Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние сочетанного воздействия рексода и мексидола на течение реперфузионного синдрома

На правах рукописи

ООЗОБ8545

БГУАШЕВА Римма Ибрагимовна

ВЛИЯНИЕ СОЧЕТАННОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ РЕКСОДА И МЕКСИДОЛА НА ТЕЧЕНИЕ РЕПЕРФУЗИОННОГО СИНДРОМА

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Старая Купавна, 2007

003068545

Работа выполнена в Медицинском институте Майкопского государственного технологического университета и Краснодарском филиале Южного бюро Российской академии медицинских наук

Научный руководитель:

Научный консультант:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Защита состоится «

старшии научный сотрудник кандидат медицинских наук Галенко-Ярошевский Владимир Павлович

член-корреспондент АМН республики Казахстан доктор медицинских наук профессор Лысенков Сергей Петрович

доктор медицинских наук профессор Березовская Ирина Владимировна;

доктор медицинских наук профессор Яворский Александр Николаевич

ГОУ ВПО "Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

_»_ 2007 г. в_часов на

заседании диссертационного совета Д 217.004.01 при Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ (ВНЦ БАВ) по адресу: 142450, Московская обл., п/о Старая Купавна, ул. Кирова, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ.

Автореферат разослан «_

2007 г.

Ученый секретарь, диссертационного совета доктор биологических наук

профессор Корольченко Л.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Динамичное развитие медицинских технологий в различных областях практической медицины обозначило весьма сложную проблему - профилактика и коррекция нарушений, возникающих после временной ишемии с последующей реперфузией какого-либо органа. В настоящее время трудно назвать отрасль практической медицины, где бы не встречался реперфузионный синдром (PC): с ним постоянно сталкиваются реаниматологи после восстановления кровообращения в организме, ангиохирурги, кардиологи, трансплантологи, офтальмологи, травматологи, неврологи и др. (В.А.Неговский и соавт., 1979; Е.С.Золотокрылина, 2000; А.В.Вабишева и соавт., 2003; А.М. Игнатов и соавт., 2003; В.А.Куксинский, Н.М.Рог, 2003; Н.Ю.Семиголовский и соавт., 2003; Н.А.Томилина и соавт., 2003; W.Brooks, C.Conrad, 1992; D.Lukas, L.Szweda, 1998; M.Hourmant, 1999).

Реоксигенационные нарушения неизбежно возникают в той или иной степени при временной ишемии. Сложность патогенеза PC заключается в том, что наряду с ишемическими повреждениями в органах, вызванными самим эпизодом прекращения кровообращения, возникают повреждения, обусловленные восстановлением кровообращения в органе или его части. Часто реперфузион-ные нарушения несут в себе более выраженные повреждения, чем сама ишемия.

Вполне понятно, что у практических врачей должны быть средства профилактики и лечения реперфузионных нарушений. Поиском таких средств занимаются в настоящее время многие исследователи. Среди существующего арсенала особенно следует подчеркнуть соединения, относящиеся к естественным метаболитам либо их производным (В.В.Гацура, С.В.Гацура, 1982; В.В.Гацура, 1988; 1993; А.К.Рачков, 1988; Л.А.Балыкова, 1992; П.А.Галенко-Яро-шевский, В.В.Гацура, 2000; В.В.Бульон и соавт., 2002; А.А.Скоромец и соавт., 2003; Л.А.Журавлева, 2004; А.Н.Багов, 2005; C.Ceconi, 1996).

Успешно изучаются соединения, в которых удачно скомбинированы несколько активных метаболитов или их активных начал. К таким веществам относится мексидол (2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцинат). Последний сочетает в себе выраженные эффекты антиоксиданта и антигипоксанта, что и обусловило его широкое применение в практической медицине (Л.Д.Смирнов, 1998; Т.В.Тарасова, 2004; Н.Н.Андреева, И.В.Мухина, 2005; В.П.Галенко-Яро-шевский и соавт., 2005; А.Г.Голиков и соавт., 2005; Н.В.Карсанов, 2005; Р.Н. Короткина и соавт., 2005; Н.А.Кузнецов и соавт., 2005; С.Б.Середенин и соавт., 2005; Е.Н.Багметова, 2005; А.Н.Багов, 2005; А.В.Савенко, 2005).

С учетом роли антиоксидантной системы в защите от реперфузионных повреждений в эксперименте, а в последнее время и в клинике используется су-пероксиддисмутаза (СОД) либо ее производные (Е.Б.Бурлакова и соавт., 1985; Л.Е.Бобырева, 1988; М.В.Биленко и соавт., 1989; С.А.Сельков, 1992; Л.В.Дери-медведь, 1996; О.Н.Шевантаева, Ю.И.Косюга, 2006).

Исходя из вышеизложенного, представлялось важным провести доклиническое изучение влияния сочетанного применения лекарственных препаратов "рексод", представляющего собой рекомбинантную СОД человека, и "мекси-

дол" на течение РС.

Цель исследования. Выявить органопротекторные свойства комбинированного применения рексода и мексидола в условиях экспериментального ре-перфузионного синдрома.

Основные задачи исследования. Для достижения поставленной цели планировалось решение следующих задач:

1. Изучить влияние сочетанного действия рексода и мексидола на течение реперфузионного периода и выживаемость животных.

2. Установить особенности изменения биохимических параметров крови, включая параметры кислотно-основного состояния и газового состава крови, под действием комбинированного применения рексода с мексидолом в условиях РС (у крыс).

3. Провести морфологическую оценку эффективности использования сочетания рексода с мексидолом, выявить органоселективность.

4. Изучить влияние рексода в сочетании с мексидолом на морфофункци-онапьные показатели глюкокортикоидной функции надпочечников.

5. Провести сравнительную характеристику влияния сочетанного действия рексода с мексидолом и с каждым препаратом в отдельности на морфофунк-циональные и биохимические показатели животных.

Научная новизна. Впервые в условиях экспериментального РС дана характеристика органопротекторных свойств сочетанного применения рексода с мексидолом в отношении группы органов, перенесших ишемию-реперфузию.

Установлено, что применение указанного комплекса сопровождается значительным ростом выживаемости животных и улучшением течения клинической картины РС. Эти изменения происходили на фоне положительного влияния исследуемого сочетания препаратов на ряд биохимических показателей крови (активность аланинаминотрансферазы, уровень калия, миоглобина). Доказано, что указанный комплекс рексода с мексидолом более эффективен в сравнении с рексодом и мексидолом в отдельности по влиянию их на кислотно-щелочное состояние и газовый состав крови.

Впервые в условиях РС у комплекса рексод + мексидол выявлена органоселективность по отношению к миокарду и почкам. Установлено, что применение исследуемого комплекса рексода с мексидолом в раннем реперфузионном периоде сопровождается значительной активацией глюкокортикоидной функции надпочечников, что способствует адаптации организма животных в реперфузионном периоде.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Комплекс рексода с мексидолом является комбинацией, резко повышающей выживаемость животных и улучшающей течение экспериментального реперфузионного периода у крыс.

2. Комплекс рексод + мексидол имеет преимущества перед мексидолом и рексодом, улучшает показатели кислотно-щелочного состава крови и потребление кислорода тканями в реперфузионном периоде; особенностью действия мексидола является его выраженный ощелачивающий эффект.

3. Сочетание рексода с мексидолом превосходит по нормализующему эф-

фекту в отношении биохимических параметров отдельно взятые рексод и мек-сидол.

4. Введение рексода в комплексе с мексидолом сопровождается выраженной стимуляцией глюкокортикоидной функции надпочечников, превосходящей рексод, а затем и мексидол.

5. Сочетанное введение рексода с мексидолом оказывает выраженный ор-ганопротекторный эффект (ОПЭ) лишь по отношению к миокарду (по влиянию на микрогемодинамику), почкам и надпочечникам (по влиянию на микрогемодинамику), при этом уступая рексоду по эффектам на легкие, почки (противо-отечный эффект), тонкий кишечник, скелетные мышцы и мексидолу по его эффекту на мозг, миокард (противоотечный эффект) и печень.

Научно-практическая ценность работы. Проведенное исследование расширяет представления о морфофункциональных и биохимических изменениях в органах и тканях и в организме в целом в реперфузионном периоде. Выявленные органопротекторные свойства комплекса рексода с мексидолом обосновывают целесообразность углубленных доклинических исследований для дальнейшего представления в Федеральную службу по надзору в сфере здравоохранения и социального развития с целью получения необходимого разрешения на клинические испытания у больных с РС, а также у больных с надпочеч-никовой недостаточностью.

Результаты работы включены в программу обучения студентов на кафедрах фармакологии Кубанского и Ростовского государственных медицинских университетов.

Апробация работы. Результаты настоящего исследования были представлены и обсуждены на Всероссийской научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Перспектива - 2006» (Нальчик, 2006), на XII неделе науки Майкопского государственного технологического университета (Майкоп, 2006), на научно-практической конференции «Проблемы клинической фармакологии и моделирования в фармакологии и биомедицине» (Ростов на Дону, 2006), расширенных заседаниях (2006) Краснодарского краевого отделения Российского научного общества фармакологов с приглашением представителей лаборатории фармакологии дерматотропных средств Краснодарского филиала Южного бюро РАМН, кафедр фармакологии, клинической фармакологии, общей хирургии, факультетской хирургии с курсом анестезиологии, военной и экстремальной медицины Кубанского государственного медицинского университета.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ.

Объём и структура диссертации. Материал диссертации изложен на 134 страницах компьютерного текста. Диссертация состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, научно-практических рекомендаций и списка литературы.

Работа иллюстрирована 50 рисунками и 20 таблицами. Библиография включает 245 источников литературы, из которых 203 отечественных и 42 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

I. Материалы и методы исследований

Эксперименты выполнены на 210 белых нелинейных крысах-самцах массой 170 - 220 гр. Все травматичные этапы моделирования и забора материала проводились в соответствии со статьей 11-й Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (1964), «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и Правилами лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.).

Моделирование PC у крыс проводили по методу С.ПЛысенкова, Л.З.Тель (1995) путем перевязки грудной части аорты без вскрытия грудной клетки, атравматично, с последующим восстановлением. Суть модели заключается во временной (экспозиция 28 мин) окклюзии грудного отдела аорты лигатурой, проведенной в просвете изогнутой полой иглы и выведенной на поверхность спины. Модель позволяет в любой момент восстановить кровоток либо его прекратить. Экспозиция ишемии в 28 мин выбрана из тех соображений, что при ней наблюдается 75% летальности животных.

Количественную оценку тяжести состояния крыс и течения PC осуществляли путем применения показателя общего состояния животных, выражаемого в баллах (С.П.Лысенков, 1982). Удовлетворительное состояние оценивали в ноль баллов, а клиническую смерть - в 100 баллов.

Для проведения биохимических и морфологических исследований было сформировано 5 групп крыс: 1 - здоровые (интактные), 2 - контрольные (ишемия + реперфузия + физиологический раствор), 3 - реперфузия + рексод, 4 -реперфузия + мексидол, 5 - реперфузия + рексод + мексидол.

В опытных группах (3 - 5) исследуемые препараты и их сочетания вводили внутривенно (в хвостовую вену): мексидол (ООО НПК «Фармсофт», г. Москва) из расчета 25 мг/кг, ргксод (производитель ООО «Рэсбио», г. Санкт-Петербург) - 0,02 мг/кг; из тех же расчетов инъецировали последовательно рексод, затем мексидол. Введение препаратов осуществляли непосредственно после восстановления кровотока по аорте.

У части крыс после восстановления кровообращения проводилась активная эйтаназия под тиопенталовым наркозом (50 мг/кг внутрибрюшинно); кровь забирали в пробирку и центрифугировали при температуре тающего льда со скоростью 3000 об/мин с экспозицией в 10 мин. Плазму крови вносили в пластиковые пробирки и замораживали при температуре -20° С.

Для определения активности ферментов аланин- (АлАТ) и аспартатами-нотрансфераз (АсАТ), концентрации калия и кальция использовали биохимические наборы ООО «Витал Диагностика СПб», программируемый фотометр «Screen Master plus» (Hospitex Diagnostics Str., Italy).

Для оценки степени миолиза использовали показатель концентрации мио-глобина, определяемый с помощью набора ДС-эритро-миоглобин (кат. № М-131) (НПО «Диагностические системы», г. Нижний Новгород). Исследование показателей кислотно-щелочного равновесия и газов крови проводили на аппа-

рате «Medica EASY blood gas» (США).

Гистологическое исследование органов и тканей проводили в окраске гематоксилин-эозин (по методу Б.Ромейс, 1954). Для оценки тяжести повреждения и используемой терапии применяли морфометрический метод Г.Г.Ав-тандилова (1990). Для гистологического исследования забирались: кора больших полушарий, часть левого и правого желудочка, базальные отделы левого и правого легкого, часть правой доли печени, нижние полюса правой и левой почки, надпочечники, часть подвздошной кишки, часть приводящей мышцы бедра. Исследование морфометрических показателей органов и тканей в репер-фузионном периоде под действием рексода проведено совместно с А.А.Барчо.

Статистическая обработка материала проводилась с помощью стандартных программ «Bio Stat», с применением параметрических критериев. Различия считались достоверными при р < 0,05.

II. Результаты исследований и их обсуждение

Как показали исследования, используемый комплекс рексода и мексидола благоприятно сказывался на клиническом течении реперфузионного периода и выживаемости животных. Если в контрольной группе летальность в течение 48 ч составляла 75%, то в опытной группе с применением рексода и мексидола она снизилась до 10%. Это значительный и убедительный аргумент в пользу используемой комбинации препаратов. Кроме того, балльная оценка РС, начиная с 3-х часового периода, характеризовалась достоверным уменьшением количества баллов, что свидетельствовало о благоприятном его течении (рис. 1).

100 80 60 40 20 о

Рис. 1. Показатель общего состояния животных (в баллах) в динамике реперфузионного периода.

* - р< 0,05; *** - р< 0,001 - по отношению к контрольной группе животных.

Эти данные свидетельствуют о суммарном положительном ОПЭ, что должно было отразиться на ряде биохимических и морфологических показателей.

опыт контроль

0,5 ч

Действительно мы убедились в том, что применение исследуемой комбинации проявлялось нормализующим эффектом на отдельные исследуемые показатели (табл. 1).

Таблица 1. Сравнительная характеристика биохимических показателей крови под действием рексода, мексидола и их комбинации

Исследованные показатели Группы животных

1гр. (здоровые) , п = 8 II гр. (контроль1), п = 5 III гр. (реперфузия + рексод), п = 6 IV гр. (реперфузия + мексидол), п = 5 V гр.(репер-фузия + рексод + мексидол), п = 9

АсАТ, ммоль/л-ч 0,45 ±0,11 1,11 ±0,11*** 0,14 ±0 02***ЛЛА 1,68 ±0 05***ЛЛА 1,22 ±0,05***

АлАТ, ммоль/л-ч 1,19 ±0,10 2,43 ±0,13*** 1,50 ±0,07***лл 1,92 ±0 04***АА 1,49 ±0,16*ЛЛЛ

Миоглобин, нг/мл 26,2 ±4,1 176,8 ±30,60*** 62,2 ±10,6*ллл 36,0 ±4,0ЛЛЛ 38,2 ±4,6ЛАЛ

Кальций, мм оль/л 0,55 ±0,03 1,84 ±0,16*** 3,96 ±0,61**ллл 1,82 ±0,20*** 1,83 ±0,12***

Калий, ммоль/л 5,11 ±0,16 6,32 ±0 14*** 4,79 ±0,16ллл 5,10 ±0,20ЛА 4,70 ±0,34**

1 Ишемия + реперфузия.

* -р < 0,05; ** -р < 0,01; *** -р < 0,001 -по отношению к группе здоровых животных; лл - р< 0,01; ЛАЛ -р< 0,001 -по отношению к контролю.

Следует отметить, что полного нормализующего эффекта не было обнаружено практически по всем показателям (кроме концентрации калия), однако наиболее эффективным действием обладало сочетание рексода с мексидолом. Это относится к таким показателям, как АлАТ, концентрация миоглобина, концентрация калия. В то же время концентрация кальция и активность АсАТ оставались высокими.

В сравнительном аспекте эффекты мексидола и рексода в отдельности уступают их сочетанному действию, а при сравнении между собой можно было отметить определенные отличия. Так, рексод более эффективно оказывал действие в отношении АлАТ и уровня калия, однако мексидол превосходил рексод по нормализующему эффекту на уровень миоглобина и кальция. При этом сравнении выявилось свойство рексода угнетать активность АсАТ. Надо полагать, что это действие специфично для рексода, так как не встречается при действии мексидола и в сочетании рексода с мексидолом.

Представляло изучить влияние сочетанного действия препаратов на важнейшие параметры организма - кислотно-щелочное состояние и газовый состав крови. Эти параметры являются чувствительными индикаторами метаболических процессов и дыхательных функций. Их оценку проводили по венозной крови на 10-й и 60-й мин.

Однако при сравнительном анализе оказалось (табл. 2), что наиболее выраженным нормализующим эффектом в раннем реперфузионном периоде обладал мексидол. При использовании сочетания рексода с мексидолом эффект оказался менее выраженным и менее стойким. Это касалось в первую очередь нормализации интегрального показателя рН. Мексидол оказывал выраженный

Таблица 2. Изменения основных показателей кислотно-щелочного равновесия и газового состава венозной крови спустя 10 мин и 1 ч после реперфу-зии под действием мексидола, рексода и их сочетанного введения

Иссле- Группы животных

дован- I гр. II гр. III гр. (реперфу- IV гр. (реперфу- V гр. (реперфу-

ные по- (здоро- (конт- зия + рексод), зия + мексидол), зия + рексод +

каза- вые), роль1), п = = 6 п = = 5 мексидол), п = 9

тели п = 8 п = 5 10 мин 60 мин 10 мин 60 мин 10 мин 60 мин

рН, ед 7,36 7,15 7,26 7,25 7,43 7,33 7,29 7,26

±0,01 ±0,002* ±0,04*л ±0,04*л ±0,01*Л ±0,001л ±0,02*Л ±0,01 *л

Рш-гу Риму Р,у.у Р1У-У

<0,01 <0,01 <0,001 <0,001

рС02, 35,3 53,6 66,3 69,1 53,6 64,2 71,8 72,5

мм рт. ±1,13 ±4,1* ±2,3 *л ±3,9* ±3,0* ±0,9*л ±3,2*л ±2,4*

ст. Р[1НУ Риму Ргу-у ?1У-У

<0,01 <0,01 <0,01 <0,05

р02, мм 35,4± 29,0 44,1 27,5 40,0 35,5 42,2 31,2

рт. ст. 1,41 ±1,52* ±2,4*л ±4,5 ±4,7Л ±1,50л ±3,1л ±2,3

Риму

<0,05

БВ, 23,01 28,5 24,9 24,6 31,6 28,1 27,3 25,8

ммоль/л ±0,15 ±2,41* ±2,3 ±2,6 ±0,6* ±0,25* ±1,1* ±1,3

Риму Ргу-у

<0,05 <0,05

ВЕ, -0,77 -7,2 1,3 1,6 4,90 5,50 4,2 4,2

ммоль/л ±0,90 ±0,1* ±2,7Л ±3,1 ±1,15*л ±0,40*л ±0,9 *л ±0,9 *л

НЮ2, % 59,6 41,6 69,3 37,3 75,4 61,6 67,4 54,4

±8,8 ±3,64* ±5,0 ±10,9 ±0,69*л ±2,6Л ±4,5Л ±1,3

Риму ?1У-У

<0,01 <0,05

02, й, 5,90 3,47 14,13 9,1 15,32 5,5 13,70 9,80

мл/дл ±0,60 ±0,73* ±1,06*л ±1,75 ±0,19*л ±0,60л ±0,93 *л ±1,20*

Риму Р[У-У

<0,01 <0,05

1 Ишемия + реперфузия.

* -р< 0,05; ** -р< 0,01 ;***-/>< 0,001 - по отношению к здоровым животным; ЛА-р < 0,01; ллл -р< 0,001 -по отношению к контролю.

ощелачивающий эффект, который уже фиксировался на 10-й мин реперфузион-ного периода и оставался до 60-й мин. По этому показателю эффект смеси рек-

сода с мексидолом был сходен с таковым рексода.

Анализируя метаболический показатель BE (base exess), можно заключить, что сдвиг показателей в щелочную сторону примерно одинаков при сочетанном действии рексода с мексидолом и у мексидола отдельно. При этом в группе с мексидолом показатели стандартного бикарбоната оказались выше, чем в других контрольных группах.

Во всех исследуемых группах эти изменения происходили на фоне повышенного напряжения рСОг. При сравнительном анализе оказалось, что наиболее высокие значения имеют место при использовании комбинации рексода с мексидолом. Это могло свидетельствовать либо об усиленном образовании углекислоты в реперфузируемых зонах, либо о недостаточной легочной компенсации развившейся гиперкапнии.

Эти изменения происходили на фоне практически одинаковой концентрации кислорода. В то же время степень насыщения гемоглобина кислородом при использовании рексода, а также сочетания рексода с мексидолом к 60-й мин достоверно снижалась по сравнению с группой мексидола. Пропорционально этим показателям увеличивалось и напряжение углекислоты в венозной крови. Сопоставив эти два факта, можно прийти к заключению о более эффективном использовании тканями кислорода в группах рексод + мексидол и отдельно рек-сод.

Следовательно, можно сделать заключение о том, что, несмотря на нормализацию показателя рН при использовании мексидола, развитие признаков метаболического ацидоза с элементами гиперкапнии в группах животных рексод + мексидол и отдельно рексод связано с лучшей утилизацией кислорода тканями, перенесшими ишемию. В свою очередь, учитывая показатели газового состава в группе с применением рексода, следует признать, что утилизация кислорода происходила лучше, хотя и близка по эффекту к таковому при использовании комбинации рексод + мексидол.

Можно было бы предположить, что нарастание явлений гиперкапнии связано с нарушениями структуры легочной ткани: микротромбозами, ателектазами, отеком. Однако, как свидетельствовали морфометрические показатели, рексод, мексидол и их сочетание по отношению к легким обладали высокой орга-нопротекторной способностью. Следовательно, предположение о несостоятельности легких по обеспечению функции газообмена следует признать малообоснованным.

Далее мы попытались выявить степень адаптивных реакций на реперфузи-онный стресс, оценив морфофункционагтьное состояние глюкокортикоидной функции надпочечников (рис. 2). Такая оценка проводилась отдельными авторами в отношении постреанимационного (А.В.Волков, 1966, 1977; А.В.Волков, В.Л.Кожура, 1980) и реперфузионного (А.В.Савенко, 2005) периодов.

Из анализа показателей концентрации кортизола и прогестерона следует, что наиболее выраженный стимулирующий эффект на синтез кортизола и его предшественника прогестерона отмечался при комбинированном введении рексода и мексидола. Так, если в контрольной группе показатели концентрации кортизола и прогестерона составляли 53,2 ± 1,8 нмоль/л и 13,7 ± 6,1 нмоль/л со-

У У / / g У / +**

А А 11

*

Ii 1 % *** *

^ АЛА шШ^Ш' **+ äJ

; im|Ii1.1

II rp.

III rp.

IV rj».

V

□ кортизол S прогестерон

Рис. 2. Влияние сочетаяного введения рексода и мексидола на уровень (в нмоль/л I кортизона и прогестерона.

* -/)< 0,05; ** -р< 0,01; *** ~р< 0,001 - [¡о отношению к здоровым животным; ™ - р < 0,001 -по отношению к контролю.

ответственно, то в условиях применения комбинации рексода с мексидол ом уровень кортизола и прогестерона достигал значений 120,3 ± 14,3 нмоль/л (р < 0,001) и 17,2 ± 2,3 нмоль/л. При этом активировался, в основном, синтез кортизола. Напротив, введение рексода вызывало значительное угнетение выброса кортизола (до 32,0 ± 2,4 нмоль/л; р < 0.001) и, особенно, прогестерона (3,6 ± 1,7 нмоль/л; р < 0,001).

Мексидол вызывал аналогичное рекеоду угнетение синтеза кортизола (до 32,2 ± 12,9 нмоль/л; р < 0,05) и менее выраженное - прогестерона (до 9,7 ± 4,6 нмоль/л).

Выявленный потенцирующий эффект сочстанного введения рексода и мексидола мы постарались объяснить морфологическими изменениями и коре надпочечников. Оказалось, что при таком введении сохраняются признаки отека коркового вещества, как и у контрольных животных, однакс резко уменьшается степень венозного полнокровия. Такие изменения могли способствовать улучшению микроциркуляции, что особенно характерно для мексидола (A.A. Спасов и соавт., 1999; Л .В.Гаврилова, 2001).

ОПЭ в отношении надпочечников наименее выраженным оказался у рексода, что соответствовало и функциональным показателям надпочечников. Более того, по сравнению с показателями животных контрольной группы в группе с использованием мексидола увеличилось количество патологических признаков, характерных для венозного полнокровия (с 2,60 ± 0,20 усл. ед. до 3,62 ± 0,12 усл. ед.; р < 0,001).

По сравнению с рексодом мексидол достоверно оказывал против о отечный эффект (4,67 ± 0,18 усл. ед. - в контроле и 3,14 ± 0,12 усл. ед. - в опыте; р < 0.01), однако абсолютно не оказывал эффекта на венозное полнокровие (2,60 ± 0,20 усл. ед. в контроле; 2,85 ± 0.23 усл. ед. - в опыте). Это оказалось несколько неожиданным, так как мексидол способен улучшать в состоянии ги-

поксии микроциркуляцию. Но, как мы уже сказали, этот эффект ярко проявляется при сочетанном введении мексидола и рексода.

Таким образом, по эффективности действия на морфофункциональные характеристики коры надпочечников препараты можно было бы расположить следующим образом: рексод + мексидол —> мексидол —» рексод.

Описанный комплекс биохимических изменений целесообразно рассмотреть в связи с характером и выраженностью морфологических нарушений.

Как и следовало ожидать, выраженность органопротекторных свойств исследуемых препаратов и их сочетания оказалась в каждом из исследуемых органов различна (рис. 3). Так, по отношению к головному мозгу наиболее выраженный ОПЭ отмечагтся у мексидола (2,22 ±0,14 усл. ед. - в опыте, р < 0,05,

4.42 ± 0,17 - в контроле) и сочетания мексидола с рексодом (2,50 ± 0,35 усл. ед., р < 0,05). Наименее эффективен в плане противоотечного эффекта оказался рексод (3,97 ± 0,15 усл. ед.). Показатели патологических признаков статистически не отличались от контрольных.

В легких наиболее выраженный эффект в отношении профилактики ателектазов отмечен у рексода (1,01 ± 0,12 усл. ед. - в опыте, 3,07 ± 0,15 усл. ед. -в контроле; р < 0,001), а затем по эффективности следовали мексидол (1,34 ± 0,19 усл. ед.; р < 0,001) и сочетание рексода с мексидолом (1,64 ± 0,14 усл. ед.; р <0,001).

Такая же закономерность отмечалась в действии препаратов на микрогемодинамику. Наиболее эффективным оказался рексод (2,66 ±0,12 усл. ед. - в опыте и 3,15 ± 0,13 усл. ед. - в контроле; р < 0,05), а наименее выраженный эффект отмечен при сочетании рексода и мексидола (3,60 ± 0,25 усл. ед.).

В сердце наиболее выраженный ОПЭ, в частности - противоотечное действие, оказывал мексидол как на степень отека кардиомиоцитов (2,00 ±0,19 усл. ед. - в опыте и 4,38 ± 0,16 усл. ед. - в контроле; р < 0,001), так и на степень отека интерстициалыюго пространства (2,73 ±0,19 усл. ед. - в опыте, 4,39 ± 0,19 усл. ед. - в контроле; р < 0,001). Однако по влиянию на гемодинамику наиболее эффективным оказалось сочетание рексода с мексидолом (0,87 ± 0,35 усл. ед. - в опыте и 2,23 ±0,18 усл. ед. - в контроле; р < 0,01), а эффекты отдельно взятых мексидола и рексода оказались равнозначными (1,43 ± 0,20 усл. ед. и

1.43 ±0,20 усл. ед.).

В отношении печени наиболее выраженный эффект отмечен у мексидола по отношению как к микрогемодинамике (0,90 ± 0,19 усл. ед. - в опыте и 2,91 ± 0,16 усл. ед. - в контроле; р < 0,001), так и к выраженности отека эндотелия капилляров (0,69 ± 0,17 усл. ед. - в опыте, 3,88 ± 0,16 усл. ед. - в контроле; р < 0,001). Наименьший ОПЭ оказывал рексод как в отношении микрогемодинамики (2,71 ±0,14 усл. ед.), так и по противоотечному эффекту на эндотелий капилляров (3,76 ± 0,14 усл. ед.). Отсутствие достоверных различий указанных показателей с контролем говорит о том, что эффект вообще отсутствовал.

Сочетание рексода с мексидолом занимало промежуточное положение. В частности, менее выраженный эффект, чем у мексидола, проявлялся в отношении микрогемодинамики (1,24 ± 0,14 усл. ед., р < 0,001) и выраженности отека эндотелия капилляров (3,03 ± 0,14 усл. ед.; р < 0,001).

Головной мои

.lei кос

РТН ' 11. I I. Г | Г I, I II11 ' О k ' II

□ коитрол|> ( J роксол

0 мексидол 0 рсксод+ мексндол

Рис. 3. Изменение морфом еТричёс к tei показателей (в усл. ед.'| органов и тканей к реперфузионном периоде под действием рексода, чсксилола и их сочетания.

*-р< 0,05; **-р <0,01•,**■* -р <0.001 - по отношению к контролю

полнокровие отек эндотелия вену. I кншшярон

Тонкий кишечник

отек II дистрофия ненрошпов

Сердце

I - отек кярдномноцитов, 2 - огек ннтерстицня, 3 - полнокровно венул

Почки

мнкро- ПйЛНОКрОЫЙ

aiti««raibi вшул

ИНГОрС 1 мцпн

Печень

1 2 3

1 - полнокровие всиул, 2 - отек и дистрофия эгигтелия кяпяльцев, 3 - микрогромбо» клубочков

Скелетные мышцы

отек и леек на мания

ЛШТСТИЯ ворсин

На микрогемодинамику почек наиболее выраженный эффект оказывало сочетание рексода с мексидолом (1,10 ± 0,13 усл. ед. - в опыте и 2,06 ±0,18 усл. ед. - в контроле; р < 0,001). Однако в отношении образования микротромбозов (0,69 ± 0,09 усл. ед. - в опыте, 1,22 ± 0,17 усл. ед. - в контроле; р < 0,05) и по противоотечному эффекту (1,85 ± 0,12 усл. ед. - в опыте; 2,83 ± 0,13 усл. ед. - в контроле; р < 0,001) превосходство имел рексод.

Необходимо отметить, что комбинированное применение рексода с мексидолом несколько усугубляло патоморфологическую картину как в отношении образования микротромбозов (1,70 ± 0,32 усл. ед. - в опыте и 1,22 ± 0,14 усл. ед. - в контроле), так и в отношении отека и дистрофии эпителия канальцев (3,16 ± 0,13 усл. ед. - в опыте; 2,83 ± 0,13 усл. ед. - в контроле).

Относительно тонкого кишечника наиболее выраженный ОПЭ отмечен у рексода (1,55 ± 0,19 усл. ед. - в опыте; 3,15 ± 0,19 усл. ед. - в контроле; р < 0,001). Сочетанное применение рексода и мексидола, напротив, усугубляло патоморфологическую картину (4,38 ±0,16 усл. ед. - в опыте; 3,15 ± 0,19 усл. ед.

- в контроле; р < 0,001). При воздействии мексидола у отдельных животных проявлялся незначительный эффект, что сопровождалось уменьшением отека и десквамации эпителия ворсин (2,93 ± 0,23 усл. ед. - в опыте; 3,15 ± 0,19 усл. ед.

- в контроле).

По отношению к скелетной мускулатуре сочетание рексода с мексидолом не проявляло ОПЭ (1,26 ± 0,14 усл. ед. - в опыте; 1,57 ± 0,01 усл. ед. - в контроле), в то время как: наиболее выраженную активность показал рексод (0,69 ± 0,13 усл. ед.; р < 0,001). При воздействии мексидола эффект не только отсутствовал, но даже усугублялся, что сопровождалось усилением отека скелетных мышц (2,34 ±0,21 усл. ец.;р< 0,01).

Оценивая отдельно эффективность сочетания рексода и мексидола можно отметить, что преимущества перед раздельным введением препаратов отчетливо проявлялись лишь по отношению к миокарду и почкам (влияние на микрогемодинамику). В отношении легких, почек (противоотечный эффект), тонкого кишечника и скелетных мышц ОПЭ оказался сравнительно выше у рексода. По отношению к мозгу, сердцу (противоотечный эффект) и печени явные преимущества имел мексидол.

Как следует из представленного анализа морфологической картины, сочетанное введение рексода и мексидола не имеет видимых преимуществ перед эффектами отдельно взятых препаратов. Что касается влияния исследуемой комбинации на биохимические показатели крови, то здесь выявляются преимущества комбинированного введения, но они очень близки по эффектам к мексидолу.

Разнообразные и разноплановые эффекты сочетания рексода с мексидолом тем не менее приводили к улучшению течения реперфузионного периода и значительному росту процента выживших животных. Этот аргумент весьма весомый. Тогда возникает вопрос - почему при наличии отдельных морфометриче-ских и биохимических показателей имеет место столь высокий эффект? На этот вопрос, вероятно, можно ответить так: в конечном итоге результирующей биохимических и патоморфологических изменений в организме является высокая

способность организма к адаптивным реакциям в условиях реперфузионного периода. Оценив адаптивные возможности организма по морфофункциональ-ным характеристикам глюкокортикоидной функции надпочечников, мы убедились в том, что сочетанное введение рексода и мексидола наиболее эффективно восстанавливает и даже стимулирует глюкокортикоидную функцию надпочечников. Особенно это проявляется в отношении синтеза кортизола, концентрация которого по сравнению с показателями животных контрольной группы возрастала в среднем в два раза. Следовательно, специфическое действие сочетания рексода с мексидолом в отношении надпочечников позволяет повысить адаптивные возможности организма, улучшить клиническое течение РС и значительно снизить летальность животных.

Выявленные закономерности и особенности могут быть использованы при планировании последующих доклинических испытаний сочетания рексода с мексидолом.

ВЫВОДЫ

1. Использование комбинации рексода и мексидола в раннем реперфузи-онном периоде у крыс улучшает клиническое его течение и значительно снижает летальность (в 7,5 раз).

2. Сочетанное введение рексода с мексидолом в раннем реперфузионном периоде у крыс сопровождается улучшением показателей кислотно-основного состояния и усилением утилизации кислорода тканями, однако по этим эффектам уступает рексоду; мексидол оказывает выраженный нормализующий эффект на показатели кислотно-основного состояния, однако снижает утилизацию кислорода тканями.

3. Комбинированное применение рексода и мексидола в раннем реперфузионном периоде у крыс вызывает выраженное стимулирующее действие на глюкокортикоидную функцию надпочечников, обусловленное значительным улучшением микрогемодинамики, и превосходит по указанному эффекту мексидол, а затем рексод при их изолированном введении.

4. Сочетанное введение рексода с мексидолом в раннем реперфузионном периоде у крыс оказывает выраженный органопротекторный эффект лишь по отношению к миокарду (влияние на микрогемодинамику), почкам и надпочечникам (влияние на микрогемодинамику), уступая рексоду в отношении его действия на легкие, почки (противоотечный эффект), тонкий кишечник и скелетные мышцы и мексидолу в отношении мозга, миокарда (противоотечный эффект) и печени.

5. Сочетанное действие рексода с мексидолом в раннем реперфузионном периоде превосходит по нормализующему эффекту рексод и мексидол по большинству из исследуемых биохимических параметров: активности фермента АлАТ, уровню миоглобина и калия и, равнозначно с мексидолом, по влиянию на уровень кальция.

НАУЧНО - ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Сочетание рексода с мексидолом рекомендуется для дальнейшего доклинического изучения с целью использования его в медицинской практике в качестве комбинации, предназначенной для коррекции глюкокортикоидной недостаточности надпочечников в условиях реперфузионного синдрома, а также в качестве органопротектора в постишемическом периоде.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Исследование церебропротекторных свойств мексидола и рексода в условиях ишемии-реперфузии внутренних органов и скелетных мышц (Барчо A.A., Багов А.Н., Савенко A.B.) //Современные проблемы науки и образования. -2006. -№3. - С. 44- 45.

2. Фармакологическая защита мозга в условиях ишемии-реперфузии внутренних органов (Барчо A.A., Савенко A.B., Багов А.Н.) //Современные проблемы науки и образования. - 2006. - № 3. - С. 45 - 46.

3. Фармакологическая защита внутренних органов брюшной полости и скелетных мышц при их ишемии-реперфузии (Малова И.Ю., Савенко A.B., Га-ленко-Ярошевский В.П., Лысенкова Т.Г., Шехова А.Н., Барчо A.A.) //В мат. Всероссийской научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Перспектива - 2006». - Нальчик. - 2006. - Т. III. - С. 38 - 41.

4. Влияние супероксиддисмутазы на морфометрические показатели коры головного мозга в условиях ишемии-реперфузии органов брюшной полости //В мат. XII недели науки МГТУ. - Майкоп. - 2006. - С. 21.

5. О механизмах развития реперфузионного синдрома и его фармакологической коррекции (Барчо A.A.) //В мат. XII недели науки МГТУ. - Майкоп. -2006.-С. 14-15.

6. Профилактический эффект супероксиддисмутазы при реперфузионном синдроме (Барчо A.A.) //В мат. XII недели науки МГТУ. - Майкоп. - 2006. - С. 20-21.

7. Органопротекторные свойства рексода в условиях экспериментального реперфузионного синдрома (Лысенков С.П., Барчо A.A., Малова И.Ю., Гален-ко-Ярошевский В.П.) //Кубанский научный медицинский вестник. - 2006. - № 12 (93).-С. 92-95.

8. Влияние супероксиддисмутазы и мексидола на морфофункциональную активность надпочечников при реперфузионном синдроме (Барчо A.A., Малова И.Ю., Савенко В.О., Савенко A.B., Парталян А., Арушанян М.) //В мат. конференций «Биомедицина и биомоделирование» и «Проблемы клинической фармакологии и моделирования в фармакологии и биомедицине». - Ростов-на-Дону. -2006. - Биомедицина. - 2006. № 4. - С. 76 - 77.

9. Возможности фармакологической защиты внутренних органов брюшной полости и скелетных мышц в условиях реперфузионного синдрома (Барчо A.A.,

Галенко-Ярошевский В.П.) //В мат. конференций «Биомедицина и биомоделирование» и «Проблемы клинической фармакологии и моделирования в фармакологии и биомедицине». - Ростов-на-Дону. - 2006. - Биомедицина. - 2006. - № 4.-С. 80-81.

БГУАШЕВЛ Римма Ибрагимовна

Влияние сочетанного воздействия рексода и мексидола на течение реперфузионного синдрома

Автореферат

Подписано в печать 27.03.07 г.. Формат бумаги 60 х 84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Печ. лист - 1. Заказ № 6. Тираж - 100 экз.

Краснодарский филиал Южного бюро РАМН Подразделение оперативной полиграфии. 350013, г. Краснодар, ул. Победы, 1.