Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние пептидергических веществ на изменения поведенческих и биохимических реакций организма, вызванных электростатическим полем

ТАРТУСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

ПОРОЗОВС ЮРИС МИХАЙЛОВИЧ

ВЛИЯНИЕ ПЕПТИДЕРГИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ НА ИЗМЕНЕНИЯ ПОВЕДЕНЧЕСКИХ И БИОХИМИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ ОРГАНИЗМА, ВЫЗВАННЫХ ЭЛЕКТРОСТАТИЧЕСКИМ ПОЛЕМ

14.00.25 — Фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ТАРТУ 1991

Работа выполнена в Центре медико-биологических и экологических исследований и в Институте органического синтеза Латвийской Академии наук

Научные руководители:

доктор медицинских наук В. Е. КЛУША

доктор медицинских наук, профессор Ф. Г. ПОРТНОВ

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор А. МИЦКИС доктор медицинских наук, профессор А. М. ЖАРКОВСКИЙ

Ведущая организация:

1-й Московский медицинский институт им. И. М. Сеченова

Защита состоится „ 2гЗ_" ¿МСГбОо/^Зи 1991 года в часов на заседании специализированного совета К.069.02.09 Тартуского университета по адресу: 202400, Эстонская Республика, г. Тарту, ул. Юликооли, 18.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Тартуского университета.

Автореферат разослан ,,

„Ж." СЛМЫ

1991 года.

Ученый секретарь Специализированного совета канд. мед. наук

ОНЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время в связи с бурным развитием техники все острее становятся экологические проблемы искусственного электрозагрязнения среды и воздействия этих факторов на биоценоз. Так, возрастающее применение технологических процессов, основанных на использовании сильных электростатических полей (ЭСП), а также широкое применение электризующихся полимерных материалов приводит к вовлечению различных групп населения в сферу действия ЭСП повышенной напряженности, что представляет серьезную опасность для их здоровья (Ф.Г.Портнов, А.П.Иерусалимский, 1983). В настоящее время факт биологической активности ЭСП не вызывает сомнений, что подтверждено гигиеническими наблкщениями и экспериментальными исследованиями (Ф.Г.Портнов и др.,1972, Carmaciu et

al,I977,Fam , 1981, Robinson , 1985, Р.А.Манукян, Г.Г.Арц-руни, 1988J. Они свидетельствуют о том, что под влиянием ЭСП развиваются изменения, иногда необратимые, в органах, тканях и системах организма. Однако до сих пор в литературе мало данных о нейрохимических механизмах влияния ЭСП на ЦНС, не определены интенсивности ЭСП, повреждающие центральные функции.

Известно, что у животных и человека важное место в приспособлении организма к факторам внешней среды занимают ней-ромедиаторные моноаминергические системы мозга. В литературе описаны реакции лишь со стороны отдельных моноаминов при воздействии ЭСП (К.И.Станкевич, I978,Charry .Bailey , 1985, Bailey .Charry , 1987;, не дающие представления о функционировании моноаминергических систем при различных вариантах воздействия ЭСП. Но раскрытие этого вопроса крайне существенно, поскольку это способствует не только правильному пониманию приспособительных реакций организма к данной ситуации, но и указывает на пути коррекции нарушенных этапов гомеостати-ческой регуляции организма. Для более адекватного решения этой задачи представляется необходимым наряду с фиксацией изменений в моноаминергических системах мозга регистрировать изменение и других биохимических и физиологических показателей организма.

Известно, что чрезмерные по силе и продолжительности воздействия могут привести к истощению регуляторных механизмов и развитию стойкого патологического процесса. Для предупреждения подобных последствий разрабатываются различные способы защиты организма, в том числе и фармакологические. Высокая активность, быстрота действия и нечужеродность к организму нейропептидов с каждым годом все больше привлекают внимание фармакологов и клиницистов, рассматривающих эти вещества как потенциальные лекарственные средства нового класса.

Одно из новых направлений - фармакология пептидных гормонов и белков - позволило выявить выраженную нейротропную активность коротких фрагментов и причислить их к новому классу биорегуляторов - так называемым регуляторным пептидам (В.Е.Клуша, 1984). Имея в виду регулирующие свойства пептидов, перспективным представляется их использование в качестве быстродействующих корректоров поведения и биохимических процессов при экстремальном состоянии - воздействии сильных ЭСП на организм. Учитывая высокую активность и стресспротек-торные свойства нейропептидов тимопентина (Т5}, ригина (Р), тиролиберина (ТРЛ и вещества Р (ВР) ( ОеЬте еЬ а1 , 1980, К1иза еъ а1 , 1987} при действии различных чрезвычайных раздражителей на организм, можно предположить, что эти пептиды окажут регуляторное действие и в этих условиях.

Успехи в области изучения влияния ЭСП на биохимические и поведенческие реакции организма, а также исследование возможностей предупреждения воздействия ЭСП с помощью пептидных биорегуляторов могут внести существенный вклад как в практическое разрешение проблемы о защите населения от повреждающего действия ЭСП, так и развить теоретические представления о действии нейропептидов и их использовании как протекторов, предохраняющих организм от действия различного рода чрезвычайных раздражителей.

Цель исследования.

,1.Изучить влияние воздействия ЭСП на функционирование моноаминергических систем мозга крыс.

2.Изучить возможность использования нейропептидов в качестве стресспротекторов' при воздействии ЭСП на организм.

Основные задачи исследования.

I.Изучить реактивность моноаминергических систем мозга крыс при различных по силе и продолжительности воздействиях ЭСП.

2.Определить влияние ЭСП на аденозинтрифосфотазы (АТФ-азы) митохондрий мозга крыс.

3.Исследовать спектр изменений поведенческих реакций крыс при воздействии ЭСП.

4.Изучить возможность предупреждения выявленных нарушений в поведенческих и биохимических реакциях организма, вызванных ЭСП, с помощью пептидных биорегуляторов - Т5, Р, ТРГ, ВР.

5.Создать с помощью ЭСП экспериментальные модели животных с селективно измененным содержанием биогенных моноаминов в структурах мозга.

Положения, выносимые на защиту:

1.Выявлено, что ЭСП напряженностью от 60 до 200 кВ/м и длительностью действия от 2 ч до 4 мес приводит к дисбалансу содержания биогенных моноаминов в структурах мозга крыс. Характер изменений зависит от напряженности поля и продолжительности экспозиции в нем и в целом напоминает стрессорное воздействие на организм.

2.Воздействие ЭСП активизирует АТФ-азы митохондрий мозга крыс. Наиболее чувствительной к действию ЭСП является НСОд--АТФ-аза; увеличение интенсивности ЭСП сопровождается существенным повышением активности также Са2+- и Мр2+-АТФ-аз.

З.ЭСП вызывает изменения в поведенческих реакциях животных, нарушается их локомоция и эмоциональный статус.

4.Установлено, что предварительное внутрибрюшинное введение нейропептидов крысам, подвергнутым воздействию ЭСП, предупреждает возникновение изменений в содержании биогенных моноаминов в структурах мозга и в активности АТФ-аз митохондрий мозга, а также нормализует нарушенное поведение животных.

5.На основе применения ЭСП определенных интенсивностей выявлена возможность моделирования селективного изменения нор-адренергической, дофаминергической и серотонинергической. систем мозга.

Научная новизна. В работе получены оригинальные данные, свидетельствующие о неблагоприятном влиянии ЭСП на нейрохими-

ческие, внутриклеточные и мембранные процессы в структурах мозга. Детализировано показаны качественные и количественные нарушения и их динамика в функционировании моноаминер-гических систем мозга, активный ионный транспорт (АТФ-азы), поддерживающие гомеостаз возбудимости нейрона и регуляцию высвобождения нейромедиаторов. Также показано, как на основе этих нейрохимических нарушений изменяется спектр локомоторных поведенческих реакций животных и их эмоциональность.

Впервые обнаружено, что нейрорегулирувдие пептиды -Т5, Р, ТРГ, ВР являются высокоэффективными превентивными средствами в отношении ЭСП-индуцированных изменений нейрохимически-поведенческого гомеостаза.

На основе применения ЭСП определенных интенсивноетей выявлена возможность моделирования селективного изменения конкретной моноаминергической системы мозга.

Научно-практическая ценность работы. Результаты по комплексному изучению влияния ЭСП различной интенсивности и продолжительности на состояние моноаминергических систем структур мозга, активность ферментов нейрональных митохондрий и поведение животных не только расширяют теоретическое представление о действии ЭСП на организм, в частности на функционирование ЦНС, но также $ называют на рубежи биологической опасности и гигиенического нормирования ЭСП. Это использовано при разработке нормативных актов о допустимых уровнях напряженности ЭСП и плотности ионного тока для персонала подстанций и высоковольтных линий постоянного тока ультравысокого напряжения (Акт СН * 50-60 от 23.10.89 г.).

Впервые выявлено защитное действие нейропептвдов (Т5, Р, ТРГ, ВР) к ЭСП-вызванным нарушениям нейромедиации, внутриклеточной ферментативной регуляции и в реализации поведенческих реакций, что может указывать на новый способ фармакологической регуляции острых нарушений функционирования ЦНС.

Утверждено изобретение "Способ моделирования повышенной дофаминергической активности подкорковых образований мозга (авторское свидетельство СССР * 1522278 от 15.07.89 г.) Моделирование с помощью ЭСП может быть использовано как новый бескровный (без операции, без применения нейродегенера-тивных токсинов и т.д.) метод для получения селективного дисбаланса определенной моноаминергической системы мозга.

Апробация работы. Результаты проведенных исследований . доложены на международном симпозиуме ("Механизмы биологического действия электромагнитных излучений", Пущино, 1987), •на всесоюзном симпозиуме (V Всесоюзный симпозиум "Зколого-физиологические проблемы адаптации", Москва, 1988), на конференции прибалтийских республик (Республиканская научная конференция при участии фармакологов Латвийской и Эстонской ССР "Синтез и изучение физиологически активных веществ", Вильнюс, 1988), на сессии республиканского межведомственного научно-технического совета по проблеме "Биорегуляторы пептидно-белковой природы", посвященной вопросам нейробио-логии тимопентина (Рига, 1989).

Структура и объем работы. Диссертация изложена на IS2i страниц^машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания методик, а также глав, содержащих результаты исследований и их обсуждение, выводов, научно-практических рекомендаций и библиографического указателя, вклю-чапцего 267 источников литературы. Материалы диссертации иллюстрированы 21 таблицей и 25 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проводились на половозрелых крысах-самцах Вистар массой 180-250 г. Подопытные животные подвергались воздействию ЭСП напряженностью 60, 90, 120, 150 и 200 кВ/м и ионным током 2, 15, 17, 21 и 32 мкА/м2 соответственно. Для создания поля использовали камеру конденсаторного типа. На пластины подавалось постоянное напряжение от высоковольтного преобразователя ПВС-160. Экспериментальная камера была разбита на 4 равномерные ячейки, в каждую из которых помещали не более двух крыс. Камера для контрольных животных была идентична экспериментальной, но не подключалась к источнику питания. Опытные и контрольные животные помещались в соответствующие камеры на 4 часа ежедневно. Продолжительность пребывания в поле составляла X;3 и 14 суток (стандартная экспозиция), при проведении хронического эксперимента - 1,2,3 и 4 месяца с одномесячным восстановительным периодом в конце эксперимента.

Первым этапом работы было исследование реактивности моноаминергических систем мозга крыс при различных по силе и продолжительности воздействиях ЭСП. Следующим этапом явилось создание экспериментальных моделей животных, при которых воздействие ЭСП вызывает существенные изменения в распределении биогенных аминов мозга крыс. Определение содержания моноаминов проводилось по методу Earley , Leonard , 1978, который основывается на хроматографическом разделении биогенных аминов и их метаболитов в колонках, наполненных сефадексом 6-10, из гомогената мозговой ткани и последующим определением их концентрации путем фдюориметрического анализа. Определялось содержание норадреналина (НА), дофамина (ДА), серотонина и метаболита серотонина - 5-оксииндолуксусной кислоты (5-ОИУК) в стволе мозга, в промежуточном мозге и в ба-зальных ганглиях. Концентрацию биогенных моноаминов в тканях мозга высчитывали по сравнению с флюорисценцией соответствующих стандартных растворов с известной концентрацией биогенных аминов и выражали в мкг/г ткани. Статистическую достоверность различий между экспериментальными и контрольными величинами определяли по t -критерию Ствдента с достоверностью при р<0,05.

В дальнейшем была изучена возможность предупреждения выявленных нарушений с помощью пептидных биорегуляторов (Т5, Р, ТРГ, Ш. У одних животных исследовали содержание биогенных моноаминов и поведение, а у других - активность АТФ-аз митохондрий мозга. Эксперименты проводились при следующих характеристиках воздействия поля: 4-часовом (4-час) воздействии ЭСП напряженностью 150 и 200 кВ/м и 3-суточном (3-сут) воздействии ЭСП напряженностью 150 кВ/м.

Поведение животных изучалось в камере открытого поля (Hall , 1934, Broadhurst , 1975). В течение 5 минут пребывания крыс в камере фиксировали следующие поведенческие реакции: латентный период, после которого животное покидает свое первоначальное место (в секундах), вертикальную активность - в секундах и в количестве подниманий на задние лапки, горизонтальную активность - в секундах и в количестве пересечений квадратов, общую двигательную активность, состояние покоя и груминг (в секундах) и следующие поведенческие реакции в количестве выполнений: обнюхивание отверстий (ре-

акция норы), число дефекаций, встряхивание типа "мокрой собаки", встряхивание головой, чихание, количество переходов во 2-ю зону и количество переходов в 3-ю зону (пересечение центра камеры). При оценке результатов, учитывая изменение конкретной поведенческой реакции подопытного животного в сторону увеличения или снижения по отношению к среднему значению этой поведенческой реакции у контрольной группы, высчитывали процентное соотношение животных с повышением и со снижением данной поведенческой реакции относительно к общему числу животных в группе. Для оценки достоверности различий использовали критерий У? ( 1Аера , 1974).

Активность митохондриальных АТФ-аз определяли в тех же структурах мозга, что и биогенные амины. Ввделение фракции митохондрий мозга проводили при температуре не более 4°С по методу Яопуо .Бошобу! , (1960) в модификации Р.Н.Глебова с соавт.(1972). В полученной фракции определяли содержание белка (по методу Ъот? et а1 (1953) и активность Мд НС03~~; Са2+-; Ыа^-АТФ-аз по методу Иа-ЫЛит , ВеЪ1асЬ (1981). За единицу активности принято количество АТФ-азы, которое за I час при 37°С и рН 7,4 катализирует расщепление такого количества Ыа^ТФ, при котором освобождается I мкМ фосфора ( в час ). Статистическую достоверность раз-

личий определяли по ¿-критерию Ствдента.

Для изучения протективных свойств нейропептидов животным внутрибрюшинно непосредственно перед началом воздействия ЭСП (в 3-дневном эксперименте в 3-й день опыта)вводили тимо-пентин, ригин и тиролиберин в дозе 0,5 мг/кг, а вещество Р -0,1 мг/кг веса животных. Все вещества вводили в объеме 0,5 мл на животное весом 200 г. Использованные в экспериментах пептиды синтезированы в лаборатории химии пептидов Института органического синтеза Латвийской АН и на Экспериментальном заводе Института органического синтеза.

В экспериментах использовали ИЗО крыс, провели свыше 13 ООО анализов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I.Исследование состояния моноаминергических систем

в мозге крыс при действии электростатических полей различной напряженности и времени экспозиции

Основной задачей данного этапа работы было экспериментальное исследование состояния моноаминергических систем в мозге крыс в условиях действия на животных ЭСП при постепенном нарастании величин стимула с целью создания экспериментальной модели для изучения стресс-протективных свойств ней-ропептидов при "электростатическом" стрессе.

Исследования проводились в условиях острого эксперимента (однократная 2-х и 4-х час экспозиция в ЭСП), подострого эксперимента (экспозиция в поле составляла 3 и 14 сут) и хронического 4-мес воздействия при напряженностях ЭСП от 60 до 200 кВ/м. Изменения в содержании биогенных моноаминов мозга после воздействия ЭСП представлены на.рис.1.

Результаты опытов показали, что 4-час воздействие ЭСП напряженностью 60, 90 и 120 кВ/м не вызывает существенных изменений в распределении биогенных моноаминов в структурах мозга.Воздействие ЭСП напряженностью 150 кВ/м приводит к достоверному снижению содержания НА в стволе и в промежуточном мозге. Содержание других моноаминов не изменилось. При 4-час воздействии ЭСП напряженностью 200 кВ/м на фоне нормализации содержания НА происходит резкое увеличение уровня ДА в базальных ганглиях.

Таким образом, в этой серии экспериментов наиболее ранняя ответная реакция зарегистрирована со стороны НА-ергичес-кой системы, а при более сильном стимуле - со стороны ДА-ер-гической системы. Дальнейшие опыты показали, что более краткосрочное 2-час (вместо 4-час) воздействие ЭСП напряженностью 200 кВ/м аналогично 4-час воздействию ЭСП напряженностью 150 кВ/м приводит к снижению содержания НА в промежуточном мозге.

Исследование 3-сут воздействия ЭСП на содержание биогенных моноаминов мозга 1фыс показало, что при напряженности 60 кВ/м снижается уровень НА в промежуточном мозге. Увеличение стимула до 90 кВ/м вызвало ответную реакцию со стороны ДА-ергической системы, что проявилось в значительном

Рис.1. Изменение содержания биогенных моноаминов в мозге крыс (в % от среднего значения контроля) после различного по силе и продолжительности воздействия ЭСП. ЕЭ - норадреналлн; Ш - дофамин; Ш - серотонин; I - ствол мозга; 2 - промежуточный мозг; 3 - базальные ганглий.

увеличении этого нейромедаатора в базальных ганглиях. Воздействие ЭСП напряженностью 120 кВ/м отличается отсутствием каких-либо изменений в изученных показателях. Дальнейшее увеличение напряженности до 150 кВ/м и выше привело к вовлечению в ответ серотонинергической системы - зафиксировано значительное снижение нейромедиатора в стволе и в промежуточном мозге.

Результаты, полученные в экспериментах с более длительным сроком воздействия ЭСП (14 суток и более) свидетельствуют о том, что в этих случаях адаптационные процессы происходят с преимущественным участием серотонинергической системы.

После 14-сут воздействия ЭСП ответная реакция со стороны серотонинергической системы обнаружена начиная с уровня 90 кВ/м и практически при всех последующих значениях. Причем изменения содержания серотонина носили отчетливый фазный характер.и зависили от напряженности поля: выраженное увеличение уровня моноамина при напряженностях.90 и 120 кВ/м; незначительное отклонение от контрольных данных в сторону увеличения при напряженности 150 кВ/м; стойкое достоверное снижение уровня моноамина при напряженности ЭСП 200 кВ/м.

Результаты хронического эксперимента (продолжительность воздействия ЭСП 4-мес с I-мес восстановительным периодом; напряженность поля 90 кВ/м, срок пребывания крыс в ЭСП как обычно - 4 час/сут) показали, что начиная с I-ыес экспозиции у животных отмечалось снижение содержания серотонина в стволе и в промежуточном мозге, которое сохранялось на протяжении всего эксперимента. Возможно, что обнаруженное снижение уровня серотонина объясняется усиленным метаболизмом серотонина в мозге крыс, находящихся в зоне действия сильных ЭСП. В пользу этого свидетельствует факт повышенного уровня метаболита в промежуточном мозге, зарегистрированный при 2-мес (р<0,05) и 4-мес экспозиции (0,05<р<0,1). В восстановительном периоде наблодалась полная нормализация показателей.

В литературе имеются данные об изменении отдельных моноаминов после воздействия ЭСП (Charry .Bailey , 1985, Bailey , Chari-y , 1987, К.И.Станкевич, 1978), тем не менее, не дающие представления о закономерностях функционирования моноаминергических систем мозга при действии данного фактора. Можно лишь сравнить результаты наших исследовании с

данными к.И.Станкев::ч (1978), в которых отмечается увеличение содержания серотонина в мозговой ткани крыс при воздействии ЭСП напряженностью 1100 В/см и 300 В/см (что соответствует НО кВ/м и 30 кВ/м) начиная со 2-й недели опыта. В последнем случае изменения носят временный характер. Эти данные согласуются с сыявленным нами увеличением содержания серотонина при 14-сут воздействии ЭСП напряженностью 90 кВ/м и 120 кВ/м.

В литературе имеются многочисленные данные, свидетельствующие о влиянии других различных видов стресса на распределение биогенных моноаминов мозга крыс ( Кигауата , 1984, ЬеЬпегЬ et а1 , 1983, В.И.Павлова и др., 1981, И.П.Анохина и др., 1985). Можно предположить, что после начала действия какого-то раздражителя увеличивается нагрузка на мозг животного, в том числе и на моноаминергические системы мозга. Усиливается расход нейромедиаторов (выброс моноаминов в синаптическую щель), после чего резко возрастает ёинтез данного биогенного моноамина. При сильном и длительном воздействии все же синтез может не покрывать расходов, что приводит к снижению содержания нейромедиатора. Таким образом, содержание биогенного амина при действии стрессирупцего фактора меняется фазно, и его концентрация в конкретный момент зависит от преобладания синтеза иди расхода нейромедиатора. Это преобладание для различных медиаторов по-разному определяется спецификой раздражителя, силой и длительностью его действия.

В проведенных нами экспериментах выявлена отчетливая фазная реакция, включение в ответ на воздействие ЭСП нейро-медиаторных систем мозга. Вначале, при коротких экспозициях, реагировала НА-ергическая система, снижением уровня НА в промежуточном мозге (реже в стволе), что, возможно, свидетельствует о выбросе данного моноамина из нервной клетки. Это типичная экстренная реакция организма на чрезмерное воздействие. Затем, при усилении стимула, в ответную реакцию вовлекалась ДА-ергическая система, что проявилось в значительном увеличении этого нейромедиатора в базальных ганглиях. Это, вполне вероятно, может свидетельствовать об увеличенном синтеза ДА. Последней в ответную реакцию на воздействие ЭСП включается серотонинергическая система. Причем при определенных экспериментальных условиях (постепенное нарастание напряжен-

ности поля при 14-сут экспозиции животных в нем) удалось выявить отчетливый фазный характер в изменении уровня серотонина (рис. I).

Таким образом, характер реакции моноаминов в ответ на воздействие ЭС11 определяется величиной стимула, причем один и тот же эффект можно получить, варьируя напряженность поля и длительность воздействия.

2.Создание экспериментальных моделей с дисфункцией

моноаминергических систем в структурах мозга крыс

На основании исследований, результаты которых изложены в предыдущей главе, возникла идея моделировать вполне определенный тип дисфункции той или иной моноаминергической системы с помощью ЭСП. Такая модель должна отвечать, по крайней мере, следующим требованиям: обладать хорошей воспроизводимостью и значимостью изменений; избирательностью (т.е. изменение содержания одного нейромедиатора должно происходить на фоне нормального уровня других); достаточной простотой и удобством проведения эксперимента (в связи с чем из различных экспериментальных вариантов для моделирования были выбраны эксперименты с наименьшей продолжительностью).

Нави были разработаны модели дисфункций важнейших моноаминергических систем мозга крыс - норадренергической, дофами-нергической и серотонинергической с помощью воздействия ЭСП. 4-час воздействие ЭСП напряженностью 150 кВ/м вызывает снижение содержания.НА в промежуточном мозге; 4-час воздействие ЭСП напряженностью 200 кВ/м вызывает увеличение содержания, ДА в базальных ганглиях мозга; 3-сут воздействие ЭСП напряженностью 150 кВ/м вызывает выраженное снижение содержания серотонина в промежуточном мозге и менее выраженное снижение содержания серотонина в стволе мозга крыс. Изменения уровней указанных нейроыедиаторов происходят на фоне нормального содержания других ыоноаминов, по-видимому, из-за компенсаторных механизмов. Полученные результаты обладают хорошей воспроизводимостью. Способ достижения таких состояний безболезненен и атравматичен.

3.Исследование возможности применения нейропептидов .

(Т5,Р,ТРГ,ВР) для протекции дисфункций моноаминергических систем в структурах мозга крыс

В литературе имеются данные, свидетельствующие о регу-

ляторных и стресспротектирупиих свойствах пептидов, в том числе и изучаемых нами: ВР ( ОеЬше et а1 Д980, Нес1Л et а1 # 1980), Т5, Р и ТРГ ( К1иза et а1 ,1987, 1990) при воздействии различного вида чрезвычайных раздражителей. Для объяснения этого эффекта важное значение имеет модулирующее влияние пептидов на моноаминергические системы мозга. Можно предположить, что если воздействие ЭСП вызывает изменения в организме животных, подобные стрессу, то изучаемые пептиды окажут регуляторное действие и в этих условиях.

Для изучения возможности предупреждения нарушений в содержании биогенных моноаминов мозга крыс, вызванных воздействием ЭСП, животным до экспозиции в поле внутрибршинно вводили ней-ропептида: тимопентин, ригин и тиродиберин в дозе 0,5 мг/кг веса и вещество Р в дозе 0,1 мг/кг веса животных. В экспериментах были использованы три варианта моделей животных, описанные в главе 2, у которых воздействие поля вызывает стойкие нарушения одного конкретного нейромедиатора в структурах мозга. Результаты исследований представлены в табл.1 и на рис.2.

Нами было установлено, что предварительное введение всех изучаемых нейропептидов (Т5,Р,ТРГ,ВР) до 4-час воздействия ЭСП напряженностью 150 кВ/'м полностью нормализует сниженное содержание НА в мозге крыс. Предварительное введение Р,ТРГ и ВР до 4-час воздействия ЭСП напряженностью 200 кВ/м полностью нормализует увеличенное содержание ДА. в базальных ганглиях мозга крыс, а введение Т5 частично нормализует содержание этого нейромедиатора в базальных ганглиях (уровень ДА после введения Т5 оставался на 12% выше контроля, но это значительно ниже - на 10% - чем у животных, подвергнутых воздействию ЭСП без введения пептида). Предварительное введение нейропептидов до 3-сут воздействия ЭСП напряженностью 150 кВ/м приводит к частичной или полной нормализации сниженного содержаний серотонина в мозге крыс. Наиболее эффективное влияние при этих параметрах поля оказал ригин. После введения этого пептида при 3-сут воздействии ЭСП напряженностью 150 кВ/м содержание серотонина в промежуточном мозге крыс практически не отличалось от уровня этого нейромедиатора у контрольных животных. Наименее эффективным для нормализации содержания серотонина при воздействии ЭСП на 1фыс оказалось ВР.

Таким образом, наши исследования показали, что несмотря на специфику каждого из изучаемых пептидов в целом, Т5,Р,ТРГ и ВР

Таблица I

Влияние сочетанного действия нейропептодов и ЭСП на содержание биогенных моноаминов мозга крыс

Содержание моноаминов (М+и. мкг/г ткани) Группа в зависимости от параметров воздействия ЭСП

живот------

ных 150 кВ/м,4-час 200 кВ/м,4-час 150 кВ/м. З-сут

НА промеж.мозг ДА базал.ганг. серотонин ствол мозга серотонин промеж.мозг

Контроль ХП 1,40±0Д5 I,04+0,08** 6,71±0,51 8,44±0,50** 0,75+0,05 0,61±0,06 1,15+0,07 0,92+0,06**

ЭСП+ Т5 1,54+0,26* 7,5%0,09 0,81±0,08 1,08+0,04*

Контроль 1,43+0,13 9,44±0,38 0,88+0,06 1,35+0,09

ХП 1,07+0,11** И,45±0,61** 0,73t0,05 I,00^0,04**

ЭСП+ р I,зал,10х 9,30+0,63* 0,89+0,12 1,36+0,10*

Контроль 1,30+0,05 5,69+0,25 0,93£0,05 1,27+0,09

ХП 1,01±0,08** 7,51±о,зз** 0,76+0,05** 0,96+0,06**

ХП+ ТРГ 1,22+0,07 5,95+0,21* 0,84+0,09 1,14+0,05*

Контроль 1,27+0,09 6,33*0,42 0,81+0,05 1,21+0,07

ХП 0,96+0,10** 9,03f0,67** 0,66+0,05** 0,95+0,06**

ЭСП+ ВР 1,21+0,12 5,69+0,53* 0,77+0,05 1,08+0,08

хх - р<0,05 - относительно к контролю

х - р<0,05 - относительно к воздействию ХП .

оказывают нормализующее действие на те изменения в функционировании моноаминергических систем мозга, которые вызывают воздействие ЭСП.

Внутрибршинное введение изучаемых нейропептидов животным, не подвергнутым воздействию ЭСП, вызывало некоторые, мало выраженные изменения в функционировании серотонинергической системы мозга. Как наиболее значимое, можно отметить увеличение содержания серотонина в промежуточном мозге крыс после введения ригина.

4.Исследование поведенческих реакций крыс,

подвергнутых воздействию ЭСП и коррекция изменений с помощью нейропептидов

Как известно, поведение животных зависит от функционирования моноаминергических систем мозга (Д.А.Кулагин, В.К.Болон-динский, 1986). Поэтому целесообразно проанализировать соотношение поведенческих реакций животных с содержанием нейромедиа-торов мозга.

Поведение крыс исследовалось в камере "открытого поля" при тех же параметрах ЭСП, при которых изучалась возможность применения нейропептидов для протекции дисфункций моноаминергических систем мозга. Способы коррекции поведения животных изыскивались с помощью нейропептидов Т5.Р.ТРГ и БР. Результаты исследований представлены в табл.2 и на рис.2.

Опыты показала, что 4-час воздействие ЭСП напряженностью 150 кВ/м вызывает усиление реакции норы и увеличение числа дефекаций у крыс, что свидетельствует о повышенной исследовательской активности и увеличении эмоциональной реактивности подопытных животных. При указанном воздействии ЭСП снижается содержание НА в промежуточном мозге крыс. По данным литературы (Д.А.Кулагин, В.К.Болондинский, 1986) тормозное значение нор-адренергической системы мозга коррелирует с повышенной эмоциональной реактивностью животных.

Предварительное введение всех изучаемых нейропептидов до экспозиции животных в ЭСП снижало или полностью устраняло отклонения от нормы в их поведении. Увеличенную исследовательскую активность крыс (связанную с усилением реакции норы) эффективно снижали Р,Т5 и ВР, а увеличенную эмоциональную реактивность животных (проявлением которой служит увеличение числа дефекаций) ближе к нормр приводило введение ТРГ, а полностью к норме - ВР.

4-час воздействие ЭСП напряженностью 200 кВ/м также приводило к значительным изменениям в поведении животных. Увеличилось число крыс с повышенной вертикальной активностью (это проявилось как в увеличении времени пребывания животных в вертикальном положении, так и в увеличении количества подниманий), с увеличенным количеством груминга, а также с увеличенным количеством чихания. В то же время снизилось количество животных с усиленной реакцией норы я с повышенным числом

£

i i

•О

А А.

О о

о о

сл сл

о

►3

ж о о к ч

ф ф « ЕЕ

(I) ÍC

О о

ы ж

ь й

ш 43 te» о

о я

►э В td ss в

¡P

ф к ян

слсл

к

СП tú со®

со О

а

тЭо

слсл со

0>со

сосп -о со

шел □о

сосг»

<jco *

<зго слсл

соо слсл

со 41

слсл

со-о

слсл *

со-о слсл

со-о слсл

о я

ф я

а>м »i

ит

-JCO

СоСТ> 43 со

сосп

<jco

со-о слсл

СО СП

-о со 34

СП со го оо ж

сосг)

<100 *

слсл оо

ÍO-O клел

ж

со-о слсг

слсл оо

¡K

>-эаз ело

a +

М""

а> я аи

-ого

слсл *

сосг) "со

слсл

оо *

ИФ

-о со

сосг» ■о со ¡K

соа> -о со ж

слсл

оо

я4

со<1

слсл

слсл оо

слсл QO s4

со-слсл

слсл оо ж

1=1> Ф к я и

.р»сл то

со сп 1-1ЦЭ

О) со

(ЧР

toen <зсо

»4

слсл оо

слсл

оо *

CO-J

слсл

too мш

го-о ooto

слсл оо

го-а

слсл *

соо слсл

слсл оо

^4

8

_ рг о о fa a:

17* i-s ф ж

я и ü s¡

-ого слсл

сл со сои

£

I—

Т

H0D -о со

Обнюхивание отверстий ("реакция норы )

Число дефекаций

сл>р» оо го

сл**-слсл

^сл слсл

СрСГ>

сл.(*.

оого

^сл

со оо

а>со ■о со

го-о слсл

£»01 го со

слсл

оо

Группа животных

Направление изменения поведенческой реакции

Вертикальная активность

Вертикальная активность(чис ло подниманий на задние ланки

Груминг

Обнюхивание отверстий ("реакция норы")

Число дефекаций

Чихание

Вертикальная активность(число подниманий на задние лапки

Чихание

Встряхивание типа "мокрой собаки"

Встряхивание головой

_ ё о очз о ЙОН

яно фе х>а Ф о«< я: ж к

hs® с) со

Sm S «о ф fc> ж в> S _ wj*

иВ

оо

S3

1=1 и

s*

ф ь)

о

So

ф о m о. *Е tj ф

Sh) »о

о ж ►э о х

о § ¡s ф ►3 о ф >-з fj Ы

X

о ts •с» «к

о

о

•d и ф

фч ф

дефекаций относительно к контролю. Указанные изменения свидетельствуют о повышении ориентировочной и двигательной активности животных и о снижении исследовательской активности и эмоциональной реактивности животных. Увеличение количества ДА в daзальных ганглиях мозга крыс, обнаруженное после 4-час воздействия ЭС11 напряженностью 200 кВ/м, прежде всего коррелирует с увеличением локомоторной активности животных. В литературе также имеются данные (А.Ю.Буданцев, 1976), что ДА является необходимым компонентом двигательной активности стереотипного поведения. Имея в виду увеличенное содержание ДА в базальных ганглиях подопытных животных, возможно, с этим можно связывать повышенное значение груминга у этих крыс.

Предварительное введение изучаемых нами нейропептидов у животных, подвергнутых 4-час воздействию ЭСП напряженностью 200 кВ/м, приводило к изменениям в их поведении в сторону нормализации. Различные поведенческие реакции нормализовались в большей или меньшей степени в зависимости от введенного пептида. Если введение Т5, Р и BP почти полностью реверсировало увеличенное количество вертикальной активности и груминга -это поведенческие реакции, в большей степени связанные с уровнем ДА - а влияние ТРГ было менее выражено относительно к этим реакциям, то наиболее полную нормализацию повышенного чихания подопытных животных удалось достичь при помощи введения ТРГ.

3-сут воздействие ЭСП напряженностью 150 кВ/м приводило к увеличению числа животных с повышенным количеством встряхиваний типа "мокрой собаки" и вертикальной активности (количество подниманий) , а также встряхивания головы и чихания. Также отмечена тенденция к снижению числа животных с повышенным количеством числа дефекаций, что может указывать на снижение эмоциональной реактивности крыс. По данным литературы (Gerson, Baldessarini , 1980) сниженное содержание'серотонина в мозге крыс может вызвать увеличение локомоторной активности, возможно парадоксальное снижение реакций, связанных с любопытством и страхом, а также увеличение агрессивности животных. Из этого можно предположить, что увеличение локомоторной активности и снижение эмоциональной реактивности крыс после воздействия ЭСП взаимосвязано со снижением содержания серотонина в структурах мозга. Увеличение чиханий, встряхиваний типа "мокрой собаки" и встряхиваний головы, возможно, может свидетельствовать о нейротоксических изменениях в мозге крыс.

Предварительное введение нейропептидов Т5.Р.ТРГ и ВР в большей или меньшей степени нормализовало поведение животных, подвергнутых 3-сут воздействию ЭСП напряженностью 150 кВ/м. Увеличенное количество реакций чихания эффективно нормализовало введение всех изучаемых нейропептидов, а втряхивание головой - введение Т5,Р и ТРГ. Остальные измененные поведенческие реакции у животных, подвергнутых воздействию ЭСП, введение нейропептидов лишь частично нормализовало. Внутрибршинное введение нейропептидов интактным животным показало, что лишь ригин в дозе 0,5 мг/кг веса животных вызывал увеличение вертикальной активности крыс, а также тенденцию к увеличению числа животных с повышенной реакцией дефекации. В остальных случаях статистически достоверных изменений не было выявлено.

Таким образом, результаты наших исследований показали, что нейропептиды Т5,Р,ТРГ и ВР влияют на поведение животных при воздействии ЭСП, изменяя его в сторону нормализации. Однако, как уже было показано, та или иная поведенческая реакция нормализуется в большей или меньшей степени в зависимости от введения конкретного нейропептвда. Это можно объяснить тем, что поведение животных зависит не только от состояния какой-то одной моноаминергической системы мозга, а от функционирования и взаимосвязи между всеми нейромедиат(?рами, и, поскольку направленность влияния каждого из изучаемых нами пептидов на различные медиаторные системы не вполне идентична, то их влияние на поведение животных также будет отличаться. Несмотря на это, общая закономерность действия всех изучаемых пептидов, направленная на нормализацию поведения животных, сохраняется, и это, по-видимому, связано с тем, что наибольшее влияние эти пептвды оказывают на ту нейромедиаторную систему мозга, функционирование которой наиболее сильно нарушено.

5.Исследование мембранопротекторных свойств нейропептидов

Известно, что от распределения катионов на нейрональных мембранах зависит функциональное состояние и возбудимость структур мозга, и это распределение определяется активностью соответствующих транспортных систем, центральное место в которых занимают ферменты аденозинтрифосфатазы (В.В.Давыдов, 1981). Имеется тесная взаимоствязь между функционированием нейромедиаторов и АТФ-аз. Последние принимают участие как в

захвате (Bogdanski et al , 1970), так и в высвобождении ней-ромедиаторов ( vizi , 1977).

В нашей работе были исследованы активность Са2+-, НСОд--, Мд2+- и Ыа+, К*-АТФ-аз в митохондриях структур мозга крыс и возможность предупреждения изменений ферментативной активности с помощью пептидных биорегуляторов Т5 и Р. Результаты исследований представлены в табл.3 и на рис.2.

Опыты показали, что 4-час воздействие ЭС11 напряженностью 150 кВ/м вызывает увеличение активности НСО^-АТФ-азы в стволе и в промежуточном мозге крыс, а также тенденцию к увеличению активностей НСО3-- и Мд2+-АТЗ?-аз в базальных ганглиях мозга.

Предварительное введение Т5 приводило к полной нормализации активностей АТФ-аз во всех изучаемых структурах мозга у животных, подвергнутых воздействию поля. Введение Р, хотя и снизило повышенную активность НСО^-АТФ-азы и Мд2+-АТФ-азы по сравнения с животными, подвергнутыми воздействию поля, но все же она осталась выше, чем у контрольных животных.

4-час воздействие ЭСП напряженностью 200 кВ/м привело к значительным изменениям активностей всех нами изучаемых АТФ-аз митохондрий мозга крыс, причем во всех случаях активность ферментов возрастала. Наиболее резкое увеличение активности отмечено у НС03--Ата-азы.

После предварительного введения нейропептида Т5 увеличенная активность АТФ-азы во всех случаях возвратилась к норме. После предварительного введения Р животным до экспозиции в ЭСП активность исследуемых АТФ-аз не только возвратилась к норме, но в ряде случаев снизилась ниже, чем у контрольных животных.

3-сут воздействие ЭСП напряженностью 150 кВ/м приводило к увеличению активностей НСОд~-АТ$-азы в стволе и в промежуточном мозге, к увеличению активности Мд2+^АТФ-азы в стволе мозга, а также вызывало тенденцию'к увеличению (0,05<р<0,1) Са2+-АТФ-азы в стволе мозга и НС0д--АТО-азы в базальных ганглиях мозга крыс.

После предварительного введения Т5 животным до экспозиции в ЭСП нормализовалась активность НСОд" и М^2+-АТФ-азы митохондрий мозга. Предварительное введение Р нормализовали повышенную активность Мд +-АТФ-азы в стволе мозга и частично нормализовало повышенную активность НСОд~-АТФ-азы в стволе и в промежуточном мозге. Активность Са2+-АТФ-азы после введения Р у животных, подвергнутых воздействию ЭСП, в промежуточном мо'зге оказалась

Таблица 3

Влияние сочетанного действия нейрсшептвдов и ЭСП на активность АТО-аэ митохондрий мозга крыс

Активность АТО-аз митохондрий мозга крыс (М±м, мкмоль Р„/мг белка/час)

150 кВ/м.4-час! 200 кВ/м,4-час 150 кВ/м.З-сут

живот- НС0о"-А1Ф-аза НС0о~-АТФ-аза ных ° 0 Мд^-АТФ-аза АТФ-аза НС03~-АТФ-аза АТО-аза

Ствол Проме-мозга жуточ-ный мозг Ствол Проме- Базаль-мозга жугоч- ныв ный ганглии мозг Проме- Базаль-жуточ- ные ный ганглии мозг Назальные ганглии Ствол Проме-мозга иуточ-ный мозг Ствол мозга

Конт- 21,8± 24,0± £оль 1.83 2.23 25,4± 24,2± 26,0± 1.83 2.44 1.53 7,55± 8,24± 0.45 0.69 7,93± 0.51 30,1± 28,8± 2.77 1.84 6,40± 0.35

эсп 38'9± 7.79 5.23 39,8± 34,7± 38,4± 1.75х* 1.58х* 1.83** 9,8В± 10,5± 0.99х* 0.75** Ю, 4± 0.75** 38,6± 37,3^ 2.80х* 2.83** 8,7% 0.45х*

ЭСП+ 23,06± 23,6± Т5 1.57х 3.31х 29,79± 27,34± 28,64± 1.53* 2.16х 1.62* 6,75± 7,02± 0.43* 0.67* 7.68± 0.74* 26Д9± 26,54± 2.48х 2.39* 6,37± 0.45*

ЭСП+ 30,0± 34,0± Р 1,08** 2,08 22,01 21,0± 19,0± 0,38* 2,58* 1,513* 7,15± 6,1Ь± 0,65* О.ЗЗИх 6,47+ О.ЗЗЗЬе 32,5± 30,8+ 2,04 4,10 6,74+ 0,48*

кк - р <0,05 - относительно к контролю к - р < 0,05 - относительно к воздействию ЭСП

Рис.2. Влияние нейропептвдов на поведенческие и биохимические реакции организма при воздействии ОСП. Группы животных: I - контроль; 2 - воздействие ЭСЛ; 3 - ЭСП+Т5; 4 - ЗСП+Р; 5 - ЭСП+ТРГ; б - ХГЬВР. кх - р <0,05 - относительно к контролю, к - р<0,05 - относительно к воздействию

ОСП.

ниже, чем у контрольных крыс.

Внутрибрюшинное введение пептидов Т5 и Р в дозе 0,5 мг/кг животным, не подвергнутым воздействию ЭСП, не приводило к значительным изменениям активностей АТФ-аз митохондрий мозга.

Приведенные выше данные свидетельствуют, что воздействие ЭС11 приводит к стрессподобной активации АТФ-аз митохондрий мозга крыс, причем наиболее выражено влияние на активность НСОд--АТФ-азы. Предварительное введение нейропептидов Т5 и Р нормализует увеличенную активность АТФ-аз митохондрий мозга крыс при действии ЭСП, причем после введения Т5 нормализация полная, а после введения Р в ряде случаев происходит лишь частичная нормализация активности ферментов.

ВЫВОДЫ

1.Изучено действие широкого спектра электростатических полей напряженностью от 60 до 200 кВ/м и длительностью экспозиции от 2-час до 4-мес на организм. Воздействие ЭСП приводит к дисбалансу содержания биогенных моноаминов мозга крыс, что свидетельствует о ЭСП как сртессорном факторе на уровне церебральной нейромедиации. Характер изменений зависит от напряженности поля и продолжительности его действия. Аналогичные нейрохимические изменения обнаруживаются при более низкой напряженности ЭСП и длительной экспозиции или при действии поля высокой интенсивности более короткого периода.

2.Наиболее чувствительно на воздействие ЭСП реагирует но-радренергическая система мозга (при 60 кВ/м, 3-сут; 150 кВ/м, 4-час; 200 кВ/м, 2-час) снижением содержания НА в промежуточном мозге. При увеличении напряженности иди продолжительности действия ЭСП (90 кВ/м, 3-сут; 200 кВ/м, 4-час) нарушается функционирование дофаминергической системы - увеличивается содержание ДА в базальных ганглиях мозга крыс. При более длительном воздействии ЭСП(150 и 200 кВ/м, 3-сут; 90 и 120 кВ/м, 14-сут) нарушения обнаруживаются со стороны серотонинергической системы мозга, вначале содержание нейроыедиатора увеличивается (90 и 120 кВ/м, 14-сут), а затем снижается (90 кВ/м, 1,3,4-мес) в стволе, в промежуточном мозге или в обеих этих структурах.

З.ЭСП существенно влияет на активный транспорт ионов ней-рональной мембраны, опосредуемой метаболической энергией (от АТФ) клетки и регулирующей высвобоздение нейромедиаторов. 4-час и 3-сут воздействие ЭСП напряженностью 150 кВ/м преимущественно

вызывает увеличение активности НСОз~-АТФ-азы в стволе и в промежуточном мозге. Увеличение напряженности поля до 200 кВ/м приводит к активаци НСО-^-АТФ-азы во всех изученных структурах мозга. Кроме того, 3-сут воздействие ЭСП напряженностью 150 кВ/м активизирует Мд2+-АТФ-азу в стволе мозга, а 4-час воздействие ЭСП напряженностью 200 кВ/м - М92+-А1Ф-азу в промежуточном мозге и в базальных ганглиях и Са2+-АТФ-азу в базалышх ганглиях мозга.

4.Воздействие ЭСП существенно нарушает поведение крыс.4-час действие поля напряженностью 150 кВ/м приводит к увеличению исследовательской активности и эмоциональной реактивности животных. ЭСП более высокой интенсивности (200 кВ/м, 4-час) вызывает усиленную локомоцию, однако сопровождается снижением эмоциональной реактивности животных. Более длительное действие поля (3-сут, 150 кВ/м) усугубляет поведенческий дисбаланс.

5.Предварительное внутрибршинное введение нейропептидов -тимопентина, ригина, тиролиберина (0,5 мг/кг) и вещества Р (0,1 мг/кг) до экспозиции животных в ЭСП приводит к частичной или полной нормализации нарушенного моноаминергического дисбаланса в мозге крыс и коррекции измененных поведенческих реакций животных, а введение тимопентина и ригина - к частичной или полной реверсии увеличенной активности АТФ-аз митохондрий структур мозга крыс. Особенно выраженной нейрорегулирующей и протектив-ной активностью обладают ригин и тимопентин.

6.При определенных параметрах воздействия ЭСП возможно моделировать селективные изменения содержания моноаминов в структурах мозга: 150 кВ/м, 4-час - снижение содержания НА в промежуточном мозге; 200 кВ/м, 4-час - увеличение содержания ДА в базальных ганглиях; 150 кВ/м, 3-сут - снижение содержания се-ротонина в стволе и в промежуточном мозге крыс.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Г.Портнов Ф.Г., Воробьева Л.Ф., Иерусалимский А.П., Порозов Ю.М. Реакции моноаминергических систем мозга на действие электростатических полей /Механизмы биологического действия электромагнитных излучений. Тез.докл.международ.симпоз.-Пущино,1987.-С.67. 2.Портнов Ф.Г., Воробьева Л.Ф., Дундуре Б.Л., Иерусалимский А.П., Порозов Ю.М. Экспериментальное изучение биологических эффектов электростатического поля напряженностью 60 кВ/ы//Эксперименталь-ное исследование патологических процессов.-Рига, Зинатне, 1988. -С.135-140.

3.Порозов Ю.М., Воробьева Л.Ф., Иерусалимский А.П., Муцениеце Р.К., Лиепа И.Р., Клуша В.Е. Использование нейропептидов для предупреждения дисфункции моноаминергических систем в мозге крыс, вызванных воздействием электростатических полей (ЭСП)// Синтез и изучение физиологически активных веществ. Тез.докл. Республ.научной конф.при участии фармакологов Латвийской и Эстонской СССР.-Вильнюс, 1988.-С.99-100.

4.Воробьева Л.Ф., Портнов Ф.Г., Порозов Ю.М., Громыко Н.М., Иерусалимский А.П. Экспериментальное изучение закономерности реагирования моноаминергических систем мозга при действии сильных электрических полей.//Зколого-физиологические проблемы адаптации. У Всесоюз.симпоз.-Москва, 1988.-С.57-58.

5.Портнов Ф.Г., Иерусалимский А.П., Воробьева Л.Ф., Дундуре Б.Л., Порозов Ю.М. Состояние моноаминергических систем и ферментов энергетического обмена у крыс при воздействии электростатических полей напряженностью 120 кВ/м в условиях хронического эксперимента .//Гиг.и санит.-1989, й 10.-С.89-90.

6. Vorobieva L.F., Porozov Уи.Ы., К1иза V., Jerusalimsky А.P. The use of Thymopentin for reversing^ disbalance of the rat brain monoamine systems caused by exposure to electrostatic fields//Thymopentin: A Novel Regulatory Neuropeptide/Ed.by V.Klusa et al.-Biga Inst.of Organic Synthesis, Latv.Acad.Sci., 1990 ,-P .125-138 •

7. Porozov iu., Vorobieva L., Dundure В., Jeruaalimsky A., Klu-sa V. Preventive potency of neuropeptides against electrostatic field (ESF) -induced neurochemical and behavioural altera-tions//Central and Peripheral Peptidergic Regulation/Ed.by V.Klusa et al.-Riga, Inst.of Organic Synthesis, Latv.Acad.Sci., 1991,-P. 139-159.

8. Портнов Ф.Г., Воробьева Л.Ф., Иерусалимский А.П., Ларский Э.Г., Клуша В.Е., Порозов Ю.М. Способ моделирования повышенной дофаминергической активности подкорковых образований мозга// Авторское свидетельство на изобретение № 1522276 от 15.07.89.

Parakstlts iespieSanai 30.08.91. Formats 60x84/16. Metiens 100 eks. Pas. Nr. 247. Iespiests LZA OSI Eksperimentalaja шрпГса, 226065 Riga, KrustpiJs, S3.