Значение изменений состояния системы глутатиона в патогенезе кардиотоксического действия доксорубицина

Аксенов, Владимир Владимирович

Диссертации по медицине → Токсикология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.20) на тему:Значение изменений состояния системы глутатиона в патогенезе кардиотоксического действия доксорубицина

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Аксенов, Владимир Владимирович Санкт-Петербург 2004 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.20

Автореферат диссертации по медицине на тему Значение изменений состояния системы глутатиона в патогенезе кардиотоксического действия доксорубицина

На правах рукописи

АКСЕНОВ

Владимир Владимирович

ЗНАЧЕНИЕ ИЗМЕНЕНИЙ СОСТОЯНИЯ СИСТЕМЫ ГЛУТАТИОНА В ПАТОГЕНЕЗЕ КАРДИОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ДОКСОРУБИЦИНА

Специальность: 14.00.20-токсикология 14.00.29 - гематология и переливание крови

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 2004

Работа выполнена в Военно-медицинском Академии им. С. М.Кирова

Научные руководители:

Доктор медицинских наук, профессор Куценкс Сергей Алексеевич Доктор медицинских наук, профессор Новик Андрей Аркадьевич

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Головко Александр Иванович Доктор медицинских наук Руковицнн Олег Анатольевич

Ведущая организация: институт токсикологии

Зашита диссертации состоится «29» декабря 2004 года в «. и... » часов на заседании диссертационного совета Д 215.002.11 при

Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (адрес: 194044, Санкт-Петербург, ул. Лебедева, д. 6)

С диссертацией возможно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова

Автореферат разослан «

.2004 года

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Ищенко Борис Ионович

$39

wmié

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. В своей клинической практике гематологи и онкологи зачастую сталкиваются с тем, что пациенты погибают не от онкологических заболеваний, а от токсически» осложнений химиотерапии. Одним из грозных осложнений ПХТ является развитие токсической кардиомиопатии у пациентов получающих доксорубицин.

Доксорубицин, является эффективным противоопухолевым антибиотиком антрациклинового ряда, который как в режиме моно терапии, так и в составе более двадцати пяти программ ПХТ используется для лечения более чем тридцати онко-гематологических заболеваний и солидных опухолей.

Обладая высокой эффективностью, доксорубицин, при достижении суммарной дозы 550 мг/м2, а в некоторых наблюдениях даже 400 мг/м2, приблизительно в 10-25% случаев вызывает цитотоксическое повреждение тканей, с преимущественным повреждением миокарда, которое зачастую заканчивается развитием дилятационной кардиомиопатии с фатальной застойной сердечной недостаточностью. Кардиотоксичносгь - дозозависимое и отсроченное осложнение, которое наиболее существенно лимитирует суммарную дозу этого широко применяемого цитостатика.

В настоящее время в качестве средства профилактики поражения кардиомиоцитов доксорубицииом используется кардиоксан. Данный препарат не лишен существенных недостатков: высокая стоимость, наличие собственного цитотоксического воздействия на клетки костного мозга и, как показывают исследования последних лет, низкая кардиопротекторная активность.

Также не лишена ряда недостатков система диагностики и оценки риска развития доксорубициновой кардиомиопатии

- определение активности ЛДГ, КФК, тропонина-Т в плазме крови мало специфично для оценки кардиотоксического действия препарата и

свидетельствует о глубоком повреждении и ги

- признаки кардиотоксичности можно регистрировать с помощью доплер-эхокардиографии со спектральным анализом, при этом выявляются нарушения систолической и диастолической функции левого желудочка (снижение фракции выброса менее 45%), что также свидетельствует об уже мало обратимых фазах повреждения сердечной мышцы.

В основу оптимизации подходов к диагностике, лечению и профилактике доксорубициновой кардиомиопатиии должно лечь углубленное изучение механизмов кардиотоксического действия антрациклинов, более широкий подход к раскрытию патогенеза токсического поражения кардиомиоцитов.

Изучение механизмов цитотоксичности позволяет сделать заключение о том, что, несмотря на большое разнообразие специфических механизмов токсического действия, существует ограниченное число патологических событий, вызывающих поражение и гибель клетки: 1) активация процессов свободнорадикального окисления; 2) повреждающее действие избытка ионов Са2* в клетке; 3) повреждения клеточных мембран; 4)повреждение генетического аппарата клетки; 5) нарушения процессов синтеза белка и клеточного деления; 6) нарушения энергетического обмена. По видимому, некоторые из этих механизмов реализуют цепь патологических событий, приводящую к поражению кардиомиоцитов, а в конечном итоге к развитию застойной сердечной недостаточности.

Интерес настоящего исследования, посвященный изучению состояния системы глутатиона, связан с особой ее ролью в обеспечении нормальной жизнедеятельности клетки. Действительно, система глутатиона принимает участие в ряде биохимических процессов, срыв функционирования которых отмечается и при поражении антрациклинами кардиомиоцитов: в защите от повреждающего действия активных форм кислорода и свободных радикалов; в поддержании тиол-дисульфидного равновесия; в поддержании

восстановленной среды клетки; в регуляции пластического и энергетического

• * л; и<?1

обменов; в регуляции свойств и функций биологических мембран; в синтезе нуклеиновых кислот и белка.

Вторым принципиальным направлением работы является изучение интенсивности протекания процессов перекисного окисления липидов в ряде органов и тканей в условиях острых и повторных отравлений ДР. Причем, ряд авторов отмечает ведущее значение активации процессов пероксидации в патогенезе кардиотоксичности доксорубицина.

При этом наличие взаимосвязи между интенсивностью протекания процессов пероксидации липидов и состоянием системы глутатиона как одной из ведущих составляющих антиоксидантной защиты клетки, ответственной и за регуляцию ПОЛ, придает исследованию особей интерес.

Таким образом, изучение системы глутатиона, играющей важную роль в поддержании нормальной жизнедеятельности организма и обеспечивающей многоуровневую и эффективную защиту тканей от повреждающего действия ксенобиотиков, а также интенсивности ПОЛ в условиях острого и повторного введения ДР, представляется актуальным.

Целью исследования явилось на основе комплексного изучения состояния системы глутатиона и процессов ПОЛ в различных органах лабораторных животных (сердце, печень, почки, головной мозг и эритроциты) при острых отравлениях доксорубицином в дозах 0,3 Ц}» и ЬБ»; при повторном (4-х кратном) введении токсиканта в дозе 0,3 ЦОзо, а также при использовании различных препаратов фармакологической коррекции выявить возможное патогенетическое значение нарушений указанной биохимической системы в формировании доксорубициновой кардиомиопатии и определить возможность использования показателей системы глутатиона в системе лабораторной диагностики риска развития токсических поражений сердца и для оценки кардиопротекторных свойств фармакологических препаратов.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи исследования:

1. выявить характер и динамику изменений показателей системы глугатиона и процессов перекисного окисления липидов в различных органах экспериментальных животных в условиях острых и повторных интоксикаций доксорубицином в различных дозах;

2 определить влияние препаратов фармакологической коррекции на динамику изменений показателей системы глугатиона и процессов перекисного окисления липидов в различных органах экспериментальных животных в условиях острых и повторных интоксикаций доксорубицином;

3 оценить возможности использования определения показателей системы глугатиона и процессов перекисного окисления липидов в эритроцитах для оценки риска развития доксорубиииновой кардиомиопатии.

Практическое значение работы заключается в том, что полученные в ходе диссертационного исследования данные о динамике изменений состояния системы глутатиона и процессов перекисного окисления липидов в эритроцитах лабораторных животных (концентрации малонового диальдегида, восстановленного глутатиона, сульфгидрильных групп белков и активности глюкозо-б-фосфатдегидрогенгзы, глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы) могут стать основой рафаботки новых лабораторных методов оценки риска развития кардиотоксических эффектов у конкретного пациента, получающего доксорубицин, мониторинга кардиотоксичности антрациклинов. Выявленное патогенетическое значение нарушений состояния системы глутатиона в реализации цитотоксических свойств может послужить основанием для поиска новых эффективных средств, обладающих кардиопротекторными свойствами при использовании доксорубицина в онкологической практике. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Отравления доксорубицином сопровождаются развитием в тканях сердца последовательности патологических событий, приводящих к выраженным

нарушениям состояния системы глутатиона и активации процессов ПОЛ. Выраженность и длительность данных изменений зависит от величины введенной дозы токсиканта При однократном введении относительно низких доз токсиканта (03 ЬБзд) изменения носят обратимый характер. Увеличение интенсивности токсической нагрузки или накопление суммарной дозы при повторных введениях ДР приводят к срыву цитопротекорных возможностей системы глутатиона, активации процессов ПОЛ и реализации кардиотоксических эффектов действия цитостатика.

2. Основным механизмом вызывающим истощение функциональных возможностей системы глутатиона при отравлениях доксорубицином, является угнетение активности ферментов восстановления глутатиона из окисленной формы (Г-6-Ф-ДГ, ГР), что приводит к критическому падению уровня восстановленного глутатиона, а затем к снижению активности глутатион-зависимых ферментов антирадикальной защиты, активации свободнорадикальных процессов и гибели кардиомиоцитов.

3. В качестве направлений фармакологической защиты кардиомиоцитов от повреждающего действия цитостатика патогенетически оправдано использование препаратов, действие которых направлено на коррекцию состояния системы глутатиона. Такими направлениями могут явиться: повышение пула ВГ за счет введения экзогенного глутатиона или предшественников его синтеза; компенсация части антиоксидантной нагрузки, приходящейся на систему глутатиона; стимуляция энергетических процессов в кардиомиоцитах. Определение показателей системы глутатиона и интенсивности процессов перекисиого окисления липидов в эритроцитах может быть использовано в качестве патогенетически обоснованного лабораторного метода оценки риска развития доксорубициновой кардиомиопатии.

Апробация работы проведена на Международном симпозиуме «Здоровье и химическая безопасность на пороге XXI века» (Санкт-Петербург, 2000 г.), Российской научной конференции «Медицинские

аспекты радиационной и химической безопасности» (Санкт-Петербург, 2001 г.). Всероссийской научной конференции «Биохимия - Медицине» (Санкт-Петербург, 2002 г.), IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002 г., 2003 г.), III съезде биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002 г.), Национальных днях лабораторной медицины России - 2002 (Москва, 2002 г.). Международном симпозиуме -«Медицинские и биологические проблемы, связанные с уничтожением химического оружия» (Волгоград, 2003 г.), 2-ом съезде токсикологов России - (Москва, 2003 г.), Российском национальном конгрессе кардиологов (г.Томск, 2004 г.).

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 5 глав, включающих обзор литературы, общую характеристику материалов и методов исследования, 2 главы полученных результатов, их обсуждение, заключение и выводы. Работа изложена на 186 страницах машинописного текста, содержит 14 рисунков, 49 таблиц и 2 схемы. Список литературы состоит из 188 источников, из них 35 отечественных и 153 иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Проведенный в обзоре литературы анализ позволил предположить, что состояние системы глутатиона, выполняющей ряд важных функций, направленных на поддержание метаболизма клетки, играет значительную роль в механизме кардиотоксичности антрациклинов. Кроме того, действие препаратов различных фармакологических групп, патогенетически влияющих на состояние системы глутатиона, может быть направлено на коррекцию нарушений исследуемой биохимической системы. Указанные положения были проверены в настоящей работе. Изучали состояние системы глутатиона в ряде органов и тканей белых беспородных крыс в норме, после острого отравления доксорубицином в дозах, соответствующих LD50n 0,3 LD50 (через 3, 6, 12 часов и 1, 3, 5, 7 суток), при повторном (двух-, трех- ,и четырехкратном.) введении токсиканта в дозе

соответствующей 0,3 ЬО}0 с интервалом 7 суток (забой животных производился через 1 сутки после соответствующего введения токсиканта), а также при фармакологической коррекции острых и повторных (четырехкратных) отравлений доксорубицином с использованием препаратов различных фармакологических групп.

Выбор препаратов экспериментальной терапии был основан на сложившихся в настоящий момент представлениях о механизмах кардиотоксического действия доксорубицина, среди которых отмечают: прооксидантное действие образующихся метаболитов токсиканта и АФК; угнетение процессов тканевого дыхания, а также на полученных нами сведениях о роли нарушений процессов обмена глутагаона.

Поэтому были выбрали следующие препараты фармакологической коррекции:

1. Средства, обладающие антиоксидантными и антигипоксантными свойствами - мексидол и цитофлавин.

2. Предшественники глутатиона - ацетилцистеин и изопропиловый эфир глутатиона.

3. Хелаторный агент (и препарат сравнения) - широко применяемый в настоящее время кардиоксан.

Состояние системы глутатиона при отравлениях доксорубицином оценивали в тканях сердца, печени, почек, головного мозга и эритроцитах лабораторных животных на основе исследования уровня низкомолекулярных (восстановленный глутатион) и белковых сульфгидрильных групп, а также активности некоторых ферментов указанной биохимической системы и сопряженных с ней систем:

1) ферментов, участвующих в восстановлении окисленной формы глутатиона: глутатионредуктазы. а также ключевого фермента пентозофосфатного шунта и основного поставщика кофермента глутатионредуктазной реакции НАДФ-Н - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы;

2) глутатионзависимых антиоксидантных ферментов: глутатионпероксидазы и глутатионтрансферазы (рассматривается как фермент репарации ядра), а также основного синергиста глутатионпероксидазы в реакции обезвреживания перекиси водорода -каталазы;

3) фермента глутатионовой конъюгации -глутатионтрансферазы.

Для оценки возможной роли активации процессов перекисного окисления липидов в патогенезе отравлений доксорубицином в исследуемых тканях определяли концентрации первичных и вторичных продуктов ПОЛ -диеновых конъюгат и малонового дигшьдегида. Концентрацию восстановленного глутатиона, сульфгидрильных групп белков, продуктов ПОЛ и активность вышеперечисленных ферментов в исследуемых тканях проводили спектрофотометрическими методами. Выбор этих методов исследования определялся их высокой информативностью и точностью, относительно небольшим количеством необходимого для исследования материала, возможностью проведения обследования всех животных одномоментно по всем вышеперечисленным показателям, кроме того, эти методики могут легко воспроизводиться в любых клинико-диагностических лабораториях, что позволяет проводить сравнение полученных результатов с данными других авторов.

Экспериментальные исследования выполнены на 360 белых беспородных крысах-самцах массой 180-220 г из питомника РАМН "Рапполово". Содержание и использование животных в эксперименте проводилось согласно положениям изложенным в работе И.П.Западнюка (1983). Животные содержались в виварии по 6 особей в клетке Рацион состоял из стандартного гранулированного корма, который они получали 1 раз в сутки с 10.00 до 13.00.

Определение ЬЭ^ для доксорубицина при остром отравлении проводили с использованием "табличного экспресс-метода" го В.Б. Прозоровскому (1994).

Сроки наблюдения за животными составляли 8 суток. Численное значение 1^50 для доксорубицина (в виде 0,2 % водного раствора) при внутривенном введении составило 7,47 мг/кг массы животного. Доксорубицин вводился внутривенно струйно в виде 0,2 % водного раствора в одну из боковых вен хвоста животного. Хвост непосредственно перед введением помещался в сосуд с горячей водой с целью увеличения кровенаполнения вен.

Результаты собственных исследований. Полученные экспериментальные данные позволили установить, что острые отравления ДР сопровождаются следующими изменениями в тканях сердца и в эритроцитах, имеющими дозозависимый характер:

1. снижением концентрации восстановленного глутатиона;

2. снижением содержания сульфгидрильных групп белков;

3. Активацией процессов ПОЛ.

Интоксикация ДР в дозе 7,47 мг/кг массы сопровождалась выраженным снижением содержания ВГ в тканях сердечной мышцы, которое начиналось уже через 3 ч после введения токсиканта (на 22,6% (р<0,05)) и достигало максимума - в 10,56 раза ниже уровня контроля к 7 сут исследования (р<0,05), при этом отсутствовала тенденция к восстановлению.

При использовании ДР в дозе 2,24 мг/кг динамика изменения содержания ВГ носила иной характер, так в первые сутки исследования отмечалось первоначальное снижение содержания ВГ в 2,00 раза (р<0,05), которое, начиная с 3 суток, сменялось отчетливой тенденцией к росту концентрации восстановленной формы трипептида, достигавшей уровня контроля к 5 суткам после введения токсиканта (рис. 1).

100

■ 7,47 мг/кг массы

Зч

'2,24 мг/кг массы

5 сут 7сут

Рис.1 Динамика изменений концентрации ВГ в тканях сердца белых беспородных крыс при остром отравлении доксорубицином в дозах 1ЛЭ50 и

Острое отравление цитостатиком в дозе 0,3 ЦО» приводило к менее выраженному снижению концентрации ВГ в эритроцитах экспериментальных животных. Так, через сутки после начала интоксикации, концентрация восстановленной формы трипептида снижалась всего в 1,57 раза (р<0,05), несмотря на это тенденция к восстановлению содержания ВГ не прослеживалась, и к концу периода наблюдения содержание основного цитопротектора клетки составило 69% от уровня контроля (р<0,05). При введении цитостатика в полулетальной дозе снижение содержания ВГ в эритроцитах животных было еще более выраженным. Данный факт вероятно объясняется более низкой скоростью обмена глутатиона в эритроцитах по сравнению с сердечной мышцей и отсутствием в эритроцитах возможности синтеза глутатиона в у-глутамил-трансферазном цикле. Как и в тканях сердца, данные сдвиги в эритроцитах происходили уже через 3 часа после введения токсиканта.

0,31ЛЭ50

Наличие корреляционной связи между изменениями содержания ВГ в сердечной мышце и в эритроцитах лабораторных животных может быть положено в основу использования определения данного показателя в эритроцитах пациентов в качестве лабораторного теста оценки риска развития доксорубициновой кардиомиопатии. Что особенно актуально ввиду отсутствия в настоящее время патогенетически обоснованных методов раннего выявления повреждения кардиомиоцитов в условиях применения доксорубицина.

В проведенном исследовании интенсивность протекания процессов перекисного окисления липидов в тканях отравленных животных оценивалась по содержанию малонового диальдегида и диеновых коньюгат. Анализ данных, полученных в различные сроки исследования при использовании обеих доз токсиканта, не выявил статистически значимых изменений концентрации диеновых коньюгат. Тем не менее, наблюдалось повышение содержания малонового диальдегида в тканях сердца отравленных животных в первые 12 ч после введения ДР в дозе 7,47 мг/кг и в первые 6 ч при использовании токсиканта в дозе 2,24 мг/кг (рис. 2). Эти сведения указывают на существенную значимость активации процессов перекисного окисления липидов в патогенезе поражения сердечной мышцы только в первые часы токсического воздействия доксорубицина.

Длительное сохранение концентрации ВГ на крайне низком уровне (вплоть до 7 суток при использовании полулетальных доз токсиканта) может стать следствием включения в токсический процесс иных механизмов действия ДР, таких как нарушение процессов синтеза глутатиона и восстановления его из окисленной формы - как следствие прямого повреждения ферментов обмена глутатиона и (или) генетического аппарата клетки, ответственного за синтез этих ферментов, активными метаболитами токсиканта. В эритроцитах отравленных животных также отмечался статистически значимый рост содержания малонового диальдегида только в начальной фазе интоксикации доксорубицином.

беспородных крыс при остром отравлении доксорубицином в дозах 1^50 и

0,3 ЬО50

Проведенное исследование позволило выявить существенное угнетение активности Г-6-Ф-ДГ в тканях сердечной мышцы отравленных животных.

Так, при введении доксорубицина з дозе ПЭ^ отмечалось прогрессирующее снижение активности Г-6-Ф-ДГ', достигавшее максимума к 7 сут - в 3,04 раза ниже уровня контроля(р<0,05).

Угнетение активности ключевого фермента пентозофосфатного шунта происходило и при использовании цитостатика в меньшей дозе. Однако оно было более умеренным и носило обратимый характер. Действительно, после первоначального максимального снижения в 2,54 раза через 3 ч после введения ДР (р<0,05), активность Г-6-Ф-ДГ в более поздние сроки наблюдения возрастала и к 7 сут составляла 68,2 % от уровня контроля (р<0,05) (рис. 4). По-видимому, частичное восстановление активности этого фермента, играющего по мнению Л.А.Тиунова (1995) роль лимитирующего звена в обмене

глутатиона, является ведущей причиной нормализации уровня ВГ в ткани сердечной мышцы к 5 сут при использовании доксорубицина в этой дозе. При острой интоксикации доксорубицином было выявлено и снижение активности глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы, глутатионтрансферазы.

Приведенные ранее данные экспериментального исследования позволили сделать предположение, что эффект кумуляции токсического поражения кардиомиоцитов обусловлен в первую очередь повреждающим воздействием ДР на систему глутатиона, а именно на ее ферментное звено, как следствие прямого повреждения ферментов обмена глутатиона и (или) генетического аппарата клетки, ответственного за синтез этих ферментов.

Это предположение мы проверили в эксперименте на разработанной нами модели четырехкратной доксорубициновой интоксикации, в которой дозы и сроки введения цитостатика животным имитировали таковые у человека в процессе лечения (доксорубицин вводился одно-, двух-, трех- и четырехкратно в дозе 2,24 мг/кг с интервалом в 7 суг в хвостовую вену лабораторных животных). Исследование системы глутатиона производилось через 1 сутки после очередного введения цитостатика.

Действительно эффекты кумуляции ДР отчетливо прослеживались в виде усиления угнетающего воздействия токсиканта на концентрацию восстановленной формы трипептида и сульфгидрильных групп белков в тканях сердца при повторном введении цитостатика.

Так, в процессе исследования было выявлено прогрессирующее снижение содержания ВГ в 'тканях сердца экспериментальных животных при каждом последующем введении препарата. Если через 1 сутки после однократного введения токсиканта содержание основного цитопротектора клетки уменьшалось в 1,58 раза (р<0,05), то после трехкратного введения в 1,89 раза (р<0,05), а после четырехкратного введения в 2,21 раза (р<0,05), ниже уровня контроля (рис. 3).

Э0

9«

25 контр

•СЕРДЦЕ

-ЭРИТРОЦИТЫ

4-кр

Рис.3 Динамика изменений содержания ВГ в сердце и эритроцитах животных через 24 часа после повторного введения доксорубицина в дозе

0,3 1ЛЭ50 с интервалом 7 суток Между содержанием восстановленного глутатиона в тканях сердца и в эритроцитах отравленных животных через сутки после повторных воздействий токсиканта выявлена сильная, положительная корреляционная связь (коэффициент корреляции +0,95).

Проведенное исследование позволило установить, что повторное введение токсиканта сопровождалось прогрессирующим ростом содержания МДА в тканях сердца и в эритроцитах отравленных животных.

Каждое последующее введение доксорубицина вызывало прогрессирующее угнетение активности Гл-бФ-ДГ в тканях сердца. Так, если через сутки после однократного введения препарата снижение активности ключевого фермента пентозофосфатного шунта было умеренным - в 1,34 раза от контрольных значений (р<0,05), то через сутки после четырехкратного введения активность снижалась в 2,06 раза (р<0,05). Еще более выраженное угнетение активности глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы наблюдалось в эритроцитах, где активность этого фермента после четырех кратного введения доксорубицина снижалась в 2,50 раза (р<0,05). Также было выявлено

прогрессирующее угнетение активности глутатионредуктазы, глугатионпероксидазы, глутатионтрансферазы.

Проведенный анализ литерат>ры, результаты исследований, приведенные в предыдущей главе, совершенно определенно указывают на важное значение изменений состояния системы глутатиона в механизмах кардиотоксичности доксорубицина. Данный факт позволил патогенетически обосновать целесообразность коррекции нарушений состояния системы глутатиона и определил выбор фармакологических препаратов, оказывающих прямое или опосредованное влияние на состояние данной биохимической системы:

1. Использование препаратов обладающих антиоксидантными I свойствами - мексидол (синтетический антиоксидант, обладающий

выраженным антиоксидангным и мембранопротективным действием, в отличие от аскорбата, токоферола в клетке не требуется дополнительный расход восстановленных валентностей на его восстановление из окисленной формы);

2. Использование препаратов, действие которых связано с коррекцией системы глутатиона путем восстановления пула ВГ:

- экзогенным глутатионом (изопропиловый эфир глутатиона, который в отличие от ВГ хорошо проникает в клетку; цитопротекторные свойства эфиров глутатиона при доксорубициновой интоксикации показаны в работах Mohamed Н.Е. et al. - 2002, Powell S.K. et al. - 1995)

- предшественником его синтеза (N - ацетилцистеин), который по данным Fadilloglu Е. . et al. - 2003. Tu V.C. et al. - 2002, Conaze V. et al. - 2001 существенно снижает кардиэтоксичность ДР, а по данным D'Agostini et al. -2002 не влияет на противоопухолевую активность доксорубицина и более того демонстрирует свойства угнетения опухолевого роста не только на ранних стадиях канцерогенеза, но и при развитии метастазирования (на примере В16-BL6 melanoma);

3. Использование препарата, действие которого направленно на снятие деэнергизации кардиомиоцитов, в связи с большой энергоемкостью процессов red-ох-циклирования глутатиона и синтеза его de novo -цитофлавин, тем более что имеются сведения о его иитопротекторных свойствах, антиоксидантной активности и положительном эффекте у больных инфарктом миокарда; 4 В качестве препарата сравнения использовался хелаторный агент кардиоксан.

Результаты проведенного исследования показали, что при однократном введении ДР в дозе 2,24 мг/кг АЦЦ, цитофлавин, изопропиловый эфир глутатиона, мексидол, кардиоксан оказывали положительное влияние на состояние системы глутатиона в тканях сердца, а ацетилцисгтеин, цитофлавин и изопропиловый эфир глутатиона и в эритроцитах.

Проведенное исследование по фармакологической коррекции при острой интоксикации доксорубицином в дозе 0,3 LDjo, хотя и показало перспективность выбранных направлений кардиопротекции, тем не менее в полной мере ответить на вопрос о том на сколько эти препараты эффективно защищают миокард от кумулятивных эффектов ДР не может по двум причинам:

1. доксорубициновая кардиомиопатия это отсроченное и дозозависимое осложнение;

2. в клинической практике антрациклины применяются либо в режиме моно I терапии, либо в составе программ ПХТ кубами с интервалами между очередными введениями чаще всего от 2 до 4 недель.

Поэтому нам было важно оценить возможности препаратов, оказывающих влияние на систему глутатиона, прямых антиоксидантов по защите от кардиотоксичности доксорубицина на модели четырехкратного внутривенного введения цитостатика.

Наиболее выраженные цитопротеторные свойства в условиях повторной интоксикации цитостатиком показали изопропиловый эфир глутатиона.

цитофлавин и ацетилцистеин.

Действительно, профилактическое применение эфира глутатиона позволяло полностью исключить падение уровня основного цитопротектора клетки в эритроцитах отравленных животных. В тканях сердца концентрация ВГ была в 1,22 раза ниже уровня контроля, но это отличие не было статистически достоверно (р>0.05), в отличие от группы животных не получавших лечение (снижение уровня ВГ в 2,21 раза (р<0.05) по сравнению с группой контроля).

Назначение цитофлавина, позволяло предупредить двукратное снижение уровня восстановленного глутатиона в тканях сердца. Цитофлавин полностью предотвращал снижение концентрации основного цитопротектора клетки в тканях печени и в эритроцитах.

Цитофлавин - единственный из препаратов фармакологической коррекции, включенных в исследование, позволял статистически достоверно уменьшить снижение концентрации сульфгидрильных групп белков в тканях сердца, отмеченное после четырехкратного введения ДР в группе животных без лечения (снижение по сравнению с контрольным значением в 1,54 раза у не леченных животных и в 1,27 раза у животных получавших цитофлавин -достоверность различия между группами (р<0,05)). В отличие, от кардиоксана и мексидола полностью предотвращал снижение содержания SH - групп белков в эритроцитах.

Хотя профилактическое введение ацетил цистеина не позволяло исключить снижение содержания ВГ, отмечавшееся у не леченных животных в тканях сердца. Тем не менее, падение концентрации основного цитопротектора клетки в группах леченных животных было менее выраженным чем в группе животных не получавших лечение - в 1,50 раза для мексидола, в 1,28 раза для АЦЦ и в 2,28 у не леченных животных (различия между группами животных получавших лечение и группой получавшей только ДР достоверны (р<0,05)). Профилактическое введение ацетилцистеина снижало интенсивность протекания процессов ПОЛ в тканях сердца и печени, причем в тканях

сердца при назначении ацетилцистенна отличия в содержании ТБК реагирующих продуктов по сравнению с этим показателем у не леченных животных были статистически достоверные Профилактическое назначение этих лекарственных средств оказало положительное влияние и на ферментативное звено системы глутатиона, причем как на ферменты восстановления ВГ, так и на глутатион зависимые ферменты антирадикальной защиты.

В этом ряду наибольший интерес представляет адетилцистеин, так как имеются сведения о том, что это лекарственно!: средство не только не влияег на противоопухолевую активность доксорубицина, но и препятствует, по данным 0'А§о5Пш е1 а1. - 2002, метостазированию некоторых опухолей у животных. Кроме того, не высокая цена АЦЦ я аптечной сети делает возможным широкое применение данного препарата. Это указывает на перспективность дальнейших исследований кардиопротективных свойств ацгтилциелейна при использовании антибиотиков антрациклинового ряда в онкологической практике.

Выводы

1. Нарушения системы глутатиона заним.аюг важное место в патогенезе развития доксорубициновой кардиомиопатии. В условиях токсического воздействия доксорубицином в тканях сердца происходит выраженное падение уровня восстановленного глутатиона и сульфгидрильных групп белков, угнетение активности ферментов восстановления глутатиона (Г-6-Ф-ДГ и ГР), снижение активности глутатион-зависимых ферментов антирадикальной защиты и накопление продуктов ПОЛ.

2. Выраженность и длительность данных изменений зависит от величины введенной дозы токсикант« или накопление суммарной дозы при повторных введениях ДР. Та», при острой интоксикации доксорубицидом в дозе ИЗ» снижение уровня ВГ отмечалось уже через 3 часа после воздействия токсиканта, то на 7 сугки после введения цитостатика было ниже уровня интактного контроля в 10.6 раза, а если через 1 сутки после однократного введении доксорубицина содержание основного

цитопротектора клетки уменьшалось в 1,58 раза (р<0,05), то после четырехкратного введения в 2,21 раза (р<0,05), ниже уровня контроля.

3. При однократном введении относительно низких доз токсиканта (0.3 1Х)5о) изменения носят обратимый характер. Увеличение интенсивности токсической нагрузки или накопление суммарной дозы при повторных введениях ДР приводят к усиления угнетающего воздействия токсиканта на активность ферментов восстановлен ня глутатиона в ткани сердечной мышцы, вследствие чего происходит прогрессирующее снижение содержания основного цитопротектора клетки, угнетение активности глутатион-зависимых ферментов антирадикальной защиты, срыв цитопротекторных возможностей системы глутатиона, что приводит к активации процессов свободнорадикального окисления, повреждению и гибели кардиомиоцитов.

4. В качестве направлений фармакологической защиты кардиомиоцитов от повреждающего действия цитостатика патогенетически оправдано использование препаратов, действие которых направлено на коррекцию состояния системы глутатиона. Такими направлениями могут явиться: повышение пула ВГ за счет введения экзогенного глутатиона или предшественников его синтеза (АЦЦ, ичопропиловый эфир глутатиона); компенсация части антиоксидантной нагрузки, приходящейся на систему глутатиона, за счет антиоксидантов (мексидол); стимуляция энергетических процессов в кардиомиоцитах, в том числе и с целью активации гес)-ох-циклирования глутатиона и его синтеза (цитофлавин).

5. Определение показателей системы глутатиона и интенсивности процессов перекисного окисления липвдов в эритроцитах (концентрации ВГ, СГ, МДА и активности Г-6-Ф-ДГ, ГР, ГП, ГТ, катал азы) может быть использовано в качестве патогенетически обоснованного лабораторного метода оценки риска развитая доксорубициновой кардиомиопатии.

Практические рекомендации:

1. Динамическое определение в тканях сердца и эритроцитах лабораторных животных показателей, характеризующих состояние системы глутатиона и процессов ПОЛ: концентрации малонового диальдегида, восстановленного глутатиона, сульфгидрильных групп белков, активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы и глутатион-Б-трансферазы информативно для оценки риска развития доксорубициновой кардиомиопати. Следует рекомендовать проведение исследования с использованием динамического определения данных показателей при проведении программ химиотерапии, включающих ДР, для разработки диагностических алгоритмов оценки риска отсроченной кардиотоксичности доксорубицина, и ранней диагностики этого тяжелого осложнения.

2. Показатели, характеризующие состояние системы глутатиона и процессов перекисного окисления липидов, могут быть использованы при поиске новых средств фармакологической защиты от кардиотоксического воздействия доксорубицина.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Состояние системы глутатиона в тканях сердца при острых отравлениях доксорубицином. Тезисы научных докладов III съезда биохимического общества, 26 июня - 1 июля 2002 г.- СПб.- 2002.- С. 132. (соавт. Глушков С.И., Новик A.A., Кашуро В.А.

2. Нарушения состояния системы глутатиона как основа реализации цитотоксических эффектов действия ксенобиотиков. Медико-гигиенические аспекты обеспечения работ с особо опасными химическими веществами /Труды научно-практической конференции, посвященной 40-летию НИИГПЭЧ.- СПб.- 2002.- С.228-229. (соавт. КуценкоС.А., Карпищенко А.И., Глушков С.И., Башарин В. А., Кашуро В.А., Новикова Т.М.).

3. Состояние системы глутатиона в тканях печени крыс при острых отравлениях циклофосфаном. Токсикологический вестник.- 2003.- N.4.- С.25-30. (соавт. Куценко С.А., Карпищенко А.И., Кашуро В.А., Новикова Т.М., Глушков С.И., Лавлинский А.Д.).

4. Экспериментальная оценка возможности использования показателей системы глутатиона в лабораторной диагностике отравлений ипритами. Там же.-С.229-230. (соавт. Кашуро В.А., Глушков С.И., Карпищенко А.И., Куценко С.А., Новикова Т.М.).

5. Влияние цитофлавина на состояние системы глутатиона в сердечной мышце при острых отравлениях доксорубицином. Тезисы докладов X Российского национального конгресса «Человек и лекарство», 7-11 апреля 2003 г.- М.- 2003.-С.570. (соавт. Глушков С.И., Новикова Т.М., Новик A.A.).

6. Система глутатиона в оценке средств коррекции доксорубициной кардиомиопатии. Там же.- С.570-571. (соавт. Глушков С.И., Новикова Т.М., Новик A.A.).

7. Фармакологическая коррекция системы глутатиона - перспективное направление профилактики и терапии острых и повторных отравлений нейро- и цитотоксикантами. «Медицинские и биологические проблемы, связанные с уничтожением химического оружия». Тезисы докладов международного симпозиума. Волгоград 26-28 августа 2003 года -Волгоград.- 2003.- С.215. (соавт. Кашуро В.А., Куценко С.А., Глушков С.И., Новикова Т.М., Ковтун В.Ю.).

8. Система глутатиона как перспективное направление изучения цитотоксических эффектов действия ксенобиотиков. Тезисы докладов 2-го съезда токсикологов России.- М: Российский регистр потенциально опасных химических и биологических веществ Минздрава России, 2003.- С.77-78. Куценко С.А., Новикова Т.М., Глушков С.И., Кашуро В.А.соавт. Куценко С.А., Новикова Т.М., Глушков С.И., Кашуро В.А.).

9. Pharmacological correction of glutathione system as a promising aim of prophylaxis and therapy of acute and repeated poisonings by neuro- and cytotoxicants. Medical and Biological Aspects of Chemical Weapons Stockpile Demilitarization, lntematonal Symposium Proceedings. Volgograd, August 26-28, 2003.- Volgograd.- P.67. (соавт. Kashuro V.A., Kutsenko S.A., Glushkov S.I., Novikova T.M., Kovtun V.Y.).

10. Влияние препарата «Мексидол» на содержание в тканях сердца лабораторных животных малонового диальдегида и глутатиона при повторной интоксикации доксорубицином в дозе 0,3 Медико-биологические проблемы противолучевой и протвохимической защиты.-Спб.: ООО «Издательство Фолиант», 2004.- С. 358-359. (соавт. Куценко С.А., Глушков С.И., Новикова Т.М., Кашуро В.А., Смирнов Л.Д.).

11. Новые направления поиска средств профилактики развития доксорубициновой кардиомиопатии. Бюллетень научно-исследовательского института кардиологии им. В.А.Алмазова.- 2004,- Т. 2, N. 1,- С.196. (соавт. Новикова Т.М., Глушков С.И.).

12. Определение показателей состояния системы глутатиона в эритроцитах как диагностический прием оценки риска формирования доксорубициновой кардиомиопатии. Там же,- С. 196. (соавт. Новикова Т.М., Глушков С.И.).

13. Нарушения состояния системы глутатиона в патогенезе развития доксорубициновой кардиомиопатии. Российский национальный конгресс кардиологов 12-14 октября 2004 г., г.Томск, (соавт. Новикова Т.М., Глушков С.И., Лавлинский А.Д.).

14. Сравнительная оценка состояния системы глутатиона в сердечной мышце и в эритроцитах при формировании экспериментальной доксорубициновой кардиомиопатии. Российский национальный конгресс кардиологов 12-14 октября 2004 г., г.Томск, (соавт. Новикова Т.М., Глушков С.И., Лавлинский А.Д.).

Подписано в печать 2 04

Объем пл._Тираж юс экз.

Формат 60x84'/, Заказ № та

Типография ВМедА, 194044, СПб., ул. Академика Лебедева, 6

Р2 7 О 57

РНБ Русский фонд

2006-4 439

Оглавление диссертации Аксенов, Владимир Владимирович :: 2004 :: Санкт-Петербург

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Некоторые аспекты кардиотоксичности доксорубицина

1.2. Система глутатиона и ее биологическое значение

1.3 Роль системы глутатиона в патогенезе кардиотоксического действия доксорубицина.

1.4 Фармакологическая защита кардиомиоцитов от повреждающего действия доксорубицина

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Выбор и содержание животных

2.2. Методика проведения токсикологических экспериментов

2.3 .Характеристика использованных фармакологических препаратов

2.4. Получение материалов тканей для исследований

2.5. Определение показателей системы глутатиона и продуктов ПОЛ в тканях и в эритроцитах лабораторных животных

Глава 3. ВЛИЯНИЕ ОСТРЫХ И ПОВТОРНЫХ ИНТОКСИКАЦИЙ ДОКСОРУБИЦИНОМ НА СОСТОЯНИЕ СИСТЕМЫ ГЛУТАТИОНА И ИНТЕНСИВНОСТЬ ПРОЦЕССОВ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ

В ТКАНЯХ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ

3.1. Влияние острой интоксикации доксорубицином на состояние системы глутатиона и интенсивность процессов перекисного окисления липидов в тканях лабораторных животных

3.1.1. Изучение динамики концентрации восстановленного глутатиона, сульфгидрильных групп белков и концентрации продуктов перекисного окисления липидов в тканях различных органов экспериментальных животных с острыми отравлениями доксорубицином

3.1.1.1. Динамика содержания восстановленного глутатиона в органах и тканях экспериментальных животных

3.1.1.2. Динамика содержания сульфгидрильных групп белков в органах и тканях экспериментальных животных

3.1.1.3. Динамика содержания малонового диальдегида в органах и тканях экспериментальных животных

3.1.2. Изучение динамики активности ферментов системы глутатиона в тканях различных органов экспериментальных животных с острыми отравлениями доксорубицином

3.1.2.1. Динамика активности ферментов, участвующих в восстановлении глутатиона из окисленной формы (глутатионредуктазы и глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы) в тканях различных органов экспериментальных животных с острыми отравлениями доксорубицином

3.1.2.1.1. Динамика активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в тканях различных органов экспериментальных животных с острыми отравлениями доксорубицином

3.1.2.1.2. Динамика активности глутатионредуктазы в тканях различных органов экспериментальных животных с острыми отравлениями доксорубицином

3.1.2.2. Динамика активности ферментов антиоксидантной защиты (глутатионпероксидазы, глутатион-Б-трансферазы и каталазы) в тканях различных органов экспериментальных животных с острыми отравлениями доксорубицином

3.2. Влияние повторной интоксикации доксорубицином на состояние системы глутатиона и интенсивность процессов перекисного окисления липидов в тканях лабораторных животных

3.2.1. Влияние повторной интоксикации доксорубицином на концентрацию восстановленного глутатиона, сульфгидрильных групп белков в тканях лабораторных животных

3.2.2. Влияние повторной интоксикации доксорубицином на концентрацию малонового диальдегида в тканях лабораторных животных

3.2.3. Влияние повторной интоксикации доксорубицином на активность ферментов восстановления глутатиона (глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназа, глутатионредуктаза) в тканях лабораторных животных

3.2.4. Влияние повторной интоксикации доксорубицином на активность глутатион зависимых ферментов антирадикальной защиты (глутатионпероксидаза, глутатион -S-трансфераза) и активность каталазы в тканях лабораторных животных

ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТОВ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ НА СОСТОЯНИЕ СИСТЕМЫ ГЛУТАТИОНА И ИНТЕНСИВНОСТЬ ПРОЦЕССОВ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ В ТКАНЯХ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ОСТРЫХ И

ЧЕТЫРЕХКРАТНЫХ ИНТОКСИКАЦИЯХ ДОКСОРУБИЦИНОМ

4.1. Влияние препаратов фармакологической коррекции на состояние системы глутатиона и интенсивность процессов перекисного окисления липидов в тканях сердца и в эритроцитах лабораторных животных при острой интоксикации доксорубицином в дозе 0,3 LD

4.1.1. Влияние изопропилового эфира глутатиона на состояние системы глутатиона и интенсивность протекания процессов ПОЛ в тканях сердца и в эритроцитах лабораторных животных при острой интоксикации доксорубицином в дозе 0,3 LD

4.1.2. Влияние ацетилцистеина и мексидола на состояние системы глутатиона и интенсивность протекания процессов ПОЛ в тканях сердца и в эритроцитах лабораторных животных при острой интоксикации доксорубицином в дозе 0,3 LD

4.1.3. Влияние цитофлавина на состояние системы глутатиона и интенсивность протекания процессов ПОЛ в тканях сердца и в эритроцитах лабораторных животных при острой интоксикации доксорубицином в дозе 0,3 LD

4.1.4. Влияние кардиоксана на состояние системы глутатиона и интенсивность протекания процессов ПОЛ в тканях сердца и в эритроцитах лабораторных животных при острой интоксикации доксорубицином в дозе 0,3 LD5o

4.2. Влияние препаратов фармакологической коррекции на состояние системы глутатиона и интенсивность процессов перекисного окисления липидов в тканях различных органов лабораторных животных при повторной интоксикации доксорубицином в дозе 0,3 LD5o

4.2.1 Влияние изопропилового эфира глутатиона на состояние системы глутатиона и интенсивность процессов перекисного окисления липидов в тканях различных органов лабораторных животных при повторной интоксикации доксорубицином в дозе 0,3 LD5o

4.2.2 Влияние ацетилцистеина и мексидола на состояние системы глутатиона и интенсивность процессов перекисного окисления липидов в тканях различных органов лабораторных животных при повторной интоксикации доксорубицином в дозе 0,3 LD

4.2.3 Влияние цитофлавина на состояние системы глутатиона и интенсивность процессов перекисного окисления липидов в тканях различных органов лабораторных животных при повторной интоксикации доксорубицином в дозе

0,3LD

4.2.4 Влияние кардиоксана на состояние системы глутатиона и интенсивность процессов перекисного окисления липидов в тканях различных органов лабораторных животных при повторной интоксикации доксорубицином в дозе

0,3LD

Введение диссертации по теме "Токсикология", Аксенов, Владимир Владимирович, автореферат

Актуальность. В своей клинической практике гематологи и онкологи зачастую сталкиваются с тем, что пациенты погибают не от онкологических заболеваний, а от токсических осложнений химиотерапии. Одним из грозных осложнений ПХТ является развитие токсической кардиомиопатии у пациентов получающих доксорубицин.

Доксорубицин является эффективным противоопухолевым антибиотиком антрациклинового ряда, который как в режиме моно терапии, так и в составе более двадцати пяти программ ПХТ используется для лечения более чем тридцати онко-гематологических заболеваний и солидных опухолей.

Обладая высокой эффективностью, доксорубицин, при достижении суммарной дозы 550 мг/м", а в некоторых наблюдениях даже 400 мг/м", приблизительно в 10-25% случаев вызывает цитотоксическое повреждение тканей, с преимущественным повреждением миокарда, которое зачастую заканчивается развитием дилятационной кардиомиопатии с фатальной застойной сердечной недостаточностью. Кардиотоксичность — дозозависимое и отсроченное осложнение, которое наиболее существенно лимитирует суммарную дозу этого широко применяемого цитостатика.

В настоящее время в качестве средства профилактики поражения кардиомиоцитов доксорубицином используется кардиоксан. Данный препарат не лишен существенных недостатков: высокая стоимость, наличие собственного цитотоксического воздействия на клетки костного мозга и, как показывают исследования последних лет, низкая кардиопротекторная активность.

Также не лишена ряда недостатков система диагностики и оценки риска развития доксорубициновой кардиомиопатии:

- определение активности ЛДГ, КФК, тропонина-Т в плазме крови мало специфично для оценки кардиотоксического действия препарата и свидетельствует о глубоком повреждении и гибели кардиомиоцитов;

В основу оптимизации подходов к диагностике, лечению и профилактике доксорубициновой кардиомиопатии должно лечь углубленное изучение механизмов кардиотоксического действия антрациклинов, более широкий подход к раскрытию патогенеза токсического поражения кардиомиоцитов.

Изучение механизмов цитотоксичности позволяет сделать заключение о том, что, несмотря на большое разнообразие специфических механизмов токсического действия, существует ограниченное число патологических событий, вызывающих поражение и гибель клетки: 1) активация процессов свободнорадикального окисления; 2) повреждающее действие избытка ионов Са" в клетке; 3) повреждения клеточных мембран; 4) повреждение генетического аппарата клетки; 5) нарушения процессов синтеза белка и клеточного деления; 6) нарушения энергетического обмена [4, 10, 15, 23]. Видимо, некоторые из этих механизмов реализуют цепь патологических событий, приводящую к поражению кардиомиоцитов, а в конечном итоге к развитию застойной сердечной недостаточности.

Вторым принципиальным направлением работы является изучение интенсивности протекания процессов перекисного окисления липидов в ряде органов и тканей в условиях острых и повторных отравлений ДР. Причем, ряд авторов [32, 50, 119] отмечает ведущее значение активации процессов пероксидации в патогенезе кардиотоксичности доксорубицина.

Целью исследования явилось на основе комплексного изучения состояния системы глутатиона и процессов ПОЛ в различных органах лабораторных животных при острых и повторных интоксикациях доксорубицином определить значение изменений состояния системы глутатиона в патогенезе доксорубициновой кардиомиопатии. Выявить возможность использования показателей данной биохимической системы для оценки эффективности различных препаратов фармакологической коррекции и в системе лабораторной диагностики риска развития токсических поражений сердца при использовании доксорубицина.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи исследования:

1. выявить характер и динамику изменений показателей системы глутатиона и процессов перекисного окисления липидов в различных органах экспериментальных животных при острых и повторных интоксикаций доксорубицином в различных дозах;

2. определить влияние препаратов фармакологической коррекции на динамику изменений показателей системы глутатиона и процессов перекисного окисления липидов в различных органах экспериментальных животных при острых и повторных интоксикаций доксорубицином;

3. оценить возможности использования определения показателей системы глутатиона и процессов перекисного окисления липидов в эритроцитах для оценки риска развития доксорубициновой кардиомиопатии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Отравления доксорубицином сопровождаются развитием в тканях сердца последовательности патологических событий, приводящих к выраженным нарушениям состояния системы глутатиона и активации процессов ПОЛ. Выраженность и длительность данных изменений зависит от величины введенной дозы токсиканта. При однократном введении относительно низких доз токсиканта (0,3 LD50) изменения носят обратимый характер. Увеличение интенсивности токсической нагрузки или накопление суммарной дозы при повторных введениях ДР приводят к срыву цитопротекорных возможностей системы глутатиона, активации процессов ПОЛ и реализации кардиотоксических эффектов действия цитостатика.

2. Основным механизмом, вызывающим истощение функциональных возможностей системы глутатиона при отравлениях доксорубицином, является угнетение активности ферментов восстановления глутатиона из окисленной формы (Г-6-Ф-ДГ, ГР), что приводит к критическому падению уровня восстановленного глутатиона, а затем к снижению активности глутатион-зависимых ферментов антирадикальной защиты, активации свободнорадикальных процессов и гибели кардиомиоцитов. 3. В качестве направлений фармакологической зашиты кардиомиоцитов от повреждающего действия цитостатика патогенетически оправдано использование препаратов, действие которых направлено на коррекцию состояния системы глутатиона. Такими направлениями могут явиться: повышение пула ВГ за счет введения экзогенного глутатиона или предшественников его синтеза; компенсация части антиоксидантной нагрузки, приходящейся на систему глутатиона; стимуляция энергетических процессов в кардиомиоцитах. Определение показателей системы глутатиона и интенсивности процессов перекисного окисления липидов в эритроцитах может быть использовано в качестве патогенетически обоснованного лабораторного метода оценки риска развития доксорубициновой кардиомиопатии.

Научная новизна.

Впервые проведена комплексная оценка состояния системы глутатиона, сопряженных биохимических систем и процессов перекисного окисления липидов в тканях сердца, печени, почек, головного мозга и в эритроцитах лабораторных животных при острых отравлениях доксорубицином в различных дозах в сроки от 3 часов до 7 суток, при повторном введении цитостатика в дозе 2,24 мг/кг и при использовании некоторых средств фармакологической коррекции. Проведен анализ причин, вызывающих нарушения состояния системы глутатиона и активацию процессов перекисного окисления липидов при воздействии доксорубицина. Показано наличие патогенетической связи между глубиной и длительностью угнетения активности ферментов восстановления глутатиона из окисленной формы (Гл-6-ф-ДГ, ГР) и сниженим функциональной активности системы глутатиона, приводящих к реализации кардиотоксичности ДР. Обоснованы некоторые патогенетические направления цитопротекции в профилактике кардиотоксичности доексорубицина, а также перспективность использования определения ряда показателей системы глутатиона и процессов ПОЛ в эритроцитах пациентов с диагностическими и прогностическими целями.

Практическое значение работы заключается в том, что полученные в ходе диссертационного исследования данные о динамике изменений состояния системы глутатиона и процессов перекисного окисления липидов в эритроцитах лабораторных животных (концентрации малонового диальдегида, восстановленного глутатиона, сульфгидрильных групп белков и активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы) могут стать основой разработки новых лабораторных методов оценки риска развития кардиотоксических эффектов у конкретного пациента, получающего доксорубицин, мониторинга кардиотоксичности антрациклинов. Выявленное патогенетическое значение нарушений состояния системы глутатиона в реализации цитотоксических свойств может послужить основанием для поиска новых эффективных средств, обладающих кардиопротекторными свойствами при использовании доксорубицина в онкологической практике.

Апробация работы проведена на Российской научной конференции «III съезде биохимического общества» (Санкт-Петербург, 2002 г.), IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002 г., 2003 г.), Национальных днях лабораторной медицины России — 2002 (Москва, 2002 г.). Международном симпозиуме - «Медицинские и биологические проблемы, связанные с уничтожением химического оружия»

Волгоград, 2003 г.), 2-ом съезде токсикологов России — (Москва, 2003 г.), Российском национальном конгрессе кардиологов (г.Томск, 2004 г.).

Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 15 работ.

Заключение диссертационного исследования на тему "Значение изменений состояния системы глутатиона в патогенезе кардиотоксического действия доксорубицина"

125 ВЫВОДЫ

1. Нарушения системы глутатиона занимают важное место в патогенезе развития доксорубициновой кардиомиопатии. В условиях токсического воздействия доксорубицином в тканях сердца происходит выраженное падение уровня восстановленного глутатиона и сульфгидрильных групп белков, угнетение активности ферментов восстановления глутатиона (Г-6-Ф-ДГ и ГР), снижение активности глутатион-зависимых ферментов антирадикальной защиты и накопление продуктов ПОЛ.

2. Выраженность и длительность данных изменений зависит от величины введенной дозы токсиканта или накопление суммарной дозы при повторных введениях ДР. Так, при острой интоксикации доксорубицином в дозе LD50 снижение уровня ВГ, отмечавшееся уже через 3 часа после воздействия токсиканта, на 7 сутки после введения цитостатика было ниже уровня интактного контроля в 10,6 раза. При повторной интоксикации отмечался эффект кумуляции - через 1 сутки после однократного введении доксорубицина содержание основного цитопротектора клетки уменьшалось в 1,58 раза (р<0,05), а после четырехкратного введения в 2,21 раза (р<0,05), ниже уровня контроля.

3. При однократном введении относительно низких доз токсиканта (0,3 LD50) изменения носят обратимый характер. Увеличение интенсивности токсической нагрузки или накопление суммарной дозы при повторных введениях ДР приводят к усиления угнетающего воздействия токсиканта на активность ферментов восстановления глутатиона в ткани сердечной мышцы, вследствие чего происходит прогрессирующее снижение содержания основного цитопротектора клетки, угнетение активности глутатион-зависимых ферментов антирадикальной защиты, срыв цитопротектор-ных возможностей системы глутатиона, что приводит к активации процессов свободнорадикального окисления, повреждению и гибели кар-диомиоцитов.

4. В качестве направлений фармакологической защиты кардиомиоцитов от повреждающего действия цитостатика патогенетически оправдано использование препаратов, действие которых направлено на коррекцию состояния системы глутатиона. Такими направлениями могут явиться: повышение пула ВГ за счет введения экзогенного глутатиона или предшественников его синтеза (АЦЦ, изопропиловый эфир глутатиона); компенсация части антиоксидантной нагрузки, приходящейся на систему глутатиона, за счет антиоксидантов (мексидол); стимуляция энергетических процессов в кардиомиоцитах, в том числе и с целью активации red-ox-циклирования глутатиона и его синтеза (цитофлавин).

5. Определение показателей системы глутатиона и интенсивности процессов перекисного окисления липидов в эритроцитах (концентрации ВГ, СГ, МДА и активности Г-6-Ф-ДГ, ГР, ГП, ГТ, каталазы) может быть использовано в качестве патогенетически обоснованного лабораторного метода оценки риска развития доксорубициновой кардиомиопатии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

1. Динамическое определение в тканях сердца и эритроцитах лабораторных животных показателей, характеризующих состояние системы глутатиона и процессов ПОЛ: концентрации малонового диальдегида, восстановленного глутатиона, активности глюкозо-6-фосфатдегидро-геназы, глутатионредуктазы, глутатион-8-трансферазы информативно для оценки риска развития доксорубициновой кардиомиопати. Следует рекомендовать проведение исследования с использованием динамического определения данных показателей при проведении программ химиотерапии, включающих ДР, для разработки диагностических алгоритмов оценки риска отсроченной кардиотоксичности доксорубицина, и ранней диагностики этого тяжелого осложнения.

128

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Аксенов, Владимир Владимирович

1. Арчаков А.И. Микросомальное окисление.- М.: Наука, 1975.- 327 С.

2. Арчаков А.И. Окисление чужеродных соединений и проблемы токсикологии /А.И.Арчаков, И.И.Карузина //Вестн. АМН СССР.- 1988.- N.I.-С. 14-23.

3. Баранов Е. П., Брикенштейн В. X., Дмитриевская Т. В., и др.Исследование взаимодействия рубомицина и его агликона с ДНК флюорисцентными методами //Антибиотики, 1984, Т. 29, № 3, С. 208-214

4. Блюгер А.Ф. Исследование основных патогенетических линий поражения клеток печени в условиях клинической и экспериментальной патологии и подходы к регуляции и купированию этих процессов /А.Ф.Блюгер, АЛ.Майоре //Успехи гепатологии.- Рига, 1982.- С. 12-34.

5. Виноградов В.М. Гипоксия как фармакологическая проблема /В.М.Виноградов, Ю.Ю.Урюпов //Фармакол. и токсикол.- 1985.- N.4.- С.9-20.

6. Гаузе Г. Ф., Дудник Ю. В., Исследование молекулярных механизмов действия и применение противоопухолевых антибиотиков в СССР //Антибиотики, 1982, Т. 27, № 12, С. 889-898.

7. Голиков С.Н. Общие механизмы токсического действия /С.Н.Голиков, И.В.Саноцкий, Л.А.Тиунов. //- Л.: Медицина, 1986.-С. 279.

8. Гипоксия. Адаптация, патогенез, клиника; Под. ред. Ю.Л.Шевченко.-СПб.: ООО «ЭЛБИ-СПб», 2000.-С. 384.

9. Досон Р. Справочник биохимика: Пер.с англ. /Р.Досон, Д.Эллиот, У.Эллиот, К.Джонс. -М.: Мир, 1991.- С. 251.

10. Ю.Дубинина Е.Е. Биологическая роль супероксиданион-радикала и супер-оксиддисмутазы в тканях организма // Успехи соврем, биологии.- 1989.Т. 108, Вып. 1(4).- С.3-17.

11. Зозуля Ю.А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита при патологии головного мозга ЯО.А.Зозуля, В.А.Барабой, Д.А.Сутковой.- М.: Знание-М, 2000.- С.344.

12. Карпищенко А.И. Методика определения показателей системы глутатиона в лимфоцитах человека /А.И.Карпищенко, В.В.Смирнов, С.И.Глушков //Клиническая лабораторная диагностика. 1997.- N.12.-С.41-42.

13. З.Кларк Дж.М. Токсическое действие кислорода /Медицинские проблемы подводных погружений: Пер. с англ. /Дж.М.Кларк- М.: Мир, 1988.-С.205-211.

14. Клиническая онкогематология ; Под. ред. М.А. Волковой Моск-ва.:Медицина, 2001 С.502-504.

15. Колесниченко JI.C. Глутатионтрасферазы /Л.С.Колесниченко, В.И.Кулинский //Успехи соврем, биологии.- 1989.- Т. 107, Вып.2.- С. 179194.

16. Колесниченко J1.C. Влияние эмоционально-болевого стресса, гипоксии и адаптации к ней на активность ферментов метаболизма глутатиона и концентрацию глутатиона в органах крыс /Л.С.Колесниченко,

17. B.И.Кулинский, Е.Н.Екимов //Вопр. мед. химии.- 1994.- Т.40, Вып.5.1. C.10-12.

18. Корнеев А.А. Роль глутатиона в формировании метаболического ответа клетки на гипоксию /А.А.Корнеев, И.А.Комиссарова //Известия РАН.-1993.- N.4.- С.542-549.

19. Кулинский В.И. Биологическая роль глутатиона /В.И.Кулинский, Л.С.Колесниченко //Успехи соврем, биологии,- 1990.- Т.110, Вып.1 (4).- С.20-37.

20. Кулинский В.И. Структура, свойства, биологическая роль и регуляция глутатионпероксидазы /В.И.Кулинский, Л.С.Колесниченко //Успехи совр. биол.- 1993.-Т.113, Вып.1.- С.107-122.

21. Кушаковский М.С. Юганические формы повреждения гемоглобина. (Этиология, патогенез, спекгрофотометрические и биохимические методы исследования, диагностика и лечение). — Л.: Медицина, 1962. С.325.

22. Лабори А. Регуляция обменных процессов (теоретический, экспериментальный, фармакологический и терапевтический аспекты).- М.: Медицина, 1970.-С.384.

23. Ленинджер А. Основы биохимии / Под ред. В.А.Энгельгардта.- М.: Мир, 1985.-Т.2.- С.523.

24. Машковский М.Д. Лекарственные средства. — 13-е изд., Т.2.- Харьков: Торсинг, 1997.- С.408-409.

25. Новиков B.C. Физиология экстремальных состояний /В.С.Новиков,

26. B.В.Горанчук, Е.Б.Шустов.- СПб.: Наука, 1998.- С.247. 25.0ковитый С.В. Протеинсинтетические и иммунные механизмы защитырепаративных эффектов гепатотропных средств: Дис. канд. мед. наук /С.В.Оковитый.- СПб, 1995.- 195 с.

27. Окороков А.Н., Диагностика болезней внутренних органов.- М.: Медицинская литература, 2001.- Т.4.- С.128-129.

28. Орлов B.C., Лушков В.Б., Богданов Г.Н.Электронное строениеи свобод-норадикальные механизмы противоопухолевого действия антрациклино-вых антибиотиков// Актуальные проблемы химиотерапии опухолей. Черноголовка, 1982.С. 30-32.

29. Соколовский В.В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярных механизмах неспецифической реакции организма на экстремальное воздействие //Воп. мед. химии.- 1988.-N.6.- С.2-11.

30. Справочник Видаль, Лекарственные препараты в России 2000. С. 9-10

31. Тараховский A.M., Жмарева Е.Н., Ромоданов С.А., Роль системы образования и детоксикации супероксидных радикалов в механизме противо-опухолева эффекта адриамицина.//Бюл. Экспер. Биол., 1983, Т.96 №11,1. C.86-88.

32. Тиунов Л.А. Механизмы естественной детоксикации и антиоксидантной защиты // Вестник РАМН.- 1995.- N.3.- С.9-13.

33. Тиунов Л.А. Роль глутатиона в процессах детоксикации /Л.А.Тиунов, В.А.Иванова //Вест. АМН СССР.- 1988.- N.I.- С.62-69.

34. Тренин А.С. Исследование репараций повреждения ДНК, вызываемых противоопухолевым антибиотиком карминомицином// Вестн. АМН СССР, 1981, №5, С. 71-75.

35. Фридович И. Свободные радикалы в биологии.- М., 1979.- Т.1.- С.272-314.

36. Эмануель М.Н., Коновалова Н.П., Дьячковская Р.С. и др. Спинмеченый аналог рубомицина.// Актуальные проблемы химиотерапии опухолей. Черноголовка, 1982.С. 126-129.

37. Agapito М.Т., Antolin Y., del Brio M.T. et al. Protective effect of melatonin against adriamycin toxicity in the rat // J. Pineal. Res.- 2001.- Vol.31, N.I.-P.23-30.

38. Akaza K., Nonami Т., Kurokawa T. et al. Doxorubicin-induced disturbance of the energy metabolism after hepatectomy // J. Surg. Res.- 1996.- Vol.61, N.2.- P.454-458.

39. Alderton P.M., Gross J., Green M.D. Comparative study of doxorubicin, mi-toxantrone, and epirubicin in combination with ICRF-187 (ADR-529) in a chronic cardiotoxicity animal model // Cancer. Res.- 1992.- Vol.52, N.I.-P. 194-201.

40. Alin P., Danielson U.H., Mannervik B. 4-hydroxyalk-2-enals are substrates for glutathione transferase /P.Alin, U.H.Danielson, B.Mannervik //FEBS Letters.-1985.- Vol.179, N.2.- P.267-270.

41. Amitai Y., Bhooma Т., Frischer H. Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency severely restricts the biotransformation of daunorubicin in human erythrocytes//J. Lab. Clin. Med.- 1996.- Vol.127, N.6.- P.588-598.

42. Amstad P.A., Liu H., Ichimiya M. et al. BCL-2 is involved in preventing oxidant-induced cell death and in decreasing oxygen radical production // Redox. Rep.- 2001.- Vol.6, N.6.- P.351-362.

43. Arcamone F. Doxorubicin. Anticancer antibiotics, New-York Acad. Press, 1981.-P. 369.

44. Asakura Т., Hashizume Y., Tashiro K. Suppression of GST-P by treatment with glutathione-doxorubicin conjugate induces potent apoptosis in rat hepatoma cells // Int. J. Cancer.- 2001.- Vol.15, N.94(2).- P. 171-177.

45. Aversano R.C., Boor P.J. Histochemical alterations of acute and chronic doxorubicin cardiotoxicity // J. Mol. Cell. Cardiol.- 1983.- Vol.15, N.8.-P.543-553.

46. Awasthi S., Cheng J., Singhal S.S. et al. Novel function of human RLIP76: ATP-dependent transport of glutathione conjugates and doxorubicin // Biochemistry.- 2000.- Vol.39, N.31.- P.9327-9334.

47. Awasthi S., Sharma R., Singhal S.S. et al. RLIP76, a Novel Transporter Catalyzing ATP-Dependent Efflux of Xenobiotics // Drug Metab. Dispos.-2002.- Vol.30, N.12.- P. 1300-1310.

48. Bacur N.R., Gordon S.L., Gee M.V. et. Al. NADPH cytochrom P-450 reductase activation of quinone anticancer agents to free radicals.-Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1979, vol/ 76, N 2, p. 954-957.

49. Bartoszek A., Wolf C.R. Enhancement of doxorubicin toxicity following activation by NADPH cytochrome P450 reductase // Biochem. Pharmacol.-1992.- Vol.43, N.7.- P.1449-1457.

50. Batist G., Norton J., Katki A.G. et al. Cardiac and red blood cell glutathione peroxidase: results of a prospective randomized trial in patients on total parenteral nutrition // Cancer Res.- 1985.- Vol.45, N.l 1 (Pt.2).- P.5900-5903.

51. Bounias M., Kladny J., Kruk I. Et al. Effects of catechols on free radical formation by chemotherapeutic agents (adriamycin, farmorubicin, and mitomycin) // Cancer. Detect. Prev.- 1997.- Vol.21, N.6.- P.553-562.

52. Boveris A. Superoxyde dismutase /A.Boveris, E.Cadenas /Ed. by L.V.Ober-ly.-CRS Press, Boca Rraton, Fl., 1983.- P. 15-30.

53. Buschini A., Poli P., Rossi C. Saccharomyces cerevisiae as an eukaryotic cell model to assess cytotoxicity and genotoxicity of three anticancer an-thraquinones // Mutagenesis.- 2003.- Vol.18, N.l.- P.25-36.

54. Chaires J.B. Daunomycin inhibits the B-Z transition in poly d (G-C).-Nucl. Acid. Res., 1983, vol, 11, N 23, p. 8485-8494

55. Cullinane C., Cutts S.M., van Rosmalen A., Phillips D.R. Formation of adri-amycin-DNA adducts in vitro // Nucleic. Acids. Res.- 1994.- Vol.22, N.12.-P.2296-2303.

56. D'Agostini F., Bagnasco M., Giunciuglio D. Inhibition by oral N-acetylcysteine of doxorubicin-induced clastogenicity and alopecia, and prevention of primary tumors and lung micrometastases in mice // Int. J. Oncol.- 1998.- Vol.13, N.2.- P.217-224.

57. D' Alessandro N., Rausa L., Crescimanno M. In vivo effects of doxorubicin and isoproterenol on reduced glutathione and H2O2 production in mouse heart // Res. Commun. Chem. Pathol. Pharmacol.- 1988.- Vol.62, N.I.-P.19-30.

58. De Almeida A.F. Maximal activities of key enzymes of glutaminolysis, glycolysis, Krebs cycle and pentose-phosphate pathway of several tissues in mature and aged rats /A.F.De Almeida, R.Curi, P.NewshoIme //Int. J. Biochem.1989.- Vol.21, N.8.- P.937-940.

59. De Bruin A. Zystenurie, ackaptonurie.- Leipzig, Barth, 1976.- 80 p.

60. Deman A., Ceyssens В., Pauwels M. et al. Altered antioxidant defence in a mouse adriamycin model of glomerulosclerosis // Nephrol. Dial. Transplant.- 2001.- Vol.16, N.I.- P. 147-150.

61. Doroshow J.H. Effect of anthracycline antibiotics on oxygen radical formation in rat heart.- Cancer Res., 1983,- Vol.43, N.2.- P.460-472.

62. Doroshow J.H., Locker G.Y., Baldinger J., Myers C.E. The effect of doxorubicin on hepatic and cardiac glutathione // Res. Commun. Chem. Pathol. Pharmacol.- 1979.- Vol.26, N.2.- P.285-295.

63. Doroshow J.H. Prevention of doxorubicin-induced killing of MCF-7 human breast cancer cells by oxygen radical scavengers and iron chelating agents // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1986.- Vol.135, N.I.- P.330-335.

64. Dorr R.T. Cytoprotective agents for anthracyclines // Semin. Oncol.- 1996.-Vol.23, N.4 (Suppl.8).- P.23-34.

65. Droge W. Function of glutathione and glutathione disulfide in immunology and immunopathology /W.Droge, K.Schulze-Osthoff, S.Mihm //FASEB J.- 1994.-Vol.8.- P.l 131-1138.

66. Dutta P., Rivlin R.S., Pinto J. Enhanced depletion of lens reduced glutathione Adriamycin in riboflavin-deficient rats // Biochem. Pharmacol.1990.- Vol.40, N.5.- P.l 111-1115.

67. Fadillioglu E., Erdogan H. Effects of erdosteine treatment against doxorubi-cin-induced toxicity through erythrocyte and plasma oxidant/antioxidant status in rats // Pharmacol Res.- 2003 .-Vol.47, N.4.- P.317-322.

68. Fadillioglu E., Erdogan H., Sogut S., Kuku I. Protective effects of erdosteine against doxorubicin-induced cardiomyopathy in rats // J. Appl. Toxicol.-2003.- Vol.23, N.I.- P.71-74.

69. Ferretti A., Chen L.L., Di Vito M. et al. Pentose phosphate pathway alterations in multi-drug resistant leukemic T-cells: 31P NMR and enzymatic studies // Anticancer Res.- 1993.-Vol.13, N.4.- P.867-872.

70. Ficher J., Ramakrishnan K., Becvar J.E. Direct enzyme-catalyzed reduction of anthracyclines by reduced nicotinamide adenine dinucleotide.- Biochemistry, 1983,- Vol.22, N.6.- P. 1347-1355.

71. Flohe L. Glutathione peroxidase brought into focus //Free Rad. Biol.- 1982-Vol.5.- P.223-254.

72. Gamcsik M.P., Dubay G.R., Cox B.R. Increased rate of glutathione synthesis from cystine in drug-resistant MCF-7 cells // Biochem. Pharmacol.-2002.- Vol.63, N.5.- P.843-851.

73. Geetha A., Marar Т., Devi C.S. Effect of alpha-tocopherol on doxorubicin-induced changes in rat liver and heart microsomes // Indian J. Exp. Biol.-1991.- Vol.29, N.8.- P.782-785.

74. Gessner Т., Vaughan L.A., Beehler B.C. et al. Elevated pentose cycle and glucuronyltransferase in daunorubicin-resistant P388 cells // Cancer Res.-1990.- Vol.50, N.13.- P.3921-3927.

75. Gosalvez M., van Rossum G., Blanco M. Inhibition of so diumpotassium-activated adenosine-5-triphosphatase and ion transport by adriamycin.-Cancerres., 1979, vol. 39, N 1, p. 251-261.

76. Gewirtz D.A. A critical evaluation of the mechanisms of action proposed for the antitumor effects of the anthracycline antibiotics adriamycin and daun-orubicin // Biochem. Pharmacol.- 1999.- Vol.57, N.7.- P.727-741.

77. Goto S., Ihara Y., Urata Y. et al. Doxorubicin-induced DNA intercalation and scavenging by nuclear glutathione S-transferase pi //FASEB. J.- 2001.-Vol.15, N.14.- P.2702-2714.

78. Goto S., Kamada K., Soh Y. Et al. Significance of Nuclear Glutathione S-Transferase pi in Resistance to Anti-cancer Drugs // Japn. J. Cancer. Res.-2002.- Vol.93, N.9.- P.1047-1056.

79. Gouaze V., Mirault M.E., Carpentier S. et al. Glutathione peroxidase-1 overexpression prevents ceramide production and partially inhibits apoptosis in doxorubicin-treated human breast carcinoma cells // Mol. Pharmacol.-2001.- Vol.60, N.3.- P.488-496.

80. Gustafson D.L., Swanson J.D., Pritsos C.A. Modulation of glutathione and glutathione dependent antioxidant enzymes in mouse heart following doxorubicin therapy // Free Radic. Res. Commun.- 1993.- Vol.19, N.2.-P.l 11-120.

81. Gutteridge J. Streptonigrin-induced deoxyribose degradation inhibition by superoxide dismutase, hydroxyl radical scavengers and iron chelators.- Biochiem. Pharmacol., 1984, vol. 33, N 19, p. 3059-3062.

82. Hakimelahi G.H., Gassanov G.S., Hsu M.H. et al. A novel approach towards studying non-genotoxic enediynes as potential anticancer therapeutics // Bioorg. Med. Chem.- 2002.- Vol.10, N.5.- P.1321-1328.

83. Halliwell B. Biochemical mechanisms accounting for toxic action of oxigen on living organisms key role of superoxide dismutase //Cell. Biol.- 1978.- Vol.2.-N.2.- P.l 13-128.

84. Hardman W.E., Munoz J., Cameron I.L. Role of lipid peroxidation and antioxidant enzymes in omega 3 fatty acids induced suppression of breast cancer xenograft growth in mice // Cancer Cell Int.- 2002.- Vol.17, N.2(1).- P. 1012.

85. Hino Y., Yoo S.B., Kajiyama K. et al. Effect of riboflavin-butyrate on cardiac glutathione reductase affected by adriamycin // J. Nutr. Sci. Vitaminol. (Tokyo).- 1985.- Vol.31, N.2.- P. 139-145.

86. Hayes J.D. Glutathione S-transferases in man the relationship between rat and human enzymes /J.D.Hayes, L.I.McLellan, P.K.Stockmann //Biochem. Soc. Transact.- 1987.- Vol.15, N.4.- P.721-725.

87. Hohl R.J., Kennedy E.J., Frischer H. Defenses against oxidation in human erythrocytes: role of glutathione reductase in the activation of glucose decarboxylation by hemolytic drugs // J. Lab. Clin. Med.- 1991.- Vol.117, N.4.- P.325-331.

88. Holdiness M.R. Clinical pharmacokinetics of N-acetylcysteine // Clin. Pharmacokinet.- 1991.- Vol.20, N.2.- P.123-134.

89. Julicher R.H., Sterrenberg L., Haenen G.R. et al. The effect of chronic adriamycin treatment on heart kidney and liver tissue of male and female rat // Arch. Toxicol.- 1988.- Vol.61, N.4.- P.275-281.

90. Kappus H. Toxic drug effect associated with oxigen metabolism redox cycling and lipid peroxidation /H.Kappus, H.Sies //Experientia.- 1981.- Vol.37, N.12.-P. 1233-1241.

91. Kang J., Lee Y., No K. et al. Ginseng intestinal metabolite-I (GIM-I) reduces doxorubicin toxicity in the mouse testis // Reprod. Toxicol.- 2002.-Vol.16, N.3.- P.291-298.

92. Kanter P., Schwarz H. Effects of N-trifluoroacetyladriamycin-14-valerate and related agents on DNA strand damage and thymidine incorporation in CCRF-CEM cells.- Cancer Res., 1982, vol. 39, N 2, p. 448-451.

93. Katoh N., Wise В., Wrenn R., et al. Inhibition by adriamycin of phos-pholipid-sensitive calcium depedment phosphorylation of endogenous proteins from heart. -Biochem. J., 1981, N 1, p. 199-205.

94. Kisara S., Furusawa S., Takayanagi Y., Sasaki K. Effect of glutathione depletion by buthionine sulfoximine on doxorubicin toxicity in mice // Res. Commun. Mol. Pathol. Pharmacol.- 1995.- Vol.89, N.3.- P.401-410.

95. Kondo Т., Iida T. gamma-GCS and glutathione new molecular targets in cancer treatment // Gan. To. Kagaku. Ryoho.- 1997,- Vol.24, N.15.-P.2219-2225.

96. Kothe K., Ihle R., Romaniuk P. et al. Anthracyclin-cardiomyopathy // Arch. Geschwulstforsch.- 1982.- B.52, N.2.- S.141-154.

97. Larsson K. Thioltransferase from human placenta /K.Larsson, V.Eriksson, B.Mannervik //Meth. Enzymol.- 1985.- Vol.113.- P.520-521.

98. Lash L.H. Transport of glutathione by renal basal-lateral membrane vesicles /L.H.Lash, D.P.Jones //Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1983.-Vol.l 12, N.l.- P.55-60.

99. Lazzarino G., Viola A.R., Mulieri L. et al. Prevention by fructose-1,6-bisphosphate of cardiac oxidative damage induced in mice by subchronic doxorubicin treatment // Cancer Res.- 1987.- Vol.47, N.24, Pt.l.- P.6511-6516.

100. Lee F.Y., Siemann D.W., Allalunis-Turner M.J., Keng P.C. Glutathione contents in human and rodent tumor cells in various phases of the cell cycle // Cancer Res.- 1988.- Vol.48, N.13.- P.3661-3665.

101. Lee F.Y., Siemann D.W., Sutherland R.M. Changes in cellular glutathione content during adriamycin treatment in human ovarian cancer -a possible indicator of chemosensitivity // Br. J. Cancer.- 1989.- Vol.60, N.3.-P.291-298.

102. Lee F.Y., Vessey A.R., Siemann D.W. Glutathione as a determinant of cellular response to doxorubicin // NCI Monogr.- 1988.- N.6.- P.211 -215.

103. Lehotay D., Levey В., Rogerson В., Levey G. Ingibition of cardiac quanylate cyclase by doxorubicin and some of its analogs: Possible relationship to cardiotoxicity. Cancer Treat. Rep., 1982, vol. 66, N 2, p. 311-316.

104. Li Т., Danelisen I., Bello-Klein A., Singal P.K. Effects of probucol on changes of antioxidant enzymes in adriamycin-induced cardiomyopathy in rats // Cardiovasc. Res.- 2000.- Vol.46, N.3.- P.523-530.

105. Li Т., Danelisen I., Singal P.K. Early changes in myocardial antioxidant enzymes in rats treated with adriamycin // Mol. Cell. Biochem.- 2002.-Vol.232, N. 1-2.-P. 19-26.

106. Li Т., Singal P.K. Adriamycin-induced early changes in myocardial antioxidant enzymes and their modulation by probucol // Circulation.-2000.- Vol.102, N.l7.- P.2105-2110.

107. Liu Q.Y., Tan B.K. Relationship between antioxidant activities and doxorubicin-induced lipid peroxidation in P388 tumour cells and heart andliver in mice I I Clin. Exp. Pharmacol. Physiol.- 2003.- Vol.30, N.3.- P. 185188.

108. Lown J.W. The chemistry of DNA damage by antitumor drugs.//In. Molecular aspects of anti-cancer drug action/Eds. S. Niedle, M. Waring. London-The Mac Millan Press,1983- P.283-314.

109. Lawrence R.A. Species, tissue and subcellular distribution of non Se-depen-dent glutathione peroxidase activity /R.A.Lawrence, R.F.Burk III. Nutr.-1978.- Vol.108, N.2.- P.211-215.

110. Maestro L. Subcellular localization superoxide dismutase, glutathione peroxidase and catalase in developing rat cerebral cortex /L.Maestro, W.McDonald //Mech. Ageing and Develop.- 1989.- N. 1P. 15-31.

111. Mallery S.R., Clark Y.M., Ness G.M. et al. Thiol redox modulation of doxorubicin mediated cytotoxicity in cultured AIDS-related Kaposi's sarcoma cells //J. Cell. Biochem.- 1999.- Vol.73, N.2.- P.259-277.

112. Mannervick B. Role of cytoplasmic thioltransferase in cellular regulation by thyol-disulfide interchange /В.Mannervick, K.Axelsson //Biochem. J.-1980.-Vol. 190, N.I.- P.125-130.

113. Mannervik B. The enzymes of glutathione metabolism: an overview //Biochem. Soc. Transact.- 1987.- Vol.15, N.4.- P.717-718.

114. Mannervik B. Thioltransferases //Enzymatic basis of detoxication /Pharma-col. Toxicol.: Ed by W.B.Jakoby.- Orlanto: Acad. Press, 1980.-Vol.2.- P.229-244.

115. Mannervik B. Nomenclature for human glutathione transferases /В.Mannervik, Y.C.Awasthi, P.G.Board //Biochem. J. Letters.- 1992.-Vol.282.- P.305-308.

116. Mannervik B. Glutathione: chemical, biochemical and medical aspects /B.Mannervik, J.Carlberg, K.Larson //Pt. A: Coenzymes and cofactors. V.3 /Ed. by D.Dolphin-N.Y.: Wiley, 1989.- 693 p.

117. Marujama H. Distonction between the multiple cationic forms of rat liver glutathione S-transferases /H.Marujama, J.M.Arias, J.Listovsky //J. Biol. Chem.- 1984.- Vol.259, N.20.- P. 12444-12448.

118. Meister A. Glutathione /A.Meister, M.E.Anderson //Ann. Rev. Bio-chem.- 1983.- Vol.52.- P.711-760.

119. Mimnaugh E.G., Trush M.A., Ginsburg E. et al. The effects of adriamycin in vitro and in vivo on hepatic microsomal drug-metabolizing enzymes: role of microsomal lipid peroxidation // Toxicol. Appl. Pharmacol-1981.- Vol.61, N.3.- P.313-325.

120. Minaga Т., Yasumi M., Nakamura K. et al. A possible mechanism of adriamycin cardiotoxicity. Inhibition of NADP-linked isocitrate dehydrogenase // Adv. Myocardiol.- 1983.- N.4.- P.247-253.

121. Mohamed H.E., El-Swefy S.E., Hagar H.H. The protective effect of glutathione administration on adriamycin-induced acute cardiac toxicity in rats // Pharmacol. Res.- 2000.- Vol.42, N.2.- P.l 15-121.

122. Morin J.E. Thiol: protein disulfide exchange enzymes /J.E.Morin, J.E.Dixon //Meth. Enzymol.- 1985.- Vol.113.- P.541-547.

123. Naidu M.U., Kumar K.V., Mohan I.K. et al. Protective effect of Gingko biloba extract against doxorubicin-induced cardiotoxicity in mice // Indian J. Exp. Biol.- 2002.- Vol.40, N.8.- P.894-900.

124. Nakanishi Y., Matsuki H., Takayama K. et al. Glutathione derivatives enhance adriamycin cytotoxicity in a human lung adenocarcinoma cell line // Anticancer Res.- 1997.- Vol.17, N.3C.- P.2129-2134.

125. Nakano E., Takeshige K., Toshima Y. et al. Oxidative damage in selenium deficient hearts on perfusion with adriamycin: protective role of glutathione peroxidase system // Cardiovasc. Res.- 1989.- Vol.23, N.6.- P.498-504.

126. Ogura R., Ueta H., Hino Y. et al. Riboflavin deficiency caused by treatment with adriamycin // J. Nutr. Sci. Vitaminol. (Tokyo).- 1991.-Vol.37, N.5.- P.473-477.

127. Olson R.D., MacDonald J.S., van Boxtel C.J. Regulatory role of glutathione and soluble sulfhydryl groups in the toxicity of adriamycin // J. Pharmacol. Exp. Ther.- 1980.- Vol.215, N.2.- P.450-454.

128. Papa S. Reactive oxygen species, mitochondria, apoptosis and aging /S.Pa-pa, V.P.Skulachev // Mol. Cell. Biochem.- 1997,- Vol.174.- P.305-319.

129. Paranka N.S., Dorr R.T. Effect of doxorubicin on glutathione and glu-tathione-dependent enzymes in cultured rat heart cells // Anticancer Res.-1994.- Vol.14, N.5A.- P.2047-2052.

130. Paulson G. Conjugation of foreign chemicals by animals //Resid. Rev.-1979.- Vol.70.-P.32-72.

131. Porta E.A., Joun N.S., Matsumura L. et al. Acute adriamycin cardiotoxicity in rats // Res. Commun. Chem. Pathol. Pharmacol.- 1983.- Vol.41, N.I.- P.125-137.

132. Powell S.R., Chevion M. The effect of chronic administration of doxorubicin on the rat cardiac and hepatic glutathione redox system // Res. Commun. Chem. Pathol. Pharmacol.- Vol.74, N.3.- P.273-286.

133. Powell S.R., Mc Cay P.В. Inhibition of doxorubicin-induced membrane damage by thiol compounds: toxicologic implications of a glu-tathione-dependent microsomal factor // Free Radic. Biol. Med.- 1995.-Vol.18, N.2.- P.159-168.

134. Romine M.T., Kessel D. Intracellular glutathione as a determinant of responsiveness to antitumor drugs // Biochem. Pharmacol.- 1986.- Vol.35, N.19.- P.3323-3326.

135. Russo A., Mitchell J.B. Potentiation and protection of doxorubicin cytotoxicity by cellular glutathione modulation // Cancer Treat. Rep.- 1985.-Vol.69, N.ll.- P.1293-1296.

136. Saad S.Y., Najjar T.A., Al-Rikabi A.C. The preventive role of deferoxamine against acute doxorubicin-induced cardiac, renal and hepatic toxicity in rats //Pharmacol. Res.- 2001.- Vol.43, N.3.- P.211-218.

137. Sadzuka Y., Sugiyama Т., Shimoi K. Protective effect of flavonoids on doxorubicin-induced cardiotoxicity // Toxicol. Lett.- 1997.- Vol.92, N.I.-P.l-7.

138. Saito Т., Ikeda S., Hisai H. et al. Glutathione levels in human colon cancer cell line M7609 following culture in a low sulfur amino acid medium and its sensitivity to various anticancer drugs // Gan. To. Kagaku. Ryoho.-1997.- Vol.24, N.7.- P.823-827.

139. Sayed-Ahmed M.M., Salman T.M., Gaballah H.E. et al. Propionyl-L-carnitine as protector against adriamycin-induced cardiomyopathy // Pharmacol. Res.- 2001.- Vol.43, N.6.- P.513-520.

140. Sazuka Y., Tanizawa H., Takino Y. Effect of adriamycin on the activities of superoxide dismutase, glutathione peroxidase and catalase in tissues of mice // Jpn. J. Cancer. Res.- 1989.- Vol.80, N.I.- P.89-94.

141. Seifert C.F., Nesser M.E., Thompson D.F. Dexrazoxane in the prevention of doxorubicin-induced cardiotoxicity // Ann. Pharmacother.- 1994.-Vol.28, N.9.- P. 1063-1072.

142. Serafino A., Sinibaldi-Vallebona P., Lazzarino G. et al. Modifications of mitochondria in human tumor cells during anthracycline-induced apop-tosis // Anticancer Res.- 2000.- Vol.20, N.5B.- P.3383-3394.

143. Serafino A., Sinibaldi-Vallebona P., Pierimarchi P. et al. Induction of apoptosis in neoplastic cells by anthracycline antitumor drugs: nuclear and cytoplasmic triggering? // Anticancer Res.- Vol.19, N.3A.- P. 1909-1918.

144. Sharma R., Singhal S.S., Cheng J. et al. RLIP76 is the major ATP-dependent transporter of glutathione-conjugates and doxorubicin in human erythrocytes // Arch. Biochem. Biophys.- 2001.- Vol.391, N.2.- P. 171-179.

145. Shinohara K., Tanaka K.R. The effects of adriamycin (doxorubicin HC1) on human red blood cells // Hemoglobin.- 1980.- Vol.4, N.5-6.- P.735-745.

146. Sumiyoshi Y., Hashine K., Kasahara K., Karashima T. Glutathione chemoprotection therapy against CDDP-induced neurotoxicity in patients with invasive bladder cancer // Gan. To. Kagaku. Ryoho.- 1996.- Vol.23, N.ll.- P.1506-1508.

147. Swain S.M., Whaley F.S. et. al. Delayed administration of dexrazoxane provides cardioprotection for patients with advanced breast cancer treated with doxorubicin-containt therapy//J. Clin. Oncol.- 1997,- Vol.15.- P. 1333-1340.

148. Tashiro K., Asakura Т., Fujiwara C. et al. Glutathione-S-transferase-pi expression regulates sensitivity to glutathione-doxorubicin conjugate // Anticancer Drugs.- 2001.- Vol.12, N.8.- P.707-712.

149. Tate S.S. Recent studies on y-glutamyl transpeptidase /S.S.Tate, G.A.Thompson, A.Meister //Glutathione: metabolism and function.- N.Y.: Raven press.- 1976.- Vol.6.- P.45-55.

150. Thayer W.S. Evaluation of tissue indicators of oxidative stress in rats treated chronically with adriamycin // Biochem. Pharmacol.- 1988.- Vol.37, N.l 1.- P.2189-2194.

151. The cytotoxics handbook / Ed. by: M.C.Allwood, P.Wright.- Oxford: Red-cliffe med. press.- 1990.- 239 p.

152. Thomas C., Carr A.C., Winterbourn C.C. Free radical inactivation of rabbit muscle creatinine kinase: catalysis by physiological and hydrolyzed ICRF-187 (ICRF-198) iron chelates // Free Radic. Res.- 1994.- Vol.21, N.6.-P.387-397.

153. Tu V.C., Bahl J.J., Chen Q.M. Signals of oxidant-induced cardiomyo-cyte hypertrophy: key activation of p70 S6 kinase-1 and phosphoinositide 3-kinase // J. Pharmacol. Exp. Ther.- 2002.- Vol.300, N.3.- P.l 101-1110.*21

154. Tyler D. Polarographic assay and intracelular of superoxidedismutase in rat liver //Biochem. J.- 1975.- Vol.147, N.3.- P.493-504.

155. Van Dyke R.A. Hepatic centrilobular necrosis in rats after exposure to halo-thane, enflurane, or isoflurane //Anesth. Analg.- 1982.- Vol.61, N.10.-P.812-819.

156. Van den Branden C., Ceyssens В., De Craemer D. et al. Renal antioxidant enzymes and fibrosis-related markers in the rat adriamycin model // Nephron.- 2000.- Vol.86, N.2.- P. 167-175.

157. Van den Branden C., Deman A., Ceyssens B. Et al. Vitamin E protects renal antioxidant enzymes and attenuates glomerulosclerosis in Adria-mycin-treated rats //Nephron.- 2002.- Vol.91, N.l.- P. 129-133.

158. Van Acker F.A., Hulshof J.W., Haenen G.R. et al. New synthetic fla-vonoids as potent protectors against doxorubicin-induced cardiotoxicity // Free Radic. Biol. Med.- 2001.- Vol.31, N.l.- P.31-37.

159. Villani F., Galimberti M., Monti E. et al. Effect of glutathione and N-acetylcysteine on in vitro and in vivo cardiac toxicity of doxorubicin // Free Radic. Res. Commun.- 1990.- Vol.11, N. 1-3.- P. 145-151.

160. Villani F., Galimberti M., Zunino F. et al. Prevention of doxorubicin-induced cardiomyopathy by reduced glutathione // Cancer Chemother. Pharmacol.- 1991.- Vol.28, N.5.- P.365-369.

161. Wang S., Kotamraju S., Konorev E. et al. Activation of nuclear factor-kappaB during doxorubicin-induced apoptosis in endothelial cells and myocytes is pro-apoptotic: the role of hydrogen peroxide // Biochem. J.- 2002.-Vol.367(Pt.3).- P.729-740.

162. Wang L., Lin S. Protective and antioxidative effect of 2(3)tert-butyl-4-hydroxyanisole against cytotoxicity induced by doxorubicin in mice // Yao Xue Xue Bao.- 1998.- Vol.33, N.l 1.- P.807-811.

163. Wood M. Halothane-induced hepatic necrosis in triiodothyronine-pretreated rats /M.Wood, M.L.Berman, R.D.Harbison //Anesthesiology.-1980.- Vol.52, N.6.- P.470-476.

164. Yamanaka S., Tatsumi Т., Shiraishi J. et al. Amlodipine inhibits doxorubicin-induced apoptosis in neonatal rat cardiac myocytes // J. Am. Coll. Cardiol.- 2003.- Vol.41, N.5.- P.870-878.

165. Yeh G.C., Daschner P.J., Lopaczynska J. et al. Modulation of glucoses-phosphate dehydrogenase activity and expression is associated with aryl hydrocarbon resistance in vitro //J. Biol. Chem.- 2001.- Vol.276, N.37.-P.34708-34713.

166. Yin X., Wu H., Chen Y., Kang Y.J. Induction of antioxidants by adriamycin in mouse heart // Biochem. Pharmacol.- 1998,- Vol.56, N.I.- P.87-93.

167. Yoda Y., Nakazawa M., Abe Т., Kawakami Z. Prevention of doxorubicin myocardial toxicity in mice by reduced glutathione // Cancer Res.-1986.- Vol.46, N.5.- P.2551-2556.

168. Yoshimura S. Inhibition of neutral sphingomyelinase activation and ce-rami-de formation by glutathione in hypoxic PC12 cell death /S.Yoshimura, Y.Ban-no, S.Nakashima //J. Neurochem.- 1999.- Vol.73, N.2.-P.675-683.

169. Zhang K., Yang E.B., Wong K.P., Mack P. GSH, GSH-related enzymes and GS-X pump in relation to sensitivity of human tumor cell lines to chlorambucil and adriamycin // Int. J. Oncol.- 1999.- Vol.14, N.5.- P.861-867.

170. Ziegler D.M. Role of reversible oxidation-reduction of enzyme thiols-disul-fides in metabolic regulation //Annual. Rev. Biochem.- 1985.- Vol.54.-P.305-329.

171. Zima Т., Tesar V., Crkovska J. et al. ICRF-187 (dexrazoxan) protects from adriamycin-induced nephrotic syndrome in rats // Nephrol. Dial. Transplant.- 1998.- Vol.13, N.8.- P.1975-1979.

172. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

173. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

174. Контроль 3,54 ± 0,36 10,38 ±0,31 3,30 ±0,16 0,94 ± 0,04 18,45 ± 1,67

175. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

176. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

177. Контроль 13,87 ±0,75 14,14 ± 1,26 13,41 ± 1,13 8,89 ±0,15 21,82 ±2,12

178. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

179. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

180. Контроль 122,4 ±20,2 201,0 ±12,6 341,1 ±32,0 605,1 ±34,4 23,88 ±2,86

181. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

182. Печень Почки Головной мозг Эритроциты

183. Контроль 80,41 ±9,76 40,03 ± 4,75 31,09 ±3,23 1,08 ±0,21

184. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

185. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

186. Контроль 24,73 ±2,37 210,6 ±19,8 54,62 ± 8,06 74,83 ±1,82 5,85 ± 0,86

187. Динамика изменений активности глутатионредуктазы в тканях различных органов белых беспородных крыс при остром отравлении доксорубицином в дозе 0,3 LD50 (мкмоль/(минт белка) или мкмоль/(мин-г гемоглобина))

188. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

189. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

190. Контроль 76,69 ±3,61 59,46 ±2,30 136,3 ±4,8 165,4 ±3,2 577,9 ± 54,5

191. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

192. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

193. Контроль 3,68 ± 0,24 7,99 ± 1,08 3,94 ±0,13 0,37 ± 0,02 2,60 ±0,51

194. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

195. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

196. Контроль 170,6 ±14,0 205,1 ±11,2 103,6 ±4,7 38,61 ± 1,01 1014,8 ± 121,0

197. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

198. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

199. Контроль 83,79 ± 7,98 276,1 ±8,9 114,2 ±7,3 38,43 ±8,28 29,47 ±2,77

200. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

201. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

202. Контроль 3,54 ±0,36 10,38 ±0,31 3,30 ±0,16 0,94 ± 0,04 18,45 ±1,67

203. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

204. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

205. Контроль 13,87 ±0,75 14,14 ±1,26 13,41 ±1,13 8,89 ±0,15 21,82 ±2,12

206. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

207. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

208. Контроль 122,4 ±20,2 201,0 ± 12,6 341,1 ±32,0 . 605,1 ±34,4 23,88 ±2,86

209. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

210. Печень Почки Головной мозг Эритроциты

211. Контроль 80,41 ±9,76 40,03 ± 4,75 31,09 ±3,23 1,08 ±0,21

212. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

213. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

214. Контроль 24,73 +2,37 210,6 ± 19,8 54,62 ± 8,06 74,83 ± 1,82 5,85 ± 0,86

215. Динамика изменений активности глутатионредуктазы в тканях различных органов белых беспородных крыс при остром отравлении доксорубицином в дозе LD50 (мкмоль/(мин-г белка) или мкмоль/(мин-г гемоглобина))

216. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

217. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

218. Контроль 76,69 + 3,61 59,46 ± 2,30 136,3 ±4,8 165,4 ±3,2 577,9 ± 54,5

219. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

220. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

221. Контроль 3,68 ± 0,24 7,99 ± 1,38 3,94 ±0,13 0,37 ± 0,02 2,60 ±0,51

222. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

223. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

224. Контроль 170,6 ±14,0 205,1 ±11,2 103,6 ±4,7 38,61 ± 1,01 1014,8 ± 121,0

225. Группа исследования Сроки исследования Исследуемый орган

226. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

227. Контроль 83,79 ±7,98 276,1 ±8,9 114,2 ±7,3 38,43 ±8,28 29,47 ±2,77

228. Группа исследования Исследуемый орган

229. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

230. Контроль 3,82 ±0,11 9,89 ±0,71 4,73 ±0,19 1,84 ±0,08 6,33 ± 0,28

231. Группа исследования Исследуемый орган

232. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

233. Контроль 10,01+0,43 18,58 ± 1,36 12,06 ±0,77 8,21 ±0,07 22,75 ± 1,51

234. Группа исследования Исследуемый орган

235. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

236. Контроль 210,6 ±9,0 186,0 ±9,2 193,1 ± 17,9 545,0 ± 14,5 42,43 ±2,92

237. Группа исследования Исследуемый орган

238. Печень Почки Головной мозг Эритроциты

239. Контроль 296,4 ± 7,2 309,3 ±7,1 335,0 ±5,8 1,27 ±0,11

240. Динамика изменений активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в тканях различных органов белых беспородных крыс при повторном отравлении доксорубицином в дозе 0,3 LD30 (мкмоль/(минт белка) или мкмоль/(минт гемоглобина))

241. Группа исследования Исследуемый орган

242. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

243. Контроль 58,24 ±5,51 81,77 ±4,86 41,48 ±1,58 148,4 ±14,1 6,34 ± 0,28

244. Группа исследования Исследуемый орган

245. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

246. Контроль 96,80 ±6,13 149,7 ± 13,3 167,5 ±9,7 23,87 ± 1,39 303,2 ±27,3

247. Динамика изменений активности глутатионпероксидазы в тканях различных органов белых беспородных крыс при повторном отравлении доксорубицином в дозе 0,3 LD5q (мкмоль/(мин-г белка) или мкмоль/(мин-г гемоглобина))

248. Группа исследования Исследуемый орган

249. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

250. Контроль 5,15 ±0,21 7,73 ±0,41 4,37 ±0,19 0,41 ±0,01 1,722 ±0,084

251. Динамика изменений активности глутатионтрансферазы в тканях различных органов белых беспородных крыс при повторном отравлении доксорубицином в дозе 0,3 LD50 (мкмоль/(минт белка) или мкмоль/(минт гемоглобина))

252. Группа исследования Исследуемый орган

253. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

254. Контроль 413,3 ±13,2 471,4 ±20,4 182,2 ± 17,1 50,29 ±1,51 137,3 ±15,1

255. Динамика изменений активности каталазы в тканях различных органов белых беспородных крыс при повторном отравлении доксорубицином в дозе 0,3 LD50 (мкмоль/(минт белка) или мкмоль/(минт гемоглобина))

256. Группа исследования Исследуемый орган

257. Сердце Печень Почки Головной мозг Эритроциты

258. Контроль 579,0 ±48,5 919,3 ±58,8 592,9 ±38,9 38,82 ±4,51 20,54 ±2,10