Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Исследование действия нитроглицерина на ишемизированный миокард при совместном применении с мексидолом

[|0 ол

/■. " ( . — -1 ' /

На правах рукописи

ПАШ И НА Ирина Владимировна

ИССЛЕДОВАНИЕ ДЕЙСТВИЯ НИТРОГЛИЦЕРИНА НА ИШЕМИЗИРОВАННЫЙ МИОКАРД ПРИ СОВМЕСТНОМ ПРИМЕНЕНИИ С МЕКСИДОЛОМ

14.00.25 — фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Купавна — 1997

Работа выполнена на кафедре фармакологии Курского государственного медицинского университета.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор В. В. Пичугин доктор медицинских наук, профессор Л. Н. Сернов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор А. Г. Муляр доктор медицинских наук, профессор Ю. Б. Розонов

Ведущая организация: Московский медицинский стоматологический институт.

Защита диссертации состоится «/<Р» 1997 г.

часов на заседании диссертационного Совета Д 098.01.02 при ВНЦ БАВ по адресу: 142440, Московская обл., пос. Старая Купавна, ул. Кирова, д. 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ.

Автореферат разослан « » октября 1997 года.

Ученый секретарь диссертационного Совета,

доктор биологических наук Т. Н. Робакидз<

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Несмотря на определенные достижения медикаментозной терапии ИБС, разработка новых подходов к защите миокарда от ишемических повреждений, основанных на современных представлениях о патогенезе коронарной недостаточности, имеет большую медицинскую и социальную значимость. Это связано с неудовлетворенностью практической кардиологии в эффективности фармакотерапии ИБС и ее осложнений (Каверина Н. В. и др., 1980;. Ога-нов Р. Г., 1990; Гацура В. В., Смирнов Л. Д., 1992; Метелица В. И., 1994; Сернов Л. Н., 1996; Гацура В. В. и др., 1996).

Работами последних лет показано, что реакции перекисного окисления липидов, имея универсальный характер, являются показателем устойчивости стационарного состояния в организме и определяют развитие различных патологических процессов, в том числе тяжесть ишемических и реперфузионных повреждений миокарда (Кудрин А. Н. и др., 1977; Меерсон Ф. 3. и др., 1988; Каверина Н. В., 1995).

Однако, до настоящего времени применение синтетическзгх ан-тиоксидантов в комплексной терапии острой ишемии миокарда сдерживается отсутствием законченных представлений о характере фар-макодинамических взаимодействий антиоксидантов с другими анти-ангинальными средствами — в первую очередь с нитратами. В связи с этим, экспериментальное исследование действия нитратов в сочетании с антиоксидантами при ишемическом повреждении миокарда является актуальной задачей, решение которой может способствовать повышению эффективности комплексной фармакотерапии ИБС.

Вышеизложенное послужило обоснованием для изучения карди-опротекторного действия сочетанного применения нитроглицерина и синтетического антиоксиданта мексидола при ишемии миокарда. Выполненное диссертационное исследование (№ государственной регистрации 01.9.50003405) осуществлялось по основному плану научно-исследовательской работы Курского государственного медицинского университета на 1995—1997 годы, входит в комплексную программу Центрально-Черноземного Научного центра РАМН.

Тема диссертации утверждена на заседании Ученого Совета Курского государственного медицинского университета 10 ноября 1994г.

Цель исследования. Изучить действие нитроглицерина при соче-танном применении с мексидолом на ишемизированный миокард.

Основные задачи исследования.

]. Исследовать противонекротическое действие сочетанного применения нитроглицерина и мексидола на модели коронаро-окклюзионного инфаркта, миокарда у крыс и при транзитор-ной ишемии миокарда у бодрствующих кроликов.

2. Изучить влияние сочетания нитроглицерина с мексидолом на кровоснабжение, сократимость и метаболизм ишемизирован-ного миокарда.

3. Исследовать некоторые механизмы противоишемического действия нитроглицерина и мексидола при сочетанном применении (влияние на тонус изолированных коронарных артерий, механическую активность изолированной воротной вены, фазный коронарный кровоток).

Научная новизна. Впервые получены данные об усилении коллатерального коронарного кровотока и оптимизации метаболизма в зоне ишемии миокарда (уменьшение эксцесс-лактата, электроотрицательного сдвига окислительно-восстановительного потенциала) при сочетанном применении нитроглицерина с мексидолом.

Впервые показано, что комбинация нитроглицерина с мексидолом вызывает более выраженное повышение объемной скорости коронарного кровотока в сравнении с раздельным введением нитроглицерина при сохранении положительного действия на структуру фазного коронарного кровотока (усиление преимущественно систолической фракции).

Впервые получены данные о потенцировании мексидолом дила-тирующго действия нитроглицерина на резистивные (коронарные артерии собак) и емкостные сосуды ( воротные вены крыс).

Получены новые данные об уменьшении частоты и продолжительности ранних постокклюзионных аритмий под влиянием комбинации нитроглицерина с мексидолом.

Практическая ценность. Данные о влиянии сочетанного применения нитроглицерина и мексидола на коллатеральное коронарное кровообращение, метаболизм и функциональное состояние ишеми-зированного миокарда являются экспериментальным обоснованием для применения указанной комбинации при ИБС и разработки лекарственных форм содержащих нитроглицерин и мексидол.

Материалы исследования внедрены в учебный процесс кафедры фармакологии Воронежской государственной медицинской академии и тематику НИР отдела фармакологии ВНЦ БАБ.

Основные положения выносимые на защиту.

1. Нитроглицерин в сочетании с мексидолом вызывает более выраженное уменьшение зоны некроза миокарда при остром нарушении коронарного кровообращения, чем при раздельном введении.

2. При сочетанном применении нитроглицерина с мексидолом ноышаегся уровень коллатерального коронарного кровотока, увеличивается систолическая фракция венечного кровотока и

снижается депрессия сократимости сердца в острую стадию коронарной недостаточности в большей степени, нем при раздельном введении нитроглицерина и мексидола.

3. Сочетание нитроглицерина с мексидолом оказывает более выраженное, чем при их раздельном введении, коронаро- и ве-нодилатирующее действие.

Апробация работы. Результаты исследований доложены и обсуждены на итоговых научных конференциях молодых ученых Курского государственного медицинского университета (1995, 1996, 1997), II, III и IV Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 1995, 1996, 1997), 1 Съезде Российского научного общества фармакологов (Волгоград, 1995).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ. Из научных трудов, опубликованных в соавторстве, в диссертацию включены материалы, полученные лично автором.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, пяти глав с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы, включающего в себя 165 источников, в том числе 97 отечественных и 68 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 138 страницах, из них 20 страниц занимает указатель литературы. Таблиц — 11, Рисунков— 16, схем — 2.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В экспериментах, выполненных на 62 собаках, 182 крысах, 45 кроликах, 50 лягушках, 20 изолированных сегментах коронарных артерий собак, 18 изолированных сегментах воротной вены крыс исследовано влияние нитроглицерина с мексидолом при сочетай ном применении на зону некроза при экспериментальном инфаркте миокарда, кровоснабжение, сократимость и метаболизм ишсмизирован-нош миокарда, фазный коронарный кровоток, тонус резистивных и емкостных сосудов, развитие постокклюзионных и реперфузионных аритмий, функциональное состояние сердца при кальциевой перегрузке кардиомиоцитов.

Изучена буккальная лекарственная форма «НМ» — пластинки содержащие 2 мг нитроглицерина и 20 мг мексидола. Препараты сравнения: «Тринитролонг»(пластинки содержащие 2 мг нитроглицерина) и мексидол.

Моделирование транзиторной ишемии миокарда осуществляли на бодрствующих беспородных кроликах массой 1,5—2 кг под этаминал-натриевым наркозом (30 мг/кг внутривенно). На коронарную арте-

рию накладывали окклюдер, позволяющий воспроизводить полную окклюзию и восстановление кровотока в артерии (Розонов Ю. Б., Морозова Т. В., 1984). Через сутки у бодрствующих кроликов вызывали 20-минутную ишемию. Через 48 часов реперфузии планиметрическим методом определяли зону некроза миокарда (Розонов Ю. Б., Морозова Т. В., 1984).

Мексидол в дозе 20 мг/кг вводили внутривенно, «НМ» и «Тринитролонг» применяли буккально по 1 и 2 пластинки на одно животное в момент окклюзии и на следующие сутки.

Действие на размеры зоны ишемии и зоны некроза миокарда, в опытах на крысах линии Вистар массой 250-300 г, наркотизированных этаминал-натрием (40 мг/кг внутрибрюшинно), определяли с помощью дифференциального индикаторного метода (Сернов JI. Н., Гацура В. В., 1989). «НМ» и «Тринитролонг» применяли буккально по 0,5 и 1 пластинки на одно животное за 30 мин до начала эксперимента, мексидол в дозе 30 мг/кг вводили внутривенно непосредственно после окклюзии.

Сократимость миокарда, коллатеральное коронарное кровообращение и метаболизм в зоне ишемии миокарда исследовали в опытах на наркотизированных собаках с 60-минутной окклюзией коронарной артерии. Регистрировали ретроградный приток крови в зону - ишемии (Гацура В. В., 1969, 1993), артериальное давление, лсвоже-лудочковое давление, скорость сокращения и расслабления миокарда (dp/dt шах) в исходе и через 5, 15, 30, 45, 60 мин после окклюзии коронарной артерии. В эти же временные промежутки проводили взятие проб венозной крови , дренирующей ишемический очаг (Пи-чугин В. В., Должиков А. П., 1973), а так же из бедренной артерии и бедренной вены. В пробах крови определяли содержание лактата, пирувата и глюкозы. Для суждения о зависимости коллатерального коронарного кровотока от изменений артериального давления использовали коэффициент К — отношение сдвигов этих параметров, выраженных в процентах от исходного уровня (Гацура В. В. 1969).

Для суждения о состоянии энергетики миокарда рассчитывали окислительно-восстановительный потенциал системы МК/ПВК после прохождения коронарной крови через зону ишемии (Райскина М. Е. и др., 1970; Gudbjarnason S., Bing R., 1962) и «избыточный» лактат (Nuckabee W., 1961). «НМ» и «Тринитролонг» применяли буккально по 5 и 10 пластинок на одно животное за 30 мин до коронарной окклюзии, мексидол вводили в бедренную вену в дозе 20 мг/кг через 5 мин после лигирования коронарной артерии.

Исследование фазного коронарного кровотока проводили на беспородных собаках наркотизированных этаминал-натрием (40 мг/кг

внутрибрюшинно) по методу, описанному М. В. Покровским и др., 1987. Рассчитывали ударный диастолический, ударный систолический, конечно-диастолический, минимальный систолический и средний коронарный кровоток, а также конечно-диастолическое , максимальное систолическое и среднее сопротивление коронарного русла. Нитроглицерин (2,5 мкг и 5 мкг) и мексидол (0,25мг и 0,5 мг) вводили внутрикоронарно. Оценку влияния нитроглицерина, мексидола и их комбинации на коронарный кровоток проводили с учетом расширительного резерва коронарного русла, используя величину реактивной гиперемии в ответ на 30-секундную окклюзию магистральной коронарной артерии.

Для изученимя сократительной активности сосудов использовали сегменты огибающей и нисходящей ветвей левой коронарной артерии собак диаметром 1—2 мм и сегменты воротной вены крыс длиной до 10 мм. Контрактуру коронарных сосудов вызывали увеличением внеклеточной концентрации ионов калия до 20 мМ. Нитроглицерин (1 мкМ) и мексидол (0,1 мМ) добавляли в гиперкалиевый раствор на пике контрактуры. Механическую активность воротной вены регистрировали с помощью механотропного преобразователя. Исследуемые препараты в тех же концентрациях добавлялись в пер-фузионный раствор.

На крысах линии Вистар массой 160—240 г, наркотизированных внутрибрюшинной инъекцией тиопентал-натрия (50 мг/кг), при окклюзии коронарной артерии (10 мин) с последующей реперфузией (5 мин). Мексидол в дозах 20 и 10 мг/кг вводили внутривенно непосредственно перед окклюзией коронарной артерии. «Тринитролонг» и «ИМ» применяли буккально по 0,5 и 1 пластинки на одно животное за 30 мин до лигирования коронарной артерии.

Моделирование кальциевой перегрузки кардиомиоцитов проводили на лягушках путем введения 0,05% раствора строфантина К в лимфатический мешок в дозе 4 мг/кг. Аппликацию «Тринитролонга» и «НМ» (по 0,5 пластинки на лягушку) проводили на кожу краниального отдела за 30 мин до введения строфантина. Мексидол и нитроглицерин вводили в лимфатический мешок за 30 мин до начала эксперимента. О про-тективном действии препаратов судили по времени наступления контрактуры и остановки сердца. Хлоридкальциевую аритмиию моделировали на крысах линии Вистар путем введения в бедренную вену 10% раствора хлорида кальция в дозе 20 мг/кг. Мексидол (20 мг/кг) вводили внутрибрюшинно за 30 мин, а «Тринитролонг» и «НМ» применяли буккально по 1 пластинке за 60 мин до введения кальция хлорида. Действие преператов оценивали по продолжительности нарушения ритма и числу разнившихся фибрилляций сердца.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Действие на размеры зон ишемии и некроза миокарда.

В контрольной серии экспериментов на крысах зона некроза после 4-часовой окклюзии коронарной артерии составила 22±2,0% от общей массы сердца и 68+4,30% от зоны ишемии (рис. 1).

При аппликаци на слизистую десны 0,5 пластинки на одно животное «НМ» существенно уменьшал размер зоны некроза по отношению к зоне ишемии, при увеличении дозы (1 пластинка на одно животное) размер некротнзированного участка продолжал снижаться (рис. 1).

% зоны некроза от зоны ишемии миокарда

80 т

70 -60 -50 -40 -

30 -

**

20 -

10 -

0 4-------•

К I 2 3 4

Рис. 1. Противонекротическое действие «НМ» при коронарной окклюзии у крыс. К — контроль; 1 — «Тринитролонг» (0,5 пластинки на животное); 2 — «Тринитролонг» (1 пластинка на животное); 3 — «НМ» (0,5 пластинки на животное); 4 — «НМ» (1 пластинка на животное). * — при Р < 0.05 в сравнении с контролем. ** — при Р < 0,05 в сравнении с «Тринитролонгом» в сопоставимых дозах.

При аппликации «Тринитролонга» по 0,5 пластинки на одно животное, также наблюдалось уменьшение зоны некроза по отношению к зоне ишемии (рис. 1). Увеличение дозы «Тринитролонга» в 2

раза (1 пластинка на одно животное) не приводило к усилению про-тивоишехмического действия. Обращает на себя внимание, что под влиянием «НМ» зона некроза по отношению к зоне ишемии была достоверно ниже, чем при применении «Тринитролонга» в сопоставимых дозах (Р < 0,05) (рис. 1).

В связи с тем, что коронарная недостаточность рассматривается как совокупность ишемического и реперфузионного синдромов (Оль-бинская Л. И., Литвицкий П. Ф., 1986; Baker J., Felix С., Olinger G., 1988), нами изучено противоишемическое действие нитроглицерина, мексидола и их комбинации при моделировании транзиторной 20-минутной ишемии миокарда (ТИМ) у бодрствующих кроликов.

В контрольной серии экспериментов через 48 ч после ТИМ зона некроза составила 14,2±0,9% от массы левого желудочка (рис. 2).

% зоны некроза от массы левого желудочка 16 т

14 -

12 10

8 Н

*

6 -

4 -

2 -

О -1--------

К 1 2 3 4

Рис. 2. Противонекротическае действие «НМ» при транзиторной ишемии миокарда у кроликов. Обозначения те же, что на рис. 1.

При аппликации «ИМ» (1 и 2 пластинки на животное) зона некроза составила соответственно 7,0±0,5% и (5,1 ±0,6% от массы левого желудочка. «НМ» превосходил по своей активности препарат сравнения

л. | ринитролонг». Об этом свидетельствует менее выраженное влияние «Тринитролонга» (1 и 2 пластинки на животное) на размеры зоны некроза левого желудочка в сравнении с «НМ» (соответственно 9,5±0,6% и 8,2±0,7% соответственно, при Р < 0,05 по отношению к «НМ»).

Таким образом, при сочстанном применении нитроглицерина и мексидола наблюдалось усиление кардиолротекторного действия, характеризующееся более выраженным ограничением зоны некроза при окклюзионном инфаркте миокарда у крыс и ТИМ у бодрствующих кроликов в сравне нии с «Тринитролонгом».

Для выяснения некоторых механизмов усиления противонекро-тического действия нитроглицерина при его комбинации с мексидо-лом, нами в опытах на собаках изучено влияние сочстанного применения указанных фармакологических средств на кровоснабжение, сократимость и метаболизм ишемизированного миро карда при моделировании локальной ишемии левого желудочка.

Влияние на коллатеральное коронарное кровообращение и сократимость миокарда с локальной ишемией.

Существенное значение в кардиопротекгорном действии средств, применяемых при острой коронарной недостаточности, имеет их способность улучшать коллатеральное коронарное кровообращение (ККК) (Гацура В. В., 1969, 1990, 1993; Пичугин В. В., Гацура В. В., - 1983; Сапожков А. В. и др., 1988).

В связи с этим, нами выполнены эксперименты по изучению действия «НМ» на коллатеральное коронарное кровообращение (ККК).

При применении 5 и 10 пластинок «НМ», также как в опытах с «Тринитролонгом», наблюдалось стимуляция коллатерального коронарного кровообращения и кровоснабжения ишемизированной зоны миокарда: повышались объемная скорость ККК, значения коэффициента К превышали 1. Следует отмстить, что «НМ» превосходил до коронаролитической активности «Тринитролонг». Об этом свидетельствуют более высокие значения прироста ККК на протяжении всего периода наблюдения и менее выраженное снижение САД к 60-й мин ишемии в экспериментах с «НМ» (рис. 3). В частности, максимальный прирост объемной скорости ККК под влиянием 10 и 5 пластинок «НМ» соответственно оставил 54,5±4,6% от исхода (К=1,53) и 34,4±3,7% от исхода (К=1,36), тогда как под влиянием 10 и 5 пластинок «Тринитролонга» прирост ККК был менее выраженным и составил соответственно 45,3±4,2% (К=1,49) и 20,3±4,1 (К—1,28). «НМ» в сравнении с «Тринитролонгом» предотвращал резкое падение САД к 60-й мин после коронарной окклюзии (—■4,7±3,3% от исхода) в сравнении с введением 10 пластинок «Тринитролонга» (—13,714,6% от исхода) (рис. 3).

о

15

30

45

1 (ККК)

*ж2 (ККК)

1(САД) (САД)

Контроль (САД)

Контроль (ККК)

60

Рис. 3. Влияние «НМ» и «Тринитролонга» на коллатеральный коронарный кровоток (ККК) и системное артериальное давление (САД). 1 — «НМ» (10 пластинок на животное); 2 — «Тринитролонг» (10 пластинок на животное); * — при Р < 0.05 в сравнении с контролем. ** — при Р < 0,05 в сравнении с «Тринитролонгом». По оси абсцисс — время после окклюзии коронарной артерии (в мин), по оси ординат — изменение параметров (в % от исходного уровня).

В экспериментах с внутривенным введением мексидола в дозах 5 и 20 мг/кг отмечалась стабилизизация ККК на исходных значениях в течение 30 мин после окклюзии коронарной артерии.

«НМ» (5 и 10 пластинок), также как «Тринитролонг» в аналогичных дозах оказывал протекторное действие на сократительную активность миокарда с локальной ишемией, о чем свидетельствует по-гажителъная динамика ЛЖД, dp/dt max в сравнении с контрольной :ерней экспериментов. По влиянию на эти параметры «НМ» несколь-;о превосходил «ТринитролоУ1г».

Мексидол при изолированном введении в дозе 20 мг/кг также уменьшал падение сократимости сердца с локальной ишемией, на что указывают более высокие значения ЛЖД, dp/dt max в сравнении с контролем в течении всего эксперимента. При применении мекси-дола в дозе 5 мг/кг динамика показателей сократимости была близка к наблюдавшейся в контрольной серии.

Влияние на метаболизм углеводов в зоне ишемии.

В контрольной серии экспериментов к 60-й мин наблюдения процент экстракции глюкозы, «избыточный» лактат, и ДОВП сота-вили соответственно 21,2±3,1%, 1,42±0,09 мМл и -10,0±0,7мВ.

Мексидол (5 и 20 мг/кг) улучшал метаболизм ишемизированного миокарда. Об этом свидетельствует уменьшение на 30-й мин ишемии процента экстракции глюкозы (соответственно до 9,2±2,2 и: 9,0±1,5%) и уменьшение лсктацвдемии (соответственно до 0,88±0,05 и 0,87+0,04 мМ/л), что указывает на повышение уровня аэробного гликолиза в ишемизированном миокарде. Об этом же говорит уменьшение электроотрицательного сдвига ОВП, начиная с 30-й мин наблюдения в сравнении с контролем.

Применение «Тринитролонга» (5 и 10 пластинок) приводило к снижению концентрации молочной кислоты в крови, оттекающей из зоны ишемии, что выражалось в достоверном снижении «избыточного лактата». Начиная с 30-й мин наблюдения этот эффект сочетался с менее выраженным ростом сдвига ОВП в сравнении с контрольной серией экспериментов. К 60-й мин наблюдения уровень избыточного лакгата и ДОВП составили соответственно 1,12±0,03 мМ/л и —6,8+0,2 мВ при применении 10 пластинок на4 животное. Кроме того, в отличие от контроля, при применении «Тринитролонга» (5 и 10 пластинок) не наблюдалось повышения процента экстракции глюкозы на 30 и 45-й мин ишемии.

«НМ» по выраженности влияния на метаболизм ишемизированного миокарда превосходил «Тринитролонг», на что указывает менее выраженный рост «избыточного» лактата и менее электроотрицательные значения ДОВП при действии комбинации мексидола с нитроглицерином, чем при введении «Тринитролонга». Так, к 60-й мин ишемии при аппликации 10 пластинок «НМ» величина избыточного лактата, ДОВП и процента экстракции глюкозы составили соответственно 1,07±0,03 мМ/л, —6,5±0,2 мВ и 14,0+2,1 %, в экспериментах с «Тринитролонгом» соответственно 1,12+0,03 мМ/л, —6,8+0,2 мВ и 15,4±2,5%. Таким образом, по влиянию на метаболизм ишемизированного миокарда «НМ» превосходил мексидол (5 и 20 мг/кг): наблюдались более существенные по выраженности и более продолжи-

тельные по времени сдвиги таких параметров, как экстракция глюкозы, «избыточный» лаюгат и сдвиг ОВП системы МК/ПВК.

Данные о стимуляции ККК, уменьшении депрессии сократимости сердца с локальной ишемией и оптимизации обмена углеводов в зоне ишемии при сочетанном применении нитроглицерина и мек-сидола являются экспериментальным обоснованием целесообразности сочетания нитратов и антиоксидантов в комплексной терапии острой коронарной недостаточности.

Влияние на фазный коронарный кровоток.

При внутрикоронарном введении комбинации нитроглицерина (5 мкг) и мексвдола (0,5 мг) наблюдалось повышение коронаролитическош эффекта в сравнении с наблюдавшимся при их изолированным введение в сопоставимых дозах. В частности, при совместном введении 0,5 мг мексвдола и 5 мкг нитроглицерина, средний коронарный кровоток возрастал на 43,3%, при раздельном внутрикоронарном введении нитроглицерина (5,0 мкг) и мексидола (0,5 мг) средний коронарный кровоток повышался соответственно на 30,9% и 31,9%.

В экспериментах с внутрикоронарным введением нитроглицерина, мексидола и их комбинации отсутствовали достоверные изменения показателей кардиогемодинамики (артериального давления, пер-фузионного давления, левожелудочкового давления и dp/dt шах), что свидетельствует о непосредственном действии нитроглицерина, мексидола и их комбинации на тонус коронарных сосудов.

В оценке действия препаратов на коронарное кровообращение важное значение имеет изучение их влияния не только на объемную скорость среднего коронарного кровотока, но и на показатели фазного кровотока с учетом расширительного резерва венечного русла.

Мексидол (0,25 и 0,5 мг внутрикоронарно) не оказывал существенного влияния на структуру фазного коронарного кровотока: отмечено равномерное дозозависимое увеличение (в сравнении с максимально возможным) ударного систолического, ударного диастоли-ческого, конечно-диастолического и минимального систолического кровотока. Это позволяет предположить, что мексидол в равной степени оказывает дилатирующее действие на мелкие субэндокарди-альные и крупные субэпикардиальные артерии.

Внутрикоронарное введение нитроглицерина (2,5 и 5,0 мкг) такте вызывало дозозависимое исчерпание расширительного резерва 1реимушестенно для показателей систолической фракции.

При совместном внутрикоронарном введении нитроглицерина и лексидолом, также как и при раздельном введении нитроглицерина фоисходило исчерпание расширительного резерва преимущестенно (ля показателей спстол]гческой фракции, что по мнению ряда авто-

ров (Строганова H. П., Коваленко В. И., 1985; Покровский М. В., 1995; Basende Е., Steward D. J., 1986; Sellke F. W. et al., 1990) отражает более значительный прирост пропускной способности крупных эпи-кардиальных артерий и благоприятно для перераспределения кровотока в пользу очага ишемии и предотвращения «синдрома обкрадывания».

Особого внимания заслуживает тот факт, что комбинация нитроглицерин + мексидол, при более выраженной стимуляции (в сравнении с изолированным введением препаратов) объемной скорости коронарного кровотока, вызывает дозозависимое исчерпание расширительного резерва преимущественно для показателей систолической фракции.

Влияние на тонус резкетивных и емкостных сосудов.

При добавлении в перфузионный раствор на пике калиевой контрактуры комбинации нитроглицерин (1 мкМ) + мексидол (0,1 мМ) наблюдалось падение тонуса изолированных сегментов коронарных артерий на 89,2±3,8%. По этому показателю указанная комбинация достоверно (Р < 0,05) превосходила нитроглицерин (1 мкМ) и мексидол (0,1 мМ) при раздельном введении: мексидол в концентрации 0,1 мМ вызывал уменьшение контрактуры деполяризованных калия хлоридом сегментов коронарных артерий собак на 31,4+5,3% (Р < 0,05 в сравнении с исходом), а нитроглицерин (1 мкМ) — на 62,6+5,6% (Р < 0,05 в сравнении с исходом).

Установленно, что нитроглицерин (1 мкМ) и мексидлол (0,1 мМ) способстввовали расслаблению базального тонуса изолированной воротной вены крыс. При этом, под влиянием нитроглицерина происходило снижение тонуса вены на 1,38+0,21 мН, под влиянием мек-сидола на 0,92±0,05 мН, что свидетельствует о однонаправленном действии указанных препаратов. Кроме того, нитроглицерин и мексидол достоверно снижали амплитуду сокращения изолирован ной воротной вены крыс: под влиянием нитроглицерина падение сократительной активности вены составила 58,5+1,1%, под влиянием мек-сидола — 68,1±3,2%.

В сравнении с раздельным введением препаратов, комбинация нитроглицерин (1 мкМ) + мексидол (0,1 мМ) вызывала более выраженное падение базального тонуса (на 2,01+0,31 мН) и амплитуды сокращения изолированной воротной вены (на 87,4±3,5%).

Усиление коронаролитического и венодилатирующего действия нитроглицерина при комбинации с мексидолом, возможно, связанно со стабилизацией NO за счет антирадикальной активности мек-сидола (Сернов Jl. Н., 1995). Снижение перекисного окисления ли-пидов может способствовать и восстановлению активности цитохро-

ма Р-450 и глютатион-5-трансферазы (Ольбинская Л. И., Литвицкий П. Ф., 1986; Диленко М. В., .1989), через которые опосредуется образование N0 и Б-нитрозотиолов под влиянием нитратов. Вместе с тем, известно, что калиевая контрактура сегментов коронарных сосудов, в основном, обусловлена входом кальция из внеклеточного пространства через потенциалзависимые кальциевые каналы (Никитина Е. Н., 1987). Учитывая, что нитроглицерин и мексвдол уменьшали выраженность калиевой контрактуры коронарных сосудов, можно полагать о наличии в их коронародилатирующем действии и антикальциевого компонента.

Протекторное действие при кальциевой перегрузке кардиомиоцитов.

В контрольной серии экспериментов время наступления контрактуры серца при введении срофантина К (4 мг/кг) в лимфатический мешок лягушки наблюдалось через 18,0±1,8 мин от начала эксперимента.

«НМ» в дозе 0,5 пластинки на животное достоверно пролонгировал время развития контрактуры до 40,7±3,1 мин и превосходил по этому показателю «Тринитролонг» (0,5 пластинка на животное) и мексидол (20 мг/кг). В этих экспериментах время развития контрактуры сердца соответственно составило 25,6±2,4 и 26,5+2,6 мин.

При внутривенном введении кальция хлорида у крыс развивались множественные аритмии, которые спустя 60,0±7,2 мин приводили в 100% случаев к гибели животных.

На фоне действия «НМ» число выживших животных составило 5 из 10 (50%). У одной крысы продолжительность жизни значительно превышала (600 с) этот показатель в контрольной серии. 4 животных из 10 погибли через 60—90 мин после введения кальция хлорида. Профилактическое введение мексвдола (20 мг/кг) приводило к снижению процента летальных исходов (37,3%) в сравнении с контролем, продолжительность жизни животных не изменялась. «Тринитролонг» (1 пластинка на животное), также как и мексвдол, оказывал протекторное действие при хлоридкальциевой интоксикации: число выживших животных составило 40%, а продолжительность жизни — 95±24 с.

Таким образом «НМ» выгодно отличался от «Тринитролонга» и мексвдола, о чем свидетельствует выраженная тенденция к пролонгированию жизни животных под влиянием комплексного препарата.

Влияние на развитие постокюнозионных и реперфузионных аритмий.

При моделировании острой коронарной окклюзии у крыс у всех животных в контрольной серии экспериментов через 249±33 с после пигирования артерии развивались ранние постокклюзионные аритмии, характеризующиеся политопной желудочковой экстрасистоли-2П и эпизодами желудочковой тахикардии. Продолжительность нарушении ритма составила 60±17 с, а частота возникновения желу-

дочковых экстрасистол — 82± 14 с на одно животное, фибриляции желудочков возникли у 5 животных из 12.

«НМ» (0,5 и 1 пластинка наживотнос)оказывал выраженное про-тивоаритмическое действие, на что указывает уменьшение продолжительности нарушения ритма до 4±2 с, снижение частоты желудочковых экстрасистол до 28+6 на одно животное, фибриляции не возникали, наблюдалась отчетливая тенденция к пролонгации латентного периода до 315+39 с. «Тринитролонг» (0,5 и 1 пластинка на животное) не проявлял отчетливого противоаритмического и анти-фибрилляторного действия: продолжительность нарушений ритма составила 40± 15 с, частота возникновения желудочковых экстрасистол — 62+12 на одно животное, латентный период возникновения аритмий — 256±35 с, фибрилляции желудочков возникли у 6 живот- ; ных из 8 при применении максимальной дозы. Мексидол (20 мг/кг) достоверно уменьшал общее количество желудочковых экстрасистол (до 46+8 на одно животное), сокращал длительность постокклюзи-онных нарушений ритма до 6±3 с и проявлял выраженный антифиб-рилляторный эффект.

Реперфузия коронарной артерии в контрольной серии экспериментов приводила к выраженным нарушениям ритма сердца (желудочковая экстрасистолия, парокеизмальная тахикардия) с латентным •периодом 2,9±1,3 с и продолжительностью-— 199+22 с.

«НМ» (0,5 пластинки на животное за 30 мин до лигирования коронарной артерии) полностью предупреждал развитие фибрилляции желудочков и достоверно (Р < 0,005) сокращал длительность пароксизмов желудочковой тахикардии (до 16+6 с), при 71+11 с в контроле. По выраженности противоаритмической активности «НМ» был сопоставим с действием мексидола, применяемого в дозах 10 и 20 мг/кг. При увеличении дозы «НМ» в 2 раза (1 пластинка на животное) наблюдалось усиление его противоаритмической активности, что выражалось в снижении частоты развития пароксизмальной желудочковой тахикардии и увеличении латентного периода развития аритмий до 6,8±1,5 с, при 2,9+1,3 с в контроле (Р < 0,005). При этом следует отметить, что «НМ» (1 пластинка на животное) превосходил по действию мексидол (10 и 20 мг/кг) и «Тринитролонг» (0,5 и 1 пластинка на животное). Так, в экспериментах с «Тринитролонгом» (1 пластинка на животное) и мексидолом (20 мг/кг) длительность пароксизмов желудочковой тахикардии была соответственно 54±14 и 39+14 с, вреля латентного периода соответственно 2,6±2,4 и 3,9+2,0 с.

Таким образом, «НМ» в отличие от «Тринитролонга» оказывал выраженное противоаритмическое действие при моделировании по-

стокклюзпонных и реперфузионных аритмий у крыс, превосходил по антифибрилляторной и противоаритмичсской активности мекси-дол при профилактическом применении.

Результаты выполненных исследований свидетельствуют о кар-диопротекторном действии сочетанного применения нитроглицерина и мексидола (на моделях коронароокклюзионного инфаркта миокарда у крыс,транзиторной ишемии миокарда у бодрствующих кроликов, при 60-минутной ишемии миокарда у собак, ранних посток-клюзионных и реперфузионных аритмиях у крыс). Эти данные являются экспериментальным обоснованием сочетанного применения нитроглицерина и антиоксиданта мексидола для терапии острой коронарной недостаточности и разработки комплексных антианпшаль-ных средств, содержащих нитраты и антиоксид анты.

- 18 -ВЫВОДЫ

1. Нитроглицерин при сочетанном применении с мексидолом оказывает более выраженное противонекротическое действие, чем при раздельном применении препаратов, на модели коронароокклю-зионного инфаркта миокарда у крыс и транзитороной ишемии миокарда у бодрствующих кроликов.

2. Нитроглицерин в сочетании с мексидолом улучшает коллатеральный коронарный кровоток,уменьшает депрессию внутрижелудоч-кового давления, dp/dt max, снижает лактацвдемию, электроотрицательные сдвиги окислительно-восстановительного потенциала в пробах крови из зоны ишемии, уменьшает экстракцию глюкозы в ишемическом очаге.

3. По положительному влиянию на кровоснабжение и метаболизм ишемизированного миокарда сочетание нитроглицерина с мексидолом превосходит действие этих препаратов при раздельном введении.

4. Нитроглицерин в сочетании с мексидолом в большей степени увеличивает объемную скорость среднего, конечно-диастолического и минимального систолического коронарного кровотока, снижает суммарное сопротивление венечного русла, расслабляет деполяризованные калия хлоридом сегменты коронарных артерий, снижает механическую активность изолированной воротной вены крыс. По коронарной венодилатирующей активности сочетание нитроглицерина с мексидолом превосходит действие нитроглицерина и мексидола при раздельном введении.

5. Нитроглицерин при раздельном введении и в комбинации с мексидолом увеличивает преимущественно систолическую фракцию венечного кровотока. Мексидол не изменяет структуру фазного коронарного кровотока.

6. Сочетание нитроглицерина с мексидолом при ранних посток-клюзионных и реперфузионных аритмиях, в отличие от изолированного применения нитроглицерина, предотвращает развитие фибрилляций желудочков, уменьшает выраженность и продолжительность пароксизмов желудочковых экстрасистолий и тахикар-дий

7. Сочетание нитроглицерина с антиоксидантом мексидолом перспективно в плане создания комплексного лекарственного средства патогенетической терапии ИБС.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Пашина И. В., Пашин Е. Н. Влияние нитроглицерина и мексидола на механическую активность изолированной воротной вены крыс // Диагностика, первичая и вторичная профилактика ИБС и гипертонической болезни. Сб. научн. трудов. — Курск, 1994. — С. 59—60.

2. Действие нитроглицерина и антиоксиданта мексидола на тонус емкостных сосудов / Е. Н. Пашин, Л. Н. Сернов, И. В. Пашина, Л. Д. Смирнов // II Рос. нац. конгресс «Человек и лекарство»: Тез. докл. — М.: РЦ «Фармедннфо», 1995. — С. 293-294.

3. Пашина И. В. К анализу механизма кардиопротективного действия мексидола // Тез. докл. I Съезда Рос. науч. о-ва фармакологов. — Волгоград, 1995 — С. 331.

4. Оценка коронарного действия препаратов с учетом возможностей расширительного резерва венечных артерий / М. В. Покровский, Е. Н. Пашин, В. Б. Монахов, И. В. Пашина // Тез. докл. I Съезда Рос. науч. о-ва фармакологов. — Волгоград, 1995 — С. 343.

5. Кардиопротективное действие нитроглицерина и антиоксиданта мексидола при коронароокклюзионном инфаркте миокарда у собак/Л. Н. Сернов, И. В. Пашина, Е. Н. Пашин и др.//Тез. докл. I Съезда Рос. науч. о-ва фармакологов. — Волгоград, 1995 — С. 394.

6. Кальциевая перегрузка кардиомиоцитов: протективное действие нитроглицерина при свместном применении с мексидолом / В. В. Пичугин, И. В. Пашина, Е. Н. Пашин, Л. Н. Сернов // III Рос. нац. конгресс «Человек и лекарство». Тез. докл. — М.: РЦ «Фармедннфо», 1996. — С. 187.

7. Влияние нитроглицерина при совместном применении с мексидолом на структуру фазного коронарного кровотока / Е. Н. Пашин, И. В. Пашина, В. В. Пичугин и др. // IV Рос. нац. конгресс «Человек и лекарство». Тез. докл. — М.: РЦ «Фармедннфо», 1997. — С. 282.