Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Влияние топического глюкокортикостероида на экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови больных атопическим дерматитом.
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.03.09
Автореферат диссертации по медицине на тему Влияние топического глюкокортикостероида на экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови больных атопическим дерматитом.
На правах рукописи
005003768
ФИЛИМОНОВА ТАТЬЯНА МИХАИЛОВНА
ВЛИЯНИЕ ТОПИЧЕСКОГО ГЛЮКОКОРТИКОСТЕРОИДА НА ЭКСПРЕССИЮ ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ В КОЖЕ И ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ АТОПИЧЕСКИМ ДЕРМАТИТОМ
14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Москва, 2011 г.
- 8 ДЕК 2011
005003768
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учрежден «Государственный научный центр «Институт иммунологии» Федерально! медико-биологического агентства
Научные руководители:
кандидат медицинских нау Елисютина О.Г
доктор медицинских нау Болдырева М.Н.
Официальные оппоненты
доктор медицинских наук, профессор Лусс Л.]
доктор медицинских нау профессор Ревякина В./
Ведущая организация:
Российский национальный исследовательсю-
медицинский университет имени Н.И. Пирогова Минздравсоцразвития России.
Защита диссертации состоится «28» декабря 2011 года в 14 часов на заседат диссертационного совета Д 208.017.01 в ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБ России по адресу: 115478, Москва, Каширское шоссе, дом 24, корпус 2. Факс:(499)617-10-27.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ГНЦ Инстит; иммунологии» ФМБА России.
Автореферат разослан
Ученый секретарь диссертационного совета,
доктор медицинских наук
Л.С. Сеслави!
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. В настоящее время атопический дерматит (АтД) ляется важной медико-социальной проблемой, значимость которой определяется его фоким распространением: по данным разных авторов 15-24%, а в некоторых ологически неблагоприятных регионах около 50% населения, страдает этим болеванием. В последние годы наблюдается тенденция к развитию более тяжёлых, прерывно рецидивирующих форм заболевания, сопровождающихся изнурительным жным зудом, торпидных к традиционной терапии. Лечение больных АтД «дставляет сложную проблему ввиду особенностей патогенеза заболевания, югообразия фенотипических проявлений и стадийного течения процесса и, по общему гению исследователей, должно носить этиопатогенетический характер [Феденко Е.С., 105; Кунгуров Н.В., 2004].
Наружная терапия является неотъемлемой частью комплексного лечения АтД, нимая в ней ведущее место. Рациональное использование наружных лекарственных 1едств с учетом возраста больного, периода и тяжести заболевания в значительной епени повышает эффективность лечения и способствует регрессу кожного юпаления. Исчезновение или уменьшение кожных высыпаний и субъективных цущений, таких как, зуд, боль, жжение, благоприятно сказывается на общем •стоянии больного, улучшается качество жизни.
В соответствии с международным согласительным документом по АтД, принятым 2006 г., предложена ступенчатая схема наружной терапии в зависимости от стадии болевания, которая предусматривает использование топических юкокортикостероидов (ТГКС), ингибиторов кальциневрина, увлажняющих и (ягчающих средств в комплексе с элиминационными мероприятиями на всех стадиях болевания [Akdis С., 2006].
Наружную терапию следует проводить на фоне рационального ухода за кожей, >торьш включает в себя использование препаратов, направленных на восстановление /пкции эпидермального барьера. В настоящее время предпочтение отдается )епаратам с высоким содержанием липидов, идентичным липидам здоровой кожи. |)фективиость эмолиентов была продемонстрирована в нескольких мультицентровых ¡следованиях. В одном из исследований было показано, что увлажняющие препараты ¡ладают способностью уменьшать симптомы АтД, особенно связанные с сухостью,
нарушением барьерной функции кожи [Berardesca Е„ 2001; Mohammed D., 20 Simpson Е., 2010]. По данным других исследований оказалось, что применен эмолиентов приводит к существенному уменьшению потребности в ТГКС у больных АтД [Ghazvini et al., 2010; Kucharekova. et al., 2003].
Большинство существующих на сегодняшний день схем топической тераш основано на принципе использования ТГКС в период обострения АтД. В последи время все чаще выявляются случаи тяжелого течения АтД, резистентного традиционной наружной терапии, отмечается увеличение потребности в ТГК длительное применение которых в ряде случаев является необходимым, хотя неред: приводит к развитию как местных, так и системных побочных эффектов.
Препараты всех используемых групп показали свою клиническую эффективное однако до сих пор не определены критерии ее оценки с учетом иммунных маркер« воспаления в коже.
В связи с этим, локальный иммунный ответ в очаге поражения на разных стади) АтД, а также влияние на него различных видов топической терапии является предмете перспективного изучения.
Цель работы: Изучить экспрессию генов цитокинов в коже и периферическс крови у больных атопическим дерматитом под влиянием наружной терапии.
Задачи исследования:
1. Изучить экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови у здоровь доноров.
2. Изучить экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови у больнь АтД тяжелого и средне-тяжелого течения в сравнении со здоровыми донорами.
3. Изучить влияние ТГКС и эмолиентов на экспрессию генов цитокинов в коже периферической крови у больных АтД тяжелого и средне-тяжелого течения.
4. Оценить диагностическую значимость показателей экспрессии генов цитокинов коже и периферической крови больных АтД в зависимости от проведенной наружно терапии.
Научная новизна:
Впервые проведена оценка экспрессии генов цитокинов: IL1B, IL2, IL2r, IL4, IL5, IL6, IL7, ILS, ILIO, IL 12A, IL12B, IL15 (суммарный), IL15, IL17A, ILI8, IL23, IL28, IL29,
.у, TNF, TGFB1, F0XP3 в коже и периферической крови здоровых доноров и льных АтД разной степени тяжести.
Впервые выявлены маркеры локального иммунного воспаления на основании следования экспрессии генов цитокинов в коже больных АтД.
Впервые изучено влияние мометазона фуроата 0,1% крема и нейтрального лажняющего липидсодержащего средства на экспрессию генов цитокинов в коже и риферической крови больных АтД.
Практическая значимость работы:
Изученные показатели уровня экспрессии ряда генов иммунной системы в коже и риферической крови у здоровых доноров могут служить в качестве контроля при юведении научных исследований в области дерматологии, аллергологии, шунологии.
Показана целесообразность оценки экспрессии генов цитокинов в коже и риферической крови больных АтД для определения прогноза течения заболевания и |фективности наружной терапии.
Показана целесообразность локального исследования экспрессии генов цитокинов органе-мишене коже, что может быть использовано при разработке новых 1мунотропных препаратов местного действия.
Апробация работы:
По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ в материалах отечественных международных конгрессов и в центральной научной печати. Результаты следований были представлены на межрегиональном форуме «Актуальные вопросы лергологии и иммунологии - междисциплинарные проблемы» (2010 г., шкт-Петербург, Россия), на XI международном конгрессе «Современные проблемы шунологии, аллергологии и иммунофармакологии» (2011 г., Москва, Россия).
Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 120 страницах 1шинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных данных и шодов. Библиографический указатель включает 146 источников, в том числе 49 ечественных и 97 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 12 таблицами, 7 юунками, 8 фотографиями.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
За период с 2008 по 2011 гг. в клинике Института иммунологии на базе отделен «Аллергии и иммунопатологии кожи» обследовано 77 человек. В группу здоров] доноров (контрольная группа) вошло 20 человек, не страдающих аллергически] заболеваниями. Среди них было 14 женщин и б мужчин в возрасте от 19 до 32 лет. общую группу больных АтД вошло 57 человек. Среди них было 40 женщин и мужчин в возрасте от 18 до 45 лет. Диагноз АтД был установлен согласно критери Hanifin J. и Rajka G. (1980), модифицированным отечественными авторами отраженным в Российском национальном согласительном документе по АтД. В пациенты, вошедшие в исследование были в стадии обострения АтД, из них 19 челов с тяжелым течением АтД и 38 человек со средне-тяжелым течением АтД.
Исследование было проведено в два этапа. Во время первого этапа всем пациент было проведено комплексное клинико-лабораторное, аллергологическое иммунологическое обследование.
Клинико-лабораторное обследование включало в себя сбор анамнеза, осмо' лабораторные методы исследования, инструментальные методы, функциональн методы, которые проводили по общепринятым методикам.
Аллергологическое обследование больных включало сбор аллергологическо] фармакологического, пищевого анамнеза, кожные тесты с небактериальны! аллергенами, определение уровня общего IgE.
Иммунологические методы обследования включали определение уров сывороточных иммуноглобулинов класса A, M, G по методу Манчини. По показани проводилось определение общего числа лейкоцитов и лимфоцитов, определен процентного и абсолютного числа Т-лимфоцитов (CD3), определение субпопуляций лимфоцитов: хелперов/индукторов (CD4) и киллеров/супрессоров (CD8); определен процентного и абсолютного числа B-лимфоцитов (CD 19) в периферической кро! оценка фагоцитоза.
Всем больным и здоровым донорам было проведено исследование экспресс генов цитокинов: 111 В, 1L2, lL2r, IL4, IL5, IL6, IL7, IL8, ILIO, IL 12А, IL12B, IL (суммарный), IL15, IL17A, IL18, IL23, IL28, IL29, IFNy, TNF, TGFß, FOXPS периферической крови и в биоптатах кожи, взятых методом пункционной биопст
jop материала у больных АтД проводили до лечения в период обострения и на 14-й гнь наружной терапии, а у здоровых доноров - однократно.
Биопсийный материал был взят у 57 больных АтД из очагов пораженной кожи адней поверхности шеи, сгибательной поверхности локтевых и коленных суставов.
Пяти здоровым донорам из 20 была произведена одновременная пункционная иопсия с 3 различных по локализации участков кожи (задняя поверхность шеи, гибательные поверхности локтевых или коленных сгибов, наружная поверхность леча) для выявления возможных различий в показателях экспрессии генов цитокинов. ¡оскольку статистически значимых различий между показателями в биоптатах с этих частков выявлено не было, в дальнейшем 15 здоровым донорам пункционную биопсию кожи проводили только с одного участка - наружной поверхности плеча.
Пункционную биопсию производили в асептических условиях с помощью одноразового стерильного пробойника (Stumpp Medizintechnik GmbH, Германия) диаметром 3 мм под местной анестезией 2 %-м раствором лидокаина гидрохлорида.
Забор периферической венозной крови проводили в асептических условиях утром натощак из кубитальной вены в объеме 4 мл. Образцы крови забирали в пробирки с добавленной в качестве антикоагулянта динатриевой солью этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в конечной концентрации 2 мг/мл.
Уровень экспрессии генов цитокинов в коже и периферической крови больных АтД и здоровых доноров по количеству мРНК соответствующих генов определяли методом ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией, от. англ. reverse transcription polymerase chain reaction) в режиме реального времени. Для выделения РНК из клеток из периферической крови и кожи использовали твердотельный термостат «Термит» производства компании «ДНК-Технологии» (Россия). Для постановки обратной транскрипции использовали твердотельный термостат «Гном» производства компании «ДНК-Технология» (Россия). Постановку полимеразной цепной реакции в реальном времени проводили на детектирующем термоциклере «ДТ-96» «ДНК-Технология» (Россия). Учет результатов реакции осуществлялся автоматически с помощью программного обеспечения, поставляемого с детектирующим амплификатором. В биологических образцах, содержащих мРНК исследуемого цитокина, программа прибора фиксировала положительный результат и определяла значение индикаторного цикла (Ср) [Ребриков Д.В., 2009].
Количественный уровень исследуемых мРНК генов цитокинов выражали в относительных единицах, вычисленных по формуле:
[исследуемый IL]I[ HPRT1] = Е(НРЮТ)*Ср1/Е(и/1)*Ср2 (формула 1), где Е -эффективность амплификации,
Ср1 - значение индикаторного цикла в образце для нормировочного гена HPRT1 (фермент гипоксантин-гуанин фосфорибозилтрансфераза),
Ср2 - значение индикаторного цикла в образце исследуемого цитокина. Обработку данных в виде полученных в результате вычислений относительных единиц осуществляли с помощью программы MS Excel (Microsoft Corp., США).
На 2 этапе исследования из общей группы пациентов с АтД были отобраны 40 больных со средним (п=28) и тяжелым течением заболевания (п=12). Больные АтД были разделены на 2 группы методом парного контроля в зависимости от наружной терапии, применяемой для дальнейшего лечения (рис.1).
2-ая группа (п-20) Эяобейэ крем
14 дней 2 раза в сутки Ч_|_,/
Рисунок 1. Распределение больных АтД по группам в зависимости от применяемой наружной терапии.
Группы были сходные по полу, возрасту, по степени тяжести АтД, клиническим, аллергологическим, иммунологическим признакам.
Первую группу составили 20 пациентов, которые получали непрерывный курс лечения ТГКС (мометазона фуроат 0,1% крем), который относится к ТГКС сильной активности согласно европейской классификации [Miller J., Munro D., 1993]. Препарат наносили 1 раз в сутки в течение 14 дней на пораженные участки кожи. На протяжении
1-эя группа (п=20) Мометазона фуроат 0,1% крем
14 дней 1 раз в сутки
всего периода исследования больные АтД не получали ни системных ГКС, ни ТГКС других групп.
Вторую группу составили 20 пациентов, которые получали непрерывный курс лечения увлажняющим липидсодержащим кремом Элобейз, в состав которого входит очищенная вода, парафин белый мягкий, масло минеральное, спирт цетостеариловый, цетес-20, натрия дигидрофосфат дигидрат, хлорокрезол, кислота фосфорная, натрия гидроксид. Препарат наносили на пораженные участки кожи 2 раза в день в течение 14 дней.
Наряду с наружной терапией всем больным АтД назначали антигистаминную терапию - непрерывный курс лечения цетиризином в течение 10 дней в дозе 10 мг в сутки 1 раз в день.
Клиническую эффективность терапии оценивали на основании изменения индекса SCORAD (severity scoring of atopic dermatitis), исследовательской глобальной оценки (IGA - Investigators' Global Assessment) по 6 - балльной шкале, где 0 баллов - чистая кожа (без признаков воспаления), 1 балл - почти чистая кожа (едва определяемая эритема, единичные папулы), 2 балла - легкий АтД (слабая эритема, папулы, инфильтрация), 3 балла - среднетяжелый АтД (умеренная эритема, умеренно выраженные папулы), 4 балла - тяжелый АтД (выраженная эритема, инфильтрация, папулы), 5 баллов - очень тяжелый АтД (выраженные эритема, инфильтрация, папулы с образованием корочек), субъективной оценки интенсивности зуда и сухости кожи по 4-балльной шкале по отношению к исследуемому участку кожи, где 0 баллов соответствует отсутствию данного признака, а 3 балла - это максимальные клинические проявления данного признака.
Результаты исследования обработаны и сравнены статистически с использованием адекватных методов параметрической и непараметрической статистики. Проводили вычисление медианы и интерквартильного размаха (Me [Ql; Q3]), среднего арифметического значения соответствующего параметра и его стандартного отклонения (M±Sd), использовали двухсторонний критерий Фишера. Группы сравнивали с использованием непараметрического критерия Уилкоксона (для парных сравнений показателей внутри групп), U-критерия Манна-Уитни (для сравнения показателей между двумя независимыми группами).
Различия считали достоверными при р<0,05. Для нивелирования пробле. множественных сравнений применялась поправка Бонферрони: нулевые гипотез отклонялись при достигнутом уровне значимости р<0,0023.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ В общую группу больных АтД вошло 57 человек. Среди них было 40 женщин и ! мужчин в возрасте от 18 до 45 лет. В момент включения в исследование у всех ! больных отмечалось обострение АтД: поражение кожи носило распространеннь характер с локализацией на лице, волосистой части кожи головы, шее, спине, груд конечностях с преимущественным вовлечением сгибательной поверхнос лучезапястных, локтевых и коленных суставов, явлениями экссудации, инфильтраци выраженной сухости, шелушения кожи, присутствовал интенсивный зу усиливающийся в ночное время суток.
На момент включения в исследование средне-тяжелое течение АтД было у ! человек, медиана и квартили индекса ЗСОЯАО составили - 56,6 [<31=51,1; 03=62,:; индекс ЮА составил - 3,7 [01=3,3; 03=4,1]. Тяжелое течение АтД было у 19 челове медиана и квартили индекса БСОЯАО составили - 78,6 [01=59,7; (£3=85,2], индекс ГС составил - 4,7 [01=4,3; 03=4,8].
При сборе аллергологического анамнеза установлено, что большинство пациент« страдало АтД с раннего детского возраста с длительностью заболевания от 18 до 45 ле Дебют заболевания отмечен: у 35 пациентов (61,4%) - до 1 года, у 19 пациентов (33 %) - от 2 до 5 лет. Только у 3 пациентов (5,3%) симптомы АтД впервые возникли возрасте от 7 до 10 лет. У обследованных нами больных отмечалось продолжительн! рецидивирующее течение АтД. Частота обострений АтД варьировала от 5 до 12 раз год. Средняя частота рецидивов АтД в год у пациентов со средне-тяжелой степень тяжести заболевания - 5,2 ± 2,2, у пациентов с тяжелым течением АтД - 8,2±2, Длительность обострений колебалась от 7 до 21 дня.
На основании данных проведенного аллергологического обследования проведе) оценка спектра сенсибилизации к различным группам аллергенов у обследованнь больных. Сенсибилизация к бытовым аллергенам выявлена у 54 человек (94,7%), эпидермальным аллергенам - у 31 больного (54,4%). В 70,2% (40 человек) случа( выявлена клинически значимая сенсибилизация к пыльцевым аллергена] проявлявшаяся в виде пыльцевой бронхиальной астмы, аллергического ринит
.ергического конъюнктивита, и у 17 (29,8%) пациентов зафиксирована латентная :нсибилнзация к пыльцевым аллергенам. У 13 пациентов (22,8%) был выявлен эливалентный спектр сенсибилизации. При оценке клинических проявлений ¡нсибилизации у большинства пациентов АтД (56 человек - 98,2%) выявлены гспираторные проявления аллергии. Аллергический ринит выявлен у 54 человек '4,7%), атопическая бронхиальная астма - у 13 человек (22,8%). У 12 пациентов (21%) гмечено сочетание атопической бронхиальной астмы и аллергического ринита. У всех зциентов отмечался высокий уровень сывороточного IgE: 2056 МЕ/мл [1300; 5000] ри норме до 130 МЕ/мл.
Группу контроля составили 20 практически здоровых лиц без признаков атопии, из их 14 женщин и 6 мужчин, в возрасте от 19 лет до 32 лет, средний возраст и гандартное отклонение (M±Sd) - 22,2 (4,3) лет. При аллергологическом обследовании и у одного из доноров атопии выявлено не было.
При оценке уровня экспрессии генов цитокинов статистически значимых различий ежду показателями в биоптатах кожи шеи, сгибательных поверхностей конечностей, аружной поверхности плеча у 5 здоровых доноров выявлено не было.
При сравнении показателей экспрессии генов цитокинов в коже больных АтД ыявлено статистически значимо больший уровень экспрессии IL2R, IL5, IL6, IL8, ILIO, J2B, IL23, IL29, TGFß по сравнению со здоровыми донорами (табл. 1). Также выявлена сильная статистическая тенденция в отношении различий по признаку [FNy )=0,0024), свидетельствующая о его больших значениях у больных АтД по сравнению э здоровыми донорами. Статистически значимых различий по признакам IL1B, IL2, А, 117,1L12A, IL15 (суммарный), IL15, IL17A, IL18, IL28, TNF, FOXP3 не выявлено.
При исследовании экспрессии генов цитокинов в периферической крови здоровых эноров и больных АтД статистически значимых различий не выявлено (табл. 2).
Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии статистически значимых изменений показателей уровня экспрессии генов цитокинов в периферической крови у эльных АтД и у здоровых доноров, что позволяет сделать вывод о преобладании экального иммунного ответа в органе-мишени коже, характеризующего активность эспаления при тяжелом АтД.
Таблица 1.Уровнн экспрессии генов цитокинов в коже больных АтД (п=57) здоровых доноров (п=20) (медиана, верхний и нижний квартили).
Гены Здоровые доноры n=20 Больные АтД п=57 MannWhitney U-test, Р
;LIB 0,196 [0,096; 0,337] 0,061 [0,030; 0,117] 0,0056
IL2 0,002 [0,001; 0,006] 0,005 [0,003; 0,009] 0,0135
IL2R 0,003 [0,001; 0,006] 0,011 [0,007; 0,026] 0,000064 *
1L4 0,00004 [0; 0,00025] 0,0003 [0,00005; 0,0009] 0,0270
ILS 0,0003 [0,00009; 0,0008] 0,001 [0,0005; 0,003] 0,0021 *
IL6 0,0004 [0; 0,0000591 0,0005 [0,0001; 0,002] 0,000098 *
IL7 0,218 [0,139; 0,303] 0,139 [0,085; 0,362] 0,3324
IL8 0,005 [0,003; 0,011| 0,066 [0,029; 0,141] 0*
ILIO 0,0008 [0,0004; 0,00191 0,005 [0,003; 0,0131 0,000004 *
ILI2A 0,004 [0,002; 0,006] 0,003 [0,001; 0,005] 0,1033
IL 12В 0,001 [0,0002; 0,0032] 0,004 [0,003; 0,009] 0,00058 *
IL15 (суммарн.) 0,0043 [0,032; 0,064] 0,057 [0,037; 0,075] 0,1333
IL15 0,009 [0,007; 0,014] 0,009 [0,002; 0,016] 0,4924
IL17A 0 [0; 0,000412] 0 [0; 0,0008] 0,6303
IL18 2,107 [1,444; 2,462] 1,711 [1,319; 3,732] 0,9302
IL23 0,003 [0,002; 0,007] 0,007 [0,005; 0,0121 0,00205 *
IL28 0 [0; 0,0002] 0 [0; 0,004] 0,2514
IL29 0 [0; 0] 0,0005 (0; 0,001] 0,000252 *
IFNy 0,0009 [0,0005; 0,004] 0,003 [0,002; 0,0061 0,0024
TNF 0,057 [0,036; 0,121] 0,088 [0,045; 0,165] 0,2610
TGFß 1,018 [0,616; 1,444] 1,933 [1,366; 3,310] 0,00001 *
FOXP3 0,064 [0,051; 0,088] 0,072 [0,054; 0,105] 0,41
*Р < 0,0023
Таблица 2. Уровни экспрессии генов цитокинов в периферической крови здоровых доноров (п=20) и больных АтД (п=57) (медиана, верхний и нижний квартили).
Гены Здоровые доноры п=20 Больные АтД п=57 MannWhitney U-test, Р
IL1B 5,282 [3,427; 9,212] 5,756 [3,797, 7,337] 0,924
1L2 0,0005 [0,003; 0,007] 0,004 [0,003; 0,007] 0,818
¡L2R 0,0366 [0,023; 0,049] 0,037 [0,026; 0,059] 0,403
1L4 0,0053 [0,0006; 0,0105] 0,006 [0,004; 0,012] 0,086
IL5 0,00029 [0,00009;0,00029] 0,00031 [0,00018; 0,0006] 0,034
1L6 0,0016 [0,0012; 0,0025] 0,0013 [0,00098; 0,002] 0,168
IL7 0,038 [0,0296; 0,0,057] 0,045 [0,026; 0,058] 0,594
IL8 46,108 [38,054; 80,761] 48,091 [21,484; 60,767] 0,244
ILIO 0,0043 [0,0027; 0,0052] 0,0049 [0,003; 0,008] 0,385
IL12A 0,015 [0,0122; 0,024] 0,0175 [0,012; 0,025] 0,686
ILI2B 0,00063 [0,00045;0,00119] 0,0011 [0,0007; 0,0018] 0,022
IL15 (суммари.) 0,225 [0,157; 0,308] 0,233 [0,189; 0,308] 0,590
IL15 0,067 [0,036; 0,095] 0,055 [0,0384; 0,075] 0,686
IL17A 0,00016 [0; 0,0002] 0,00013 [0; 0,00043] 0,362
IIIS 0,107 [0,069;0,162] 0,133 [0,101;0,203] 0,092
IL23 0,074 [0,037;0,115] 0,053 [0,029;0,082] 0,174
IL28 0,00009 [0;0,00029] 0,00011 [0;0,00029] 0,731
IL29 0 [0; 0] 0 [0;0] 0,006
IFNy 0,0055 [0,0226;0,0743] 0,057 [0,0384;0,0964] 0,247
TNF 0,341 [0,2107;0,5645] 0,420 [0,329;0,671] 0,087
TGFß 13,516 [ 10,022; 19,073] 15,727 [13,225; 18,379] 0,118
FOXP3 0,160 [0,086;0,165] 0,131 [0,110;0,203] 0,118
*Р < 0,0023
На 2 этапе исследования из общей группы пациентов с АтД были отобраны 40 пациентов со средним (п=28) и тяжелым течением заболевания (п=12). Больные АтД были разделены на 2 группы методом парного контроля в зависимости от наружной терапии, применяемой для дальнейшего лечения. Исследуемые группы были однородными по клиническим, аллергологическим и иммунологическим признакам (табл.3).
Таблица 3. Клиническая, аллергологнческая и иммунологическая характеристика больных АтД групп 1 и 2 перед началом лечения (п=40).
Показатель Группа 1 (п=20) Группа 2 (п=20)
Возраст, М ($) 27,2 (6,4) 25,4(7,1)
Пол
Мужской 9 (45%) 6 (30%)
Женский 11(55%) 14(70%)
Показатели оценки степени тяжести заболевания
Длительность АтД (годы), 18 [<31=15; <3з=45] 16 [<31=13; <33=40]
Ме[<21;(}31_
Индекс 10А, Ме [<31; <33 ] 4,1 [<3,=3,7; (Ъ=4,81 3,8 [<31=3,1; <33=4,51
Индекс БССЖЛО, Ме [()1; <33 ] 76,4 [С>|=57,3; <3з=84,5] 68,4 [<31=52,3; <33=80,1]
Средняя частота рецидивов М ±ш 5,9±2,1 6,1±1,9.
Возраст начала заболевания
до 1 года (число пациентов) 13(65%) 15(75%)
с 2 до 5 лет (число пациентов) 4 (20%) 3(15%)
с 6 лет (число пациентов) 3 (15%) 2(10%)
Результаты аллергологического обследования
^Е общ., МЕ/мл, Ме [С? 1; <53 ] 2045 [(21 = 1500; (23=5300] 2470 МЕ/мл [<31=1400;
<33=61001
Эозинофилы, %, Ме [<31; <33 ] 12,6 [(31=7,8; <33=15,7] 10,9 % [<31=6,0; <33=18,0]
Аллергический ринит (число пациентов) 20(100%) 17(85%)
Бронхиальная астма 3(15%) 5 (25%)
(число пациентов)
Сенсибилизация к бытовым аллергенам 19 (95%) 17(85%)
(число пациентов)
Сенсибилизация к эпидермальным 11 (55%) 6 (30%)
аллергенам (число пациентов)
Сенсибилизация к пыльцевым аллергенам 13 (65%) 12(60%)
(число пациентов)
Латентная сенсибилизация к пыльцевым 6 (30%) 10(50%)
аллергенам (число пациентов)
Сенсибилизация к пищевым аллергенам 11 (55%) 8 (40%)
(число пациентов)
Поливалентная сенсибилизация 4 (20%) 3(15%)
(число пациентов)
На фоне проводимой наружной терапии мометазона фуроатом 0,1% кремом в течение 14 дней у большинства больных АтД из группы 1 отмечалось значительное уменьшение основных симптомов заболевания, таких как зуд, сухость кожи, уменьшение площади поражения кожи, количества высыпаний, что отразилось в статистически достоверном уменьшении медианы и квартилей индекса 8С01ЪШ с 76,4 [(21=57,3; (23=84,5] до 28,3 баллов[<21=23,5; (23=42,5] , индекса ЮА с 4,1 [<21=3,7; С>3=4,8] до 1,8 [(21=1; С>3=1,8] баллов, а также в уменьшении средних значений субъективных оценок зуда и сухости кожи с 2,8±1,3 до 1,6+1,2 и с 2,6±1,4 до 1,8±1,4 (р<0,05 по критерию Уилкоксона). В группе 2, использовавшей крем элобейз, также отмечалось некоторое уменьшение основных симптомов заболевания, таких как зуд, сухость кожи и количества высыпаний, что отразилось в тенденции к уменьшению медианы и квартилей индекса БСОЯАВ с 68,4 и [(21=52,3; (23=80,1] до 48,4 баллов[(21=32,6; (23=54,4] и индекса ЮАс 3,8 [<21=3,1; (23=4,5] до 2,9 [<21=2,4; <23=3,8] баллов, а также индекса зуда кожи с 2,9+1,4 до 2,4+1,8, однако уменьшение значений данных показателей было статистически недостоверно. В группе 2 статистически достоверное уменьшение значений было выявлено только в отношении показателя индекса сухости кожи с 2,8±1,3 до 2,0±1,4 (р<0,05 по критерию Уилкоксона) (рис. 2, 3).
группа 1
группа 2
Индекс Индекс сухости зуда
ЮА
чЗ 2
Индекс Индекс сухости зуда
ЮА
■ 0 день □ 14 день
* - (р<0,05 по критерию Манна -Уитни).
Рисунок 2. Оценка клинической эффективности лечения в группах 1 и 2 (п=40). По
оси абсцисс - индексы зуда, сухости кожи и исследовательская глобальная оценка ЮА, по оси ординат - шкала в баллах.
■ О день □ 14 день
Группа ]
Группа 2
* - (р<0,05 по критерию Манна -Уитни).
Рисунок 3. Оценка индекса вСОЯАБ у больных с АтД в группах 1 и 2 до и после лечения. По оси абсцисс — группы больных АтД, по оси ординат - значение индекса БСОКАБ в баллах.
Таким образом, применение мометазона фуроата 0,1% крема приводит к достоверному уменьшению основных симптомов АтД, а именно, к уменьшению инфильтрации, воспаления, интенсивности зуда, площади поражения кожи в отличие от крема элобейз, что свидетельствует о противовоспалительных свойствах мометазона фуроата и о его высокой эффективности при АтД. Применение крема элобейз у больных с АтД приводит к достоверному уменьшению сухости кожи, а также к тенденции уменьшения зуда и воспаления.
При сравнении показателей экспрессии генов цитокинов в коже у больных АтД из группы 1 в период обострения до начала лечения и на 14-й день лечения отмечено достоверное уменьшение уровня экспрессии генов ряда провоспалительных цитокинов: IL2, IL2r, IL8, IL12B, 1L23, IFN% а также противовоспалительного цитокина IL5. При сравнении этих же показателей в коже у больных АтД из группы 2 в период обострения до начала лечения и на 14-й день лечения отмечено достоверное уменьшение уровня экспрессии генов регуляторного цитокина IL7 (р=0,0043) и провоспалительного цитокина IL17A (р=0,0117). Статистически значимых различий по остальным признакам в отличие от группы 1 выявлено не было. В таблице 4 указаны значения экспрессии генов цитокинов у больных АтД в группах 1 и 2 до и после лечения мометазона фуроатом 0,1% кремом и кремом элобейз.
Таблица 4. Уровни экспрессии генов цитокинов в коже больных АтД до и после
лечения в группах 1 и 2 (п=40) (медиана, верхний и нижний квартили).
Ген Группа 1 (п=20) Группа 2 (п=20)
0 день Ме [<31;(33] 14 день Ме [<51 ДО] Р критерий Уилкоксона^ ) день Ме [<31;<23] 14 день Ме [<51;<}3] )(критерий Уилкоксона)ц
\В 0,0544 [0,0292; 0,0884 0,0594 [0,0341,0,107] 0,91082 0,0797 [0,0385; 0,1015] 0,1015 [0,0474,0,1436] 0,53369
■> 0,0054 [0,0039; 0,0107 0,0033 [0,002; 0,0042] 0,00999* 0,0096 [0,0031; 0,0221] 0,0078 [0,0042; 0,0136] 0,7221
1г 0,0123 [0,0056; 0,0249 0,0052 [0,0026; 0,0093] 0,00803* 0,0146 [0,0093; 0,0625] 0,0103 [0,0068; 0,0359] 0,85886
4 0,0003 [0,0000; 0,0009 0 [0; 0,0003] Р,42652 0,0002 [0,0001; 0,001] 0,0004 [0; 0,0009 0,78967
5 0,0014 [0,0003; 0,0028 0 [0,0000; 0,0007] 0,00568* 0,0017 [0,0005; 0,0032] 0,0005 [0; 0,0007] 0,05933
6 0,001 [0,0001; 0,0023 0 [0; 0,0013] 0,13593 0,0004 [0,0002; 0,0053] 0 [0; 0,0003] 0,05933
7 0,1490 [0,0901; 0,4204 0,2377 [0,1195; 0,3602] 0,7089 0,2872 [0,0947; 0,5339] 0,5743 [0,3299; 0,9330] 0,00443*
8 0,0573 [0,0292; 0,1287 0,0148 [0,0052; 0,0278] 0,00511 * 0,067 [0,0312; 0,1294] 0,0254 [0,0127; 0,0825] 0,42359
10 0,0056 [0,0032; 0,0162 0,0093 [0,0039; 0,0129] 0,658 0,0045 [0,0016; 0,0167] 0,0045 [0,0013; 0,0055] 0,59371
12А 0,0027 [0,0016; 0,0067 0,0048 [0,0033; 0,0072] 0,09296 0,0028 [0,0011; 0,0073] 0,003 [0,0021; 0,0045] 0,65664
12В 0,0043 [0,0018;0,0121] 0,0011 [0;0,0023] 0,0089* 0,0031 [0,0026; 0,0048] 0,0008 [0,0001;0,0036] 0,286
15 /мм.) 0,0604 [0,0440; 0,0693 0,0625 [0,0375; 0,077] 0,52565 0,0693 [0,0604; 0,1539] 0,1436 [0,0884; 0,1895] 0,10951
15 0,0065 [0,0032; 0,0127 0,0004 [0,0019; 0,0072] 0,26272 0,0245 [0,0114; 0,0385] 0,0359 [0,0272; 0,0474] 0,13066
17А 0 [0; 0,0014] 0 [0; 0] 0,0166 0,0003 [0; 0,0008] 0 [0; 0] 0,01171*
418 1,6818 [1,2И6;3,6072] 3,6245 [2,5941;4,6058] 0,13649 1,8661 [1,5157;4,4383] 3,249 [3,0314;5,278] 0,06188
23 0,0076 [0,0056;0,110] 0,0023 [0,0016;0,004[ 0,00116* 0,009 [0,0039;0,0179] 0,0042 [0,0021;0,0068] 0,07536
28 0[0;0,0004] 0,0000 [0;0] 3,04986 0[0;0,0006] 0 [0;0,0003] 0,34544
29 0,0007 [0; 0,0016] 0 [0;0] 0,01922 0,0007 [0; 0,0022] 0[0;0] 0,12819
Ген Группа 1 (п=20) Группа 2 (п=20)
Одень Me [Q1;Q3] 14 день Me [Q1;Q3] р(критерий Уилкоксона) 0 день Me [Q1;Q3] 14 день Me [Q1;Q3] р(критерий Уилкоксона)
¡FN-) 0,003 [0,002;0,0046] 0,0014 [0,0003 ;0,002] 0,00033* 0,0059 [0,0025;0,0096] 0,0034 [0,0017:0,0045] 0,11412
TNF 0,1034 [0,0605;0,232] 0,116 [0,0423;0,2224] 0,97022 0,1015 [0,0625:0,1768] 0,1768 [0,1166:0,2176] 0,286
TGFÜ 2,3798 [1,4953:4,2191] 2,0755 [1,3918;2,8352] 0,47812 2,1435 [1,5692;4,4383] 2,1435 [1,4142:2,639] 0,7221
FOXP3 0,0839 [0,0596;0,1074] 0,0718 [0,0566:0,1051] 0,43304 0,0583 [0,0412;0,0743] 0,0442 [0,0359:0,067] 0,65664
*Р < 0,0023
Таким образом, при сравнении полученных результатов до и после лечения мометазона фуроатом 0,1% кремом отмечено уменьшение уровня экспрессии генов провоспалительных цитокинов.- IL2, IL2r, IL8, 1L12B, IL23, IFNy и гена противовоспалительного цитокина IL5, являющихся маркерами хронического воспаления и сдвига иммунного ответа в сторону Th-1, что может свидетельствовать об уменьшении хронического воспаления в коже. Полученные нами данные показали иммунотропную активность мометазона фуроата 0,1% крема, заключающуюся в положительном влиянии на локальный иммунный ответ в коже у больных АтД, что отражается в уменьшении экспрессии генов как провоспалительных, так и противовоспалительных цитокинов. Напротив, у больных из группы 2, использовавших крем элобейз, выявлено только достоверное уменьшение уровня экспрессии генов регуляторного цитокина IL7 и провоспалительного цитокина IL17A. Полученные нами данные показывают, что крем элобейз оказывает локальное влияние только на экспрессию генов регуляторных цитокинов.
При сравнении показателей экспрессии генов цитокинов в периферической крови у больных АтД из группы 1 до лечения в момент обострения заболевания и через 14 дней после лечения отмечено достоверное уменьшение уровня экспрессии генов регуляторных цитокинов TGF0 (р=0,015241), FOXP3 (р=0,013742). При сравнении показателей экспрессии генов цитокинов в периферической крови у больных АтД из группы 2 до начала лечения и на 14-й день лечения достоверных различий по всем исследуемым признакам не выявлено. В таблице 5 указаны значения экспрессии генов цитокинов в периферической крови у больных АтД до и после лечения мометазона фуроатом 0,1% кремом и кремом элобейз.
Таблица 5. Уровни экспрессии генов цитокинов в периферической крови больных АтД до лечения и после лечения мометазона фуроата 0,1 % кремом (п=20)
(медиана, верхний и нижний квартили).
Ген Группа 1 (п=20) Группа 2 (п=20)
Одень Ме [(?1,С?3] 14 день Ме [01,(33] ) (критерий Уилкоксона) 0 день Ме [(} 1,(33] 14 день Ме [(21,03] ) (критерий Уилкоксона)
ЛВ 4,9774 [2,5509;7,46426] 3,42701 [2,34071,4,75969] 0,092964 6,06287 [4,43828;8] 4,59479 [3,249; 9,18959] 0,78967
.2 0,00466 [0,003 59;0,0072] 0,0033 [0,002; 0,00534] 0,313464 0,00449 [0,00317; 0,00755] 0,00635 [0,00258;0,00897] 0,328066
,2г 0,03857 [0,03075;0,0604] 0,02586 [0,01735; 0,04344] 0,047858 0,05831 [0,01858; 0,13397] 0,125 [0,10153; 0,17678] 0,061885
,4 0,00783 [0,00457;0,0127] 0,004 [0,00114; 0,00853] 0,033341 0,02916 [0,00897; 0,03847] 0,02916 [0,00897; 0,03847] 0,073346
0,00032 [0,00018;0,0008] 0,00019 [0,00007; 0,0003] 0,053407 0,00022 [0,00012; 0,00043] 0,00008 [0; 0,00019] 0,092602
16 0,00165 [0,00121;0,0024] 0,0012 [0,00058; 0,00165] 0,204331 0,00112 [0,00052; 0,00159] 0,0024 [0,00148; 0,00419] 0,005062
!.7 0,04419 [0,02653;0,0534] 0,03235 [0,02172; 0,03653] 0,147417 0,04419 [0,01858; 0,05831] 0,07179 [0,05831; 0,14359] 0,710861
18 40,13944 [26,92485;65,20] 29,70172 [18,70324;60,7670] 0,191335 59,71411 [39,39662;66,2569] 55 [25,99208;73,5166] 0,789675
110 0,00669 [0,00371;0,0103] 0,00468 [0,00254; 0,01297] 0,940481 0,00328 [0,00209; 0,00515] 0,00419 [0,003; 0,00718] 0,050461
112А 0,01416 [0,01248;0,0307] 0,01269[0,01144; 0,01513] 0,073139 0,02538 [0,01924; 0,03125] 0,02368 [0,01924; 0,01924] 0,59371
112В 0,00140 [0,00074;0,0020] 0,0087 [0,0072; 0,0118] 0,05734 0,00088 [0,00035; 0,00195] 0,0004 [0,00026; 0,00064] 0,06188
115 :умм) 0,21393 [0,16785;0,2773] 0,19984 [0,11464; 0,28717] 0,204331 0,27739 [0,1894; 0,46652] 0,53589 [0,40613; 0,70711] 0,059337
115 0,05444 [0,03915;0,0730] 0,0508 [0,02844; 0,08392] 0,822761 0,07433 [0,03235; 0,13397] 0,15389 [0,11663; 0,25] 0,07992
117А 0,00005 [0; 0,00046] 0,00007 [0; 0,00021] 0,408045 0,00015 [0, 0,00024] 0,00023 [0,0001 0,00046] 0,284504
Ш18 0,11074 [0,09005 ;0,1784] 3,12072 [0,09652;0,16494] 0,575487 0,20306 [0,0915;0,26794] 0,11663 [0,04419;0,16494] 0,091162
123 0,05835 [0,03 5 01 ;0,1034] 0,05089 [0,03142;0,09675] 0,910827 0,03349 [0,1795;0,07695] 0,08247 [0,03847;0,11663] 0,154861
128 0,00012 [0;0,0005] 3,0001 [0;0,00022] 0,652918 0,00021 [0;0,00033] 0,00079 [0;0,00159] 0,050613
Ген Группа 1 (п=20) Группа 2 (п=20)
0 день Me [Q1,Q3] 14 день Me [Q1,Q3] р(критерий Уилкоксона) Одень Me [Q1,Q3] 14 день Me [Q1,Q3] р (критерш Уилкоксона
IL29 0 [0; 0] 0 [0;0] 0,464532 0[0; 0] 0[0; 0] 0
IFN-) 0,04419 [0,03847;0,0604] 0,05845 [0,03421;0,08252] 0,125860 0,05256 [0,02368;0,1387] 0,05831 [0,02916;0,08247] 0,79886
THF 0,37248 [0,31883,0,6713] 0,54534 [0,21547 ;0,71957] 0,851925 0,5 [0,25:0,87055] 0,53589 [0,35355:1] 0,284504
TGF0 16 [13,69158;18,70] 13,48668 [10,5624;15,74638] 0,015241* 17,14838 [10,55606:25,9920] 21,11213 [17,1121:17,14838] 0,15486
FOXP3 0,15932 [0,12287;0,2524J 0,15399 [0,09312;0,17076] 0,013742* 0,125 [0,08538:0,21022] 0,14359 [0,13397:0,18946] 0,79886
*Р < 0,0023
По данным последних зарубежных исследований количество РОХРЗ-регуляторных клеток прямо коррелирует с тяжестью воспалительного процесса при АтД: у больных с обострением заболевания было выявлено увеличение РОХРЗ-положительных CD4+CD25+-T-KneTOK [Ito Y., 2009]. Возможно, уменьшение экспрессии гена FOXP3 у больных АтД на фоне лечения мометазона фуроатом 0,1% кремом обусловлено изменением системного иммунного ответа на фоне выраженного уменьшения аллергического воспаления в коже.
Некоторые авторы отмечают, что в условиях хронизации аллергического воспаления выявляются Т-регуляторные клетки (ТРК), маркером которых является цитокин TGF/3. Известно, что он изменяет обычный эффект 1L4 и приводит к формированию Thl -ответа при активации Т-наивных лейкоцитов. Таким образом, можно предположить, что именно активация Т-регуляторных клеток, продуцирующих данный цитокин, приводит к включению в патологический процесс Thl-лимфоцитов и, соответственно - к хронизации воспаления. Уменьшение экспрессии гена данного цитокина на фоне лечения мометазона фуроатом 0,1% кремом может косвенно свидетельствовать о его влиянии на ТРК.
При сравнении результатов по разности показателей (между оценкой к 14 дню исследования и начальной оценкой) выявлены статистически достоверные различия по признакам IL4 и IL8 в коже больных АтД из групп 1 и 2. Таким образом, на фоне терапии мометазона фуроатом 0,1% кремом отмечено достоверно большее уменьшение экспрессии генов провоспалительных цитокинов JL4 и 1L8 по сравнению с группой больных, использовавших крем элобейз. При оценке разности остальных исследуемых иммунологических параметров в коже достоверных различий между группами выявлено
не было. При сравнении результатов по разности показателей в периферической крови (между оценкой к 14 дню исследования и начальной оценкой) выявлены статистически достоверные различия по признаку FOXP3 у больных АтД между группами 1 и 2. Таким образом, на фоне терапии мометазона фуроатом 0,1% кремом отмечено достоверно большее уменьшение экспрессии гена FOXP3 по сравнению с группой больных, получавших крем элобейз, где была выявлена даже некоторая тенденция к увеличению данного показателя. При оценке разности остальных исследуемых иммунологических параметров в крови достоверных различий между группами выявлено не было (рис. 4).
FOXP3 кровь
IL8 кожа
И4 кожа
-0,06 -0,04 -0,02 0 0,02
□ группа 1 И группа 2
* - (р<0,05 по критерию Манна -Уитни).
Рисунок 4. Сравнение экспрессии генов цитокинов в коже и крови по разности показателей (между оценкой к 14 дню исследования и начальной оценкой) у больных АтД из групп 1 и 2. По оси абсцисс - разности показателей, по оси ординат - показатели цитокинов.
Таким образом, полученные нами данные подтверждают преобладание ТЫ ответа в коже больных АтД средне-тяжелого и тяжелого течения. В результате проведенного исследования также показана иммунотропная активность мометазона фуроата крема 0,1% за счет его влияния на экспрессию ряда провоспалительных цитокинов в органе-мишени коже и механизмы системной иммунорегуляции у больных АтД со средним и тяжелым течением заболевания. Полученные результаты могут быть использованы для разработки критериев эффективности наружной терапии и оптимизации лечения АтД.
выводы
1. При исследовании экспрессии генов дитокинов в коже у здоровых доноров достоверных различий между разными участками кожи (задняя поверхность шеи, сгибательная поверхность коленных и локтевых суставов) не выявлено.
2. При исследовании иммунного ответа в коже у больных АтД выявлена экспрессия генов следующих провоспалительных цитокинов: IL2r (р=0,000064), IL8 (р=0), lL12B(p=0,00058), IL23 (р=0,00205), 1L29 (р=0,000252), IFNy (р=0,0024), TGFß (р=0,00001) и противовоспалительных цитокинов IL5 (р=0,000098), ILIO (р=0,000004) по сравнению со здоровыми донорами.
3. Различий в показателях экспрессии генов цитокинов в периферической крови у больных АтД тяжелого и средне-тяжелого течения и у здоровых доноров не выявлено.
4. Наружная терапия мометазона фуроатом 0,1% кремом уменьшает экспрессию генов цитокинов IL2 (р=0,0099), IL2r (р=0,008), IL8 (р=0,005), IL12B (р=0,0089), IL23 (р=0,00116), IFNyfp=0,00033) в коже у больных АтД по сравнению с кремом элобейз.
5. Достоверное снижение показателей экспрессии генов регуляторных цитокинов FOXP3 и TGFß в периферической крови у больных АтД на фоне лечения мометазона фуроатом 0,1% кремом можно рассматривать в качестве критерия уменьшения аллергического воспаления.
6. Показатели экспрессии генов следующих цитокинов lL2r, IL6, 1L8, IL 12В, IL23, IL29, TGFß, ! F N'y в коже являются маркерами хронического воспаления и преобладания Thl ответа у больных с тяжелым и средне-тяжелым течением АтД и могут изменяться в ответ на терапию.
Список работ, опубликованных по теме диссертации:
1. Елисютина О. Г., Лапшин H.H., Филимонова Т.М., Цывкина Е.А. Возможности современных увлажняющих препаратов в восстановлении функции кожного барьера у больных атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал, 2009, №4, стр. 75-81.
2. Филимонова Т.М., Елисютина О.Г., Феденко Е.С., Болдырева М.Н., Смирнов B.C. Влияние иммунотропной наружной терапии на экспрессию генов цитокинов в коже и
периферической крови больных атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал, 2010, №4, стр. 40-45.
3. Филимонова Т.М., Елисютина О.Г., Феденко Е.С., Бурменская О.В., Болдырева М.Н., Смирнов B.C. Влияние топических глюкокортикостероидов на экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови больных атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал, 2011, №3, стр. 19-30.
4. Филимонова Т.М., Елисютина О. Г., Феденко Е. С., Ниязов Д.Д., Болдырева М. Н., Бурменская О.В., Реброва О. Ю. Локальный и системный иммунный ответ у больных с тяжелым атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал, 2011, № 5, стр. 10-15.
5. Филимонова Т.М., Елисютина О. Г., Феденко Е. С., Болдырева М. Н., Бурменская О.В., Реброва О. Ю., Ярилин A.A., Хаитов P.M. Экспрессия генов цитокинов в коже и периферической крови больных атопическим дерматитом и здоровых доноров. Российский аллергологический журнал, 2011, №4, вып.1, стр. 398-400.
6. Филимонова Т.М., Елисютина О.Г., Феденко Е.С., Болдырева М.Н. Изучение влияния топических глюкокортикостероидов на экспрессию генов цитокинов у больных у больных атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал, 2010, №1, вып.1, стр. 178.
7. Филимонова Т.М., Елисютина О.Г., Феденко Е.С., Болдырева М.Н., Смирнов B.C. Влияние иммунотропного препарата крема тимоген 0,05% на экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови больных атопическим дерматитом. Российский аллергологический журнал, 2010, №5, вып.1, стр. 312-313.
Подписано в печать 17.11.11 Формат 60x84/16. Бумага офисная «БуеЮСору». Тираж 100 экз. Заказ № И72 Отпечатано на УМТ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН 115478, г. Москва, Каширское ш., 24
Оглавление диссертации Филимонова, Татьяна Михайловна :: 2011 :: Москва
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Общие сведения об АтД.
1.2. Генетические аспекты АтД.
1.3. Аспекты патогенеза АтД.
1.3.1. Роль цитокинов в патогенезе АтД.
1.3.2. Характеристика иммунологических параметров в периферической крови и коже у больных АтД.
1.4. Влияние наружной терапии на иммунные механизмы АтД.
1.4.1. Влияние эмолиентов на иммунный ответ при АтД.
1.4.2. Механизм действия топических глюкокортикостероидов.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Исследуемые группы больных.
2.2. Методы клинико-лабораторного обследования.
2.3. Методы аллергологического обследования.
2.4. Методы иммунологического обследования.
2.5. Препараты, применяемые при лечении АтД.
2.6. Методы оценки степени тяжести АтД.
2.7. Формирование подгрупп больных АтД и схемы лечения.
2.8. Статистический анализ.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Клиническая характеристика больных АтД.
3.1.1. Общая характеристика группы.
3.1.2. Данные аллергологического обследования общей группы.
3.1.3. Данные общеклинического обследования общей группы.
3.2. Клиническая характеристика группы здоровых доноров.
3.3. Сравнение экспрессии генов цитокинов в коже и периферической крови больных АтД и здоровых доноров.
3.3.1. Сравнение экспрессии генов цитокинов в коже у больных АтД и здоровых доноров.
3.3.2. Сравнение экспрессии генов цитокинов в периферической крови больных АтД и здоровых доноров.
3.4. Клиническая, аллергологическая и иммунологическая характеристика больных АтД до проведения наружной терапии.
3.5. Влияние ТГКС на экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови больных АтД.
3.5.1. Оценка клинической эффективности лечения мометазона фуроат 0,1% кремом в сравнении с кремом элобейз у больных АтД.
3.5.2. Влияние мометазона фуроат 0,1 % крема на иммунологические параметры в коже и периферической крови у больных АтД в сравнении с кремом элобейз.
Введение диссертации по теме "Клиническая иммунология, аллергология", Филимонова, Татьяна Михайловна, автореферат
Актуальность темы диссертации
В настоящее время АтД является важной медико-социальной проблемой, значимость которой определяется его широким распространением: по данным разных авторов 15-24%, а в некоторых экологически неблагоприятных регионах около 50% населения страдает этим заболеванием. У 45% детей АтД развивается в течение первых 6 месяцев жизни, у 60% - в течение первого года и, по крайней мере, у 85% - в течение первых 5 лет. В зрелом возрасте АтД развивается только у 16,8% больных [24, 41]. В последние годы отмечается интенсивный рост заболеваемости АтД, что связано с загрязнением окружающей среды, употреблением продуктов питания, обладающих высоким аллергенным потенциалом, укорочением сроков грудного вскармливания и другими причинами [34,38,41]. Кроме того, наблюдается тенденция к развитию более тяжёлых, непрерывно рецидивирующих форм заболевания, сопровождающихся изнурительным кожным зудом, торпидных к традиционной терапии. АтД, начинающийся в '' раннем детском возрасте, часто сопровождает больных всю жизнь и проявляется обострениями различной степени тяжести.
Мультифакториальная концепция патогенеза АтД и выявленные нарушения при исследовании различных органов и систем обосновывают применение в терапии больных широкого спектра лечебных мероприятий, некоторые из которых стали называться традиционными: гипоаллергенная диета, дезинтоксикационные, антигистаминные, седативные, ферментные, разнообразные наружные препараты. Лечение больных АтД представляет сложную проблему ввиду особенностей патогенеза заболевания, многообразия фенотипических появлений и стадийного течения процесса и, по общему мнению исследователей, должно носить этиопатогенетический характер.
Наружная терапия является неотъемлемой частью комплексного лечения АтД, занимая в ней ведущее место. Рациональное использование наружных лекарственных средств с учетом возраста больного, периода и тяжести заболевания в значительной степени повышает эффективность лечения и способствует регрессу кожного воспаления. Используемые при этом лекарственные препараты оказывают не только местное, но и общее воздействие на организм через нервно - рецепторный аппарат посредством кожного всасывания. Исчезновение или уменьшение кожных высыпаний и субъективных ощущений, таких как, зуд, боль, жжение, благоприятно сказывается на общем состоянии больного, улучшается качество жизни.
В соответствии с международным согласительным документом по АтД, принятым в 2006г., предложена ступенчатая схема наружной терапии в зависимости от стадии заболевания, которая предусматривает использование топических ГКС, ингибиторов кальциневрина, увлажняющих и смягчающих средств, в комплексе с элиминационными мероприятиями на всех стадиях заболевания [50].
Наружную терапию следует проводить на фоне рационального ухода за ' кожей, который включает в себя использование препаратов, направленных на восстановление функции эпидермального барьера. В настоящее время предпочтение отдается препаратам с высоким содержанием липидов, идентичным липидам здоровой кожи, а также средств созданных с использованием технологии наночастиц. Эффективность эмолиентов была продемонстрирована в нескольких мультицентровых исследованиях. В одном из исследований было показано, что увлажняющие препараты обладают способностью уменьшать симптомы АтД, особенно связанные с сухостью кожи, нарушением барьерной функции кожи [56,105,134]. По данным других исследований оказалось, что применение эмолиентов приводит к существенному уменьшению потребности в ТГКС у больных с АтД [75,90].
Большинство существующих на сегодняшний день схем топической терапии основано на принципе использования ТГКС в период обострения 8 заболевания АтД. В последнее время все чаще выявляются случаи тяжелого течения АтД, резистентного к традиционной наружной терапии, отмечается увеличение потребности в ГКС, длительное применение которых в ряде случаев является необходимым. Однако длительное использование ТГКС часто приводит к развитию как системных, так и местных побочных эффектов.
Препараты всех используемых групп показали свою клиническую эффективность, однако до сих пор не определены критерии ее оценки с учетом иммунных маркеров воспаления в коже.
В связи с этим, иммунный ответ в коже больных АтД на разных стадиях заболевания, а также влияние различных видов топической терапии на экспрессию генов цитокинов в коже данных больных может быть предметом перспективного изучения.
Полученные результаты могут быть использованы для разработки критериев эффективности наружной терапии и оптимизации лечения АтД.
Цель исследования
Изучить экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови у больных атопическим дерматитом под влиянием наружной терапии. Для решения поставленной цели определены следующие задачи:
1. Изучить экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови у здоровых доноров.
2. Изучить экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови у больных АтД тяжелого и средне-тяжелого течения в сравнении со здоровыми донорами.
3. Изучить влияние ТГКС и эмолиентов на экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови у больных АтД тяжелого и средне-тяжелого течения.
4. Оценить диагностическую значимость показателей экспрессии генов цитокинов в коже и периферической крови больных АтД в зависимости от проведенной наружной терапии.
Научная новизна
Впервые проведена оценка экспрессии генов цитокинов: IL1B, IL2, IL2r, IL4, IL5, IL6, IL7, IL8, ILIO, IL 12А, IL12B, IL15 (суммарный), IL15, IL17A, IL18, IL23, IL28, IL29, IFNy, TNF, TGFB1, FOXP3 в коже и периферической крови здоровых доноров и больных АтД разной степени тяжести.
Впервые выявлены маркеры локального иммунного воспаления на основании исследования экспрессии генов цитокинов в коже больных АтД.
Впервые изучено влияние мометазона фуроата 0,1% крема и нейтрального увлажняющего липидсодержащего средства на экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови больных АтД.
Практическая значимость работы
Изученные показатели уровня экспрессии ряда генов иммунной системы в коже и периферической крови у здоровых доноров могут служить в качестве контроля при проведении научных исследований в области дерматологии, аллергологии, иммунологии.
Показана целесообразность оценки экспрессии генов цитокинов в коже и периферической крови больных АтД для определения прогноза течения заболевания и эффективности наружной терапии.
Показана целесообразность локального исследования экспрессии генов цитокинов в органе-мишене коже, что может быть использовано при разработке новых иммунотропных препаратов местного действия.
Внедрение в практику
Научные положения и практические рекомендации внедрены в клинических отделениях ФГБУ «ГНЦ Института иммунологии» ФМБА России, а также рекомендованы к практическому применению врачам на курсах повышения квалификации кафедры клинической аллергологии и иммунологии ФГБУ «ГНЦ Института иммунологии» ФМБА России
Публикации по теме диссертации
По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ в материалах отечественных и международных конгрессов и в центральной научной печати. Результаты исследований были представлены на межрегиональном форуме «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии - междисциплинарные проблемы» (2010 г., Санкт-Петербург, Россия), на XI международном конгрессе «Современные проблемы иммунологии, аллергологии и иммунофармакологии» (2011 г., Москва, Россия).
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных данных и выводов. Библиографический указатель включает 146 источников, в том числе 49 отечественных и 97 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 12 таблицами, 7 рисунками, 8 фотографиями.
Заключение диссертационного исследования на тему "Влияние топического глюкокортикостероида на экспрессию генов цитокинов в коже и периферической крови больных атопическим дерматитом."
выводы
1. При исследовании экспрессии генов цитокинов в коже у здоровых доноров достоверных различий между разными участками кожи (задняя поверхность шеи, сгибательная поверхность коленных и локтевых суставов) не выявлено.
2. При исследовании иммунного ответа в коже у больных АтД выявлена экспрессия генов следующих провоспалительных цитокинов: IL2r (р=0,000064), IL8 (р=0), IL12B(p=0,00058), IL23 (р=0,00205), IL29 (р=0,000252), IFNy (р=0,0024), TGFß (р=0,00001) и противовоспалительных цитокинов IL5 (р=0,000098), ILIO (р=0,000004) по сравнению со здоровыми донорами.
3. Различий в показателях экспрессии генов цитокинов в периферической крови у больных АтД тяжелого и средне-тяжелого течения и у здоровых доноров не выявлено.
4. Наружная терапия мометазона фуроатом 0,1% кремом уменьшает экспрессию генов цитокинов IL2 (р=0,0099), IL2r (р=0,008), IL8 (р=0,005), IL12B (р=0,0089), IL23 (р=0,00116), IFNy (р=0,00033) в коже у больных АтД по сравнению с кремом элобейз.
5. Достоверное снижение показателей экспрессии генов регуляторных цитокинов FOXP3 и TGFß в периферической крови у больных АтД на фоне лечения мометазона фуроатом 0,1% кремом можно рассматривать в качестве критерия уменьшения аллергического воспаления.
6. Показатели экспрессии генов следующих цитокинов IL2r, IL6, IL8, IL12B, IL23, IL29, TGFß, IFNy в коже являются маркерами хронического воспаления и преобладания Thl ответа у больных с тяжелым и средне-тяжелым течением АтД и могут изменяться в ответ на терапию.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Филимонова, Татьяна Михайловна
1. Аллергология и иммунология. Клинические рекомендации для педиатров. Под ред. A.A. Баранова, P.M. Хаитова. М. Союз педиатров России, 2008.
2. Аллергология и иммунология: национальное руководство. Под ред. P.M. Хаитова, Н.И. Ильиной. М. ГЭОТАР-Медиа, 2009, стр. 656.
3. Аравийская Е.Р., Ковалева C.B. Космецевтика в аптеке. М. МЦЭР, 2006, стр. 208.
4. Б. Бартон, Д. Яаквей, С. Смит, М. Зигель. Ингибирование цитокинового синтеза новым стероидом мометазона фуроатом. Вестник дерматологии и венерологии, 1999, №3, стр. 43-45.
5. Бакстон Пол К. Дерматология. М. Бином. 2005, стр. 29-38.
6. Баранов A.A. и соавт. Атопический дерматит у детей: диагностика, лечение и профилактика. Научно-практическая программа, 2000, стр.53-62.
7. Белова О.В., Арион В.Я. Иммунологическая функция кожи и нейроиммунокожная система. Аллергология и иммунология, 2006, т. 7 (4), стр. 492-497.
8. Бережная Н.М. Цитокиновая регуляция при патологии: стремительное развитие и неизбежные вопросы. Цитокины и воспаление, 2007, т.6 (2), стр.26-34.
9. Бутов Ю.С., Попов К.В., Парфенов A.C., Васильева А.Е. Трансэпидермальная потеря влаги у больных атопическим дерматитом. Российский журнал кожных и венерических болезней, 2000, №3, стр .25-27.
10. Волкова E.H. Элоком в комплексной терапии хронических дерматозов. РМЖ, 2002, т. 10, № 15, Стр 15.
11. Гамаюнов Б.Н., Короткий Н.Г., Тихомиров A.A., Сучкова Т.Н. Мометазона фуроат и гидрокортизона 17-бутират в наружной терапии атопического дерматита у детей. РМЖ, 2008, том 16, № 18, стр. 45-49.
12. Геворкян О.В., Оспельникова Т.П., Ершов Ф.И. Иммунологические изменения при атопическом дерматите. Российский аллергологический журнал, 2010, №6, стр. 14-19.
13. Гущин И.С. Аллергическое воспаление и его фармакологический контроль. Москва. Фармус Принт, 1998, стр. 223-240.
14. Гущин И.С. Эпидермальный барьери аллергия. Рос. Аллерг. Журн., 2007, №2, с.3-16.
15. Емельянов A.B. Лечение больных бронхиальной астмой в амбулаторных условиях: использование ингаляционных глюкокортикоидов. Справочник поликлинического врача, 2007, №6, стр 4.
16. Игнатьева Г.А. Иммунная система и патология. Патологическая, физиология и экспериментальная терапия, 1997, стр 26.
17. Ильина Н.И. Аллергопатология в различных регионах России. Автореф. дисс. докт. мед. наук. М. 1996.
18. Кетлинский С.А. Роль Т-хелперов 1-го и 2-го типов в регуляции клеточного и гуморального иммунитета. Аллергия, астма и клиническая иммунология, 2000, № 8, стр 87-91.
19. Кетлинский С.А., Симбирцев A.C. Цитокины. Санкт-Петербург. Фолиант, 2008, стр. 550.
20. Ковальчук JI.B., Ганковская JI.B., Рубакова Э.И. Система цитокинов. Янус-К, 2000, стр.6-7.
21. Короткий Н.Г. Современная наружная терапия дерматозов (с элементами физиотерапии). Руководство для врачей. Тверь: Губернская медицина, 2001, стр 56.
22. Короткий Н.Г., Таганов A.B., Тихомиров А. А. Современная наружная и физиотерапия дерматозов. М: Экзамен, 2007, стр. 703.
23. Красносельских Т.В., Михеев Г.Н. Основы наружной терапии болезней кожи. Основы наружной терапии болезней кожи. Васкулиты кожи. СПб.: Соти, 1999, стр. 191.
24. Кунгуров Н.В., Кохан М.М., Кениксфест Ю.В., Мирина Ю.Г., Ведерникова C.B. Об оптимизации терапии больных атопическим дерматитом детей и взрослых. Вестник дерматологии и венерологии, 2004, №3, стр. 23-29.
25. Намазова Л.С., Вознесенская Н.И., Мазитова Л.П. Атопический дерматит у детей проблемы и решения. РМЖ, 2006; 14(19), стр. 4449.
26. Папий H.A. Медицинская косметика: Практ. пособие для врачей. Беларусь, 1998, стр.175.
27. Парахонский А.П., Цыганок С.С. Особенности местного иммунитете и цитокинового спектра крови при атопическом дерматите. Фундаментальные исследования, 2008, №11, стр. 58-59.
28. Просекова Е.В., Деркач В.В., Шестоковская Т.Н., Нестерова С.Ю., Иванова Ю.В. Особенности цитокинового профиля и иммунного статуса при аллергических заболеваний у детей. Pacific Medical Journal, 2006, №3, p. 44-48.
29. Путырский И., Прохоров В. Растительная косметика и уход за кожей М.: Махаон; Мн.: Книжный дом, 2000, стр. 192.
30. Ребриков Д.В., Саматов Г.А., Трофимов Д.Ю., Семёнов П.А и др. ПЦР в «реальном времени».- М.:БИНОМ. Лаборатория знаний, 2009, стр. 115.
31. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. М., МедиаСфера, 2003. стр. 312.
32. Ревякина В.А., Агафонов A.C. Атопический дерматит у детей. Современная проблема. РАЖ, 2008, №3, стр. 57-61.
33. Российский национальный согласительный документ по атопическому дерматиту. Под ред. P.M. Хаитова, A.A. Кубановой. Атопический дерматит: рекомендации для практических врачей. М.: Фармарус принт, 2002; стр.24.
34. Руднева Н.С. Исследование микроциркуляции методом лазерной допплеровской флоуметрии у детей, страдающих атопическим дерматитом. Рос. журнал кожных и венерологических болезней, 2006, №5, стр. 38-41.
35. Руководство по дерматокосметологии. Под ред. Е.Р. Аравийской и Е.В. Соколовского. СПб.ЮОО «Издательство Фолиант», 2008, стр. 632.
36. Сапунцова С.Г. Морфологическое, иммунологическое и клинико-лабораторное обоснование применения тимодепрессина в комплексной терапии атопического дерматита. Автореферат дисс. канд. мед. наук. Хабаровск, 2004.
37. Симбирцев A.C. Цитокины: классификация и биологические функции. Цитокины и воспаление. 2004, т.З (2), стр. 16-23.
38. Смирнова Г.И. Аллергодерматозы у детей. М., БУК, 1998, стр.299.
39. Смирнова Г.И. Современные подходы к лечению, реабилитации атопического дерматита, осложненного вторичной инфекцией. Аллергология и иммунология в педиатрии, 2004, №1, стр. 34-39.
40. Смолкин Ю.С., Чебуркин A.A. Атопический дерматит у детей: принципы диагностики и рациональной терапии. Лечащий врач, 2002, №9, стр. 12.
41. Феденко Е.С. Аллергология и иммунологоия. Национальное руководство. 2009, стр. 436-456.
42. Феденко Е.С. Клинико-иммунологическое обоснование дифференцированного подхода к иммунотропной терапии атопического дерматита. Автореф. докт. мед.наук. М., 2000, стр. 9.
43. Феденко Е.С. Кожные проявления аллергии: клинические аспекты и принципы лечения. Цитокины и воспаление. 2005; №3, стр. 35.
44. Феденко Е.С. Системный подход в лечении атопического дерматита. Лечащий врач, 2003; №3, стр. 36-22.
45. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы. М. 2005, стр. 142.
46. Черешнев В.А., Гусев Е.Ю. Иммунология воспаления: роль цитокинов. Медицинская иммунология. 2001, т.З, стр. 361-368.
47. Шестакова Н.А., Борисов В.И., Пронкина Н.В. и соавт. Иммунологические особенности аллергической и неаллергической формэ атопического дерматита. Мед. Иммунол. 2009, т. 11 (6), стр. 531-540.
48. Ярилин А.А. Взаимодействие эпителиальных и имфоидных клеток барьерных тканей в норме и при патологоии. Современные проблемы аллергологии, иммунологоии и иммунофармакологии. М. 2001, № 1, стр. 261-298.
49. Ярилин А.А., Климова С.В., Симонова А.В., Пащенков М.В., Никонова М.Ф. и др. Применение проточной цитометрии для оценки функциональной активности иммунной системы человека. Пособие для врачей клинической лабораторной диагностики. Москва, 2008.
50. Allen В., Lakhanpaul M., Morris A. Et al. Systemic exposure, tolerability, and efficacy of pimecrolimus cream 1% in atopic dermatitis patients. Arch. Dis. Child., 2003, v. 88, p. 969-973.
51. Andrew D., Craig A.D. Spinothalamic lamina I neurons selectively responsive to cutaneous warming in cats. J.Phisiol., 2001, v. 537,p. 489-495.
52. Baran R., Maibach H.I. Textbook of cosmetic Dermatology. MartinDunitz Ltd, 1998, p. 99-167.
53. Belladonna M.L., Renauld J.C. Bianchi R. et al. IL-23 and IL-12 have overlapping, but distinct, effects on murine dendritic cells. J. Immunol., 2002, v. 168 (11), p. 5448-5454.
54. Benczik M., Gaffen S.L. The interleukin (IL)-2 family cytokines: survival and proliferation signaling pathways in T lymphocytes. Immunol. Invest., 2004, v. 33 (2), p. 109-142.
55. Beutler B. Innate Immunity: an overview. Mol. Immunol., 2004, v.40, p.845-859.
56. Bieber Thomas, M.D., Ph.D. Mechanisms of Disease Atopic Dermatitis. N Engl J Med., 2008, v.358, p.1483-94.
57. Billich A., Aschauer H. Pimecrolimus is more lipophilic and permeates less through skin than tacrolimus. Ann. Dermatol. Venerol., 2003, v. 129. p.692.
58. Blumberg H., Conklin D., Xu W.F. et al. Interleukin 20: discovery, receptor identification, and role in epidermal function, cell. 2001, v. 104 (1), p. 9-19.
59. Brown S., Irvine A. Atopic eczema and the fillagrin story. Semin. Cutan. Med. Surg., 2008, v.27, p. 128-137.
60. Burcley R. H. Primary cellular immunodeficiencies. J. Allergy Clin. Immunol., 2002, v. 109, p.747-757.
61. Candi E., Schmidt R., Melino G. The cornified envelope: a model of cell death in the skin. Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 2006. v. 6 (4), p. 328-340.
62. Carbone A, Siu A, Patel R. Pediatric atopic dermatitis: a review of the medical management. Ann Pharmacother., 2010, v 44(9), p. 1448-58.
63. Chapel H., Geha R., Rosen F. S. Primary immunodeficiency diseases: an update. J. Clin. Exp. Immunol., 2003, p.9-15.
64. Chomczynski P., Sacchi N. Single Step Method of RNA Isolation by Acid Guanidinium Thiocyanate Phenol Chloroform Extraction Anal. Biochem., 1987, v. 162, p. 156-9.
65. Chunharas A. Therapeutic efficacy and safety of loratadine syrup in childhood atopic dermatitis treated with mometasone furoate 0.1 per cent cream. J Med Assoc Thai., 2005,v. 85(4), p.482-7.
66. Cohen S., Bigazzi P., Yoshida T. Similarities of T cell function in cellmediated immunity and antibody production. Cell.Immunol.,1974, v. 12, p. 150-9.
67. Cookson O.C.M. The genetics of atopic. Current O pinions in A llergy and Clin. I mmunol., 2002, v. 2 (2), p. 383-387.
68. Cooper K.D. Atopic Dermatitis: recent trends in pathogenesis and therapy. J Invest Dermatol. 2003, v. 102, p. 128-137.
69. Dayer-Pastore F., McClain K.L., Shrearer W.T. Secondary immundeficiencies duo to proliferative and histiocytic disorders. In.tVi1.munologic Disorders in Infants and Children, 5 edn. Philadelphia:W.B. Saunders, 2004.
70. Eijnden S.V., Goriely S., De Wit D. et al. IL-23 up-regulates IL-10 and induces IL-17 synthesis by polyclonally activated naive T cells in human. Eur. J. Immunol., 2005, v. 3 (2), p. 469-475.
71. Europian Task Force on Atopic Dermatitis. Severity scoring of atopic dermatitis: the SCORAD index. Dermatology, 1993, v. 186, p.23-31.
72. Fort M.M., Cheung J., Yen D. et al. IL-25 induces IL-4, IL-5, and IL-13 and Th2-associated pathologies in vivo. Immunity, 2001, v. 15 (6), p. 985-995.
73. Ghazvini P, Pagan LC, Rutledge TK, Goodman HS Jr. Atopic dermatitis. J Pharm Pract., 2010, v. 23(2), p. 110-6.
74. Godic A. S uccessful treatment of N etherton's syndrome with topical calcipotriol. European Journal of Dermatology, 2004, v. 14 (3), p. 115-117.
75. Gratchev A., Kzhyshkowska J., Duperrier K. et al. The receptor for interleukin-17E is induced by Th2 cytokines in antigen-presenting cells. Scand. J. Immunol., 2004, v. 60 (3), p. 233-237.
76. Grewe M, Bruijnzeel-Koomen CA, Schopf E, et al. A role for Thl and Th2 cells in the immunopathogenesis of atopic dermatitis. Immunol Today, 1998, v.19, p. 359-361.
77. Hanifin J.M, Rajka G. Diagnostic features of atopic dermatitis. Acta Derm Venerol., 1980, v. 92, p. 44-47.
78. Hoehn P., Goedert S., Germann T. et al. Opposing ef-fects of TGF-p2 on the Thl cell development of naive CD4+ T cells isolated from different mouse strains. J. of immunol., 1995, v. 155 (8), p. 3788-3795.
79. Hurst S.D., Muchamuel T., Gorman D.M. et al. New IL-17 Family Members Promote Thl or Th2 Responses in the Lung: In Vivo Function of the Novel Cytokine IL-25. J. Immunol., 2002, v. 169, p. 443-453.
80. Ikeda K., Nakajima H., Suzuki K. et al. Mast cells produce interleukin-25 upon Fc epsilon Rl-mediated activation Blood. 2003, v. 101 (9), p. 3594-3596.
81. Irvine A.D., McLean W.H. Breaking the (us)sound barrier: fillagrin is a major gene for atopic dermatitis. J. Invest. Dermatolog., 2006, v. 126, p. 1200-1202.
82. Ito Y, Adachi Y, Makino T, Higashiyama H, Fuchizawa T, Shimizu T, Miyawaki T. Expansion of FOXP3-positive CD4+CD25+ T cells associated with disease activity in atopic dermatitis. Ann Allergy Asthma Immunol., 2009, v. 103(2), p. 160-5.
83. Kabesch M. A ssociation between polymorphisms in serine protease inhibitor, kazal type 5 and asthma phenotypes in a large German population sample. Clin. Exp. A llergy. 2004, v. 34 (2), p. 340-345.
84. Kang C.M., Jang A.S., Ahn M.H. et al. IL-25 and IL-13 production by alveolar macrophages in response to particles. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 2005.
85. Kawaguchi M., Adachi M., Oda N. et al. IL-17 cytokine family. J. Allergy Clin. Immunol., 2004, v. 114 (6), p. 1265-1273.
86. Kim S.H., Han S.Y., Azam T. et al. Interleukin-32: a cytokine and inducer of TNFalpha. Immunity. 2005, v. 22 (1), p. 131-142.
87. Komine M. Analysis of the mechanism for the development of allergic skin inflammation and the application for its treatment:keratinocytes in atopic dermatitis their pathogenic involvement. J. Pharmacol Sci., 2009, v. 110(3), p. 260-4.
88. Kucharekova M., Van De Kerhof P.C. Randomized comparasion of an emolient containing skin-related lipids with a petrolatum-based emollient as adjunct in the treatment of chronic hand dermatitis. Contact. Derm., 2003, v. 48(6), p.293-299.
89. Lee J., Ho W., Maruoka M. et al. IL-17E, a novel proinflammatory ligand for the IL-17 receptor homolog IL-17Rhl. J. Biol. Chem., 2001, v. 276 (2), p. 1660-1664.
90. Leung D. Pathogenesis of topic dermatitis. J. Allergy Clin. Immunol., 1999, v. 104, p. 99-108.
91. Leung DY, Bieber T. Atopic dermatitis. Lancet 2003, v.361, p.151-60.
92. Li S, von Mutius E, Lau S, et al. The natural course of atopic dermatitis from birth to age 7 years and the association with asthma. J Allergy Clin Immunol., 2004, v. 113, p. 925-31.
93. Liao S.C., Cheng Y.C., Wang Y.C. et al. IL-19 induced Th2 cytokines and was up-regulated in asthma patients. J. Immunol., 2004, v. 173(11), p. 6712-6718.
94. Lo C.H., Lee S.C., Wu P.Y. et al. Antitumor and antimetastatic activity of IL-23. J. Immunol., 2003, vol. 171 (2), p. 600-607.
95. Maintz L., Novak N. Getting and more complex: the pathophysiology of atopic eczema. Eur. J. Dermatol., 2007, v. 17(4), p. 267-283.
96. Marenholz I, Nickel R, RuschendorfF, et al. Filaggrin loss-of-function mutations predispose to phenotypes involve in the atopic march. J Allergy Clin Immunol., 2006, v.l 18, p. 866-71.
97. Martin C. W apenaar, Alienke J. M onsuur, Jos Poell et al. SPIN K gene family and celiac disease susceptibility. Immunogenetics, 2007, v. 59 (5), p. 349-357.
98. Mehta D.S., Wurster A.L., Grusby M.J. Biology of IL-21 and the IL-21 receptor. Immunol. Rev., 2004, v. 202, p. 84-95.
99. Meingasser J. ,Kowalsky E., Schwendinger H. et al. Pimecrolimus does not affect Langergans cells in murine epidermis, in contact to corticosteroids. Ibid, 2002, v. 119, p. 347.
100. Mitchell J.A., Belvisi M.G. Akarasereemom P. et al. Induction of cyclo-oxygenase-2 by cytokines in human pulmanory epithelial cells: regulation by dexamethasone. Brit. J. Pharm., 1994, v. 113, p. 1008-1014.
101. Mohammed D, Matts PJ, Hadgraft J, Lane ME. Influence of Aqueous Cream on corneocyte size, maturity, skin protease activity, protein content and Trans-Epidermal Water Loss. Br J Dermatol., 2011.
102. Morgan D., Ruscetti F., Gallo R. Selective in vitro growth of T-lymphocytes from normal human bone marrows. Science, 1976, v.193, p.1007-1008.
103. Mudde G.C., Van Reijsen F.C., Boland G.J. et al. Allergen presentation by epidermal Langerhans cells from patients with atopic dermatitis is mediated by IgE. Immunol., 1990, v. 69, p. 41- 335.
104. Naseema Kapadia, Saima Ghouri. Efficacy, safety and tolerability of mometasone furoate 0.1% cream, ointment and lotion in childhood eczema. Journal of Pakistan Association of Dermatologists, 2008; v. 18, p. 93-96.
105. Nghiem P., Person G., Langley R. Tacrolimus and pimecrolimus: from cleverprokaryotes to ingibiting calcineurin and treating atopic dermatitis. J. Am. Acad. Dermatol., 2002, v.46, p. 228-241.
106. Nicola N. Guidebook of cytokines and their receptors. Sambook and Tooze. Oxford: Oxford Univ. Press., 1994, p 261.
107. Nishikawa, H. Definition of target antigens for naturally occurring CD4(+)CD25(+) regulatory T cells. H. Nishikawa et all. J. Exp. Med., 2005; v. 201, p.681-6.
108. Nishikawa, H. CD4+CD25+T regulatory cells control the induction of antigen-spesific CD4+ helper T cell responses in canser patients. Blood. 2005; v. 106, p.1008-11.
109. Nishio Y., N oguchi E., Shibasaki M. et al. Association between polymorphisms in the SPIN K5 gene and atopic dermatitis in the Japanese. Genes and I mmunity. 2003, v. 4 (3), p . 515-517.
110. Nomura T, Sandilands A, Akiyama M, et al. Unique mutations in the filaggrin gene in Japanese patients with ichthyosis vulgaris and atopic dermatitis. J Allergy Clin Immunol., 2007, v.l 19, p. 434-40.
111. Novak N, Bieber T. Allergic and nonallergic forms of atopic diseases. J Allergy Clin Immunol., 2003;v.l 12, p.252-62.
112. Novak N, Kruse S, Potreck J, et al. Single nucleotide polymorphisms of theIL18 gene are associated with atopic eczema. J Allergy Clin Immunol., 2006, v.l 18, p. 1319.
113. Ou L.S., Goleva E., Hall C. T-regulatoiy cells in atopic dermatitis and subersion of their activity by super-antigens. J. Allergy Clin. Immunol., 2004, v. 113, p. 756-763.
114. Ozaki K., Spolski R., Ettinger R. et al. Regulation of B cell differentiation and plasma cell generation by IL-21, a novel inducer of Blimp-1 and Bcl-6. J. Immunol., 2004, v. 173 (9), p. 5361-5371.
115. Pace, L.IL-4 modulation of CD4+CD25+T regulatory cells mediated suppression. J. Immunol., 2006; v. 174, p. 7645-53.
116. Palmer C.N., I rvine A .D., Terron-Kwiatkowski A. et al. Common loss-of-function variants of the epidermal barrier protein filaggrin are a major predisposing factor for atopic dermatitis. Nat Genet., 2006, v. 38 (4), p. 441-446.
117. Pelletier M., Bouchard A., Girard D. In vivo and in vitro roles of IL-21 in inflammation. J. Immunol., 2004, v. 173 (12), p. 7521-7530.
118. Pene J., Gauchat J.F., Lecart S. et al. Cutting edge: IL-21 is a switch factor for the production of IgGl and IgG3 by human B cells. J. Immunol., 2004, v. 172 (9), p. 5154-5157.
119. Rafanelli A., Rafanelli S., Stanganelli I., et al. Mometasone furoate in the treatment of atopic dermatitis in children. J Eur Acad Dermatol Venereol., 1993, v. 2 (3),p. 225-30.
120. Romani N., Gruner S., Brang D. et al. Proliferating den-dritic cells progenitors in human blood. J. of experim. Medicine, 2004, v. 180 (1), p. 83-93.
121. Sanderson C.J., Urwin D. Interleukin-5: a drug target for allergic diseases. Curr. Opin. Investig. Drugs, 2000, v. 1, p. 435^41.
122. Sandilands A, Terron-Kwiatkowski A, Hull PR, et al. Comprehensive analysis of the gene encoding filaggrin uncovers prevalent and rare mutations in ichthyosis vulgaris and atopic eczema. Nat Genet., 2007, v.39, p.650-4.
123. Sengler C. I nteractions between genes and environmental factors in asthma and atopy. Respiratory Rws., 2002, v. 3 (1), p. 1-12.
124. Serge J.A. Epidermal barrier formation and recovery in skin disoders. J. Clin. Invest. 2006, v. 116, p. 1150-1158.
125. Siegfried E., Korman N., Molina C. Et al. Safety and efficacy of early invervention with pimecrolimus cream 1% combined with corticosteroids for major flates in infants and children with atopic dermatitis. J. Der. Treat., 2006, v. 17, p. 143-150.
126. Simon D, Braathen LR, Simon HU. Eosinophils and atopic dermatitis. Allergy, 2004, v. 59, p. 561-570.
127. Simon D., Vassina E., Youselfi S. et al. Inflammatory cells numbers and cytokine expression after topical pimecrolimus treatment. Allergy, 2005, v. 60, p. 944-951.
128. Simpson EL, Berry TM, Brown PA, Hanifin JM. A pilot study of emollient therapy for the primary prevention of atopic dermatitis. J Am Acad Dermatol., 2010, v.63(4), p. 587-93.
129. Smith FJ, Irvine AD, Terron-Kwiatkowski A, et al. Loss-of-function mutations in the gene encoding filaggrin cause ichthyosis vulgaris. Nat Genet., 2006, v.38, p.337-42.
130. Sonkoly E, Muller A, Lauerma AI, et al. IL-31: a new link between T cells and pruritus in atopic skin inflammation. J Allergy Clin Immunol., 2006, v. 117, p. 411-7.
131. Stray- Pederson A., Abrahamsen T. G., Froland S. S. Primary immunodeficiency diseases in Norway. J. Clin. Immunol., 2000, v.20, p.407-485.
132. Takaoka A., Arai I., Sugimoto M. et al. Expression of IL-31 gene transcripts in NC/Nga mice with atopic dermatitis. Eur. J. Pharmacol., 2005, v. 516 (2), p. 180-181.
133. Wahl S.M. Transforming growth factor: the good, the bad and the ugly. J. of experim. Medicine, 1994, v. 180 (7), p. 1587-1590.
134. Walley A.J. Gene polymorphism in N etherton and common atopic. N at. Genetics, 2001, v. 29 (2), p. 175-178.
135. Weidinger S, Illig T, Baurecht H, et al. Loss-of-function variations within the filaggrin gene predispose for atopic dermatitis with allergic sensitizations. J Allergy Clin Immunol., 2006, v. 118, p.214-9.
136. Weller P.F. Role of eosinophils in allergy. Curr Opin Immunol., 1999, v. 4, p. 782-787.
137. Williams H, Flohr C. How epidemiology has challenged 3 prevailing concepts about atopic dermatitis. J Allergy Clin Immunol., 2006; v. 118, p.209-13.
138. Wollenberg A., Beieberg T. Atopic dermatitis: from genes to skin lesions. Allergy, 2000, v.55, p.205-213.