Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Внутриклеточный транспорт антрациклинов и множественная лекарственная резистентность
- Ученая степень
- кандидата биологических наук
- ВАК РФ
- 14.00.14
Оглавление диссертации Шубина, Ирина Жановна :: 2000 :: Москва
ВВЕДЕНИЕ.
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Антрациклиновые антибиотики: строение и физико-химические свойства.
1.2. Роль антрациюшновых антибиотиков в противоопухолевой химиотерапии.
1.3. Характеристика фенотипа множественной лекарственной резистентности.
1.4. Генетическая основа, структура Р-гликопротеина, механизм действия и транспорт антрациклиновых антибиотиков.
1.5. Другие механизмы множественной лекарственной резистентности.
1.6. Методы исследования механизма множественной лекарственной резистентности.
Глава П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
Глава Ш. НОВЫЕ СПЕКТРОФЛУОРИМЕТРИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОЦЕНКИ ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО ТРАНСПОРТА И ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С ДНК АНТРАДИКЛИНОВ.!.
3.1. Прямая прижизненная оценка внутриклеточного транспорта и взаимодействия с ДНК антрациклинов по тушению флуоресценции антрациклина в среде инкубации.
3.2. Оценка внутриклеточного транспорта и взаимодействия с ДНК антрациклинов с использованием красителя Хехста.
Глава IV. ОЦЕНКА ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО ТРАНСПОРТА И ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ДОКСОРУБИЦИНА С ДНК В ЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ И РЕЗИСТЕНТНЫХ КЛЕТКАХ.
4.1. Внутриклеточный транспорт и взаимодействие доксорубицина с ДНК в чувствительных и резистентных клетках in vitro.
4.2. Внутриклеточный транспорт и взаимодействие доксорубицина с ДНК в чувствительных и резистентных клетках in vivo.
Глава V. ОЦЕНКА ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО РАСПРЕДЕЛЕНИЯ
ДОКСОРУБИЦИНА В ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТКАХ.
5.1. Прямая оценка внутриклеточного распределения доксорубицина в живых клетках.
5.2. Внутриклеточное распределение и связывание доксорубицина с ДНК в разных типах опухолевых клеток in vivo.
Глава VI. ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЙ ТРАНСПОРТ И ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ
С ДНК АНТРАЦИКЛИНОВ, СВЯЗАННЫХ С ПОЛИМЕРНЫМИ
НОСИТЕЛЯМИ.
6.1 .Внутриклеточный транспорт и взаимодействие с ДНК даунорубицина, связанного с полиглуаминовой кислотой.
6.2.Внутриклеточный транспорт и взаимодействие с ДНК доксорубицина с наносферами.
Глава УП. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
Введение диссертации по теме "Онкология", Шубина, Ирина Жановна, автореферат
Актуальность проблемы
Антрациклиновые антибиотики - это большая группа противоопухолевых препаратов. которые нашли широкое применение в онкологической клинике. Как и в отношении всех цитостатиков, при использовании антрациклиновых соединений очень важной является проблема первичной и индуцированной резистентности, которая обычно является перекрестной для достаточно широкого круга лекарств. Это значит, что развитие устойчивости к одному из цитостатиков сопровождается резистентностью ко многим другим, часто совершенно непохожим по структуре и спектру биологической активности. Такой вид резистентности получил название множественной лекарственной резистентности (MJIP). Наиболее ярким примером может служить большая группа высоко эффективных противоопухолевых антрациклиновых антибиотиков, проблема преодоления резистентности к которым все еще не решена.
В большинстве случаев определяющим в реализации биологической активности антрациклинов является количество антибиотика, поступившего в клетку. На клеточном уровне этот процесс регулируется трансмембранным транспортом. Вхождение антрациклина в клетку осуществляется за счет диффузии, тогда как выброс антибиотика из клетки - активный процесс, осуществляемый энергетически зависимыми насосами, часть из которых Са-зависимы. Процесс этот осуществляется при участии белка-переносчика. В настоящее время идентифицированы три транспортных белка - Р-гликопротеин [27, 63, 76, 77, 99], белок, ассоциированный с множественной лекарственной резистентностью - MRP [15, 16, 30, 35, 48, 59, 108] и белок, ассоциированный с раком легкого - LRP [96], которые являются представителями большого семейства мембранных энергетически-зависимых транспортеров (так называемое ABC семейство транспортеров) [105, 111, 138]. Физиологическая роль большинства представителей ABC транспортеров не изучена, а признанным индикатором МЛР является Ргликопротеин. Выделен также ген, кодирующий синтез этого белка - ген тёг (ген множественной лекарственной резистентности). В клетках с множественной лекарственной резистентностью ген т<1г экспрессирован. количество белка-транспортера в большинстве случаев, повышено, и как результат - внутриклеточное содержание антрациклинов уменьшено, а их биологическая активность снижена. Однако, показано, что иногда резистентные к антрациклинам клетки включают значительные количества лекарства без проявления его цитотоксичности. Одной из причин этого может быть то, что общее внутриклеточное содержание антрациклинов не отражает активную фракцию лекарства, взаимодействующую с внутриклеточной ДНК.
Однако, вопрос о том, что является определяющим в чувствительности опухолевых клеток к антрациклинам - общее внутриклеточное содержание лекарства или его активная фракция, взаимодействующая с ДНК, а следовательно, внутриклеточное распределение препарата, остается нерешеным. Для решения этого вопроса необходимы методические подходы, которые позволили бы оценить процессы транспорта и связывания лекарства с ДНК количественно, в динамике поступления препарата в живую клетку, до и после модифицирующих воздействий, и таким образом обеспечили бы оценку функциональной активности экспрессированного Р-гликопротеина, а также уровень активной фракции антрациклина.
Существующие и используемые до настоящего времени методы имеют ряд принципиальных недостатков:
1. не позволяют судить о внутриклеточном накоплении препарата в динамике;
2. не дают представления о внутриклеточном распределении и величине активной фракции препарата, связанной с ДНК, что на самом деле является главным фактором, определяющим эффективность цитостатика;
3. недостаточно чувствителны для определения низкой степени множественной лекарственной резистентности, характерной для опухолей человека;
4. трудоемки и дорогостоящи.
Нам представилось, что преодолеть эти недостатки можно, используя в качестве субстрата Р-гликопротеина доксорубицин. который является типичным представителем лекарств из группы с перекрестной резистентностью (так называемые МЛР-цитостатики), основываясь на уже известных физико-химических характеристиках док-сорубицина.
Основанием для разработки первого метода послужили данные о том, что при взаимодействии антрациклинов с ДНК происходит резкое уменьшение уровня их флуоресценции, чего не наблюдается при взаимодействии этих лекарств с другими макромолекулами. Поэтому мы предположили, что тушение флуоресценции антрациклинов при инкубации с клетками может явиться количественным показателем его внутриклеточного транспорта и взаимодействия с ДНК.
Для разработки второго методического подхода представилось возможным использовать ДНК-специфический краситель Хехст 33258, флуоресценция которого при взаимодействии с ДНК наоборот увеличивается во много раз. Используя данные о возможной конкуренции между красителем и антрациклиновыми антибиотиками за связывание с ДНК, мы предположили, что количественным показателем внутриклеточного транспорта и взаимодействия антрациклинов с ДНК может служить тушение флуоресценции красителя при добавлении к клеткам антрациклина.
Мы предположили также, что использование новых методических подходов позволит оценить процесс внутриклеточного транспорта антрациклинов в чувствительных и резистентных опухолевых клетках с разным уровнем множественной лекарственной резистентности и определить вклад в реализацию биологической активности антрациклинов их взаимодействия с ДНК. Более того, разработанные методы пригодны для изучения внутриклеточного транспорта и взаимодействия с ДНК антрацикли-новых антибиотиков, связанных с полимерами. Это высокоэффективный новый класс цитостатиков, изучение которых обычными биохимическими методами, включающими разрушение клеток и экстракцию, невозможно из-за химической нестабильности комплексов. Все вышесказанное обуславливает актуальность настоящего исследования, его цели и задачи.
Целью настоящего исследования является разработка новых методов прижизненного количественного определения в чувствительных и MJIP-резистентных опухолевых клетках внутриклеточного транспорта антрациклинов для оценки функциональной активности транспортных белков, связывания антрациклинов с ДНК и их внутриклеточного распределения, определения активной внутриклеточной фракции лекарства, а также для изучения механизма действия антрациклинов, связанных с полимерными носителями.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
1. Разработать оптимальные условия проведения количественной прижизненной оценки внутриклеточного транспорта антрациклинов в нормальных и опухолевых клетках, растущих in vitro и in vivo.
2. Провести количественную оценку внутриклеточного накопления, связывания с ДНК и внутриклеточного распределения доксорубицина в чувствительных и резистентных опухолевых клетках с разной степенью множественной лекарственной резистентности in vitro и in vivo.
3. Исследовать влияние модификатора МЛР, верапамила, на внутриклеточное накопление и связывание доксорубицина с ДНК в чувствительных и резистентных опухолевых клетках in vitro и in vivo.
4. Изучить возможность внутриклеточного транспорта и связывания с ДНК высоко эффективных комплексов антрациклинов с полимерами.
Научная новизна и практическая значимость
Разработаны два новых спектрофлуориметрических метода, позволяющих количественную прижизненную оценку внутриклеточного транспорта, взаимодействия с ДНК и внутриклеточного распределения антрациклиновых антибиотиков.
Впервые, с помощью разработанных методов эти параметры оценены в живых чувствительных опухолевых клетках и в клетках с индуцированной и врожденной множественной лекарственной резистентностью in vitro и in vivo. Показано, что в опухолевых клетках даже с низким уровнем резистентности внутриклеточное накопление и взаимодействие доксорубицина с ДНК значительно ниже, чем в чувствительных.
Впервые, новые методы использованы для прижизненной оценки в реальном масштабе времени функциональной активности Р-гликопротеина в чувствительных и резистентных опухолевых клетках. Показано, что после воздействия специфического ингибитора Р-гликопротеина, верапамила, внутриклеточное накопление и взаимодействие доксорубицина с ДНК увеличиваются в резистентных опухолевых клетках до уровня в чувствительных клетках.
Впервые методы использованы для изучения механизма взаимодействия с клетками комплексов антрациклиновых антибиотиков с полимерными носителями. Показано, что биологическая активность комплексов может реализовываться с поверхности мембран без их проникновения внутрь клеток и взаимодействия с ДНК. Таким образом, впервые получен факт, позволяющий объяснить (по крайней мере, частично) чувствительность клеток с множественной лекарственной резистентностью к комплексам ан-трациклинов, связанных с полимерными носителями.
Простота и высокая чувствительность разработанных методов позволяет рекомендовать их для широкого использования при сравнительном изучении механизма действия разных антрациклинов и механизма реализации множественной лекарственной резистентности в разных типах нормальных и опухолевых клеток даже с низкой степенью резистентности, что характерно для опухолей человека.
Это позволит проведение индивидуальной оценки множественной лекарственной резистентности и скрининга ее модификаторов у конкретного больного. На наш взгляд, это принципиально новый подход к решению проблемы поиска путей преодоления множественной лекарственной резистентности.
Заключение диссертационного исследования на тему "Внутриклеточный транспорт антрациклинов и множественная лекарственная резистентность"
выводы
1. Разработаны два новых спектрофлуориметрических метода прижизненной количественной оценки в реальном масштабе времени внутриклеточного транспорта, взаимодействия с ДНК и внутриклеточного распределения антрациклиновых антибиотиков.
2. Разработанные методы позволяют выявить различия в накоплении, связывании с ДНК и внутриклеточном распределении антрациклинов в чувствительных и резистентных опухолевых клетках in vitro и in vivo.
3. Новые методы позволяют оценивать функциональную активность АВС-транспортеров и осуществлять поиск эффективных модификаторов множественной лекарственной резистентности.
4. Применение новых спектрофлуориметрических методов для изучения механизма взаимодействия с клетками активных комплексов антрациклинов с полимерными носителями показало, что их внутриклеточное накопление и связывание с ДНК значительно ниже, чем свободного антибиотика, что свидетельствует о возможности реализации биологической активности комплексов с поверхности мембраны без проникновения внутрь клетки.
5. Высокая чувствительность разработанных методов оценки внутриклеточного транспорта, взаимодействия антрациклинов с ДНК и их внутриклеточного распределения позволяет различить чувствительные и резистентные опухолевые клетки даже при низком уровне множественной лекарственной резистентности (менее 4), что делает метод пригодным для исследования опухолей человека
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2000 года, Шубина, Ирина Жановна
1. Баранов Е.П., Брикенштейн В.Х., Дмитриевская Т.В., Баренбойм Г.М. Антибиотики, 1984, N3. стр.208-214.
2. Богуш Т.А., Сидтикова С.М., Сыркин А.Б. Вестник АМН СССР, 1985, N11, стр.82-86.
3. Богуш Т.А., Баранов Е.П., Козорез А.Б., Танкович Н.И. Антибиотики и химиотерапия, 1990, т.35(11), стр.16-19.
4. Блохин H.H., Переводчикова Н.И. Химиотерапия опухолевых заболеваний. -М.: Медицина, 1984.
5. Брикенштейн В.Х., Баранов Е.П. Механизм взаимодействия даунорубицина с ДНК. Антибиотики, 1985, т.ЗО (2), стр. 90-96.
6. Бушелев С.Н. Параметры электронной структуры и количественные соотношения структура-активность противораковых антрациклиновых антибиотиков. Доклады АН СССР, 1985, т.282 (2), стр.429-432.
7. Гаузе Г.Ф., Дудник Ю.В. Противоопухолевые антибиотики. М.: Медицина,1987.
8. Гончарова С.А., Демидова Н.С., Ширяева O.A., Шевцова В.Н., Коновалова Н.П. Характеристика антрациклиноустойчивых штаммов лейкоза Р388. Экспериментальная онкология, 1987, т.9, N4. стр.42-47.
9. Демидова Н.С., Гончарова С.А., Ширяева O.A., Коновалова Н.П. Чувствительность к химиотерапевтическим препаратам антрациклинустойчивых штаммов лейкоза Р388 мышей. Экспериментальная онкология, 1989, т.11, N1, стр.65-68.
10. Добрынин Я.В., Монатова Т.Н. Мирзоян Е.Е. Вопросы онкологии, 1974, т.20(3), стр.44-48.
11. Кафиани К.А., Бронштейн И.Б. ДНК-топоизомеразы и механизм действия антинеопластических соединений. Успехи биологической химии, 1988, т.29, стр.84-112.
12. Ставровская А.А., Стромская Т.П., Штиль А.А. Генетические механизмы и закономерности развития множественной лекарственной устойчивости опухолевых клетокю Вестник ОНЦ РАМН, 1993, N4, стр.37-47.
13. Эмануэль Н.М., Богданов Г.Н., Орлов B.C. Свободно-радикальные механизмы в цитотоксическом действии противоопухолевых антибиотиков. Успехи химии,1984, т.53(12), стр. 1929-1958.
14. Abe Т., Koike К., Ohga Т. et al. Chemosensitisation of spontaneous multidrug resistance by a 1,4-dihydropyridine analogue and verapamil in human glioma cell lines overexpressing MRP or MDR1. British Journal of Cancer, 1995, v.72 (2), p.418-23.
15. Arceci R.J. Clinical significance of P-glycoprotein in multidrug resistance malignancies. Blood, 1993, v.81(9), p.2215-2222.
16. Ayesh S., Shao Y.-M., Stein W.D. Co-operative, competitive interactions between modulators of P-glycoprotein. Biochimica et Biophysica Acta, 1996, v.1316, p.8-18.
17. Batist G., Tulpule A., Sinha B.K., Katki A.G., Myers C.E., Cowan K.H. Overexpression of a novel anionic glutathione transferase in multidrug-resistant human breast cancer cells. Journal Biological Chemistry, 1986, v.261(33), p. 15544-15549.
18. Bauer G., Wendel A. The activity of peroxide-metabolizing system in human colon carcinoma. Journal of Cancer Research of Clinical Oncology, 1980, v.97, p.267-273.
19. Barbarics E., Kronauge J.F., Cohen D. et al. Characterization of P-glycoprotein transport and inhibition in vivo. Cancer Research, 1998, v.58(2), p.276-282.
20. Beketic-Oreskovic L., Duran G.E., Chen G. et al. Decreased mutation rate for cellular resistance to doxorubicin and suppression of mdrl gene activation by cyclosporin PSC 833. Journal of the National Cancer Institute, 1995, v.87(21), p.1593-1602.
21. Beck W.T., Multidrug resistance and its circumvention. Eur. J. Cancer, 1990, v.26 (4), p.513-515.
22. Bennis S., Ichas F., Robert J. Differencial effects of verapamil and quinine on the reversal of doxorubicin resistance in a human leukemia cell line. International Journal of Cancer, 1995, v.62(3), p.283-290.
23. Bennis S., Chapey C., Couvreur P., Robert J. Enhanced cytotoxicity of doxorubicin encapsulated in polyisohexylcyanoacrylate nanospheres against multidrug-resistant tumor cells in culture. European Journal of Cancer. 1994, v.30A(l), p.89-93.
24. Binaschi M., Supino R., Gambetta R.A. et al. MRP gene overexpression in ahuman doxorubicin-resistant SCLC cell line: alterations in cellular pharmacokinetics and in pattern of cross-resistance. International Journal of Cancer. 1995, v.62(l), p.84-89.
25. Booser D.J., Hortobagyi G.N., Anthracycline antibiotics in cancer therapy. Focus on drug resistance. t>rugs, 1994, v.47(2), p.223-258.
26. Broxterman H.J., Giaccone G., Lankelma J. Multidrug resistance proteins and other drug transport-related resistance to neutral product agents. Current Opinions on Oncology, 1995, v.7, 532-540.
27. Broxterman H.J., Versantvoort C.H.M., Linn S.C. Multidrug resistance in lung cancer. In Hansen H.H., ed. Lung Cancer, Norwell, USA, Kluwer, 1994, p.193-222.
28. Broxterman H.J., Kupier C.M., Schuurhuis G.J., Tsuruo T., Pinedo H.M., Lankelma J. Increase of daunorubicin and vincristine accumulation in multidrug-resistant human ovarian carcinoma cells by a monoclonal antibody reacting with P-glycoprotein.
29. Biochemical Pharmacology, 1988, v.37, p.2389-2393.
30. Broxterman H.J., Lankelma J., Pinedo H.M. How to probe clinical tumour samples for p-glycoprotein and multidrug resistance-associated protein. European Journal of Cancer, 1996, v.32A (6), p.1024-1029.
31. Capranico G. et al., Sequence-selective topoisomerase II inhibition by anthracycline derivatives in SY40 DNA: relationship with DNA binding affinity and cytotoxicity. Biochemistry, 1990, v.29, p.562-569.
32. Cabanes A., Briggs K.E., Gokhale P.C. et al. Comparative in vivo studiws with paclitaxel and liposome-encapsulated paclitaxel. International Journal of Oncology, 1998, v. 12 (5), p. 1035-1040.
33. Childs S., Yeh R.L., Hui D., Ling V. Taxol resistance mediated by transfection of the liver specific sister gene of P-glycoprotein. Cancer Research, 1998, v.58 (18), p.4160-4167.
34. Chao C.C. Lack of elevated drug efflux in adriamycin-resistant immunoblastic lymphoma cells with mdrl overexpression. FEBS Letters. 1995, v. 373(3), p. 285-290.
35. Chan H.S.L., Thorner P.S., Haddad G., Ling V. Immunohistochemical detection of P-glycoprotein: prognostic correlation in soft tissue sarcoma of childhood. Journal of Clinical Oncology, 1990, v.8, p.689-704.
36. Cole S.P.C., Deely R.G. Multidrug resistance associated with overexpression of
37. MRP. In Hait WN, ed. Advances in Cancer Research, in press
38. Cole S.P., Sparks K.E., Fraser K. et al. Pharmacological characterization of multidrug resistant MRP-transfected human tumor cells. Cancer Research, 1994. v.54(22), p.5902-5910.
39. Curt G.A., Clendeninn N.J., Chabner B.A. Drug resistance in cancer. Cancer Treat. Rep., 1984. v.68, p.87-99.
40. Cummings J. et al. Studies on the in vivo disposition of adriamycin in human tumors which exibit different responses to the drugs. Br. J. Cancer., 1986, v.53, p.835-838.
41. D'Arpa P. et al., Topoisomerase-targeting antitumor drugs. Biochim. Biophys. Acta., 1989, v.989, p. 163-177.
42. Dalmark M., Storm H.H. A flickian diffusion transport process with features of transport catalysis. Journal of Genetic Physiology, 1981, v.78(4), p.348-364.
43. DefFie A.M., Batra J.K., Goldenberg GJ. Direct correlation between DNA topoisomerase II activity and cytotoxicity in adriamycin-sensitive and -resistant P388 leukemia cell lines. Cancer Research, 1989, v.49, p.58-62.
44. DTncali M., Capranico G., Giaccone G., Zunio F., Garattini S. DNA topoisomerase inhibitors. InrCancer Chemotherapy and Biological Response Modifiers Annual 14, Pinedo H.M., Longo D.L., Chabner B.A., eds, Elsevier Science Publishers B.V., 1993, p.61-85.
45. Di Ilio C., Sacchetta P., Del Boccio G., La Rvere G., Federici G. Glutathione peroxidase, glutathione S-transferase and glutathione reductase activities in normal and neoplastic human breast tissue. Cancer Letters, 1985, v.26, p.37-42.
46. Dev S., Ramachandra M., Pastan I. et al. Evidence for two nonidentical drug-interaction sites in the human P-glycoprotein. Proc Natl Acad Sci USA. 1997, v.94, p. 10594.
47. Doyle L.A., Ross D.D., Ordonez J.V., Yang W. et al. An etoposide-resistant lung cancer subline overexpresses the multidrug resistance-associated protein. British Journal of Cancer, 1995, v.72 (3), p.535-542.
48. Doyle L.A., Ross D.D., Sridhara R. et al. Expression of a 95 kDa membrane protein is associated with low daunorubicin accumulation in leulaemic blast cells. British Journal of Cancer, 1995, v.71(l), p.52-58.
49. Eijdems E.W., Zaman G.J., de Haas M. et al. Altered MRP is associated with multidrug resistance and reduced drug accumulation in human SW-1573 cells. British Journal of Cancer, v.72 (2), p.298-306.
50. Eijdems E.W., de Haas M., Timmerman AJ. et al. Reduced topoisomerase II activity in multidrug-resistant human non-small cell lung cancer cell lines. British Journal of Cancer, 1995, 71(1), p.40-47.
51. Endicott J.A., Ling V. The biochemistry of P-glycoprotein-mediated multidrug resistance. Ann. Rev. Biochem., 1989, v.58, p.137-171.
52. Ernest S., Bello-Reuss E. Expression and function of P-glycoprotein in a mouse kidney cell line. American Journal of Physiology. 1995, v.269, p.C323-333.
53. Fairchild C.R., Ivy S.P., Kao-Shan C.S., Whang-Peng J., Rosen N. et al. Isolation of amplified and overexpressed DNA sequences feom adriamycin-resistant human breast cancer cells. Cancer Research, 1987, v.47, p.5141-5148.
54. Ford J.M., Hait W.N. Pharmacology of drug that alter multidrug resistance in cancer. Pharmacological Reviews, 1990, v.42(3), p.155-199.
55. Fojo A., Ueda K. Slamon D.J., Gottesman M.M., Pastan I. Expression of a multidrug-resistant gene in human tumors and tissues. Proc Natl Acad Sci USA, 1987, v.84, p.265-269.
56. Flens M.J., Zaman G.J.R., Van der Valk P. et al. Tissue distribution of the multidrug resistance-associated protein (MRP). American Journal of Pathology, 1996.
57. Fritzsche H. Et al. Studies on interaction of anthracycline antibiotics and deoxyribonucleic acid: geometry of intercalation of iremycin and daunomycin. Biochemistry, 1982, v.21, p.3940-3946.
58. Ganzina F., Pacciani M.A., Di Pietro N., Idarubicin (4-demethoxydaunorubicin). A preliminary overview of preclinical and clinical studies. Invest. New Drugs, 1986, v.4, p.85-105.
59. Galsci H., Sullivan M., Willingham M.C. Expression of a human multidrug resistance cDNA (MDR1) in the bone marrow of transgenic mice: resistance to daunomycin-induced leukopenia. Mol. Cell Biol., 1989, v.9, p.4357.
60. Germann U.A. P-glycoprotein a mediator of multidrug resistance in tumor cells. - Eur. J. Cancer, 1996, v.32A, N.6, p.927-944.
61. Glisson B.S et al. DNA topoisomerase II : a primer on the enzyme and its unique role as a multidrug target in cancer chemotherapy. Pharmacol. Ther., 1987, v.32, p.89-106.
62. Goal D., Hudecz F. Low toxicity and high antitumor activity of daunomycin by conjugation to an immunopotencial amphoteric branched polypeptide. European Journal of Cancer, 1998, v.34(l), p.155-161.
63. Gottesman M.M., Pastan I., The multidrug transporter, a double-edged sword. J. Biol. Chem., 1988, v.263(25), p.12163-12166.
64. Gottesman M.M., Pastan I. Biochemistry of multidrug resistance mediated by themultidrug transporter. Ann. Rev. Biochem., 1993, v.62, p.385-427.
65. Goldestein L.J. MDR1 gene expression in solid tumors. European Journal of Cancer, 1996, v.32A (6), p.1039-1050.
66. Goormaghtigh E. Et al. Anthracycline glycoside-membrane interactions. Biochim Biophys Acta, 1984, v.779, p.271-288.
67. Gros Ph., Croop J., Houman D. Mammalian multidrug resistance gene: complete cDNA sequence indicates strong homology to bacterial transport proteins. Cell, 1986, v.47, p.371-380.
68. Grant C.E., Valdimarsson G., Hipfner D.R., Almquist K.C., Cole S.P.C., Deeley R.G. Overexpression of multidrug resistance-associated protein (MRP) increases resistance to natural product drugs. Cancer Research, 1994, v.54, p.357-361.
69. Grogan T., Dalton W., Rybski J. et al. Optimization of immunocytochemical P-glycoprotein assessment in multidrug-resistant plasma cell myeloma using three antibodies. Laboratory Investment, 1990, v.63, p.815-824.
70. Gudkov A.V., Massino J.S., Chernova O.Y., Kopnin B.P. Chromosoma (Berl.), 1985, v.92, p.16-24.
71. Hayes J.D., Wolf C.R. Molecular mechanisms of drug resistance. Biochem. J., 1990, v.272,p,281-295.
72. Hasegawa S., Abe T., Naito S. et al. Expression of multidrug resistance-associated protein (MRP), MDR1 and DNA topoisomerase II in human multidrug-resistant bladder cancer cell lines. British Journal of Cancer, v.71(5), p.907-913.
73. Haber D.A. Multidrug resistance (MDR1) in leukemia: is it time to test? Blood, 1992, v.79, p.295-298.
74. Hedley D.W. Flow cytometric assays of anticancer drug resistance. Clinical Flow Cytometry Series: Ann NY Acad Sci, 1993, v.677, 341-353.
75. Hedley D.W., Xiu-Yan Xie S, Minden M.D. et al. A novel energy dependantmechanism reducing daunorubicin accamulation in acute mieloid leukemia. Leukemia, 1997, v.ll,p.48.
76. Higgins C.F. ABC transporters: from microorganisms to man. Annual Review Cell Biology, 1992, v.8, p.67-113.
77. Higgins C.F., Gottesman M.M. Is multidrug transporter a flippase? Trends Pharmacol. Sei. 1992, v.17. p.18-21.
78. Hickman J.A. Apoptosis: new vistas for therapeutic intervention? Oncology in Practice, 1998, N1, p.3-5.
79. Huet S., Chapey Ch., Robert J. European Journal of Cancer, 1993, v.29A(10), p.1377- 1381.
80. Huet S., Scott B., Robert J. P-glycoprotein overexpression cannot explainm the complete doxorubicin-resistance phenotype in rat glioblastoma cell lines. British Journal of Cancer, 1992, v.65, p.538-545.
81. Hu X., Yang H., Pan Q.R., Zheng S. Does P-glycoprotein play a pivotal role in the drug resistance of an MDR variant, K562/Dox? Chemotherapy, 1995, v.41(4), p.296-305.
82. Hegewisch-Becker S., Fliegner M., Tsuruo T., Zander A., Zeller W., Hossfeld D.K. P-glycoprotein expression in normal and reactive bone marrows. British Journal of Cancer, 1993, v.67, p.430-435.
83. Izquierdo M.A., Scheffer G.L., Flens M.J., Schroeijers A.B., P. Van der Valk, Scheper R.J. Major vault protein LRP-related multidrug resistance. European Journal of Cancer, 1996, v.32A(6), p.979-984.
84. Jiang X.R., Macey M.G., Collins P.W., Newland A.C. Characterization and modulation of drug transport kinetics in K562 cl.6 daunorubicin-resistant cell Une. British Journal of Haematology. 1994., v.86(3), p.547-554.
85. Jones A.S., Phillips D.E., Cook J.A., Helliwell T.R. A randomised phase II trial of epirubicin and 5-fluorouracil versus cisplatinum in the palliation of advanced and recurrent malignant tumor of the salivary glands. Br.J.Cancer, 1993, v.67, p.112-114.
86. Juliano R.L., Ling V. A surface glycoprotein modulating drug permeability in Chinese hamster ovary cell mutants. Biochem. Biophys. Acta., 1976, v.455, p. 152-162.
87. Krishnamachary N. Center M.S. The MRP gene associated with a non-P-glycoprotein multidrug resistance encodes a 190-kDa membrane bound glycoprotein. -Cancer Research, 1993, v.53, p.3658-3661.
88. Krishan A., Dutt K., Israel M., Ganapathi R. Comparative effects of adriamycin and N-trifluoroacetyladriamycin-14-valerate on cell kinetics, chromosomal damage and macromolecular synthesis in vitro. Cancer Research, 1981, v.41, p.2745-2750.
89. Kubota N., Nishio K., Takeda Y. et al. Characterization of an etoposide-resistant human ovarian cancer cell line. Cancer Chemotherapy & Pharmacology. 1994, v.34(3), p.183-190.
90. Lankelma J., Spoelstra E.C., Dekker H., Broxterman H.J. Evidence for daunomycin efflux from multidrug-resistant 2780AD human ovarian carcinoma cells against a concentration gradient. Biochim. Biophys. Acta, 1990, v. 1055, p.217-222.
91. Lai T., Collins C.M.P., Hall P., Morgan A.P., Smith P.J.B., Stonebridge B.R., Symes M.O. Verapamil enchances doxorubicin activity in cultured human renal carcinoma cells. European Journal of Cancer, 1993, v.29A(3), p.378-383.
92. Legrand O., Simonin G., Perrot J.Y., Zittoun R., Marie J.P. Pgp and MRP activities using calcein-AM are prognostic factors in adult acute myeloid leukemia patients. -Blood, 1998, v.91 (12), p.4480-4488.
93. Lecureur V., Fardel O., Guillouzo A. The antiprogestatin drug RU 486 potentiates doxorubicin cytotoxicity in multidrug resistant cells through inhibition of P-glycoprotein function. FEBS Letters, 1994, v.355(2), p.187-191.
94. Liu B., Sun D., Xia W. et al. Cross-reactivity of C219 anti pl70mdr-' antibody with pl85°"erbB2in breast cancer cells: cautions on evaluating p 170mdr-' . J Natl Cancer Inst, 1997, v.89, 1524.
95. Lum B.L., Fisher G.A., Brophy N.A., Yahanda A.M., Adler K.M., Kaubisch S., Halsey J., Sikic B.I. Clinical trials of modulation of multidrug resistance. Cancer, 1993, v.72, p.3502-3514.
96. Lum B.L., Gosland M.P. MDR expression in normal tissues. Drug resistance in clinical oncology and hematology, 1995, v.9 (2), p.319-336.
97. Marie J.P., Huet S., Faussat A.M. et al. Multicentric evaluation of MDR phenotype in leukemia. Leukemia, 1997, v.ll, 1086.
98. Marquardt D., Center M.S. Drug transport mechanisms in HL60 cells isolated for resistance to adriamycin: evidence for nuclear drug accumulation and redistribution in resistant cells. Cancer Research, 1992, v.52, p.3157-3163.
99. Maymon R., Bar-Shira Maymon B., Cohen-Armon M. et al. Enchancing effect of ATP on intracellular adriamycin penetration in human ovarian cancer cell lines. Biochimica et Biophysica Acta. 1994, v. 11201(2), p. 173-178.
100. Mayer U., Wagenaar E., Beijnen J.H. et al. Substantial excretion of digoxin via the intestinal mucosa and prevention of long-term digoxin accumalation in the brain by themdrla P-glycoprotein. British Journal of Pharmacology, 1996, v.119, p.1038-1044.
101. Morris D.I., Speicher L.A., Ruoho A.E., Tew K.D., Seamon K.B. Interaction of forskolin with the P-glycoprotein multidrug transporter. Biochemistry, 1991, v.30, p.8371-8379.
102. Myers C.E., Mimnaugh E.G., Yeh G.C., Sinha B.K. Biochemical mechanisms of tumor cell kill by the anthracyclines. In: Anthracycline and anthracenedione-based anticancer agents, Lown J.W., ed, Elsevier: Amsterdam-Oxford-New York-Tokyo, 1988, p.527-569.
103. Noonan K.E., Beck C., Holzmayer T.A. et al. Quantitative analysis of MDR1 (multidrug resistance) gene expression in human tumors by polymerase chain reaction. Proc Natl Acad Sci USA, 1990, v.87, p.7160-7164.
104. Nooter K., Westerman A., Hens M.J. et al. Expression of the multidrug-associated protein (MRP) gene in human cancers. Clin Cancer Res, 1995, v.l, p.1301-1310.
105. Pinedo H.M., Schuurhuis G.J., Broxterman H.J., Lankelma J. Detection of multidrug resistance in acute myeloid leukemia and human tumor xenografts. Annals of Oncology, 1992, v.3(Suppl l),p.62.
106. Pommier Y., Kerrigan D., Schwartz R.E., Swack J.A., McCurdy A. Altered DNA topoisomerase II activity in Chinese Hamster cells resistant to topoisomerase II inhibitors. Cancer Research, 1986, v.46, p.3075-3081.
107. Pereira E., Teodori E., Dei S. et al. Reversal of multidrug resistance by verapamil analogues. Biochemil Pharmacology. 1995, v.50(4), p.451-457.
108. Rahman A., Husain S.R., Siddiqui J., Verma M., Agresti M., Center M., Safa A.R., Glazer R.I. Liposome-mediated modulation of multidrug resistance in human HL-60 leukemia cells. Journal of National Cancer Institute, 1992, v.84, p.1909-1914.
109. Robert J. Multidrug resistance: biology and modulation. Oncology in practice, 1998, Nl,p.9-ll.
110. Robert J. Multidrug resistance reversal agents. Drugs of the Future, 1997, v.22,149.
111. Roller E., Klumpp B., Krause J., Eichelbaum M., Schumacher K. Influence of sequential exposure to R-verapamil or B8509-035 on rhodamine 123 accumulation in human lymphoblastoid cell lines. Cancer Chemotherapy and Pharmacology, 1993, v.32, p. 151-155.
112. RuetzS., Raymond M., Gros P. Functional expression of P-glycoprotein encoded by the mouse mdr3 gene in yeast cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, v.90, p.l 158811592.
113. Scala S., Akhmed N., Rao U.S. et al. P-glycoprotein substrates and antagonists cluster in two distinct groups. Molecular Pharmacology, 1997, v.51, p. 1024.
114. Schneider Y.J et al. DNA binding parameters of daunorubicin and doxorubicin in the conditions used for studying the interaction of anthracycline-DNA complexes with cells in vitro. Cancer Chemother. Pharmacol. 1979, v.2, p.7-10.
115. Scott B. et al. Comparative cytotoxicity, DNA synthesis inhbition of eight anthracyclines in a model of doxorubicin-sensitive and -resistant rat glioblastoma cells. -Biochem. Pharmacol., 1981, v.38, p.167-172.
116. Slapak C.A., Mizunuma N., Kufe D.W. Expression of the multidrug resistance associated protein and P-glycoprotein in doxorubicin-selected human myeloid leukemia cells. Blood. 1994, v.84(9),p.3113-1321.
117. Schuurhuis G.J., Broxterman H.J., De Lange J.H.M. et al. Early multidrug resistance, defined by changes in intracellular doxorubicin distribution, independent of P-glycoprotein. British Journal of Cancer, 1991, v.64, p.857-861.
118. Sonneveld P., Schoester M., de Leeuw K. Clinical modulation of multidrug resistance in multiple myeloma: effect of cyclosporine on resistant tumor cells. Journal of Clinical Oncology, 1994, v.12(8), p.1584-1591.
119. Sparano J.A., Speyer J., Gradishar W.J. et al. Phase I trial of escalating doses of paclitaxel plus doxorubicin and dextrazoxane in patients with advanced breast cancer. -Journal of Clinical Oncology, 1999, v. 17 (3), p.880-886.
120. Stow M.W., Warr J.R. Reduced influx is a factor in accounting for reduced vincristine accumulation in certain verapamil-hypersensitive multidrug-resistant CHO cell lines. FEBS Letters, 1993, v.320(2), p.87-91.
121. Stein W.D., Cardelli C.O., Pastan I., Gottesman M.M. Kinetic evidence suggesting that the multidrug transporter differentially handles influx and efflux of itssubstrates. Mol. Pharmacol., 1994, v.45, p.763-772.
122. Sugawarw I. Multidrug resistance: role of multidrug resistance-associated protein (MRP). The Cancer Journal, 1995, v.8(2), p.59-61.
123. Sumizawa T., Chuman Y., Sakamoto H. Non-P-glycoprotein-mediated multidrug-resistant human KB cells selected in medium containing adriamycin, cepharanthine, and mezerein. Somatic Cells & Molecular Genetics, 1994, v.20(5), p.423-435.
124. Schneider E. et al. DNA topoisomerases as anticancer drug targets. Adv. Pharmacol., 1990, v.21, p.149-183.
125. Tanaka S., Aizawa K., Katayanagi N., Tanaka O. Flow cytometric analysis of early steps in development of adriamycin resistance in a human gastric cancer cell line. Japanese Journal of Cancer Research. 1994, v.85(l), p.86-92.
126. Takeda Y., Nishio K., Niitani H., Saijo N. Reversal of multidrug resistance by tyrosine-kinase inhibitors in a non-P-glycoprotein-mediated multidrug-resistant cell line. International Journal of Cancer. 1994, v.57(2), p.229-239.
127. Takeda Y., Nishio K., Morikage T. et al. Reversal of multidrug resistance by genistein in non-P-glycoprotein-mediated multidrug-resistant cell line (K562/TPA). Proc Annu Meet Am Assoc Cancer Res, 1992, v.33, A2847.
128. Takeda Y., Nishio K., Sugimoto Y. et al. A human myelogenous leukemia cell line resistant to 12-0-tetradecanoylphorbol 13-acetate shows non-P-glycoprotein mediated multidrug resistance. Proc Annu Meet Am Assoc Cancer Res, 1991, v.32, A1297.
129. Tarasiuk J., Garnier-Suillerot A. Kinetik parameters for uptake of anthracycline by drug-resistarit and drug-sensitive K562 cells. European Journal of Biochemistry, 1992, v.204, p.693-698.
130. Tarasiuk J., Frezard F., Garnier-Suillerot A., Gattegno L. Anthracycline incorporation in human lymphocytes. Kinetics of uptake and nuclear concentration. -Biochem Biophys Acta, 1989, v.1013, p.109.
131. Tewey K.M. et al. Adriamycin-induced DNA damage mediated by mammalian DNA topoisomerase II. Science, 1984, v.216, p.466-468.
132. Thottassery J.V., Zambetti G.P., Arimori K. et al. P53-dependent regulation of MDR\ gene expression causes selective resistance to chemotherapeutic agents. Proc Natl Acad Sci USA, 1997, v.94, p. 11037.
133. Trock B.J., Leonessa F. And Clarke R. Multidrug resistance in breast cancer: a meta-analysis of MDRH gpl70 expression and its possible functional significance. J Natl Cancer Inst, 1997, v.89, 917.
134. Tritton T.R. et al. The anticancer agent adriamycin can be actively cytotoxic without entering cells. Science, 1982, v.217, p.248-250.
135. Van der Heyden S., Gheuens E., De Bruijn E., Van Oosterom A., Maes R. P-glycoprotein: clinical significance and methods of analysis. Critical Review Clinical Laboratories of Science, 1995, v.32, p.221-264.
136. Versantvoort C.H., Withoff S., Broxterman H.J. et al. Resistance-associated factors in human small-cell lung-carcinoma GLC4 sub-lines with increasing adriamycin resistance. International Journal of Cancer, 1995, v.61(3), p.375-380.
137. Van der Valk P., Van Kalken C.K., Ketelaars H. et al. Distribution of multidrug-resistance-associated P-glycoprotein in normal and neoplastic human tissues. Ann Oncol,1990, v.l, p.56-64.
138. Versantvoort C.H.M., Rhodes T., Twentyman P.R. Acceleration of MRP-associated efflux of rhodamine 123 by genistein and related compounds. British Journal of Cancer, 1996, v.74, p. 1949-1954.
139. Versantvoort C.H.M., Shuurhuis G.J., Pinedo H.M. et al. Probing daunorubicin accumulation defects in non-P-glycoprotein expressing multidrug-resistant cell lines using digitonin. International Journal of Cancer, 1992, v.50, p.906-911.
140. White J.G., Amos W.B., Fordham M. An evaluation of confocal vs conventional imaging of biological structures by fluorescence light microscopy. Journal of Cell Biology., 1987, v.l05,p.41-48.
141. Warren L., Jardillier J.C., Malarska A., Akeli M.G. Increased accumulation of drugs in multidrug-resistant cells induced by liposomes. Cancer Research, 1992, v.52, p.3241-3245.
142. Weiss G., Loyevsky M., Gordeuk W.J. Dextrazoxane (ICRF-187). Genetic Pharmacology, 1999, v.32 (1), p.155-158.
143. Yamamoto M., Baba H., Kusumoto T., Sakaguchi Y. et al. Cyclosporin A and FK506 reverse anthracycline resistance by altering the cell cycle. Anti-Cancer Drugs, 1995, v.6(4), p.570-577.
144. Yang C.Z., Luan F.J., Xiong D.S., Liu B.R. et al. Multidrug resistance in leukemic cell line K562/A02 induced by doxorubicin. Chung-Kuo Yao Li Hsueh Pao Acta Pharmacologica Sinica, 1995, v.16 (4), p.333-337.
145. Zaman G.J.R., Versantvoort C.H.M., Smit J.J.M. et al. Analysis of the expression of MRP, the gene for a new putative transmembrane drug transporter, in human multidrug-resistant lung cancer cell lines. Cancer Research, 1993, v.53, 1747-1750.