Автореферат и диссертация по медицине (14.00.34) на тему:Влияние препарата природного происхождения эплира на морфо-функциональное состояние клеток системы мононуклеарных фагоцитов при остром токсическом гепатите в эксперименте

На правах рукописи

2 9 АПР т>

ШАХОВА Светлана Сергеевна

ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА ПРИРОДНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ЭПЛИРА НА ШРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ КЛЕТОК СИСТЕМЫ ШНОНУКЛЕАРНЬИ ФАГОЦИТОВ ПРИ ОСТРОМ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.00.34 - курортология и физиотерапия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск - 1896

Работа выполнена в лаборатории изучения механизмов действия фивических факторов Томского научно-исследовательского института курортологии и физиотерапии МЗ и МП РФ.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, академик РАМТН, профессор Левицкий Е.Ф. доктор биологических наук Лаптев Б.И.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Огородова Л.М. доктор медицинских наук Зарипова Т.Н.

Ведущая организация: Всероссийский научный центр

медицинской реабилитации и физической терапии КВ и МП РФ

Защита диссертации состоится (¿¿а.Л Ю96 г.

в & часов на заседан:ш диссертационного совета К 084.77.01 при Томском НИИ курортологи! и физиотерапии КЗ и Ш ГО по адресу: 634009, Томск, ул. Розы Люксембург,!.

С диссертацией мси.шо ознакомиться в библиотеке Томасого НИИ курортологии и физиотерапии Ш и МП РФ

Автореферат разослан 1996 г.

И.о. Ученого секретаря диссертационного совета, ^

кандидат биологических наук - --Тронова Т.Н.

0Б1ДЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЛБОТП

Актуальность теми. Заболевания печени занимают существенное место среди причин, вызывающих утрату трудоспособности и смертность населения. В частности, острыми гепатитами, вызванными вирусными или токсическими агентами, в течение года заболевает не менее полутора миллионов жителей Земли (А.И.Арчаков, И.И.Каруяина, 1988).

Круг веществ с гепатозащитными свойствами в современной клас-сифи1сации лекарственных средств достаточно велик. Однако из них выделяют незначительную группу гепатопротекторов, оказывающих избирательное терапевтическое действие на ткань печени. К ним относятся растительные полифенольные антиоксиданты (легалон, катерген, силибор, валиллив), фосфолипидный препарат эссенциале и некоторые другие (А.С.Саратиков, А.И.Венгеровский, 1995). Следует отметить, что терапевтическая эффективность вышеперечисленных средств не всегда оказывается достаточной. Кроме того, все они являются импортными препаратами, что побуждает осуществлять поиск новых эффективных отечественных гепатозащитных средств природного происхождения.

В терапии патологии печени заслуженной популярностью пользуются гепатоэащитные средства природного происхождения: эплир, сллоокол-лип и максар (A.II. Венгеровский, A.C. Саратиков, 1990; В.Н.Буркова и др., 1988). Денным преимуществом этих препаратов является низкая токсичность, хорошая переносимость и мягкость действия. Однако, спектр гепатоэа'цитных лекарственных средств краше ограничен. В последнее время большое внимание уделяется ног-ому препарату - эплиру, выделенному иэ полярной фракции иловой сульфидной грязи (Е.Я.Матис и др., 1989), гепатозащптные свойства которого не уступают по своей эффективности эссенциале (А.И.Венгеровский и др., 1990; A.C. Саратиков, А.И.Венгеоовсклй, 1995). Причем, в отлично от других лекарственных средств данной группы, эплир можно вводить не только per os, но и с помощью физиотерапевтических процедур, в частности, >.!зтодом ультра/'юнофореза. Указанный препарат проявляет мембраностаб;1. визирующие свойства, ингибирует процессы перекисиого о;шсления липидов, стимулирует гемопоэз (А.С.Саратиков и др.,1990; М.Г.Скороходова, 1990).

Перечисленные выке свойства позволяют предположить, что эплир может 01«зывать защитное и стимулирующее влияния на систему фагоцитирующих мононуклеароз. Вместе с тем, механизмы модулирующего эффекта эплира на клетки Купфера, через которые происходит реали-

зацил его гепатопротекторных свойств, удаление некротических и поврежденных элементов и регуляция процессов регенерации клеток печени, остаются практически неизученными.

Цель работы. Изучить влияние препарата природного происхождения эплира на морфо-функционалыюо состояние различных отделов систеш мононуклеарных фагоцитов при остром токсическом гепатите в эксперименте.

Задачи исследования.

1. Исследовать влияние эплира на различные отделы системи мононуклеарных фагоцитов и гепатоцити в норме и при моделировании экспериментальной СС14-интоксикации.

2. Изучить особенности действия ультрафонофоретического метода введения эплира на клетки систеш мононуклеарных фагоцитов при остром токсическом гепатите.

3. Оценить корригирующее влияние эплира на макрофагалыше элементы в сравнении с гепатопротектором эссенциале и иммуномодулято-ром продигиозаном.

Научная ковизна. Впервые в эксперименте изучено влияние нового препарата природного происхождения эплира на функциональную активность различных отделов систеш мононуклеарных фагоцитов.

Показано, что под действием препарата у интактных мышей наблюдается стимуляция систеш мононуклеарных фагоцитов.

У .тавотных с острым токсическим гепатитом выявлено корригирующее действие эплира на состояние макрофагов печени, продукцию ци-токинов [слетками Купфера (интерлейкша-Х и колониестимулирующего и эритропозтического факторов). При этом установлено, что эффективность коррекции мсрфо-функционального состояния системы мононукле-арных фагоцитов при остром токсическом гепатите у животных на фоне лечебно-профилактического применения ультрафонофоре.за эплира не уступает таковой при его внутрижелудочном введении.

Показано, что у животных с острым токсическим гепатитом введение эплира по сравнению с гепатопротектором эссенциале и иммуиоыо-дулятором продигиозаном оказывает Солее выраженное нормализующее действие на морфо-функциональное состояние макрофагов'печени.

Практическая значимость. Полученные данные могут служить экспериментальным обоснованием для использования ультрафонофореза эплира при разработке новых методов лечения заболеваний, сопровождающихся нарушениями в системе мононуклеарных фагоцитов.

Показано, что для коррекции морфо-фушщионалыюго состояния систеш мононуклеарных фагоцитов при моделировании острого токси-

ческого гепатита может быть использован как фонофоретичеасий метод введения эплира, так и внутрижелудочный прием препарата.

Полученные данные легли в основу разработки вещества природного происхождения для антиметастатической терапии (положительное решение N 5065317/17 (035964) от £7.11.1995 Г.

Основные полол'.скня nuiiocsmiio на зсвдггу.

1. Курсовое введение эплира интактным животным приводит к стимуляции различных отделов системы мононуклеарных фагоцитов, сопровождающейся усилением фагоцитарной и секреторной активностей макрофагов печени.

2. Эффективность корригирующего влияния эплира на систему мононуклеарных фагоцитов при токсическом ССЦ-гепатите на фоне лечебно-профилактического применения ультрафонофореза не уступает таковой при внутрижелудочном приеме препарата.

3. Нормализующее воздействие эплира на макрофаги печени при остром токсическом гепатите более выражено по сравнению с гепатоп-ротектором эссенциале и иммуномодулятором продигиозаном.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на 1 Международном конгрессе по традиционной медицине и питанию (Москва, 1994), Российской научно-практической конференции, посвященной 150-летию курорта "Краинка" (Тула-Кратка, 1994), отчетной научной сессии Томского НИИ курортологии и физиотерапии (1994).

Публикации. По теме диссертации опубликовало 4 работы, получено положительное решение на изобретение N 50В5317/144 (0359964) от 27.11.1995 г.

Структура и объем работа. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, главы результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Работа изложена на 154 страницах машинописи, содержит 56 таблиц, 18 рисунков. Указатель литературы включает 178 источников, из них 85 отечественных и 93 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ¡'дтеркали н метода исследовашт.

Для решения поставленных задач были проведено 10 серий опытов на 380 мышах-самцах линии Balb/c массой 18-22 г. Опиты проводились в одно и тоже время суток, через 16-17 часов после кормления, приемущественно в осенне-зимний период, в утреннио часы для исключения влияния суточных и сезонных колебаний. Для забора материала

гзтотных умервщшли путем цервикальной дислокации спинного мозга.

В соответствии с поставленными задачами были проведены следующие серии экспериментов:

1 - фон (интактные мыши) (30 шт.);

2 - животные с курсовым внутрижелудочным приемом растительного масла (растворитель) (25 шт.);

3 - мыши с курсовым внутрижелудочным приемом 1% масляного раствора зплира (25 шт.);

4 - гепатит, вызванный введением ССЦ (70 шт.);

5 - животные с гепатитом при курсовом лечебна-профилактическом внутрижелудочком введении эплира (65 шт.);

6 - животные с гепатитом при курсовом лечебно-профилактическом внутршкелудочном введении эссенциале (65 шт.);

7 - животные с гепатитом при курсовом лечебно-профилактическом введении продигиозана (25 шт.);

8 - ниши при 1?урсовом воздействии улътрафонофюреза растительного масла (25 шг.);

9 - тавотные с гепатитом при курсовом воздействии ультрафонофо-роза растительного масла (25 шт.);

10 - затотше с гепатитом при курсовом воздействии ультрафоно-фореза 1% масляного раствора эплира (25 шт.).

Острый токсический гепатит вызывали путем ежедневного интра-гастрального введения 107. масляного раствора ССЦ в дозе 1 мл/кг веса на протяжении 6 суток (О.В.Паульс, 1388; В.С.Чучалин, 1989). Для оценки динамики ССЦ-гепатита и изучения влияния на нее эплира, эссенциале, продигиозана исследования проводили спустя 1, 3, Б, 7 суток после окончания введения препаратов.

Препарата. Зплир - препарат, полученный в лаборатории геохимии НИИ химии а нефти СО АН СССР путем многократного экстрагирования нативной грязи смесью хлороформа и метанола с последующим удалением канцерогенных веществ и обработкой Н-гексеналом. Он содержит фосфолипиды (фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, глицерофосфа-тиды в виде бкфитаноловых ¡;иров), сульфолипэды, гликолипиды, ксантофиллы, желчные кислоты, высшие спирты, хлориды. В работе использовали 17. масляный растЕор эплира, полученный через аптечную сеть г. Томска. В качестве препаратов сравнения использовали гепа-топротектор эссенциале форте ("Наттерманн", Германия) или иммуно-ыодулятор продигиозан.

Зплир и эссенциале вводили внутрижелудочио ежедневно с помощью зонда по лечебно-профилактической схеме в течение 10 дней. За два

дня до CCI4-интоксикации, затем в течение б дней за S'часа до введения четыреххлористого углерода и 2 дня после интоксикацт тет-рохлорметаном. Эплир вводили в дозе 10 мг/кг веса етшоткого, зс-сенциале - 80 мг/кг (О.В. Паульс, 1988; В.С.Чучалин, 1989; И.М.Се-дьгх, 1989), продигиозан - внутримышечно за сутки до начала введения тетрахлорметана, затем трижды через 3 суток в дозе 60 мг/кг (Д.Н.Маянский, 1981, 1991).

Для проведение ультрафонофорева в опытах использовали ультразвуковой аппарат УЗТ-1.01 с фиксированной частотой 830 кГц, интенсивностью воздействия 0,2 Вт/смг, продолжительностью 3 мш!уты в непрерывном режиме. Процедуры отпускали по лабильной методике, па-равертебрально на межлопаточную область спины. В качестве растворителя применяли растительное масло. Для фонофорева использовали 1% масляный раствор эплира. Курс состоял из 10-ти процедур, проводимых ежедневно по лечебно-профилактической схеме.

Применяемый нами режим ультразвугаэвых колебаний (0,2 Вт/см2) обоснован в ряде экспериментальных и клинических работ, свидетельствующих об оптимальном противовоспалительном действии ультразвука (Е.Н.Сологуб и др.. 1981; Д.К.Новиков, И.А.Новикова, 1986).

В работе ггспагьзкзаяя слоду?г?;э погода. В периферэтеской крови подсчитывали общее количество лейкоцитов и гемограмму , в îcocthou мозге, Tia.fyce и селезенке определяли общую клеточность с помопфс стандартных методик (Е.Д.Гольдберг, 1989)'. Определение уровня аланинтрансаминазы и аспартаттрансаминазы в сыворотке крови осуществляли колориметрически* методом с использованием наборов реактивов фирмы "Лахема" (Чехия). Гистологический анализ ткани печени проводили на парафиновых срезах, окравенных гематоксилином и эозином. Получение Ыас-1+ шеток (клеток Купфера производили путем "пэшшга" (М.Клаус, 1990) с последующи!.« культивированием в течение 24 часов и биотестированием кондиционной среды на содержание в ней цитратов Гинтерлейкина-1 (ИЛ-1), колониест1-мулируадего фактора (КСФ), зритропоэтина (ЭП)]. Уровень интерлейкина-1 определяли с помогаю субмитогенного теста на тимоцитах, КОЗ и ЭП - на костномозговых клетках (Е.Д.Гольдберг и др., 1992). Фагоцитарную активность перитонеалышх макрофагов и лейкоцитов периферической 1фови исследовали с использованием золотистого стафилококка, частиц латекса или эритроцитов барана (И.Я.Учитель, 1978; Г.Фркмель, 1S87). Хемилюминисценцию перитонеальных макрофагов оцегавали на хемшяоминометре с помощь» люминола (Г.Ю.Любимов и др.,1992). В качестве стимулятора использовали форбол меристат ацетат (Slgra,

США), 1соторый вносили в дозе 2,5 икг/мл. Через 5-10 минут оценивали максимум люминесценции. Клиренс крови от частиц коллоидного угля или латекса определяли колориметрическим или флхюриметричесгаш способами, соотвественно (Г.Фримель, 1987; Д.Н.Маянский и др., 1992; Е.Д.Гольдберг и др., 1992). НСТ-тест лейкоцитов периферической крови или перитонеалышх макрофагов исследовали с помощью ннтросинего тетразолия (Д.Н.Маянский, 1981, 1991).

Полученные результаты обрабатывали с использованием стандартных статистических или непараметрических методов Вилкоксона-Мана-Уитни (В.Урбах, 1963).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

Согласно современным представлениям в организме существует иерархическая система запуска адаптационных реакций. В качестве при-, мера можно рассмотреть экспериментальную модель острого токсического гепатита, вызванного введением четереххлористого углерода. Одним наименее устойчивым элементом к данному яду являются гепато-циты, которые не способны его утилизировать. Образующиеся токсические метаболиты разрушают'клетки печени. Лизис гепатоцитов соп-роводдается развитием воспалительной реакции на фоне глубокой депрессии практически всех функциональных свойств печени. Наблюдаемый выброс большого количества внутриклеточных энзимов, активных метаболитов и продуктов распада приводит к усилению системы перекисно-го окисления липидов, изменению со стороны цитохромов, ядерного матрикса, структуры цитоплазматическия мембран и, в конечном счете, к необратимым, деструктивным изменениям данного органа (Д.Н. Ыаянский, 1981; Д.Н.Маянский и др., 1992; А.И.Венгеровкий, A.C. Саратиков, 1988). Параллельно включаются защитные механизмы, среди которых следует отметить активацию клеток СШ>. Стимулированные клетки Купфера одними из первых вганочаются в процесс нейтрализации поврежденных гепатоцитов и продуктов распада ткани (Д.Н. Маянский, 1991, И.С.Фрейдлии, 1984, 1995).

В проведенном исследовании на модели острого токсичесютго гепатита были получены изменения, аналогичные указанным выше. Тетрах-лорметан' вызывал глубокое нарушение морфо-функциональных свойств печени, крови, костного мозга и тимуса.

На гистологических препаратах были видны многочисленные очаги некрозов, жировая и белковая дистрофии клеток печени, мононуклеар-ная инфильтрация сосудов. Увеличивалась абсолютная (на 46Х) и относительная масса печени. В крови возрастала активность маркеров повреждения гепатоцитов - ферментов АЛТ (на 2092), ACT (на 76%).

Кроме того, наблюдалась выраженная инволюция вилочгапой железы (до 63% на 1 сутки опыта), что, очевидно, свидетельствовало о развитии стрессорного компонента ответной реакции организма (табл. 1).

Характерные для воспалительной реакции сдвиги были отмечены и со стороны системы крови. Спустя сутки увеличивалась клеточность костного мозга, а затем в периферической крови возрастало абсолютное число незрелых гранулоцитов (в 6,5 раза по сравнению с фоновыми показателями), сегментоядерных иейтрофилов (в 2,3 раза),' моноцитов (в 5,5 раза). Кроме того, наблюдалась стимуляция фагоцитарной активности нейтрофилов по отношению к золотистому стафилокок-icy• Отмечалось возрастание фагоцитарного индекса (на 26%), фагоцитарного числа (на 16%), индекса завершенности фагоцитоза (на 135%) и интенсивности НСТ-резкции (на 101Z).

Интересные данные были получены и при изучении клеток Cftffi. Оказалось, ито в процессе развитая острого токсического гепатита поведение различных отделов системы мононуклеариих фагоцитов отличалось друг от друга. Так, если в перктспсадьных макрофагах отмечались признаки стимуляции (увеличение на 59Z фагоцитарного индекса, усиление в несколько раз НСТ-реакцин), то поглотительная способность клеток Купфера, судя по клиренсу частиц коллоидного угля или латекса, pes¡co снижалась (рис. 1. 2). По-видимому, в последнем случае nv.eso место не толысо токсичеасое действие на сти клетки CCI4, но и частичная блокада накрофагоа печени продуктами деструкции гепатоцитов. 3 то не вро1,л следует отметить, что секреция про-воспалителышх цитокинов Купферовыми клетками возрастала для пн-терлейгаша-1 в 5,4 раза, колониесгимулирувщэй активности - в 5,3 раза. Уровень ceicpemut ЗПА, при зтем достоверно не изменялся (табл. 1).

На основании полученных результатов и данных литературы модно • заключить, что при моделировании острого токсического гепатита реализуется "аварийный", детерминирований реким адаптации, нкправ-ленный, в первую очередь, на нейтрализация продуотоз распада и токсических метаболитов, привлечения в поврекденную ткань печени иейтрофилов с целью локализации очагов дестругаяот и подготовки плацдарма для последующего процесса репарации печени (Л. Н.Мзяго-кий, 1931, ;331; Д.Н.Каяксгаш и др., 1992). Однако, клетки Купфера не справляются с этой задачей. Усиленная продукция провоспалитель-кых цитокинов и активных форм гаслорода на фоне снижения поглотительных свойств CíiS, очевидно, приводили Л15кь к дополнительной деструкции гепатоцитоз, увеличению числа и размеров очагов некроза

в печени и снижению функциональной активности данного органа.

Химическая структура используемого в работе нового препарата природного происхождения эплира позволяла предположить, что данный препарат может быть экзогенным источником пластического материала и антирадикальных биомолекул, необходимых клеткам Купфера для реализации своих функций при развитии некро-воспалительных и регене-рациониых процессов в ткани печени при остром токсическом гепатите.

В опытах на интактных животных было установлено, что введение эплира приводит к умеренной стимуляции клеток системы мононуклеар-ных фагоцитов (табл. 1, рис. 1, 2), о чем свидетельствовало развитие в периферической крови относительного моноцитоза (повышение числа клеток на 82% от исходного уровня), усиление способности пе-ритонеальных макрофагов поглощать частицы латекса (на 39%) и продуцировать супероксидные формы кислорода (на 43%). Особого внимания заслуживает тот факт, что зплир усиливает секрецию клетками Купфера цитокинов (ИЛ-1 - на 38%, КСА - '50% и ЭПА - на 20%).

Кроме стимуляции Ш3> препарат вызывает также активацию и других клеток. В нейтрофилах усиливается НСТ-ре-акция (на 37%), способность к завершенному фагоцитозу стафилококка (на 23%). Других изменений со стороны костного мозга, картины периферической крови, тимуса, селезенки, ткани-печени выявлено не было.

Исследования, проведенные на модели токсического гепатита, подтвердили высказанное выше предположение. Введение эплира животным с острым токсическим гепатитом во многом сглаживало изменения, наблюдаемые со стороны системы мононуклеарных фагоцитов, крови, печеночной и лимфоидной ткани, вызываемые действием гепатотоксипа (табл. 1). По сравнению с контрольной группой (СС14-интоксикация) снизился прирост удельной массы печени, а выраженность повреждений со стороны ее микроархитектоники (количество очагов некроза, нарушение строения микрососудов, гепатоцитов, паренхимы) была значительно меньше. Это согласуется с данными других авторов (А.С.Сара-тиков, А.И.Венгеровский, 1995). Гепатопротекторные свойства препарата проявлялись и в снижении уровня активности ферментов печеночного происхождения (маркеров повреждения) - AJIT и ACT в сыворотке крови по сравнению с гепатитом без коррекции (контроль) (табл. 1).

Наблюдавшиеся по отношению к контролю сдвиги фагоцитарной активности нейтрофилов - снижение фагоцитарного индекса (до 84%) при возрастании завершенности фагоцитоза (на 44%), а также увеличение

- и -

Таблица 1

Влияние лечебно-профилактического введения эплира, эссешшале и продигиозала на морфо-функционаьные параметры печени и системы мононугаеарных фагоцитов при остром ССЦ-гепатите

Воздействие

АЛТ МЕ/мл

АСТ (С/мл

УД. масса печени мг/г

Моноциты крови х10!

Перитон. макрофаги

ФП.Х

нст.х

Клетки Купфера

ИЛ-1 у.е.

КСА Х105

ЭПА УЛО[

Фон

Эплир

СС14-геп.

Зплир+

ссц-

геп.

Эссен-

циале

+ССЦ-

геп.

Проди-

ГИОЗЭН

+ ССЦ-геп.

17,9 |46,9 |46,8 +1,9 112,5 |+1,5 I I

14,3*|50,9*|49,5 т1.б |+3,3 |+1,7

I I

55,4*182,6*168,3* +9,9 |+8,3 |+2,С

I I 33,18|58,9«|62,6* +2,7*1+5,2 1+0,4 I I

43,5*|83,8*|64,1А +3,8 |+6,2 |+0,4

51,8*|56,3»|85,6й* +7,8 |+1,4 1+2,5 I I

0,14 |35,8 +0,02|+3,7 • I

0,18 |49,6* +0,021+3,1 I

0,77*107,0* +0,161+3,4 I

0,96л|36,3 +0,121+2,5

I

0,36 |28,0 +0,11|+3,0

0,50*133,4 ±0.1 (±2.1

20,6 +1,7

29,5* ±1,3

63,2* ±5,2

42,0* +3,4

19,6 ±0,9

33,0«* +2,4

0,42 0.58* 2,25* 2,28* 1,83*

4,33*8

0,50 |0,92 I I

0,75*11,10*

2,67*10,67

I I

3,33*12,92*

I «

I

2,75*10,83

I

4,338|0,67 *1 I I

Примечание: * -8 ■

■ р < 0,05 по сравнению с фоном; - р < 0.05 по сравнения с ССЦ- гепатитом

1001—

Е231 Ш2 ЕЗа ШЖ 4 ЕЗе СПб Ш7

Рис.1. Очистительная способность крови от частиц коллоидного угля у мышей при остром токсическом гепатите. 1 - фон; 2 - ССЦ; 3 - эплир + СС14; 4 - ультразвук + ССЦ; Б - ультрафонофорез зплкра + ССЦ; 6 - эссенциале + ССЦ; 7 - продигиозан + ССЦ. По оси абсцисс - время выведения частиц в сек; '* - достоверность различий по отношении к гепатиту

m i ш 2 Ез з ш 4 ЕПЗ 5 Ш s Ш 7

Рио.2. Очистительная способность крови от частиц латекса у мышей при остром токсическом гепатите. 1 - фон; 2 - ССЦ; 3 - зплир + ССЦ; 4 - ультразвук + ССЦ; Б - ультрафонофорев зплира.+ ССЦ: 6 - эссенциале + ССЦ; 7 - продигиоэаи + ССЦ. По оси абсцисс -время выведения частиц в сек; * - достоверность различий по отношению к гепатиту

поглотительной способности перитонеальных макрофагов (105% на 5 сутки) и очистительной способности клеток Купфера (рис. 1, 2) свидетельствовали о нормализующем действии эплира на систему СШ мышей с острым токсическим гепатитом.

Интересные данные были получены при изучении секреторной способности клеток Купфера. Оказалось, что под действием эплира уровень продукции ими ИЛ-1 и КСА оставался достаточно высоким. Важно отметить, что макрофаги печени в этих условиях начинали продуцировать еще один тип цитокинов - ЭПА (табл. 1).

Все эти факты свидетельствуют о том, что СЖ> под действием эплира перестраивает свои функциональные свойства в направлении усиления очистительной способности от продуктов распада клеток, соединительной ткани и токсических метаболитов. Повреждающее действие гепатотокиша на макрофагалыше элементы под влиянием эплира было выражено в значительно меньшей степени, чем у животных с гепатитом. Очевидно, что эплир обладает как стимулирующим, так и протекторным действием и по отношению к системе мононуклеарных фагоцитов и, в частности, клеток Купфера.

Следует отметить, что в используемой концентрации специфический иммуностимулятор макрофагов продигиозан у мышеи с острим токсическим гепатитом уменьшал активность в плазме крови ACT, фагоцитарную активность мононуклеаров (табл. 1). В то же время происходило возрастание продукции цитокинов (1Ш-1 и КСА) и увеличение выраженности деструктивно-некро'тических изменений в ткани печени.

Не исключено, что эти нежелательные эффекты продигиозана могли быть следствием чрезмерной стимуляции мононуклеарных фагоцитов. Это предположение подтверждается данными А.Д.Маянского (1995) и В.О.Войтенкова, В.Б.Окулова (1995), показавши;;, что в таких случаях наблюдаются депрессия СМ1>, усугубление тяжести патологического процесса, усиление воспалительной реакции, отека в очаге деструкции, повреждение сосудов, стромы, внеклеточного матрикса, цитолиз клеток, нарушения в работе нейро-эндокринного аппарата. Кроме того, отмечаются усиление потребления кислорода в клетках, энергетических макромолекул, образование промежуточных токсических радикалов и метаболитов, не успевающих обезвреживаться имеющимися в организме защитными механизмами. Именно эти сдвиги и наблюдались в нашем исследовании. Очевидно, что в таких условиях может возникать порочный круг, когда цитотоксические факторы, продуцируемые ги-перстимулирован«ыми макрофагами, не только не выполняют защитных Функций, а наоборот, усиливают повреждающее воздействие ССЦ не

только гепатоцитов, но и макрофагов печени.

При оценке влияния гепатопротектора эссенциале на систему мо-ионуклеаров мышей с острым токсическим гепатитом оказалось, что препарат не повышал фагоцитарной активности С!,® (табл. 1). При этом, наряду с уменьшением изменений со стороны кроветворной ткани и лимфоидных' органов, снижением в сыворотке крови активности толь*-ко АЛТ, происходила супрессия фагоцитарной активности Iслеток периферической крови и перитонеальной полости. Вместе с тем. при введении эссенциале наблюдались некоторые позитивные сдвиги в системе мононуклеаров, в частности, повышение очистительной способности |фови от инертных частиц (рис.1, 2). С учетом этих данных, можно заключить, что положительный эффект действия гепато:.ротектора бил менее выражен, чем при действии эплира..

Практический интерес представляло изучение при токсическом гепатите возможности адекватной стимуляции СШ> и защиты гепатоцитов при комплексном действии физиотерапевтических факторов и.' в частности, ультрафонофореза эплира. Как уже было отмечено, зплир, содержит липиды и фосфолипиды, а также больной комплекс жирорастворимых биоактивных веществ, вторые способны проникать через кожные покровы при физиотерапевтически воздействиях.

Результаты проведенных нами исследований показали, что гистологическая структура печени при ультрафонофорезе эплира мышам с острил токсическим гепатитом практически не отличалась от таковой, при персралыгсм ведении эплира. Существенных различий между эт:м! сериями не наблюдалось и при сопоставлении параметров удельной массы печени, активности ферментов печеночного происходцения, фагоцитарной активности, очистительной способности клеток Купфера (табл.1, 2; рис.1, 2). На основании этого, можно заключить, что как внутрижелудочный, так и ультрафонофоретический путь введения . эплира в целом не отличаются между собой по выраженности их гепа-тозащитного действия и стимулирующего влияния на систему мононук-леарных фагоцитов.

Согласно существующей концепции (Д.Н. Маяиский, 1981, 1991; К.Ка1о е.а. 1989), для лечения патологических процессов в печени (в том числе острых токсических гепатитов), следует использовать препараты,.регулирующие функция СМ2. Для решения этой задачи необходим поиск новых, более эффективных лекарственных средств, которые жгли бы при различных заболеваниях адекватно воздействовать на макрофагалыше клетки.

Таблица 2

Влияние лечебно-профилактического применения ультрафоио-фореаа зплира на морфо-функциональные параметры печени и системы мононуклеарных фагоцитов при остром ССЦ-гепатите

Воздействие АЛТ . МЕ/МЛ АСТ МР/мл УД. масса печени мг/г Моноциты крови Х109 Перитонеалыше макрофаги

ФИ,% нет,;» Хемилюминесценция

Спонт.% Индуц.%

Интак- 25,0 36,8 48,6 0,21 21,8 20,8 100 • 100

ТНЬ16+ +5,4 +4,1 +1.3 +0,03 +1,7 |+1,7

У$Ф р.

масла

У$Ф р. 50,2 80,4 57,0 0,57 |29,5 148,0 110* 180*

масла+ +8,0 а +7,6* +1.0* +0,15 |+1,7*1+2,2*

ссц

У5Ф 50,2* 49, 1 56,2 0,11* 1 |56,0«|49,3* 120* 232*#

эплира ±6.1 +12,2 ¿0,9 +0,05 1+3,4*1+2,7

+ССЦ I 1 | 1 1 ' | 1 | 1

Примечание: а - р < 0,05 по сравнению с интактными животным; » - р < 0,05 по сравнению с ССЦ- гепатитом

Полученные результаты действия зшшра на гепатоциты согласуются с данными других авторов (В.Н.Буркова и др.. 1988; Л.С. Саратикоз, А.И.Венгеровский, 1988, 1995). Так, мембрано-стабилизирующее эффекты эплира проявлялись и в снижении гиперфермэнтемии, возникающей при массивном цитолизе гепатоцитов. При этом, полярные фракции ли-пидов из иловой сульфидной грязи превосходили эссенциале по спо- • собности стабилизировать клеточные и субклеточные структуры проявляли антиоксидантное действие. По их мнению, фосфатиды, входящие в состав эплира, зссенциале и ряда других аналопгашх препаратов, являясь основным компонентом мембран меток, обладают способностью восстанавливать их целостность и физико-химичеашз свойства.

Судя по полученным результата}/, эплир является uj только гепа-топротектором и стабилизатором мембран клеток СШ>, но и стимулятором мононуклеаров, в частности, iслеток Купфера. Как видно из нагих данных и'материалов других авторов (Д.Н.Маянский, 1991 и др.), ни зссенециале (поставщик фосфолипидов и комплекса витаминов), ни продигиозан (стимулятор мшфофагов) не обладают таз сим широким спеютром действия по отношения к гепатоцитш и клеткам системы фа- . гоцитирувщих мононуклеаров. При этом следует отметить, что продигиозан может сам вызывать глубокие нарушения цитохром Р-450-зависимых моноксигеиаз клеток печени (C.B.Сибиряк, И.Л.Кра-силова, 1995).

Результаты проведенного исследования показали, что для коррекции токсического гепатита возможно применение ультрафонофореза нового препарата природного происхождения эплира. По-видимому, при таком воздействии на организм происходит взаимное усиление положительного влияния как самого препарата, так и ультразвука на CJ,® и гепатоциты.

ВЫВОДЫ

1. Курсовое внутрижелудочное введение препарата природного происхождения эплира интактным мышам приводит к умеренной стимуляции клеток системы мононуклеарных фагоцитов. При этом наблюдается усиление фагоцитарной активности макрофагов, а также стимуляция секреции цитокинов клетками Купфера.

2. Лечебно-профилактическое внутрижелудочное введение эплира мышам с острым токсическим гепатитом нормализует функцию гепатоци-тов, оказывает корригирующее влияние на систему мононуклеарных фа> гоцитов. При-этом наблюдается нормализация фагоцитарной способнос-

' ти макрофагов, снижение активности НСТ-реакции, а также возрастание секрецци цитокинов, синтевируемых клетками Купфера - интерлей-кина-1, колониестимулирующего и эритропозтического факторов.

3. Эффективность коррекции морфо-функционального состояния системы мононуклеарных фагоцитов у животных с токсическим ССЦ-гепа-титом при лечебно-профилактическом применении ультрафонофореза эплира не уступает таковой при внутрижелудочном приеме препарата.

4. У животных с острым токсическим гепатитом внутрижелудочное введение эплира по сравнению с гепатопротектором зссенциале и им-муноыодулятором продигиозаном оказывает более выраженное нормали-вующее воздействие на мононуклеарные фагоциты.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЯКЙОЙАШШН ПО ТЕ1Ш ДИССЕРТАЦИЙ!

1. Состояние системы мононуклеарных фагоцитов при экспериментальном гепатите на фоне введения эплира / Актуальные вопросы физиотерапии и курортологии Сибирию. - Томск, 1994. - С. 33-34.

2. Иммуномодулирующее действие фонофоретического введения эплира в эксперименте / там же. - С. 35-36 (соавт. Т:В.Рабинская, Б.И.Лаптев).

3. Влияние эплира на систему мононуклеарных фагоцитов у животных с острым ССЦ-гепатитом / Актуальные вопросы курортной терапии. - Краинка, 1994. - 4.1. - С. 40-41.

• 4. Перспективы использования эплира в лечении токсических гепатитов / 1-й международный конгресс "Традиционная медицина и питание". - М., 1994. - С. 400.

5. Антиметастатитическое вещество / положительное решение о выдаче патента на изобретение N 5065317/14(035964) от 27.11.1905 (соавторы В.Н.Бурокова, С.И. Писарева, Е.Я.Матис, Е.А. Кураколова, Н.В.Юдина, С.Н.Удинцев).