Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Закономерности изменений детоксикационной функции печени при вирусных гепатитах

ПРУТКИ НА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА

ЗАКОНОМЕРНОСТИ ИЗМЕНЕНИЙ ДЕТОКСИКАЦИОННОЙ ФУНКЦИИ ПЕЧЕНИ ПРИ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТАХ

14 00 16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

иил76545

ЧИТА - 2007

003176545

Работа выполнена в ГОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

Научный руководитель:

доктор медицинских на>к,

профессор Цыбиков Намжил Нанзатович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Витковский Юрий Антонович

кандидат медицинских наук Герасимов Александр Ачександрович

Ведущая организация: ГУ НЦ клинической и экспериментальной медицины СО РАМН (г Новосибирск)

Защита диссертации состоитсягода в часов на заседании диссертационного совета Д 208 118 01 при ГОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия Росздрава", 672090, г Чита, ул Горького, 39а

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия Росздрава" по адресу 672090, г Чита, ул Горького, 39а

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент

Кузьмина О.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТ ИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Вирусные гепатиты являются важнейшей клинической проблемой, как во всем мире, так и в Российской Федерации Ежегодно они выявляются впервые у 1 млн человек на Земном шаре и поражают самую дееспособную часть общества наибольшая заболеваемость отмечается среди лиц 15-30 лет (Баранов А А и др , 2003, Жебрун А Б , 2003, Ивашкин В Т, 2005, Miriam J , 2001)

Вирусные гепатиты сопровождаются нарушением функций печени разной степени выраженности от бессимптомной гепатодепрессии до развития печеночной энцефалопатии и комы, причем первая встречается значительно чаще (Белозеров Е С, Иоанниди Е А, 2004, Калинин А В , Хазанов А И, 2007) Взгляды на механизмы возникновений этих явлений, а также их раннюю диаг -ностику противоречивы Особо отмечается, что гепатодепрессия - скорее функциональный синдром, так как постоянные морфологические признаки при нем отсутствуют и далеко не всегда выявляется некроз гепатоцитов По своей сути гепатодепрессия - это угнетение детоксикационной и, отчасти, синтетической функций органа (Шерлок Ш , 2002, Gerber Т, Schomerus Н , 2000, Abou-Assi S , Vlahcevic Z R, 2001)

Состояние функции детоксикации при гепатитах чаще принято оценивать косвенно, ориентируясь на клшшческие симптомы, степень выраженности цитолиза гепатоцитов, нарушений белоксинтетической функции, изменений в гемостазе в комплексе с вирусологическими исследованиями Также учитываются данные ультразвукового и радиоизоюпного сканирований, полагая, что, чем значительнее структурные изменения, тем в большей степени угнетены функции печени (Силивончик Н Н , 2001, Баранов А А и др , 2003, Лобзин Ю В, 2003,)

Прямыми индикаторами состояния функции детоксикации являются нагрузочные пробы, из которых чаще используется антипириновый тест (АндрееваТВ и др ,2000, Непомнящих В А идр ,2006, GuengenchF, 1999, Chernyak Y, Mermova А , 2001) Но его клиническое применение частично ограничено побочными эффектами препарата, техническими неудобствами проведения пробы, несовершенством методик обнаружения вещества в жидкостях организма Также противоречивы данные о чувствительности и диагностической ценности теста (Сергеенко В И и др, 2003, Engel G и соавт, 1996, Schulz М and Shcmoldt, 2003)

Скорость биотрансформационных процессов в печени генетически детерминирована и зависит от этнической принадлежности, пола, возраста (Пальцев М А и др , 2004, Вартанян Ф Е , 2006, Сычев ДА и др , 2006, Evans W Е and Johnson J , 2001, Moor N , 2001, Rogers J F и соавт, 2002) Следователь-

но, степень ее нарушений при вирусных гепатитах индивидуальна, что также затрудняет интерпретацию результатов нагрузочных проб

Ранее для оценки скорости процессов биотрансформации в печени при проведении фармакокинетических исследований использовался тест с про-пранололом (Peng G W, 1990), но мы не обнаружили работ о его применении для оценки изменений детоксикационной функции при ее заболеваниях

Проведение нагрузочных тестов требует многократного определения концентрации модельного вещества, поэтому в качестве тест-ткани желательно использовать неинвазивно получаемые биологические жидкости организма Кроме того, метод его обнаружения должен быть высоко специфичным, тк во время проведения проб пациенты принимают различные лекарственные препараты

В связи с вышесказанным особенности изменений детоксикационной функции печени при вирусных гепатитах требуют дополнительного изучения Также остается открытым вопрос о надежном, неинвазивном, технически приемлемом методе ее исследования, который позволил бы объективизировать оценку степени гепатодепрессии при вирусных гепатшах

Цель исследования: установить с помощью нагрузочных проб (анти-пириновой и теста с пропранололом) закономерности изменений детоксикационной функции печени при вирусных гепатитах и их взаимосвязи с наиболее употребляемыми функциональными пробами печени

Для достижения поставленной цели последовательно решались следующие задачи:

1 Разработать способ определения пропрацолола и модифицировать метод обнаружения антипирина в слюне, плазме/сыворотке крови, апробировать методику проведения нагрузочного теста с пропранололом с использованием слюны для оценки состояния детоксикационной функции печени

2 Изучить с помощью нагрузочных тестов особенности биотрансформиру-ющей функции печени здоровых в зависимости от этнической принадлежности (у бурят и русских)

3 Исследовать с помощью нагрузочных проб характер изменений детоксикационной функции печени при разных формах вирусных гепатитов и сравнить чувствительность тестов между собой

4 Оценить характер взаимосвязей между состоянием детоксикационной функции с одной стороны и степенью цитолиза гепагоцитов, нарушениями би-лирубинового обмена, белоксинтетическои функции при разных формах вирусных г епатитов - с другой

Научная новизна. Впервые разработан метод твердофазной экстракции пропранолола и других (3-адреноблокаторов с использованием нового

отечественного сорбента Риго5ер-200' (на основе сверхсшитого полистирола) для ВЭЖХ анализа в биологических жидкостях (слюна, плазма/сыворотка крови) с УФ-детекцией

Предложена модификация жидко-жидкостной экстракции антипирина для ВЭЖХ анализа в сшоне, плазме/сыворотке крови с УФ-детекцией

Установлено, что скорость процессов детоксикации в печени, по данным теста с пропранололом, у здоровых лиц (бурят и русских) вне зависимости от национальной принадлежности имеет бимодальное распределение с одинаковой частотой встречаются "быстрые" и "медленные" элиминаторы У "медленных" элиминаторов бурят процессы биотрансформации происходят с меньшей скоростью

Впервые показано, что при вирусных гепатитах, по данным тес га с пропранололом, развиваются неоднозначные изменения детоксикационной функции печени при остром гепатите средней степени тяжести в период разгара заболевания происходит ее активация, а при хроническом - угнетение уже на ранних стадиях развития заболевания При этом характер нарушений процессов детоксикации не зависит от степени цитолиза гепатоцитов, изменений би-лирубинового обмена, белоксинтетической функции Нарушение биотрансфор-мациопных процессов при хроническом вирусном гепатите предшествует другим дисфункциям печени

Теоретическая и практическая значимость. В ходе исследования был разработан чувствительный, специфичный, воспроизводимый метод определения иропранолола и других Р-блокаторов (бисопролола, атенолола и сота-лола) в биологических жидкостях организма плазме/сыворотке крови, слюне

Разработана и апробирована методика проведения нагрузочного теста с пропранололом для исследования детоксикационной функции печени при вирусных гепатитах Показано, что для определения параметров скорости элиминации модельного вещества достаточно 4-5 определений его концентрации, чш позволяет сократить время исследования и исключить забор пробы в ночное время Использование слюны в качестве тест-ткани позволило проводить тест с пропранололом неинвазивно

Полученные данные расширили представление о характере изменений детоксикационной функции печени при различных формах вирусных гепатитов Показано, что при остром гепатите средней степени тяжести в стадию разгара происходит компенсаторная активация детоксикационной функции пе-

1 Автором сорбента является проф В А Даванков (Институт элементоорганичсских соединений имени А Н Несмеянова РАН Москва) Разработка методики проводилась при его личной информационной поддержке

чени В патогенезе хронических вирусных гепатитов функция детоксикации угнетается на самых ранних этапах развития заболевания, в том числе при отсутствии активности процесса

Обнаруженная разница в скорости биотрансформационных процессов у бурят и русских по данным теста с пропранололом позволит оптимизировать терапию лекарственными препаратами, которые метаболизируются в печени с участием тех же изоформ системы СУР, что и пропранолол (липофилыше Р-блокаторы, антидепрессанты, нейролептики, ингибиторы протонной помпы идр)

Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедр патологической физиологии, госпитальной терапии, инфекционных болезней с курсом общей и военной эпидемиологии Читинской государственной медицинской академии

Положения, выносимые на защиту:

1 Разработанный метод определения пропранолола является чувствительным и воспроизводимым по сравнению с имеющимися аналогичными Пропра-нололовый тест с использованием слюны может примеюиься для оценки детоксикационной функции печени при вирусных гепатитах

2 Скорость метаболических процессов в печени у бурят и русских, по данным теста с пропранололом, имеет этнические особенности у "медленных" элиминаторов бурят она меньшая

3 Характер изменений детоксикационной функции, а также ее взаимосвязи с наиболее употребляемыми функциональными пробами печени зависят от формы вирусных гепатитов

Апробация работы. Основные результаты исследования доложены на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии" (Курск, 2006), VII Международной научно-практической конференции "Здоровье и Образование в XXI веке" (Москва, 2006), Всероссийском симпозиуме РАН "Хроматография в химическом анализе и физико-химических исследованиях" (Москва-Клязьма, 2007), I межрегиональной конференции "Сочетанные заболевания внутренних органов в терапевтической практике" (Иркутск, 2007), Всероссийской 15-ой научно-практической конференции "Достижения современной гастроэнтерологии" (Томск, 2007), совместном заседании кафедр патофизиологии, нормальной физиологии, биохимии, фармакологии с участием сотрудников НИИ медицинской экологии ЧГМА (Чита, 2007)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 2 - в изданиях, определенных ВАК для публикации результатов диссертационных исследований

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и состоит из введения, двух глав обзора литературы, описания материалов и методов исследования, двух глав собственных исследовании, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, иллюстрирована 17 таблицами и 23 рисунками Указатель литературы включает 145 работ отечественных и 103 - зарубежных авторов

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Характеристика обследованных групп. В работе с обследуемыми лицами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (1964, 2000 ред) Исследование проводилось в следующих группах

1 Контрольная включала 32 здоровых добровольца, разделенных на 2 подгруппы

- 16 представителей европеоидной расы, половина из которых мужчины, половина - женщины, средний возраст - 24,6 ± 4 года,

-16 представителей монголоидной расы (бурягы), среди которых преобладали женщины 9 (56%), мужчин - 7 (44%), средний возраст - 26,4 ± 3 года

Национальность и наличие противопоказаний выяснялись путем анкетирования, куда также были включены тестовые вопросы для выявления возможного злоупотребления алкоголем - вопросник CAGE (Маевская М В , 2001, Шерлок Щ, 2002)

Из исследования исключались лица, имеющие условия для изменения скорости элиминации антипирина и пропранолола набравшие по вопроснику CAGE 2 балла и более (т е имеющие признаки злоупотребления алкоголем), принимающие лекарственные средства (в том числе гормональные контрацептивы) или биологические добавки, влияющие на активность системы С YP 450, имеющие отягощенный аллергологический анамнез В течение недели до и во время проведения проб испытуемые придерживались диеты №5 по Певзнеру (для исключения влияния пищевых продуктов на абсорбцию модельных веществ)

2 Исследуемые группы - 50 больных вирусными гепатитами, находившихся на лечении в отделении гепатологии ГУЗ "Областная клиническая инфекционная болыгица" г Читы Диагноз, стадия и активность процесса выставлялись согласно действующей международной классификации вирусных гепатитов (Лос-Анджелес, 1994) В зависимости от формы заболевания пациенты были разделены на подгруппы

- бопьные острым вирусным гепатитом, желтушной формы, средней сте-

пени тяжести, в стадию разгара заболевания -15 человек Из них 9 (60%) - с вирусным гепатитом А и 6 (40%) - вирусным гепатитом В В группе преобладали женщины (9 человек), средний возраст составил 291- 5,0 лет

- больные хроническим вирусным гепатитом 0 степени активности - 12 пациентов, у которых маркеры вирусных гепатитов были выявлены впервые при проведении профилактических осмотров, за 1 - 5 месяцев до исследования Всем была диагностирована 0-1 стадия развития заболевания Мужчин и женщин в группе было поровну, средний возраст - 30,2±6,5 лет Пациенты mi в анамнезе, ни при поступлении в стационар не имели субъективной симптоматики, считали себя здоровыми людьми и были госпитализированы для дообследовать У большинства из них - 7 (58%) был диагностирован хронический вирусный гепатит С, у остальных - В

- больныехроничеекгш вирусным гепатитом 2-3 степени активности -11 человек с продолжительностью заболевания 3-5 лет, со 2 стадией процесса Подавляюще большинство -10 человек, составляли мужчины Средний возраст - 36±8,1 года Большинство -10 человек (91 %) больные хроническим вирусным гепатитом С

- бочьные субкочпенсированным (класс В по Чайльду-Пью) вирусным циррозом печени в активную фазу - 12 человек Среди них - 8 (67%) мужчины, 4 (33%) - женщины, средний возраст - 31,4±4,7 года У большинства - 7 (58%) выявлены маркеры гепатита С, у 3 (25%) - В+С, у остальных - В

Критериями исключения из группы служили налтие противопоказаний к применению пропранолола и антипирина, прием энтеросорбенгов (либо тес-1ы проводились после окончания сорбционпой терапии), прием фенобарбитала, рифампицина (индукторы системы CYP), употребление наркотических средств Все пациенты находились на одинаковом режиме (палатном), диете (стол №5 по Певзнеру), получали стандартную терапию

Биохимическое исследование. Всем испытуемым проводились определение уровня билирубина и его фракций по Иендрашику - Гроффу, АлАТ и АсАТ - стандартшдми биохимическими наборами фирмы "Согшау" (Польша), уровень общего белка - биуретовым, белковых фракций - турбодимегричес-ким методами, сулемовой пробы - по Grinstedt F, протромбинового индекса - унифицированным методом (Тимин О А и соавт, 2002, Титов В Н , 2004)

Инструментальное исследование. Больным с ОГ проводилось УЗИ органов брюшной полости Пациентам с хроническими гепатитами и циррозом печени наряду с УЗИ проводили радиоизотопное скенирование печени с коллоидом, меченым 99гаТс по стандартной методике

Методы оценки детоксикационной функции печени.

Антигшрииовый тест Использовался антипирш! ("ICN", Россия) из расчета 10 мг/кг массы пацпента Препарат принимался испытуемыми утром Через 4, 8, 12, 16 и 24 часа (в контрольной группе проводился дополнительный забор через 20 ч) собирали 3 - 4 мл слюны и до исследования хранили в замороженном виде при -20°С Отделение слюны стимулировали приемом 3-4 кристалликов пищевой лимонной кислоты Перед анализом слюну оттаивали при комнатной температуре и фильтровали через бумажный фильтр (белая лента) Концентрация антипирина в биопробе определялась методом ВЭЖХ с УФ-детекцией и жидко-жидкостной экстракцией собственной модификации

Тест с пропранолалоч Использовался таблетированный препарат ("Тат-химфармпрепараты", Россия) в однократной дозе 60мг Пробы слюны собирались и хранились аналогично образцам для проведения ангипиринового теста Определение концентрации пропранолола проводилось методом ВЭЖХ с УФ-детекцией и твердофазной экстракцией по оригинальной методике

Расчет параметров элиминации модельных веществ После определения концентрации препаратов в определенные промежутки времени строилась кривая элиминации - "концентрация - время" Учитывая, что и антипирин, и пропранолол имеют кинетику первого порядка, для расчета показателей использовалась одночастевая модель без всасывания Площадь под кривой (AUC) рассчитывалась линейным трапециидальным методом Определялись показатели, отражающие метаболизм модельных веществ Т1/ - время, требующееся для снижения концентрации препарата на 50%, и общий клиренс -объем тест-ткани, очищаемой от препарата за единицу времени При оценке полученных результатов учитывалось, что в рамках кинетики первого порядка TV2 и клиренс являются величинами постоянными, независящими от принятой дозы и начальной концентрации препарата (Холодов Л Е, 1985, Мирошниченко И И ,2002, Сергиенко В И исоавт,2003,PengG W исоавт, 1990)

Статистическая обработка материала проведена с использованием пакета программ STATISTICA® 6 0, StatSoft Inc (США) Учитывая нормальное распределение данных, при сравнении групп использовался t - критерий Стыоден-та для независимых выборок, различия считали значимыми при р<0,05 Результаты исследования представлены как M±SD, где М - среднее значение, SD -среднее квадратичное отклонение При анализе взаимосвязей параметров применялся корреляционный метод Пирсона (Реброва О Ю , 2006) Для оценки воспроизводимости разработанных методик рассчитывался коэффициент вариации аналитической воспроизводимости (V), при этом вариабельность считали слабой, если V < 10% (Меньшиков В В , 2000)

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Разработка ЮЖХ методов анализа пропранолола и антипирина в биологических жидкостях 1.1. Разработка метода твердофазной экстракции (БРЕ) р-блокаторов

В качестве тестируемых препаратов использовали липофильные (пропра-нолол и бисопролол) и гидрофильные (атенолол и соталол) В качестве внутреннего стандарта (В) для пропранолола использовали бисопролол, для сота-лола - атенолол (справедливо обратное) Твердофазную экстракцию производили на картриджах, упакованных новым сорбентом - сверхсшитым полистиролом (Ригозер-200) (Даванков В А , 2002-2005) Картриджи готовили по собственной методике на основе 3-мл полипропиленовых шприцев с фторопластовыми фильтрами (8ире!со, США), которые упаковывались 30 мг сорбента

В качестве тест-ткани использовали плашу/сыворотку крови, слюну К плазме/сыворотке перед загрузкой в картридж добавляли кислоту для высвобождения Р-блокаторов из связи с белками Определили, что лучше использовать фосфорную кислоту Разницы в степени экстракции при использовании плазмы либо сыворотки не обнаружено Экстракция из слюны технически сложнее, тк она содержит высокомолекулярные шикопротеины Устранить их можно последовательным замораживанием-оттаиванием и центрифугиро-

и и

Рис 1 Хроматограммы стандартов бисопролола и пропранолола 200 и 50 иг соответственно (слева), экстракта сыворотки (в центре) и слюны (справа) пациента через 4 часа после приема 80 мг пропранолола (бисопролол - 1Б) Экстракция из сыворотки 98%, из слюны - 96%

вашем, иногда дополнительной фильтрацией Установили, что исходная рН бнопробы - кислая, щелочная или нейтральная - не влияет на выход р-блока-торов

Стандарш готовили из таблетировашшх препаратов, растворяя их в 50% водном метаноле с добавлением 1% (rio объему) концентрированной 113Р04 Базовые растворы (100 нг/мкл) фильтровали Хранили в темноте при комнатной температуре Рабочие растворы готовили в день исследования, разбавляя базовые элюентом до концентрации 10 нг/мкл

Разработанный нами протокол экстракции представлен в таблице 1 Хроматография Аналитическая колонка 100x4 мм с Диасфер С18 5 мкм УФ-детекция при 220 нм Элюенты ацетонитрил-вода-изопропанол-TFA (50 50 1 0 05, v/v/v/v)+ 200 мг/л Na-DDS для пропранолола и те же компоненты в соотношении 35 65 1 0 05+200 мг/л Na-DDS для атенолола и соталола, скорость потока 600 мкл/мин, давление около 36 бар (пример хроматограмм представлен на рисунке 1)

Таблица 1

Базовый протокол экстракции гидрофильных и липофильных ß-блокаторов

Этапы Основной вариант Альтернативные варианты

Промывка 1 мл хлороформа, 1 мл этанота 1 мл дичлорметана, 1 мт изопропанола

Регенерация и кондиционирование 1 мл метанола, 1 мл воды

Загррка 1 мл биопробы + IS + 20 мкл Н,Р04 1 мл биопробы f 50 мкл СН,СООН

Промывка 1 1 мл 10% водного метанола+ 20 мкл NH4OH (гидрофильные), 1 мл 40% водного метанола + 20 мкл NHjOH (липофилыше) 1 мл 5% водного метанола (гидрофильные) или 1 мл 20% водного метанола (липофильные)

Высушивание 3 - 5 мин под слабым вакуумом

Промывка 2 0,5мл этилацетага, затем 0,5 мл хлороформа (гидрофильные), 1 мл хлороформа (липофильные) 1 мл хлороформа, или 1 мл дихлорметаиа, или 1 мл гексана

Высушивание 1 мин под слабым вакуумом

Элюирование 1 мл смеси хлороформ - метанол (3 1, v/v) с добавлением 1 капли TFA на 4-5 мл растворителя 1 мл смеси ацетон - метанол (9 1, v/v, гидрофильные) или 100% метанолом с добавлением 1 капли TFA на 4-5 мл растворителя (липофильные)

Упаривание При 50° С на нагревательной плате в стаканчиках (Рутех)

Растворение В 100 мкл элюента В 100 мкл 0 1% TFA

Чувствительность лимит детекции (сигнал/шум >3) составили 5 нг для пропраиолола, по 10 иг для атеиолола и соталола и 25 нг для бисопролола на микроинъекцию 10 мкл экстракта биопробы, соответствует 0,1 мл слюны)

Оценка воспроизводимости метода С этой целью оценивали аналитическую вариацию разработанной методики в серии (в течение 1 лабораторного дня -10 определений) и во времени (в течение 1 месяца - 22 определения) К бланковой слюне добавлялись стандарты (50 нг пропраиолола и 200 нг бисопролола - IS), встряхивали на вортекс 2-3 мин, после чего проба хранилась при минус 20°С до анализа В ходе эксперимента слюна оттаивалась и подвергалась полной процедуре экстракции Результаты определений пропраиолола в течение 1 дня - 47,3±0,9 нг/мл, при коэффициенте вариации -1,9%, в течение 1 месяца - 46,2±1,5 нг/мл, при V~3,2% Таким же способом определяли воспроизводимость при использовании бланковой плазмы/сыворотки крови Результаты определений в течение 1 дня - 46,8±0,73 hi/мл, при V=l,6%, в течение 1 месяца - 46,1±1,2 нг/мл, при V=2,6% Результаты свидетельствуют о хорошей воспроизводимости метода

1.2. Модификация жидко-жидкостной (LLE) экстракции антипирина

Экстракция в эппендорфовскую пробирку помещали 300 мкл слюны, добавляли 50 мкл рабочего раствора внутреннего стандарта - ацетазоламида (10 нг/мкл), 300 мкл ацетонитрила и осторожно перемешивали до получения гомогенной массы Затем вносили до насыщения кристаллический сульфат аммония, встряхивали на вортекс 10-15 сек и центрифугировали при 10 000 rpm 15-20 сек , 5 мкл верхнего органическою слоя вводили в хроматогра-фическую систему

Хроматография колонка 100x4 мм с Диасфер CN 5 мкм детекция при УФ 254 нм Элюенг ацегонитрил - вода (25 75, v/v) + 1% изопропанола, скорость потока 600 мкл/мин, давление 48 бар

Чувствитечъность лимит детекции (сигнал/шум >3) составили 0,5 нг для антипирина и 1,5 нг для ацетазоламида (IS) на микроиш>екцито - 5 мкл экстракт а биопробы (соответствует 0,05 мл слюны) В нашей модификации LLE антипирина не используется упаривание и длительное центрифугирование (что позволило сократить время процедуры до 5-10 минут), не применяется разбавление биопробы (что повысило чувствительность)

Вариабечьность воспроизводимости в течение лабораторного дня -V = 3,6%, в течение месяца V = 4,8%

2. Сравнительный анализ диагностических возможностей нагрузочных тестов 2.1. Этнические особенности скорости биотрансформации модельных веществ у здоровых

Антипирин овый тест Скорость метаболизма антипирина в обеих группах имела тримодальное распределение большинство обследованных лиц обеих национальностей - 8 (50%) буря г и 9 (56%) русских - фенотипически принадлежало к "средним" элиминаторам с Т'/211,6±0,7 ч К "быстрым" эли-минаторам с Т'/2 8,0±1,2 ч принадлежали 6 (37,5%) буряги 5 (31%)русских, и только по 2 человека (12,5%) в каждой группе относились к "медленным" с Т'/ 14,0±1,0 ч Различий в скорости биотрансформации антипирина между соответ ствующими метаболическими типами разных этнических групп, а также в частоте встречаемости типов элиминации не обнаружено При анализе особенностей элиминации в зависимости от пола различий также не получено В дальнейшем эта ipynna использовалась для сравнения в качестве контроля без учета пола и этнической принадлежности

Тест с пропранололоы В доступной нам литературе мы не обнаружили данных о распределении типов элиминации пропранолола в популяции, указываются лишь усредненные данные ТЧ2 пропранолола 3 - 5ч Среди здоровых добровольцев в нашем исследовании зарегистрировано бимодальное распределение скорости метаболизма пропранолола в обеих этнических группах Среди бурят доля "средних" и "медленных" элиминаторов в нашей выборке одинакова, среди русских "средних" элиминаторов несколько больше - 10 (62,5%), а среди бурят - 6 (37,5%) Достоверной разницы в частоте встречаемости элиминационных типов нет

При сравнении значений Т1/, пропранолола между различными типами элиминаторов с учетом национальности получены достоверные различия этого параметра как между "средними" и "медленными" метаболизаторами бурятами (р<0,001), так и соответственно русскими (р<0,001) При сравнении этого параметра между этническими группами зарегистрированы значимые отличия между "медленными" элиминаторами - бурятами и русскими (у бурят метаболизм происходит медленнее, р^0,006) Вместе с тем между "средними" метаболизаторами - бурятами и "средними" метаболизаторами - русскими отличий не выявлено, р>0,05 (табл 2)

При анализе особенностей элиминации пропранолола в зависимости от пола испытуемых различий не получено

На следующем этапе исследования для корректной оценки данных теста у больных гепатитами мы учитывали результаты, полученные при обследовании здоровых

Таблица 2

Распределение Т1/ проиранолола в зависимости от типа элиминации и этнической принадлежности (М ± ББ)

Показатель "Средние" элнмина горы -буряты (п=8) "Медленные" элиминаторы -буряты (п=8) "Средине" эчиминаторы -русские (п=10) "Медленные" эчиминаторы -русские (п=6)

Т'/г(ч) 6,1 ± 0,6 р2 < 0,001* Р, > 0,05 р4< 0,001* 9,4 ± 1,0 р, < 0,001* р,< 0,001* Р4 = 0,006* 5,5 ± 1,5 р, > 0,05 р, < 0,001* р, = 0,001* 8,0 ± 0,2 р, <0,001* р2 = 0,006* р, = 0,001*

р, - значение различий в сравнении со "средними" эаиминагорами - бурятами. р2 - значение разчичий в сравнении с "медленными" элимииаторами - буря1ами,

- значение различий в сравнении со "средними" элимииаторами - русскими р4 - значение различий в сравнении с "медленными" элимииаторами - русскими * - значимые различия

- величины Т1/ проиранолола больных сравнивались с показателями "медленных" элиминаторов, т к исходный тип метаболизма больного нам неизвестен При таком подходе максимально снижается вероятность ложной регистрации замедления выведения модельного вещества из организма,

- учитывалась этническая принадлежность пациента для бурят за норму принимался V/ 9,4±1,0 ч , для русских - 8,0±0,2 ч

2.2. Изменения скорости элиминации модельных веществ при вирусных гепатитах

Антипириновый тест У больных ОВГ, а также ХВГ 2-3 акт замедления выведения антипирина не происходило ТЧг его при этих заболеваниях не оыичался от контрольной группы, р>0,05 (табл 3) У пациентов с ХВГ 0 акт происходило угнетение метаболизма антипирина как в сравнении со здоровыми испытуемыми (р=0,004), так и больными ОВГ (р=0,003) В группе с ЦП элиминация антипирина также значительно замедлялась примерно на 40% удлинялся Т1/ модельного вещества по сравнению со здоровыми (р=0,014), при сравнении же степени нарушения элиминации с больными ХВГ 0 активности, значимых различий не зафиксировано (р>0,05)

Таким образом, скорость биотрансформации антипирина сохранялась в пределах здоровых у пациентов с ОВГ и ХВГ 2-3 активности, и в равной степени замедлялась при ЦП и ХВГ 0 акт При исследовании клиренса антипирина получено он остается на уровне здоровых при ОВГ, ХВГ 0 акт и даже при ЦП, а в группе бочьных ХВГ 2 акт - увеличивается (табл 3 )

Тест с пропрано ютом Получены результаты с иной тенденцией (табл 4 )

Таблица 3

Показатели аитипиринового теста больных вирусными гепатитами, тест-гкань - слюна (М - 80)

Показатель Здоровые П=32 ОВГ п =15 ХВГ 0 акт п =12 ХВГ 2-3 акт п =11 Цирроз печени п=12

Т>/2 (ч) 10,9 ±2,2 10,9 + 2,0 Р, > 0,05 р, = 0,003* Р, >0,05 р, = 0,014* 13,7 ±2,4 р, = 0,004* р2 = 0,003* р4< 0,001* Р; > 0,05 9,9 ± 2,0 р, > 0,05 р2 > 0,05 р3 <0,001* р, - 0,007* 14,2 ± 4,2 р, = 0,014* р2 = 0,014* Р3 > 0,05 р4 = 0,007*

Клиренс (мл/мин) 3,2 ь 0,9 4,0 ± 1,2 р, > 0,05 Р, >0,05 р4 <0,001* Р, >0,05 3,9 ± 0,9 Р, > 0,05 Р2 > 0,05 Р„< 0,001* Р, > 0,05 4,5 i 0,9 р, < 0,001 * р2< 0,001* р3 < 0,001* р3 <0,001* 3,6 ± 1,0 р, > 0,05 р2 > 0,05 Р, > 0,05 р4< 0,001*

р1 - значение различий по отношению к здоровым,

р2 - значение различий по отношению к больным ОВГ,

р3 - значение различии по отношению к больным ХВГ 0 активности,

р4 - значение различий по отношению к больным ХВГ 2-3 активности,

- значение различии по отношению к больным циррозом печени, * - указаны случаи значимых различий

При ОВГ происходило ускоретк выведения пропранолола, как по сравнению со здоровыми, так и всеми остальными группами больных, при ХВГ 0 акт и ХВГ 2-3 акт в равной степени наблюдалось его замедление, и самое значительное нарушение метаболизма происходило при ЦП

Таблица4

Показатели теста с пропранололом больных вирусными гепатитами, тест-ткань - слюна (М ± ББ)

Показатель Здоровые п —16 ОВГ п-15 ХВГ 0 акт п =12 ХВГ 2-3 акт п =11 Цирроз печени п =12

П (ч) 8,0 ± 0,2 4,9 ± 1,7 р, <0,001* ро <0,001* р4 <0,001* р, <0,001* 13,45 ±2,1 р, <0,001* р2< 0,001* Р4 >0,05 р., <0,001* 12,4 ± 3,4 р, <0,001* р2 <0,001* р, > 0,05 р <0,002* 16,5 ± 0,9 р, <0,001* р2< 0,001* р3 < 0,001* р4 < 0,002*

Клиренс (мл/мин) 47,8 ± 20,9 84,1 ±20 7 р, <0,001* р, <0 001* Р4 <0,001* р5 < 0 001* 48 3 ± 19,3 Р, > 0,05 р2< 0,001* р4< 0,001* р5 > 0 05 122,2 ± 7,34 р, <0,001* рг <0,001* р3 <0,001* р <0,001* 54,9 ± 9,3 Р, > 0,05 р2 <0,001* P, > 0,05 р4 <0,001*

Прим те же, что к таблице 3

Время взятия пробы ' '

-Здоровые —•— ОВГ -«—ЦП

| - - - ХВГ 0 акт.--ХВГ 2-3 акт.__

Рис. 2. Типичные элиминационные кривые теста с пропранололом.

Угол наклона кривой при ОВГ самый большой. При ХВГ 0 акт. и ХВГ 2-3 акт. наклон кривых практически одинаков. Самая пологая кривая в группе пациентов с ЦП. . ....

При проведении теста с пропранололом мы установили следующие методологические особенности. Концентрация пропранолола через 24 ч. у здоровых находится на пределе чувствительности метода - 5-7 нг/мл, кроме того, эти результаты не влияют на точность построения элиминационной кривой. Несмотря на то, что у больных уровень препарата в слюне в это время выше, для проведения теста в клинических условиях достаточно забора материала 4 раза - через 4,8,12 и 16 часов от приема. Это является более удобным и для пациента, и для исследователя, т.к. исключается забор пробы в ночное время. Пример элиминационных кривых представлен на рисунке 2.

2.3. Сравнительный анализ наиболее применяемых функциональных проб печени при вирусных гепатитах

Изменение индикаторов цитолиза гепатоцитов представлено на рис. 3. Самый высокий уровень АлАТ - при ОВГ; группы с ХВГ 2-3 акт. и ЦП по этому показателю достоверно отличались от здоровых (р<0,001), причем при ХВГ 2-3 акт. уровень фермента выше, чем при ЦП (р<0,001). Повышение уровня АсАТ имело несколько другую тенденцию. Концентрация ее при ОВГ была также самой высокой, а при ЦП ее уровень был выше, чем при ХВГ 2-3 акт. (во всех случаях р<0,001). Уровень обеих трансаминаз при ХВГ 0 акт. не отличался от здоровых. Если предположить, что нарушение процессов детоксикации зависит от степени цитолиза гепатоцитов, то при ОВГ оно должно быть самым

значительным, при хронических гепатитах угнетение их будет происходить в ряду ХВГ 0 акт. ЦП ХВГ 2-3 акт., что противоречит патогенетической сущности этих состояний. У больных же с ХВГ 0 акт. изменения этой функции печени должны отсутствовать, т.к. уровень трансаминаз у них находится в переделах нормы.

Закономерности изменений уровня билирубина представлены на рис. 3. Биотрансформация билирубина является составной частью детоксикацион-ной функции печени. Поэтому уровень этого пигмента часто считают индикатором ее угнетения в целом. Самые значимые изменения билирубинового обмена, конечно же, происходили при ОВГ и, в меньшей степени, при ЦП. Обращает на себя внимание тот факт, что по уровню билирубинемии (следовательно, и по состоянию этой функции печени) не отличались группы ХВГ О акт. от здоровых лиц, а также пациенты ХВГ 0 акт. и ХВГ 2-3 акт. между собой. Безусловно, что при ОВГ и ЦП гипербютирубинемия является проявлением не только нарушения его обезвреживания, но и цитолиза гепатоцитов. Если же для оценки функции детоксикации в целом в качестве критерия использовать уровень билирубина, то вновь получается, что самое выраженное угнетение ее должно было происходить при ОВГ, в меньшей степени - при ЦП, и практически отсутствовать при хронических гепатитах.

Уровень белка и его фракций в сыворотке крови (рис. 4) был самым низким у больных с ОВГ и только у этой группы он отличался от показателей здоровых лиц (р<0,001). При сравнении концентрации белка между исследуемыми группами показано, что его уровень достоверно ниже при ОВГ по сравнению с больными ХВГ 2-3 акт. (р=0,045), и также значимо ниже при сравнении с пациентами с ЦП (р=0,002). Несмотря на зарегистрированные различия, колебания концентраций белка сыворотки во всех исследуемых группах находились

Уровень билнрубвнем ни

Индикаторы цитолиза гепатоцитов

ЕД/л 1200 1000 800 SOO 400 200 О

У

/

/

/

/

/ / •гзаг-Щ рвщтШшШг

oSü 1?

2 АлАТ (ЕД/л) а АсАТ (ЕД/л)

Я Билирубин о

53 Прямей ОНелряМ'

Рис.3. Уровень трансаминаз и билирубина крови больных вирусными гепатитами.

в пределах нормы. Гипоальбуминемия наиболее выражена была при ОВГ (при сравнении со всеми группами р<0,001) и ЦП (во всех случаях, кроме сопоставления с ОВГ, р<0,05), но между собой пациенты с этими заболеваниями по уровню альбуминов крови не различались. Группы же с ХВГ 0 акт. и ХВГ 2-3 акт. по концентрации альбуминовой фракции не отличались ни от здоровых, ни между собой (при всех сопоставлениях р>0,05). У всех больных, за исключением пациентов с ХВГ 0 акт., было зафиксировано повышение фракции у-глобулинов крови по сравнению со здоровыми (р<0:05). Но между собой по этому показателю не отличались пациенты с ОВГ и ЦП (р>0,05), а также страдающие ХВГ 0 акт. и ХВГ 2-3 акт. (р>0,05). Кроме того, концентрация фракции у-глобу-линов при ОВГ, ХВГ 0 акт. и ХВГ 2-3 акт., хотя и отличалась от контрольной группы, но находилась в референтных пределах.

Уровень ПТИ не отлетался от здоровых ни у одной из исследуемых групп (р>0,05). Сулемовая и другие осадочные пробы, несмотря на известную низкую чувствительность и специфичность, входят в стандарты обследования пациентов с заболеваниями печени (Шутутко Б.И., 2003), поэтому мы анализировали характер изменений и этого критерия. Ни в одной из исследуемых групп нами не было обнаружено отличий сулемового титра от здоровых.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что возможность использования уровня общего белка крови, сулемового титра, ПТИ для косвенной оценки степени угнетения детоксикационной функций печени, скорее всего, сомнительна - колебания этих параметров во всех группах происходят в реферативных пределах. Более чувствительным в этом аспекте параметром является определение белковых фракций. Но уровень альбумина одинаков в группах ХВГ 0 акт. и ХВГ 2-3 акт., а также между пациентами с ХВГ 2-3 акт. и с ЦП. Несмотря на имеющуюся тенденцию к увеличению фракции у-глобулинов во всех группах больных, кроме пациентов с ХВГ 0 акт., этот показатель был выше

Общин белок крови

Уровень белковые фриьашй крови

65 -

| Я Здоровые О ОВГ В ХВГ 0 акт Ш ХВГ 2-3 акт О ЦП I |ш Зд,,,,.»« о опт о хвго га. о ХВГ2-3 □ ЦП

Рис. 4. Уровень общего белка крови и его фракций при вирусных гепатитах. 18

нормы только у страдающих ЦП

Инструментальные исследования У подавляющего большинства пациентов вне зависимости от формы гепатита, при УЗИ были зарегистрированы умеренные диффузные изменения - от 60% у больных ОВГ до 90-100% при обеих формах хронических гепатитов и ЦП Более специфичная картина регистрировалась при ЦП (у 10% из них - выраженные диффузные изменения, а у 60% - гепато- и спленомегалия) При оценке изменений на сонограммах следует учитывать, что и у здоровых людей отмечаются значительные различия в эхогенности печени (Шерлок Ш , 2002)

Радиоизотопное скенирование печени отражает не только структурные изменения, но и в какой-то мере функциональное состояние органа Нарушения, выявленные э тим методом, во всех группах достаточно однотипны у большинства больных выявлялись (как и при УЗИ) умеренные диффузные изменения печени Следует отметить, что при ХВГ 0 акт, в сравнении с УЗИ печени, процент их выявления был выше, а при ХВГ 2-3 акт, радиоизотопное скенирование не всегда подтверждало результаты, полученные предыдущим методом (72% против 91 % подобных изменений в этой группе при сонографии) Более специфические результаты вновь регистрировались при ЦП на фоне диффузных изменений визуализировались мелко- и среднеузловые образования Сцин-тиграфическая картина при ХВГ 0 акт и при ХВГ 2-3 акт (те при разных стадиях хронического гепатита) была практически идентичной Таким образом, судить о степени нарушения функций органа, опираясь на выраженность структурных изменении (по данным УЗИ и сцинтиграфии) можно только с позиции того, что при ЦП они более значительны Однако, оценивать изменения при хронических гепатитах разной стадии и степени активности процесса скорее всего невозможно

3. Взаимосвязи между изменениями наиболее употребляемых функциональных проб печени и нагрузочными тестами

Каждый из биохимических методов исследования печени отражает нарушения функции органа в своем аспекте уровень трансаминаз - проницаемость мембран и цитолиз гепатоцитов, концентрация альбуминов и колебания ПТИ -белоксинтетическую функцию, концентрация непрямого билирубина - обезвреживание этого эндогенного вещества Исследованные нами нагрузочные тесты характеризуют детоксикационную функцию печени, осуществление которой будет страдать при повреждении клеток органа В связи с этим мы предположили, что выявленные нами изменения в элиминации модельных веществ и изменения других функциональных тестов при гепатитах взаимосвязаны между собой, и для их интерпретации мы использовали корреляционный анализ

(рис 5) Наличие связей и их силу оценивали по отношению к периоду полувыведения модельных веществ, так как именно по этому параметру выявлены значимые изменения

Корреляционные связи между изменениями наиболее употребляемых ФПП и состоянием детоксикационной функции при каждом заболевании отмечались между разными параметрами и имели разный характер и чаще среднюю или малую силу При ОВГ они не регистрировались Выделить же один индикатор среди общепринятых исследовашга, по степени изменений которого можно было бы косвенно судить о состоянии детоксикационной функции печени, не представляется возможным

ЗДОРОВЫЕ

Т /2 антипирина

АлАТ

АсАТ

Билирубин

Альбу мины

ПТИ

Г'/г пропранолола

г=0 57, р=0,04

ХРОНИЧЕСКИЙ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТ НЕАКТИВНЫЙ

Т А антипирина

АлАТ

АсАТ

Билирубин

Альбумины

ПГИ

Т!/г пропранолола

г=0М, р=0,022

г=0 60 р-0 021

ХРОНИЧЕСКИ!! ВИРУСНЫИ ГЕПАТИТ 2-3 СТ АКШВНОСТИ

Т'/2 антипирина

1 г=0 89 р-0,009

Т1/г антипирина

АлАТ

АсАТ

Билирубин

Альбумины

ПТИ

'Г 1г пропранолола

г=0 49 р=0,043

= -0,57, р=0 032

ЦИРРОЗ ПЕЧЕНИ

[--0/11 р=0 048

АлАТ

АсАТ

Билирубин

Альбумины

ПТИ

Т'/г пропранолола

г=0 58, р-0,028

Рис 5 Схема корреляционных взаимоотношений между скоростью элиминации модельных веществ и общепринятыми функциональными пробами печени При ОВГ ни одной корреляционной связи не выявлено

выводы

1 Разработан способ твердофазной экстракции на полимерном сорбенте Ригозер-200 р-адреноблокатора пропранолола в биологических жидкостях (слюна, плазма/сыворотка крови) для анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовой детекцией, который характеризуется высокой чувствительностью (5нг на 0,1 мл) и воспроизводимостью

2 Апробирована методика проведения нагрузочного теста с пропранололом для оценки детоксикационной функции печени В качестве тест-ткани может использоваться слюна, для определения параметров элиминации достаточно четырехкратного забора материла через 4, 8,12 и 16 ч

3 У представителей обеих национальностей (бурят и русских) отмечается три-модальное распределение скорости биотрансформации антипирина, при этом различия в распределении элиминационных типов и скорости выведения вещества не обнаружены Темп биотрансформационных процессов по данным теста с пропранололом имеет бимодальное распределение, но у "медленных" элиминаторов бурят метаболизм вещества осуществляется более длительно Половые различия в скорости биотрансформации избранных модельных веществ отсутствуют

4 Изменение детоксикационной функции печени при вирусных гепатитах происходит неоднотипно при остром гепатите средней степени тяжести в стадию разгара - наблюдается ее активация, а при хроническом - угнетение, начиная с 1 стадии развития заболевания, достигая наибольшей выраженности при циррозе печени Степень угнетения процессов детоксикации не зависит от выраженности цитолитического синдрома, уровня билирубине-мии, нарушений белоксинтетической функции На начальных стадиях развития хронического вирусного гепатита угнетение процессов детоксикации предшествует другим дисфункциям

5 Для оценки состояния функции детоксикации при вирусных гепатитах наиболее подходящим является тест с пропранололом он отличается высокой чувствительностью, имеет меньше противопоказаний, удобен в применении по сравнению с антипириновой пробой

6 Корреляционные связи между изменениями детоксикационной функции печени и показателями наиболее употребляемых функциональных проб не однотипны и зависят от формы гепатита При остром вирусном гепатите они огсутствуют В начальную стадию развития хронического гепатита изменения процессов детоксикации положительно коррелирует с уровнем АсАТ и протромбинового индекса, во вторую стадию - положительно с концентрацией билирубина крови и отрицательно с уровнем альбуминов При циррозе печени отмечаются взаимосвязи только с уровнем АсАТ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Разработанный метод ВЭЖХ анализа пропранолола в биологических жидкостях (слюна, плазма/сыворотка крови) с УФ-детекцией и твердофазной экстракцией на полимерном сорбенте может быть использован для проведения нагрузочного теста с пропранололом

2 При лечении больных с фоновыми хроническими вирусными гепатитами необходимо учитывать, что нарушения детоксикационной функции печени происходят уже на 1 стадии развития заболевания, вне зависимости от степени активности процесса При назначении им на длительный срок лекарственных средств, метаболизирующихся в печени, рекомендуется предварительно оценивать степень угнетения процессов биотрансформации при помощи теста с пропранололом

3 Дозы и кратность применения лекарственных средств, обладающих высокой степенью пресистемного метаболизма, у пациентов бурят необходимо подбирать с учетом возможного более медленного их выведения из организма

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ

1 Пруткина Е В Метод исследования детоксикационной функции печени // Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Медико-биологические аспекты мультифакториалыгой патологии" В 2-х томах Т 2 - Курск, 2006 - С 462-463

2 Пруткина Е В Роль ферментов метаболизма ксенобиотиков в патологии / Е В Пруткина, Н Н Цыбиков // Межвузовский сборник научных трудов "Естествознание и гуманизм", Т 3, №3 - Томск, 2006 -СИ

3 Пруткина Е В Национальные различия биотрансформирующей функции печени // Межвузовский сборник научных трудов "Естествознание и гуманизм", Т 3,№3 -Томск,2006 -С 27

4 Пруткина Е В Возможность исследования метаболического статуса пациента/ЕВ Пруткина, НН Цыбиков // Материалы VII Международной научно-практической конференции "Здоровье и Образование в XXI веке" - Москва, 2006 -С 408

5 Универсальный экстракционный протокол для последующего ВЭЖХ анализа бета-адреноблокаторов в биологических жидкостях / А А Дутов, Д А Никитин, Р Р Биктимеров, Д Б Жамбалов, Е В Пруткина, А А Федотова // Материалы Всероссийского симпозиума РАН "Хроматография в химическом анализе и физико-химических исследованиях" - Москва - Клязьма, 2007 -С 169

6 Модифицированный метод ВЭЖХ анализа липофильных бета-блокаторов с

УФ-детекцией и твердофазной экстракциен на полимерном сорбенте / А А Дутов, Д А Никитин, РР Бкктимеров, Д Б Жамбалов, Е В Пруткина, А А Федотова // Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им ИИ Мечникова -2007 -№2(2) -С 57-58

7 Пруткина Е В Диаг ностические возможности антипиринового и анаприли-нового тестов у больных хроническими вирусными I епаттами// Материалы I межрегиональной конференции "Сочетанные заболевания внутренних органов в терапевтической практике" - Иркутск, 2007 - С 64-66

8 Пруткина Е В Возможности анаприлинового теста как метода оценки дс-токсикационной функции печени / Е В Пруткина, А А Дутов, НИ Цыби-ков // Сибирский медицинский журнал (г Иркутск) -2007 -№3 - С 44-47

9 Пруткина Е В Взаимосвязи между общепринятыми функциональными пробами печени и изменениями детоксикационнои функции /ЕВ Пруткина, НН Цыбиков // Забайкальский медицинский вестник -2007 -№3 -С 9-12

10 Пруткина Е В Сравнительная оценка функциональных проб печени /ЕВ Пруткина, Н Н Цыбиков // Материалы Всероссийской 15-ой научно-прак-тическои конференции "Достижения современной I астроэнтероло! ии" -Томск, 2007 // Сибирский вестник гепатологии и гастроэнтерологии -2007 -№21 - С 8-11

*

СПИСОКСОКРАЩЕЖИЙ

АлАТ - аланинаминотрансфераза

АсАТ - аспартатаминотрансфераза

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкое гная хроматография

ОВГ - острый вирусный гепатит

ГГГИ - протромбиновый индекс

УЗИ - ультразвуковое исследование

УФ-детекция - дешкция в ультрафиолетовом спектре

ФПП - функциональные пробы печени

ХВГ 0 акт - хронический вирусный гепатит неактивный

ХВГ 2-3 акт - хронический вирусный гепатит 2-3 степени активности

ЦП - иирроз печени

С18 - сорбент - модифицированный силикагель с привитыми

силанольными группами

CN - сорбент цианопропильпыи

СУР - CYtochrom Р - цитохром Р

IS - внутренний стандарт при ВЭЖХ анализе

LLE - жидко-жидкостная экстракция

Na-DDS - натрия додецилсульфат

SPE - твердофазная экстракция

TFA - трифторуксусная кислота

v/v или v/v/v - соотношение объемов

Лицензия ИД №03077 от 23 10 00 Подписано в печать 11 10 07 Бумага офсетная Формат 60 х 84 '/16 Уел печ л-1,0 Тираж 100 Заказ № 1332007

Отпечатано в информационно-издательском центре ЧГМА 672090, Чита, ул Горького, 39а