Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Влияние полиамина и простагландина Е2 на содержание циклических нуклеотидов в печени и плазме крови

I 9 т Я 0

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УССР

ЛЬВОВСКИЙ ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ВДЦИНСККЙ ИНСТИТУТ '

На правах рукописи

ПАРОБЕЦШ Ирина Михайловна

УДК 616-083.2:613.2-032:615.456:547„9б]-092.9

ВЛИЯНИЕ ПОЛИАМИНА И ЛРОСГАГЛАЩИНА Е2 НА СОДЕРЖАНИЕ 1ЩЛИЧЕСШ НУКЛЕОТВДОВ В ПЕЧЕНИ И ПЛАЗМЕ КРОВИ -

Специальность - 14.00.17 - нормальная физиология

Авто ре ф в р а т .

диссертации на соискание учено!? ствпеки кандидата биологических наук

Львов - 1990

Р&б&га дашжт юр '¿ъьожхт фаяиаяе Ктеотго даугод-ысследовв^ьскзго пптщч& гы/ммогт и п&рзштта кровн я Ивано-&раикоьек(ш гоеудздотзшгои пришитой инеиюучб

Научные руководи«):; д9»?ор тгФШШШХ, тун, профессор Гланц Р.Ы.; доктор «едидаиских паук, прсфоссор Гсрвгт ЯМ,

Официальные оппотнпг, Д5«7ор ыздмшяст наук Ьшкам Г.И.; ДОКТрр биологических и&ук, 1Щ4тС0р Роэгейй И.И.

Ведущее у-чревденйа: Всесоюзный гематологический изумшй центр ш СССР

, .Защита диссертации состоится 1990 г.

в , часов на заседаю«! спади ализйровгшного совета К 088.21.02 во Львовском ордена Дружбы народов государственном медицинском институте по адресу: 290010, г. Львов, ул. Пекарская, 69.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Львовского оццена Дружбы народов государственного медицинского■ института по адресу: 290010, г, Львов, ул. 17 Вересня, 6.

Автореферат разослан 1990 г.

Ученый секретарь специализированного

советь, доктор медицинских наук . 3 ЛУЩК А.Д.

| ^ /

К- -г'

! , ,, .. 5 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

" 'Актуальность проблемы. Одним из важнейших направлений в современной трансфузиологии является разработка проблема парентерального питания.

Необходимость парентерального азотистого питания возникает при многих патологических состояниях, обусловленных развитием белковой недостаточности в результате нарушения процессов переваривания а келудочно-кишечном тракта или вследствие усиленк./о распада тканевых белков.

Парентеральное питание /ПП/ в настоящее время, широко применяется в клинике как наиболее эффективный метод коррекции нарушенного метаболизма. Абсолютным показанием к его применению является полная невозможность энтерального питания. Поэтому парентеральное питание должно временно его имитировать. С '»той целыз. созданы препараты для ПП: белковые гидролизаты, аминокислотные и электролитные смеси, препараты для обеспечения энергетических потценностей, которые в большей или меньшей степени аналогичны структурам, всасывающимся в кишечнике.

Проблема парентерального литания развивается в нескольких направлениях, одним из которых является всестороннее изучение физиологических механизмов действия препаратов для ПП. Важное значение имеет исследование процессов усвояемости препаратов, механизмов их лечебного действия, влияния сочетанного применения препаратов для парентерального азотистого питания и регуляторов метаболических процессов /Н.Т.Терехов, 1934; Р.М.Глани, 1986; к.С.ьшлгву, 1985/.

Основные процессы при парентеральном питании происходят на органотканевом 15 молекулярном уровнях и реализуются по принципу ' медиатор - фермент - тканевой метаболизм; гормон - фермент - -

I " ' • ' '

■ГК2ШЭЕ0Й матабмнза /Р.М.Гланц, 1983/. Анализ литературы покази-Bsaip wo роль медиаторов', рормоновц фериактов в механизм® действия препаратов для парентерального тга&шя в достаточной степени изучены /Ю.Н,Крэяер0 1980; Р.М.Гланц, 1983; А.Вротлнкд, А.В.Суд-ш, 19341 Г.НДкпнак к соавт., 1985/.

Однако в дастугоюй литература нам и© удалось найти дакшх об участии при парентеральной питания ч&ккх ванных рэгуюторнюс структур ка?абслкзиа на молекулярном уровне как циклические ну-клаоткда /цАМФ к цП£Ф/»

•Циклически© нуняеоткды являются вторичныии гормональньмм кессовдкзрами я ведуарши клеточными нэдваторвмв, укиьерсальньыи к уиикояьиыми рагуляторош метаболизма, пролиферации и дифференциация клеток. Посредством влияния через систему циклических ну-клеотидов иа клетку воздействуй? «вЯротранскиттеры» горюш бея-ково-пептидной природы, катехоламиив и простагдандины /Н.А.$адо-рОВ6 1979; ДяиТеплершн, Х.Теплерыен, 1989; s.w.Sutherland, 1972s S.Kalciuehi, 1979; E.G.Krabe, .1983; D.bacaaa et al., 1988/.

Ризнои&правленяосгь действия разных типов простаглаединов /ИГ/ на одну и ту же ткань объясняют стимуляцией образования и im разнкх циклических нуклеотидов, соотношение которых составляет основу регуляторного механизма клетей Д.Ы.Марков, 1980; K.ik-torite et el., 1983/.

В доступной omfcpaтуре нам ие удалось найти данных о роли циклических нуклеотидов в патогенезе белкового голодания и их взаимоотношении с простагландинои Eg при парентеральном питании.

Изучение роли циклических нуклеотидов и кх взаимодействие с простатландином Е^ в механизма действия препаратов для азотистого парентерального питания представляв* не только большой физиологический интерес, но может иметь и практическое значение так как

отгрызло" попав возмотаоетн н&пр&вяекного злиггяяя на мояекуляр-кда основы метаболизма пря парентеральном пет&ням.

йзучгнкз этих вопросов и явилось иредпв'.сг. дшшого :: с следования.

Цель и задачи исследования. Основной цзльв работы-явилось изучение влияния полнамша и простагландина. на содержание циклических нуклеотидов /цАМФ, цШФ/ а печени и плазые ирови при белковой недостаточности, токсическом гепатите к их сочвтвиии.

В задачи работы входило:

1. Изучить содержание циклических нуклеотидов, перекисей ли-пидов и активность двгидрогвказ в норае я при експерямент&льной патологии /белковое голодание и токсическое пораженке пачек* на фоне белкового голодания/.

2. Изучить влияние полиаиина на содержание циклических нуклеотидов и активность двгидрсгоназ при белковом голоден*^, токсическом пораженки печени в условиях белкового голодания.

3. Изучить влияние простагландина на содержание циклических нуклеотидов и активность дагидрогвказ в условиях избранной экспериментальной патологии.

4. Изучить влияние сочетаемого введения полиамина и простаг-лаедина Е^ на содержание циклических нукяеотвдов, активность де-гидрогеназ в условиях белкового голодания.

Научная новизна исследования. Впервые изучено содержание циклических нуклеотидов /цАЫФ, цГЫО/ в печени и плазме крови при белковом голодании, токсическом гепатите и юс сочетании. Впервые раскрыта роль циклических нуклеотидов в механизме действия препаратов для парентерального азотистого питания. Установлено, что аффекты полиамина и простаглаедина связаны с увеличением функционирования адвнилатциклазной системы и снижением активности

г&хжозо-6ч*»сфа?двгидрогвнг.зи и яагтатдегидрогенаэы и ггрошссов перахксноге оккслемм лягоздоа щ?я токсическом гзпатятв к бэляо-3£»5 'гвлод&гам» Э?о выявляет новые иолекуяярнче иахшшз!гы действия препаратов для ларокчераяьвдге азотистого питания,

Теораткчасуая и пдасткчсск&к значимость работы. Результаты проведенных исе-яедованк:5, способствует углубления г;ош:г;а;;;ш фпзк-ологнчзских мох<шизиой действия пояишлщ&. Пояучвиниа дшашэ м-еперкигнтальн© обосновкзаят цвяассобразкосгь принеьснкя простаг-лавдкиа З^ для усшкшш в^фектоз азогкстых препаратов, прязюия-ейж при парокторалькои щгеашш.

Основный положения,, которна -выносятся на зачует^.

1. При вэсогвднавком белковом голодании иаблсдаотся смажо-шю содержания цАМФ в отношения цЛМФ/цЩФ только в влазнв крови, Содвраание цикякчасхях !гуклестидои к активация перетесного окисления лшидов в печени не изманяатся„ активность глвкозо-6-фсс-фатдвгадромиазы в лактатдегвдрогеназы увеличивается»

Прд восьмидневном банковом голодакаи увздячешэ содержания цАМО к уизньЕошю содержания цГМ§ в печени сочетается со скккз-киеи активности дегидрогенаэ, что указываем на взагкосвязь шг-ду увеличением откозенил цАМФ/цГМФ в лечезда и сняженисы актлвлос-тй формантов гликолиза и пентозоф-осфатного цикла..

2. Однократное введенж колиамина животным при Езстяднев- . ком белковой голодания приводит к увеякчэйя® содержания цАМФ в плазма крови к печени н сшгааякю активности дегвдроген&з. Трехкратное введение етвотнш полиаыина при восьмидневном белковом голодании нормализует содержание цАМ в плазме крови и пвченк. При втом активность фэрментов в лечеяи существенно снижается и соатво-гсгвует даккык здоровых животных.

3. Однократное введение животным простагландина Ео на фоне

, Еесгйдиовкого белкового голодания позиш&е* содержание цАМФ в почоки яыша кормы и ушнькгааг актавшсть дагндрогсиаз до уровне но p.m. При ¥рохкраткоа зпедания за вот m« простагландика Eg иаб-лидаэтся ого нормализующее злияни» на годерааняе циклических иу-алеотвдов и активность гяшсо50-о-ф«сфа?Дегядрогеназы н-лакта?-дэгндрогеиозы...

4о Однократное соемзстнов вводеняе етзоткш полиамина и простагяавдика Eg а условиях белкового голодания приводи? к увеличения содержания иА1'<5 в печени /его уровень самый высокий срэ- . дй бсох опытных групп крыс/ и нормализации активности дегадроге-нвз.

5. Прм токсической гепатите и белковой голодании накопление содержания а ткани почеш диеновых коныогьтов и малонового диальдегзда сопровождается разним снижением содержания цАМФ, увеличением содержания цГОФ я активности дегидрогеназ.

6. Введение ливотным с токсическим поражением печени на фоне белкового голодания полиамина и простаглацдяна Eg ПРЯВ°ДИТ в. норму содержание циклических нуклестидов: уровень цАМб в печени повышается, а уровень цАМФ в плазме крови я цШФ в плазме крови

и печени понижается. Активность глмкозо-б-^осфатдегидрогенйзы и ' лактатдегидрогеназы в печени уменьшается.

Апробация работн. Материалы диссертаций нздсг.гмы и обсуждены на Всесоюзном симпозиуме "Актуальные вопросы искусственного питания в онкологии" /Москва, 1988/; на научно-практической конференции "Научно-технический прогресс, здоровье сельского населения, прикладные к фундаментальные проблемы медицины и биологии" /Полтава, 1989/; на III сьезде гематологов н трансфуэнологоа Узбекистана /Ташкент, 1990/.

Публикации. По тема диссертации опубликовано 4 научим рябо-

Бнедрэтм тезудт/гатов исследование. Полученные рэзудьт&гы используются е учгбвон процосса на кафедрах нормально!? фнзколэ-гия и фззкояогш человека и «квотных Чтагяскоге государственного цеднтанского шштиггута к Львовского государственного укивзрсито-

та.

Структура и обьвм, диссертации» Диссертация состоит кэ ве®дв-икя» обзора яятэратури, описания катарашгас м иатедов исследования, глав събатюш исследований, обсу/эдоет.я, зызодоз н «таска якте|»атуры, содержащего 259 ясто*зюка, из них 121 отечественных и. 138 аарубекшлс. Работа излотакв на 16! сгрггацв машлмткеного таксой, 'шиваетркрована 12 рнсунк&ыз к 21 таблицей.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИСОЛВДОШШ

Вез исследования проведены в двух сериях вксперкшдаов на 360 беспорздиетых бвяык крысах. Всего было 15 групп этвотных.

Тесг-эбьохттг исследований бьик пачань, «ртроциты и плазма крови о Наш определялись еяедувдяе сезгазатеда: содержанке циклического аденоэш-3 * ,5' -иокофосфага /цАМ§/, содерзканка циклического гуакозин-3 * ,5 '-иокофосфага /цГМФ/, активность гяюхоэо-6-фосфатдегадрогеназы /Г-6-SflT/ к активность яактатдегадрагеиазы ДДГ/, содержание диеновых коиьагатов /ДК/ к ыалояового дн&яьде-гвда /МДА/..

В первое серии акслеримзнтов изучено влияние полиамнна и UTEg на указанные показатели в условиях нормы, шестидневного и восьмидневного белкового голодания. Препараты вводили однократно при шестидневном белковой голодании и трехкратно при восьмидневном белковом голодании. Во второй серии опытов изучено влня-• нив полиакина и ПГЕ^ на та as показатели в условиях токсического

поражения печени и& фона шестидневкой и восьмидневной бээбодко-вой диета. Препараты вводились однократно и трехкратно.

Нарушение азотнстого обмена вызывай путем содержания животных в течаниз 6 и 8 суток на безбелковой диете, а тыао путем трехкратного подкопного введения 5055 масляного раствора чо-•амреххюрпстого углерода /тетрахлоризтана, СС1^ / а доза 1,0 мл на 10О г массы тела животного с интервалом 2-3 суток.

В качестве средства парентерального азотистого питания использовали подиаыин - отечественный препарат, выпускаемый промышленностью для применения в клинических условиях. Полиамин представляет собой раствор смеси аминокислот а растворе Д-сорбита. Его вводили внутримышечно из расчета 0,3 г условного белка на 100 г массы тела животного.

При проведении исследований применяли отечественный проста-гтндин /простанон/, синтезированный в секторе чистьт веществ Института химии АН ЗССР под руководством проф. Ю.Э. Лилле, в дозе 40 мкг на 100 г массы тела животного»

Контрольным группам животных вместо пояиамкиа и ПГЕ^ внутримышечно вводили в эквивалентных обьемах изотонический раствор хлористого натрия / Нав! /. Через час после введения контроль- • ным животным изотонического раствора НьС1 , а опытным соответствующих препаратов - крыс декапитировали.

Содержанке циклических нуклеотццов /цАК® и цП.!Ф/ в истеки и плазма крови определяли радионуклида™ методом, используя наборы фирмы " ДпвгеЬая я /Англия/. Принцип радионуоидных методов, основанных на связывании циклических нуклеотццов специфическими бэлками или антителами, сводится к разбавлении радиоактивности добавленного %-нуклеотида тем намоченным циклическим нуклеотвдом, который содержится в образно.

Активность гмкозо-6-фо<4а?догидрогенази в печзии опроделк-■ ЛК «070Д011 ПО С.З.С1ооЬ » С,ЙО&в£Ш /1953/.

■ Ояредоденио активности дактатдеищрогеназы в печени проводили пэ методу н«и.Эег®муег /1965/.

Об интенсивности Протасов перехиснэго ояаеяання лкпвдов судиям по накоплении в эритроцитах и печени их продуктов - диеновых коньюгатов п налогового диальдэгвда, который оп^здеяяга методой В.О.ЕосЬищэ!, Д.КоО&оаЬяЗ. /1С65/ т Н.&гао^е-г1 ( -и.ВохйепЫеьй /1957/ в модификации В.А.Владширавь и А.И.Ар-чакова. /1972/, . .. '

Подученные в «ксивродевте д/тта подвергались соотвзтствув-1цзй стакютичэской обработке с использовги-яам критерия Стьвданта Д./иОйвш, 1960/. Бса вычисления произведены на ЭШ "Электроника. БЗ-21". '

гшкъши ИССЛЕДОВАНИЯ

Результаты проводашкх исследований показали, что у еявот-кых/ находившихся б суток на бозболковом голодании содержание цйЫЭ в шгадмэ ггрош сшдаются на 21,4$ /р 4 0,001/, а уровень • цШ? ш изменяется. Поэтому укзньиается отношение цАМФ/цШ5. Приведенные данные указывай® на сшшаниа поступления .в плазму крови цАМЗ аз мембран клеток крови и тканой при белковом голодании. Снижение содержания цАЫФ в плазие крови при шестидневном белкоЕом го-аедании иожно было бы объяснить активацией перекисного окисления липидов в мембранах клеток тканей. Однако, как наш установлено, содержанке диеновых: коньагатов, малонового диальдегида и цАМФ в печени не изменяется к этому сроку белкового голодания.

Известно, что в ранние сроки белкового голодания существенно увеличивается в плазме кров» животных содержание глюкокортякоидов

/fl.3ou.ill at al .,1970/. Уваятот« секреции гортюп xop-J ищпо-чочвжсов н г&чофиза неоднэгсргуко мдаечело щи бзлкоссм .голодания у гвдо8 / ?.a.l\mn st al . Д973/, Петссзсортаксиду, как изеозтио, сжзулнрузз? катаболкчзсжза процесса s optvM.ax гишко-лтагЛатечас-кой снсгеии в скедфтаих икяцас, обашечи'вая повтупяснхэ акшюкнс-.-SOT в кроза /a.Youlíoa 8fe в! 1972? P.Q.btuai et al ,»1973/. Действительно, содоряаико иаоамек-каня и заакиимых ашппнсиелот УБэак'-агва.с'гся в крови пря бэяковоя голодании /Р.И.Гла/щ и coas?., 1985; Л.А.Лвбнк®цв 1983/. С другой сготш, гявкокортикоедн стн- ■ мулирую? еязбоднчаскво протесы в пвчови, обеспечиваю? иадухцио синтеза ферментов и лппокортяна, хоториЯ слагает активность фос-фолнпазы Ag а пряяодкт к ухэнмгоияв сиптсза простаглаидкнов в ряде гкакэЯ организма / С.Gupta ot al 1984; P.Hirata ,1984/. Известно, чго простагладдаш Ej я Eg способны повивать- содержат киэ цА№ в различных ткеяля /3.H.Fateai , 1985; O.N.Medtke, I9Q6; а.?1п« , 1987/. Такта образом» праэаденшгэ данные и их анализ позволяют предположить, что уиенодеяив синтеза цА1Й и про-стагландяноэ в тканях является одгаш из иаханазмов снижения потребления тканями амшокяслот при белковом голодании. Такое прэд-полоязнйэ становится тел более вероятнш, если учесть данкне о той, что в скелетных мышцах при введении индскетацлна /ингибитор синтеза простагландвков/ унеличхвается содержаний свободных аминокислот более, чзм в 2 раза /Л.А.Лвбкнзц, 1988/. Однако, кпхаиу.эи ст-житп потребления тканями аминокислот пря белковом голодания в условиях блокады синтеза просгаглалдшгов т ясен. Поэтому наш проведено изучение влияняя ПГЕ^ на содержание циклических нуялэоти-дов в плазма крови я печени при белковом голодании.

Нами установлено, что уже при однократном введения ПГЕ^ т-. вотным, находившимся в течение б суток на безбелкосой дизте, наб-

здц&езся догтевериоз ковЕнвгае содорздшя цАМФ в пжазна крови в .печати При s?oи содержание цШ@ существенно U® йзионйлось в оба-¡ж гест-обьактах, что приводило к значительному уволичсико шаккя uAliS/uTliS. $ги датше указывай® ш Basffsya роль iiTEg в ак?а-вациз адеиияатцнклазы в мембранах «легок почэнп и, по-видимому» в двугга: тканях организма. Увеличено содержания цШ а якшш BS-чэии я гшагма жровк при однокр&теой введзнйй ПГЕ^ лпхлотоя ев>з ед-юш подгаврадеилом «ого фот, ч*о миэдиэ содержания цШ& в плазме крови при белковой голодений иоенз? рсгуяяторгшй хараотэр в связано со снихочкш синтеза просгатуищдпкоа.

Следует отоотигъ* ws аырахиккость кзмзквний уровня nAMS при введении ПГЕл зависят от тапа «к&наЯ а специфического связывания проетаРйавданов /С»Д.ВарфоЕОйеав4 А.Т.Йовх, 1935/. Для характеристики этого специфического связывания принято использовать термин ипростагл&ндачовый рацаптор" / Х.КехшесИ. at.el. 1982/. При

связывания IiTEg увеличивается внутриклеточный уровень цА®.

Таким образом» приведенные данныз и их анализ позволяв? заключить,, что молекулярный механизм действия IITEg при белковом голодании состой? в специфическом его связывании рецепторами мембран клеток, что приводят к активации аденилатцикл&зы и увеличению цАЫФ в печени и других органах.

Представляют интерес данные о том, что при белковом голодании увеличивается активность яактатдегадрогенаэы и глюкозо-6-фос-ф&тдегмдрогеназа в печени крыс. Однократное введение ilTEg приводит к скияени» активности обоих ферментов до уровня нормы, что яв-. лявтея следствием увеличения содержания цАМФ и проявлением ого влияю» 1 н& аэробные процессы в печени. Известно, что цАМФ повышает аэробной дыхание, окисление основных субстратов в митохондриях и снижение синтеза лкпидов /Я.Мусил, 1985/.

Б более поздние сроки белкового голодешш /8 суток/ в плазме крови обнаружено уменьшение уровня цА№5 та 22^% /р< 0 „02/„ а то же врэмя содар:глтю цГМФ практически ке изменилось, а показатель цА£!5/цИ© составил /р I 0„СЮ1/ от такового у интактных крыс. Что касается тканн печени, то в условиях восьмидневной безбэлно-вой диеты в кой произошли значительна разнонаправленные сдвиги в содержании циклических нуклеотидов. Гакс концентрация цЛ?.!5 увеличилась на 22./р с. 0,01'/, а концентрация ц№ уменьшалась и составила 62,7$ от исходного урогня. В результате зтих измензшй показатель цАМФ/цГОЗ увеличился почти вдвое. Пра этом активность глюкозо-б-фосфатдегидрогеназы повысилась иа 36Й /р < 0,05/, а да- • ктятдегидрогвназная активность - на 32,8% /р < 0,01/ по сравнению с их величинами у интактных квотных. Из проведенных опытов следует, что продолжительность белкового голодания влияет на активность обоих ферментов в печени: при восьшздкэвном белковом голодании активности дегндрогенаэ были ниже, чем при шестидневной безбелковой диета, что сочетается с повышением содержания цАМФ. Яри трехкратном введении ИГЕ^ животным, находившимся в течение 8 суток на безбелковой даете, наблюдается увеличение содержания цАМЗ только в плазме крови. В печени, наоборот, под влиянием ПГЕ^ уменьшается содержание цАЫФ и активность ЛДГ и Г-б-ВДГ.они достигает уровня нормы.

Таким образом, ПЛЕд оказывает модулирующее влияние на содержание цАМ5 в печени и плазме крови при-белковом голодании, т.е. увеличивает или снижает содержание цШФ в зависимости от исходного его уровня.

Полученные нами результаты согласуются с данными литературы о том, что мевду цАМФ и простаглаединами существует положительная обратная связь /Я.Мусил, 1985/. Так, ПГЕ^ активирует аденилатг,кк-лазу, увеличивая тем самым продуцирование пАМФ, который, в свою

очэредь, гтинулируат синтез ЕГЕ2 вплоть до вк&ктивашк км аданя-.-'ауциклазк.

Для рагшшя вопросе» латерального азотистого питаная нами проведено изучение глвяшг полкамшь и его сочетания с ПП^ на уровень цикличэских иуклоотвдоп и активность дегидрогеиаз с плакле крови и пачеш крыс, садораавшахся ис базбояксшоГ; диета.

. Установлено» что через одкн час после введения полиамкна кк-оотнш, находивпикея в условиях шестидневного белкового голодания, ¡шблддалось увеличение содержания цАМФ л плазма крови. В стой группа животных уровень цА1!3 статистически значимо преььпвег содержание цАМФ в плазме крови крыо, содержавшихся в обычных условиях Еиварип. Увеличение содержания цАМФ в плазме крови при .введении. полиамина суммарно отражает интенсивность функционирования адеинлатциклазноЯ системы в мембранах клеток крови к органов. При объяснении полученных данных следует иметь в виду, что введение полишина приводит к увеличению в крови ряда аминокислот /фекял-аланина, тирозина, гнстидина, триптофана и др./, когорта используются для синтеза медиаторов, биологически активных веществ /кате-холаыинов, гисташша, саротонина/, играющих первостепенную роль в активации аденилатцихлазы и образовании цАМФ в органах и тканях /Р.М.Глакц и соавт., 1982; В.П.Сергвев, Н.Л.Шиыановский, 1987/.

• Таким образом, на основании этих данных можно заключить, что увеличение содержания цАМФ в плазме крови при введении полиаыина связано с активацией аденилатцикяазы в мембранах клетох тканей под влиянием катехоламинов и физиологически активных веществ. Об этом свидетельствуют также данные об изменении содержания цАМ в печени при введении полиамина. Так, содержание цАМФ в печени жи-вотн^у с белковой недЬстаточностьв существенно увеличивается при однократном введении полиамина и превышает таковое в контроле.

Содержание цПЙ а печени, наоборот, уизиьаазтся. В связи с »тки существенно увеличивается отношение цАМФ/цПМ®» что указ^аот на довольно тесное взаимодействие мвкду едеьияат- к гуттл&тшталаз-

системам в явчзки при введения полианнна. Увеличение от-иоЕзная цАМЗ/цГМ® в печени сочетается со сияяэючм активности ЛДГ и Г-6-ЗДГ. Из призедешгах даннюс водно црвдполоиоть, что пояиаиян сжвягэт иятеясишость анаэробного гликолиза н окисление глжмзы в понтозофосфаигом цикла клеток явчаня з связи с повыязниии цАМ-2 я восстажшсняэя функциональной актогтета мятехсидряй. Такой предположат» становится том болео вэроятним, эс-та участь, что при Фэляопзц голодании снижается потреблена» ккслорода штжовдриями клоток мозга а других органов и ухудшается энергообеспечений тка-кей, ведущее к активация анаэробного гликолиза / а.Кавео 9-Х,, 1973/.

Трехкратное введение полигона а условиях восьмидневного бзл-кового голодания приводит к нормализации содержания цАМ5 а плазме крови и печени. При этом активность ЛДГ и Г-6~$ДГ а печени существенно снижается и соответствуй? контрольный данным.

Представляет интерес тот факт, что при однократном сочетанием введении ГГГЕ^ я полиашиа животным при белковом голодании содержание цАЫ2? в пэчош было достоверно вша, чем в группах, яото-рш препараты вводились раздельно.

Анализируя результаты этой серии бксперимзитоа, необходимо отметить два обстоятельства: I/ ЕК^ усиливает усвояемость азотистых препаратов для парентерального питания /Л.А.Любинец, 1938/; 2/ известно, что простаглавдины, в особенности ПГЕд, реализуют свое действие посредством цАИФ/ОД.Раявеэ, В.Э.Аренд0 К89/. И при парентеральном питании, как показано налш, ПГЕ^ реализует свое действие через цАМФ.

При ьшо?®с пштгчттш оеотояна®е применения 1Ш,

возникай? дарушш сшюквпнтваирусщзй печени /Р.М.Гланц,

1983» Н.З\Т«рв*я, Ш'*Л

Ра^ВЯТЕй ^6ке?5Ч®окого поражения печени характериэируется наличие» некроасдчмрс^ических изменений в гепатоцитах, что биохимически проявляются вцракешюй гкперферыектемией „ нарушением обмана билирубина и биосинтеза белка /Л.Л.Громашевская, 1982; А.Н.Голиков, 1985/.

Экспериментальное поражение печени /токсический гепатит/ вызывают введением классического гепатотоксина - четырехзсдористого углерода /тотрахлорметана/. Этот галогоналкаа хорошо проникает в клетки печени и приводит к активации перекисного окисления лигск-ДОЗ /.E.Chierpotto «t al. .. 1981/.

Все это мотивировало целесообразность использования кодели острого токсического поражения печени для более полного исследования влияния полиамина и простаглавдина Е>> на содержание циклических нуклеоткдов.

Нами установлено, что накопление диеновых коньюгатов и малонового диальдегида в мембранах клеток печени при изучаемой патологии сопровождается резкими изменениями в содержании циклических нуклвотидов. Так, в плазы® крови концентрация цАМФ повысилась на 43,6,? /р 4. 0,001/, концентрация цГМФ возросла почти вдвое; в печени уровень цАЬ® резко, в 2,6 раза, уменьшился, а уровень ц1Ш увеличился на 43,6% /р < 0,001/. В обоих тест-обьектах значительно понизилось отношение цАМФ/аШФ. Уменьшение содержания цАМФ в печени сопровождалось увеличением активности Г-6-4ДГ /на 34,75?,р< 0,01/ и активности ЛДГ /в 1,9 раза, р ¿ 0,001/, что указывает на повреж-денк гепатопктов и Соответствует литературным данным /11.А.Рубанова и соавт., 1980; Л.Е.Панин и соавт., 1981/. Такие значительные

СДВИГИ В уровнях ШКЛОНуЯЛООТИДОВ, ЯС-ВИДИМОИу, являктся следствием ингибирования аденилатцкклазы я активирования гуаиилатцикла-зы продуктами пзрекисного окисления лкшдов /В.В.Иванов иссавт., 1982; А.С.Соболев и соавт., 1982/.

Что касается беяоксянгззирующего аппарата гепатоцитов, то введение ямвотным тетрахлорютаяа приводит к уменьшения общего количества рибо сочного материала в псчзни и значительным нарушениям полирибосомного профиля. Этепом трансляции, наиболее чувствительным к действии четыреххлорлстого углерода, является образование комплексов ыгаду иагрипной рибонуклеиновой' кислотой и рибосомами, а также стадия инициации цепа /Й.И.Губскнй, П.Я.Смольнов, 1983/. Согласно данным, получзткм ЮЛ.Губсгагд и соавт, /1984/ одним иэ возможных механизмов повреждения трансляции при действии тетрахлорметала является нарушение цАМФ-ааписимьи процессов биогенеза рибосом и регуляции белкового синтеза на яолирибосомах. Таким образом, косвенным подтверждением нарушения белкового обмена пожат служить факт резкого понижения содержания цАМФ в пиши печени крыс при токсическом гепатита.

Перевод животных с уоясячаскгоа гепатитом на беэбеяковуэ диету не приводит к дальнейшей активации перекисяого окислений липи-дов в печени. Однако, при втом снижается в печени уровень цАМФ и существенно увеличивается содержание цШФ, активность лантатде-гидрогеназц и глюкоэо-б-фосфатдегадро?енаэн. Таким образом, бээ-белковая диета усугубляет течение токсического гепатита и нарушение обмена циклических нуклеотадов.

В связи с вышеизложенным возникло предположение о том, что введение животным препаратов,.модифицирующих обман и внутриклеточный уровень циклонукдеотидов, может? быть эффективным средством коррекции токсического поражения печени на фоне белкового голодания.

Нами установлено, что однократное введение полнамина кнзэт-нт с токсическим гаавлито-л, надол'шикыся в усясытх шестидневного белкового голодание, привело к значительному увеличонка содор-зкапия циклических яуклооткдов и цГЫФ/ в плазма крез и и печени; при этом о им достигли уровня ¿¡сходных величин, лишь уровень цАМФ в ллазмз крови повысился вышэ нормы. Параллельно с повмаени-ек содержания цШФ под влиянием поли амина в изучаемых тзег-обьек-тах наблюдалось значительное понижение активности гя»коэо-6-фос-фатдегидрогеназы /на 20, £$/, дактатдвгидрогеназы /на 21,3%/ в печени гшвотных. При этом Г~б-4ЩГ-активность и ЛДГ-активносгь не достигли величин здоровых животных. "

Трехкратное использование аминокислотной смеси у животных с токсическим поражением печени, находившихся 8 суток на белковом голодании, вызывает однонаправленный ответ в сдвигах циклических нуклеотидов в плазме крови» Так, содержание цАМФ уменьшилось на 21,52£ /р < 0,001/, а цГЫФ - почти в 2 раза /р < 0,001/. При этом их уровни и соотношение цАМФ/цГМФ соответствовали норме.

Что касается ткани печени, то трехкратное введение полиамина крысам с токсическим гепатитом на фоне восьмидневного белкового голодания привело л резкому, в 3,5 раза /р < 0,001/, увеличении содержания цАМФ и уменьшению уровня цГЫФ на 29,2% /р < 0,01/. В- результате трехкратного воздействия полиамина содержание циклических нуклеотидов, а также их соотношение в ткани печени не отличалось от показателей здоровых животных. В тех же условиях активность изучаемых дегидрогеназ значительно упала, но при этом Г-б-ФДГ-актинность достигла уровня нормы, а ЛДГ-актнвность была выве нормы.

Высокая активность лактатдвгидрогеназы свидетельствует об активации анаэробного гликолиза у животных, которым полиамин ибо-

дили трехкратно в условиях токсического пор&чюнмя печен;! я яось-надвевной безбелковой дкеты. Поэтому нами проведано исследование влияния простагланд'.ша Е£ на изучаешь показатели в печени к-плазма кровк шротньпс с печеночной недостаточностью при белковом голодания.

Однократное введение простатландина лмвотиш с токсическим гепатитен, находящимся на бззбелкозай дкете, приводят не тол* ко к норкаляэедаи содержания цАМ§ з печени и плазме йровя, но и к статистически значимому увеличении их содержания по сравното с кятакга&гл яивотнь9.й. Что касается прШ, зе его содержание о плазме крови и печени сгега&ется под влиянием ПГЕд и приближайся к показателям кптактннх кязотньк. 3тя данные указывая? на етшу-лирутев влияние ЛГЕ^ именно на адешлатцкклаэнуа систему мембран клеток печэни и хроэи.

Увеличение содержания цАМФ а печгш при введении ПГЕ^ сопро воздается нормализацией активности глакозо-б-фосфатдегидрогсиази и снтеииеи активности лактатдвгадрогеназы. Это указывает на вы-сокуо терапевтическую эффективность ПГЕ2 в условиях токсического гепатита и белкового голодания.

Трехкратное введение ПП^ крысам с печеночной недостаточностью, находившимся на белковой голодании 8 суток, существенно уменьшает в плазма крови содержание как цАМФ /на 22,6$, р < 0,01/, так и содержание цГУФ /на 33,7%, р г. 0*,001/. Величины обоих показателей соответствовали тзковьм у здорових крыс, отношение цАМФ/цП!Ф также на отличалось от нормы.

При трехкратном применении ПГЕ^ в условиях токсического гепатита и белковой недостаточности в ткани печени уровень цАМФ резко, в 3,3 раза, увеличился, а содержанка цГ№В понизилось на 33,8$ /р < 0,001/. При этом величины уровней циклических нуклео-

тидов и соотношение иатщу даош в атой группе животных практически не отличались от нормальных гллпчнн. Поя действием трехкратно введенного ПГЕ2 уменьап'лась и полаостьв нормализовалась такие активность глюкозо-ф-фосфатдеггздрогеназы к лактатдегидрогэназы.

Приведенные данные позволяют заключить, что простагландин Е2 мохе? быть использован для восстановления функционирования аде-нялатшклазной и гуанилатциклазной систем при проведении парентерального питания в условиях белкового голодания и токсического гепатита.

Таким образом, приведенный результаты работы и их анализ указывают на важную роль циклических нуклеотвдов в патогенезе белкового голодания и в молекулярных механизмах действия полиамина и,простагландин» £3 при белковом голодании и токсическом гепатите.

Полученные данные экспериментально обосновывают целесообразность применения простаглаедяна Е^ для повышения эффективности проводимого парентерального азотистого питания.

вывода

1. При шестидневном белковом голодании снижение содержания цАЫФ и отношения цАМФ/иПАФ в плазме крови сочетается с увеличением в печени активности глюкозо-6-фосфатдегидрогв назы и лактатде-гидрогеназн. При восьмидневной белковом голодании повышение в ткани печени содержания цАМФ сопровождается снижением уровня иГМФ и активности дегидрогеназ.

2. Однократное введение животным полиамина на фоне шестидневной безбелковой диеты увеличивает содержание цАМФ в плазме крови и печени и снижает активность ферментов, что указывает на участие аденилатииклаэного комплекса в механизме действия полиами-

•на при белковом голодании. Трехкратное введвнне нивотнш полна-иина нормализует в плазм® кровк и пзченя содвряаняа цАМ® и активность дегидрогеназо

3. Однократное ввэдениа швотным простагландкна при швстиднэвнон белковом голодании повышает содержание цАМ® и понижает активность дегкдрэгеназ в печэня. При трвхкратвоы введении простаглаедина Е^ сохраняйся положительный ъЪфзкт на содержанка циклических нуклеотидоэ и активность фврнэито» в печени»

4. Однократное совместное введение животным полиамина и простаглавдина Е^ в условиях белкового голодания оказывает более выраженный эффект на содержанке цАМ<5 в плазма крова и печена, чем раздельное их применение»

5. При токсическом гепатите в печени животных наблюдается накопление гидроперекисей липидов, что сопровождается резким спи гением содержания цАМФ, увеличение» содержания цГМФ и активности дегидрогенаэ. Безбелковая диета усугубляет нарушения метаболизма циклических нуклеотндов в печени при токсическом гепатите.

6. Однократное введение полиамина животным с токсическим гепатитом на фоне шестидневного белкового голодания приводит к увеличению в печени уровня цАМФ, уменьшению содержания цГМ® и активности ферментов. Трехкратное введение животным полиамина не оказывает полного нормализующего действия на изучаемые показатели.

7. Однократное введение животным в условиях токсического поражения печени и шестидневного белкового голодания простагланди-на Е^ повышает содержание цАМФ а плазме крови и печени вше нормы, а содержание цГКФ и активность ферментов понижает до исходных значений. Трехкратное введение животным простагл&ндиня £« в уело-

виях токсического поражения печени и восьмидневной базбадковой диеты приводит в норму все изучаемые показатели; содержание цАМФ в печени повшалосъ, а содержание цАИФ и цГОФ в плазме крови, цШФ в печени и активность ферментов понижались.

8. Полу мнныа данные раскрывав? роль циклических нуклеоти-дов в молекулярных механизмах действия препаратов для парентерального азотистого питания и обосновывают применение простаглаеди-на Для усиления эффектов полиамина.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИЙ"

Результаты проведенных исследований экспериментально обосновывают целесообразность применения простагландина Е<> для усиления эффектов азотистых препаратов, применяемых при парентеральном питании.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Роль простагландииов в механизме действия препаратов для парентерального питания // Актуальные вопросы искусственного питания в онкологии. Тез.докл.Всес.симпозиума.-М., 1988. - С.57-58 /соавт. Р.М.Гланц, А.Н.Яковенко, Л.А.Лвбинец/.

2. Процессы перекисного окисления липидов и циклические нуклеотиды при парентеральном азотистом питании и введении простаглавдина £2 //Научно-технический прогресс, здоровье сельского населения, прикладные и фундаментальные проблемы медицины и биологии. Тез .докл. - Полтава, 1989. - С. 273-274 /соавт. Р.М.Гланц, Л.А.Любинец/.

3. Роль простагландина Е£ в процессах перекисного окисления лишков // Научно-технический прогресс, здоровье сельского населения, прикладные и фундаментальные проблемы медицины и биологии.

Тез.докл. - Полтава, 1989. - С.283-284 /соавт» Л.А.Лвбкнвц/.

4. Биохимические аспекты влияния простьглаидшга 2, на ®ффакти действия азотистых препаратов для парентерального питания // Новое в гематологии и транефузиологин. Тез.докяЛП сьоэда гематологов и гршгсфузиологов Узбекистана. - Тааквнг, 1990, ~ С.83-90 /соавт. Д.АДвбинвц, Л.Я.Длкив/.

Подп. к печ. 25.10.90. Формат 60x84/16. Печать офсет. Бумага офсет. Усл. п.л. 1,4. Усл. кр. -отт. 1,4. Уч. -изд.л. 1,0. Тйра* 100 экз. Бесплатно. Зак. 3285.

Областная книжная типография, 290000, Львов, ул. Стефаника, II