Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Взаимосвязь воспалительных, деструктивных и иммунных процессов у больных с остеоартрозом коленных суставов

РГБ ОД п /. * по 9ГШ

\ -

. У—

На правах рукописи

чу ¡\

МИХАЙЛОВА ТАТЬЯНА ВАСИЛЬЕВНА

ВЗАИМОСВЯЗЬ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ, ДЕСТРУКТИВНЫХ И ИММУННЫХ ПРОЦЕССОВ У БОЛЬНЫХ С ОСТЕОАРТРОЗОМ КОЛЕННЫХ СУСТАВОВ

14.00.16 - Патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

НОВОСИБИРСК 2003

Работа выполнена в Научном центре клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (г. Новосибирск) и в Национальном институте аллергологии, астмы и клинической иммунологии (г. Москва)

Научный руководитель

доктор медицинских наук

Научный консультант

доктор медицинских наук, профессор

Славянская Татьяна Александровна

Трунов

Александр Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Куликов

Вячеслав Юрьевич

доктор медицинских наук

Поляков

Лев Михайлович

Ведущая организация:

Новосибирская государственная медицинская академия Министерства Здравоохранения Российской федерации (г. Новосибирск).

Защита диссертации состоится « » / 2003 г. в_

часов на заседании Диссертационного совета Д 001.048.01 в Научном центре клинической и экспериментальной медицины СО РАМН по адресу: ул. Академика Тимакова, 2, Новосибирск, 630117. тел/факс 8(3832)33-64-56.

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке Научного центра клинической и экспериментальной медицины СО РАМН.

Автореферат диссертации разослан 2002 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 001.048.01 доктор биологических наук

С.Н. Кутина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ.

Приоритетными задачами в области ревматологии на современном этапе развития медицинской науки являются: изучение конкретных механизмов и этапности развития клеточного и гуморального иммунного ответа с целью проведения поиска точечного влияния на отдельные компоненты иммуновос-палительного процесса и разработка новых технологий по раннему выявлению и прогнозированию течения хронических заболеваний суставов и позвоночника, являющихся причиной ранней инвалидности, высокой временной нетрудоспособности и, как следствие, серьезных социально-экономических последствий для государства (Прогноз развития медицинской науки на период 20002005 года, РАМН, Москва, 1999).

В настоящее время остеоартроз считается наиболее распространеным заболеванием опорно-двигательной системы, приводящим к потере трудоспособности и инвалидизации населения в большинстве развитых стран мира (Цветкова Е.С., 1998; Насонов Е.Л., 2001; Caremer Р., Hochberg М.С., 1997; Lawrence R.C., Hehnick С.О., Arnett F.C, 1998).

Эпидемиологические исследования позволяют сделать заключение, что дегенеративные изменения в хряще коленных суставов выявляются у 65-75% лиц в возрасте 40 - 50 лет и у 100% людей старше 60 лет (Фоломеева О.М., Амирд-жанова В.Н., 1997; Мануйлова О., 1998).

Данные научной литературы свидетельствуют, что этиология и патогенез остеоартроза до настоящего времени остаются до конца не выясненными, что приводит к определенным проблемам в лечении данного патологического процесса, которое до сих пор является симптоматическим (Цветкова Е.С., 1998; Боровиков H.H., 1999; Kolarz G., Adlassnig K.P., 1995; Oliw E., Wollheim F.A., 2000; Svensson O., 2000).

В последние годы в научной литературе появились отдельные публикации, посвященные изучению патогенеза остеоартроза, которые позволили констатировать, что в основе заболевания лежит не только старение суставного хряща, но и нарушение баланса в процессах деструкции и репарации суставной ткани. Кроме того, не исключается значимость воспалительных и аутоиммунных процессов в патогенетических механизмах развития заболевания (Кочетков А.Г., Сорокин А.П., Стельникова И.Г., 1994; Müller-Fassbender Н., Bach G.L., Haase W., 1994; Mow V.C., Setton L.A., Fuilak F., 1995; Poole A.R., 1995; Holderbaum D., Haqqi T.M., Moskowitz RW, 1999; Nakamura K, Patterson R.M., Moritomo H., Viegas S.F., 2001).

Важную роль в патогенезе остеоартроза играет интерлейкин Iß (ИЛ-Iß) -основной провоспалительный цитокин, способный стимулировать секрецию латентных металлопротеиназ и плазминогена, повышенное содержание которых приводит к разрушению хрящевой ткани (Nakamura S., Kamihagi К., Satakeda Н. et al, 1996; Ryan M., Greenwald R., Golub L., 1996; Kubota E., Imamura H„ Kubota Т., Shibata Т., Murakami К., 1997; Woessner J., 1997). Также в научной литературе дискутируется значимость при ревматологических заболеваниях полифункционального белка лактоферрина, способного участвовать в процессах деструкции хрящевой ткани (Guillen С., Mclnnes I.B., Brock J.H.,

1997; Guillen С., Mclnnes I.B., Brock J.H., 1998). Неоднозначной и требующей дальнейшего изучения является роль ИЛ-4 - цитокина, обладающего противовоспалительными свойствами и отвечающего за синтез антител, развитие гуморального иммунного ответа и аутоиммунных реакций при различных формах артритов, в том числе и осте о артрозе (Murray K.J., Grom А.А, Thompson S.D, Lieuwen D, 1998; Loza E., Tinture T., Sanchez-Ibarrola A.,1999; Van der Graaff W.L., Prins A.P., Niers T.M., Dijkmans B.A.,1999; Yin Z., Siegert S., Neure L., Grolms M., Liu L., 1999).

Роль воспалительных процессов и развития иммунного ответа в патогенезе остеоартроза до конца не раскрыта: так, в ряде научных публикаций показано отрицательное влияние высоких концентраций отдельных иммуноглобулинов, цигокинов и других иммуноактивных субстанций на развитие патологического процесса, а также то, что продукты распада хондроцитов и синовиального воспаления способны вызывать развитие аутоиммунных реакций (Horiuchi Т., Yoshida T., Koshihara Y.,1999; Nivbrant В., Karlsson К., Karrholm J.,1999; Alaaeddine N., Di Battista J.A., Pelletier J.P., 1999; Verbruggen A., De Clerck L.S., Bridts C.H., Breedveld F.C., 2000).

Одним из универсальных маркеров развития деструктивных и аутоиммунных процессов в организме является повышение уровней аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК. При остеоартрозе такого рода исследований не проводилось, хотя в научных публикациях авторами представлены их высокие уровни в сыворотке крови при ревматологических заболеваниях (ревматоидный артрит, системная красная волчанка). Авторы считают их высокие уровни маркером активности процесса и неблагоприятным прогностическим критерием (Грейскоп И.А., Крюков М.Е., Киселева Г.И., 1997; Кудрявцева И.В., 2000; Чижов Н.Н., 2002).

Таким образом, патогенетические механизмы развития остеоартроза, заболевания, имеющего высокую медико-социальную значимость, остаются до конца не изученными, а научных публикаций, посвященных комплексному изучению развития иммунного ответа, уровней биохимических маркеров воспалительных, аутоиммунных и деструктивных процессов, явно недостаточно, что определяет актуальность такого рода исследований.

Вышеизложенное позволило сформулировать цель и задачи настоящего исследования.

Цель исследования. Изучить взаимосвязь между активностью воспалительных, деструктивных, иммунных процессов у пациентов с остеоартрозом коленных суставов.

Задачи исследования:

1. Провести ультразвуковое исследование коленных суставов у пациентов с остеоартрозом для выявления воспалительно-деструктивных процессов.

2. Определить концентрацию ИЛ-ip, ИЛ-4 и лактоферрина в сыворотке крови и синовиальной жидкости у пациентов с остеоартрозом коленных суставов.

3. Определить содержание аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови и синовиальной жидкости у пациентов с остеоартрозом коленных суставов.

4. Тестировать концентрации иммуноглобулинов класса M, G, А и содержа-

ние циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови и синовиальной жидкости у пациентов с остеоартрозом коленных суставов.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

Впервые показано, что у пациентов с остеоартрозом коленных суставов повышены концентрации основного провоспалительного цитокина ИЛ-1(3 в сино-

виалшой~Зкйякости сыворотке крови,-причем_уровень~его концентрации-в--------

синовиальной жидкости в два раза превышает содержание в сыворотке крови. Полученные данные свидетельствуют об участии процессов воспаления в патогенезе остеоартроза коленных суставов на организменном и местном уровнях.

Установлено, что у обследованных больных тестируется активация гуморального звена иммунной системы, проявляющаяся высокой концентрацией 1§А в сыворотке крови и синовиальной жидкости, повышенным в 4 раза уровнем циркулирующих иммунных комплексов и высокой концентрацией ИЛ-4 в сыворотке крови. Концентрации ^А в исследуемых биологических жидкостях достоверно не различались между собой.

Впервые установлено, что у пациентов с остеоартрозом коленных суставов определяется высокое содержание аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови и синовиальной жидкости. Полученные высокие значения тестируемых показателей свидетельствуют о выраженных деструктивных и аутоиммунных процессах у обследованных больных.

Впервые проведена оценка размеров ЦИК в сыворотке крови и синовиальной жидкости у больных с остеоартрозом коленных суставов. Полученные данные свидетельствуют о преобладании у них мелкомолекулярных иммунных комплексов, способных вызывать развитие аутоиммунных реакций.

Выявленные прямые коррелятивные взаимосвязи между содержанием ИЛ-1(3 и ИЛ-4, и ЦИК, ИЛ-1(3 и аутоантител к антигенам нДНК, ИЛ-4 и аутоантител к антигенам нДНК, ^А и уровнем аутоантител к антигенам нДНК, ЦИК и аутоантител к антигенам нДНК в сыворотке крови, между содержанием ^А и ЦИК, ИЛ-1(3 и 1§А, ИЛ-4 и ЦИК, аутоантител к антигенам дДНК и ЦИК в синовиальной жидкости отражают патогенетическую взаимосвязь между развитием деструктивных, воспалительных процессов и активацией гуморального иммунного ответа у больных с остеоартрозом коленных суставов.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Выявленная прямая коррелятивная взаимосвязь между ИЛ-1(3 и лакгофер-рином в подгруппе больных с повышенной концентрацией этого цитокина в сыворотке крови, позволяет считать высокие значения лактоферрина маркером

активации воспалительных процессов при остеоартрозе коленных суставов.

Установлено, что наиболее информативными и доступными показателями, свидетельствующими об активации гуморального звена иммунной системы у пациентов с остеоартрозом коленных суставов, являются достоверно высокие концентрации 1§А и резко повышенные уровни циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови.

Показано, что метод ультразвукового исследования при остеоартрозе коленных суставов обладает высокой диагностической значимостью и позволяет выявлять, наряду с дегенеративными изменениями в костной ткани, структур-

но-функциональное состояние синовиальной оболочки и мягких тканей, окружающих сустав, наличие воспалительных процессов в суставе.

ВНЕДРЕНИЕ

Теоретические и практические аспекты, разрабатываемые в диссертационном исследовании, внедрены в научную и практическую деятельность муниципального диспансера клинической иммунологии г. Новосибирска.

ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. При остеоартрозе коленных суставов существует взаимосвязь между деструктивными, воспалительными и иммунными процессами.

2. Выявленные изменения содержания и коррелятивные взаимосвязи между показателями, отражающими деструктивные воспалительные процессы и развитие иммунных реакций в сыворотке крови и синовиальной жидкости при остеоартрозе коленных суставов, свидетельствуют об аналогичности процессов, происходящих в организме и на местном уровне.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Основные положения диссертации доложены: на совместном семинаре кафедры патологической фииологии НГМА МЗ РФ и лаборатории экологической иммунологии НЦ клинической и экспериментальной медицины СО РАМН (Новосибирск, 2002 г.); на 11 и 12 научно-практических конференциях "Актуальные вопросы современной медицины (Новосибирск, 2001, 2002); на Всероссийской конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные и клинические аспекты» (Новосибирск, 2002); на межлабораторном семенаре Научного центра клинической и экспериментальной медицины СО РАМН (Новосибирск, 2002).

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертационной работы опубликовано б печатных работ.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ Диссертация изложена на 122 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы материалы и методы, глав результатов собственных исследований, обсуждения полученных данных, выводов, практических рекомендаций и списка используемой литературы; содержит 2 таблицы, 11 рисунков и 6 фотографий. Список литературы включает 211 источников отечественных и зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Было обследовано 80 пациентов с диагнозом остеоартроз коленных суставов, находившихся под наблюдением в Новосибирском государственном областном клиническом диагностическом центре, в возрасте от 45 до 65 лет, женщины составили 80%, мужчины - 20%.

Диагноз остеоартроз коленных суставов выставлялся на основании:

- Клинических критериев:

1. Боли в суставах, возникающие в конце дня и/или в первую половину ночи.

2. Боли в суставах, возникающие после механической нагрузки и уменьшающиеся в покое.

3. Деформация суставов за счет костных разрастаний.

- Рентгенологических критериев: I. Сужение суставной щели.

2. Остеосклероз.

3. Остеофитоз.

Примечание:

Критерии 1-2 - основные; критерии 3 - дополнительные. Для постановки диагноза остеоартроза наличие первых двух клинических и рентгенологических критериев обязательно (Беневоленская Л.И., 1993).

Для оценки степени выраженности остеоартроза коленных суставов применялся «индекс тяжести гонартроза» (Цветкова Е.С., 1997).

Все обследованные пациенты имели среднюю или выраженную тяжесть течения патологического процесса.

ЗАБОР КРОВИ И СИНОВИАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ.

У всех пациентов из локтевой вены был проведен забор крови в количестве 5 мл в сухую центрифужную пробирку (центрифугировали при 1500 об/мин 710 мин на центрифуге ОПН-3), слой образовавшейся сыворотки использовался для определения уровней иммуноглобулинов и ЦИК, ААТ к нДНК и дДНК, лактоферрина, ИЛ-1р и ИЛ-4.

Синовиальная жидкость забиралась при пункции коленного сустава в сухую центрифужную пробирку (центрифугировали при 1500 об/мин 5 мин на центрифуге ОПН-3 для осаждения сгустков фибрина) и использовалась для тестирования изучаемых показателей.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ЛАКТОФЕРРИНА В СЫВОРОТКИ КРОВИ И СИНОВИАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ.

Исследования выполняются на тест-системах Лактоферрин-стрип 0-4106 производства ЗАО "Вектор-БЕСТ" по инструкции производителя.

При анализе для определения концентрации лактоферрина в анализируемых образцах необходимо построить калибровочный график по «средним» оптической плотности каждого стандартного раствора. Контрольная сыворотка предназначена для проверки точности и достоверности анализа.

При постановке реакции сыворотка и синовиальная жидкость разводится в 50 раз, вследствие этого для получения конечного результата необходимо умножить результат в нг/мл, соответствующий оптической плотности, на 50.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АУТОАНТИТЕЛ К АНТИГЕНАМ НАТИВНОЙ И ДЕНАТУРИРОВАННОЙ ДНК В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И СИНОВИАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ.

Аутоантитела к антигенам нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови и в синовиальной жидкости пациентов определялись с помощью тест-системы "ДНК-ТЕСТ" производства ПМЦ Сибмедприбор. Результаты иммуно-ферментного анализа регистрировали на вертикальном фотометре МиШвкап МСС 340 при длине волны 492 нм. Бланк задавали по воздуху. Результаты учитывали только в том случае, если среднее значение оптической плотности в лунках с контролем коныогата не превышало 0.15, в лунках с отрицательным контролем не превышало 0.2, а в лунках с положительным контролем было выше, чем 0.3 оптические единицы. Результаты теста считались положительными, если оптическая плотность анализируемой сыворотки была больше критической оптической плотности, которая составляла - оптическая плотность отрицательного контроля Х2. Уровень аутоантител (ААТ) к нативной и денату-

рированной ДНК выражали усл. ед., полученных путем деления: оптическая плотность исследуемого образца/ критическую оптическую плотность.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ УРОВНЕЙ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И СИНОВИАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ.

Содержание Ig определялось прямым сандвич вариантом иммунофермент-ного анализа. В качестве твердой фазы использовали 96-луночные планшеты для иммунологических реакций. В работе применяли коммерческий коньюгат пероксидазы с антителами к иммуноглобулинам человека (Московский НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи), моноспецифические антисыворотки к иммуноглобулинам человека А, М, G, стандартную сыворотку крови человека производства этого же института или Горьковского НИИЭМ. Измерения проводили на вертикальном фотометре Multiskan МСС 340 в двухволновом режиме 492/600 нм для уменьшения неспецифического поглощения светового потока. Вычисления проводили с помощью персонального компьютера и прикладной программы, разработанной на базе SK4 для сандвич-варианта ИФА.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И СИНОВИАЛЬНОЙ

ЖИДКОСТИ.

Определение циркулирующих иммунных комплексов методом жидкостной преципитации 3 и 4% ПЭГ-6000 с выведением коэффициента относительных размеров ЦИК. 0.01М боратный буфер рН 8.4 использовали для приготовления 3 и 4% растворов полиэтиленгликоля (ПЭГ) 6000. В рядом находящиеся лунки параллельных стрипов 96- луночных плоскодонных планшетов для иммунологических реакций вносили по 0.3 мл 0.01М боратного буфера рН 8.4 (контроль) и 0.3 мл 3 и 4% разведения ПЭГ-6000 на 0.01М боратный буфер рН 8.4 (опыт). В контрольную и опытные лунки добавляли по 0.005 мл исследуемой сыворотки крови или синовиальной жидкости. Инкубировали 1 час при комнатной температуре. Величину оптической плотности читали против контроля при длине волны 450 нм на вертикальном спектрофотометре Multiscan ММС 340. Количество циркулирующих иммунных комплексов выражали в условных единицах: величина оптической плотности * 1000 (у.е.). Коэффициент рассчитывали путем деления результата уровня ЦИК, полученного в реакции с 4% разведением ПЭГ-6000, на результат уровня ЦИК, полученного в реакции с 3% разведением ПЭГ-6000. К< 1.1- крупномолекулярные ЦИК, 1.1 < К <1.5, среднемолекуляр-ные, К > 1.5 мелкомолекулярные.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ИНТЕРЛЕЙКИНОВ ip, 4 В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И СИНОВИАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ.

Исследования выполняются на тест-системах ProCon IL1 beta, ProCon IL4, производства ООО "Протеиновый контур" С-Петербург по инструкции производителя. Результаты иммуноферментного анализа регистрировали на вертикальном фотометре Multiskan МСС 340 в при длине волны 492 нм.

Для определения концентрации интерлейкинов в анализируемых образцах строился калибровочный график по «средним» оптической плотности каждого стандартного раствора.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СУММАРНОГО РЕВМАТОИДНОГО ФАКТОРА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ.

Исследования выполняются на тест-системах ВектоРевматоидный фактор суммарный А-8654 производства ЗАО "Вектор-БЕСТ" по инструкции производителя. Положительными считались результаты, превышающие «среднюю» отрицательного контроля + 0.2 опт. ед.

УЛЬТРАЗВУКОВОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СУСТАВОВ.

Ультразвуковое исследование проводилось на сканере "Aloka SSD-630*1 и "Sonoline Versa Plus" фирмы Siemens линейными датчиками 5 и 7,5 МГц. УЗИ коленного сустава проводилось по схеме, включающей выполнение серии ска-нов: сагиттальных выше и ниже надколенника и по задней поверхности сустава для оценки наличия выпота и состояния капсулы, фронтальных по боковым поверхностям для выявления краевых костных разрастаний, оценки ширины суставной щели и осмотра менисков и боковых связок, передне- и заднегори-зонтальных через мыщелки бедра для изучения суставного хряща.

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ.

Статистическая обработка вариационных рядов включала подсчет средних арифметических величин (М) и стандартных ошибок средних арифметических (т), стандартного отклонения. В таблицах и рисунках информация представлена в виде М ± т. В работе использовались методы непараметрической статистики. Значимость различий вариационных рядов в связанных попарно выборках оценивалась с помошью U - критерия Вилкоксона - Манна - Уитни, корреляция показателей вычислялась по методу Спирмена. Анализ данных проводился с помощью пакета прикладных программ Statgrafics. В данной работе достоверными считаются результаты при Р<0.05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В соответствии с поставленными целью и задачами диссертационного исследования, учетом возможной патогенетической значимости изменений имму-нобиохимических показателей при развитии остеоартроза, было проведено комплексное клинико-лабораторное обследование 80 пациентов с диагнозом остеоартроз коленных суставов.

Всем пациентам было проведено УЗ исследование коленных суставов.

При ультразвуковом исследовании коленных суставов в 90% случаев наблюдения визуализировались признаки воспалительного процесса з исследуемом суставе. Синовиальная жидкость определялась, чаще всего, в надколенной сумке и, реже, в одном из боковых заворотов, была гипоэхогенной, гомогенной. Однако, у части пациентов определялась ее разнородность за счет появления гиперэхогенной хлопьевидной взвеси (фибрина) или тестировались крупные, пристеночно расположенные, гиперэхогенные образования (фибршгавые сгустки). Особенностью ультразвуковой картины при остеоартрозе коленного сустава, осложненного синовитом, являются кисты Бейкера, встречающиеся в 33% случаев наблюдений. Указанные образования определялись в мягких тканях по задней поверхности одного (76%) или обоих (24%) коленных суставов. Как правило, они имели вид округлого жидкостного образования с четкими ровными контурами за счет наличия плотной капсулы, визуализировалась шейка, соединяющая сустав с кистой. Размеры кист были от 2 до 8-12 см. Поперечный

размер кист варьировал от 0,5 до Зсм. В 78 % кисты содержали негомогенную жидкость с нитями и сгустками фибрина, иногда прикрепленными к синовиальной оболочке и образующими перегородки кисты. В 89 % подколенная киста находилась поверхностно - сразу под подкожно-жировой клетчаткой, а в 11% она визуализировалась между мышцами.

У обследованных больных с остеоартрозом коленных суставов были выявлены следующие сонографические признаки патологического процесса:

Истончение гиалинового хряща на суставных поверхностях бедра с повышением его эхогенности (состояние гиалинового хряща оценивалось при отсутствии выпота в заднем завороте, толщина хряща была уменьшена до 1,3-1,8 мм (И 3-4 мм), эхогенность его была повышена, структура умеренно неоднородна);

Деформация суставных поверхностей и сужение суставной щели;

На краях суставных поверхностей бедренных и большеберцовых костей визуализировались краевые остеофиты, их размеры были больше, чем при рентгенографическом обследовании, что связано с визуализацией 11-негативной хрящевой ткани. Одним из наиболее часто встречающихся был направленный кверху остеофит болынеберцовой кости, приподнимающий и деформирующий медиальную коллатеральную связку, что приводило к стойкому болевому синдрому в этой области.

Наиболее часто встречались остеофиты с медиальной стороны коленного сустава (82%), с латеральной - в 18% случаев наблюдений.

Таким образом, метод УЗИ коленных суставов при осгеоартрозе обладает диагностической значимостью и позволяет тестировать в высоком проценте случаев наблюдения у обследуемых пациентов не только наличие и степень дегенеративных изменений в костной и хрящевой тканях, но и выявить у обследуемых лиц вовлечение в развитие патологического процесса воспалительных реакций.

Данные факты позволяют сделать заключение об актуальности исследований, посвященных изучению значимости воспалительных, деструктивных процессов, аутоиммунных реакций и изменений уровней иммунобиохимических показателей в патогенетических механизмах развития остеоартроза.

В настоящее время известно, что развитие остеоартроза практически не сопровождается изменениями лабораторных показателей, применяемых в практическом здравоохранении с целью тестирования активности воспалительных реакций и, только при синовите, у части больных происходит ускорение СОЭ.

В проведенном исследовании с целью подтверждения данного факта и, возможно, доказательства целесообразности тестирования более значимых иммунобиохимических маркеров для выявления активации воспалительных процессов у всех обследованных пациентов было проведено определение СРБ, СОЭ, ревматоидного фактора (РФ).

В результате исследования было выявлено, что содержание СРБ выше нормативных значений тестировалось у 2 обследованных пациентов из 80, что составляет 2.5%.

Высокое содержание суммарного ревматоидного фактора было выявлено у 6 пациентов. Полученное значение положительных результатов составило 7, 5 % от группы обследованных лиц, однако, по литературным данным, аналогичный

процент высоких значений РФ тестируется при популяционных исследованиях у лиц старше 40 лет без остеоартроза.

При индивидуальном анализе полученных данных ускоренные значения СОЭ были тестированы у 18 пациентов с диагнозом остеоартроз коленных суставов из 80, что составляет 22.5 %.

Таким образом, анализ полученных данных позволяегг~сдёЖть"заклточепиег что несмотря на тестирование при УЗ исследовании у высокого процента обследованных пациентов признаков воспалительных изменений в суставах, лабораторное обследование с применением методов, используемых в практическом здравоохранении для оценки активности воспаления, является малоинформативным.

В связи с этим, в настоящем исследовании было проведено тестировать ряда иммунобиохимических показателей в сыворотке крови и синовиальной жидкости, изменения уровней которых, по литературным данным, играет несомненную роль в процессах развития воспаления.

В настоящее время известны немногочисленные, но достаточно важные литературные публикации о роли лактоферрина в развитии воспалительных, аутоиммунных процессов, в том числе об его корреляционных взаимосвязях с концентрацией провоспалительных цитокинов, играющих значительную роль в патогенезе ревматологических заболеваний. Кроме того, известно, что лакто-феррин обладает бактерицидной и противовоспалительной активностью, является белком острой фазы и усиливает пролиферацию аутореактивных Т-лимфоцитов, проявляя стимулирующие свойства. Однако, изучение концентрации этого белка при остеоартрозе и его взаимосвязи с другими (шмунобио,химическим и показателями практически не проводилось.

Учитывая приведенные данные, в соответствии с целью и задачами настоящего исследования нами определялось содержание лактоферрина в сыворотке крови у 80 больных с диагнозом остеоартроз коленных суставов и в 20 образцах синовиальной жидкости.

В качестве нормативных были использованы данные, полученные в лаборатории экологической иммунологии НЦ КиЭМ СО РАМН и представленные в литературе - М ± m - 1125± 216 нг/мл (Божин Е.Ю., 2001).

При определении содержания лактоферрина больных с остеоартрозом коленных суставов была выведена «средняя» его концентрации, равная 2859+211 нг/мл, которая достоверно (р < 0.01) превышала «среднюю» нормативных значений.

При индивидуальном рассмотрении полученных данных была выявлена гетерогенность обследованной группы по уровню содержания лактоферрина: высокий его уровень тестировался у 57 пациентов, что составляет 71.25% случаев наблюдений.

При определении концентрации лактоферрина в синовиальной жидкости была выявлена «средняя» его концентрация, равная 225±46 нг/мл. Ввиду отсутствия нормативных значений уровней лактоферрина в синовиальной жидкости, было проведено его сравнение с уровнями в сыворотке крови. Выявленный уровень был достоверно (р<0.01) ниже как «средней» нормативных значений, так и

так и «средней» концентрации лактоферрина в группе обследованных пациентов.

В заключение необходимо отметить, что лактоферрин, уровень которого, по данным литературы, коррелирует с содержанием провоспалительных цитоки-нов в сыворотке крови, может быть как участником, так и маркером активации очага воспаления и патологического процесса в целом. Выявление же, в ряде случаев, нормативных значений лактоферрина в описанной группе пациентов, вероятно, указывает на адекватность проводимой терапии.

Учитывая литературные данные о высокой патогенетической значимости повышения уровней концентрации различных цитокинов в развитии воспалительных, деструктивных и иммунных (в том числе аутоиммунных) процессов при различных артропатиях, следующим этапом нашего исследования было тестирование концентрации основного провоспалительного цитокина ИЛ-ip и ИЛ-4 - цитокина, обладающего противовоспалительными свойствами и отвечающего за синтез антител, развитие гуморального иммунного ответа и аутоиммунных реакций, в сыворотке крови и синовиальной жидкости обследованных пациентов.

В качестве нормативных значений использовались совместные данные, полученные в лаборатории экологической иммунологии НЦ КиЭМ СО РАМН и Институте аллергологии, астмы и клинической иммунологии (Москва) и представленные в литературе (Славянская Т.А.,1999; Тихонова О.В, 2001).

При определении концентрации ИЛ-ip у 80 пациентов с диагнозом остео-артроз коленных суставов была выведена «средняя» его концентрации в сыворотке крови, равная 422±81.0 пг/мл, которая достоверно (р < 0.01) превышала «среднюю» нормативных значений, равную 70.4 ±3.1 пг/мл.

Анализ концентраций исследуемого интерлейкина ip в 20 образцах синовиальной жидкости позволил тестировать «среднюю» его концентрации, равную 972+211 пг/мл. Тестируемый уровень был достоверно (р<0.01) выше как «средней» нормативных значений, так и «средней» концентрации ИЛ-1(3 в сыворотке крови обследованных пациентов. Данные представлены на рисунке 1.

1400 1200 1000 800

I 600

с 400 200 0

Ш Норма (сыворотка крови) ВОбсл. лица (сыворотка крови) □ Обсл. лица (синовиальная жидкость)

Рис.1 Концентрация ИЛ-ip у обследованных пациентов в сравнении с нормой

----

т

fтт. == ~7~Т £

При аналогичном исследовании, проведенном с целью определения концентрации интерлейкина 4, также было выявлено достоверное повышение «средней» его концентрации в группе обследованных лиц по сравнению со «средней» нормативных значений - 65.6 ±15.1 пг/мл против 30.7+ 9.1 пг/мл (р < 0.05).

При тестировании концентраций исследуемого интерлейкина-4 в 20 образцах синовиальной жидкости была получена «средняя» его содержания, равная 42.1+5.8 пг/мл. Тестируемый уровень был достоверно ниже «средней» концентрации ИЛ-4 в сыворотке крови (р<0.05) обследованных пациентов и не отличался от «средней» нормативных значений. Данные представлены на рисунке 2.

Полученные в результате исследования данные свидетельствуют об участии основного провоспалительного цитокина ИЛ-1р и ИЛ-4, отвечающего за развитие гуморального иммунного ответа и аутоиммунных реакций, в патогенетических механизмах развития остеоартроза, что подтверждается их достоверно высокими уровнями.

При индивидуальном рассмотрении полученных данных нам удалось выявить гетерогенность обследованной группы по уровню содержания интерлейкина 1р в сыворотке крови. Высокий уровень ИЛ-1(3, превышающий значения 75 пг/мл, выявлялся в 56.25% наблюдений (подгруппа А), а нормативный уровень изучаемого интерлейкина определялся в 43.75% ( подгруппа Б).

В результате проведенного исследования и статистической обработки полученных значений были получены следующие данные: «средняя» концентраций ИЛ-1Р в подгруппе А составила 944±!44 пг/мл, что достоверно превышало «среднюю» как нормативных значений, так и общей группы (р < 0.01); «средняя» в подгруппе Б была равна 10.2 ± 0.79 пг/мл и была достоверно ниже, чем в подгруппе А и общей группе (р < 0.01).

90 75 60

I 45 с

30 15

0

13 Норма (сыворотка крови) ЭОбсл. лица (сыворотка крови) □ Обсл. лица (сиповиачьная жидкость)

Рис.2 Концентрация ИЛ-4 у обследованных пациентов в сравнении с нормой

Проведенное разделение позволило выявить следующие достоверности различий по изучаемым показателям в подгруппах А и Б в сыворотке крови обсле-

_

т

ш

ш

......1-- —~ --1-ш

дованных лиц. «Средняя» концентраций ИЛ-4 в подгруппе А составила 123.1 ± 31.2 пг/мл, что достоверно (р <0.01) превышало «среднюю» нормативных значений (30.7± 9.1 пг/мл). Полученное значение «средней» содержания ИЛ-4 в сыворотке крови так же достоверно превышало значение «средней» в общей группе (65.6 ± 15.1 пг/мл; р<0.05) и подгруппе Б (18.96+0.23 пг/мл; р<0.01).

Кроме того, была выявлена достоверность различия между содержанием в подгруппах описываемых далее аутоантител к антигенам нативной ДНК, повышение которых свидетельствует о степени выраженности деструктивных процессов в организме. «Средняя» их содержания в сыворотке крови пациентов в подгруппе А составила 3.43 ± 0.27 усл.ед., что достоверно (р < 0.01) превышает «среднюю» нормативных значений (1.14± 0.03 усл.ед.). Значение «средней» содержания аутоантител к антигенам нДНК в сыворотке крови так же достоверно превышало значение «средней» в подгруппе Б (2.57±0.17 усл.ед., Р<0.05).

Разделение на подгруппы позволило при проведении корреляционного анализа получить важные и диагностически значимые данные. Так, в подгруппе А была выявлена прямая достоверная коррелятивная взаимосвязь между концентрациями ИЛ-1 Р и лактоферрина (г = 0.45, р < 0.01). В подгруппе Б, где уровни концентрации ИЛ-1 р тестированы в пределах нормативных значений, нам не удалось выявить коррелятивную взаимосвязь между изучаемыми показателями.

Таким образом, было показано возникновение коррелятивной взаимосвязи между основным провоспалительным цитокином ИЛ-1Р и лактоферрином -полифункциональным белком, обладающим свойствами белка острой фазы, только при активации воспалительных реакций, о чем свидетельствует отсутствие данной взаимосвязи в подгруппе Б, характеризующейся нормативными значениями ИЛ-1 р.

По данным научных публикаций, при различных ревматологических заболеваниях многими авторами отмечается значимость определения концентраций иммуноглобулинов трех основных классов в сыворотке крови и синовиальной жидкости для понимания патогенетических механизмов развития патологического процесса, активности аутоиммунных реакций и для прогноза течения заболевания. Наибольшее значение при указанных патологических процессах уделяется высоким уровням концентраций

Кроме того, не вызывает сомнения диагностическая и прогностическая значимость определения циркулирующих иммунных комплексов как неотъемлемого компонента развития специфического гуморального иммунного ответа. Многие исследователи проводят определение ЦИК при различных патологических процессах, в том числе ревматологических, связывая их высокие уровни, чаще всего, с неблагоприятным прогнозом течения заболевания.

Оценка функционального состояния гуморального звена иммунной системы основывалась на определении трех основных классов иммуноглобулинов -

IgA и циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови. В качестве нормативных значений для исследуемых параметров (^М, 1§А, ЦИК) использовались данные и методические подходы, разработанные в лаборатории экологической иммунологии НЦ КиЭМ СО РАМН. Данные представлены в таблице 1.

Основой методологии, предложенной авторами, является сравнение не только «средних» полученных показателей со «средними» нормативных значений, но и их сопоставление с границами нормы, границами стимуляции или

иммунной недостаточности, выведенными с применением добавления и вычета значений двух сигмальных отклонений от «средних» значений нормы. Все это

расширяет возможности клиУшшстгГпри проведении индивидуального анализа---------

с целью определения активации гуморального звена иммунной системы и сравнения с клиническим течением.

В результате проведенного обследования были получены следующие данные: «средняя» концентраций составила 1.65 ±0.08 г/л, что достоверно (р<0.01) превышало «среднюю» нормативных значений. Полученное значение «средней» уровней содержания ^М в сыворотке крови превышало границу стимуляции показателя, равную 1.48 г/л.

Таким образом, можно говорить о том, что у 80 обследованных пациентов с остеоартрозом коленных суставов уровни содержания соответствуют значениям, характерным для активного синтеза этого иммуноглобулина. Для оценки его значимости в патогенезе заболевания был проведен индивидуальный анализ значений ^М у обследованных пациентов.

Таблица 1

НОРМАТИВНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ ГУМОРАЛЬНОГО ЗВЕНА ИММУННОЙ

СИСТЕМЫ (Трунов А.Н., 1997)

Показатель М±ш г/л Сигма Верхняя граница иммунной недостаточности Нижняя граница стимуляции

1.04±0.02 0.22 0.6 1.48

ДО 10 ±0.27 2.3 5.4 14.6

1ёА 1.08±0.02 0.23 0.62 1.54

ДИК* 61±4.61 13 __ 87 _ __

* уровни Г ^ИК выражаются в условных единицах

В результате было выявлено, что только у 39 человек из 80, что составляет 48.75 %, уровни 1§М превышали границу стимуляции показателя; у 40 пациентов (50%) значения 1цМ находились в границах нормативных значений. Состояние иммунной недостаточности по лабораторным признакам определялось в 1 случае из 80, что составляет 1.25%.

«Средняя» концентраций 1§М в 20 образцах синовиальной жидкости обследованных лиц составила 0.71+0.02 г/л.

Рассмотрение результатов, полученных при определении 1^0, позволило выявить следующие закономерности: «средняя» концентрации 1§С составляла 10.88 ± 0.44 г/л, что достоверно не различалось со «средней» нормативных значений. Кроме того, полученная «средняя» уровня ^О находилась в границах нормативных значений.

Анализ индивидуальных значений позволил выявить, что у 62 (77.5%) пациентов показатель находился в границах нормы, а у 14 обследованных (17.5%) уровни содержания превышали границу стимуляции показателя, составляющую 14.6 г/л.

Состояние иммунной недостаточности по лабораторным признакам определялось в 4 случаях наблюдений из 80, что составляет 5%.

«Средняя» концентрация IgG в образцах синовиальной жидкости обследованных пациентов с диагнозом остеоартроз коленных суставов составила 5.01±0.29 г/л.

При тестировании содержания IgA «средняя» значений его концентраций в сыворотке крови обследованных больных составила 2.26 ±0.13 г/л, что достоверно (р <0.01) превышало «среднюю» нормативного значения -1.08 ± 0.02 г/л, а также превышало границу стимуляции показателя, равную 1.54 г/л. При проведении анализа индивидуальных данных было выявлено, что у 77.5% обследованных лиц уровень концентрации IgA превышал границу стимуляции, то есть 62 пациента из 80 имели достоверно выраженное повышение содержания иммуноглобулина А. У 1 пациента (1.25%) уровень IgA был ниже границы иммунной недостаточности, у 17 человек (21.25% ) IgA находился в границах нормативных значений.

Крайне важные результаты были получены при тестировании концентраций IgA в синовиальной жидкости пациентов. «Средняя» его содержания составила

2.28+0.23 г/л, что достоверно (р< 0.01) превышало «среднюю» нормативного значения для сыворотки крови (1.08 ± 0.02 г/л), а также превышало границу стимуляции показателя, равную 1.54 г/л. При проведении анализа индивидуальных данных было выявлено, что у 90% обследованных лиц уровень концентрации IgA в синовиальной жидкости превышал границу стимуляции показателя для сыворотки крови. Графически данные представлены на рисунке 3.

И Норма (сыворотка крови) Ш Обсл. лица (сыворотка крови) □ Обсл. лица (синовиальная жидкость)

Рис.3 Концентрация ^А у обследованных пациентов в сравнении с нормой

Учитывая большую патогенетическую значимость иммунных комплексов в возникновении и развитии ревматологических заболеваний, взаимосвязь этого показателя с воспалением, поддержанием иммунологического гомеостаза и развитием аутоиммунных реакций, в обследуемой группе пациентов было проведено тестирование содержания ЦИК методом ПЭГ 6000 преципитации и их относительных размеров.

В результате тестирования были получены следующие данные: «средняя»

содержания ЦИК, выявленных методом жидкостной преципитации 4% ПЭГ 6000, составила 240±5.05 усл.ед., что практически в 4 раза превышает «среднюю» нормативных значений и достоверно (р < 0.01) от нее отличается. «Средняя» изучаемого показателя также резко превышала границу активации, что свидетельствует об усиленной реакции антиген-антитело.

При анализе индивидуальных знэтё™й~уроЖей ЦИК было-выявлено-что у-----------

всех 80 пациентов с диагнозом остеоартроз коленных суставов (100%) уровень циркулирующих иммунных комплексов превышал значения границы стимуляции исследуемого показателя. Данные представлены на рисунке 4

300

250

200

150

¡й 100

о

0 Норма (сыворотка крови) ВОбсл. лица (сыворотка крови) □ Обсл. лица (синовиальная жидкость)

Рис.4 Уровень ЦИК у обследованных пациентов в сравнении с нормой

Опосредованное определение размеров циркулирующих иммунных комплексов, проводившееся путем деления результатов, полученных в реакции преципитации 4% ПЭГ 6000, на данные, полученные преципитацией 3% ПЭГ 6000 (153+4.41 усл. ед.), дало коэффициент 1.57, что соответствует преобладанию мелкомолекулярных ЦИК, имеющих тенденцию к длительной циркуляции в кровеносном русле, способных осаждаться в тканях и запускать механизмы аутоагрессии.

В результате тестирования содержания ЦИК в 20 образцах синовиальной жидкости обследованных лиц методом жидкостной преципитации 4% ПЭГ 6000 была получена «средняя» их содержания, равная 57±2.35 усл.ед., при тестировании с 3% ПЭГ 6000 - 21.9±2.35 усл.ед

Опосредованное определение размеров циркулирующих иммунных комплексов в синовиальной жидкости позволило вывести коэффициент 2.59.

Таким образом, в синовиальной жидкости обследуемых пациентов тестируются низкомолекулярные циркулирующие иммунные комплексы, способные осаждаться на синовиальной оболочке, вызывая развитие воспалительных и аутоиммунных процессов.

Следующим "этапом нашего исследования было изучение содержания ауто-антител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови и синовиальной жидкости у пациентов с остеоартрозом коленных суставов.

В настоящее время известно, что в организме человека существует опреде-

ленный, физиологически детерминированный, уровень аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК, их выход в кровеносную систему в этих случаях определяется физиологическими процессами клеточного распада. Превышение границы физиологического уровня является свидетельством наличия патологии, сопровождающейся распадом клеточных элементов и выходом межорганных ДНК аутоантигенов.

Основой данного процесса является общепатологический, универсальный феномен - повреждение клеточных мембран при патологических процессах различной этиологии с дальнейшим выходом в циркулирующую кровь различных органоспецифических и межорганных аутоантигенов и ответным синтезом аутоантител.

Появление ДНК-ядерных аутоантигенов, в большей степени, связывается с наличием воспалительных, дистрофических, дегенеративных процессов, сопровождающихся повышением уровня перекисного окисления липидов, активацией системных аутоиммунных реакций и т.д.

Наиболее универсальными маркерами такого рода деструкции тканей, вне зависимости от ее локализации в организме, являются межорганные аутоанти-гены, особенно АГ нативной и денатурированной ДНК, которые появляются при разрушении клеток и освобождении ядерного вещества.

В качестве нормативных значений уровней аутоантител к АГ нДНК и дДНК нами были взяты данные, полученные при обследовании тщательно отобранных для этой цели доноров и группы «практически здоровых» лиц в лаборатории экологической иммунологии НЦ КиЭМ СО РАМН и описанные в литературе (Кудрявцева И.В., 2000; Тихонова О.В., 2001.).

Использование при оценке изучаемой патологии как нормативных данных, так и данных, полученных в группе «практически здоровых» лиц, дает возможность в исследованиях, с большой долей вероятности, отбросить определенный уровень ААТ к антигенам ядерных ДНК, появление которых в циркуляции связано с наличием у пациентов различных хронических воспалительных процессов, ксенобиотического воздействия, сопровождающихся развитием иммунных реакций, активацией перекисного окисления липидов и т.д. При такого рода сравнении можно, в определенной степени, оценить прирост деструктивных и аутоиммунных процессов, вызванных конкретной патологией.

Вышеизложенное дало нам основание провести определение содержания аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови и синовиальной жидкости пациентов с диагнозом остеоартроз коленных суставов.

В результате проведенных исследований были получены следующие результаты.

«Средняя» содержания ААТ к антигенам нативной ДНК составила 3.00 ± 0.17 усл.ед. Полученный результат достоверно превышал как «среднюю» нормативных значений -1.1410.03 усл.ед (р < 0.01), так и «среднюю» показателя доя группы «практически здоровых» лиц -1.36 ±0.06 усл.ед (р < 0.01).

«Средняя» содержания ААТ к денатурированной ДНК у этих пациентов составила 8.04± 0.27 усл.ед, что также достоверно превышало как «среднюю»

нормативных значений 1.24+0.1 усл.ед (р < 0.01), так и «среднюю» для группы «практически здоровых» лиц -1.98 ±0.16 усл.ед (р < 0.01).

Полученные значения «средних» для нативной и денатурированной ДНК в

сыворотке крови у пациентов с остеоартрозом превышали также верхнюю гра-ницы_нормы_(Ь34 усл.ед для нативной и 1.9 усл.ед. для денатурированной

ДНК) и в группе «практически здоровых>Лк71Г(Г.921Г2.74 усл;ед"соответствен-------------

но).

При индивидуальном разборе полученных данных нами были выявлены следующие факты:

- Индивидуальные значения уровня аутоантител к антигенам нДНК у больных с изучаемым патологическим процессом в 87.5% случаев превышали границу физиологической нормы и в 70% наблюдеш?й превышали аналогичный показатель в группе «практически здоровых» лиц.

Таким образом, высокий уровень ААТ к антигенам нативной ДНК тестировался у 70 из 80 обследуемых пациентов при сравнении с верхней границей нормы и 56 пациентов при сравнении с аналогичным показателем группы «практически здоровых» лиц.

- Индивидуальные значения содержания аутоантител к антигенам дДНК у обследованных пациентов в 100% случаев превышали как верхнюю границу нормы выведенную для доноров, так и аналогичную границу в группе «практически здоровых» лиц.

При сравнении «средних» уровней ААТ к антигенам нДНК и дДНК было выявлено, что уровни последних в 2.5 раза превышают значения первых, что является доказательством наличия в организме пациентов длительно существующего хронического деструктивного процесса, протекающего на фоне активации аутоиммунных реакций и сопровождающегося нарушением процессов утилизации ядерной ДНК.

Подтверждением данного постулата являются исследования содержания аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в 20 образцах синовиальной жидкости, полученной у больных с остеоартрозом коленных суставов.

В результате проведенного тестирования была выведена «средняя» содержания ААТ к антигенам нативной ДНК в синовиальной жидкости, которая составила 1.79 ± 0.09 усл.ед, полученный результат достоверно превышал как «среднюю» нормативных значений 1.14±0.03 усл.ед (р < 0.01), так и «среднюю» значения показателя для группы «практически здоровых» лиц (1.36 ±0.06 усл.ед, р < 0.01) для сыворотки крови.

«Средняя» содержания ААТ к денатурированной ДНК в синовиальной жидкости у этих пациентов составила 4.27± 0.27 усл.ед, что также достоверно превышало как «среднюю» нормативных значений 1.24±0.5 усл.ед (р < 0.01), так и «среднюю» группы «практически здоровых» лиц - 1.98 +0.16 усл.ед (р < 0.01) для сыворотки крови.

Полученные значения «средних» аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в синовиальной жидкости крови у пациентов с остеоартрозом превышали также границы физиологической нормы для сыворотки крови

(1.34 и 1.9 усл.ед. соответственно).

Индивидуальные значения уровня аутоантител к антигенам нДНК у больных с остеоартрозом в образцах синовиальной жидкости в 90% случаев, а уровни аутоантител к антигенам дДНК в синовиальной жидкости обследованных пациентов в 100% случаев превышали границу физиологической нормы.

При оценке диагностической и прогностической значимости какого-либо показателя в патогенезе заболевания крайне важным является не только наличие его изменений и достоверности различия между нормативными и полученными значениями, но и взаимосвязи между изучаемыми параметрами, определяющими развитие патологического процесса.

С целью определения патогенетически значимых взаимосвязей между изучаемыми лабораторными показателями в сыворотке крови и синовиальной жидкости пациентов с остеоартозом коленных суставов был проведен корреляционный анализ полученных данных методом ранговой корреляции по Спир-мену.

Все полученные коррелятивные взаимосвязи можно условно разделить на две категории:

Первая, которая включает в себя выявленные взаимосвязи между исследуемыми показателями в сыворотке крови.

Выявлена прямая достоверная коррелятивная взаимосвязь между концентрациями ИЛ-1Р и ИЛ-4 (г = 0.58, р < 0.01). Данная коррелятивная взаимосвязь свидетельствует о прямой зависимости между концентрацией основного про-воспалительного интерлейкина, уровень которого отражает степень активности воспалительных реакций, и интерлейкина, отвечающего за активацию гуморального звена иммунной системы и развитие аутоиммунных реакций.

Прямые достоверные коррелятивные взаимосвязи между концентрациями иммуноглобулинов - 1§М и 1§0 (г = 0.37, р < 0.01), ^М и 1§А (г = 0.45, р < 0.01) и (г = 0.44, р < 0.01); концентрацией иммуноглобулинов и содержанием циркулирующих иммунных комплексов - ^М и ЦИК (г = 0.35, р < 0.01), и ЦИК (г = 0.35, р < 0.01), 1ёА и ЦИК (г = 0.4, р < 0.01), а также между содержанием ЦИК, выявляемых методом преципитации 3% ПЭГ6000 и 4% ПЭГ6000 (г = 0.65, р < 0.01) у обследованных пациентов отражают их взаимозависимость при развитии гуморального иммунного ответа на антигенную стимуляцию.

Важными являются прямые достоверные корреляции между концентрацией ИЛ-1р и содержанием аутоантител к нДНК (г = 0.34, р < 0.01), концентрацией ИЛ-4 и содержанием аутоантител к нДНК (г = 0.34, р < 0.01), концентрацией ^А и содержанием аутоантител к нДНК (г = 0.44, р < 0.01), содержанием ЦИК и ААТ к антигенам нДНК (г = 0.3, р < 0.05). Выявленные коррелятивные взаимосвязи указывают на значимость и взаимосвязанность деструктивных, воспалительных процессов, выраженности аутоиммунных реакций и образования комплексов антиген-антитело в механизмах развития остеоартроза.

Кроме того, выявленная взаимосвязь между концентрацией 1§А и содержанием аутоантител к нДНК в сыворотке крови свидетельствует о том, что синтез аутоантител происходит в основном за счет иммуноглобулина этого класса.

Вторая категория включает в себя выявленные взаимосвязи между ис-

Прямые достоверные коррелятивные взаимосвязи между концентрациями 1§М и (г = 0.67, р < 0.01); концентрацией иммуноглобулинов и содержанием циркулирующих иммунных комплексов - ^М и ЦИК (г = 0.54, р < 0.03) и

^А и ЦИК (г = 0.64, р < 0.01) у обследованных пациентов с остеоартрозом отражают активацию гуморального звена иммунной системы, его участие в развитии иммунного ответа на местном уровне^а^также подтверждают заклточе---------—

ние, что наиболее информативными показателями, свидетельствующими о развитии иммунных реакций в организме при изучаемом патологическом процессе, являются высокие концентрации 1»А и содержание циркулирующих иммунных комплексов.

Представляют несомненный теоретический и практшеский интерес выявленные прямые достоверные коррелятивные взаимосвязи в синовиальной жидкости между концентрациями ИЛ-1(3 и (г = 0.54, р < 0.01) и ИЛ-1(3 и IgA (г = 0.82, р < 0.0 Г), позволяющие сделать заключение, что активация гуморального звена иммунной системы на местном уровне, проявляющаяся в синтезе иммуноглобулинов классов М и А, происходит на фоне повышения концентрации основного провоспалительного цитокина ИЛ-1р.

Достоверные прямые коррелятивные взаимосвязи между концентрацией ИЛ-4 и ЦИК в синовиальной жидкости (г = 0.45, р < 0.05), содержанием аутоан-тител к антигенам денатурированной ДНК и ЦИК (г = 0.45, р < 0.05), а также достоверная обратная коррелятивная взаимосвязь между концентрацией ИЛ-1(3 и содержанием ЦИК в синовиальной жидкости (г = - 0.89, р < 0.01) свидетельствуют, что после активации воспалительных реакций происходит нарастание деструктивных процессов, приводящее к повышенному уровню выхода антигенов ядерных ДНК, связывание их в комплекс антиген-антитело с образованием циркулирующих иммунных комплексов, максимум образования которых приходится на момент уменьшения активности воспалительного процесса, проявляющегося в снижении уровня ИЛ-1Р-

В заключение следует отметить, что выявленные коррелятивные взаимосвязи между тестируемыми показателями в синовиальной жидкости и сыворотке крови обследованных пациентов еще раз убедительно подтверждают значимость и взаимосвязанность деструктивных, воспалительных и иммунных процессов в патогенетических механизмах остеоартроза коленных суставов на местном и организменном уровнях.

ВЫВОДЫ

1. У 90% пациентов с остеоартрозом коленных суставов ультразвуковое исследование выявило признаки воспалительного процесса.

2. У обследованных больных достоверно повышаются концентрации ИЛ-1р, ИЛ-4 и лактоферрина в сыворотке крови по сравнению с нормативными значениями показателей. «Средняя» концентрации Ш1-1[3 в синовиальной жидкости в два раза превышает его содержание в сыворотке крови.

3. У пациентов с остеоартрозом коленных суставов выявлена активация гуморального звена иммунной системы, что проявляется в достоверном повышении концентрации IgA и уровней циркулирующих иммунных комплексов в

сыворотке крови. Концентрация ^А в синовиальной жидкости соответствует её значениям в сыворотке крови обследованных пациентов.

4. Оценка размеров ЦИК в сыворотке крови и синовиальной жидкости обследованных пациентов свидетельствует о циркуляции мелкомолекулярных иммунных комплексов, способных вызывать развитие аутоиммунных реакций.

5. У обследованных пациентов с остеоартрозом коленных суставов выявлено высокое содержание аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови и синовиальной жидкости, что свидетельствует о выраженности деструктивных процессов и аутоиммунных реакций в организме.

6. У больных с остеоартрозом коленных суставов выявлены прямые достоверные коррелятивные взаимосвязи в сыворотке крови между содержанием ИЛ-10 и ИЛ-4, IgA и ЦИК, ИЛ-1(3 и аутоантител к антигенам и ДНК, ИЛ-4 и аутоантител к антигенам нДНК, и уровнем аутоантител к антигенам нДНК, ЦИК и аутоантител к антигенам нДНК и между содержанием 1§А и ЦИК, ИЛ-1р и ^А, ИЛ-4 и ЦИК, аутоантител к антигенам дДНК и ЦИК в синовиальной жидкости. Полученные данные свидетельствуют о значимости и взаимосвязанности деструктивных, воспалительных и иммунных процессов в патогенезе остеоартроза коленных суставов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Для повышения качества диагностики и контроля проводимого лечения у пациентов с остеортрозом рекомендуется доступный для практического здравоохранения диагностический комплекс (определение концентрации лактофер-рина, уровней аутоантител к антигенам денатурированной ДНК и циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови), позволяющий оценить степень выраженности деструктивных процессов, воспалительных и иммунных реакций.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кудрявцева И.В., Михайлова Т.В., Брагинская Н.М. и соавт. Опыт диагностики и лечения остеоартроза крупных суставов// Актуальные вопросы современной медицины: Тезисы докладов 11 научно-практической конференции врачей - Новосибирск, 2001. - С. 370.

2. Михайлова Т.В., Прохоров М.Ю., Бравве Ю.И. и соавт. Роль ультразвукового исследования в диагностике остеоартроза коленных суставов// Актуальные вопросы современной медицины: Тезисы докладов 12 научно-практической конференции врачей - Новосибирск, 2002. - С. 183-184.

3. Трунов А.Н.,.Славянская Т.А, Михайлова Т.В.,. Горбенко О.М, Трунова Л.А. Значения иммунобиохимических показателей в сыворотке крови и синовиальной жидкости при остеоартрозе // Аллергология и иммунология,- 2002,-Т.3.-№3.-С. 434-436.

4. Михайлова Т.В., Славянская Т.А, Трунов А.Н. Уровни аутоантител к антигенам нативной и денатурированной ДНК в сыворотке крови и концентрация интерлейкина -1р в синовиальной жидкости пациентов с остеоартрозом // Материалы VIII Международного конгресса по иммунореабилитации «Аллер-

гия, иммунология и глобальная сеть».- Канны, 2002,- International Journal on Immunorehabilitation.- T.4.- №1,- C.l 12.

5. Михайлова T.B., Горбенко O.M., Шваюк А.П., Трунов А.Н. Уровни иммунобиохимических показателей в сыворотке крови и синовиальной жидкости у пациентов с остеоартрозом //Материалы Всероссийской конференции

«Компенсаторно-приспособительные- процёссы:_фундамеетальньге ir клиниче------------

ские аспекты».- Новосибирск, 2002.- С.63-64

6. Михайлова Т.В., Трунов А.Н., Шваюк А.П., Трунова Л.А. Уровни ин-терлейкинов 1 Р,4 и показателей гуморального звена иммунной системы у пациентов с остеоартрозом // Бюл. СО РАМН.- 2002.- №3,- С.98-100

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АГ - Антиген

AT - Антитело

ААТ - Аутоантитело

дДНК - денатурированная ДНК

ил-ip - Интерлейкин 1 р

ИЛ-4 - Интерлейкин 4

ИН - Иммунная недостаточность

нДНК - нативная ДНК

ЦИК - Циркулирующие иммунные комплексы

IgA - Иммуноглобулин класса А

IgG - Иммуноглобулин класса в

IgM - Иммуноглобулин класса М

Соискатель Т.В.Михайлова

Подписано в печать 20 декабря 2002 г., заказ № 0190 Объем 1 п.л. Тираж 100 экз.

Формат бумаги 84x60 1/16. Типография НГМА_