Автореферат и диссертация по медицине (14.00.21) на тему:Обоснование использования иммобилизованных протеолитических ферментов в лечебно-профилактических зубных пастах

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ОУ2КИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ имени И. КАЛИНИНА

3Г6 од

:и' и

на правах рукописи

ЗАРЯ ОЛЬГА ИВАНОВНА

ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ В ЛЕЧЕШСЬ ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ЗУБНЫХ ПАСТАХ

14.00.21 - Стоматология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

<МЖ 1994

"V/ > /г'

/ { / ^ ■- / с, ( - / "У /

I , I.

Работа выполнена на кафедре стоматологии датского возраста Новосибирского медицинского института V института Цитологии и Генетики СО РАЕ

Научные руководители - заслуженный деятель науки РФ

профессор, доктор медицинских наук Леонтьев Е К

- профессор, доктор медицинских наук Железный П. А.

Официальные оппоненты - профессор, доктор медицинских:

наук Беликов П. П.

- доцент, кандидат медицинских наук Иванова Г. Г.

Ведущая организация

ШСИ им. н.А .Семашко

Заадгга состоится 1994 г. в часов на

заседании специализированного Совета Д. 084.30.02 Омского ордена Трудового Красного Знамени государственного медицинского института

Адрес: 644099, г. Омск, ул. Ленина. 12. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Омского медицинского института

Автореферат разослан

>1994 г.

Ученый секретарь специализированного Совета

Нэдосеко Е Б.

Актуальность проблемы. Лечебно-профилактические зубные пасты отличаются многообразием своего состава. Задачей исследователей при разработке рецептур таких паст является целенаправленное лечебно-профилактическое воздействие на некоторые звенья патогенеза кариеса зубов и заболеваний пародонта

Подавление развития зубного налета путем ферментативного воздействия на его содержимое является одним из направлений подобных исследований. По данным патентной литературы,- наиболее распространенным является включение в состав зубных паст протеолитических ферментов животного и микробного'происхождения, способность которых предупреждать образование зубного налета подтверждается многими авторами С А. L. Jensen., 1959, Н. J. Fornikola et al. ,1972, Ю.А. Федоров и соавт.,1986 ].

Современные достижения молекулярной биологии позволили разработать способы присоединения растворимых ферментов к полимерным матрицам. В такой иммобилизовав ной форме обычно нестойкие ферменты приобретают высокую стабильность, что позволяет снизить дозу применяемого препарата, увеличить время его действия и одновременно ослабить побочные реакции [ А. R Березин. ,1971 ].

Одной из современных тенденций является разработка гелевых лечебно-профилактических зубных паст. Их высокий кариеспрофилактический эффект связывают со способностью геля задерживаться в фиссурах зубов t RR Морозова, 1975 ]. Кроме того, вещества, содержащиеся в геле, диффундируют в слюну, оказывая лечебный и профилактический эффект [ R К. Леонтьев, В.Г. Сунцов, 1984 ].*

Можно полагать, что гелевые ферментсодержащие зубные пасты в отличие от абразивных, способны растворять зубной налег, не травмируя при этом эмаль зуба. При соответственном подборе оптимальной концентрации фермента и геля возможно получить зубную пасту с заданными характеристиками.и определить ее место в комплексной профилактики заболеваний зубов и пародонта.

Целью работы является научное обоснование возмож-

ности и целесообразности использования протеолитических иммобилизованных ферментов в составе зубных паст для профилактики кариеса зубов. Дня достижения поставленной

цели нами решались следующие задачи:

1. Разработать состав гелеобразной зубной пасты с оптимальным содержанием в ней иммобилизованных протеи-наз для максимального устранения зубного налета и профилактики кариеса зубов.

2. Оценить в эксперименте кариеспрофилактический эффект зубных паст с оптимальной, минимальной и максимальной активностью протеолитических иммобилизованнйх ферментов.

3. Изучить острую и хроническую токсичность ферментативной зубной пасты в эксперименте.

4. Изучить в клинике очищающее от зубного налета действие зубных паст с минимальной, оптимальной и максимальной активностью комплекса иммобилизованных протеиназ и влияние их на проницаемость твердых тканей зубов.

5. Изучить кариеспрофилактический эффект ферментативной зубной пасты в клинике у детей с различной активностью кариозного процесса.

Научная новизна работы. Разработан состав новой лечебно-профилактической зубной пасты, где в качестве активного компонента введен комплекс иммобилизованных протеиназ Вас. бЛИИб в количестве 2,5-5,0 вес.%, в качестве носителя предложен гель полиэтиленгликоля в количестве 85-90 вес. X. Экспериментально доказана целесообразность введения предложенного ферментативного препарата в составе зубной пасты для профилактики кариеса зубов. Это же положение подтверждается в клинике при оценке очищающего и кариеспрофилактического действия .ферментативных зубных паст.

Нами установлено, что предложенная рецептура зубной пасты позволяет в течении года сохранять ей специфическую активность иммобилизованных ферментов,

обусловливая тем самым высокий терапевтический эффект.

Вами разработана методика, позволяющая оценить активность ферментного препарата в зубной пасте, основанная на способности протеиназ расщеплять белки, находящиеся на пленочном индикаторе. Нами обнаружена способность ферментативной зубной пасты оказывать пролонгированное очищающее действие. Так у пациентов,испольаующих ферментативную зубную пасту, наблюдалось дальнейшее снижение гигиенического индекса в первые три часа после чистки зубов.

Практическая ценность работа Результаты проведенного исследования позволили разработать оптимальный состав новой зубной пасты на основе комплекса иммобилизованных протеиназ и геля полиэтиленгликоля. Данная зубная паста "Клеродент" предлагается в качестве эффективного средства профилактики кариеса зубов.

Материалы исследования являются теоретической основой для дальнейших разработок разнообразных рецептур зубных паст с целью более дифференцированного воздействия на патогенез кариеса зубов.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Состав новой лечебно-профилактической зубной пасты на основе иммобилизованных протеолитических ферментов с целью повышения эффективности кариеса зубов.

2. Ферментативная зубная паста обладает достаточным противокариозным эффектом в эксперименте и в клинике, хорошим очищающим от зубного налета действием, не оказывая при этом отрицательно влияния на твердые ткани зубов.

Апробация работы. Результаты исследования доложены на заседании Новосибирского областного научно-практического общества стоматологов [ 1991 ], на 51-й, 53-й, 54-й итоговых научных конференциях студентов и молодых ученых [ Новосибирск, 1990,1992,1993 ], на областной научно-практической конференции по методам диагностики, лечения и профилактики стоматологических заболеваний [ Новосибирск, 1990 ], на научно-практической конференции

"Применение иммобилизованных ферментов б стоматологии" [ Москва, 1992 ]. Диссертация апробирована на заседании проблемно-плановой комиссии по стоматологии Новосибирского медицинского инотитута С 1993 1.

Публикации. В ходе выполнения работы опубликованы 4 печатные работы. Получено 2 положительных решения по заявке на игобретекия. Разработаны технические условия на производство ферментативной зубной пасты "Клеро-дент".

■ Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Текст содержит №S машинописных страниц. Диссертация иллюстрирована 16 таблицами, 6 рисунками. Указатель литературы содержит 145 источников, из них 108 отечественных, 3? зарубежных. В главе "Обзор литературы" имеются ссылки на 35 зарубежных патента и 8 авторских свидетельств.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Поскольку в состав разработанной зубной пасты входит биологически активное вещество - фермент, необходимо было определить совместимость традиционных компонентов зубной пасты - пенообразующих веществ, красителей, отдушек и др. с иммобилизованными протеиназами. Протео-литическую активность фермента определяли методом Ancosa [ ГОСТ 20264.2-74 ] через сутки, неделю, месяц. По степени изменения активности фермента в опытных и контрольных пробирках делали вывод о влиянии каждого компонента на протеолитичеекую активность.

Сохранение специфической ферментативной активности при хранении является важнейшей задачей в разработке рецептур ферментсодержащкх зубных паст. В предлагаемой пасте, где отсутствует абразив и за качество очищения

твердых тканей зубов отвечает в основном фермент, данный вопрос является основным. Изучали специфическую активность иммобилизованных протейная в зубных постах при хранении в течении года в разных температурных режимах [ +6 С и +20 С ] методом, основанном на способности протеиназ ливировать белки пленочного индикатора. Специфическую активность оценивали по времени полного лизиса белка пленочного индикатора Определяли также изменения пенного числа, устойчивости пены и рН зубной пасты в течении года

Изучали противокариозную эффективность ферментативной зубной пасты в сравнении с известными абразивными пастами в эксперименте на крысах линии Вистар. Алиментарная модель кариеса воспроизводилась кариесогенньм рационом Стефана 580. Были сформированы четыре опытных и одна контрольные группы по 25 животных в каждой. В контрольной группе зубные пасты не применяли. В связи с отсутствием зубной пасты, содержащей протеолитические ферменты, сравнение осуществляли с гигиенической пастой "Мятная" - ее применяли в первой опытной группе. Во второй, третьей и четвертой опытных группах использовали пасту "Клеродент" с различной концентрацией в них ферментного препарата Зубные пасты наносились на зубы животных в течении 1-2 минуты ежедневно на протяжении 4-х недель. По окончании эксперимента крыс под эфирным наркозом декапитировали, челюсти выделяли, фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, импрегнировали в 1% растворе азотнокислого серебра, из блоков челюстей готовили полушлифы. Активность кариозного поражения оценивали по степени глубины проникновения азотнокислого в твердые ткани зубов С Методические указания по экспериментальному и клиническому испытанию зубных паст ]. Индекс кариозности рассчитывали по глубине гипомине-рализации в фиссурах и контактных зонах первого и второго моляров верхней и нижней челюстей крыс. Противока-. риозную эффективность исследуемых паст оценивали по величине редукции индекса кариозности, которая выражается

в процентах.

Острую токсичность пасты определяли при однократном пероральном введении крысам Вистар до 3 мл ферментативной вубной пасти Острая токсичность оценивалась по отсутствию летальных исходов, фоническая токсичность была изучена на самках линии Вистар. Двум группам животных [ 12 опытных и 12 контрольных 1 на протяжении 5 недель по 5 раз в неделю вводили в пищевод по 100 мг зубных паст : "Клеродент" опытным животным, детскую пасту "Антошка" - контрольным. Оценивали возможное действие пасты на морфологический состав периферической "крови, функцию барьерных органов и органов выделения, изменение весовых коэффициентов всех внутренних органов и гистоморфологическую картину паренхиматозных органов. Для оценки очишающих свойств зубных паст использовали упрощенный гигиенический индекс Green et Vermillion. Были созданы 3 опытных и 1 контрольная группы по 15 клинически здоровых человек в каждой, в возрасте 19-23 лег. Веем пациентам перед исследованием проводилось снятие зубных отделений. Также все пациенты обучались стандартному методу чистки зубов, всем были вьщаны одинаковые щетки средней жесткости. В контрольной группе чистка зубов проводилась гигиенической абразивной пастой "Мятная", а в опытных - зубной пастой "Клеродент" с минимальной [ 1 вес. % ], оптимальной С 50 вес. %1 и максимальной С 85 вес. % ] концентрацией фермента 2 раза в день. Не рекомендовалось тщательное полоскание полости рта после чистки ферментативными зубными пастами. Испытуемые проводил! контролируемую и неконтролируемую чистку зубов предлагаемыми зубными пастами. Контроль чистки проводили на 1-й, 7-й, 14-й, 21-й и 28 день. До и после контролируемой чистки определяли гигиенический индекс. В остальное время испытуемые чистили зубы той же щеткой и пастой утром и вечером в домашних условиях без контроля. Эффективность очищающего действия зубных паст определяли путем сравнения индекса гигиены с первым осмотром.

Физиологическое состояние эмали зубов при использовании ферментативных зубных паст с различной концентрацией иммобилизованных протеиназ оценивали с помощью теста эмалевой резистентности, предложенный В. П. Окупко [1984]. Тест эмалевой резистентности определяли до чистки ферментативными пастами, сразу после нее, через один, три и восемь часов в тех 2® группах, что и при определении очищающего действия зубных паст.

Для сравнительной оценки кариеспрофилактического действия зубной пасты "Кперодект" в клинике использовали известную фторсодержащую пасту "Чебурашка". Были созданы одна контрольная группа из 97-ми детей в возрасте 6 лет и одна опытная из 104 детей. В свою очередь в каждой группе дети были поделены на 4 подгруппы по степени активности кариеса С Т. Ф. Виноградова, Н. В. Морозова, 1987: 1-я группа - отсутствие кариеса [ п в контрольной группе-8, в опытной-8]; 2-я группа 1-я степень активности кариеса С п в контрольной группе 36, в опытной - 36 ]; 3-я группа - 2-я степень активности кариеса [ п в контрольной группе - 32, в опытной - 40 ]; 4-я группа - 3-я степень активности кариеса С п в контрольной группе - 21, в опытной - 20 ].

При стоматологическом обследовании для выявления кариозных поражений использовали общепринятые методики [ осмотр, зондирование ]. Интенсивность кариозного поражения определяли путем подсчета индексов кп С сумма всех пораженных кариесом, запломбированных временных зубов "] и ШЗп I сумма всех пораженных кариесом и запломбированных поверхностей постоянных зубов ]. Исследования проводились на базе детского комбината 409 г. Новосибирска. Все дети были однократно санированы. В опытной и контрольной группах проводилась' ежедневная чистка зубов предложенными пастами один раз в день, утром после завтрака. Сг,'*к раз в месяц в обеих группах проводили контроль чистки зубов. Эффективность паст с помошью указанных индексов оценивали путем сравнения с первыми осмотрами и через 12 месяцев. Динамическое наб-

людение за группами детей в течении года позволило определить прирост кариеса зубов в абсолютных цифрах, затем выразить его в процентах.

Шлучешые результаты экспериментальных и клинических исследований подвергались статистической обработке с определением средней арифметической, среднего квадратического отклонения, средней квадратической ошибки, критерия достоверности и достоверности изучаемого признака.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В состав разработанной зубной пасты включен комплекс иммобилизованных протеиназ Вас. эиЬиПБ С 2,5-5,0 вес. % ]. Выбор данного ферментного препарата диктовался рядом его несомненных достоинств. В отличие от трипсина и химотрипсина он доступен в больших количествах и дешев. Сочетание в нем щелочных и нейтральных субтилизи-нов, способных расщеплять различные пептидные связи в белковой молекуле, обеспечивают ему высокую протеолити-ческую активность. Кроме того, некоторые штаммы Вас. эиМЛНБ могут продуцировать /-амилазу. Иммобилизованный фермент - иммозимаза - отличается высокой стабильностью и большой продолжительностью действия благодаря прочному присоединению протеиназ к полимеру-носителю, трудной раощэпляемостью, плохой смываемостью. Иммозимаза способна сохранять специфическую активность в широком диапазоне рН среды - 6,0 - 11,0. Фермент не вызывает местнораздражающие и аллергические реакции, не обладает антимитогическим и цитотоксическим действием, не всасывается в кровь и не изменяет ее сзертывающей активности.

Абразивы в разработанную пасту не вводятся, так как мы предполагаем не столько механический, сколько ферментативный механизм устранения зубного налета В качестве носителя использовали гель полиэтиленгликоля [ШГ] в количестве 85-90 вес. %, который не только при-

дает пасте пластичность, но и является стабилизатором фермента. Из традиционных компонентов были включены ла-урилсульфат натрия как пенообразувдее вещество [1-2 вес. X], бензоат натрия как антисептик [1-2 вес. 7Л, фосфатный буфер для придания пасте нейтральной рН [0,5-1,0 вес. %], сахарин водорастворимый [0,1-0,2 вес. %], отдушка С1-2 вес.%], краситель СО,05-0,1 вес. %] для придания пасте хороших органолептических свойств. Разработанная зубная паста была названа "Клеродент".

При лабораторных исследованиях выяснилось, что комплекс иммобилизованных протеиназ совместим с традиционными компонента».™ зубной пасты, такими как бензоат натрия, сахарин, отдушки, красители . Лишь лаурилсуль-фат натрия снижает активность фермента на 25%.

Зубная паста "Клеродент" в течении года сохраняла свою специфическую активность при хранении в разных температурных условиях - +20'С и +6" С. При этом наблюдается снижение активности на 30% от исходного уровня в первые три месяца хранения, затем активность не меняется. Разработанная зубная паста обладает стабильностью рН среды -7,6±0,2 и хорошими пенообразующими свойствами в течении года С пенное число равнялось 425±25 смЗ.

Нами была определена острая токсичность пасты в эксперименте при однократном пероральном введении крысам Вистар 3 мл ферментативной зубной паста В результате эксперимента все животные остались живы, что говорит от отсутствии токсичности даже в такой дозе. При определении хронической токсичности изучали возможное действие новой зубной пасты на животный организм. Двум группам животных [ 12 опытных и 12 контрольных ] на протяжении 5 недель перорально вводили по 100 мг ферментативной зубной пасты [ опыт] и детской пасты "Антошка" [контроль]. В результате проведенного исследования было устаноп-^но, что группа опытных крыс не проявляла двигательного беспокойства при введении пасты, выглядела опрятнее, чище, чем контрольная группа Характер фекалий на протяжении опыта у всех живот-

ных не менялся. У всех животных контрольной и опытной групп обшэе количество лейкоцитов и эритроцитов не изменялось. У животных всех групп определялась крайне широкая индивидуальная вариабельность в скорости свертывания крови, что не позволило установить связь этого показателя с воздействием зубных паст. Наличие полиэти-ленгликоля в крови исследуемых животных на всех этапах эксперимента также не установлено. Прирост массы животных за время опыта бьш в пределах нормы. При морфологическом исследовании жизненно важных органов признаков их токсического поражения не обнаружено.

Одним из основных моментов работы было определение оптимальной концентрации: фермента в зубной пасте, которая бы позволила максимально устранять зубной налет и не оказывать при этом побочного действия. В ходе эксперимента проверяли кариеспрофилакгические свойства зубных паст с максимальным содержанием иммобилизованных протеиназ - 8,5-1,0 вес. % ["Клеродент 2"], со средним -2,5-5,0 вес. % С "Клеродент 1"], с минимальным -0,5-1,0 вес. % [ "Клеродент 3" 3.

Оказалось, что использование максимальной концентрации фермента не приводит к резкому повышению результатов. Показатели редукции индекса кариозности [РИК] моляров крыс по контактным поверхностям составили 54%, а по жевательным 44%. Они соответствуют данным при применении зубной пасты со средним содержанием иммобилизованных протеиназ -"Клеродента 1" С табл. 1 ]. РИК в опытной группе, где использовалась зубная паста "Мятная" составила по контактным поверхностям 38%, а по жевательным - 30%. Таким образом, противокариозный эффект зубной пасты "Клеродент 1" и "Клеродент 2" в 1,4 выше по сравнению с пастой "Мятная". Однако, использование максимальных концентраций иммобилизованных протеиназ экономически нецелесообразно. Понижение концентрации фермента [ "Клеродент 3" 1 приводит к снижению противо-кариозной эффективности. РИК по контактным поверхностям равняется 41%, а по жевательным - 32%, но остается выше

и

по сравнению с пастой "Мятная". Во время клинических исследований очищающих свойств ферментативных зубных паст мы наблюдали значительное уменьшение зубного налета [ Р<0,001 ] после каждой контролируемой чистки пастой "Клероденг 1" [ табл.2]. Средний ОНЬБ уменьшился с 2,30+0,08 до 0,85+0,07 балла на 28-й день пользования данной пастой. Ингибирование зубного налета при этом составило 66 X по сравнению с первым днем. Это в 1,6 раза эффективнее применения пасты "Мятная", где уменьшение зубного налета за месяц составило 41% I 0Н1 снизился с 2,25+0,06 до 1,21+0,08 при Р<0,001 ]. фи этом значения гигиенического индекса никогда не опускались ни*е едшпгцы.

Использование зубной пасты с минимальной концентрацией комплекса иммобилизованных протеиназ [ "Клеро-дент 3" ] не дает нужного очикщзцего действия, т.к. ингибирование зубного налета за месяц составило 46% С 0Н1 снизился с 2,27+0,01 до 1,21+0,06 при Р<0,001 ]. А повышение концентрации фермента [ "Клероденг 2" ] не приводит к повышению очищающего эффекта К тому же 80% пациентов, пользовавшихся этой пастой, отмечали появление оскомины на зубах, повышение болевой чувствительности на холодные и сладкие раздражители.

Одновременно нами была определена динамика образования налета на зубах в течении суток. При этом гигиенический индекс определяли через один, три и восемь часов после чистки зубов. Оказалось, что после чистки зубов пастой "Клеродент 1" гигиенический индекс снижается с 1,61 + 0,01 до 0,78+0,02 [ Р<0,01 ] на первый -третий час и к восьмому часу восстанавливается. После применения зубной пасты "Мятная" гигиенический индекс увеличивается через час и постоянно нарастает во времени С рис. 1 ]. Мы предполагаем, что гелевая зубная паста, задерживаясь в пришеечной области и межзубных промежутках, создает условия для пролонгированного действия активных компонентов пасты.

Нами было отмечено, что у ряда пациентов, пользо-

Таблица 1

Редукция индекса кариозности [ РИК ] по контактным и жевательным поверхностям моляров крыс в различных группах [ М+т ]

1 —....... 1 Показатели 1 группы 1 животных ■ 1 1 Индекс ка- 1 1 риозности 1 1 контактных 1 ! поверхнос- 1 1 тей 1 1 Индекс кариозности жевательных поверхностей РИК по контактным поверхностям 1 РИК 1 по жева- 1 тельным 1 поверх- 1 ностям 1

1 Контроль 1 486,8+0.4 1 374.2+0.7

1 "Мятная" 1 312.6±0.2 1 281,3+0,2 38% 30% 1

1 "Клеродент 1" 1 [2.5-5,0 вес.%] 1 224,4+1.4 1 £10,0+0,6 54% 43,8-44% 1

1 "Клеродент 2" ! [8,5-10,0 вес.%] 1 222,7+0.6 1 208,4+0,7 54% 44% 1

1 "Клеродент 3" 1 [0,5-1,0 вес.%] 1 1 285.1+0.6 1 1 I 265,2+0,6 1 41% 32% 1 |

Примечание: В таблице указаны только достоверные различия;

Р<0,05, степень достоверности рассчитана по отношению к значений индекса кариозности моляров крас контрольной группы.

Таблица 2

Показатели гигиенического индекса ОШ-Б при использовании ферментативных зубных паст и пасты "Мятная" [М+ш]

1 1 Зубная 1 паста ■ 1 1 Состояние 1 1 |_ Динамика гигиенического индекса ОШ-Б -■ ..... 1 [ДНИ] 1

1 г 1 1 1 1 1-й 7-Й 14-й 21-Й 1 28-й 1 1 |

1 "Мятная" 1 1 1 до чистки 1 1 1 1после чистки! 1 | 2,25+0,06 1.70+0,06 2,00+0.06 1,62+0,06 2.00+0.07 1.55+0.06 1.90+0,08 1,23+0,09 1 1 1 1,83+0,06 1 1 1 1 1,21+0,08 1 1 1

I "Клеродент 1" 1 | 1до чистки 1 1 1 1после чистки! 1 I 2,30+0.08 1,50+0,08 1.80+0.06 1.20+0,06 1,52+0,07 1,00+0.06 1,52+0.08 0.96+0,06 1 1 1 1.52+0,06 1 1 1 1 0,85+0,07 ! 1 |

1 "Клеродент 2" 1 1 1 до чистки 1 1 1 1 после чистки! 1 1 2,23+0,07 1,48+0,07 1,78+0,06 1,19+0,07 1.50+0,07 1,00*0,08 1,50+0,06 0,91*0,08 1 1 1 1,50±0,06 1 1 1 1 0.77±0,06 1 ! |

! "Клеродент 3" 1 .... 1 1 1 до чистки 1 1 1 1после чистки! 1 1 2,27+0.01 1.70+0,06 1,98+0,06 1,60+0.06 2,00+0,06 1,51+0.08 ........... _ 2.00±0,07 1,21+0,08 1 1 1 1,95*0,06 1 ! 1 1 1,21+0,06 1 1 1

Примечание: В таблице указаны только достоверные различия;

Р<0,001, степень достоверности рассчитана по отношению к значению гигиенического индекса до чистки зубов в первый день.

вавшихся зубной пастой с максимальным содержанием ферментного препарата наблюдались явления гиперзстезии эмали зубов. Это связано, по-видимому, с повреждением пелликулы и как следствием увеличением проницаемости эмали до 35,210,8 [ Р<0,001 ] в первые три часа после чистки . В дальнейшем, показатели теста эмалевой резистентности остаются выше исходного уровня -30,51-0,2 балла при Р<0,001 [ рис.2 3. У пациентов, чистящих зубы пастой с концентрацией фермента 2,5-5,0 вес. %, подобные явления не наблюдались, т. к. повышение проницаемости определялось только в первые три часа после чистки до 30,1±1,0 баллов СР<0,001], затем показатели теста эмалевой резистентности снижались до исходного уровня. При применении зубной пасты с минимальным содержанием фермента 11,0 вес. %] имеется тенденция к снижению показателей теста до 15,4±0,5 баллов [Р<0,001], что может отрицательно влиять на ионообменные процессы в эмали зубов.

Кариеспрофилакгический эффект зубной пасты "Клеро-денг" с оптимальным содержанием иммобилизованных проте-иназ, сравнивали с известной пастой "Чебурашка". Оказалось, что при регулярном применении пасты "Клеродент" лишь у 20% детей с полным отсутствием кариеса отмечалось появление свежих кариозных полостей временных зубов [ кп 0,2+0,1 ;Р<0,01 ], тогда как при использовании пасты "Чебурашка" мы наблюдали появление кариеса временных зубов в 100% случаях С кп 1,0±0,3; Р<0,01 ]. У детей с первой степенью активности кариозного процесса, чистящих зубы пастой "Клеродент", прирост интенсивности кариеса за год составил 37% [ кп с 2,4+0,9 до 3,3±0,2; Р<0,001 ] против 16% при использовании пасты "Чебурашка" [ кп с 3,1+0,2 до 3,6+0,1; Р<0,01 ], у детей со 2 степенью активности -7% [ кп с 5,7+0,4 до 6,1±0,2; Р<0,01 ] против 33% в контрольной группе С кп с 6,0+1,5 до 8,0+0,1; Р<0,05 ], у детей с 3 степенью активности -4% С кп с 9,9±0,01 до 10,3+0,1; Р<0,1] против 24% при применении пасты "Чзбурашка" С кп с 9,1±2,1 до

Индекс' 0Н1

[баллы] 2 1

п-30

до после 1 3 6-8 время [часы]

чистки чистки после примене-

ния паст

Рис.1. Динамика образования зубного.налета при чистке зубов гелеобразной ферментативной пастой "Клеродент" и гигиенической абразивной пастой "Мятная" в течение суток.

1 - показатели 0Н1 при использовании пасты

"Клеродент "

2 - показатели 0Н1 при использовании пасты "Мятная"

ТЭР

[баллы] 30

20

10

п-45

ДО

чистки

после чистки

1

5

8

время [часы] после применения паст

Рис. 2. Резистентность эмали зубов после использования зубной пасты "Клеродент" с различной концентрацией иммобилизованных протеолитических ферментов: 1 - 10,0 вес. X, 2 - 5,0 вес. X, 3 - 1,0 вес.Х.

11,3±0,9; Р<0,01 ]. Эти показатели интересны тем,что четко определяют патогенетическую профилактику кариеса вубов. Так, у кариесрезистентных детей на первое место выходит устранение вубного налета как фактора риска. Недостаточное удаление его привело к 100Х появлению кариеса у детей контрольной группы. При 1-й степени активности кариеса первостепенное значение приобретает повышение резистентности эмали, вот почему кариеспрофи-дактический эффект пасты "Чебурашка" в 2,3 раза вше ферментативной пасты. У детей со 2 и особенно с 3 степенью активности - кариесвосприимчивые воны вубов почти полностью реализованы и профилактические мероприятия должны быть направлены вновь на устранение зубного налета для уменьшения тяжести заболевания. Применение фгорсодержащэй пасты в этих случаях в 5-6 раз ниже действия ферментативной пасты.

Шкааатели интенсивности кариеса постоянных зубов [Щи] у детей в опытной и контрольной группах почти не тличавтся друг от друга. Так, в группах детей с отсутствием кариеса и с 1 степенью активности прироста кариозных полостей не наблвдалось в течении года. А у детей со 2 степенью активности кариеса, пользовавшихся пастой "Клеродент" прирост интенсивности равен 22% С КПа с 0,5±0,1 до 0,6+0,05; Р<0,05], у детей с 3 степенью активности - 20£_С КПп с 1,5+0,3 до 1,810,1; Р<0,001 ]. Цри применении пасты "Чебурашка" прирост интенсивности в этих же группах составил 25Х С КПп с 0,8+0,1 до 1,0+0,1; Р<0,02 ] и 20% £ КПп с 1,5±0,3 до 1,0+0,1; Р< 0,01 3. Дети с большой охотой чистили зубы пастой "Клеродент". Их привлекала яркость, прозрачность, приятный вкус пасты. Раздражавшего действия на слизистую оболочку полости рта за время исследования не обнаружено.

Итак, результаты проведенных исследований показали определенные достоинства разработанной ферментативной пасты "Клеродент". Предложенная зубная паста обладает достаточным очищающим и противокариозным действием, не

токсична и не оказывает отрицательного влияния на твердые ткани зубов. Следовательно, протеолитические иммобилизованные ферменты можно и нужно включать в состав лечебно-профилактических зубных паст.

Нужно отметать, что предложенная рецептура, зубной пасты не является до конца оптимальной и завершенной и служит основой для дальнейших научных разработок более эффективных средств профилактики. Так. иммобилизация ферментов позволяет совмещать несовместимые в природе ферменты - декстранааы и протеазы для комплексного воз^ действия на зубной налет. В состав гелеобразной ферментативной зубной пасты можно вводить вещества, повышающие резистентность эмали зубов. Ферментативная, обработка зубов будет создавать благоприятные условия для проникновения ионов фтора и кальция в кристаллическую решетку эмали. Введение в ферментативную зубную пасту антимикробных, кератопластических препаратов позволит эффективно использовать ее для профилактики и лечения воспалительных заболеваний пародонта. Таким образом, открывается широкая перспектива в разработке новых средств профилактики распространенных стоматологических заболеваний

ВЫВОДЫ

1. Экспериментально и клинически обоснована целесообразность включения в состав лечебно-профилактических зубных паст протеолигических иммобилизованных ферментов для профилактики кариеса зубов.

2. Экспериментально определена оптимальная концентрация иммобилизованных протеиназ в составе зубной пасты - 2,5-5,0 вес. X. Цри этом редукция индекса кари-озности моляров крыс по контактным поверхностям составила 54%, а по лввательным 44%, что в 1,4 раза эффективнее гигиенической пасты "Мятная".

3. Ферментативная активность иммобилизованных протеиназ в составе зубной пасты сохраняет свое специфи-

ческое действие в течении года одинаково в разных температурных режимах со снижением активности на 302 от исходного уровня. Зубная паста "Клеродент" обладает стабильностью) рН I 7,6±0,2 1, хорошими пенящимися свойствами, не токсична.

4. Зубная паста "Клеродент" обладает хорошим очшца-юсдам от зубного валета эффектом. Ингибирование зубного налета за 28 дней составила 662, что в 1,6 раза выше действия гигиенической пасты "Мятная". Наблюдалось дальнейшее снижение гигиенического индекса в первые три часа после чистки зубов ферментативной пастой, тогда как после чистки пастой "Мятная" отмечалось только повышение гигиенического индекса. 5. Пэсле чистки зубов пастой "Клеродент" повышается проницаемость эмали на первый - третий час в 1,2-1,6 раза, а через восемь часов проницаемость восстанавливается до исходного уровня.

5. Ферментативная зубная паста "Клеродент" обладает достаточным противокариозным действием при использовании ее у детей. Профилактический эффект у кариесре-зистентных детей по индексу кп в пять раз выше действия фгорсодержащей пасты "Чебурашка". Прирост интенсивности кариеса временных зубов у детей с 1-ой степенью активности составил 0,9+0,1, со 2-ой степенью - 0,4±0,2, с 3-ей - 0,4±0,03. Прирост интенсивности кариеса постоянных зубов по индексу КПП наблюдался только у детей со 2-ой и 3-ей степенью и составил 0,12+0,87 и 0,3+0,2 соответственно.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендуется применять гелеобразную ферментативную зубную пасту "Клеродент" для производства и широкого применения в качестве простого и эффективного средства индивидуальной гигиены полости рта.

2. Хорошие органолептические свойства и высокий ка-

риеспрофилактический эффект делают ее особенно привлекательной для использования у детей различных возрастных групп. Детям дошкольного возраста рекомендуем чистить зуба пастой один раз в день. Детям старшего ■ возраста и взрослым - два раза в день. Не рекомендуется тщательное полоскание после чистки зубов.

3. Выявленные особенности и закономерности профилактического воздействия ферментативной пасты рекомендуем использовать с целью дифференцированного подхода к назначению превентивных средств, повышающих результативность воздействия.

4. Детям, резистентным к кариесу, рекомендуем пользоваться ферментативной пастой в качестве удобного средства индивидуальной профилактики, не требующего длительной и трудоемкой чистки зубов.

5. Детям с 1-ой степенью активности кариеса рекомендуется сочетать применение ферментативной пасты со фторсодержащими пастами для усиления кариеспрофилакти-ческого эффекта

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сравнительная характеристика очищающего эффекта зубного налета гигиенической зубной пасты "Мятная" и гельной ферментсодержащей "Клеродент" // Новые методы диагностики, лечения и профилактики заболеваний. - Новосибирск. - 1990.-С. 315-317. [ в соавт. с О. Н. Толмачевой, А. М. Гончаром 3.

2. Токсикологическое исследование влияния фер-ментсодержащзй зубной пасты "Клеродент" на твердые ткани зубов и слизистую полости рта // Современные методы формирования протезного ложа в стоматологии. - Новосибирск. - 1991. Т. 140. С. 48-51 С в соавт. с В. И. Дерибас 3.

3. Влияние ферментативных зубных паст,содержащих иммобилизованные ферменты, на проницаемость твердых тканей зуба // Актуальные проблемы современной медицина - Новосибирск. 1992. - 0.120.

4. Противокариозная эффективность ферментативной .зубной пасты "Клеродент" в эксперименте // Вопросы стоматологии детского возраста - Новосибирск. - 1993. -Т. 147. С. 57-59 £ в соавт. с В. К. Леонтьевым, А. М. Гончаром 3.

ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Зубная паста С Положительное решение о признании новизны от 29.04.93 по заявке 4821454 ] С в соавт. с Р. И. Салгаником, А. Е Троицким, А. М. Гончаром 3.

2. Способ лечения кариеса зубов. [ Положительное решение о признании новизны от 29.04.93 по заявке 4736338 3 [ в соавт. с А. М. Гончаром, Е И. Дерибас, Р. Л Салгаником, А. Е Троицким ].

Зах .2 8 .Тир . 100 .Печ. л Л, 0 .Бум .писчая. Тиограняя СО РАМН г .Новосибирск 1994г.