Автореферат и диссертация по медицине (14.00.21) на тему:Влияние зубных паст лечебно-профилактического назначения на процессы свободно-радикального окисления в полости рта

На правах рукописи

ГАДИУЛЛИН АЛЬБЕРТ МАНСУРОВИЧ

ВЛИЯНИЕ ЗУБНЫХ ПАСТ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ НА ПРОЦЕССЫ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ В РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ (клинико-экспериментальное исследование)

14.00.21 - стоматология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

- 3 ДЕК 2009

Пермь-2009

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Герасимова Лариса Павловна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Леонова Людмила Евгеньевна

ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия им. академика Е.А. Вагнера Росздрава»,

доктор медицинских наук Булгакова Альбина Ирековна

ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет».

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия Росздрава», (г. Екатеринбург).

Защита диссертации состоится ^И^^^/^ЗООЭ года в /о часов

на заседании диссертационного совета Д 208.067.01 при ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия им. академика. Е.А. Вагнера Росздрава» по адресу: г. Пермь, ул. Петропавловская, 26.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия им. академика Е.А. Вагнера Росздрава» по адресу: г. Пермь, ул. Коммунистическая, д. 26 и с авторефератом на сайте www.psma.ru

:« №

Автореферат разослан « »А-ЯХ 2009 года

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук,

профессор Мудрова Ольга Александровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Воспалительные заболевания пародонта (ВЗП) представляют серьезную общемедицинскую и социальную проблему (Ар-тющкевич A.B., 2006; Арутюнов С.Д., 2006; Боровский Е.В., 2007; Вольф Г.В. и др., 2008; Данилевский Н.Ф. и др., 2001; Дзех С.А., 2008; Дмитриева JI.A., 2007; Курякина Н.В. и др., 2000; Муравянникова Ж.Г., 2007; Мюллер Х.П., 2004; Пожарицкая М.М., 2003; Цепов Л.М., 2006; Mandel Y.D. et al., 2003). Они встречаются даже у молодых лиц и среди социально благополучной категории населения. Распространенность этой патологи остается на высоком уровне, не имеет тенденции к снижению. Факторы, обуславливающие столь широкое распространение ВЗП — агрессивная экологическая обстановка, систематический стресс, несбалансированное питание, генетический статус, нарушения обменных процессов, снижение иммунитета и др. (Булгакова А.И., 2001; Леонова Л.Е., 1999; Гречишников В.В., 2005; Григорьян A.C., и др.2004; Иванов B.C., 2001; Михалева Л.М. и др. 2004; Орехова Л.Ю. 2004; Перова М.Д. 2005; Почтаренко В.А. и др., 2005; Сивовол С.М., 2006; Чурилов Л.П., 2006; Chappie I.L., 2006; Starka М., 2000). В этих условиях, пародонт утрачивает свою защитную способность, что ведет к его поражению. С другой стороны, очаги инфекции в паро-донтальных карманах отрицательно влияют на организм в целом. Клиническая картина воспаления пародонта на ранних стадиях заболевания характеризуется маломанифестным и латентным течением, что затрудняет своевременную диагностику и отдаляет начало адекватных лечебных и реабилитационных мероприятий, ведет к потере зубов.

В последние годы в патогенезе воспалительных заболеваний пародонта повышенное внимание уделяется нарушению свободнорадикального окисления (СРО) - генерации активных форм кислорода (АФК) и перекисному окислению липидов (ПОЛ) (Грудянов А.И. и др., 2002; Кравец О.Н. и др., 2002; Петрович Ю.А. и др., 2000-2001; Пожарицкая М.М. и др., 2005; Терехина H.A. и др., 2005; Brrock G.R. et al., 2004; Panjamurthy К et al., 2005; Tsai C.C. et al., 2005; Waddigton R.J. et al., 2000).

В литературе имеются данные о применении антиоксидантов в стоматологии (Гаржа A.B. и др., 2006; Грудянов А.И. и др., 2005; Дмитриева Л.А. и др., 2004; Лемецкая Т.И. и др., 2000; Петрович Ю.А. и др., 2004-2005; Сороко-викМ.Н., 2005; Houde V. Et al., 2006). Клинические наблюдения свидетельствуют об их противовоспалительном действии. Однако бесконтрольное использо-

вание лекарственных веществ с антиоксидантным действием может вызвать нежелательные осложнения, в частности, подавить микробицидную активность клеток слюны. Кроме того, анатомические и физиологические особенности полости рта способствуют быстрому снижению концентрации лекарственных препаратов в очаге повреждения. В этом плане перспективным представляется регулярное применение зубных паст, которые могут оказать корригирующее влияние на состояние свободнорадикального окисления в ротовой полости.

В этой связи проблемы уточнения этиопатогенеза пародонтита, совершенствование методов раннего выявления и выбор эффективных лечебно-профилактических мероприятий по-прежнему сохраняют актуальность, научно-практическую и социально-экономическую значимость. Разработка и внедрение доступных для практического здравоохранения методов объективной оценки состояния свободнорадикального окисления в полости рта, индивидуальный подбор зубных паст с учетом их влияния на этот процесс открывает новые перспективы профилактики стоматологических заболеваний. Это позволит не только рационально выбирать средства гигиены полости рта, но и целенаправленно создавать пасты с определенными свойствами, сократить сроки проведения клинических испытаний.

Цель исследования: коррекция свободнорадикального окисления в ротовой жидкости зубными пастами лечебно-профилактического назначения.

Задачи исследования:

1. Разработать методику исследования свободнорадикального окисления в ротовой жидкости, изучить состояние данного процесса в норме и при хроническом генерализованном катаральном гингивите.

2. Разработать способы экспресс оценки влияния зубных паст лечебно-профилактического назначения на свободнорадикальное окисление в модельных системах и в ротовой жидкости, дать характеристику их свойств.

3. Разработать способ индивидуального подбора зубных паст, учитывающий их влияние на свободнорадикальное окисление и состояние данного процесса в ротовой жидкости.

4. Изучить состояние свободнорадикального окисления в ротовой жидкости после однократной и регулярной гигиенической процедуры с применением различных зубных паст при хроническом генерализованном катаральном гингивите.

5. Дать оценку эффективности разработанных мер профилактики и коррекции свободнорадикального окисления в ротовой жидкости зубными пастами лечебно-профилактического назначения.

Научная новизна работы. Впервые изучено влияние зубных паст лечебно-профилактического назначения на процессы СРО в модельных системах, генерирующих радикалы активных форм кислорода, в которых протекают реакции перекисного окисления липидов. (Способ экспресс оценки действия зубных паст. Патент на изобретение № 2328740). Дана сравнительная оценка их антиокислительной активности.

Исследовано влияние зубных паст на процессы свободнорадикального окисления в ротовой жидкости. Выделены зубные пасты, обладающие повышенной антиокислительной активностью, не влияющие на процессы свободно-радикального окисления и стимулирующие образование активных форм кислорода в ротовой жидкости.

Впервые изучено состояние свободнорадикального окисления в ротовой жидкости в норме и при хроническом генерализованном катаральном гингивите до и после применения зубных паст. Использование зубных паст лечебно-профилактического назначения с учетом их влияния на процессы свободнорадикального окисления и состояния данного процесса в ротовой жидкости позволяет нормализовать содержание свободных радикалов в ротовой жидкости, что повышает эффективность лечебно-профилактических мероприятий (Способ выбора лечебно-профилактической пасты Патент на изобретение № 2339941).

Практическая значимость исследования. Разработаны экспресс методы, основанные на измерении XJI, позволяющие подбирать зубные пасты с учетом их влияния на СРО и индивидуальных особенностей состояния данного процесса в смешанной слюне (ротовой жидкости) пациента. Они включают способы оценки антиокислительной активности зубных паст лечебно-профилактического назначения и методы индивидуального подбора средств гигиены полости рта, защищенные патентами. Внедрение этих методов в стоматологическую практику позволило повысить эффективность лечебно-профилактического использования зубных паст.

Положения, выносимые на защиту:

1. Разработана методика определения влияния зубных паст лечебно-профилактического назначения на процессы СРО в ротовой жидкости in vitro и in vivo. Дана сравнительная оценка их свойств.

2. Разработана методика индивидуального подбора зубных паст лечебно-профилактического назначения с учетом их влияния на СРО и особенностей состояния данного процесса в ротовой жидкости.

3. Уточнение особенностей состояния СРО в ротовой жидкости и подбор зубных паст с учетом их влияния на СРО повышает эффективность лечебно-профилактических мероприятий при воспалительных заболеваниях пародонта.

Личный вклад автора в проведенное исследование. Автору принадлежит идея оценки влияния зубных паст лечебно-профилактического назначения на процессы СРО в ротовой жидкости in vitro и in vivo. Им разработаны и внедрены в практику экспресс-методы индивидуального подбора зубных паст с учетом их влияния на состояние СРО в полости рта. Автором лично осуществлялось ведение пациентов, исследование зубных паст in vitro и in vivo, статистическая обработка и анализ полученных данных.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на: Всероссийском симпозиуме «Новые технологии в стоматологии» Уфа, 2003; Республиканской конференции стоматологов «Профилактика и лечение стоматологических заболеваний у детей» Уфа, 2006; Всероссийском конгрессе и Республиканской конференции стоматологов РБ «Внедрение новых технологий при лечении стоматологических заболеваний» Уфа, 2007, Всероссийской научно-практической конференции «Профилактика стоматологических заболеваний и их осложнений» Уфа, 2008; Научно-техническом Совете БГМУ, 2008.

Внедрение. Разработанные способы индивидуального подбора зубных паст лечебно-профилактического назначения с учетом их влияния на свободноради-кальное окисление и особенностей состояния данного процесса в ротовой жидкости, защищенные патентами внедрены в практическую работу терапевтического отделения ГУЗ «Республиканская стоматологическая поликлиника» г. Уфы, терапевтического отделения Городской стоматологической поликлиники № 4 г. Уфы, Стоматологической клинике «Дентал студия» - ООО «Дина медсервис».

Обоснованные в ходе исследования теоретические положения и методологические подходы внедрены в учебный процесс на кафедре терапевтической стоматологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Публикации по теме диссертации. По теме диссертации опубликовано 8 работ, 1 из них в научном журнале РФ, рекомендованном ВАК, получены 2 патента ФИПС.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 137 страницах, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Диссертация иллюстрирована 21 таблицами, 13 рисунками. В библиографический указатель включено 212 источников, из которых 154 отечественных и 58 зарубежных авторов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы. В таблице 1 представлены основные этапы работы. Проведен комплекс клинико-лабораторных исследований, направленных на оценку состояния тканей пародонта.

Таблица 1

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОВЕДЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Этапы и задачи исследования Объект и методы исследования Основные результаты

I. Клинические исследования. Клинико-лабораторные методы, гигиенические индексы полости рта, исследования ротовой жидкости (лизоцим, иммуноглобулины, цитология, фагоцитоз, HCT и т. д.). Выделено 48 здоровых лиц с ин-тактным пародонтом (контрольная группа) и 74 пациента с хроническим катаральным гингивитом (основная группа).

2. Оптимизация метода регистрации XJI ротовой жидкости. Регистрация люминол зависимой ХЛ ротовой жидкости в норме и при хроническом катаральном гингивите. Разработаны нормативные показатели ХЛ ротовой жидкости. Основная группа пациентов разделена на лиц с повышенной (33) и пониженной (41) ХЛ ротовой жидкости.

3. Исследование влияния зубных паст на процессы СРО в модельных системах. Использовано 20 зубных паст лечебно-профилактического назначения. Применялись модели, в которых вызывалось образование АФК и протекали реакции ПОЛ. Разработана методика оценки влияния зубных паст на процессы СЮ. Выделены пасты, подавляющие генерацию АФК и реакции ПОЛ, стимулирующие образование АФК и не влияющие на процессы СРО.

4. Исследование влияния зубных паст на процессы СРО в ротовой жидкости in vitro. 48 здоровых лиц и 74 пациента с хроническим катаральным гингивитом. Регистрировалась ХЛ ротовой жидкости до и после добавления в неё различных зубных паст. Использовано 20 зубных паст. Разработана методика индивидуального подбора зубных паст. Выделены пасты, не влияющие на процессы СРО в ротовой жидкости, подавляющие генерацию АФК и реакции ПОЛ, стимулирующие образование АФК.

5. Оценка атияния зубных паст на процессы СЮ в ротовой жидкости in vivo при однократном и регулярном их применении. Использовались клинико-лабораторные методы, гигиенические индексы полости рта, исследования ротовой жидкости. Применялись 5 зубных паст в динамике наблюдения. Доказана возможность и эффективность коррекции СРО в ротовой жидкости зубными пастами. Разработан алгоритм исследования влияния зубных паст на процессы СРО.

Клинические исследования выполнены на базе кафедры терапевтической стоматологии Башкирского государственного медицинского университета (зав. каф. д.м.н., проф. Л.П. Герасимова).

Всего в исследование путем целенаправленной выборки было включено 48 соматически здоровых лиц (20 мужчин и 28 женщин) в возрасте от 18 до 24 лет (контрольная группа), не имевших общесоматических заболеваний, не предъяв-

лявших жалоб на состояние тканей пародонта, регулярно проходящих профилактические осмотры.

Основную группу составили 74 пациента (40 мужчин и 34 женщины) того же возраста с хроническим генерализованным катаральным гингивитом.

Обследование полости рта у данных пациентов проводили на основе рекомендаций ВОЗ (1995). Для объективной оценки пародонтологического статуса использовали индексы: гигиенический индекс ИГР-У по Грин-Вермилиьону (1969), пародонтальный индекс (Rüssel А., 1956), индекс кровоточивости (Muhlemann H. R., Cowell I., 1975), папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс PMA (Parma С., 1960), индекс гингивита Gl (Loe H., Silness J., 1963).

Лабораторные исследования проводились на базе Центральной научно-исследовательской лаборатории БГМУ (зав. отделом биофизики, д.м.н., проф. P.P. Фархутдинов).

Для оценки естественной резистентности и специфической иммунной защиты полости рта проводили определение уровня лизоцима (по методу О.В. Бухарина, 1975) и иммуноглобулинов класса A, G и секреторного иммуноглобулина класса А (иммуноферментным методом с помощью наборов «SIgA-ИФА-БЕСТ-стрип», и «IgG-ИФА-БЕСТ-стрип» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск).

Цитологическое исследование ротовой жидкости и оценку активности фагоцитов проводили общепринятыми методами, а также определяли окислительно-восстановительный потенциал нейтрофилов с помощью теста восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-теста).

Общеклиническое исследование крови проводили по общепринятым методикам. Иммунологическое исследование крови включало оценку состояния Т-клеточного, B-гуморального звеньев иммунитета, фагоцитарной активности лейкоцитов.

Хемилюминесценцию модельных систем и ротовой жидкости in vitro и in vivo измеряли на приборе ХЛ-003. В качестве наиболее информативного показателя ХЛ была взята светосумма излучения - S и ее максимальное значение -I max за время исследования (Фархутдинов P.P. и др., 2005). Весь процесс измерения ХЛ и обработка результатов проводились в автоматическом режиме, что повышает точность и объективность получаемой информации.

При выборе зубных паст руководствовались классификацией, предложенной С.Б. Улитовским (2001). Исследовали гигиенические пасты (Мятная), лечебно-профилактические зубные пасты, в состав которых входят компоненты,

направленные на лечение и профилактику одного вида патологии: против воспаления (Лесная); против воспаления с выраженной антиоксидантной активностью (Mexidol dent); против кариеса и для отбеливания (Aquafresh white and shine). Кроме того, изучали комплексные лечебно-профилактические зубные пасты, действующие на разные патологические процессы: против кариеса, налета и микробов (Blend-a-med complete экстра свежесть, Biend-a-med complete night, President classic, Silica good morning, Новый жемчуг); против воспаления, микробов, налета и кариеса (Colgate total propolis, Lacalut fluor, Parodontax, Кедровый бальзам, 32 комплекс); против воспаления и микробов (Blend-a-med blendax пчелиный бальзам, ROCS); против воспаления, зубного налета, для укрепления десен (El-ce med); против кариеса, для реминерализация зубной эмали (Blend-a-med pro mineral action, Silica complete Vitamin); против кариеса и снижения гиперчувствительности зубов (Sensodyne fluoride).

Полученные данные обработаны статистически с помощью пакета компьютерных программ: «Statistica for Windows (release 5.0)». На основании величины t-критерия Стьюдента и степени свободы п по таблице распределения t находили вероятность различия р. Достоверными считали данные, для которых вероятность ошибки (р) была меньше 0,05 (р<0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При комплексном стоматологическом обследовании у всех пациентов контрольной и основной групп кожные покровы были физиологической окраски, пальпация точек Вале безболезненна, регионарные лимфатические узлы не пальпируются, безболезненны.

В контрольной группе движения в височно-нижнечелюстном суставе в полном объеме, безболезненны у 68,8%, симптом дисфункции ВНЧС выявлен у 31,2% (жалобы на хруст и щелканье в суставе, зигзагообразное открывание рта), А в основной группе соответственно 89,2 и 10,8%.

У 49,0% обследованных лиц контрольной группы и у 61,4% диагностирован метеорологический хейлит. Слизистая оболочка преддверия полости рта без патологических изменений во всех группах обследованных. В контрольной группе глубина преддверия полости рта в пределах нормы, без патологии прикрепления уздечек верхней и нижней губы. В основной группе средняя глубина преддверия была у 86,4%, глубокое преддверие у 5,5%, у 8,1% - мелкое преддверие полости рта. У 33,8% пациентов диагностировано низкое прикрепление уздечки верхней и 21,2%-высокое прикрепление уздечки нижней губы.

В контрольной группе при осмотре слизистой оболочки собственно полости рта патологических изменений не обнаружено. У пациентов основной группы на слизистой оболочке щёк по линии смыкания зубов у 35,3% обследованных выявлены тяжи без признаков гиперкератоза. При объективном обследовании слизистой оболочки языка у 75,0% пациентов сосочки языка были умеренно выражены, у 12,8% диагностировано десквамативный глоссит, у 13,9% отпечатки зубов по боковой поверхности языка.

Индекс КПУ оказался во всех группах в пределах средней интенсивности кариозного процесса. Величины этого индекса составили 7,6±0,811 для пациентов с интактным пародонтом. Компонент «К» составил 2,5+0,5, «П» - 5,3±1,2, «У» -0. У пациентов с хроническим генерализованным катаральным гингивитом КПУ - 9,66±0,619. Компонент «К» составил 3,5±0,5, «П» - 4,3±0,2, «У» - 1,4±0,1. Некариозные поражения твёрдых тканей зубов в виде системной гипоплазии диагностировано у 45,6% обследованных лиц в контрольной и основной группах.

Величины индекса гингивита по Н. Loe составила у больных с ХГКГ (основная группа) в среднем 0,93±0,02, а у пациентов с интактным пародонтом (контрольная группа) - 0. Отличия в величине этого индекса при сравнении между основной группой и контрольной оказались достоверными р < 0,05. По данным индекса ИГР-У гигиена полости рта у пациентов в основной группе оценена как удовлетворительная. Величины этого индекса для пациентов с ХГКГ соста-. вили 2,1±0,3, а у пациентов с интактным пародонтом 0,91±0,01. Отличия в величине этого индекса при сравнении между указанными группами также оказывались достоверными р < 0,05.

У значительной части обследованных пациентов исходный гигиенический уход за полостью рта был недостаточным, что подтверждается значениями индекса гигиены и индекса кровоточивости.

Индекс РМА оказался средним у пациентов с ХГКГ. Величины этого индекса составили для пациентов с ХГКГ - 46,2±3,2%. У пациентов с интактным пародонтом он был равен - 0. Отличие явилось достоверным р < 0,05.

Средние значения индекса кровоточивости (Muhlemann H. R.) составили для пациентов с интактным пародонтом - 0,11±0,03, у пациентов с ХГКГ -0,95±0,07. Отличия в величине этого индекса при сравнении между основной и контрольной группами оказались достоверными р < 0,05.

Анализ результатов комплексного стоматологического обследования показал, что 100% пациентов основной группы нуждались в лечении воспалительных заболеваний пародонта, обучении правилам гигиены и проведении профессиональной гигиены полости рта.

У пациентов с ХГКГ в смешанной слюне (ротовой жидкости) увеличивалось содержание иммуноглобулинов Айв, снижался уровень секреторного иммуноглобулина Цитологическое исследование ротовой жидкости у пациентов с хроническим катаральным гингивитом показало увеличение в ее составе числа нейтрофилов, эпителиальных клеток, лимфоцитов, появление макрофагов и гистиоцитов. Наблюдалась тенденция к увеличению спонтанного НСТ-теста, снижению индуцированного и повышение фагоцитарного индекса. Основные показатели периферической крови пациентов с хроническим генерализованным катаральным гингивитом находились в пределах нормы (табл. 2).

Таблица 2

НАИБОЛЕЕ ЗНАЧИМЫЕ КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ

ОБСЛЕДОВАННЫХ ЛИЦ

Показатели Контроль п=48 Гингивит п=74

Стоматологический статус

ИГ - индекс гингивита 0 0,93±0,02*

ИГР-У - упрощенный индекс гигиены полости рта РМА - папиллярно-маргинально-альвеолярньш индекс Индекс кровоточивости 0,91 ±0,01 2,1±0,3*

0 46,2±3,2*

0,11±0,03 0,95±0,07*

Ротовая жидкость

Иммуноглобулины (г/л) 1§А 0,18±0,06 0,26±0,01*

^ 0,11 ±0,02 0,3±0,02*

Б^А 0,56±0,04 0,21 ±0,03*

Лизоцим (мкг/мл) 0,31±0,09 1,1 ±0,05*

Клеточный состав

нейтрофилы 53,3±4,8 61,1±1,4*

лимфоциты 0,9±0,01 1,5±0,02*

макрофаги - 1,1±0,03*

гистиоциты - 2,2±0,01*

НСТ (% активации) спонтанный 28,7±1,5 36,4±0,9*

индуцированный 39,4±2,2 38,5±1,8*

Фагоцитарный индекс 54,5±3,8 62,8±1,3*

* - Отличие достоверно р<0,05.

На рис. 1 приведены типичные записи хемшноминесценции ротовой жидкости в норме и при хроническом катаральном гингивите (кривая 1 - запись ХЛ в норме, 2 и 3 при хроническом катаральном гингивите).

При исследовании ХЛ ротовой жидкости, величина спонтанного свечения слюны здоровых людей колебалась от 0,7 до 3,9 усл. ед., в среднем составляла 1,9±0,07 усл. ед., светосумма свечения Б от 5,8 до 12,9 усл. единиц, в среднем 7,8±0,3 усл. ед, максимальная интенсивность свечения I шах от 2,6 до 5,4 усл. ед.

в среднем 3,1±0,2. Эти значения в дальнейших исследованиях послужили в качестве контроля. У 33 пациентов выявлено повышение, у 41 - наблюдалось снижение интенсивности хемилюминесценции ротовой жидкости. Подобное изменение хемилюминесценции ранее наблюдалось в крови. Оно оказалось характерным для начальных форм воспалительного процесса при различных заболеваниях. Даже при отсутствии выраженной клинической картины в начальных стадиях воспаления усиливается генерация активных форм кислорода, повышается интенсивность хемилюминесценции. Недостаточная фагоцитарная активность сопровождается угнетением хемилюминесценции.

з:: |>ч

£5-60 22.40 13.30 1В.00

12. аа

3.60

1.4«

Рис. 1. Запись хемилюминесценции ротовой жидкости в норме (кривая 2) и при хроническом генерализованном катаральном гингивите (кривая 1 и 3)

Исследования хемилюминесценции ротовой жидкости позволили разделить основную группу пациентов на 2 подгруппы: с высокими (I А) и низкими (I Б) показателями хемилюминесценции по сравнению с контрольной группой. Более подробное исследование этих групп позволило выявить разницу и в кли-нико-лабораторных показателях (табл. 3).

У пациентов первой группы по сравнению со второй статистически выше были показатели индекса гингивита, упрощенного индекса гигиены и ниже показатели индекса кровоточивости. Со слов больных длительность заболевания до обращения за стоматологической помощью в подгруппе IА по сравнению с подгруппой I Б была ниже. В клеточном составе ротовой жидкости при высоких показателях хемилюминесценции обращает на себя внимание преобладание нейтрофилов, в то время как у больных IБ подгруппы их количество было снижено.

Спонтанный и индуцированный НСТ-тест, фагоцитарный индекс были высокими при повышенных значениях хемилюминесценции ротовой жидкости и пониженными при низких значениях. Такой параллелизм объясняется тем, что все эти показатели с разных сторон характеризуют уровень генерации активных форм кислорода в ротовой жидкости фагоцитирующими клетками.

Таблица 3

НАИБОЛЕЕ ЗНАЧИМЫЕ КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ У ПАЦИЕНТОВ КОНТРОЛЬНОЙ ГРУППЫ И ГРУППЫ I А ИI Б

Показатели Интактный пародонт (п=48) Хронический катаральный гингивит

повышенная ХЛ (I А, п=33) пониженная ХЛ аБ,п=41)

ХЛ ротовой жидкости 7,8±0,3 36,3±5,4* 2,1±0,4***

Стоматологический статус

ИГ - индекс гингивита ИГР-У - упрощенный индекс гигиены РМА - папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс Индекс кровоточивости 0 0,96±0,02* 0,81±0,03***

0,91±0,01 2,3±0,03* 1,8±0,02***

0 29,1±2Д* 27,2±0,7*

0,11±0,03 0,81±0,02* 1,2±0,02***

Ротовая жидкость

Иммуноглобулины (г/л) 1§А ДО 81яА 0,18±0,0б 0,24±0,01* 0,15±0,01 ***

0,11 ±0,02 0,3±0,03* 0,3±0,04*

0,5б±0,04 0,53±0,05* 0,19±0,01***

Лизоцим (мкг/мл) 0,31 ±0,09 1,01±0,5* 1,12±0,8*

Клеточный состав нейтрофилы лимфоциты макрофаги гистиоциты 53,3±4,8 61,3±3,8* 41,5±2,9***

0,9±0,01 1,4±0,02* 1,6±0,02*

- 1,4±0,03* 0,9±0,01***

- . 2,б±0,01* 1,2±0,31***

НСТ (% активации) спонтанный индуцированный 28,7±1,5 36,9±2,4* 19,8±1,3***

39,4±2,2 42,7±3,7* 2б,9±1,8***

Фагоцитарный индекс 54,5±3,8 79,8±4,9* 36,1±2,7***

Отличие достоверно с контролем р<0,05 помечено*. Отличие достоверное в подгруппах р<0,05 помечено**.

В целом было отмечено, что при повышенной интенсивности хемилюми-несценции клиническая картина воспаления соответствовала обострению процесса, в то время как низкие показатели хемшпоминесценции ротовой жидкости были характерны для длительного, вяло текущего гингивита.

На следующем этапе исследований изучалось влияние зубных паст лечебно-профилактического назначения на процессы свободнорадикального окисления в модельных системах. В таблице 4 приведены средние значения изменения показателей ХЛ модельных систем при добавлении к ним антиоксиданта мексидо-ла и зубных паст лечебно-профилактического назначения.

Таблица 4

ВЛИЯНИЕ ЗУБНЫХ ПАСТ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ НА ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИЮ МОДЕЛЬНЫХ СИСТЕМ (усл. ед.)_

Название Доза мг/мл Модель АФК Модель ПОЛ

S 1 max S Imax

Контроль - 28,5±1,2 10,3±0,04 54,5±9,6 27,9±2,4

Aqua fresh white and shine 0,1 26,3 ±2,4 9,8±0,4 48,5±8,1 24,1±3,6

0,01 28,7±1,3 10,2±0,1 51,3±4,8 26,7±4,9

Blend-a-med pro mineral action 0,1 22,4±1,9* 9,6±0,1* 40,2±5,7* 22,3±1,9*

0,01 27,9±2,1 10,4±0,5 56,8±3,5 26,4±0,1

Blend-a-med complete экстра свежесть 0,1 20,7±3,3* 8,8±0,7* 38,9±4,4* 21,4±1,7*

0,01 26,9±2,8 10,9±0,3 53,8±3,9 27,1±2,9

Blend-a-med complete night од 21,1±1,9* 8,6±0,2* 40,9±4,3* 20,9±3,2*

0,01 27,9±2,1 9,9±0,1 51,6±5,3 26,1±4,7

Blend-a-med blendax пчелиный бальзам 0,1 18,9±1,6* 8,1±0,1* 30,5±5,1* 16,6±0,9*

0,01 24,4±1,1* 9,0±0,03* 38,1±4,6* 20,2±2,5*

Colgate total propolis 0,1 18,4±0,7* 8,2 ±0,5* 29,2±3,4* 13,4±3,4*

0,01 21,9±1,5* 9,1±0,3* 34,9±4,8* 19,1±2,8*

El-ce med 0,1 24,1 ±2,4* 9,6±0,2* 36,1±3,2* 20,8±2,2*

0,01 29,4±2,6 10,1±0,4 44,5±6,1 23,7±2,3

Lacalut fluor 0,1 32,2±1,3* 11,5±0,4* 43,4±9,3 22,9±3,6

0,01 29,9±1,8 10,8±0,6 49,9±4,8 25,4±4,7

Mexidol dent 0,1 9,6±1,1* 3,8±0,09* 19,4±5,1* 10,6±1,9*

0,01 13,4±1,5* 6,4±0,08* 26,6±4,2* 16,9±1,7*

Parodontax 0,1 58,2±4,6* 26,4±2,5* 39,1±3,7* 20,2±3,8*

0,01 46,б±1,6* 20,8±1,8* 48,9±6,7 24,3±1,6

President classic 0,1 22,2±2,6* 8,4±0,9* 37,1±6,9* 21,8±5,3*

0,01 26,4±2,8 10,6±0,2 49,9±4,8 26,1 ±3,7

ROCS 0,1 42,6±3,4* 19,9±1,2* 42,5±7,2 21,6±4,2

0,01 38,9±1,2* 15,1±0,7* 48,7±5,6 24,5±3,7

Sesodyne fluoride 0,1 16,5±0,9* 8,1±0,6* 37,2±4,8* 19,5±3,1*

0,01 19,3±1,2* 14,4±0,7* 44,1±1,7* 21,2±2,3*

Silica complete Vitamin 0,1 12,9±0,8* 5,9±0,2* 32,2±б,1* 17,4±1,9*

0,01 20,4±0,7* 8,4±0,3* 40,1±7,2* 20,2±3,8*

Silica good morning 0,1 24,8±1,3 9,6±0,2 4б,5±8,8 24,4±3,2

0,01 27,5±1,8 10,9±0,3 50,1±4,6 2б,8±4,5

Кедровый бальзам 0,1 46,6±1,9* 18,1±0,2* 36,3±7,1* 16,5±1,9*

0,01 33,5±1,6* 13,5±0,4* 42,9±4,4* 20,6±2,1*

Новый жемчуг 0,1 22,9±1,3* 9,1±0,6* 30,3±6,2* 15,6±9,4*

0,01 30,1±2,5 11,8±0,5 41,1±1,7* 20,2±3,6*

Лесная 0,1 42,4±1,1* 13,9±0,1* 32,6±3,3* 19,5±4,2*

0,01 31,9±2,4* 12,8±0,07* 44,1±2,6* 22,1±1,3*

Мятная 0,1 28,6±1,4 10,9±0,9 50,9±б,9 26,6±5,8

0,01 29,4±2,1 11,5±0,6 52,7±4,8 28,4±3,2

32 комплекс 0,1 18,4±1,1* 6,1 ±0,5* 29,2±4,1* 16,8±3,9*

0,01 21,1±2,4* 7,9±0,3* 32,2±б,6* 18,7±4,2*

Примечание: приведены средние значения 10 измерений. * - разница с контролем (р< 0,05).

Такие зубные пасты как Mexidol dent, Blend-a-med blendax пчелиный бальзам, Silica complete Vitamin, Colgate total propolis, 32 комплекс существенно подавляли XJl модельной системы, генерирующей АФК и в которой протекали реакции ПОЛ. Lacalut fluor, Parodontax, ROCS, Кедровый бальзам - стимулировали образование АФК, но в то же время подавляли реакции ПОЛ. Среди исследованных зубных паст ни одна из них не вызывала ускорение ПОЛ. Практически не влияли на процессы свободнорадикального окисления при добавлении в модельные системы Aqua fresh white and shine, Silica good morning, Мятная.

Проведенные исследования показывают, что зубные пасты лечебно-профилактического назначения могут влиять на радикалы АФК и ПОЛ в модельных системах. Следует признать, что действие различных веществ на процессы СРО в организме много сложнее, чем в простых модельных системах. Однако препараты локального применения, к которым можно отнести зубные пасты действуют непосредственно в очаге и, поэтому использование модельных систем, имитирующих наиболее распространенные процессы СРО можно считать приемлемым для изучения их про- и антиоксидантных свойств.

В следующей серии экспериментов, исследуемые зубные пасты лечебно-профилактического назначения добавлялись in vitro к ротовой жидкости здоровых лиц и пациентов с ХГКГ. Они оказывали различное влияние на генерацию свободных радикалов в ротовой жидкости (табл. 5).

Добавление к ротовой жидкости АО мексидола вызывало снижение ХЛ независимо от того, были клетки слюны интактные или спровоцированные воспалительным процессом. Мексидол проникает вовнутрь фагоцитов и там взаимодействует с радикалами кислорода. Интенсивность ХЛ слюны снижалась при добавлении к ней зубных паст Mexidol dent, Blend-a-med blendax пчелиный бальзам, Colgate total propolis, Sensodynt fluoride, Silica complete Vitamin, 32 комплекс. В большей степени это происходило при высоком уровне ХЛ слюны у пациентов с хроническим катаральным гингивитом. Наоборот, такие пасты как Lacalut fluor, Parodontax, Кедровый бальзам стимулировали генерацию АФК в клетках слюны, особенно, при изначальном снижении данного процесса у пациентов. Результаты исследования влияния зубных паст лечебно-профилактического назначения на процессы СРО в модельных системах и в ротовой жидкости in vitro в целом оказались однонаправленными, что является дополнительным подтверждением перспективности использования модельных систем и метода регистрации хемилюминесценции для прогнозирования влияния зубных паст на свободнорадикальное окисление.

Также проведено изучение влияния зубных паст на процессы СРО в ротовой жидкости после гигиенической процедуры. Мексидол и зубные пасты, обладающие антиоксидантным действием (Mexidol dent, Blend-a-med blendax пчелиный бальзам, Colgate total propolis, Silica complete Vitamin, Sensodynt fluoride, 32 комплекс) - снижали интенсивность хемилюминесценции ротовой жидкости (рис. 2).

Таблица 5

ВЛИЯНИЕ АНТИОКСИДАНТА МЕКСИДОЛА И ЗУБНЫХ ПАСТ НА ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИЮ РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ (усл. ед.) В ЭКСПЕРИМЕНТАХ IN VITRO

Объект исследования Хемилюминесценция ротовой жидкости

интактный пародонт (п=48) хронический катаральный гингивит

повышенные значения ХЛ (п=33) сниженные значения ХЛ (п=41)

S Imax S Imax S Imax

Исходный уровень ХЛ слюны 7,8±0,3 3,1±0,2 36,3±5,4 15,8±2,1 2,1 ±0,4 0,9±0,0б

После добавления препаратов (0,01мг на мл слюны)

Мексидол 1,3±0,09* 0,6±0,0Г 5,4±0,8* 1,6±0,04* 1,1±0,03' 0,6±0,02*

Aqua fresh white and shine 7,6±0,4 3,2±0,1 30,2±5,8 13,9±1,3 2,2±0,4 0,8±0,05

Blend-a-med pro mineral action 7,9±0,5 3,3±0,4 31,1±1,8 13,2±1,6 2,0±0,3 0,8±0,02

Blend-a-med complete 7,6±0,3 3,0±0,2 2,7±2,1* 10,3±1,7* 2,3 ±0,7 1,1±0,05

Blend-a-med complete night 7,4±0,8 2,7±0,3 32,8±3,4 13,7±2,1 2,2±0,5 0,9±0,07

Blend-a-med blendax 6,2±0,5* 2,1±0,1* 21,3±2,2* 9,4±1,2* 1,8±0,1 0,7±0,04

Colgate total propolis 6,1±0,3* 2,2±0,Г 19,9±3,4* 10,1±0,9* 1,7±0,1 0,7±0,03

El-ce med 7,б±0,5 2,8±0,5 20,9±2,4* 9,9±0,1* 2,2±0,3 0,9±0,07

Lacalut fluor 11,5±0,2* 4,1 ±0,4* 40,3±1,9 16,3±1,2 4,1 ±0,09* 1,7±0,04*

Mexidol dent 2,9±0,05* 0,9±0,04' 16,2±1,Г 6,6±0,04' 1,6±0,0б' 0,7±0,0Г

Parodontax 8,9±0,5" 4,6±0,3" 39,1±б,3 17,7±3,2 б,3±0,2' 1,8±0,1*

President classic 8,1±0,б 3,2±0,1 20,2±1,8* 11,9±1,9* 33±0,5 1,2±0,07

ROCS 8,3±0,2 4,1±0,5 39,9±2,7 16,9±1,8 5,4±0,3* 1,б±0,Г

Sensodynt fluoride 7,4±0,6 2,3±0,3 21,4±2,1* 10,9±2,3* 2,2±0,07 0,7±0,03

Silica complete Vitamin 6,3±0,Г 2,4±0,3" 31,4±3,б" 12,7±1,5J 1,8±0,3 0,7±0,04

Silica good morning 7,7±0,3 2,8±0,6 34,4±1,7 14,9±1,8 2,3±0,7 0,9±0,06

Кедровый бальзам 8,4±0,Г 3,7±0,3* 33,9±4,1 13,7±3,5 3,6±0,2" 1,4±0,05"

Новый жемчуг 8,2±0,2 3,б±0,1 28,8±3,9* 11,4±2,8* 3,2±0,5 1,2±0,0б

Лесная 8,4±0,5 3,2±0,4 34,4±2,6 14,1±3,1 3,8±0,5* 1,5±0,0б*

Мятная 7,4±0,6 2,9±0,5 3б,6±3,1 16,1±3,3 2,4±0,1 1,1 ±0,05

32 комплекс 7,5±0,3 2,7±0,6 20,3±1,9* 10,6±2,3* 2,1±0,9 0,8±0,06

* - р<0,05.

?.2е Б.ле

4.ее 3.2Э

г.че 1.60

г у Vlv

V

V

1 ДО

1,2 после 2 до

Рис. 2. Запись XJI ротовой жидкости у пациентов с изначально высокой и сниженной генерацией АФК в слюне до- и после однократного применения зубных паст Mexidol dent (1) и Parodontax (2)

Это было связано как с увеличением АОА надосадочной части ротовой жидкости, которая определялась по степени подавления XJI модельной системы, генерирующей АФК, так и со снижением генерации АФК в клетках слюны. Зубные пасты Lacalut fluor, Parodontax, President classic, Кедровый бальзам, наоборот, стимулировали изначально сниженные процессы генерации АФК в слюне пациентов с хроническим катаральным гингивитом1. В этих случаях антиокислительная активность надосадка слюны не менялась, а повышение XJI было связано со стимуляцией клеток.

Следует, однако, заметить, что однократная гигиеническая процедура не давала стойкого эффекта на процессы свободнорадикального окисления в ротовой жидкости. В течение 4-8 часов показатели хемилюминесценции ротовой жидкости возвращались к исходному уровню.

При анализе эффективности лечебно-профилактического действия зубных паст, назначенных с учетом особенностей генерации активных форм кислорода в ротовой жидкости получены следующие данные: при повышенных показателях хемилюминесценции слюны применяли пасту Mexidol dent, при низких значениях - использовали пасту Parodontax. Наблюдения продолжались в течение 14 дней.

У больных с повышенными значениями хемилюминесценции ротовой жидкости. Клиническая картина после 14 дней характеризовалась исчезновением кровоточивости десневого края, снижением индексов гигиены. При этом показатели светосуммы свечения слюны составляли уже не более 12,4 усл. ед. При исследовании ротовой жидкости отмечалось увеличение спонтанного и стимулированного НСТ-теста, повышение фагоцитарного индекса. У лиц с низкой интенсивностью хемилюминесценции ротовой жидкости после 14 дней показатели

светосуммы свечения ротовой жидкости находились в пределах 6,6 усл. ед. Повышение показателей ХЛ сопровождалось изменением клинической картины: уменьшением отечности и гиперемии слизистой оболочки десневого края, снижением индексов гигиены.

После курса гигиенических процедур наряду с положительной динамикой изменения хемилюминесценции ротовой жидкости у всех пациентов наблюдалось улучшение стоматологического статуса, клеточного состава ротовой жидкости. Нормализовались активность фагоцитов: повышенные значения снизились, а низкие повысились. Количество иммуноглобулинов класса А и О, и секреторного иммуноглобулина класса А у всех пациентов в ходе курса гигиенических процедур также имели тенденцию к нормализации (табл. 6).

Использование зубных паст, с учетом их влияния на процессы свободнора-дикального окисления в ротовой жидкости позволило достичь нормализации хемилюминесценции и клинико-лабораторных показателей, добиться стойкого терапевтического эффекта.

При этом значения показателей ХЛ ротовой жидкости изменились: в случае пониженных - повысились, а в случае повышенных - снизились, придя к средним значениям, характерным для лиц с интакгным пародокгом. Это позволило в дальнейшем перейти на зубные пасты, не влияющие на процессы СРО в ротовой жидкости.

Подводя итоги проведенного исследования можно сделать следующее заключение. Вопросы диагностики, лечения и профилактики воспалительных заболеваний пародонта сохраняют свою актуальность, социальную, научную и практическую значимость, требуют комплексного подхода.

Рациональный гигиенический уход за полостью рта рассматривается как неотъемлемый компонент этиотропной профилактики заболеваний пародонта. Процесс эволюции зубных паст далеко не завершен, что связано с научным прогрессом и постоянным совершенствованием средств гигиены полости рта, требует нового методологического подхода к данной проблеме, углубленного изучения механизма действия и особенностей применения. Концепция роли сво-боднорадикапьного окисления в ротовой жидкости может рассматриваться в качестве теоретического фундамента дальнейшего совершенствования мер предупреждения воспалительных заболеваний пародонта и их санации. Даже при отсутствии клинически выраженной формы патологии полости рта интенсивность свободнорадикального окисления в ротовой жидкости меняется.

Специфика этого процесса в ротовой полости требует индивидуального подхода к выбору лечебно-профилактических зубных паст. Перспективно создание мно-

нефункциональных или комплексных зубных паст, сочетающих в своей рецептуре препараты, оказывающие действие как на зубы и ткани пародонга, так и корригирующих процессы свободнорадикального окисления в ротовой жидкости.

Таблица 6

ИЗМЕНЕНИЕ НАИБОЛЕЕ ЗНАЧИМЫХ КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫХ

ПОКАЗАТЕЛЕЙ ДО И ПОСЛЕ КУРСА ГИГИЕНИЧЕСКИХ ПРОЦЕДУР (14 дней)

Клинико-лабораторные показатели Хронический катаратьный гингивит

Повышенная ХЛ (I А, п=33) Пониженная ХЛ (I Б, п=41)

до курса после курса до курса после курса

ХЛ ротовой жидкости 36,3±5,4* 12,4*1,7** 2,1±0,4*** 6,6±0,9**

Стоматологический статус

ИГ ИГР-У РМА Индекс кровоточивости 0,96±0,02* 0,32±0,01** 0,81±0,03*** 0,41±0,02**

2,3±0,03* 1,2±0,05** 1,8±0,02*** 1,1±0,07

29,1±2,1* 10,б±0,9** 27,2±0,7* 9,4±0,8**

0,81±0,02* 0,17±0,04** 1,2±0,02*** 0,25±0,09**

Ротовая жидкость

Иммуноглобулины (г/л) 1£А ДО 0,24±0,01* 0,19±0,07** 0,15±0,01*** 0,17±0,08**

0,3±0,03* 0,19±0,06** 0,3±0,04* 0,17±0,08**

0,53±0,05* 0,37±0,08** 0,19±0,01*** 0,34±0,0б**

Лизоцим (мкг/мл) 1,01±0,5* 0,38±0,05** 1,12±0,8* 0,41±0,08**

Клеточный состав нейтрофилы лимфоциты макрофаги гистиоциты 61,3±3,8* 54,7±3,6 41,5±2,9*** 48,3±4,4

1,4±0,02* 1,1±0,05 1,6±0,02* 0,9±0,08

1,4±0,03* - 0,9±0,01*** -

2,6±0,01* - 1,2±0,31*** -

НСТ (% активации) спонтанный индуцированный 36,9±2,4* 29,8±3,6** 19,8±1,3*** 2б,3±3,5**

42,7±3,7* 39,1±2,9** 2б,9±1,8*** 36,8±2,9**

Фагоцитарный индекс 79,8±4,9* 58,7±6,1** 36,1±2,7*** 49,4±5,6**

* - Отличие достоверно от контроля, ** - до и после процедуры р<0,05.

На основании проведенных экспериментальных и клинических исследований сформулированы рекомендации по оптимизации применения зубных паст лечебно-профилактического назначения, учитывающие их влияние на свободно-радикальное окисление, состояние СРО в ротовой жидкости и стоматологический статус пациента (рис. 3). В одних случаях следует назначать для ухода за зубами пасты, обладающие антиокислительной активностью, в других - способствующие активации генерации радикалов кислорода, которые обладают микро-

бицидным действием. Создание многофункциональных или комплексных зубных паст, сочетающих в своей рецептуре препараты, оказывающие лечебно-профилактическое действие на зубы и ткани пародонта, корригирующие процессы СРО в ротовой жидкости позволяет в значительной степени повысить эффективность профилактических и лечебных мероприятий, выбирать зубные пасты, сочетающие в себе различные положительные свойства.

Рис. 3. Алгоритм исследования влияния зубных паст лечебно-профилактического назначения на процессы свободнорадикального окисления in vitro и in vivo

Выводы:

1. Разработаны и апробированы в клинических условиях экспресс-способы оценки влияния зубных паст лечебно-профилактического назначения на процессы свободнорадикального окисления в модельных системах in vitro, in vivo и в ротовой жидкости, основанные на регистрации хемилюминесценции.

2. С помощью разработанной методики исследования свободнорадикального окисления в ротовой жидкости определена величина светосуммы свечения слюны здоровых людей, которая в среднем составляла S - 7,8±0,3 усл. ед, максимальная интенсивность свечения I шах - ЗД±0,2 усл. ед. У пациентов с хроническим генерализованным катаральным гингивитом определены как повышенные (S - 36,3±5,4 усл. ед., I шах - 15,8±2,1), так и пониженные значения хеми-люминенсценции (S - 2,1±0,4 усл. ед, I шах - 0,9±0,06).

3. Разработан способ индивидуального подбора зубных паст лечебно-профилактического назначения, заключающиеся в обоснованном, дифференцированном их назначении в зависимости от состояния процессов свободноради-

кального окисления в ротовой жидкости. Пациентам с хроническим катаральным гингивитом и сниженной интенсивностью хемилюминесценции ротовой жидкости назначали лечебно-профилактическую пасту прооксидантного действия, а пациентам с повышенными значениями хемилюминисценции назначали пасты с ан-тиоксидантным действием, а пациентам с нормальными показателями хемилюминисценции рекомендовали зубные пасты, не влияющие на процессы свободно-радикального окисления.

4. Однократная гигиеническая процедура оказывала влияние на процессы свободнорадикального окисления в ротовой жидкости, но не давала стойкого эффекта. Регулярное применение зубных паст у лиц с хроническим генерализованным катаральным гингивитом, оказывающих корригирующее влияние на процессы СРО в ротовой жидкости, нормализует ее показатели и приводит к средним значениям, характерным для лиц с интактным пародонтом, и позволяет добиться стойкого терапевтического эффекта.

5. Применение зубных паст с учетом их влияния на процессы свободнорадикального окисления в ротовой жидкости повышают эффективность лечебно-профилактических мероприятий.

Практические рекомендации:

1. С целью повышения эффективности лечебно-профилактического действия зубных паст рекомендуется оценивать состояние свободнорадикального окисления в ротовой жидкости и учитывать влияние гигиенических процедур на данный процесс.

2. Для определения состояния свободнорадикального окисления в ротовой жидкости рекомендуется использовать метод регистрации хемилюминесценции.

3. Для рационального выбора зубных паст лечебно-профилактического назначения разработан индивидуальный подход, позволяющий оценить их влияние на процессы свободнорадикального окисления, заключающийся в исследовании хемилюминесценции ротовой жидкости и модельных систем.

4. При высоких показателях хемилюминесценции ротовой жидкости рекомендуется использовать лечебно-профилактические зубные пасты с повышенной антиокислительной активностью, в частности, Mexidol dent, Blend-a-med blendax пчелиный бальзам, Colgate total propolis, Silica complete Vitamin, 32 комплекс. При низких значениях хемилюминесценции слюны рационально назначение зубных паст, стимулирующих генерацию радикалов активных форм кислорода, например, Lacalut fluor, Parodontax, Кедровый бальзам.

5. Для контроля над эффективностью лечебно-профилактических мероприятий рекомендуется регулярно исследовать хемилюминесценцию ротовой

жидкости в процессе лечения. Нормализация показателей XJI слюны является критерием восстановления функциональной активности фагоцитирующих клеток и коррелируете клиническим выздоровлением.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Гадиуллин A.M. Влияние зубных паст на процессы свободнорадикального окисления: активных форм кислорода и перекисное окисление липидов / A.M. Гадиуллин, Л.П. Герасимова, P.P. Фархутдинов // Пермский медицинский журнал - 2009. -Т. 26,-№5.-С. 124-130.

2. Гадиуллин, A.M. Влияние зубных паст на генерацию активных форм кислорода в слюне / A.M. Гадиуллин, Л.П. Герасимова, Х.М. Шайдуллина, P.P. Фархутдинов // Казанский медицинский журнал. - 2007. - t.-LXXXVIII № 4. прил. - С. 75-76,

3. Кравец, О.Н. Активные формы кислорода в слюне / О.Н. Кравец, Х.М. Шайдуллина, Л.П. Герасимова, А.М Гадиуллин, Э.К. Сабирзянова, P.P. Фархутдинов // Казанский медицинский журнал. - 2007. -т. LXXXVIII № 4. прил. - С. 87-88,

4. Гадиуллин, A.M. Влияние зубных паст на процессы свободнорадикального окисления / A.M. Гадиуллин, Л.П. Герасимова, P.P. Фархутдинов //Материалы Всероссийского конгресса «Внедрение новых технологий при лечении стоматологических заболеваний». - Уфа, 2007. - С. 97-99.

5. Гадиуллин, A.M. Определение индивидуальной совместимости зубных паст и ротовой жидкости / A.M. Гадиуллин, P.P. Фархутдинов, Л.П. Герасимова //Материалы Всероссийского конгресса «Внедрение новых технологий при лечении стоматологических заболеваний». - Уфа, 2007. - С. 99-101.

6. Герасимова, Л.П.. Хемилюминесцентные методы исследования в стоматологии. / Л.П. Герасимова, A.M. Гадиуллин, Х.М. Шайдуллина, О.Н. Кравец, P.P. Фархутдинов// Материалы Всероссийского конгресса стоматологов «Внедрение новых технологий при лечении стоматологических заболеваний» - Уфа, 2007. - С. 4-6.

7. Гадиуллин, A.M. Хемилюминисцентные методы исследования ротовой жидкости. /. A.M. Гадиуллин, P.P. Фархутдинов, Л.П. Герасимова, Э.К. Сабирзянова, Ш.З. Байков// Материалы всероссийской научно-практической конференции «Профилактика стоматологических заболеваний и их осложнений». 21-22 октября Уфа, 2008. - С. 68-69.

8. Гадиуллин, A.M. Способы определения влияния зубных паст лечебно-профилактического направления на процессы свободнорадикального окисления в модельных системах и ротовой жидкости in vitro, основанные на регистрации хемшпоми-нисценции./ А.М Гадиуллин., P.P. Фархутдинов, Л.П. Герасимова, Ш.З. Байков //Материалы всероссийской научно-практической конференции «Профилактика стоматологических заболеваний и их осложнений». 21-22 октября. Уфа, 2008. - С. 74-75.

Авторские свидетельства

1. Способ экспресс-оценки действия зубных паст /Л.П. Герасимова, P.P. Фархутдинов, Х.М. Шайдуллина, A.M. Гадиуллин // Патент на изобретение № 2328740 опубликован Бюлл. № 19 от 10.07.2008.

2. Способ выбора лечебно-профилактической пасты /Л.П. Герасимова, P.P. Фархутдинов, Х.М. Шайдуллина, A.M. Гадиуллин// Патент на изобретение № 2339941 опубликован Бюлл. № 33 от 27.11.2008.

ГАДИУЛЛИН АЛЬБЕРТ МАНСУРОВИЧ

ВЛИЯНИЕ ЗУБНЫХ ПАСТ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ НА ПРОЦЕССЫ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ В РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ

(клинико-экспериментальное исследование)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Издательская лицензия № 06788 от 01.11.2001 г. ООО «Издательство «Здравоохранение Башкортостана» 450000, РБ, г. Уфа, а/я 1293; тел./факс (347) 250-13-82.

Подписано в печать 03.11.2009 г. Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman. Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Усл. печ. л. 1,0. Уч.-изд. л. 1,5. Тираж 100. Заказ №501.

Актуальность исследования. Воспалительные заболевания пародонта продолжают оставаться наиболее распространенными в структуре стоматологических заболеваний. Более 80% населения во всем мире подвержено паро-донтитам, приводящим к потере зубов, появлению в полости рта очагов хронической инфекции, снижению реактивности организма, микробной сенсибилизации и других расстройств .[2, 4, 15, 23, 30, 36, 44-46, 52, 53, 57, 94, 96, 98, 101, 104, 109, 126, 127, 164 и др.].

Факторы, обуславливающие широкое распространение воспалительных заболеваний пародонта- агрессивная экологическая обстановка, систематический стресс, несбалансированное питание, нарушения обменных процессов, снижения иммунитета и др. [8, 32, 66, 93, 119, 126, 127, 164-167]. В этих условиях пародонт утрачивает свою защитную способность, что ведет к его поражению. С другой стороны, очаги инфекции в пародонтальных карманах отрицательно влияют на организм в целом. Клиническая картина воспаления пародонта на ражих стадиях заболевания характеризуется маломанифестным и латентным течением, что затрудняет своевременную диагностику и отдаляет начало адекватных лечебных и реабилитационных мероприятий, ведет к потере зубов [4, 10, 36, 66, 39, 154, 164, 165]. В этой связи, вопросы диагностики, лечения и профилактики воспалительных заболеваний пародонта сохраняют свою актуальность, социальную, научную и практическую значимость [4, 23, 31, 37, 48, 52, 53,57, 126, 127, 148 и др.].

В последние годы в патогенезе воспалительных заболеваний пародонта повышенное внимание уделяется нарушению свободнорадикального окисления (СРО) - генерации активных форм кислорода (АФК) и перекисному окислению липидов (ПОЛ) [25, 59, 67, 70, 82, 105, 107, 110, 125, 128, 165, 166, 189, 194, 198]. Клетки, обладающие фагоцитарной активностью, вырабатывают радикалы кислорода, которые обеспечивают их микробицидность. При острых и обострении хронических воспалительных процессах количество АФК в биологических жидкостях увеличивается [55, 60, 89, 90, 208, 209], что может стать причиной инициирования свободнорадикального перекисного окисления ли-пидов [18, 19, 102, 141, 161, 170, 176-178, 182, 183, 193, 203, 206].

Регуляция скорости свободнорадикального окисления и содержания свободных радикалов осуществляется физиологической системой антиоксидантов, разнообразной по механизму действия. Сюда, в частности, относятся ферменты: супероксиддисмутаза (СОД), каталаза (КТ), пероксидаза, NO-синтазы и т. д., витамины (ретинол, токоферол, аскорбиновая кислота), микроэлементы (металлы переменной валентности, селен), которые содержатся в ротовой жидкости [12, 35, 46,47, 51, 59, 66, 70, 82,105, 107, 155, 169, 173, 201, 204, 205, 212].

При воспалительных заболеваниях пародонта в ротовой полости меняется активность ферментов, регулирующих содержание радикалов кислорода [12, 36, 38, 67, 89, 175, 177] и оксида азота [186, 188, 205, 212], нарушается общая антиокислительная активность смешанной слюны [105, 107,169, 173, 909, 204].

Избыток свободных радикалов вызывает деполимеризацию гиалуроно-вой кислоты и других компонентов соединительной ткани, способствует образованию активного фактора хемотаксиса и миграции нейтрофилов к месту воспаления, увеличивается проницаемость капилляров [18, 89, 90 102, 111]. Активация свободнорадикального перекисного окисления липидов приводит к нарушению тканевого дыхания в митохондриях и процессов гидроксилирова-ния в микросомах, выходу лизосомальных ферментов. Все это, в конечном счете, поддерживает воспалительный процесс и ведет к поражению тканей пародонта [40, 52, 55, 75, 87, 101, 150,165, 166, 189, 198, 202, 209].

С другой стороны недостаток активных форм кислорода, обеспечивающих микробицидную активность фагоцитов, способствует микробной инвазии [63; 194]. Персистенция инфекции в пародонте опасна не только вероятностью обострения заболевания или субклиническим течением воспаления, но и способствует аллергизации организма и возникновению различных хронических заболеваний [6, 8, 23, 28, 48, 52-53, 58, 94, 101, 104, 127, 148]. Поэтому как увеличение, так и снижение содержания свободных радикалов в ротовой жидкости может играть определенную роль в развитии заболеваний пародонта, а поддержание свободнорадикального окисления в ротовой жидкости на оптимальном уровне, иметь существенное значение при лечении и профилактике стоматологических заболеваний.

Вместе с тем результаты изучения СРО в ротовой жидкости нередко противоречивы, что связано со сложностью методов исследования. Обычно на основании определения продуктов окисления (малоновый диальдегид, диеновые конъюгаты ит. д.) или антиокислительной активности (АОА) в слюне констатируется ускорение свободнорадикального окисления в ротовой полости при воспалении. Следует заметить, что нестабильность свободных радикалов, быстрый распад и включение в метаболизм продуктов свободнорадикального окисления затрудняют их обнаружение в биологическом материале. Исследования должны проводиться в строго контролируемых, специально подобранных условиях, исключающих разрушение или образование продуктов окисления во время проведения анализа, что делает малодоступными эти методы для практического здравоохранения.

Многих перечисленных недостатков лишен способ, основанный на регистрации хемилюминесценции (ХЛ) биологического материала- свечения, возникающего при взаимодействии радикалов [17, 20, 137, 141, 162, 172, 197]. К его достоинствам следует отнести высокую чувствительность, удается выявить наиболее реакционноспособные, короткоживущие радикалы, которые другими методами не регистрируются. Измерение ХЛ ведется в естественных условиях, нет необходимости специальной подготовки материала к исследованию, во время которого количество свободных радикалов и скорость окисления могут изменится. Это единственный метод, отвечающий требованиям экспресс анализа, не нуждающийся в особых лабораторных условиях, что представляет особую ценность при массовых профилактических осмотрах и диспансеризации населения.

В последние годы появился ряд сообщений о применении антиоксидан-тов в стоматологии [3, 9, 36, 39, 45, 51, 64, 80, 106, 112, 122, 125]. Клинические наблюдения свидетельствуют об их противовоспалительном действии. Однако бесконтрольное использование лекарственных веществ с антиоксидантным действием может вызвать нежелательные осложнения, в частности, подавить микробиоцидную активность клеток слюны. Кроме того, анатомические и физиологические особенности полости рта способствуют быстрому снижению концентрации лекарственных препаратов в очаге повреждения.

Перспективным представляется регулярное применение зубных паст, которые могут оказать коррегирующее влияние на состояние свободнорадикального окисления в ротовой полости. Эпидемиологические исследования свидетельствуют, что стоматологические заболевания чаще всего возникают вследствие недостаточной индивидуальной гигиены полости рта, а стоимость профилактических мероприятий во много раз меньше стоимости лечения и доступны для всех пациентов, независимо от материального достатка [41, 86, 130, 133-134, 136, 143].

Современная зубная паста, в состав которой входят различные сильнодействующие компоненты, рассматривается как лечебное и профилактическое средство, способное реально воздействовать на причины стоматологических заболеваний, снизить их частоту и отрицательные последствия [27, 68, 73, 97, 108, 120, 124, 139, 135, 204]. Но для этого необходимо правильно ориентироваться в многообразии постоянно меняющегося рынка зубных паст.

В настоящее время существует достаточно большой ассортимент зубных паст лечебно-профилактического назначения. Для повышения эффективности применения индивидуальных средств гигиены полости рта, важно разобраться в особенности их действия, в том числе выяснить влияние на свободнорадикальное окисление в ротовой жидкости. Требуются экспресс методы, позволяющие оценивать индивидуальную совместимость используемой пасты с ротовой жидкостью.

Разработка и внедрение доступных для практического здравоохранения методов объективной оценки состояния свободнорадикального окисления в полости рта, индивидуальный подбор зубных паст с учетом их влияния на этот процесс открывает новые перспективы профилактики стоматологических заболеваний. Это позволит не только рационально выбирать средства гигиены полости рта, но и целенаправленно создавать пасты с определенными свойствами, сократить сроки проведения клинических испытаний.

Цель исследования. Коррекция свободнорадикального окисления в ротовой жидкости зубными пастами лечебно-профилактического назначения.

Задачи исследования:

1. Разработать методику исследования свободнорадикального окисления в ротовой жидкости, изучить состояние данного процесса в норме и при хроническом генерализованном катаральном гингивите.

2. Разработать способы экспресс оценки влияния зубных паст лечебно-профилактического назначения на свободнорадикальное окисление в модельных системах и в ротовой жидкости, дать характеристику их свойств.

3. Разработать способ индивидуального подбора зубных паст, учитывающий их влияние на свободнорадикальное окисление и состояние данного процесса в ротовой жидкости.

4. Изучить состояние свободнорадикального окисления в ротовой жидкости после однократной и регулярной гигиенической процедуры с применением различных зубных паст при хроническом генерализованном катаральном гингивите.

5. Дать оценку эффективности разработанных мер профилактики и коррекции свободнорадикального окисления в ротовой жидкости зубными пастами лечебно-профилактического назначения.

Научная новизна работы. Впервые изучено влияние зубных паст лечебно-профилактического назначения на процессы СРО в модельных системах, генерирующих радикалы активных форм кислорода, в которых протекают реакции перекисного окисления липидов. (Способ экспресс оценки действия зубных паст. Патент на изобретение - № 328740 опубликован Бюлл. № 19 от 10.07.2008). Дана сравнительная оценка их антиокислительной активности.

Исследовано влияние зубных паст на процессы свободнорадикального окисления в ротовой жидкости. Выделены зубные пасты, обладающие повышенной антиокислительной активностью, не влияющие на процессы свободнорадикального окисления и стимулирующие образование активных форм кислорода в ротовой жидкости.

Впервые изучено состояние свободнорадикального окисления в ротовой жидкости в норме и при хронических генерализованных катаральных гингивитах до и после применения зубных паст. Использование зубных паст лечебно-профилактического назначения с учетом их влияния на процессы свободнорадикального окисления и состояния данного процесса в ротовой жидкости позволяет нормализовать содержание свободных радикалов в ротовой жидкости, что повышает эффективность профилактических мероприятий (Способ выбора лечебно-профилактической пасты Патент на изобретение № 2339941 опубликован Бюлл. № 33 от 27.11.2008).

Практическая значимость исследования. В результате проведенных исследований разработаны экспресс методы, основанные на измерении ХЛ, позволяющие подбирать зубные пасты с учетом их влияния на СРО и индивидуальных особенностей состояния данного процесса в ротовой жидкости пациента. Они включают способы оценки антиокислительной активности зубных паст лечебно-профилактического назначения и методы индивидуального подбора средств гигиены полости рта, защищенные патентами. Внедрение этих методов в стоматологическую практику позволило повысить эффективность лечебно-профилактического использования зубных паст.

Положения, выносимые на защиту:

1. Разработана методика определения влияния зубных паст лечебно-профилактического назначения на процессы СРО в ротовой жидкости in vitro и in vivo. Дана сравнительная оценка их свойств.

2. Разработана методика индивидуального подбора зубных паст лечебно-профилактического назначения с учетом их влияния на СРО и особенностей состояния данного процесса в ротовой жидкости.

3. Уточнение особенностей состояния СРО в ротовой жидкости и подбор зубных паст с учетом их влияния на СРО повышает эффективность лечебно-профилактических мероприятий при воспалительных заболеваниях пародонта.

Личный вклад автора в проведенное исследование. Автору принадлежит идея оценки влияния зубных паст лечебно-профилактического назначения на процессы СРО в ротовой жидкости in vitro и in vivo. Им разработаны и внедрены в практику экспресс-методы индивидуального подбора зубных паст с учетом их влияния на состояние СРО в полости рта. Автором лично осуществлялось ведение пациентов, исследование зубных паст in vitro и in vivo, статистическая обработка и анализ полученных данных.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на: Всероссийском симпозиуме «Новые технологии в стоматологии» Уфа 2003; Республиканской конференции стоматологов «Профилактика и лечение стоматологических заболеваний у детей» Уфа 2006; Всероссийском конгрессе и Республиканской конференции стоматологов РБ «Внедрение новых технологий при лечении стоматологических заболеваний» Уфа, 2007, Всероссийской научно-практической конференции «Профилактика стоматологических заболеваний и их осложнений» Уфа, 2008; Научно-техническом Совете БГМУ 2008.

Внедрение. Разработанные способы индивидуального подбора зубных паст лечебно-профилактического назначения с учетом их влияния на свободнорадикальное окисление и особенностей состояния данного процесса в ротовой жидкости, защищенные патентами внедрены в практическую работу терапевтического отделения ГУЗ «Республиканская стоматологическая поликлиника» г. Уфы., терапевтического отделения городской стоматологической поликлиники № 4 г. Уфы, Стоматологической клиники «Дентал студия» - ООО «Дина медсервис»

Обоснованные в ходе исследования теоретические положения и методологические подходы внедрены в учебный процесс на кафедре терапевтической стоматологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Публикации по теме диссертации. Опубликовано 8 работ, 1 из них в научных журналах РФ, рекомендованных ВАК, получены 2 патента ФИПС.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 137 странице, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Диссертация иллюстрирована 21 таблицами, 13 рисунками. В библиографический указатель включено 212 источников, из которых 154 отечественных и 58 зарубежных.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны и апробированы в клинических условиях экспресс-способы оценки влияния зубных паст лечебно-профилактического назначения на процессы свободнорадикального окисления в модельных системах in vitro, in vivo и в ротовой жидкости, основанные на регистрации хемилюминесценции.

2. С помощью разработанной методики исследования свободнорадикального окисления в ротовой жидкости определена величина светосуммы свечения слюны здоровых людей, которая в среднем составляла S — 7,8±0,3 усл. ед, максимальная интенсивность свечения I шах - 3,1±0,2 усл. ед. У пациентов с хроническим генерализованным катаральным гингивитом определены как повышенные (S - 36,3±5, 4 усл. ед., I шах - 15,8±2,1), так и пониженные значения хемилюминенсценции (S - 2,1±0,4 усл. ед, I max - 0,9±0,06).

3. Разработан способ индивидуального подбора зубных паст лечебно-профилактического назначения, заключающиеся в обоснованном, дифференцированном их назначении в зависимости от состояния процессов свободнорадикального окисления в ротовой жидкости. Пациентам с хроническим катаральным гингивитом и сниженной интенсивностью хемилюминесценции ротовой жидкости назначали лечебно-профилактическую пасту прооксидантного действия, а пациентам с повышенными значениями хемилюминисценции назначали пасты с антиоксидантным действием, а пациентам с нормальными показателями хемилюминисценции рекомендовали зубные пасты, не влияющие на процессы свободнорадикального окисления.

4. Однократная гигиеническая процедура оказывала влияние на процессы свободнорадикального окисления в ротовой жидкости, но не давала стойкого эффекта. Регулярное применение зубных паст у лиц с хроническим генерализованным катаральным гингивитом, оказывающих корригирующее влияние на процессы СРО в ротовой жидкости, нормализует ее показатели и приводит к средним значениям, характерным для лиц с интактным пародонтом, и позволяет добиться стойкого терапевтического эффекта.

5. Применение зубных паст с учетом их влияния на процессы свободнорадикального окисления в ротовой жидкости повышают эффективность лечебно-профилактических мероприятий.

Практические рекомендации:

1. С целью повышения эффективности лечебно-профилактического действия зубных паст рекомендуется оценивать состояние свободнорадикального окисления в ротовой жидкости и влияния гигиенических процедур на данный процесс.

2. Для определения состояния свободнорадикального окисления в ротовой жидкости рекомендуется использовать метод регистрации хемилюминесценции.

3. Для рационального выбора зубных паст лечебно-профилактического назначения разработан индивидуальный подход, позволяющий оценить их влияние на процессы свободнорадикального окисления, заключающийся в исследовании хемилюминесценции ротовой жидкости и модельных систем.

4. При высоких показателях хемилюминесценции ротовой жидкости рекомендуется использовать лечебно-профилактические зубные пасты с повышенной антиокислительной активностью, в частности, Mexidol dent, Blend-a-med blendax пчелиный бальзам, Colgate total propolis, Silica complete Vitamin, 32 комплекс. При низких значениях хемилюминесценции слюны рационально назначение зубных паст, стимулирующих генерацию радикалов активных форм кислорода и повышающих микробицидный потенциал клеток слюны, например, Lacalut fluor, Parodontax, Кедровый бальзам.

5. Для контроля над эффективностью лечебно-профилактических мероприятий рекомендуется регулярно исследовать хемилюминесценцию ротовой жидкости в процессе лечения. Нормализация показателей XJI слюны является критерием восстановления функциональной активности фагоцитирующих клеток и коррелирует с клиническим выздоровлением.