МЕ/0,2 мл интенсивность проявления аллергических реакций была меньше, чем на АТК для птиц.

В благополучных по паратуберкулезу хозяйствах на первое введение ППД-туберкулина для птиц в дозе 10 000 МЕ/0,2 мл реагировало 5,0%, на второе введение — 11,0% животных, в дозе 5000 МЕ/0,2 мл реагировало на первое введение 2,0%, на второе — 6,0%, в дозе 2500 МЕ/0,2 мл на первое и второе введение реагировало 2,0% животных. На АТК для птиц также реагировали здоровые животные, но в меньшем количестве.

В хозяйствах, где установлена сенсибилизация животных атипичными микобактериями, на ППД-туберкулин для птиц в дозе 5000 МЕ/0,2 мл реагировало: на первое введение 13,0%, на второе — 79,7% животных, на АТК для птиц на первое введение — 49,2%, на второе — 89,8% животных. На ППД-туберкулин для птиц в дозе 2500 МЕ/0,2 мл реагировало 9,6—14,3%, на АТК для птиц — 19,2—38,5% животных. При сравнительном изучении ППД-туберкулина для птиц и его французского аналога «Авиту-бер» в дозах по 5000 ME, на «Авитубер» выявлено на 7,7% больше реагирующих коров.

Полученные результаты исследований показывают, что при применении всех видов туберкулинов для птиц (ППД, АТК или «Авитубер» Франции) из-за близкого антигенного родства, выяв-

ляются реагирующие животные, сенсибилизированные атипичными микобактериями.

При исследовании больного туберкулезом скота установили, что на внутрикожное введение ППД-туберкулина для птиц в дозах 10 000, 7500, 5000 МЕ в 0,2 мл растворителя выявляется больше реагирующих животных, чем на АТК. для птиц в дозе 0,4 мл. На ППД-туберкулин для птиц в дозе 2500 МЕ/0,2 мл выявляли большее или равное количество реагирующих животных. При изучении динамики проявления аллергических реакций на туберкулины установили, что в одних группах животных выявляется больше реагирующих коров через 24 ч., в других через 48 ч., в третьих через 72 ч. после введения туберкулинов. Однако мы считаем, что аллергические реакции следует учитывать через 72 ч. после введения туберкулина, с целью, чтобы исчезли воспалительные явления в месте введения туберкулина у здоровых животных.

В неблагополучных по паратуберкулезу хозяйствах, при применении ППД- и альттуберкулинов для птиц характерных проявлений аллергических реакций у больного скота, мы обнаруживали крайне редко. Поэтому считаем нецелесообразным проводить учет реакций по характеру проявления реакций.

Учитывая, что сенсибилизированные атипичными микобактериями коровы реагируют в 90—98% случаях увеличением кожной складки на 3—5 мм, считаем, что за положительную реакцию при паратуберкулезе следует считать животных с утолщением кожной складки на 5 мм и выше (без учета характера реакции) .

2.16. Коррекция комплекса методов диагностики в зависимости от эпизоотического статуса стад крупного рогатого скота

По эпизоотическому состоянию все стада крупного рогатого скота можно условно разделить на следующие категории: благополучные по туберкулезу и паратуберкулезу; благополучные стада скота, инфицированные нетуберкулезными микобактериями; неблагополучные по туберкулезу с различным распространением и с различной стадией оздоровления от туберкулеза; неблагополучные по паратуберкулезу.

При исследовании здорового скота в благополучных стадах следует повысить специфичность, а в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах при исследовании больного скота — чувствительность диагностических исследований. Задачи эти непростые, так как при повышении чувствительности внутрикожной туберкулиновой пробы (увеличением дозы, кратности введения туберкулина, изменением критериев оценки реакций и т. д.) одновременно снижается ее специфичность и, наоборот, при увеличении специфичности снижается чувствительность туберкулиновой пробы.

Поэтому, в благополучных хозяйствах следует применять более щадящие методы диагностики туберкулеза и критерии оценки аллергических реакций. Так как цель диагностики в этих стадиях заключается в контроле за благополучием и в случае возникновения туберкулеза — раннее выявление зараженных животных в самом начале возникновения заболевания.

В длительно благополучных по туберкулезу хозяйствах благополучных районов, краев и областей аллергические исследования целесообразно проводить внутрикожной туберкулиновой пробой ППД-туберкулином для млекопитающих в дозе 2 500 МЕ.

В благополучных хозяйствах в неблагополучной по туберкулезу зоне, в целях контроля за благополучием поголовья скота аллергические исследования на туберкулез следует проводить внутрикожной пробой ППД-туберкулином для млекопитающих в дозе 5000 МЕ. При выявлении небольшого количества реагирующих животных (5—10 гол.) в стаде, они подлежат диагностическому убою с последующим патологоанатомическим и лабораторным исследованием на туберкулез. При выявлении большого количества реагирующих животных, реагирующих коров переисследуют симультанной пробой с Использованием ППД-туберкулина для млекопитающих и KAM. Проводят диагностический убой 3—5 животных, реагирующих в большей степени на ППД-тубер-кулин ддя млекопитающих. Материал от убитых животных исследуют лабораторными методами на туберкулез. Остальных реагирующих животных изолируют в отдельную группу и через 60 дней проводят дополнительные исследования внутрикожной и пальпебральной пробой. При этом считаются реагирующими и подлежат убою животные давшие положительные показания по внутрикожной и пальпебральной пробе.

Реагирующих животных дополнительно исследуют внутривенной туберкулиновой пробой. Считаются реагирующими и подлежат убою животные, давшие положительные показания как минимум на две диагностические пробы.

В стадах крупного рогатого скота, инфицированного атипичными микобактериями, следует повысить специфичность диагностических исследований методом подбора различных аллергенов и диагностических методов с целью отбора из общего числа реагирующих на туберкулин животных, двух-трех реагирующих на несколько диагностических тестов с наиболее характерными реакциями на гомологичный аллерген.

В неблагополучных по туберкулезу стадах диагностические исследования следует проводить в зависимости от стадии оздоровления. Так, в начале оздоровительных мероприятий следует применять наиболее чувствительные методы диагностики и жесткие критерии оценки реакций, до тех пор пока будет подтверждаться туберкулез результатами паталогоанатомических и лабораторных исследований. Одновременно следует провести исследо-

ааниЯ по выявлению «анергичных» больных туберкулезом животных.

Диагностические исследования животных на туберкулез проводят внутрикожной пробой ППД-туберкулином для млекопитающих в дозе 5000 МЕ/0,2 мл. В качестве дополнительного метода применяют пальпебральную пробу. При этом считают зараженными животных, реагирующих на внутрикожную и пальпебральную пробы, или на одну из них. Эти животные подлежат убою.

Также следует применять «booster effect». В случаях подтверждения туберкулеза у реагирующих на туберкулин животных, исследования следует повторить. В случаях отсутствия туберкулеза необходимо ограничиться разовым применением предлагаемого метода.

В, неблагополучных по паратуберкулезу стадах аллергические исследования • проводят ППД-туберкулином для птиц в дозе 2500 ME в 0,2 мл растворителя. Реакции учитывают через 72 часа после введения туберкулина. Реагирующими следует считать животных с утолщением кожной складки на 5 мм и выше, независимо от характера аллергической реакции.

5. ВЫВОДЫ

1. Отечественные ППД-туберкулины для млекопитающих и птиц и комплексный аллерген из атипичных микобактерий уступают по степени очистки синтетическому туберкулину «Интра-макс» (Франция).

Однако, наличие балластных антигенов не снижает специфичность и чувствительность отечественных туберкулинов.

2. У больного туберкулезом и инфицированного атипичными микобактериями крупного рогатого скота гистологические изменения в местах внутрикожного введения ППД-туберкулина для млекопитающих KAM, ППД- и АТК для птиц характерны для гиперергической реакции замедленного типа и различаются лишь степенью выраженности.

3. Десятикратное (с интервалом в 45—60 дней) повторение двойной внутрикожной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих не вызывает сенсибилизацию у здоровых животных.

У больного туберкулезом скота шестикратное повторение этой пробы привело к снижению интенсивности проявления реакций на туберкулин (более, чем в два раза). Одновременно снизилось (на 36,3%) число реагирующих животных.

4. При одновременном внутрикожном введении нескольких туберкулинов или одного аллергена в разных разведениях концентрированные туберкулины подавляют интенсивность проявления реакций на разбавленный аллерген. Соответственно, снижается число реагирующих животных.

5. При исследованиях животных, инфицированных атипичными микобактериями, число реагирующих максимально (13,4%) через 24 ч. после введения туберкулина. Через 72 ч. оно снижается, а через 120 ч. у большинства реагировавших животных реакции выпадают. При исследованиях больного туберкулезом скота число реагирующих через 24 ч. составляет 81,5—95,1%, достигает максимума (до 100%) через 72 ч. и несколько снижается (до 74,6%) через 120 ч. после введения туберкулина.

6. На внутрикожную туберкулиновую пробу реагируют 85,0— 100% больных туберкулезом животных. Она была и остается основным методом массовых прижизненных исследований крупного рогатого скота, так как превосходит остальные известные методы по чувствительности, диагностической ценности и возможности широкого применения.

Офтальмопроба значительно уступает внутрикожной по степени чувствительности и возможности применения. При двукратном введении туберкулина она выявляет в среднем 53,2% инфицированных животных. При повторном введении аллергена через 72 ч. повышается чувствительность пробы, сокращаются сроки их проведения.

7. В благополучных по туберкулезу хозяйствах на внутри-кожное введение туберкулина для млекопитающих в дозе 10 000 ME реагируют 1,5% здоровых животных. В неблагополучных хозяйствах применение туберкулина в дозах 10 000 и 5000 ME не влияет на полноту выявления зараженных животных. Оптимальной дозой в таких случаях является 5000 ME ППД-тубер-кулина для млекопитающих. Контроль благополучия хозяйств в свободных от туберкулеза районах, краях, областях можно обеспечить при использовании туберкулина в дозе 2500 ME.

8. Положительные результаты аллергических и серологических исследований естественно и искусственно инфицированного крупного рогатого скота не являются критерием наличия характерных для туберкулеза патологических изменений.

В естественных условиях такие изменения у большинства (63^6%) инфицированных животных появляются через год после ввода здорового скота в неблагополучное по туберкулезу стадо.

9. Применение тубазида (химиопрофилактика) во многих случаях подавляет проявление реакций на туберкулин у больного скота. В неблагополучных по туберкулезу в течение длительного времени стадах, регулярные исследования однократной и двукратной внутрикожной пробои не обеспечивают полноту выявления инфицированных животных.

10. Применение пальпебральной пробы позволяет дополнительно выявлять в неблагополучных стадах до 15,7% реагирующих животных, у которых в 64,5% случаев подтверждается туберкулез. Использование БЦЖ-теста обеспечивает дополнительное выявление 3,2%, а использование «booster effect» — 1,9%

реагирующих животных, у которых туберкулез подтверждается в 34,4% случаев.

11. Эффективность результатов симультанной пробы с ППД-туберкулином для млекопитающих и КАМ можно повысить до 52,3% путем изменения критериев оценки достоверности реакций. Использование ускоренной методики симультанной пробы повышает ее эффективность до 75,0%, ускоряет и облегчает проведение исследований.

12. При выявлении реагирующих животных в благополучных по туберкулезу хозяйствах дополнительным методом дифференциации парааллергических реакций может служить одновременное применение внутрикожной пальпебральной проб с ППД-ту-беркулином для млекопитающих.

13. Разовое внутривенное введение здоровым животным ППД-туберкулина для млекопитающих в дозе 1 мл на 100 кг живого веса не влияет на проявления реакций клеточного и гуморального иммунитета. Внутривенную туберкулиновую пробу целеособразно использовать в целях отбора реагирующих животных для диагностического убоя.

14. Использование различных диагностических тестов по отдельности с оценкой характера и интенсивности проявления реакций не позволяет дифференцировать поствакцинальные аллергические реакции у иммунизированного БЦЖ крупного рогатого скота от реакций, возникающих у естественно инфицированных животных. Решение этого вопроса по стаду в целом обеспечивает использование комплекса диагностических тестов.

15. При аллергической диагностике паратуберкулеза у крупного рогатого скота ППД-туберкулин для птиц в дозе 2500 МЕ специфичен и более активен, чем альттуберкулин для птиц в дозе 0,4 мл.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. При постановке офтальмопробы проводить повторное введение туберкулина через 72 часа после первого (во время учета внутрикожной пробы). Учет реакции проводить через 3, 6, 9, 12 и 24 ч. после второго введения туберкулина.

2. В неблагополучных по туберкулезу хозяйствах проводить аллергические исследования с интервалом 60 дней.

3. В благополучных хозяйствах благополучных по туберкулезу районов, краев и областей использовать при контрольных исследованиях крупного рогатого скота ППД-туберкулин для млекопитающих в дозе 2500 МЕ. При установлении неблагополучия стада следует применять при аллергических исследованиях туберкулин в дозе 5000 МЕ.

4. При оздоровлении неблагополучных по туберкулезу стад крупного рогатого скота следует применять следующие диагностические тесты, обеспечивающие дополнительное выявление зараженных животных:

— комплексную внутрикожную и пальпебральную пробу;

— «booster effect» или «способ повышения чувствительности к туберкулину»;

— одновременное применение внутрикожной туберкулиновой пробы и БЦЖ-теста.

Реагирующими следует считать животных с положительными показаниями хотя бы на одну из проб.

5. В благополучных хозяйствах, где выявляются реагирующие на туберкулин животные, для дифференциации «параспеци-фических» реакций следует применять:

— ускоренную симультанную пробу, когда реагирующих на туберкулин коров сразу после учета внутрикожной пробы исследуют ППД-туберкулином для млекопитающих и KAM;

— одновременное применение внутрикожной и пальпебраль-ной туберкулиновых проб; реагирующими считать животных с положительными показаниями обоих проб;

— внутривенную туберкулиновую пробу с целью отбора из числа реагирующих на внутрикожную пробу 2—3 животных для диагностического убоя.

6. Для аллергической диагностики паратуберкулеза крупного рогатого скота следует применять ППД-туберкулин для птиц в дозе 2500 ME в 0,2 мл растворителя. Учет реакций проводить через 72 ч. после введения туберкулина, реагирующими считать животных с утолщением кожной складки на 5 мм и выше, независимо от характера аллергической реакции.

Результаты исследований учтены при разработке Инструкций о мероприятиях по профилактике и ликвидации туберкулеза животных (утверждена Главным Управлением ветеринарии в 1988 г.), Наставления по диагностике туберкулеза животных (1986 г.), проектов Инструкции о мероприятиях по профилактике и оздоровлению от паратуберкулеза животных, Наставления по диагностике паратуберкулеза животных, Наставления по диагностике туберкулеза животных, представленных Главветупру МСХ РФ (1992 г.).

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Найманов А. X. Туберкулинизация крупного рогатого скота//Ветерина-рия. 1980, jYs 6, с. 39—40.

2. Найманов А. X. Взаимное влияние нескольких одновременно введенных доз разведений туберкулина на проявление аллергических реакций у крупного рогатого скота//Бюлл. ВИЭВ. 1980, т. 38, с. 32—34.

3. Нанманов А. X. Изучение оптимальной дозы ППД-туберкулина для млекопитающих при диагностике туберкулеза у крупного рогатого скота//Бюлл. ВИЭВ. 1980, т. 38, с. 34—38.

4. Найманов А. X. Значение дозы, объема и места введения ППД-туберкулина для млекопитающих при диагностике туберкулеза у крупного рогатого скота//Л1ат. Всесоюзн. научн. конф. «Состояние и перспективы научн. иссл. по диагностике проф. тул. и бруц. и меры борьбы с этими болезнями с.-х. ж-х». — Омск, 20—23 мая 1980 г., с. 120—123.

5. Найманов А. X. Сравнительное изучение внутрикожного и глазного методов применения ПГЩ-туберкулина для млекопитающих//Бюлл. ВИЭВ. 1981, т. 43, с. 12—16.

6. Овдиенко Н. П., Найманов А. X. Изучение динамики аллергических реакций па внутрикожное введение туберкулина для млекопитающих//Бюлл. ВИЭВ. 1983, т. 51, с. 42—46.

7. Овдиенко Н. П., Найманов А. X. Сравнительное изучение диагностической ценности ППД-иальттуберкулина для млекопнтающих//Труды ВИЭВ. 1983, т. 58, с. 10—15.

8. Оздоровление неблагополучных хозяйств от туберкулеза крупного рогатого скота/Щуревский В. Е., Овдиенко Н. П, Кадочкин А. М., Найманов А. X., Манько А. А.//Листовка ГУВ МСХ СССР. — М„ 1984.

9. Аллергическая диагностика туберкулеза крупного рогатого скота./Щу-ревский В. Е., Овдиенко Н. П., Найманов А. X., Якушева О. В.//С6. научн. трудов. Пути ликв. ииф. инваз. болезней с.-х. животных. — Новосибирск, 1985, с. 12—13.

10. Сравнительное испытание туберкулинов для млекопитающих и для птиц на курпном рогатом скоте./Щуревский В. Е., Овдиенко Н. П., Найманов А. X., Якушева О. В., Плотников Э. С., Мустафаев Г. А., Шаров А. Н., Кузин А. И., Кочмарский А. Ф., Тяхнас Т. Т.. Бокун А. О., Пионтковский В. И., Бахтин Д. П., Михайлова К. И.//Труды ВИЭВ. 1985, т. 62, с. 8—20.

11. Белоглазов П. Г., Найманов А. X. Безигольные иньекторы в ветерина-рии//Листовка ГУВ Госагропрома СССР. 1986.

12. Найманов А. X. Сравнительное изучение ППД-туберкулина для млекопитающих и БЦЖ-теста для аллергической диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота//Бюлл. ВИЭВ. 1987, т. 64, с. 19—23.

13. Пальпебральная проба при туберкулезе крупного рогатого скота./Овдиенко Н. П., Нуратинов Р. А., Найманов А. X., Кочаров П. Э.//Ветеринария. 1987, № 5, с. 32.

14. Найманов А. X. Использование БЦЖ-теста для аллергической диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота.//Тезисы докл. III республ. н.-п. конф. «Современ. пробл. профил. зооиозных болезней и пути их решения». — Гродно, 20—21 мая 1987 г. с. 110—111.

15. О кратности введения туберкулина крупному рогатому скоту./Щурев-ский В. Е., Овдиенко Н. П., Найманов А. X., Якушева О. В., Шаров А. Н., Плотников Э. С.//Ветеринария. 1987, № 8, с. 29.

16. Устойчивость к туберкулину быков разных пород в условиях искусственного заражения./Бороздин Э. К.., Исаев М. К., Овдиенко Н. П., Найманов А. X., Косенко В. Й„ Кочаров П. Э., Якушева О. В., Халиков М. X., Нуратинов Р. А., Байтубаев Г. Т., Шувалов В. М., Ерошкин В. Ф., Зимин Г. Я.// Селекция с.-х. ж-.ч на устойчивость к болезням и повышению резистентности в условиях пром. техн. Всерос. НИИ плем. дела. — М., 1988, вып. 8, с. 59.

17. Устойчивость быков некоторых пород и линий к туберкулезу при искусственном заражении. Бороздин Э. К., Исаев М. К.. Овдиенко Н. П., Найманов А. X.. Косенко В. И., Кочаров П. Э., Якушева О. В., Халиков М. X., Нуратинов Р. А., Байтубаев Т. Г., Шувалов В. М., Ерошкин В. Ф., Зимин Г. Я.// Сб. трудов Всерос. НИИ плем. дела. «Исследование высокоценных плем. с.-х. ж-х». — М., 1988, с. 29—36.

18. Выделение микобактерий и чувствительность крупного рогатого скота к туберкулинам./Овдиенко Н. П., Кадочкин А. М., Найманов А. X., Иванова Н. А., Козин А. И., Ткачев-Кузьмин А. В., Косенко В. И., Якушева О. В.//Ветеринария, 1988, № 9, с. 26—28.

19. Найманов А. X., Байтубаев Т. Г., Кочаров П. Э. Дифференциация пост-вакциональных и постинфекционных реакций на туберкулин у молодняка крупного рогатого скота.//Бюлл. ВИЭВ. 1988, т. 66, с. 32—38.

20. Найманов А. X., Байтубаев Т. Г. Иммунизация вакциной БЦЖ против туберкулеза крупного рогатого скота.//Бюлл. ВИЭВ. 1989, т. 67, с. 103—111.

21. Овдиенко Н. П., Найманов А. X. Сравнительная оценка активности ППД-туберкулинов для млекопитающих производства СССР, ЧССР и ГДР.//

Сб. научных трудов ВИЭВСн ДВ «Акт. проблемы туберкул, и бруцел. с.-х ж-х».— Новосибирск, 1989, с. 35—40.

22. Сравнительное испытание активности отечественных и зарубежных ту-беркулинов для млекопитающих/Овдиенко Н. П., Найманов А. X., Плотников Э. С., Якушева О. В., Кадочкип А. М., Землянова В. И., Пионтков-скип В. И., Бахтин Д. П., Дубовой И. С., Кавун И. С.//Ветеринария. 1989, № 10, с. 21—24.

23. Найманов А. X. Совершенствование глазной пробы при диагностике туберкулеза у крупного рогатого скота//Ветеринария. 1990, № 2, с. 30—32.

24. Сравнительная оценка методов заражения морских свинок при диагностике туберкулеза./Овдиенко Н. П., Косенко В. И., Красота Л. А., Найманов А. X., Ашимова К. А., Суворов В. С., Соколова С.//Ветеринария. 1990, № 5, с. 28—30.

25. Найманов А. X., Нуратинов Р. А., Дубовой И. С. Применение диагностических тестов в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах//Ветеринария. 1990, № 1, с. 31—33.

26. Мировое распространение туберкулеза крупного рогатого скота и основные принципы профилактических и противоэпцзоотических мероприятий./ Овиденко Н. П., Ведерников В. А., Найманов А. X., Пыталев П. Н.//Бюлл. ВИЭВ. 1990, т. 73—74, с. 3—23.

27. Найманов А. X., Байтубаев Т. Г., Наурузбекова Г. В. Сравнительная оценка туберкулинов для млекопитающих СССР и Франции.//Бюлл. ВИЭВ.

1990, т. 73—74, с. 24—29.

28. Видовая принадлежность микобактерий, выделяемых от крупного рогатого скота и объектов внешней среды/Овдиенко Н. П., Косенко В. И., Найманов А. X., Антонов Б. И., Гертман М. И.//Проблемы туберкулеза. 1990, № 2, с. 46—48.

29. Видовая принадлежность микобактерий, выделенных от крупного рогатого скота и объектов внешней среды/Овдиенко Н. П., Косенко В. И., Иванова Н. И., Найманов А. X., Кадочкин А. М., Ткачев-Кузьмин А. В.//Мат. объед. пленума проблемной комиссии союзного значения «фтизиатрия» и Узбекской республ. и.-п. конференции. Вопросы борьбы с тубер. людей и ж-х». Медицина. — Ташкент, 1990, с. 96—102.

30. Проблема совершенствования мероприятий по профилактике паратубер-кулеза жнвотных./Овдиенко Н. П., Найманов А. X., Шаров В. А., Григорьева Н. И., Хон Ф. К.//Тезисы докл. III Всесоюзн. конф. по эпизоотологии. — Новосибирск, 24—26 сентября 1991 г., с. 143—144.

31. Особенности проявления аллергических реакций на туберкулин для птиц при паратуберкулезе крупного рогатого скота./Найманов А. X., Якушева О. В., Прокопьева Н. И., Кузин А. Н., Кулькова Л. А.//Труды ВИЭВ. 1991, т. 69, с. 129—136.

32. Найманов А. X., Косенко В. И., Дубовой И. С. Применение «booster effect» при диагностике туберкулеза для довыявления больных туберкулезом животных//Труды ВИЭВ. 1991, "т. 69, с. 136—144.

33. Найманов А. X., Косенко В. И., Якушева О. В. Туберкулез крупного рогатого скота при естественном и искусственном заражении//Труды ВИЭВ.

1991, т. 69, с. 144—150.

34. ППД- и альттуберкулин для птиц при диагностике паратуберкулеза крупного рогатого скота./Найманов А. X., Якушева О. В., Прокопьева Н. И., Кузин А. Н., Кулькова Л. А.//Ветеринария. 1992, № 2, с. 24—26.

35. Найманов А. X., Овдиенко Н. П., Черноусова Л. Н. Влияние внутривенной туберкулиновой пробы на проявление реакций клеточного и гуморального иммунитета у крупного рогатого скота.//Труды ВИЭВ. В печати.

36. Найманов А. X., Овдиенко Н. П., Черноусова Л. Н. Влияние многократного внутрикожного введения туберкулина на состояние реакций клеточного и гуморального иммунитета у крупного рогатого скота.//Труды ВИЭВ. В печати.