Автореферат и диссертация по медицине (14.00.21) на тему:Выявление и коррекция нарушений свободнорадикального окисления в ротовой жидкости при хроническом генерализованном пародонтите

На правах рукописи

[Г111111ГН11Г111

□ □3 17*7824

Кравец Ольга Николаевна

ВЫЯВЛЕНИЕ И КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ В РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ГЕНЕРАЛИЗОВАННОМ ПАРОДОНТИТЕ

14.00.21. - Стоматология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

17ЯН9

20 Ф^

ч

Казань-2007

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: кандидат медицинских наук, доцент

Шайдуллина Хамида Мухлисовна Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Хитров Венидикт Юрьевич, доктор медицинских наук, доцент Мухамеджанова Любовь Рустемовна Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пермская государственная медицинская академия имени академика Б.А. Вагнера Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита диссертации состоится 2008г. в

М-

часов на

заседании диссертационного совета Д 208.034.02 при ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (420012, г. Казань, ул. Бутлерова, 49) С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 420012, г. Казань, ул. Бутлерова, 49 «Б».

Автореферат разослан «_»_2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук,

профессор

Ситдикова И .Д.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Воспалительные заболевания пародонта являются одним из наиболее частых патологических состояний полости рта [Горбачева И А, 2001, Петрович ЮА, 2004] Несмотря на достигнутые успехи в профилактике и лечении данной патологии, некоторые вопросы, в частности, касающиеся уточнения механизмов развития воспалительного процесса, остаются недостаточно изученными

В последние годы в патогенезе воспаления повышенное внимание уделяется роли нарушения свободнорадикального окисления (СРО) - генерации активных форм кислорода (АФК) и перекисному окислению липидов (ПОЛ) [Владимиров Ю А , 2000, Фархутдинов Р Р , 2005]

Активация процессов СРО при воспалительном процессе в пародонте связана с патогенным воздействием ассоциации микроорганизмов зубной бляшки как экзогенного индуктора цепи радикального окисления и развитием гипоксии смешанного типа, усугубляющей течение воспаления [Воскресенский О Н, Ткаченко Е К , 2003] Доказано, что в условиях гипоксии нарушаются все виды обменных процессов Происходит аккумуляция продуктов перекисного окисления и свободных радикалов, вступающих в реакции, приводящие к развитию патологических состояний [Владимиров Ю А , 2000,2002]

Считается, что избыток свободных радикалов вызывает поражение тканей, поддерживает воспалительный процесс, в то время как недостаток АФК, обеспечивающих микробицидную активность фагоцитов, способствует микробной инвазии, что играет определенную роль в развитии и прогрессировании воспалительных процессов [Маянский А Н , 2005]

В то же время результаты изучения состояния СРО в тканях пародонта нередко противоречивы В большинстве исследований констатируется лишь накопление продуктов окисления, что является предпосылкой для назначения ан-1 иоксидантных препаратов [Розколупа Н В и соавт, 1996, Петрович Ю А и со-авт, 2004] Вместе с тем, возможность замедления процессов СРО практически не учитывается клиницистами. Объективная оценка характера и степени изменения данного процесса и его коррекция может открыть новые перспективы лечения и профилактики заболеваний пародонта

Изучение особенностей генерации АФК фагоцитирующими клетками в очаге воспаления, подбор лекарственных препаратов, обладающих способностью влиять на скорость окисления, требуют применения адекватных методов

исследования СРО Сложность многих способов мониторинга состояния СРО делает их малодоступными для практического здравоохранения Перспективным методом является регистрация хемилюминесценции (ХЛ) - свечения, возникающего при взаимодействии свободных радикалов [Владимиров Ю А , 2000, 2002, Фархутдинов Р Р , 2005]

Изучение состояния СРО в ротовой жидкости при различном характере течения воспалительного процесса, при медикаментозных и других воздействиях может дать новые возможности для уточнения причин и общих закономерностей развития воспалительных заболеваний пародонта, вести целенаправленный поиск эффективных способов лечения Указанный круг проблем и стал предметом настоящей работы

Цель исследования: повышение эффективности лечения хронического генерализованного пародонтита с учетом особенностей генерации активных форм кислорода клетками ротовой жидкости при различном характере течения воспалительного процесса и влияния проводимого лечения на состояние свобод-норадикального окисления

Задачи исследования:

1 Разработать способ оценки состояния свободнорадикального окисления в ротовой жидкости и определения антиокислительной активности надосадоч-ной части слюны

2 Изучить антиокислительную активность и генерацию активных форм кислорода в ротовой жидкости у лиц с интактным пародонтом и больных хроническим генерализованным пародонтитом

3 Оценить влияние лекарственных средств, применяемых для лечения хронического генерализованного пародонтита, на процессы свободнорадикального окисления: генерацию активных форм кислорода и перекисное окисление липидов в модельных системах и в ротовой жидкости in vitro Определить препараты, обладающие про- и антиоксидантной активностью

4 Разработать тактику лечения больных хроническим генерализованным пародонтитом с учетом особенностей генерации активных форм кислорода в очаге воспаления в зависимости от характера течения заболевания и влияния лекарственных препаратов на процессы свободнорадикального окисления

5 Определить эффективность предложенного подхода лечения хронического генерализованного пародонтита

Научная новизна заключается в том, что впервые:

- разработан метод регистрации XJI ротовой жидкости, позволяющий оценить генерацию активных форм кислорода и антиокислительную активность слюны (патент № 2140633 от 27 10 1999 г)

- изучена хемилюминесценция ротовой жидкости у лиц с интактным паро-донтом и больных воспалительными заболеваниями пародонта

- дана оценка влияния ряда лекарственных средств, используемых при лечении хронического генерализованного пародонтита ротокана, хлорофиллипта, настойки календулы, настойки эхинацеи пурпурной, метрогила, гипохлорита натрия на процессы свободнорадикального окисления в модельных системах и in vitro Выявлены новые свойства данных препаратов, расширяющее их фармакологическую характеристику, заключающиеся в анти- или прооксидантном действии

На основании исследования хемилюминесценции клеток ротовой жидкости разработан способ подбора лекарственных препаратов для лечения воспалительных заболеваний пародонта с учетом состояния свободнорадикального окисления

Практическая значимость. Внедрена в практику методика исследования хемилюминесценции ротовой жидкости, позволяющая оценить генерацию активных форм кислорода клетками слюны и ее антиокислительную активность Выявлены особенности состояния свободнорадикального окисления в ротовой жидкости при различном характере течения воспалительного процесса в тканях пародонта, давшие возможность предложить патогенетически обоснованный подход к лечению данной патологии В частности, разработан способ подбора лекарственных средств для местного лечения хронического генерализованного пародонтита с учетом их влияния на скорость генерации активных форм кислорода фагоцитирующими клетками слюны

Благодаря рациональному выбору используемых средств, с учетом их влияния на свободнорадикальное окисление в ротовой жидкости, удалось снизить частоту рецидивов заболевания Рекомендованный для клинической практики комплекс лечебных мероприятий, влияющих на состояние свободнорадикального окисления в ротовой жидкости, позволил повысить эффективность лечения больных хроническим генерализованным пародонтитом

Внедрения Материалы исследования внедрены в работу пародонтологи-ческого кабинета клинической стоматологической поликлиники БГМУ г Уфы, ГУЗ Республиканской стоматологической поликлиники г Уфы, стоматологиче-

ской поликлиники № 2 г Уфы, стоматологической поликлиники № 4 г Уфы, стоматологической поликлиники № 5 г Уфы, в учебный процесс на кафедре терапевтической стоматологии ГОУ ВПО «БГМУ Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», в учебный процесс на кафедре терапевтической стоматологии ГОУ ВПО «КГМУ Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Получен патент на изобретение «Способ оценки состояния свободноради-кального окисления ротовой жидкости при воспалительных заболеваниях паро-донта» № 2140633 от 27 10 1999 г

Материалы диссертации вошли в информационно-методическое письмо для врачей-стоматологов «Нарушения свободнорадикального окисления в ротовой жидкости при воспалительных заболеваниях пародонта диагностика, профилактика, возможность коррекции» (утвержденное в МЗ РБ, г Уфа, 19 09 2007 г)

Положения, выносимые на защиту:

1 Предложенная методика исследования хемилюминесценции ротовой жидкости, позволяет оценить генерацию активных форм кислорода клетками слюны и ее антиокислительную активность

2 Интенсивность генерации активных форм кислорода клетками ротовой жидкости зависит от характера течения воспалительного процесса в тканях пародонта при хроническом генерализованном пародонтите скорость генерации активных форм кислорода понижена, при его обострении — повышена

3 Лекарственные средства, применяемые для местного лечения хронического генерализованного пародонтита, оказывают как антиоксидантное (рото-кан, хлорофиллипт, настойка календулы, настойка эхинацеи пурпурной, метро-гил), так и прооксидантное действие (гипохлорит натрия)

4 Применение лекарственных препаратов, влияющих на генерацию активных форм кислорода клетками ротовой жидкости, позволяет повысить эффективность лечения пародонтита, снизить частоту рецидивов заболевания

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены на 74 Студенческой научной конференции, посвященной столетию Р А Вяселева (Казань, 2000), Национальной научно-практической конференции с международным участием «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека» (Смоленск, 2001), Республиканской конференции стоматологов РБ «Профилактика и лечение стоматологических заболеваний у детей», «Актуальные проблемы стоматологии» (Уфа, 2006), Всерос-

сийском конгрессе и Республиканской конференции стоматологов РБ «Внедрение новых технологий при лечении стоматологических заболеваний» (Уфа, 2007)

Диссертация обсуждена на совместном заседании научно-технического со-вегга, Центральной научно-исследовательской лаборатории и кафедры терапевтической стоматологии ГОУ ВГТО «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (протокол № 10 от 29 06 2007 г )

Апробация диссертации проведена на расширенном заседании предметно -проблемной комиссии ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и ГОУ ДПО «Казанская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по специальности «Стоматология» (протокол № 7 от 12 09 2007 г) Публикации по теме диссертации.

По материалам диссертации публиковано 8 печатных работ, в том числе 1 в центральной печати, в ведущем рецензируемом журнале, определенном Высшей аттестационной комиссией для публикации основных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата и доктора наук Личный вклад автора в проведении исследования. Автором самостоятельно составлена программа исследования Разработка методики исследования состояния свободнорадикального окисления в ротовой жидкости, обследование 118 больных хроническим генерализованным паро-донтитом и тестирование лекарственных препаратов в модельных системах и in vitro производились при участии и организации автора Статистическая обработка проводилась лично автором

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 141 страницах машинописного текста, состоит из введения, главы «Обзор литературы», главы «Материалы и методы исследования», главы результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы Работа иллюстрирована 16 таблицами, 25 рисунками. Библиографический список содержит 196 источников литературы, в том числе 117 работ отечественных и 79 зарубежных авторов

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования. В настоящей работе в соответствии с поставленной целью и задачами, были выделены основные этапы исследования,

которые представлены в таблице 1 Работа включала в себя экспериментальный и клинический разделы

Экспериментальный раздел состояла из нескольких этапов На первом этапе проводили разработку метода регистрации ХЛ РЖ и подбирали оптимальные условия для исследования Использовалась РЖ лиц контрольной группы, в которую вошло 25 здоровых человек в возрасте от 15 до 20 лет (15 женщин и 10 мужчин) Забор материала для исследования производили утром натощак, до гигиенических процедур Исследования проводились на аппарате для регистрации сверхслабых свечений «Хемилюминомере - 003» В качестве наиболее информативных показателей ХЛ были взяты светосумма (в) и максимальная амплитуда медленной вспышки (1шах)

Таблица 1

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОВЕДЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Этапы исследования Объект исследования Методы исследования

1 Разработка метода регистрации ХЛ ротовой жидкости 25 лиц с интактным пародонтом Подбор оптимальных условий определения ХЛ ротовой жидкости

2 Оценка влияния препаратов на процессы СРО Ротокан, хлорофиллипт, настойка календулы, настойка эхинацеи пурпурной, метрогил, гипохлорит натрия Регистрация ХЛ модельных систем, генерирующих АФК, в которых протекают реакции ПОЛ и в фагоцитирующих клетках

3 Изучение особенностей клинического течения воспалительного процесса на примере ХГП 118 больных ХГП средней и тяжелой степени тяжести Объективное, инструментальное, рентгенологическое исследование, исследование ротовой и десневой жидкости цитологическое исследование десневой борозды, хемилюминесцент-ное исследование ротовой жидкости

4 Определение эффективности лечения 118 больных ХГП средней и тяжелой степени тяжести Анализ клинических результатов и лабораторных данных

Производился подбор условий для исследования XJ1 РЖ и ее зависимость от разведения и длительности хранения Исследовалось наличие свечения осадка и надосадочной части РЖ

Степень антиокислительной активности надосадочной части слюны оценивали по ее способности подавлять свечение модельной системы, широко применяемой в исследовании антиокислительных свойств биологических объектов [Фархутдинов Р Р, 2005], в % от величины угнетения свечения МС, при добавлении к последней 0,1мл надосадка

Расчет проводили по формуле SAOA = 100% - (SMC - SMCCII) / SMCxl00%, где SAOA - суммарная антиокислительная активность, SMC -светосумма модельной системы, SMCCFI - светосумма модельной системы + надосадочная часть слюны

На втором этапе исследовали влияние лекарственных препаратов на процессы СРО в модельных системах (МС) и in vitro

В работе применяли следующие МС В первой инициировали генерацию АФК Для этого в 20 мл фосфатного буфера (КН2Р04 - 20 мМ, KCL - 105 мМ, Na лимоннокислый — 45 мМ) вводили 1 мл 5 мМ раствора сернокислого железа (FeS04 х 7 Н20) Величину рН полученного раствора доводили до 7,45 ед титрованием насыщенным раствором КОН и добавляли 0,2 мл маточнош раствора люминола (5 х Ю^М) Образование АФК инициировали введением 1 мл 50 мМ раствора сернокислого железа при постоянном перемешивании [Р Р Фархутдинов, 1995]

Влияние на фагоцитирующие клетки исследовали следующим образом отбирали венозную кровь в пластиковую пробирку с гепарином (на 1 мл крови 50 ЕД гепарина) Кровь в объеме 0,1 мл с приготовленным раствором препарата или физиологическим раствором в том же объеме в качестве контроля инкубировали в термостате в течение 10 минут, разводили в 2 мл физиологического раствора с люминолом (10_5М) и регистрировали XJ1 в течение 10 мин

В качестве МС, в которой протекают процессы ПОЛ, использовали липо-сомы, полученные из куриного желтка, содержащего липопротеиновые комплексы, сходные с липидами крови (Г И Клебанов с соавт , 1988), при добавлении к которым ионов двухвалентного железа (10 мМ) развивается цепное окисление полиненасыщенных жирных кислот, сопровождающееся свечением

В работе были использованы следующие лекарственные средства ротокан, настойка эхинацеи пурпурной, хлорофиллипт, настойка календулы, гипохлори г натрия, метрогил

Препараты в концентрациях, соизмеримых с терапевтическими, добавляли в системы и регистрировали XJI, по изменению которой судили об их про - и антиоксидантных свойствах в отношении этих систем

При исследовании влияния препаратов на клетки РЖ в лунки иммунологического планшета помещали по ОД мл смыва с полости рта В лунку добавляли 0,1 мл лекарственного препарата, изучали XJI и определяли изменение ее показателей относительно первоначальных значений

Проведено клиническое, рентгенологическое и функциональное обследование 118 больных обоего пола (64 женщины и 54 мужчины) в возрасте от 25 до 45 лет В исследование были включены больные хроническим генерализованным пародонти-том (ХГП) средней и тяжелой степени В обследование не были включены больные с заболеваниями эндокринной системы, доброкачественными опухолями Хронические заболевания лиц, включенных в обследование, были в стадии стойкой ремиссии, что подтверждалось данными клинического и лабораторного исследования

Для комплексной клинической характеристики состояния полости рта применяли следующие основные методы опрос больного, осмотр полости рта с оценкой стоматологического статуса и использованием гигиенического индекса (ИГ) Green JC, Vermihon JR (1964), пародонтального индекса (ПИ) Rüssel (1956), индекса кровоточивости (ИК) Muhlemann Н R (1971), определение количества десневой жидкости (метод N Brill и В Krasse в модификации Г М Барера, Э М Халитовой (1986)), цитологическое исследование содержимого десневой борозды (метод С В Ериной (1985), определение количества иммуноглобулинов в десневой и ротовой жидкости проводилось методом простой радиальной иммунодиффузии в агаре [Mancini G et al, 1965]

Для рентгенологического исследования тканей пародонта использовали цифровую ортопантомографию, которую проводили всем больным хроническим генерализованным пародонтитом до и через один год после проведенного комплексного лечения В исследуемых зонах определялась оптическая плотность костной ткани с построением денситограмм

Всем больным проводилось обучение рациональной гигиене полости рта, санация полости рта, профессиональная гигиена полости рта, по показаниям общая и местная антимикробная и противовоспалительная терапия, которая дополнялась назначением иммунокорре! ирующих препаратов, препаратов с про - и антиокси-дантным действием в зависимости от состояния СРО РЖ При наличии супракон-тактов выполнялось избирательное пришлифовывание зубов [Jenkelson В А, 1979]

Хирургическое лечение заключалось в проведении лоскутных операций по методике В.И. Лукьяненко с применением остеотропного препарата «Биоим-плант» (ООО «Конектбиофарм»).

Клинические, рентгенологические исследования выполнены в Клинической стоматологической поликлинике ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» (главный врач - заслуженный врач РФ, канд. мед. наук Гончаров A.B.). Исследование люминолзависимой хемилюминесценции ротовой жидкости и определение антиокислительной активности лекарственных средств производились в отделе биофизики Центральной научно-исследовательской лаборатории ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» (зав. отделом - д-р. мед. наук, профессор Фархутдинов P.P.).

Статистический анализ выполняли на персональном компьютере, с использованием пакета компьютерных статистических программ «Excel 2003» с вычислением t-критерия Стъюдента.

Результаты исследований и их обсуждение. С целью выработки нормативных показателей люминолзависимой ХЛ РЖ были обследованы пациенты котрольной группы. На первом этапе проводили исследование люминолзависимой ХЛ нативной слюны. При добавлении в 2 мл нативной слюны 0,05 мл 5 х Ю-5 М люминола было выявлено свечение, типичная запись которого представлена на рисунке J.

<* eö ..................... .................._

3-вэ _! ]

л га .;_____I

t* .1 ^

Вэемн, Ьин.

Рис. 1. Запись люминолзависимой ХЛ различных компонентов слюны.

Клетки (кривая 1), иативная слюна (кривая 2), надосадочная часть (кривая 3)

Величина спонтанного свечения слюны здоровых людей колеблется от 0,07 до 1,9 уел ед, в среднем составляет 0,95 уел ед , светосумма свечения от 1,71 до 3,19 уел единиц, в среднем 2, 57 уел ед

Возможными источниками АФК РЖ являются клеточные элементы осадка, в основном фагоциты Для исследования использовали 0,1 мл осадка, полученного в результате центрифугирования 1 мл слюны при 1500g в течение 10 минут Каждый образец помещали в физиологический раствор с добавлением лю-минола в конечной концентрации 10~5 М

Свечение надосадочной части приближалось к нулевым значениям, максимальная активность ХЛ была в осадке, состоящем из клеток слюны, в которых происходит образование радикалов кислорода, регистрируемое в виде ХЛ в присутствии люминола Надосадочная часть слюны в норме подавляла ХЛ модельной системы в среднем в 2 раза Данный феномен ингибирующего влияния биологической жидкости на генерацию АФК можно объяснить наличием в ней антиоксидантов (супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы и глута-тионредуктазы), угнетающих образование свободных радикалов на различных фазах цепной реакции СРО

С целью снижения влияния надосадочной части слюны на ХЛ регистрировалась люминолзависимая ХЛ смывов с полости рта На основании полученных результатов рекомендована следующая методика комплексного исследования состояния СРО в РЖ объем физиологического раствора, предназначенного для смыва, составляет 2 мл, исследование должно быть проведено в течение 10 минут после забора материала, антиокислительные свойства надосадочной части слюны можно оценивать в процентах от угнетения величины свечения модельной системы, при добавлении к последней 0,1 мл надосадочной части

Влияние некоторых препаратов, применяемых в лечении хронического i енерализованного пародонтита, на процессы СРО в модельных системах и in vitro.

Необходимость местной коррекции местной и системной антиоксидантной терапии при ХГП способствовала изучению действия лекарственных средств, используемых в лечении данной патологии, на процессы СРО Данные исследования препаратов в модельных системах приведены в таблице 2

В МС, генерирующей АФК, метрогил, ротокан, хлорофиллипт, настойка календулы, настойка эхинацеи пурпурной подавляли ХЛ В наибольшей степени на генерацию АФК влияла настойка эхинацеи пурпурной (более чем на 85%

от контроля) Гипохлорит натрия усиливал интенсивность ХЛ системы, выступая в роли прооксиданта

Таблица 2

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИОКИСЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ, ПРИМЕНЯЕМЫХ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ХРОНИЧЕСКИХ ГЕНЕРАЛИЗОВАННЫХ

ПАРОДОНТИТОВ

Препараты, их концентрация в модельной системе, мг/'мл Генерация АФК Перекисное окисление липидов Клетки

S Jmax S Jmax S Jm&\

н | с 0,1 25,3+3,2* 20,09±2,6* 4,4+0,4* 2,3+0,5*

Хлоро филли 0,05 51,1±6,4* 55,6±6,2* 7,5+0,7* 4,3+0,4*

0,001 78,5±6,2* 67,8±7,1* 44,9+4,3* 41,8+5,7* 33,4+5,2* 42,5+6,9*

ев I 0,1 52,8+7,1* 41,9±5,3* 274,2+12,5* 306,7+12,6*

1 1 0,05 71,1+6,9* 62,2±4,6* 235,7+14,8* 292,4+14,5*

« 1 ж 3 0,001 94,9+7,2* 93,7±4,3* 199,2+14,3* 277,5+16,1* 38,9+6,9* 52,3+6,3*

в* S од 20,02+2,3* 15,4±3,4* 20,2+5,7* 22,8±5,7*

'5 я р cd £ 3 0,05 45,5+4,6* 45,3+6,1* 57,3+3,4* 66,5+5,3*

¡2 Я ж л ,001 71,9±5,7* 70,3±5,7* 73,8+4,3* 79,8+4,3* 22,3+2,5* 27,9+5,3*

§ 0,1 33,3+6 3* 17,4+6,9* 9,4+0,5* 4,9+0,5*

к о 0,05 44,7±6,1* 28,8+5,7* 17.4 ±1,1* 9,1+0,7*

о си 0,001 58,8±7,6* 48,9+5,2* 73,3+5,7* 78,6±2 5* 6,7+0,4* 10,7+2,8*

0,1 60,9+4,3* 71,1+4,8* 84 2+5,7* 85,7+6,1*

о о. 0,05 74,5 ±6,5* 74,2+5,2* 91,6+4,6* 93,01+4,3*

S £ 0,001 80,1±8,1* 75,9+5,1* 98,1+6,1 96,1+2,4 19,2+3,4* 37,3+5 7*

к 0,1 156,5+11,3* 189,1±11,4* 128,2+11,1* 141,9+12,1*

О Q. 11 н 0,05 137,4±10,8* 156,0+12,6* 116,6+10,3* 127,9±10,1*

о к 5 Ё и О. 0,001 115,7+12,5* 130,5+10,6* 110,9±10,5* 114,2+11,4* 192,2±10,2* 222,2 ±11,3*

Примечание * - статистически достоверные отличия р<0,05 Приведены показатели ХЛ моде чьи их систем в % от контроля, принятого за 100% Приведены средние значения 10 измерений S - светосумма, I тах - амплитуда медленной вспышки

На МС, в которой протекали процессы Г10Л, препараты различных групп влияли неоднозначно Из препаратов наиболее интенсивно подавлял процесс ПОЛ хлорофиллипт (более чем на 90%), метрогил практически не влиял на ХЛ желточных липопротеинов Настойка календулы усиливала процессы ПОЛ, выступая в данной системе в роли прооксиданта Гипохлорит натрия усиливал ХЛ, связанную с ПОЛ

В фагоцитах ротокан наиболее интенсивно вызывал угнетение образования АФК клетками, а гипохлорит натрия — стимулировал образование АФК фагоцитами крови

Наиболее интенсивно подавлял ХЛ клеток РЖ ротокан, усиливал - гипохлорит натрия

Данные исследования хемилюминесценции клеток ротовой жидкости у больных хроническим генерализованным пародонтитом.

При обследовании больных ХГП помимо традиционных клинико-лабораторных и инструментальных методов исследования, были применены хемилюминесцентные методы

Показатели светосуммы ХЛ, свидетельствующие о функциональной активности клеток, находящихся в РЖ, значительно отличались друг от друга в зависимости от характера течения воспалительного процесса в пародонте Была установлена взаимосвязь между показателями ХЛ РЖ и стадией процесса при хроническом генерализованном пародонтите отмечалось понижение показателей ХЛ РЖ, данную группу составили 51 человек с показателями светосуммы ХЛ менее 37 уел единиц, из них 30 с диагнозом ХГП средней степени тяжести, 21- ХГП тяжелой степени У больных данной группы пониженные показатели ХЛ клеток РЖ свидетельствовали о замедлении скорости СРО в РЖ При обострении процесса - значительное повышение значений, в группу вошло 60 больных с показателями светосуммы ХЛ более 60 уел единиц (33 больных ХГП средней степени тяжести в стадии обострения, 27- ХГП тяжелой степени в стадии обострения) Повышенные показатели ХЛ клеток РЖ свидетельствовали об увеличении скорости генерации АФК этими клетками У 7 больных показатели ХЛ РЖ находились в пределах нормы (от 37 до 60 уел единиц), что было связано с тем, что в данную группу составили лица, ранее получавшие медикаментозное лечение по поводу ХГП Данные клинико-лабораторного обследования больных ХГП.

Основными жалобами пациентов с ХГП средней и тяжелой степеней служили кровоточивость десен, их болезненность при чистке зубов и при приеме жесткой пищи, о гонение корней зубов и их повышенную чувствительность, на

подвижность зубов, изменение их положения в зубном ряду, на наличие зубных отложений, на неприятный запах изо рта, больные ХГП в стадии обострения также предъявляли жалобы на гноетечение из пародонтальных карманов

При объективном обследовании у пациентов с пониженными показателями XJ1 определялись отечность, гиперемия слизистой оболочки десневого края, кровоточивость его при зондировании, наличие над - и поддесневых зубных отложений, подвижность зубов варьировалась от I до II-III степени в зависимости от тяжести процесса, рецессия десневого края от 1/3 до 1/2 длины корня, у больных ХГП с повышенными показателями XJI РЖ также отмечалось наличие гнойного экссудата из пародонтальных карманов, в некоторых случаях абсце-дирование, наличие блоков травматической окклюзии

При изучении данных объективного обследования было обнаружено достоверное увеличение исследуемых индексных показателей по отношению к норме (р < 0,05) У значительной части больных гигиенический уход был недостаточным, что подтверждается высокими значениями индекса гигиены, в среднем у больных ХГП с пониженными показателями XJ1 РЖ он составил 2,8 ± 0,04 балла, а у больных с повышенными - 3,1 + 0,04 балла, среднее значение ПИ у больных ХГП с пониженными показателями XJI РЖ - 4,74 ± 0,01, с повышенными - 4,86 + 0,02, значения индекса кровоточивости у больных с пониженными показателями XJI РЖ составили - 2,3 ± 0,04 балла, с повышенными - 2,5 ± 0,03 балла

При рентгенологическом обследовании определялась неравномерная горизонтальная резорбция костной ткани межзубных перегородок при хроническом генерализованном пародонтите средней степени тяжести от 1/3 до 1/2 длины корня, при хроническом генерализованном пародонтите тяжелой степени тяжести - более 1/2 длины корня Плотность костной ткани у больных ХГП с пониженными показателями XJI РЖ на верхней челюсти - 37,8 ±0, 35 уел ед, на нижней челюсти - 33,1±0,64 услед, у больных с повышенными - на верхней челюсти - 39,8 ±0, 32 уел ед , на нижней челюсти - 35,1±0,65 уел ед

При исследовании десневой жидкости отмечалось повышение ее количества, причем в стадии обострения - в максимальной степени, количество иммуноглобулинов в десневой жидкости увеличивалось в зависимости от тяжести и стадии воспалительного процесса в пародонте

Цитологическое исследование десневой жидкости у пациентов с пониженными показателями ХЛ РЖ показало увеличение в ее составе числа нейтрофи-лов (78,2 ±1,3), эпителиальных клеток (8,6 ± 0,2), появление лимфоцитов (1,5 ± 0,03), макрофагов (1,73 ± 0,2) и гистиоцитов (5,3 ± 0,1), у пациентов с повышенными показателями - увеличение числа нейтрофилов (81,3 ± 2,2), эпителиальных клеток (9,2 ± 0,3), лимфоцитов (1,8 ± 0,05), макрофагов (2,2 ± 0,2) и гистиоцитов (5,7 ±0,1)

Анализ эффективности лечения больных хроническим генерализованным пародонтитом с учетом особенностей генерации активных форм кислорода и влияния препаратов на процессы свободнорадикального окисления в ротовой жидкости.

Чтобы определить эффективность предложенного способа коррекции СРО больные первой и второй группы были произвольно разделены на две подгруппы у первой подгруппы первой группы (41 человек) и у первой подгруппы второй группы(50 человек) — основные, целью проведения местного лечения была не только санация очага воспаления, но и коррекция состояния СРО, в данном случае мы сочли необходимым применение прооксидантов Вторая подгруппа первой группы (10 человек) и вторая подгруппа второй группы (10 человек) служили подгруппой сравнения, и получали традиционное лечение

Местное лечение больным первых подгрупп проводили на основании данных ХЛ РЖ с использованием изученных лекарственных средств Больным групп сравнения проводилась традиционная предоперационная подготовка

В связи с тем, что показатели ХЛ РЖ группы больных с пониженными значениями свидетельствовали о низкой скорости генерации АФК клетками РЖ, сочли целесообразным применение препарата с изученным прооксидантным действием В эксперименте было установлено, что применяемые для местного лечения препараты хлорофиллипт, ротокан, метрогил, настойка календулы и эхинацеи пурпурной при воздействии на клетки РЖ при пониженных показателях ХЛ еще больше снижают показатели А гипохлорит натрия, выступая в роли прооксиданта, повышает показатели ХЛ, усиливая ее

Виду этого, для стимуляции процессов СРО применяли для местного воздействия 0,5% раствор гипохлорита натрия в виде полосканий полости рта в течение 2 минут 3-4 раза в день В процессе лечения производили исследование ХЛ РЖ

Длительность лечения определялась индивидуально по динамике клинической картины заболевания и по данным хемилюминесцентного исследования РЖ, которое проводили до введения препарата при каждой второй процедуре

Лечение больных ХГП с пониженными показателями ХЛ РЖ основной подгруппы с помощью коррекции свободнорадикального дисбаланса позволило получить стойкий лечебный эффект Повышение показателей ХЛ сопровождалось изменением клинической картины уменьшением кровоточивости, отечности и гиперемии слизистой оболочки десневого края, уменьшением подвижности зубов Также было получено статистически значимое снижение индексов ИГ до 1,2 ± 0,02(р < 0,05), ИК до 0,4±0,01 балла(р < 0,05)

У больных ХГП с пониженными показателями ХЛ РЖ в подгруппе сравнения нормализация клинической картины происходила лишь после 9-10 процедуры с момента начала лечения Что характеризовалось снижением показателей индекса гигиены Грина-Вермильона с 2,8±0,04 до 1,5±0,03 баллов, ИК с 2,3±0,04 до 0,8±0,02 балла Показатели ХЛ РЖ в процессе лечения также претерпевали изменения повышение показателей происходило в среднем после 56 процедуры, причем не так стремительно, как у больных первой подгруппы, в среднем на 20-25% Нормализация показателей ХЛ РЖ происходила лишь на 15 сутки после начала лечения

После проведения комплексного лечения, включая хирургическое, на рентгенограммах через 12 месяцев наблюдалась положительная динамика Выявлено уменьшение атрофии альвеолярных отростков челюстей, восстановление замыкательных пластинок, уменьшение очагов остеопороза, уплотнение костных трабекул У больных основной подгруппы отмечалось значительное уплотнение костной структуры, восстановление межальвеолярных перегородок У больных подгруппы сравнения отмечалось сохранение очагов остеопороза и нечеткость костной структуры По данным локальной денситометрии у больных основной подгруппы плотность костной ткани на верхней челюсти через год после оперативных вмешательств увеличилась на 59,3 уел ед, а на нижней - на 56,8 уел ед, у больных подгруппы сравнения плотность костной гкани на верхней челюсти через год после операции увеличилась на 36,3 уел ед, а на нижней - на 34,7 уел ед

При оценке отдаленных результатов лечения в основной подгруппе через 3, 6, 12 месяцев после лечения было отмечено, что стойкая ремиссия отмечалась у 82% больных ХГП средней степени тяжести и 77 % ХГП тяжелой степени В подгруппе

сравнения клинические, индексные, иммунологические показатели оставались в пределах, достигнутых после первичного курса лечения, в течение 4 месяцев у 62% больных XIII средней степени и 39% больных XI IIтяжелой степени

В связи с тем, что показатели ХЛ РЖ группы больных с повышенными значениями свидетельствовали о повышенной скорости генерации АФК клетками РЖ, посчитали необходимым применение препаратов с изученным анти-оксидантным действием В эксперименте было установлено, что применяемые для местного лечения препараты хлорофиллипт, ротокан, метрогил, настойка календулы и эхинацеи пурпурной при воздействии на клетки РЖ при повышенных значениях ХЛ снижают показатели Гипохлорит натрия при повышенных показателях ХЛ клеток РЖ, обусловленных избыточной скоростью генерации ими АФК, оказывал дальнейшее усиление интенсивности ХЛ

В виду этого, лекарственные препараты, оказывающие ингибирующее влияние на процессы СРО, использовали в виде аппликаций (производили разведение препаратов 13с водой), ротовых ванночек (производилось разведение 1 чайной ложки препарата на стакан воды) Курс лечения составлял в среднем 7-9 процедур Длительность лечения определялась строго индивидуально, в зависимости от динамики течения воспалительного процесса и от данных хеми-люминесцентного исследования клеток ротовой жидкости Исследования ХЛ РЖ проводили после каждой второй процедуры

Понижение показателей ХЛ у больных основной подгруппы сопровождалось изменением клинической картины уменьшением кровоточивости, отечности и гиперемии слизистой оболочки десневого края, уменьшением подвижности зубов Также было получено статистически значимое снижение индексов ИГ до 1,1 ± 0,02, ИК до 0,4 ± 0,01(р< 0,05)

Анализ результатов лечения различными препаратами с антиоксидантными свойствами выявил различия в длительности лечения и в динамике клинических и лабораторных показателей, наиболее быстрый и стойкий эффект оказывало применение ротокана, что связано с его выраженным антиоксидантным свойством

У больных ХГП в стадии обострения с повышенными показателями хеми-люминесценции ротовой жидкости (подгруппа сравнения) при применении традиционного консервативного лечения улучшение клинической картины заболевания произошло в среднем после 12-14 процедуры, что характеризовалось снижением или полным исчезновением кровоточивости десневого края при зондировании (значения ИК составили в среднем 0,6±0,02), уменьшением или полным исчезновением экссудации из патологических карманов, уменьшение

степени подвижности зубов, ИГ Грина-Вермильона до 1,4±0,04 Показатели XJI РЖ в процессе лечения также претерпевали изменения снижение показателей происходили в среднем после 7-8 процедуры, причем не так стремительно как у больных первой подгруппы, в среднем на 15-20% Нормализация показателей ХЛ РЖ происходила лишь на 20 сутки после начала лечения

По данным локальной денситометрии - у больных основной подгруппы с повышенными показателями плотность костной ткани на верхней челюсти через год после оперативных вмешательств увеличилась на 62,4 уел ед, а на нижней - на 59,8 уел ед, у больных подгруппы сравнения плотность костной ткани на верхней челюсти через год после операции увеличилась на 39,8 уел ед, а на нижней - на 36,4 уел ед

При оценке отдаленных результатов лечения в основной подгруппе через 3, 6, 12 месяцев после лечения было отмечено, что стойкая ремиссия отмечалась у 85% больных ХГП средней степени тяжести и 76% ХГП тяжелой степени В подфуппе сравнения клинические, индексные, иммунологические показатели оставались в пределах, достигнутых после первичного курса лечения, в течение 4 месяцев у 59% больных ХГП средней степени и 40% больных ХГП тяжелой степени

ВЫВОДЫ

1 Разработан и апробирован способ оценки состояния свободнорадикаль-ного окисления в ротовой жидкости, основанный на регистрации хемилюми-несценции, позволяющий ex tempore определить генерацию активных форм кислорода клетками ротовой жидкости и ее антиокислительную активность

2 Высокие значения показателей хемилюминесценции клеток при хроническом генерализованном пародонтите в стадии обострения (показатели свето-суммы хемилюминесценции - 75,5±3,18 уел ед (р < 0,01)) связаны с избыточной выработкой активных форм кислорода, низкие значения показателей хемилюминесценции клеток ротовой жидкости при хроническом генерализованном пародонтите (показатели светосуммы свечения - 29,8±1,12 уел ед (р<0,05)) свидетельствуют о низкой функциональной активности фагоцитирующих клеток ротовой жидкости

3 Лекарственные средства, используемые для местного лечения хронического генерализованного пародонтита, стимулируют выработку активных форм кислорода за счет антиоксидантного действия (хлорофиллипт, настойка эхина-

цеи пурпурной, настойка календулы, метрогил, ротокан) и подавляют ее за счет прооксидантного действия (гипохлорит натрия)

4 Дифференцированное применение лекарственных средств дня местного лечения хронического генерализованнного пародонтита с учетом показателей хеми-люминесценции ротовой жидкости позволило повысить выработку активных форм кислорода при пониженных показателях хемилюминесценции ротовой жидкости на 60% (р< 0,01) и понижать ее при повышенных состояниях на 54% (р<0,01)

5 Применение лекарственных средств с учетом состояния генерации активных форм кислорода позволило повысить эффективность лечения, снизить частоту рецидивов на 32% и продлить ремиссию заболевания в 2,1 раза

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 С целью оценки состояния процессов свободнорадикального окисления у больных хроническим генерализованным пародонтитом рекомендуется исследовать люминолзависимую хемилюминесценцию клеток ротовой жидкости на этапе диагностики, на этапах лечения (на вторые сутки, на 5-6 сутки лечения), по окончании лечения и на этапах реабилитации

2 Эффективность лечения в динамике может контролироваться хемилю-минесцентными исследованиями ротовой жидкости, при этом критерием нормализации функциональной активности фагоцитирующих клеток, коррелирующим с клиническим выздоровлением, являются показатели светосуммы хемилюминесценции от 37 до 60 условных единиц (52,6±1,09 условных единиц)

3 Рекомендуется дифференцированный подход к применению лекарственных средств, традиционно используемых при местном лечении хронического генералзованного пародонтита, в зависимости от их анти - или проокисли-тельных свойств и состояния свободнорадикального окисления в ротовой жидкости при показателях светосуммы хемилюминесценции более 60 условных единиц в качестве местного лечения рекомендуется применение хлорофиллип-та, ротокана, настойки эхинацеи пурпурной, настойки календулы, метрогила, при показателях светосуммы свечения менее 37 условных единиц гипохлорита натрия

4 При необходимости внедрения новых лекарственных препаратов с целью изучения их влияния на процессы свободнорадикального окисления целесообразно исследовать хемилюминесцентным методом антиокислительную ак-

тивность медикаментов в модельных системах, генерирующих активные формы кислорода и процессы перекисного окисления липидов

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Шайдуллина X М Влияние лекарственных препаратов на процессы сво-боднорадикального окисления при лечении заболеваний пародонта / X М Шайдуллина, Р Р Фархутдинов, О Н Федотова // Материалы научно-практической конференции стоматологов республики Башкортостан Уфа, 1997 -С 45-46

2 Кравец О Н Оптимизация лечения хронического генерализованого па-родонтита /ОН Кравец - КГМУ Материалы 74 Студенческой научной конференции, посвященной столетию Р А Вяселева — Казань, 2000 - С 119

3 Кравец О Н Хемилюминесценция ротовой жидкости при воспалительных заболеваниях пародонта /ОН Кравец, Р Р Фархутдинов, X М Шайдуллина // Материалы национальной научно-практической конференции с международным участием «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека» -Смоленск,2001 -С 226-228

4 Кравец О Н Возможность прогнозирования изменений свободноради-кального гомеостаза при комплексном лечении больных пародонтитом / О Н Кравец, X М Шайдуллина, Р Р Фархутдинов // Здравоохранение Башкортостана, специальный выпуск -2002 -№4 - С 236-237

5 Кравец О Н Применение хемилюминесцентных методов исследования при лечении заболеваний пародонта / О Н Кравец, Р Р Фархутдинов, X М Шайдуллина // Материалы республиканской конференции стоматологов РБ «Профилактика и лечение стоматологических заболеваний у детей», «Актуальные проблемы стоматологии» - Уфа, 2006 - С 234-235

6 Фархутдинов Р Р Использование хемилюминесцентных методов в стоматологии / Р Р Фархутдинов, X М Шайдуллина, О Н Кравец // Проблемы стоматологии -2007 -№1 -С 9-13

7 Кравец ОН Активные формы кислорода в слюне / ОН Кравец, X М Шайдуллина, Л П Герасимова, А М Гадиуллин, Э К Сабирзянова и др // Казанский медицинский журнал - 2007 -Т 88 -№4 - С 87-88

8 Кравец ОН К вопросу о возможности медикаментозной коррекции процессов свободнорадикально! о окисления в комплексном лечении хронического генерализованного пародонтита / О Н Кравец // Материалы Всероссий-

ского конгресса и республиканской конференции стоматологов РБ «Внедрение новых технологий при лечении стоматологических заболеваний» - Уфа, 2007 -С 115-118

Список использованных сокращений

АФК- активные формы кислорода

ИГ - индекс гигиены

ИК - индекс кровоточивости

MC - модельная система

ПОЛ - перекисное окисление липидов

СРО - свободнорадикальное окисление

РЖ- ротовая жидкость

ХГП — хронический генерализованный пародонтит ХЛ - хемилюминесценция

I max — максимальная амплитуда медленной вспышки S - светосумма

Кравец Ольга Николаевна

ВЫЯВЛЕНИЕ И КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ В РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ГЕНЕРАЛИЗОВАННОМ ПАРОДОНТИТЕ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Издательская лицензия № 06788 от 01 11 2001 г. ООО «Издательство «Здравоохранение Башкортостана» 450000, РБ, г. Уфа, а/я 1293; тел./факс (347) 250-13-82.

Подписано в печать 21 12.2007 г Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе Усл. печ л 1,4 Уч.-изд л. 1,5 Тираж 100 Заказ № 386.

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Воспалительные заболевания пародонта являются одним из наиболее частых патологических состояний полости рта [Горбачева И.А., 2001; Иванов B.C., 1989; Петрович Ю.А., Сухова Т.А., Лемецкая Т.И., 2004]. Несмотря на достигнутые успехи в профилактике и лечении данной патологии, некоторые вопросы, в частности, касающиеся уточнения механизмов развития воспалительного процесса, остаются недостаточно изученными.

В последние годы в патогенезе воспаления повышенное внимание уделяется роли нарушения свободнорадикального окисления - генерации активных форм кислорода и перекисному окислению липидов [Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., 1989; Владимиров Ю.А., 2000; Фархутдинов P.P. и др., 2005]. АФК участвуют в аккумуляции и трансформации энергии, в процессах неспецифической резистентности и иммунорегуляции, в синтезе простагландинов, выработке интерлейкинов и других иммуномедиаторов [Matarasso S., Bozzini V., Vaia Е., 1987; Poli G., Parola M., 1997]; они выполняют также защитные функции — окисление эндо — и экзогенных чужеродных веществ, обеспечение кислородозависимой цитотоксичности [Barja, G., 1993; Roda A. et al., 2000; Zgliczynsky I. et al., 1988; Whiteacre C.A., Cathcart М.К.,1992]. В норме скорость СРО поддерживается сложным многоступенчатым механизмом регуляции [Т.В: Моругова, Д.Н. Лазарева,2000; Фархутдинов P.P. и др., 2005; Чучмай Г.С., Шириханова И.Ю., 1993; Dziak R., 1985], при срыве которого нарушение СРО становится причиной и молекулярной основой патогенеза различных заболеваний, в том числе и воспалительных [Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., 1989; Владимиров Ю.А.,1999, 2000; Маянский А.Н., Пикуза О.И., 1993; Lamster I.B., Harper D.S. et al., 1987].

Активация процессов СРО при воспалительном процессе в пародонте связана с патогенным воздействием ассоциации микроорганизмов зубной бляшки как экзогенного индуктора цепи радикального окисления и развитием гипоксии смешанного типа, усугубляющей течение воспаления [Воскресенский О.Н., Ткаченко Е.К.,1991]. Доказано, что в условиях гипоксии нарушаются все виды обменных процессов. Происходит аккумуляция продуктов перекисного окисления и свободных радикалов, которые вступают в реакции, приводящие к развитию патологических состояний [Владимиров Ю.А., 2000].

Считается, что избыток свободных радикалов вызывает поражение тканей, поддерживает воспалительный процесс, в то время как недостаток АФК, обеспечивающих микробицидную активность фагоцитов, способствует микробной инвазии [Маянский А.Н., 2005]. В связи с этим, как ускорение СРО и увеличение свободных радикалов, так и уменьшение их содержания, может играть определенную роль в' развитии и прогрессировании воспалительных процессов. Коррекция СРО- во многих случаях, помогает предотвратить прогрессировать различных, заболеваний, предупредить возможные осложнения или облегчить тяжесть их течения [Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., 1989; Владимиров Ю.А., 1999, 2000].

В то же время результаты изучения состояния СРО в тканях пародонта нередко противоречивы. В' большинстве исследований- констатируется* лишь накопление продуктов- окисления; что является предпосылкой для- назначения-антиоксидантных препаратов [Бобырев В.Н., Розколупа Н.В., Скрипникова Т.П., 1994; Нидзельский М.Я., 1989; Розколупа Н:В., Скрипникова Т.П., Бобырев В.Н., 1996]. Вместе с тем, возможность замедления процессов СРО практически не учитывается клиницистами. Объективная оценка характера и степени изменения данного процесса и его коррекция может открыть новые перспективы лечения и профилактики заболеваний пародонта.

Изучение особенностей генерации АФК фагоцитирующими клетками в очаге воспаления, подбор лекарственных препаратов, обладающих способностью влиять на скорость окисления, требуют применения адекватных методов исследования свободнорадикального окисления. Однако сложность многих способов мониторинга состояния СРО делает их малодоступными для практического здравоохранения. Среди существующих методов, позволяющих ex tempore оценить скорость генерации активных форм кислорода, перспективным является регистрация хемилюминесценции - свечения, возникающего при взаимодействии свободных радикалов [Белоцкий С.М., 1986; Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., 1989; Владимиров Ю.А.,1999, 2000, Григорьян А.С., Грудянов А.И., 2004; Журавлев А.И., 1983; Зборовская И.А., Банникова М.В., 1995; Фролова В.М. и др., 1992; Фархутдинов P.P., Тевдорадзе С.И., 2005; Kaul N., Siveski-Iliskovic N., Hill M., 1993]. Данный метод успешно применяется в медицине для изучения СРО в крови при различных заболеваниях, а также для оценки антиокислительной активности препаратов, пищевых добавок и т.д. [Фролова В.М. и др., 1992; Фархутдинов P.P., Тевдорадзе С.И., 2005].

Изучение состояния СРО в ротовой жидкости при различном характере течения воспалительного процесса, при медикаментозных и других воздействиях может дать новые возможности уточнить причины и общие закономерности развития воспалительных заболеваний пародонта, вести целенаправленный поиск эффективных способов лечения. Указанный круг проблем и стал предметом настоящей работы.

Цель исследования: повышение эффективности лечения хронического генерализованного пародонтита с учетом особенностей генерации активных форм кислорода клетками ротовой жидкости при различном характере течения воспалительного процесса и влияния проводимого лечения на состояние свободнорадикального окисления.

Задачи исследования:

1. Разработать способ оценки состояния свободнорадикального окисления в ротовой жидкости и определения антиокислительной активности надосадочной части слюны.

2. Изучить антиокислительную активность и генерацию активных форм кислорода в ротовой жидкости у лиц с интактным пародонтом и больных хроническим генерализованным пародонтитом.

3. Оценить влияние лекарственных средств, применяемых для лечения хронического генерализованного пародонтита, на процессы свободнорадикального окисления: генерацию активных форм кислорода и перекисное окисление липидов в модельных системах и в ротовой жидкости in vitro. Определить препараты, обладающие про - и антиоксидантной активностью.

4. Разработать тактику лечения больных хроническим генерализованным пародонтитом с учетом особенностей генерации активных форм кислорода в очаге воспаления в зависимости от характера течения заболевания и влияния лекарственных препаратов на процессы свободнорадикального окисления.

5. Определить эффективность предложенного подхода лечения хронического генерализованного пародонтита.

Научная новизна

Впервые разработан метод регистрации хемилюминесценции ротовой жидкости, позволяющий оценить генерацию активных форм кислорода и антиокислительную активность слюны (патент № 2140633 от 27.10. 1999 г).

Впервые изучена хемилюминесценция ротовой жидкости у лиц с интактным пародонтом и у больных воспалительными заболеваниями пародонта. Полученные результаты дали возможность уточнить механизмы развития различных форм пародонтита и состояние свободнорадикального окисления в ротовой жидкости. Впервые установлено, что у больных хроническим генерализованным пародонтитом показатели хемилюминесценции ротовой жидкости понижены, при обострении хронического генерализованного пародонтита — повышены.

Впервые дана оценка влияния ряда лекарственных средств, используемых при лечении хронического генерализованного пародонтита: ротокана, хлорофиллипта, настойки календулы, настойки эхинацеи пурпурной, метрогила, гипохлорита натрия на процессы свободнорадикального окисления in vitro. Впервые выявлены новые свойства данных препаратов, расширяющие их фармакологическую характеристику, заключающиеся в анти - или прооксидантном действии.

На основании исследования хемилюмиесценции клеток ротовой жидкости разработан способ подбора лекарственных препаратов для лечения воспалительных заболеваний пародонта с учетом состояния свободнорадикального окисления.

Практическая значимость

Внедрена в практику методика исследования хемилюминесценции ротовой жидкости, позволяющая, оценить .генерацию активных форм кислорода клетками слюны и её антиокислительную активность. Выявлены особенности; состояния свободнорадикального окисления в ротовой жидкости при различном характере течения воспалительного процесса в тканях пародонта, давшие возможность наметить патогенетически обоснованные подходы к лечению данной патологии. В частности, разработан способ подбора лекарственных средств для местного лечения хронического генерализованного пародонтита с учетом их влияния на скорость генерации активных форм кислорода фагоцитирующими клетками слюны.

Рациональный выбор используемых средств, с учетом их влияния на свободнорадикальное окисление в ротовой жидкости, снизил частоту рецидивов заболевания. Внедрение практических рекомендаций в клиническую практику позволило повысить эффективность лечебно-диагностических мероприятий.

Положения, выносимые на защиту

1. Предложенная методика исследования хемилюминесценции ротовой жидкости, позволяет оценить генерацию активных форм кислорода клетками слюны и её антиокислительную активность.

2. Интенсивность генерации активных форм кислорода клетками ротовой жидкости зависит от характера течения воспалительного процесса в тканях пародонта: при хроническом генерализованном пародонтите скорость генерации активных форм кислорода понижена, при обострении хронического генерализованного пародонтита - повышена. f 3. Лекарственные средства, применяемые для местного лечения хронического генерализованного пародонтита, оказывают как антиоксидантное свойство (ротокан, хлорофиллипт, настойка календулы, настойка эхинацеи пурпурной, метрогил), так и прооксидантное действие (гипохлорит натрия). h

4. Применение лекарственных препаратов, влияющих на генерацию активных форм кислорода клеток ротовой жидкости, позволяет повысить, эффективность лечения пародонтита, снизить частоту рецидивов заболевания.

Внедрения

Материалы исследования внедрены в работу пародонтологического кабинета Клинической стоматологической поликлиники БГМУ г. Уфы, ГУЗ Республиканской стоматологической поликлиники г. Уфы, стоматологической поликлиники № 2 г. Уфы, стоматологической поликлиники № 4 г. Уфы, » стоматологической поликлиники № 5 г. Уфы, в учебный процесс на кафедре терапевтической стоматологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», на кафедре терапевтической стоматологии ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Получен патент на изобретение «Способ оценки состояния свободнорадикального окисления ротовой жидкости при воспалительных заболеваниях пародонта» № 2140633 от 27.10. 1999 г.

Материалы диссертации вошли в информационно - методическое письмо для врачей - стоматологов «Нарушения свободнорадикального окисления в ротовой жидкости при воспалительных заболеваниях пародонта: диагностика, профилактика, возможность коррекции» (утвержденное в МЗРБ, г.Уфа, 2007г.).

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены на: 74 Студенческой научной конференции, посвященной столетию Р.А. Вяселева - Казань, 2000 год; Национальной научно-практической конференции с международным участием «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека»1 Смоленск, 2001 год; Республиканской конференции' стоматологов «Профилактика и лечение стоматологических заболеваний у детей», «Актуальные проблемы стоматологии» - Уфа, 2006 год; Всероссийском конгрессе и республиканской конференции стоматологов РБ «Внедрение новых технологий при лечении стоматологических заболеваний» - Уфа, 2007 год.

Диссертация обсуждена на совместном заседании научно-технического совета, Центральной научно-исследовательской лаборатории и кафедры терапевтической стоматологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (протокол № 10 от 29.06.2007г.).

Апробация диссертации проведена на расширенном заседании предметно — проблемной комиссии ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и ГОУ ДПО «Казанская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по специальности «Стоматология» (протокол № 7 от 12.09.2007г.).

Публикации по теме диссертации

По материалам диссертации публиковано 8 печатных работ, в том числе 1 в. центральной печати, в ведущем рецензируемом научном журнале, определенном Высшей аттестационной комиссией для публикации основных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата и доктора наук (Казанский медицинский журнал).

Структура и объем диссертации

ВЫВОДЫ

1. Разработан и апробирован способ оценки состояния свободнорадикального окисления в ротовой жидкости, основанный на регистрации хемилюминесценции, позволяющий ex tempore определить генерацию активных форм кислорода клетками ротовой жидкости и ее антиокислительную активность.

2. Высокие значения показателей хемилюминесценции клеток при хроническом генерализованном пародонтите в стадии обострения (показатели светосуммы хемилюминесценции - 75,5 ± 3,18 усл. ед.(р < 0,01)) связаны с избыточной выработкой активных форм кислорода, низкие значения показателей хемилюминесценции клеток ротовой жидкости при хроническом генерализованном пародонтите (показатели светосуммы свечения - 29;8" ± 1,12 усл. ед. (р < 0,05)) свидетельствуют о низкой* функциональной активности• фагоцитирующих клеток ротовой жидкости;

3. Лекарственные средства- используемые: для местного лечения хронического генерализованного пародонтита, подавляют выработку активных форм кислорода за счет антиоксидантного действия (хлорофиллипт, настойка эхинацеи пурпурной, настойка календулы; метрогил, ротокан) и стимулируют ее за счет прооксидантного действия (гипохлорит натрия).

4. Дифференцированное применение лекарственных средств для-местного лечения хронического генерализованного пародонтита с учетомщоказателей. хемилюминесцении ротовой жидкости позволило повысить выработку активных форм кислорода при пониженных показателях хемилюминесценции ротовой жидкости на 60 % (р< 0,01) и понижать ее при повышенных состояниях на 54 % (р< 0,01).

5. Применение лекарственных средств с учетом состояния генерации АФК позволило повысить эффективность лечения, снизить частоту рецидивов на 32 % и продлить ремиссию заболевания в 2,1 раза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью оценки состояния процессов свободнорадикального окисления у больных хроническим генерализованным пародонтитом рекомендуется исследовать люминолзависимую хемилюминесценцию клеток ротовой жидкости на этапе диагностики, на этапах лечения (на вторые сутки, на 5-6 сутки лечения), по окончании лечения и на этапах реабилитации.

2. Эффективность лечения в динамике может контролироваться хемилюминесцентными исследованиями ротовой жидкости, при этом критерием нормализации функциональной активности фагоцитирующих клеток, коррелирующим с клиническим выздоровлением, являются показатели светосуммы хемилюминесценции' от 37 до 60 условных единиц (52,6 ± 1,09 условных единиц).

3. Рекомендуется дифференцированный подход к применению лекарственных средств; традиционно используемых при местном лечении хронического генерализованного пародонтита, в зависимости от их анти -или проокислительных свойств и состояния свободнорадикального окисления в ротовой жидкости: при показателях светосуммы хемилюминесценции- более 60 условных единиц в. качестве местного-лечения рекомендуется применение хлорофиллипта, ротокана, метрогила, настойки эхинацеи пурпурной, настойки календулы; при показателях светосуммы свечения менее 37 условных единиц гипохлорита натрия.

4. При необходимости внедрения новых лекарственных препаратов с целью изучения их влияния на процессы свободнорадикального окисления целесообразно исследовать хемилюминесцентным методом антиокислительную активность медикаментов в модельных системах, генерирующих активные формы кислорода и процессы перекисного окисления липидов.