Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Вкусовая афферентация в системных механизмах регуляции приема пищи и реализации специализированных аппетитов

' ( ' 1 " -•■//, ОРДЕНА ЛЕНИНА АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СССР НОРМАЛЬНОЙ ФИЗИОЛОГИИ имени П. К. АНОХИНА НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи УДК 612.87.

СЕРОВА ОЛЬГА НИКОЛАЕВНА

ВКУСОВАЯ АФФЕРЕНТАЦИЯ В СИСТЕМНЫХ МЕХАНИЗМАХ РЕГУЛЯЦИИ ПРИЕМА ПИЩИ И РЕАЛИЗАЦИИ СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫХ АППЕТИТОВ

14.00.17 — нормальная физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Научный консультант — доктор медицинских наук, профессор А. В. КОТОВ

Москва 1992

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте Н( мальной физиологии им. П. К. Анохина АМН СССР. Официальные оппоненты:

член-корреспондент А .Н СССР А. Л. Вызов

доктор биологических наук Т. М. Дмитриева

доктор медицинских наук Б. В. Журавлев

Ведущая организация — Московский медицинский стоматоло1 ческий институт им. Н. А. Семашко.

Защита диссертации состоится «

в .часов на заседании Специализированного ученого сое

та Д 001.08.01 при Научно-исследовательском институте норма; ной физиологии им. П. К. Анохина АМН СССР (103009, Моске ул. Герцена, 6).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Научно-г следовательского института нормальной физиологии им. П. К. Аь хина АМН СССР.

Автореферат разослан « » иЮсб&^РД 1992 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, кандидат медицинских наук

В. А. ГУМЕНЮК

; ' ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

•A'fe- — —1ле,цов.ания. Согласно теории функциональных "систем П.К.Анохина (1930-1975) возбуждения периферических ре-цепторных аппаратов служат необходимым компонентом механизмов акцептора результата действия. В работе "Проблема центра и периферии в физиологии высшей нервной деятельности" П.К.Анохин писал:"Мы считаем, что каждая функциональная система имеет определенный комплекс афферентных сигнализаций, который направляет и корригирует выполнение определенной функции" (1935). Аффе-рентация от рецепторов ротовой полости играет важную роль в функциональной система пищевого поведения, обеспечивая центральные структуры акцептора результата сведениями о сенсорных параметрах потребляемой пищи и жидкости. Вся динамика приема пищи находится под контролем афферентации от рецепторов языка, пищевода и желудка, -а процесс потребления соответствует этапу "сенсорного насыщения", так как прекращение приема пищи происходит задолго до всасывания ее химических элементов в кровь и состояние насыщения достигается благодаря афферентным возбуждениям ( П.К.Анохин, 1968, 1975; К.В.Судаков, 1984; А.И.Щумилина, Б.В.%равлев, 1987). На начальной стадии "сенсорного насыщения" вкусовая афферентация обеспечивает сигнализацию о химическом составе пищи и участвует в формировании гедонического компонен-тавосприятия, а на завершающем этапе она способствует прекращению приема пищи.

В психофизиологических экспериментах было обнаружено, что уровень функциональной мобильности вкусовых сосочков языка человека в состоянии голода высок, а после приема пищи снижен (Н.С.Зайко, 1956, 1967; С.М.Е5удылина, 1987). В основе изменения хемосенсорной чувствительности в процесса пищевого потребления лежат регуляторные изменения уровня афферентации от хеморецепто- . ров языка (А.И.Есаков, 1961, 1977; Brush, Halpernt 1970). Важное значение вкусовая афферентация имеет не только в процессе поедания смешанной пищи, но и в реализации специализированных аппетитов. Если формирование "солевого аппетита" у крыс можно вызвать адреналэктомией, то его реализация - потребление хлорида натрия находится в зависимости от сниженного уровня вкусовой

афферентной импульсации у таких животных ( Kosten, Contreras, 1985), а нарушение "углеводного аппетита" у мышей с врожденным диабетом сопровождается двукратны.! усиление!.: вкусовых ответов на сахара, регистрируемых со вкусового нерва ( Sako е.а. • 1990). Однако в научной литературе крайне мало публикаций, посвященных оценке изменений уровня вкусовой афферентации в процессе динамики пищевого потребления, исследованию невральных и нейромедиагорных механизмов регуляции афферентации, изменениям пищевого и специализированного потребления при недостатке вкусовой сигнализации. В то же время проблема участия вкусовой афферентации в механизмах, регулирующих, процесс потребления пищи и жидкостей, относится к разряду актуальных проблем фундаментальной физиологии и ее решение важно для более полного понимания деятельности функциональной системы пищевого поведения.

Цели и задачи исследования. Целью данного исследования било изучение роли вкусовой афферентации в системных механизмах регулирования приема пищи и параметров специализированных форм потребления, в соответствии с чем были сформулированы основные экспериментальные задачи:

I. Исследовать особенности и нейромедиаторные ыехшшэыы центробежной регуляции вкусовой афферентации, вызванной активацией интероцептивного аппарата желудка, а также ее роль на этапе пищевого "сенсорного насыщения".

.2. Изучить роль пептидергических механизмов регуляции вкусовой айерентации в реализации специализированного потребления растворов сахарозы или хлористого натрия.

3. Исследовать особенности специализированного потребления растворов хлорида натрия, сахарозы или сахарина в условиях частичного дефицита вкусовой аГферентации.

Научная новизна работы.В исследовании показано, что в процессе пищевого потребления на стадии "сенсорного насыщения" вкусовая афферентация находится под двойственным центробежным контролем - тормозным и облегчающим. Раскрыты нейромедиаторные механизмы, опосредующие центробежные облегчающее и тормозное влияния на вкусовую афферентацию, вызванные избирательной активацией хеш- и механорецепторов желудка, соответственно. Установлена роль симпатической нервной системы и эфферентных волокон барабанной

струны в качестве каналов центробежной регуляции, а также раскрыты норадренергические и холинергические нейромедиаторные механизмы реализации центробежных влияний на афферентную активность вкусового рецепторного аппарата.

Впервые установлено, что реализация специализированного потребления сладких углеводов, контролируемая пептидом холецистоки-нином обусловлена усилением вкусовой афферентации под влиянием этого пептида. Специализированное потребление хлорида натрия находится под контролем пептидов вещество-П и литорина и опосредовано избирательным усилением интенсивности вкусовой афферентации под влиянием этих пептидов. Применение активной иммунизации животных конъюгатами литорина и вещество-П с альбумином с целью создания высокого уровня эндогенных антител подтвердило участие этих пептидов в системном регулировании активности вкусовых рецепторов и солевого потребления. У животных с неонатальной дегенерацией вещество-П-содержащих нервных волокон обнаружено снижение уровня афферентации и нарушение солевого потребления.

Обнаружено, что специализированные формы потребления сладких веществ или хлорида натрия существенно изменяются в условиях дефицита вкусовой афферентации. Дефицит афферентации приводит к усилению предпочтения соли воде и нарушению баланса гормонов натриевого гомеостаза - альдостерона и кортикостерона; под влиянием дефицита нарушаются процессы вкусовой памяти, а также контроль зависимости объема потребления сладких веществ от массы тела животных.

Диссертационное исследование позволило сформулировать следующие концептуальные положения, выносимые на защиту: На стадии пищевого "сенсорного насыщения" уровень интенсивности вкусовой афферентации изменяется в соответствии с фазой потребления и характером потребляемой пищи благодаря механизмам двойственного центробежного контроля. В процессе специализированного потребления сладких и соленых соединений, находящегося под контролем пептидных факторов, участвуют регуляторные изменения вкусовой афферентации, опосредованные этими пептидами. В условиях дефицита вкусовой афферентации нарушаются механизмы контроля параметров потребления. Благодаря эмоциональной оценке восприятия вкусовая

афферентация играет роль фактора, модулирующего параметры полезного результата - процесса пищевого и специализированного потребления .

Теоретическое и практическое значение работы. Диссертационное исследование вносит существенный вклад в фундаментальную проблему сенсорных механизмов, контролирующих пищевое поведение у человека и животных. Проведенное исследование раскрывает перспективы дальнейшего изучения роли афферентных сигнализаций в процессе пищевого "сенсорного насыщения".

В диссертации сформулировано и доказано экспериментально положение о модулирующей роли вкусовой афферентации в контроле параметров потребления функциональной системы пищевого поведения. Раскрытие механизмов двойственного центробежного контроля вкусовой афферентации привело к необходимости учитывать состояние активности хеморецепторного аппарата языка на каждой стадии процесса пот- • ребления. Получены новые данные о пептидергической системной регуляции вкусовой афферентации в процессе потребления сладких углеводов и соленого хлорида натрия. Использование современных методов -регулирования эндогенного уровня пептидных факторов в организме путем активной иммунизации животных и неонатальной дегенерации пептид-содержащих нервных волокон дает перспективы в исследовании участия аналогичных механизмов в реализации других сенсорных функций .

Данные, полученные при анализе нарушений параметров пищевого и специализированного потребления в условиях дефицита вкусовой афферентации, раскрывают роль афферентации в механизмах регуляции пищевого поведения и могут быть также использованы в качестве рекомендации в клинической практике при повреждении вкусовых нервов у человека. Аналитическое исследование участия вкусовой афферентации в формировании эмоционального компонента восприятия пищи и жидкости может стать основой для новоги направления в области сенсорной физиологии.

Диссертационное исследование вносит вклад в развитие теории функциональных систем академика П.К.Анохина и концепции профессора А.И.Есакова о регуляции активности рецепторов.

Результаты работы могут служить указаниями в области лечеб-

ного питания и экологии питания человека. Материалы использованы и могут быть применены в дальнейшем в курсе лекций по темам "Физиология питания" и "Физиология анализаторов", проводимых на кафедре нормальной физиологии Московской медицинской академии, на кафедре физиологии Иркутского государственного университета, на кафедрах физиологии животных и высшей нервной деятельности Московского государственного университета им. М.И.Ломоносова.

Апробация работы. Результаты исследования по теме диссертации были доложены на XIII и ХУ Съездах всесоюзного физиологического общества им. И.П.Павлова (Алма-Ата, 1979 и Кишинев, 1987); на У1 и УП Семинарах "Развитие общей теории функциональных систем" (Суздаль, 1982 и Дагомыс, 1986); на международной советско-американской Павловской конференции памяти П.К.Анохина (Москва,

1984); на I Всесоюзном симпозиуме "Физиологические механизмы голода и насыщения" (Тбилиси, 1987); на 1У Всесоюзной конференции памяти Х.С.Коштоянца "Физиология и биохимия медиаторов" (Москва,

1985); на Всесоюзных конференциях "Механизмы сенсорной рецепции" (Пущино, 1979, 1988); на симпозиуме "Физиология пептидов" (Ленинград, 1988); на заседаниях Московского физиологического общества (Москва, 1985, 1987, 1989, 1990).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 30 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из "Введения", "Обзора литературы", трех частей и 12 глав "Результатов исследования", методического описания, "Заключения" и "Выводов". Библиографический указатель содержит 328 наименований. Диссертация иллюстрирована 55 рисунками и 5 таблицами.

МЕТОДЫ И ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Электрофизиологический метод. Для анализа активности хеморе-цепторного аппарата языка применяли методику регистрации импульсных ответов вкусового нерва - барабанной струны у крыс и кошек в традиционном - с периферического конца перерезанного нерва и оригинальном варианте - с интактного нерва в зависимости от задачи эксперимента. У животных под нембуталовым наркозом (30-40мг/кг) препарировали мышечную и соединительную ткань в подчелюстном

районе, производили трахеостомию. У крыс при выполнении операции скалывали часть нижнечелюстной кости. Далее препаровали барабанную струну, промывали нерв в растворе Рингера-Локка при температуре 34-36° С и при помощи металлической иглы снимали оболочку нерва. Отпрепарированный нерв (интактный или с перерезанным центральным концом) помещали на отводящие электроды и заливали вазелиновым маслом. Регистрацию импульсной активности нерва в ответ на адекватную стимуляцию дорсальной поверхности языка вкусовыми растворами осуществляли с помощью биполярных серебряных электродов длиной 25-30 мм, диаметром 0,3-0,4 мм. Так как амплитуда отдельных спайков, регистрируемых с целого нерва очень мала (1525 мкВ) и визуальный анализ затруднен, было применено разработанное К.В.Голубцовым устройство, работающее по принципу частотомера и интегрирующее импульсы на 3-5 мкВ превосходящие по амплитуде уровень шума. Запись процесса интеграции частоты импульсов в виде кривой (или в виде пересчетных импульсов) на фоторегистри-рукхцем устройстве (МЭДИКОР, Венгрия) или чернилопипущем устройстве анализировали в процессе и после окончания экспериментов (О.Н.Серова, К.В.Голубцов, 1978). Для улучшения соотношения сигнал-шум в данных экспериментах был использован блок предварительного усиления, выполненный на микросхеме К234УА1 А (В.Д.Пьянов, К.В.Голубцов, 1961). Амплитуды кривых импульсных реакций анализировали, принимая уровень кривой при фоновой импульсации за "нулевой". В'одних экспериментах исходную (до опыта) амплитуду реакции принимали за 100/2, а в дальнейаем амплитуды ответов выражали в % от исходного. В других экспериментах амплитуда выражали в $ от амплитуда ответа на 0,25 И хлорид аммония. Регистрировали четыре вкусовые реакции при последовательной аппликации и смыве вкусовых стимулирующих растворов: сахарозы, хинина сульфата, хлорида натрия и лимонной кислоты. В качестве стимулирующих прииеияли растворы 0,3 М сахарозы, 0,01 М хинина-сульфата, 0,10,3 М лимонной и щавелевой кислоты, 0,1-0,9 М хлорида натрия. Стимуляция хемореиепторов языка одним из четырех растворов длилась 8-10 секунд, интервалы между регистрациями составляли 2-5 минут. Дорсальную поверхность языка животных орошали до регистрации 0,04 М хлоридом натрия, не вызывающим вкусовых реакций у кошек и крыс, этим же раствором смывали каждаК стимул. Необходимо

отметить, что суммарные вкусовые реакции у интактных животных при условии смыва стимулирующих растворов через 8-10 секунд после начала стимуляции отличаются стабильностью. В наших экспериментах в течение 1,5 часа отклонение ответов от исходного уровня характеризовалось коэффициентом вариации (С/. ) равным 2,35^. Причем стабильность ответов возрастает с увеличением концентрации стимулирующих растворов. Такая стабильность величин ответов позволила провести анализ влияния различных биологических веществ на активность вкусового аппарата. В серии экспериментов,, преследующих цель выяснить влияние активации интероцептивных аппаратов желудка на активность вкусового рецепторного аппарата, применяли быстрое воздушное растяжение желудка резиновым баллоном до 100 мл у кошки и 8 мл у крысы или вводили 7-8 мл 0,15 М раствора хлорида натрия или соленого бульона (0,8 г - 1,0г на 100 мл) в желудок ксшки и 0,5 - 0,6 мл -в желудок крысы. Раствор соли вводили через зонд или с помощью шприца и иглы в полость отпрепарированного желудка.

Метода; анализа поведения. Механизмы регулирования специализированного потребления растворов соли, сахарозы или сахарина изучали на крысах. Для анализа объема потребления растворов, а также предпочтения и выбора были применены следующие методы: I) оценка объема потребления растворов (доступ к одной бюретке в течение 15-30 минут после депривации животных от пищи или жидкости); 2) тестирование в течение 5 дней предпочтения раствора вещества воде, причем считали паттерном устойчивого предпочтения вид реакции, когда животное в течение 5 дней предпочитало раствор сахарозы, сахарина, хлорида натрия или воду (С, Сн, НХ или В), сменой предпочтения - переход от предпочтения одной жидкости к другой в паре ( С-"В, Сн-^В, НХ~>В или В->С, В-^Сн, В—НХ); поведенческие реакции устойчивого предпочтения растворов или перехода к нему, относили н предпочтению веществ, а реакции устойчивого предпочтения воды или перехода к нему - к предпочтению воды (О.Н.Серова, А.И.Есаков, 1986); 3) тестирование в течение суток выбора наиболее предпочитаемых концентраций хлорида натрия из пяти концентраций: 0,01, 0,05, 0,1, 0,5 и 1,0 М.

Фармакологический анализ. При анализе роли нейромедиаторов

или эндогенных пептидов в экспериментах, выполненных под наркозом, в механизмах регуляции активности вкусового рецепторного аппарата применяли "субэпителиальную инъекцию" - оригинальный метод подведения 0,1-0,3 мл раствора вещества тонкой инъекционной иглой и шприцем в область базальной части дорсального вкусового эпителия языка. Такой способ введения препаратов имеет преимущество перед методом аппликации фармакологических веществ на поверхность языка, так как вкусовой эпителий является эффективным барьером для проникновения многих химических соединений (М1з1;ге«а , 1971). В поведенческих экспериментах применяли системные внутрибрюшинную, подкожную инъекции или интраназаль-ную аппликацию по 0,5 мл растворов веществ. В работе использованы следующие препараты:

Циклический АМ5 и его дибутирильный аналог ("Сигма", США)- 10~7-- Ю-8!!.

Циклический Г.© ("Сигма", США) - Ю-7- Ю~8Ы. 2', 2> цАМ1> ("Сигма", США) - Ю^М. Пропранолол ("Сигма", США) - 2хЮ~5- ЗхЮ"8М. Изопротеренол ("Сигма",США) - 10~7 - Ю~9Ы. Норадреналин-гидротартрат (СССР) - Ю-8 - Ю_9А1. Папаверин (СССР) - Ю"5 М. Теофиллкн ("Сигма", США) - КГ3 - Ю"4М. " Никотиновая кислота, натриевая соль (СССР) - %10""4М. Ацетилхолин хлорид ("Серва", ФРГ) - ЗхЮ-4- Ю"7М. Прозерин (СССР) - Ю"7М. Атропин (СССР) - Ю-4 - ЗхЮ~7М. Фентоламин (СССР) - Ю"8 - 10"%. .

Холецистокинин-панкреозимин ("Бутс компани", Великобритания) Ю"5 - 1(Г7М.

5 7

Холецистокинин-октапептид сульфат ("Серва", ФРП-КГ"- НГ'М. Лизил-вазопрессин ("Сандоз", Швейцария) - ПГ^М. Литорин нанопептид (синтезирован в Институте биоорганической химии АН БССР профессором В.Н.Голубовичем и сотрудниками) - ЮМ Бомбезин-тетрадекапептид ("Серва", ФРГ) - 10 - 10~® М. Вещество-П-ундекапептид ("Серва", ФРГ) - 10~4 - 10"^ Капсаицин ("Серва", ФРГ) - 50 мг/кг. АКТГ.тт ("Серва", ФРГ) - Ю_5Ы.

Биохимический метод. Концентрация гормонов в плазме крови определена кандидатом биологических наук, старшим научным сотрудником НИИНФ им. П.К.Анохина АМН СССР Ю.В.Полынцевым с использованием радиоимунного метода. Альдостерон, АКТГ и ангиотензин-1 определяли с .помощью наборов " С131НЕ-Зог1п " (Франция-Италия). Для определения уровня кортикостерона использовали высоко специфическую антисыворотку, полученную в лаборатории эндокринологии (заведующий Г.П.Кация) Института экспериментальной патологии и терапии АМН СССР.

Иммунологический метод. Для исследования участия пептидных факторов в регуляции активности вкусового рецепторного аппарата и потребления вкусовых растворов кроме экзогенного введения препаратов, использовали метод создания высокого уровня эндогенных специфических антител в организме крыс. Метод активной иммунизации крыс конъюгатами пептидов литорина и вещества-П с бычьим сывороточным альбумином обладает тем преимуществом перед методом введения готовых антител, что при активной иммунизации устранен эффект образования антител к антителам, вводимым извне (М.Ф. Обухова, И.П.Ашларин и др., 1990; А.В.Котов и др., 1988). Конъю-гаты готовили путем связывания пептидов с альбумином при молярном соотношении белка и пептида 30:1 и 1,5$-ном содержании глутарово-го альдегида. Конъюгат в смеси с адъювантом Фрейнда (неспецифическим иммуностимулятором) и физраствором вводили животным в течение четырех недель (одна иммунизация в неделю). Инъекции выполняли подкожно в области спины и задних лап крыс с обеих сторон, по 0,15-0,2 мл смеси вводили с помощью шприца и тонкой иглы 3-4 инъекциями. Дозу расчитывали исходя из 600 мкг белка на кг массы для первых двух иммунизаций и 300 мкг/кг для третьей и четвертой иммунизации. Первые две иммунизации проводили с полным, а третью и четвертую - с неполным адъювантом. Одну группу контрольных животных иммунизировали аналогичным образом смесью альбумина, обработанного глутаровым альдегидом, с адъювантом Фрейнда, другую контрольную группу инъецировали только физраствором. Коныогаты пептидов с альбумином приготовлены кандидатом биологических наук, ведущим научным сотрудником группы "Регуляторные пептиды" ( руководитель. академик АМН СССР И.П.Ашмарин) М.Ф.Обуховой; более

подробно схема иммунизации описана в публикациях (О.Н.Серова, И.П.Ашмарин, М.Ф.Обухова и др., 1988; О.Н.Серова, М.Ф.Обухова и др., 1989). После окончания срока иммунизации животных использовали в экспериментах и брали пробы крови методом декапитации. Содержание антител к пептидам в плазме крови определяли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа " тгт.тяа " с использованием 96-луночных полистироловых планшет фирмы "Титертек" (Алглия). Определения титров антител к пептидам выполнены кандидатами био- . логических наук AI.Ф.Обуховой и 3.И.Сторожевой.

йетод хирургической деафферентации. Для создания вкусового сенсорного дефицита у крыс осуществляли частичную деафферентацию языка. Под нсмбуталовым (30-40 мг/кг) или эфирным наркозом у животных отпрепаровывали язычный нерв, являющийся общим стволом ветви тройничного и барабанной струны, до его вхождения в язык. Башбанная струна проводит вкусовую, а тройничная ветвь - тактильную и болевую офферентацию от передних 2/3 языка у млекопитающих. Следовательно, послс ее перерезки, крысы теряют вкусовое восприятие в значительной мере, несмотря на сохранность языкоглоточного и блуждающего нервов. После препаровки проводили билатеральную экстирпацию участка нерва длиной 4-5 мм. Рану зашивали, после чего животным вводили бензилпенициллин. Контрольным животным производили ложную операцию без экстирпации нервов и/или перевязку протоков подчелюстной и подъязычной желез. Через 8-10 дней после операции животных использовали в поведенческих экспериментах.

Статистическая обработка. Анализ различия в электрофизиологических и поведенческих экспериментах проводили, применяя критерий Стыэдента-Фипера. При анализе параметров поведения также использовали критерий Хи-квадрат. Для оценки уровня антител в сыворотке крови применяли метод медианы (Г.Ф.Лакин, 1990). Данные обработаны на ЭВМ СМ-3.

Животные. В качестве объекта исследования были использованы кошки и лабораторные крысы. В I части исследования использовано 78 кошек массой 2,5-3,0 кг и 95 лабораторных крыс массой 200300 г, во II части - 496 крыс массой 200-300 г, в III части -374 крысы массой 100-350 г.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ЦЕНТРОБЕЖНАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ВКУСОВОЙ АФФЕРЕНТАЦИИ В СИСТЕМНЫХ МЕХАНИЗМАХ ЩЕВОГО СЕНСОРНОГО НАСЫЩЕНИЯ.

Поскольку в динамике "сенсорного насыщения" интероцептив-ный аппарат желудка играет важную роль можно предполагать, что центробежные влияния на вкусовую афферентацию, вызванные активацией интероцепторов также участвуют в этом процессе. В психофизиологических экспериментах было показано, что уровень мобильности вкусовых сосочков языка человека снижается после приема пищи (Н.С.Зайко, 1956, 1958; С.М.Будылина, 1987), или после введения пищи через фистулу в желудок (Н.С.Зайко, Е.З.Локшина, 1963). Обнаружены также изменения пищевого поведения животных после активации интероцептивного аппарата (В.Г.Кассиль, 1972; A.B. Асатиани, 1987; А.В.Асатиани, А.И.Бакурадзе, 1975). При активировании механо- и хеморецепторов желудка амфибий были показаны разнонаправленные изменения интенсивности импульсной активности, регистрируемой с языкоглоточного нерва языка (Д.И.Есаков, 1961; Brush, Holpern , 1970), причем установлено, что центробежные влияния у амфибий достигают уровня хеморецепторных клеток языка, изменяя потенциалы клеточной мембраны (А.И.Есаков, А.Л.Вызов, 1971; Eaakov, Byzov, Bukhtiyarov , 1989). Однако для раскрытия каналов и механизмов центробежных влияний на вкусовую афферентацию требовалось провести электрофизиологическое исследование изменений вкусовой афферентации у млекопитающих животных в условиях насыщения или активации интероцепторов. Задачей первого этапа работы был анализ характера и нейромедиаторшх механизмов центробежного контроля вкусовой афферентации, а также определение места и роли такой регуляции в процессе "сенсорного насыщения" животных.

Опыты показали, что у животных (кошки и крысы), накормленных перед экспериментом, величины вкусовых реакций, зарегистрированных с барабанной струны на аппликацию вкусовых растворов на язык, были меньше, чем у ненакормленных животных. Аналогичное тормозное влияние на вкусовую афферентацию оказывала механиче-

екая активация рецепторов растяжения желудка. Следовательно, инициирующим фактором в реализации снижения вкусовых ответов после наполнения пищей желудка является активация рецепторов растяжения (О.Б.Ильинский, 1975;Palatal , 1954; Iggo , 1955). Механизмы влияния активации рецепторов растяжения желудка на вкусовую афферентацию изучали применяя два режима растяжения - кратковременный (2, 4 и б минут) и длительный (30 минут ), что дало возможность оценить динамические характеристики наблюдаемых эффектов. При общей направленности центробежного влияния, обусловленного активацией интероцепторов - снижении величин вкусовых реакций, у кооек и крыс были обнарзтаены различия в динамике процесса торможения афферентации. Так при кратковременном растяжении желудка продолжительность тормозного эффекта у кошек соответствовала длительности интероцептивного воздействия, а у крыс - значительно превышала длительность растяжения (на 50-60 минут). При длительном растяжении у кошек наблюдали характерный эффект "ускользания" вкусовой афферентации из-под центробежных влияний: ответы восстанавливались на 5-10 минут раньше времени окончания интероцептивного воздействия. После анализа динамических характеристик тормозного эффекта решалась задача исследования нейромедиаторных механизмов, реализующих влияния такого типа.(Эксперименты, связанные с выяснением механизмов тормозного эффекта выполнены при длительном режиме растяжения желудка). Сакт быстрого проявления тормозного эффекта (10-15 секунд) говорит в пользу невральной природы явления. Однако попытка устранить центробежный тормозный эффект перерезками основных нервов языка была безуспешной: билатеральные перерезки барабанной струны,тройничного или подъязычного нервов не устраняли торможение афферентации; следовательно, волокна нервов языка не могут быть эфферентными проводниками центробежного торможения. Сохранность тормозного центробежного влияния на вкусовую афферентацию после перерезки нервов языка поставила вопрос об участии симпатической нервной системы в его реализации, так как известно, что симпатические нервные волокна входят в язык по сосудам и остаются интактными после устранения основных нервов (М.А.Савушкина и др., 1974). Исследование роли симпатической нервной системы в реализации центробежного тормоз-

ного эффекта показало, что ипсилатеральная перерезка шейного симпатического нерва, а также введение в базальную область вкусового эпителия fí -адреноблокатора пропранолола (Ю-® - полностью устраняло тормозный эффект и приводило даже к его извращению, как у кошек, так и у крыс, JL -адреноблокатор фентоламин (10~®М) не влиял на центробежный эффект. Если введение блокатора имлульсации симпатических нервных волокон пропранолола устранило тормозный эффект, то инъекции в область эпителия языка норадре-налина (10~ - 10~^М) или специфического активатора ,/0-адренореак-тивных структур изопротеренола - ICT^M) - имитировали торможение вкусовой афферентации. Стимулирование верхнего шейного симпатического ганглия импульсами тока ( р-50 гц, и =20 В) также приводило к угнетению имлульсации от рецепторного аппарата языка.

Согласно данным литературы вкусовые почки получают симпатическую эфферентную иннервацию (Р.А.Певзнер, 1960; М.А.Савушкина и др., 1974; Gabella t 1969), а электронно-микроскопическое исследование выявило электронноплотные везикулы катехоламиновой природа в области эфферентных синаптических контактов нервных волокон со вкусовыми рецепторными клетками (Р.А.Певзнер, 1960; Xraldl, Bobertia , 1964). В электрофизиологических работах наблюдали как усиление, так и торможение импульсных ответов хеморе-цепторного аппарата языка на стимулирование симпатической нервной системы (А.И.Есаков, 1962, 1977; Klmura ,1961). Проведеннные в данном исследовании эксперименты выявили участие симпатической нервной системы в реализации центробежного тормозного влияния на вкусовую афферентацию,вызванного активированием интероцеп-торов.

Поскольку внутриклеточным посредником норадренергической ней-ромедиации в нейронах, как центральной, так и периферической нервной системы считают цА1® ( Blooa , 1975; Doly , 1977; ¡Tatanaon, 1977; НаЪапзоп, Greengard , 1977), а во вкусовом эпителии это соединение обнаружено в большом количестве (В.О.Самойлов, 1980; 1983; Kurihara, Koyama , 1972; Cagan , 1976), было предположено, что цАШ может участвовать в механизмах торможения хемосен-сорной афферентации. Исследование показало, что инъекции в базальную часть вкусового эпителия цАШ> (10~^- 10~®М) и его дибутириль-

Q

ного мембрано-проникаюцего аналога (10 Ы) снижало величины вкусовых реакций (Р<0,01), при этом цАШ (I0~® iM) не влиял на активность рецепторного аппарата. Аналогичное снижение ответов наблюдали при введении в эпителий языка ингибиторов фосфодиэстера-зы, приводящих к увеличению эндогенного уровня цАЛК>, таких, как папаверин и теофиллин (Ю-^ - I0"4 М) (Р<"0,01), в то же время введение активатора фосфодиэстеразы - никотиновой кислоты (8х КГ4 натриевая соль) приводило к значительное усилению вкусовых реакций (F<0,01). Таким образом результаты исследования дали основание предполагать участие цАЖ в опосредовании торможения афферентации от хеморецепторов языка под влиянием симпатической нервной системы и норадренергической нейромедиации. Следует оговориться, что при анализе влияния ряда веществ на активность вкусового рецепторного аппарата необходимо учитывать их действие на сосуды и возможное опосредование ими этих влияний. Известно, что усиление кровотока в языке приводит к увеличению, а ослабление кровотока - к снижению величин импульсных ответов вкусового рецепторного аппарата ( Hellekant , 1971). Следовательно, введение в область вкусового эпителия таких веществ, как изопроте-ренол, теофиллин и папаверин должно приводить к раширению сосудов, усилению кровотока и увеличению ответов. Однако эксперименты показали снижение величин вкусовых ответов, что исключает участие сосудов в опосредовании наблюдаемых изменений активности вкусового аппарата.

Поскольку в процессе "сенсорного насыщения" происходит активация не только рецепторов растяжения желудка, но и хемо-, осмо-и терморецепторов, реагирующих на химический состав, осмотические и температурные параметры потребляемой пищи,(В.Н.Черниговский, 1962; В.Г.Нассиль и др., 1962; К.В.Судаков,. С.К.Рогачева, 1962; И.А.Алешин и др., 1983; Iggo , 1957; Clarke, Davidson , 1978), в данном исследовании проведен анализ характера и динамики влияний активации хеморецепторов желудка на активность вкусового рецепторного аппарата. Хеморецепторы желудка стимулировали введением в желудок растворов 0,15 Ы хлорида натрия в воде или бульоне, а также водных растворов 0,1 - 0,3 М сахарозы, 0,1 Ы лимонной или

щавелевой кислот. Эксперименты показали, что во всех случаях после введения в желудок животных растворов использованных веществ наблюдали усиление вкусовых импульсных реакций, регистрируемых с барабанной струны при аппликации на язык сахарозы, хинина, соли или кислоты (Р<0,05). Для дальнейшего изучения динамики и механизмов облегчающего влияния на вкусовую афферентацию использовали в качестве стимула для хеморецепторов желудка 0,15 М хлорид натрия. Облегчающий эффект проявляется в быстром (через 10-15 секунд после введения в желудок раствора соли) и мощном возрастании величин вкусовых реакций на все четыре вкусовых раствора - ответы возрастали на первой минуте более чем на 100% (Р<0,01), что указывало на рефлекторную природу явления. Не было отмечено различий в динамике облегчающего эффекта у кошек и крыс, поэтому в дальнейшем эксперименты выполняли на крысах. Задача дальнейшего исследования заключалась в раскрытии конкретных механизмов, обеспечивающих этот тип центробежных влияний.

Афферентным звеном облегчающего эффекта, вероятно, являются нервные волокна, проходящие в составе блуждающего нерва, иннер-вируюцие хеморецепторы желудка, чувствительный к растворам хлорида натрия и других веществ (В.Г.Кассиль и др., 1962; И.А.Булыгин, 1981; И.А.Алешин и др., 1983; К.В.Судаков, С.К.Рогачева, 1962; 1Е80 , 1957), так как перерезки блуждающего нерва в шейном отделе приводили к блокаде эффекта. На специфическую роль хеморецепторов желудка в формировании центробежного облегчающего влияния на вкусовую афферентацшо указывает отсутствие каких-либо изменений в направленности и динамике усиления активности вкусовых рецепторов при введении в желудок раствора хлорида натрия при различных температурах (25°, 30°, 35° и 40° С). Дальнейшее исследование центробежных механизмов облегчающего эффекта показало, что для того чтобы устранить его достаточно ипсилатеральной перерезки центрального конца барабанной струны. Перерезка барабанной струны приводила не только к устранению облегчающего влияния на вкусовую афферента-цию, но и "извращала" эффект. Таким образом можно предположить, что в составе барабанной струны содержатся эфферентные нервные волокна, способные проводить центробежное облегчающее влияние, вызванное интероцептивной активацией. Известно, что в составе бара-

банной струны содержится большое количество парасимпатических преганглионарных нервных волокон, направленных к слюнным железам, а также к структурам языка ( Hellekant , 1971, 1978). Пост-гаиглионарные нейроны парасимпатической нервной системы расположены в толще иннервируемых органов и являются холинергическими по своей нейромедиаторной природе, а блокировать эффект возбуждения таких нейронов можно инъекцией М-холиноблокатора атропина. В данном исследовании было установлено, что введение в область вкусового эпителия атропина в концентрации 10"^- 10"' М приводило к полному устранению и даже к "извращению" облегчающего центробежного влияния на вкусовую афферентацию. Причем сама инъекция атропина не влияла на вкусовые ответы, а введение адреноблокаторов пропранолола или фентоламина не изменяло облегчающего эффекта. Так как возбуждение постганглионарных парасимпатических нейронов приводит к выделению из нервных терминалей ацетилхолина, в данном исследовании было проанализировано влияние этого нейромедиатора на активность вкусового рецепторного аппарата. Обнаружено, что через несколько минут после инъекции ацетилхолина (Ю-4 - 10~7Ы) можно наблюдать возрастание вкусовых реакций более чем на 30% от исходного уровня (Р<0,05), но эффект ацетилхолина не был стабильным и в ряде экспериментов не проявлялся даже при максимальных концентрациях. В то же время введение в область вкусового эпителия антихолинэстеразного агента прозерина (Ю-7 М), повышающего . эндогенный уровень ацетилхолина, приводило к значительному возрастанию ответов на все четыре использованные вкусовые стимула (Р<0,01). Таким образом было установлено, что облегчающее центробежное влияние на вкусовую афферентацию опосредуется эфферентными волокнами барабанной струны и холинергической нейромедиацией.

Так как внутриклеточным посредником холинергической нейроме-диации в нейронах ЦНС и периферической нервной-системы считают цГШ ( Daly , 1977; Nataason , 1977; Hatanaon, Greengard , 1977) и во вкусовом эпителии обнаружено его содержание (В.О. Самойлов, 1980), было предположено, что в реализации облегчающего эффекта, проводимого по холинергическому каналу может принимать участие цГМ5. Было обнаружено, что инъекции цГМ5 (10~® М) приводили к усилению вкусовых реакций, что делает это вещество возмож-

ным посредником холинергических эфферентных влияний.

Таким образом,исследование показало, что в процессе пищевого "сенсорного насыщения", то есть удовлетворения потребности животного в пище до начала всасывания ее элементов в кровь, вкусовая афферентация находится под контролем центробежных влияний, которые осуществляют постоянную коррекцию уровня ее интенсивности, следовательно, чувствительности хеморецепторного аппарата языка. Активация хеморецепторного аппарата желудка млекопитающих такими компонентами пищи, как хлорид натрия, кислоты, сахара, приводит к усилению вкусовой афферентации. При этом облегчающий центробежный эффект опосредуется при участии эфферентных нервных волокон, проходящих в составе барабанной струны (предположительно парасимпатические преганглионарные волокна) при участии холинергических нейромедиаторных механизмов и М-холинореактивных структур вкусового эпителия. Важную роль в реализации облегчающего влияния играет внутриклеточный посредник холпнергической нейромедиации цГА®. Облегчающее влияние на вкусовую афферентацию, является необходимым фактором для обеспечения четкого распознавания вкусовых качеств и формирования эмоциональной оценки пищи в процессе ее приема.

На завершающей стадии "сенсорного насыщения" после наполнения желудка происходит значительное угнетение интенсивности вкусовой афферентации. При этом, если облегчающий центробежный эффект у двух исследованных видов животных не был отличен ни по каким-либо параметрам или механизмам, то центробежный тормозный эффект у кошки и крысы отличался по динамическим характеристикам. В частности, только у кошек наблюдали феномен "ускользания" вкусовой афферентации из-под центробежного контроля при длительном растяжении желудка: вкусовые ответы восстанавливаются значительно раньше, чем длится растяжение. Такое ускользание, вероятно, обусловлено центральными механизмами "реактивного торможения" (В.Н.Черниговский, 1962), а различия в динамике центробежного тормозного влияния у двух видов определено особенностями экологии питания хищных и грызунов (Е. Барнард, 1977).

В отличие от облегчающего тормозное центробежное влияние опосредуется симпатической нервной системой, норадренергической

нейромедиацией и ß -адренореактивными структурами вкусового эпителия. В реализации тормозного эффекта участвует, вероятно, внутриклеточный посредник норадренергической нейромедиации цАШ>. Правомерность такого предположения подтверждается исследованиями механизмов работы цАЖ в нейронах ДНС; так было обнаружено, что цАНЬ вызывает увеличение длительности гиперполяризации и снижение спонтанной импульсации клеток Пуркинье мозжечка аналогично влиянию норадреналина, причем ^-адрсноблокаторы предотвращали эффект норадреналина, а цАМЭ и норадреналин увеличивали трансмембранное сопротивление клеток; анализ данных привел авторов к мнению, что цк'М опосредует тормозный эффект, вызываемый возбуждением норадренергических волокон, идущих от синего пятна у крыс { Siglns е.а. , 1971 а,б; Hoffer е.а. , 1972; Bloom . 1975). Несмотря на то, что в данном исследовании анализируются механизмы деятельности периферических паранейрональных структур (вкусовые рецепторы), аналогию с функцией цАШ1 в нейронах мозга можно считать вполне оправданной: активация симпатических нервных волокон языка приводит к торможению вкусовой афферентации, которое блокируется -3 -блокатором пропранололом, а цАЖ, изопротеренол и норадреналин снижают импульсацию нервных волокон вкусового рецеп-торного аппарата.

Следовательно, в процессах регулирования функции хеморецепторов языка цАУ5 может играть роль тормозного "вторичного посредника" норадренергической нейромедиации, так же как и в ЦНС ( Daly, 19,77; Bloom , 1975; Hatanson, Greengard , 1977; НоЪ1моп е. а., 1971; Torda , 1972). При этом цГЩ> оказывает противоположное - облегчающее влияние на активность хеморецепторного аппарата языка и, вероятно, служит вторичным мессенджером облегчающих влияний холинергической нейромедиации. Такая двойственность функции циклических нуклеотидов в центральных и периверических нейронах подробно описана в литературе (Штарк и др., 1974; В.В. Шерстнев, И.А.Светлаев, 1^79; Bloom , 1975; Dely , , 1977; На-tanaon , 1977; Stone е.а. , 1975; Goldberg е.а. , 1974) и по нашим данным характерна для хеморецепторных клеток вкусового аппарата; при этом она, вероятно, является отражением и продолжением двойственных влияний, приходящих ко вкусовому рецепторно-

му аппарату по норадренергическому и холинергическому центробежным каналам. Исследование показало, что на стадии "сенсорного насыщения", вкусовая афферентация находится под контролем двух качественно различных влияний облегчающего"и тормозного. Центробежные влияния у млекопитающих, как показало исследование, отличны от центробежных влияний такого рода, обнаруженных у амфибий (А.И.Есаков, 1972, 1977) у которых предполагается существование "тонического" типа эфферентных влияний: центробежный контроль опосредуется эфферентными волокнами языкоглоточного нерва и угнетает активность хеморецепторного аппарата языка, а регуляция осуществляется ослаблением или усилением тормозного влияния (А.И.Есаков,-1977). Двойственный характер регуляции вкусовой афферентации у млекопитающих, включающий влияния противоположного знака (+) или (-), имеет преимущество перед однонаправленным контролем, так как регуляция, осуществляемая по двум каналам, вероятно, обладает меньшей инерционностью, более эффективна и надежна по сравнению с регуляцией по одному каналу. Два качественно различных, разнонаправленных канала регуляции способствуют быстрому и оптимально точному переходу от одного уровня возбудимости хеморецепторов к другому в зависимости от стадии пищевого поведения и характера потребляемой пищи.

РЕГУЛЯЦИЯ ВКУСОВОЙ АФФЕРЕНТАЦИИ В С1СТЕМНЫХ

МЕХАНИЗМАХ СПЕЦИАЛИЗИРОВАННОГО ПОТРЕБЛЕНИЯ,

КОНТРОЛИРУЕАЮГО ПРИ УЧАСТИИ ЭНДОГЕННЫХ ПЕП-ТВДШХ ФАКТОРОВ. '

В механизмах "сенсорного насыщения" принимает участие целый ряд нейрохимических факторов, среди которых эндогенным пептидам придается значение мощных регуляторов приема пищи и жидкости; при этом многие пептиды активируют нейроны как ЦНС, так и периферической нервной системы (П.К.Климов, 1983; И.П.Ашмарин, М.Ф.Обухова, 1986; К.В.Судаков, 1987; А.В.Котов и др., 1987; Panula , 1986; Levins е.а. , 1986; Gibba, Smith , 1986 и другие). В то же время участие вкусовой афферентации в пептидергическом контроле процесса насыщения практически не исследовано. Задачей следующего этапа

работы и было изучение роли вкусовой афферентации в системных механизмах специализированного потребления Сахаров и хлорида натрия, находящихся под контролем пептидных факторов. .

Среди регуляторных пептидов, участвующих в контроле процесса потребления,холецистокинин занимает особое место. Одним из характерных свойств холецистокинина является его избирательное угнетающее влияние на пищевое поведение, приводящее к снижению количества потребляемой пищи даже у голодных животных. Снижение объема пищевого потребления наблюдается как при внутрибрюшинном, внутривенном, подкожном, так и при внутрижелудочковом введении пертрда в мозг (К.В.Анохин,. 1982; Falasco е.а. , W9; Gibba е.а. , 1973; Naneroff o.a. , 1978; Della-Fera е.а. , 1979; Gibbs, Smith , 1986). При этом не отмечено угнетения общей активности животного. Инъекция антител к холецистокинину в мозговые желудочки овец приводила к противоположному эффекту,, то есть усиленному поеданию животными пищи ( Della-Fera е.а. , 1981). Все это дало основание считать холецистокинин специфическим "пептидом насыщения". Участвует ли холецистокинин, играющий такую важную роль в поедании смешанной пищи, в контроле специализированного потребления, опосредованного вкусовой афферентацией ?Для решения этого вопроса проводили анализ влияния холецистокинина на потребление растворов сахарозы или хлорида натрия, а также на уровень вкусовой афферентации. Обнаружено, что внутрибршинное введение холецистокинина снижает объем потребления раствора сахарозы у депривированных на 4в часов крыс. Как панкреозимин, так и холецистокинин октапептид приводили к угнетению потребления сахарозы в концентрации и Ю"э .М (Р-<0,05). Инъекция холецистокинина в концентрации Ю-7 М приводила к угнетению потребления сахарозы, не достигавшему достоверного уровня (Р^О.Оо). Поскольку наблюдали случаи, когда животные полностью'отказывались от питья раствора сахарозы после шгьекции холецистокинина,результаты экспериментов были подвергнуты анализу по методу ХИ-квадрат. Различие в числе случаев, когда животные пили сахарозу (положительные реакции "+") и отказывались от питья (отрицательные реакции "-") после инъекций I0~° М холецистокинина и контрольной (инъекция ФР) было достоверно (Р<0,01). У крыс, инъецированных раство-

' -7 -5

рами 10 М холецистокинина или Ю- М лизил-вазопрессина не отмечено различей в положительных и отрицательных поведенческих реакциях по сравнению с контролем (Р>-0,05). Внутрибрюшинная инъекция холецистокинина избирательно угнетала потребление растпора сахарозы, не влияя на прием воды или раствора хлорида натрия.

Специфическое снижение объема потребления раствора сахарозы поставило вопрос о роли вкусового восприятия сладких веществ и вкусовой афферентации в системных механизмах контроля потребления, осуществляемом при участии пептида холецистокинина. Для решения задачи об участии вкусовой афферентации в реализации торможения потребления сахарозы под влиянием холецистокинина был проведен электрофизиологический анализ возможного действия холецистокинина на биоэлектрическую активность вкусового рецепторного аппарата. В экспериментах было обнаружено, что у крыс под нембуталовым наркозом как после субэпителиального введения в язык, так и внут-рибрюшинной инъекции Ю-5 М холецистокинина (концентрация, эффективная в поведенческих экспериментах) вкусовые ответы, регистрируемые с барабанной струны при аппликации на язык четырех вкусовых растворов возрастали. При этом ЛП реакции вкусового аппарата на инъекции холецистокинина зависели от способа введения пептида: при внутрибрюшинном введении усиление афферентации можно наблюдать через 10 секунд, а при субэпителиальном введении в язык -через 10-20 минут после соответствующей инъекции. Такие различия в ЛП действия пептида говорят о том, что во вкусовом эпителии отсутствуют структуры, реагирующие на инъекции холецистокинина с последующим усилением вкусовой афферентации и о наиболее вероятном расположении таких структур в висцеральных органах. Облегчающее влияния внутрибрюшинной инъекции холецистокинина на вкусовую афферентацию можно блокировать перерезкой блуждающего нерва в шейном отделе (ипсилатерально), что указывает на афферентные волокна блуждающего нерва и как на возможный центростремительный канал облегчающего влияния холецистокинина. Поскольку в наших предыдущих исследованиях было обнаружено, что облегчающий центробежный эффект, может опосредоваться эфферентными волокнами барабанной струны и холинергической нейромедиацией,' предположили, что центробежное влияние на вкусовую афферентацию, вызванное

инъекцией холецистокинина, реализуется при участии аналогичных механизмов. Эксперименты показали, что облегчающее влияние холецистокинина на вкусовые реакции, можно блокировать субэпителиальным введением 10" М раствора атропина в язык. При инъекции атропина наблюдали не только устранение, но и "извращение" облегчающего эффекта. Аналогичное устранение и "извращение" эффекта инъекции холецистокинина наблюдается также при перерезке центрального конца барабанной струны на ипсилатеральной стороне, что указывает на участие эфферентных волокон барабанной струны в опосредовании влияния инъекции пептида на вкусовую афферентацию.

Таким образом,была установлена холинергическая нейромедиа-торная природа конечного звена эфферентного канала, проводящего центробежное облегчающее влияние на вкусовую афферентацию, вызванное инъекцией холецистокинина. Если блокирование М-холинореактив-ных структур языка устраняет усиление вкусовой афферентации под действием холецистокинина, то можно ожидать, что обработка вкусового эпителия атропином должна блокировать и угнетающее действие холецистокинина на питье раствора сахарозы в поведенческих экспериментах в том случае, если усиление активности вкусовых рецепторов участвует в реализации поведенческого эффекта пептида. Основываясь на таком допущении и решая задачу о возможной роли центробежного облегчающего эффекта на вкусовую афферентацию в угнетающем влиянии холецистокинина на питье сахарозы у крыс, мы провели серию экспериментов,в которых внутрибрюшинную инъекцию 10~э М пептида производили животным, предварительно инъецированным внутрибрюаинно или подкожно раствором атропина в различных концентрациях - Ю~ЬМ); результаты показали, что только после троекратной инъекции 10"^ Ы атропина ( в течение 2 суток деприва-ции от водЬ) угнетающее влияние холецистокинина на потребление раствора сахарозы было полностью блокировано, причем инъекции только атропина не приводили к усилению приема раствора сахарозы.

Следовательно, эксперименты подтвердили участие холинергиче-ских нейромедиаторных механизмов в реализации угнетающего влияния холецистокинина на процесс потребления раствора сахарозы и облегчающего влияния на вкусовую афферентацию. Все это доказывает, что "сенсорное насыщение" в процессе потребления сладких Сахаров, на-

ходящееСя под контролем пептида холецистокинина, опосредуется при участии облегчения под влиянием этого пептида вкусовой аффе-рентации. йде одним доказательством важной роли вкусовой афферен-тации в этом процессе являются опыты, в которых инъекцию 10 М холецистокинина производили животным с частичной хирургической деафферентацией языка: у деафферентированных животных не отмечено торможения приема сахарозы, в то время как у ложнооперированных инъекция пептида снижала объем потребления сахарозы так же, как и у интактных крыс.

В семействе пептидов, контролирующих пищевое и питьевое поведение, выделяют пептиды бомбезин-подобной группы (П.К.Климов и др., 1985; П.К.Климов, 1986; М.А.Каменская, 1988; А.Т.Марьянович и др., 1989; Levine o.a. , I986;Panula , 1986; Gibba, Smith, 1986). При введении бомбезина и литорина как в мозговые структуры, так и внутрибршшнно можно наблюдать угнетение пищевого и литьевого потребления у крыс (Kulkoaky, Gibba , 1982; Gibbs o.a. , 1981;Levine a.a. , 1986; Negri , 1986). Однако роль литорина в регуляции физиологических функций изучена значительно меньше, чем это сделано в отношении бомбезина. В то же' время эксперименты дают основание предполагать, что несмотря на очень незначительное различие п строении С-концевого фрагмента у пептидов бомбезин-подобной группы участие их в. реализации пищевого поведения может специфически различаться. В данном исследовании был проведен анализ участия литорина я контроле потребления вкусовых веществ и слияния литорина на вкусовую афферентацшо. Первым этапом исследования был анализ влияния инъекций литорина на процесс питья вкусовых растворов у депривированных на 48 часов крыс. При внутри-брюшинном введении литорина обнаружено избирательное дозо-зави-симое - Ю-'' М) усиление потребления 0,1 М раствора хлори-

да натрия, при этом на питье сахарозы или водопроводной воды инъекции литорина таких же концентраций не повлияли. В то же вре-ня при внутрибршинном введении бомбезина - отмечено

количественно зависимое от концентрации - Ю-'' М) снижение

потребления 0,3 М сахарозы, но объем потребления соли или воды при введении бомбезина не изменялся. В электрофизиологических

экспериментах было показано, что как при внутрибрюшинном, подкожном, субэпителиальном введении в язык, так и при интраназаль-ной аппликации Ю-^ - Ю-® литорина можно наблюдать усиление вкусовых импульсных ответов, регистрируемых с барабанной струны при аппликации на язык раствора хлорида натрия и лимонной кислоты (Р<0,05). Характерной особенностью этих экспериментов была различная динамика усиления вкусовых реакций: в одних случаях ответы возрастали в первую минуту, в других - через 10 и более минут после инъекции. Ответы на стимуляцию языка растворами сахарозы или хинина существенно не изменились. Перерезками барабанной струны или тройничного нерва не удалось осуществить блокаду усиливающего эффекта литорина на вкусовые ответы, следовательно эти нервы не являются проводниками регуляторного эффекта литорина. Большой ЛП в ряде опытов (до 20 минут) действия инъекции литорина на вкусовой рецепторный аппарат, независимо от способов введения пептида, а также невозможность устранения эффекта перерезками нервов языка указывают, по нашему мнению, на то,что в реализации усиливающего эффекта литорина участвуют не только невральные механизмы, но и гуморальные факторы. Из литературы известно, что при инъекциях литорина и бомбезина в крови животных повьцпартся уровень таких гормонов, как инсулин и глюкагон ( Ьвтг1пв е.а. , 1986; Рапи1а , 1986). ¿!ожно предположить участие этих гормональных факторов и в реализации усиливающего действия литорина на вкусовой рецепторный аппарат.

Для изучения специфической роли пептида литорина в системном контроле специализированного . потребления соли был применен метод активной иммунизации крыс конъюгатом литорина с альбумином, дающий возможность создания высокого уровня эндогенных антител к литорину в организме животных. Медианные значения титров антител в плазме, полученной при иммунизации крыс конъюгат том литорина с альбумином и адъювантом Фрейнда, смесью альбумина с адъювантом или инъецированных физраствором составили: 1:256, 1:64, 1:16. При анализе отношения у животных ко вкусовым растворам было установлено, что крысы, иммунизированные конъюгатом литорина с альбумином, после депривации (48 часов) пили в течение 15 минут меньше раствора соли, чем контрольные крысы, иммунизи-

рованные только альбумином с адъювантом в то же время объем потребления раствора сахарозы был одинаковым в обеих группах животных. При дальнейшем анализе предпочтения соли воде и выбора раствора соли, обнаружено, что при 5-дневном 2-бутылочном тестировании соотношение крыс, предпочитавших соль или воду в группах, иммунизированных конъюгатом, только альбумином или инъецированных физраствором составило: I :5, 4:2, 6:0, соответственно. При определении наиболее предпочитаемых концентраций в течение 24 часов, как у крыс, иммунизированных конъюгатом литорина с альбумином, так и у контрольных крыс, иммуниз1трованных альбумином без литорина наиболее предпочитаемыми были 0,05 ¿1 и 0,1 М хлорид натрия, при этом суточное потребление в опытной и контрольной группах было равным и составило 1,1 + 0,Oír и 1,2 ± 0,Oír кристаллического хлорида натрия (Р>0,05). Подводя итоги экспериментов можно сделать заключение, что у иммунизированных конъюгатом литорина с-альбумином крыс объем потребления соли после деприпации и предпочтение раствора соли воде снижены, в то время как на выбор из нескольких концентраций иммунизация не повлияла. Величины биоэлектрических реакций, регистрируемых с барабанной струны у иммунизированных конъюгатом пептида с альбумином крыс не отличались от контрольных по амплитуде.

В данной работе был проведен анализ участия еще одного пептида в процессе специализированного потребления и регуляции вкусовой афферентации - всщества-Г1. В 1979 г Ландбсргом и его коллегами было обнаружено существование вещество-11-иммунорсактипных нервных волокон, входящих во вкусовио почки языка кошки Lundberg е.а. , 1979). Дальнейшие исследования, выполненные на крысах, показали, что вещество-П - иммунореэктивные волокна листовидного и желобовидного сосочков снабжаются язьшоглоточным нервом, а волокна, входящие в ерчбовидный сосочек принадлежат барабанной струне ( Niahlnoto е.а. , 1982). Возникло предположение, о том, что вещество-П-иммунореактивные волокна являются вкусовыми афферентнши волокнами, однако иммуноэлсктронномикроскопическое изучение тонкой структуры этих волокон показало, что не существует синаптических контактов между вецсство-П-волокнами и клетками вкусовой почки, а нервные окончания, которые имеют синаптиче-

ские контакты с клетками III типа (вкусовые рецепторные клетку), не содержат вещество-П-иммунореактивных структур ( Yamasald. е.а., 1984). Следовательно, вещество-П-содержащие нервные волокна не могут участвовать в механизмах вкусовой рецепторной трансмиссии и не являются вкусовыми афферентами. В то же время методом флюоресцентной микроскопии было показано, что через 3-5 дней после' системного введения вещества-П содержание серотонина в гантеле-видных клетках вкусовой почки лягушки увеличивается (H.A. Соловьева, А.И.Есаков, 1984). Все это дало основание для предположения о возможном участии вещество-П-содержащих волокон и самого вещества-П в регуляции вкусовой афферентации и зависимого от нее процесса специализированного потребления.

Задачей следующего этапа и стало исследование влияния вещества-П на уровень вкусовой афферентации и процесс специализированного потребления хлорида натрия или сахарозы. В начале исследования были проведены электрофизиологические эксперименты. Изучали влияние вещества-П на вкусовые реакции, регистрируемые с барабанной струны. Опыты показали, что субэпителиальное введение в язык М вещества-П не изменяет вкусовых реакций, а вещество-П усиливает вкусовые ответы на соль и кислоту в 40$ случаев, и, наконец, применение высокой концентрации Ю-4 М вещество-П приводило к усилению ответов на соль и кислоту во всех экспериментах (Р<0,05). При этом вкусовые реакции на сахарозу и хинин не изменялись, что исключает участие в наблюдаемом эффекте изменения просвета сосудов. Усиление вкусовых реакций на растворы хлорида натрия и лимонной кислоты наблюдали через 30 секунд после субэпителиального введения вещества-П, а максимальное увеличение ответов наступало через 5 и 10 минут, для ответов на соль и кислоту соответственно. Субэпителиальное введение Ю-4 Ы раствора фрагмента вещество-П^-^ не изменяло вкусовые реакции.

После обнаружения избирательного усиления вкусовых реакций на хлорид натрия и кислоту также, как и в опытных с литорином, возник вопрос о роли усиления вкусовой афферентации под влиянием вещества-П в процессе потребления соли у бодрствующих крыс. Оказалось, что вещество-П избирательно влияет не только на вкусовые

реакции, но и на потребление вкусовых растворов. Подкожная инъекция 10 - 10~7 М приводила к зависимому от концентрации пептида усилению объема солевого потребления у депривированных крыс, не влияя на объем потребления сахарозы или воды. Введение фрагмента вецество-П^-ц в Ю-4 М концентрации угнетало потребление раствора соли, не изменяя потребления сахарозы в тех же условиях. Противоположный влиянию вещества-П эффект вещества-П^ р вероятно, отражает отношения "структура-активность", характерные для этого пептида и его фрагментов (В.¿.Клуша, 1934; Эме и др., 1984). Можно предполагать, что только полная структура ундекапептида веще-ства-П обеспечивает "реальную" регуляцию активности вкусового ре-цепторного аппарата и солевого потребления.

Таким образом, усиление интенсивности вкусовой афферентации при повышении концентрации вещества-П во вкусовом эпителии приводит к возрастанию вкусовой чувствительности к хлориду натрия у бодрствующих крыс и способствует усилению солевого потребления. Однако, усиливающее влияние вещества-П на вкусовую афферентацию, проявляющееся только при высоких для биологически активных веществ концентрациях пептида (Ю-4 - 10~°М), потребовало дополнительного исследования специфичности эффектов, вызываемых препаратом. Целесообразно испытать влияние не только введения пептида на активность вкусового рецепторного аппарата и процесс потребление раствора соли., но и эффект изменения эндогенного уровня пептида. Для этой цели были применены два метода исследования, приводящие к изменению уровня вещества-П во вкусовом эпителии: I) активная иммунизация крыс конъюгатом пептида с альбумином; 2) неонатальная инъекция крысам капсаицина.

Было обнаружено, что после 4-недельной иммунизации крыс и использования их в экспериментах, проведенный анализ уровня антител в плазме крови животных показал, что медианные значения титров антител к веществу-П в группах крыс, иммунизированных конъюгатом вещества-П и адъювантом Срейнда или инъецированных только альбумином и адъювантом составили: 1:1280 и 1:80, соответственно. Электрофизиологическое исследование показало-, что вкусовые реакции, регистрируемые с барабанной струны, на аппликацию на язык растворов сахарозы, хинина, соли и кислоты у крыс, иммунизирован-

ных к веществу-П были снижены. Причем наблюдали обратную зависимость между уровнем антител к пептиду и амплитудой вкусовых ответов. При анализе потребления растворов соли и сахарозы у деприви-. рованных крыс установлено, что иммунизация животных конъюгатом вещества-П с альбумином приводит к понижению объема потребления хлорида натрия, не влияя на объем выпитого раствора сахарозы. В процессе более длительного 5-дневного тестирования у крыс, иммунизированных к веществу-П, также отмечено снижение предпочтения раствора соли воде - соотношение числа животных, предпочитавших соль или воду составило: 1:5, в то время как в контрольной группе - 4:2. Тестирование выбора различных концентраций раствора соли показало, что у иммунизированных к веществу-П крыс первая из двух предпочитаемых концентраций (0,01 М и 0,05 М) является для вкусового рецепторного аппарата подпороговой.

Другой способ изменения уровня вещества-П в организме -применение препарата капсаицина. Капсаицин - вещество, выделенное из плодов жгучего перца, обладающее различным действием на нервные структуры в зависимости от способа его применения: при инъекциях малых концентраций капсаицина можно наблюдать возбуждение нейронов, чувствительных к веществу-П, средние дозы капсаицина угнетают деятельность нейронов, а высокие - приводят к их разрушению и гибели (Hagi , 1982 а,в; Janceo е.а, , 1987). Если ввести капсаицин новорожденным крысятам, то у таких животных не развиваются тонкие немиелинизированные нервные волокна, преимущественно афферентные, проводящие болевую чувствительность. Известно, что такие волокна содержат пептиды вещество-П, соматостатин и, возможно, другие факторы ( Nagl , 1982, а, б). При неонаталь-ной обработке крыс капсаицином можно предполагать дефицит вещества-П, по крайней мере'периферических нейронах, вот почему в данном исследовании анализировали изменения вкусовой афферента-ции у крыс, неонатально инъецированных капсаицином. Крысятам двух пометов через 24 часа после рождения инъецировали подкожно 50 мг/кг капсаицина, растворенного в смеси 10^-ного этанола с 10%-ным.твином-80 в физрастворе ( Nagl , 1982 а, в;Schultzberg е.а. , 1982; Traurig o.a. , 1984). Крысят второго помета инъецировали смесью растворителей капсаицина (контроль). Через 4 не-

дели после рождения крысят отняли от самки, через 5 недель разделили самцов и самок, через 7 недель отсадили по одной особи в клетки для испытания и проводили анализ объема потребления соли и сахарозы, выбора и предпочтения. После проведения поведенческих опытов животных использовали в электрофизиологических экспериментах. Исследование изменений биоэлектрической активности вкусового рецепторного аппарата 8-недсльных крыс обнаружило, что амплитуды интегральных ответов на стимуляцию языка сахарозой, хинином, хлоридом натрия и кислотой были меньше у крыс, инъецированных неонатально капсаицином, по сравнению с крысами, которым вводили только растворитель капсаицина. Однако через 16 педель после рождения вкусовые ответы достигали уровня контрольных животных, что,вероятно, обусловлено регенерацией вещество-П-содоржпщих структур у 16-недельных крыс. При анализе параметров потребления растворов соли или сахарозы обнаружено, что неонатальная обработка животных не только капсаицином, но и использованным растворителем этого препарата приводит к нарушению процесса приема растворов хлорида натрия, что лишает возможности дифферет;иропать долю участия капсаицина в изменениях параметров потребления.

Таким образом исследование показало, что специализ;!ровлннио формы -потребления соли и сахарозы находятся под контролем пептидных факторов, и такой контроль носит специфический характер. Так пептид холецистокинин избирательно угнетает потребление сахарозы, не изменяя потребления воды или соли, Участие холецисто-кинина в контроле потребления сладких веществ опосредовано усилением интенсивности вкусовой аф^срснтации под влиянием пептида. Установлено, что введение холецистокинина усиливает биоэлектрические реакции на все четыре использованные вкусовые вещества, но облегчающее влияние пептида осуществляется не в результате прямого воздействия на вкусовые рецепторные структуры, а опосредованно эфферентными волокнами барабанной струны при участии холи-нергических нейромедиаторных механизмов хеморецепторного аппарата языка. Нужно отметить, что трактовка экспериментальных результатов, полученных при изучении роли пептидных факторов в регуляции функций затруднена тем, что пептиды распределены широко как в ЦШ, так и в периферической нервной системе, а также в висце-

ральных органах (И.П.Ашмарин, М.Ф.Обухова, 1986; В.Е.Клуша, 1984). Холсцистокинин не является исключением, а холецистокинин-подобная иммунореактивность обнаружена в различных структурах мрзга и желудочно-кишечного тракта ( Dockray , 1976; Rehfeld а.а. , 1979; Snyder , 1980). Сопоставляя результаты электрофизиологических экспериментов и анализа параметров поведения, полученных в данном исследовании, можно представить последовательность событий, инициированных пептидом: при внутрибршинной инъекции холецистокини-на и последующем попадании пептида в кровь, он связывается с чувствительными к холецистокинину рецепторами, которые расположены, вероятно, в органах брюшной полости ( Zarbia е.а. , 1981). После активации рецепторов холецистокинином происходит возбуждение афферентных волокон в составе блуждающего нерва ( Smith е.а. , 1981; KLinov е.а. , 1982; Crawley е.а. , 1981; Lorenz, Goldmaa , 1982) и последующее возбуждение нейронов ЦНС (гипоталамуса, таламуса, моста), а также вегетативных центров парасимпатической нервной системы. Возбуждение эффекторных и постганглио-нарных нейронов может приводить к выделению ацетилхолина и активированию М-холинореактивных структур вкусового эпителия, с последующим облегчающим влиянием на вкусовой рецепторный аппарат. Эксперименты подтвердили участие М-холинореактивных структур в опосредовании угнетающего влияния холецистокинина на потребление сахарозы - системные инъекции атропина блокировали эффект этого пептида. В результате возникновения дефицита вкусовой афферентации у крыс с перерезкой вкусовых нервов влияние холецистокинина также резко снижено. Все это доказывает ведущую роль вкусовой афферентации в процессе потребления сахарозы, находящемся под контролем пептида холецистокинина; при этом усиливающее влияние пептида на афферентацию участвует в механизмах угнетения потребления сахарозы. Можно думать, что на этапе "сенсорного насыщения" (П.К.Анохин, 1968; К.В.Судаков, 1979) усиление интенсивности вкусовой афферентации и восприятия сладкого вкуса сахарозы под действием холецистокинина включается в систему торможения потребления,как необходимый согласующий фактор. При отсутствии такого облегчащего эффекта пептида в условиях блокирования М-холинорецепторов атропином или вкусового дефицита, вероятно, не наступает полного "сен-

сорного насыщения"« угнетения приема сахарозы, Можно было бы предполагать, что "сенсорное насыщение", эквивалентное угнетению потребления раствора сахарозы при высоком уровне холецистокинина в организме в приведенных опытах, адекватно элиминации под влиянием этого пептида пищевой мотивации, сформированной в результате деп-ривации. Однако торможение потребления сахарозы под влиянием холецистокинина отмечено даже у крыс, подвергнутых только водной депривации (ТЯаМЪИИде, О'СаНаеап , 1980) и, следовательно, пищевая .мотивация играет в данном случае второстепенную роль.

Если холецистокинин участвует в контроле поведения специализированного потребления сладких соединений, то пептид литорин участвует в системном регулировании другой формы потребления -"солевого аппетита". Установлено, что введение литорина специфически усиливает потребление раствора соли, не влиял на потребление сахарозы или воды. При этом контроль солевого потребления при участии литорина опосредуется избирательны;/ усилением вкусовой афферентации (возрастание ответов на соль и кислоту). При повышении уровня литорина в организме при инъекции пептида наблюдается усиление вкусовой афферентации и солевого потребления, в то же время в условиях высокого эндогенного уровня антител к литорину, полученному активной иммунизацией животных, потребление и предпочтение раствора соли воде снижено, а уровень афферентации не изменился. Механизмы участия литорина в контроле потребления соли и противоположный эффект активной иммунизации к пептиду можно объяснить следующим образом: при экзогенной инъекции, приводящей к возрастанию уровня литорина в крови и тканях, пептид активирует рецепторные клеточные структуры, чувствительные к литорину, как периферические, так и в ЦНО, в результате чего происходит "запуск" процессов, в регуляции которых данный пептид играет существенную роль, в частности, усиливается мотивация потребления соли. При активной иммунизации животных ксньюгатом литорина с альбумином в организме крыс образуется значительное количество антител к этому пептиду, которые, вероятно, связывают эндогенный литорин, инактивируют его, при этом увеличивается коллчество свободтох рецепторов для литорина, и, как следствие, ослабевает влияние пептида на функции организма - уровень "солевого аппетита" снижается.

Тот факт, что введение литорина вызывает избирательное усиление активности вкусового рецепторного аппарата, а активная иммунизация животных к пептиду не изменяла существенно уровень вкусовой афферентации, по нашему мнению, отрицает возможность существования рецепторных молекул во вкусовом эпителии, способных связываться с литорином с последующим облегчением афферентации и служит,' вероятно, дополнительным подтверждением предположения о том, что облегчающий эффект инъекцией литорина опосредован гуморальными факторами, циркулирующими в крови.

Совершенно иные механизмы лежат в основе регуляции вкусовой афферентации и потребления вкусовых растворов при участии пептида вещество-П. Быстрое проявление облегчающего влияния локальной инъекции вещества-П в область вкусового эпителия дает право предполагать существование на базальной и латеральной поверхности вкусовых клеток рецепторных структур, связывающих пептид и приводя- • щих к усилению активности вкусового аппарата. Феномен избирательного влияния только на вкусовые ответы на кислоту и хлорид натрия (но не на сахарозу или хинин) может говорить о неравномерном количественном распределении вещество-П-реактивных структур на поверхности вкусовых клеток: клетки наиболее чувствительные к хлориду натрия и кислоте содержат, вероятно, на поверхности большее количество рецепторов к пептиду, чем клетки, наиболее чувствительные к сахарозе или хинину. Кроме того селективное влияние вещества-П на вкусовые ответы полностью исключает опосредование наблюдаемого эффекта изменениями просвета сосудов, снабжающих вкусовые почки. Специфичность влияния вещества-П на активность хеморецеп-торного аппарата языка убедительно подтверждена экспериментами на животных с высоким уровнем антител к пептиду, полученному благодаря активной иммунизации конъюгатом вещества-П с альбумином: как показали опыты амплитуды импульсных вкусовых реакций на четыре вкусовые раствора были у иммунизированных крыс ниже контрольных, при этом установлена обратная зависимость между концентрацией антител к пептиду в крови и величинами вкусовых реакций. Применение другого метода создания дефицита вещества-П во вкусовом эпителии - неонатальная инъекция крысам капсаицина также привела к снижению интенсивности вкусовых реакций, что согласуется с

данными, полученными л результате активной иммунизации животных к этому пептиду. Механизмы регуляторного влияния вещества-П на вкусовой рецепторный аппарат могут иметь следующее объяснение: при введении пептида во вкусовой эпителий происходит его связывание с вещество-П-реактивными структурами базальной поверхности вкусовой клетки ( апикальная микровиллярная поверхность взаимодействует со вкусовыми стимулами) и повышение возбудимости вкусовых клеток, преимущественно реагирующих на соль и кислоты. Повышение уровня вещества-П во вкусовом эпителии и аналогичная активация вкусового рецепторного аппарата, вероятно, происходит и в случае пападания в ротовую полость "жгуч10с" соединений (пиперин и капсаи-цин горького перца, горчицы и т.п.) ( Ьа*1еэ8 , 1564), приводящих, как известно, к выбросу вещества-П из нервных терминалей ( Иаг1 ; 1982). Кроме того можно предполагать существование спонтанного выделения пептида из нервных терминалей и активации вкусовой афферентации за счет этого процесса ( Еаа.о УавиМаа ,1983). У животных с дегенерацией вещество-П содержащих волокон, вызванной неонатальной инъекцией капсаицина, спонтанный выброс пептида, вероятно, нарушен и, как результат, можно наблюдать снижение активности вкусовых рецепторов. У крыс, подвергнутых активной иммунизации, спонтанно выделяемый из нервных терминалей вкусового эпителия пептид может связываться и инактивироваться специфическими антителами, что также может приводить к снижению вкусовых реакций. Избирательное усиливающее влияние инъекции вещества-П на вкусовые реакции на хлорид натрия коррелируют с избирательным усилением потребления раствора соли после внутрибрюшинной инъекции вещества-П у бодрствующих крыс, при этом на потребление сахарозы введение вещества-П не повлияло. В тоже время в условиях высокого уровня антител и вероятной инактивации пептида этими антителами, потребление хлорида натрия, оценненое различными методами, снижено. Очевидно, что пептид вещество-П играет важную роль в механизмах регуляции чувствительности вкусового аппарата к хлориду натрия и реализации "солевого аппетита" у крыс, не принимая участия м контроле удовлетворения "углеводного аппетита".

Таким образом исследование показало, что специализированные формы потребления хлорида натрия и сахарозы избирательно контро-

лируются при участии пептидных факторов, и такой контроль потребления обусловлен усилением интенсивности вкусовой афферентации под влиянием этих пептидных факторов.

ВЛИЯНИЙ ДЕФИЦИТА ВКУСОВОЙ АФФЕРЕНТАЦИИ НА ПРОЦЕСС СПЕЦИАЛИЗИРОВАННОГО ПОТРЕБЛЕНИЯ.

В предыдущих двух частях исследования было показано, что на этапе "сенсорного насыщения" вкусовая афферентация благодаря механизмам ее регуляции участвует в контроле динамики приема пищи, а также служит основой для тонкой коррекции процесса специализированного потребления соленого хлорида натрия и сладких Сахаров. В то же время недостаток интенсивности афферентации от рецепторов ротовой полости, "сужение афферентации" приводит к изменению нормальной реализации процесса потребления (И.А.Лаптев, 1935; К.В. Шулейкина, 1987; А.И.Есаков и др., 1988; Zeigler , 1973; Miller , 1981; Jaoquln Mark , 1983). Третья часть данного исследования посвящена изучению нарушений специализированного потребления растворов веществ в условиях дефицита вкусовой афферентации .

Частичный дефицит вкусовой афферентации создавали хирургическим способом, подробно описанным в разделе "Методы и объекты исследования". Хирургическая деафферентация языка приводит к хроническому недостатку интенсивности вкусовых ощущений и дает возможность исследовать значение вкусовой афферентации для процесса потребления хлористого натрия и сладких растворов. В работе было проанализировано изменение предпочтения растворов воде в условиях 5-дневного выбора. В экспериментах были использованы три группы животных: первая группа получала доступ к 0,1 М хлориду натрия и воде, вторая группа получала доступ к 0,3 М сахарозе к воде, третья группа получала 0,001 М сахарин и воду. В каждой группе половине животных производили ложную операцию, оставшуюся половину деафферентировали. Анализ распределения животных по паттернам предпочтения с применением критерия Хи-квадрат (смотри "Методы и объекты исследования") показал, что число деафферентированных и ложнооперированных крыс, предпочитавших сахарозу воде, было

равным. В обеих группах животных, предпочитавших сахарозу было больше, чем предпочитавших воду, причем максимальное количество приходится на группу животных с поведенческим паттерном устойчивого предпочтения сахарозы. Операция не повлияла и на предпочтение сахарина воде: число деафферентированных и ложнооперированных крыс, предпочитавших сахарин было равным. В то же время средний объем раствора сахарозы, выпиваемого в течение 5 суток крысами с перерезкой вкусового нерва, вдвое превышал средний объем, выпиваемого ежедневно раствора сахарина (49,3 + 3,0 и 24,9 + 4,0 мл соответственно, Р<0,01). При анализе 5-дневного предпочтения хлорида натрия отмечено преобладание числа животных, предпочитавших соль воде, в группе деафферентированных крыс в сравнении с ложнооперированной группой (Р<0,05). В группе ложнооперированных животных число особей, предпочитавших соль и воду было рапным, а в группе оперированных животных число крыс, предпочитавших соль, преобладало.

Каким образом можно объяснить влияние деа4ферснтакии языка на предпочтение хлорида натрия при длительном 5-дневном тестировании и отсутствие таких влияний при кратковременном 15-минутном тестировании и даже в течении суточного выбора растворов соли? Очевидно, что вкусовая аф{:ерентация которая относится к нев-ральным процессам, играет наибольшую роль на начальной и меньшую .- на завершающей стадии потребления. При длительном хроническом доступе к растворам веществ (более одних суток) в контроле за потреблением начинают преобладать метаболические процессы, зависимые от химического состава потребленной жидкости, внутреннего состояния метаболизма, а также других системных факторов. Было предположено, что усиление предпочтения соли воде при 5-дневном доступе к жидкостям обусловлено именно метаболическими сдвигами и гуморальными механизмами в организме деафферентированных крыс. Кроме того, дефицит вкусовой афферентации, развивающийся у крыс в течение 8-10 дней после деафферентации языка, может, вероятно, приводить и к снижению уровня эмоциональной оценки потребленных растворов, а гедонический дефицит в свою очередь - к нарушению баланса гормонов, уровень которых изменяется в условиях дискомфорта. К таким гормонам относят прежде всего адренокортикотроп-

ный гормон (АКТГ), кортикостерон и альдостерон, которые одновременно участвуют в регуляции натриевого гомеостаэа (М.Г.Колпаков, и др., 1967; С.И.Бажан, 1977; А.А.Филаретов, 1979). Все это и определило направление дальнейшего исследования механизмов "солевого аппетита" в условиях деафферентации языка: был исследован уровень гормонов, регулирующих обмен Naja именно, альдостерона, кортикостерона, ангиотензина I и АКГГ в плазме крови деафференти-рованных крыс. Было обнаружено, что уровень кортикостерона и альдостерона в крови деаффорентированных крыс был выше, чем у ложно-оперированных Р<0,05), или ложнооперированных с дополнительной перевязкой слюнных протоков, концентрация других гормонов достоверно не менялась. Поскольку альдостерон и кортикостерон - основные гормоны, регулирующие уровень Na+b организме, полученные данные подтвердили предположение об изменении натриевого баланса у деафферентированных крыс.

Известно, что усиление потребления раствора хлорида натрия можно вызвать у интактных крыс системным введением дезоксикорти-костерона ( Denton , 1982). В то же время установлено, что высокое содержание гормонов коры надпочечников служит показателем напряженного состояния животного (А.А.Филаретов, 1979), а при эмоциональном напряжении усиливается потребление натриевых солей ( Kuta, Celeste е.а, , 1984). Таким образом очевидна тесная взаимосвязь "солевого аппетита", натриевого гомеостаэа и напряженного состояния животных. Если в состоянии напряжения происходит усиление потребления солей натрия ( Kuta Celeste е.а. , 1984), то инъекции АКТГ должны также усиливать потребление этой соли в этих же условиях. В наших экспериментах было показано, что внутрибрю-шинная инъекция М АКТГ привела к усилению потребления (доступ к одной бюретке после депривации) хлористого натрия, не изменяя при этом потребления сахарозы.

Подводя итоги экспериментов, можно сказать, что у крыс в условиях дефицита вкусовой афферентации нарушены предпочтение хлорида натрия воде и гормональная регуляция натриевого гомеостаза.

Как было ранее отмечено, вкусовые ощущения, имеют выраженную эмоциональную окраску и фиксируются в памяти животного на опреде-

ленное время. Известно, что предоставление крысам возможности опробовать растворы, содержащие вкусовые вещества, за несколько часов до повторного тестирования может как усиливать, так и тормозить процесс, последующего потребления тестируем« растворов ( Flaherty е.а. , 1979; Green, Parker , 1975; Eobortoon, Garrud , 1983). Предварительное предъявление вкусовых растзоров ослабляет неофобные реакции и изменяет протекание и угасание условного вкусового отвергания, вызванного отравлением ( Miller, Holtzoan, 1981; В.Г.Кассиль, 1990). Однако из исследований, вы- ■ полненных на крысах, с нормально функционирующим вкусовым рсцоп-торным аппаратом, не вполне ясна роль вкусовой афферентакии в регуляции объема потребления в этих условиях, так как в контроль за потреблением на начальных стадиях вовлечены хеморецепторы желудка, глотки и т.д. В следующей серии экспериментов была предпринята попытка исследовать закономерности изменения потребления растворов сахарозы, сахарина или хлорида натрия поело предварительного предъявления их животным с дефицитом вкусовой а^фюрентации. Интактных, ложнооперированных и деафферентировпшшх крыс делили на 2 группы: 1-ю группу крыс отсаживали по одной особи, деггрн-вировали от пищи и жидкости в точиние *18 часоз, по истечении срока депривации каждой крысе предоставляли бюретку с одним из вкусовых растворов и регистрировали объем выпитой за 15 минут жидкости; 2-ля группа животных в течение 2 суток до депривации получала неограниченный доступ к одному из растворов п паре с водой. Предварительное предоставление растворов применяли для ознакомления животных со вкусовым качеством жидкости и определения характера предпочтения (воды или раствора). После предварительного предъявления вкусовых растворов и воды крыс 2-й группы также деп-' ривировали на 48 часов от воды и пищи и после око!мания депривации предоставляли животным в течение 15 минут доступ к тому из трех растворов (одна бюретка), который животное предварительно опробовало. На этапе предварительного предоставления крысам раствора сахарина и воды в течение 2 суток было обнаружено, что все как ложнооперировенные (контрольные), так и -деаффсрент(грованные животные предпочитали сахарин воде, так как объем потребления раствора превышал объем выпитой воды. Ложнооперированные животные

после предварительного питья сахарина пили больше этого раствора в 15-минутном тесте, чем крысы, которых тестировали без предварительного предъявления раствора сахарина (Р<0,05). В то же время деафферентированные крысы, подвергшиеся и не подвергшиеся предварительному ознакомлению с раствором сахарина, пили одинаковое количество раствора в 15-минутном тесте (Р>0,05). Все крысы, которым предварительно предоставляли раствор сахарозы в течение 2 суток также предпочитали этот раствор воде. Ложнооперированные животные после предварительного опробования сахарозы пили в 15-минутном тесте больше этого раствора, чем крысы, которых тестировали без предварительного предоставления им сахарозы. Деафферен-тированные крысы показали такую же закономерность (Р<0,05). При предварительном предоставлении контрольным животным выбора между раствором хлорида натрия и водой было обнаружено, что крысы разделились на предпочитавших воду или соль. Было проанализировано потребление раствора соли в 15-минутном тестировании после депри-вации у крыс, предпочитавших раствор хлорида натрия и крыс всей группы. Оказалось, что предварительно обученные ложнооперированные крысы, которые обнаружили предпочтение соли воде, после деп-ривации пьют достоверно больше раствора хлорида натрия, чем животные предварительно не опробовавшие раствор (Р<0,05). У деаффе-рентированных крыс предварительное (в течение 2 суток) предоставление выбора между раствором соли и водой показало, что все оперированные животные предпочитали раствор соли. При этом обученные и необученные животные пили в 15-минутном тесте после депривации равное количество раствора соли (Р^-0,05). Интактные животные во всех опытах вели себя так же, как ложнооперированные: очевидно, что повреждение тканей во время операции не повлияло на поведение крыс и все изменения в параметрах потребления растворов обусловлены у деафферентированных животных перерезкой вкусового нерва.

Эти эксперименты выявили важную роль вкусовой афферентации в регулировании параметров процесса потребления, которые находятся под контролем механизмов памяти.

Одной из особенностей функциональной системы пищевого поведения, является поддержание относительного постоянства массы тела индивида. Для поддержания такого постоянства необходимо ежеднев-

ное пополнение организма пищей для компенсации затрат энергии. Системные механизмы, поддерживающие постоянство массы, контролируют объем поступающих в организм веществ, не допуская превышения максимального уровня потребления. Ведущая роль в невральной регуляции функциональной системы пищевого поведения принадлежит как известно, нейронам латерального и вентромедиального отделов гипоталамуса, а приема воды - осморсцепторпм продолговатого мозга и гипоталамуса. В то же время в регулирований'специализированного потребления растворов сладких углеводов нельзя не учитывать роль вкусовой афферентации. На следующем этапе исследования решали задачу о возможном участии вкусовой афферентации в системных механизмах поддержания массы тела.

Для решения такой задачи были проведены следующие эксперименты: деафферентировянных крыс разделили на 6 групп таким образом, что средняя масса тела животных в кл.-здой группе, изморенная до и после 48-часовой дс-привации, соответствовала ICO, 1ЬС, 2С0, 250, 300 и 350 граммам соответственно. Контрольными были ложноопер::ро-ванные особи соответствующей массы. После депривзпил крысам предоставляли доступ к бюретке с раствором 0,001 М сахарина и измеряли количество выпитого раствора за 15 минут от начяла питья. После статистической обработки результатов строили графическую зависимость объема выпитого раствора сахарина от массы тела животных. Анализ показал, что зависимость объема раствора сахарина от массы тела у контрольных ложносперирзванных крыс имеет форму ломаной линии: в диапазоне от ICO до 250 грамм массы объем потребления раствора не изменяется (Р>0,05), и только при троекратном различии в массе тела, (100 г и 300 г) объемы потребления отличаются вдвое (4,1 + 1,1 и 8,6 + 1,2 мл, соответственно, Р<0,05). У деаф-ферентировашшх крыс достоверное отличие объема потребления от объема, выпиваемого в группе массой 100 г, отмечено для всех других групп, причем в диапазоне от 100 до 2С0 г объем потребления увеличивается в пять раз (1,2 + 0,3 и 6,0 + 0,9, Р<0,01), а при троекратном увеличении массы (100 и 300 г) всего в 3,7 раза (1,2 + 0,3 и 4,5 ± 0,8, Р<0,01). Хотя деафферентированше крысы массой 100, 150, 23), 300 и 350 г потребляют меньше раствора сахарина, чем ложнооперированные'такой же массы, у животных массой

200 г отмечена обратная закономерность - в результате наблюдается пересечение ломаных линий графической зависимости в группах деаф-ферентированных и контрольных животных. Полученные экспериментальные результаты показали, что частичный дефицит вкусовой афферен-тации приводит к кардинальному нарушению функциональных взаимоотношений между системным контролем массы тела и регуляцией объема потребляемых сладких соединений.

Поскольку вкусовое восприятие имеет не только информационные параметры, такие, как качество и интенсивность, но и эмоциональный параметр, можно видеть, что у животных с дефицитом вкусовой афферентации и вероятным развитием гедонического дефицита существенно изменяются характеристики процесса потребления. Существуют экспериментальные доказательства того, что вкусовая афферентация и эмоциональный компонент вкусового восприятия служат основой для тонкой коррекции объема потребления веществ. Так в работах Pao (1983, 1984) было установлено, что крысы, ограниченные в пище, пьют больше раствора сахарозы и сахарина, и соли, чем контрольные животные, получавшие пищу неограниченно ( Еао , 1983, 1984). В .нашем исследовании показано, что зависимость объема потребления сахарина от массы тела у деафферентированных крыс полностью нарушена: можно думать, что частичная деафферентация языка исключает эмоциональную оценку вкуса растворов и это приводит к ошибкам в системном контроле потребления сладких веществ.

На роль эмоциональной оценки вкусового восприятия в механизмах контроля параметров потребления указывает и характер нарушений гормональной регуляции натриевого гомеостаза и факт усиления предпочтения раствора хлорида натрия воде.' Можно думать, что именно дефицит гедонического компонента восприятия у деафферентированных крыс приводит к состоянию дискомфорта и повышению уровня кортикостерона и альдостерона, так как в условиях эмоционального напряжения отмечена потеря,натрия и усиленное потребление раствора соли ( Cuta Celeste o.a. , 1984). Участие эмоционального компонента вкусового восприятия в регуляции потребления хлорида натрия подтверждает и тот факт, что инъекция АКТГ, увеличивающая уровень кортикостерона и альдостерона, приводила к избирательному усилению приема соли.

Тесно связаны также с эмоциональной оценкой вкуса потребляемой пищи и жидкости и механизмы памяти, участвующей в коррекции процесса потребления. Устранение усиливающего влияния предварительного предъявления растворов на повторное их потребление, у деаффе-рентированных животных, вероятно, можно объяснить следующим образом: повторное тестирование у контрольных крыс быстро извлекает из памяти следы оценки "приятности" вкусовых ощущений, и приводит к усиленному потреблению растворов; у крыс с дефицитом вкусовой афферентации, несмотря на способность распознавать вкусовые качества и формирование предпочтения в течение 2 дней, кратковременное 15-минутное повторное тестирование растворов, вероятно, является недостаточным по времени для извлечения из памяти следов "приятности" вкуса, в результате чего эффект предварительного тестирования у деафферентированных животных не проявляется.

Результаты, полученные в третьей части исследования, способствовали раскрытию закономерностей участия вкусовой афферентации в таких механизмах, регулирующих процесс пищевого или специализированного потребления, как эмоциональная оценка и вкусовая память. •

ЗАШНШИЕ

Исследование роли вкусовой афферентации в механизмах контроля параметров процесса пищевого и специялиз;грованного потребления выявило ряд закономерностей, важных для понимания работы всей функциональной системы пищевого поведения. lia этапе "сенсорного насыщения", вкусовая аф^ерентация включается в механизмы акцептора результата действия полезного для системы (П.К.Анохин, 1968, 1975; А.И.Есаков, 1987). Таким полезным результатом является пополнение уровня веществ в организме, сниженного в процессе энергетических затрат. С принципом полезного результата теории функциональных систем П.К.Анохина согласуются представления Кабана (1979, 1985), который считает,, что приятностный компонент сенсорной оценки пищи является знаком ее "полезности" (СаЪаяас , 1979, 1985). При этом уровень положительной эмоциональной.оценки потребляемой пищи и жидкости зависит как от центральных механизмов акцептора результата, так и от уровня афферентации от рецепторов языка и прежде

всего от вкусовой афферентации.

В данном исследовании было показано, что на всем протяжении процесса потребления пищи у животных происходит изменение интенсивности вкусовой афферентации. Именно на этапе "сенсорного насыщения" необходимо соответствие уровня интенсивности афферентации стадии процесса потребления: до начала приема пищи афферента-ция находится на среднем уровне, в процессе приема пищи - возрастает, после окончания потребления - резко снижается. Такая синхронизация уровня интенсивности вкусовой афферентации со стадией процесса потребления возможна благодаря феномену регуляции активности хеморецепторов (А.И.Есаков и сотр. 1965-1988). Исследование нейромедиаторных механизмов центробежной регуляции активности вкусового рецепторного аппарата на этапе пищевого "сенсорного насыщения" дало понимание принципа двойственности регуляции. В процессе пищевого потребления регулирование уровня вкусовой афферентации осуществляется при участии двух разнородных каналов -тормозного и облегчающего, опосредованных симпатической нервной системой и эфферентными волокнами барабанной струны, соответственно. Двойственность и разнонаправленность центробежных влияний на активность хеморецепторного аппарата нашла отражение и в молекулярных механизмах регуляции: норадренергическая нейромедиация опосредует тормозный эффект, а холинергическая - облегчающий эффект, разнонаправленно влияют на хеморецепторную активность и внутриклеточные посредники нейромедиации циклические нуклеотиды.

Механизмы центробежной и локальной регуляции активности хеморецепторного аппарата языка и уровня вкусовой афферентации обеспечивают контроль параметров специализированного потребления соленого хлорида натрия и сладких углеводов (объем потребления, выбор, предпочтение). Участвуя в пептидергических системных механизмах контроля процесса специализированного потребления вкусовая аффе-рентация настроена на необходимый уровень интенсивности, причем наблюдается большая избирательность и специфичность механизмов регуляции в зависимости от того,какие факторы вовлечены в контроль потребления. Так процесс потребления сахарозы, находящийся под контролем пептида холецистокинина, регулируется при участии облегчения вкусовой афферентации под влиянием этого пептида, а пот-

ребление растворов соли находится под контролем литорина и вещест-ва-П, также опосредованным усилением афферентации под влиянием этих пептидов. Следовательно, повышение содержания этих биологически активных соединений в организме во время приема хлорида натрия или Сахаров приводит к облегчения вкусовой афферентации и включению механизмов коррекции потребления растворов.

Тонкая встроенность вкусовой афферентации в механизмы контроля потребления ярко выражена при ее дефиците. В условиях дефицита или "сужения" афрерентаций наглядно проявляются общие для функциональных систем закономерности - нарушение параметров поведения за счет перестройки полезного для системы результата (К.В.Судаков, 1983). В наших экспериментах дефицит вкусовой афферентации приводит к изменению характеристик специализированного потребления соли и Сахаров: наблюдается усиление предпочтения раствора соли воде и увеличивается концентрация гормонои натриевого гомеостаза в крови дсафферентированных животных; наблюдается устранение усиливающего влияния предварительного предоставления растворов на их повторное потребление; нарушается зависимость объема потребления сладких веществ от массы тела. Нарушения процесса специализированного потребления, вызванные вкусовым дефицитом, выявили участие вкусовой афферентации в таких важшх механизмах регуляции потребления, как эмоциональная оценка и вкусовая память.

Исследование показало, что процесс пищевого и специализированного потребления находится под контролем системных механизмов, реализуемых при участии вкусовой-афферентации. Вкусовая афферентации обеспечивает в функциональной системе пищевого поведения тонкий модулирующий контроль параметров потребления.

ВЫВОДУ.

I. В системных механизмах пищевого поведения на этапе "сенсорного насыщения" активность вкусового рсцопторного аппарата находится под двойственным эфферентным контролем - тормозным и облегчающим. В процессе пищевого наа.'щения активация хсморсцопторного аппарата жолудка млекопитающих приводит к усилению (облегчающее центробежное влияние), а активация рецепторов рэстякония желудка - к снижению (тормозное центробежное влияние) интенсивности вкусовой аффе-

рентации.

2. Центробежные влияния на вкусовую афферентацию, вызванные активацией интероцепторов желудка, осуществляются по различным каналам и опосре,пу»тся нейромедиаторными механизмами различной природы:

а) облегчающее центробежное влияние опосредуется эфферентными волокнами барабанной струны, холинергическими нейромедиаторными механизмами, М-холинореактивными структурами вкусового эпителия, при участии цГМЗ>;

б) тормозное центробежное влияние опосредуется симпатической нервной системой, норадренергическими нейромедиаторными механизмами^ -адренореактивными структурами вкусового эпителия, при участии цА®.

3. Реализация специализированного потребления сахарозы находится под контролем пептида холецистокинина: такой контроль опосредуется механизмами облегчения холецистокинином вкусовой аффе-рентации при участии холинергического нейромедиаторного канала.

4. Специализированное потребление хлорида натрия находится под контролем пептида литорина: этот контроль опосредуется механизмами избирательной активации литорином вкусовой афферента-ции.

5. Процесс потребления раствора хлорида натрия находится под контролем пептида вещество-П: такой контроль опосредуется локальными механизмами избирательной активации веществом-П вкусовой афферентации.

6. Реализация специализированного потребления хлорида натрия существенно изменяется в условиях дефицита вкусовой афферентации. Частичная деафферентация языка избирательно усиливает предпочтение хлорида натрия воде, в то же время предпочтение сахарозы или сахарина воде не изменяется. При этом вкусовой дефицит изменяет уровень гормонов крови, регулирующих натриевый гомеостаз-альдостерона и кортикостерона.

7. В условиях дефицита вкусовой афферентации нарушены процессы вкусовой памяти, участвующей в контроле параметров потребления; деафферентация языка устраняет усиливающее влияние предварительного доступа к растворам хлорида натрия или сахарина на их пов-

торное потребление. Вкусовой дефицит нарушает зависимость объема потребления сахарина от массы тела.

8. Вкусовая афферентация в функциональной системе пищевого поведения является фактором, модулирующим восприятие параметров полезного результата: объема потребляемой пищи и жидкости и их химический состав. Изменения уровня вкусовой афферентации служит обеспечением механизмов контроля параметров результата - эмоциональной оценки и памяти. .

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Прибор для количественного анализа суммарной импульсной активности //Бюлл. эксп. биол. и мед.- 1978.-Т. 855.-С.631-632 (Соавт. К.В.Голубцов).

2. О некоторых механизмах структурно-функционального контроля вкусового рецепторного органа // Тр. XIII съезда Всес. фи-зиол. об-ва им. И.П.Павлова.- Алма-Ата.-1979.-Л.-Наука.-1979.-Т. 2.- С-. 140. (Соавт. А.И.Есаков, М.С.Бухтияров, М.А.Савушкина, Н.А.Соловьева).

3. Влияние активации рецепторов растяжения желудка на вкусовой рецепторний аппарат кошки // Деп. в ВИНИТИ,- № 2566-79. (Соавт. А.И.Есаков).

4. Облегчающие влияния активации хеморецепторов желудка, ■ чувствительных к хлориду натрия, на вкусовой рецопторнцй аппарат//, •' В тез. докл. II съезда физиол. Молд. ССР.- Кишинев.-Штиинца.-i960..'. С. 45-46. (Соавт. А.И.Есаков).

' 5. О возможной роли симпатических влияний и цА'.15 в центробежном контроле вкусового рецепторного аппарата // Физиол. журн. СССР.- 1980,- Т.66.-,712.- С. 1778-1704. (Соавт. А.И.Есаков).

о. О возможном участии сЛМР в процессах регуляции вкусовой чувствительности // Матер. III Всес. симп. "Циклические нуклео-тиды".- Канев.- 1980,-Наукова Думка,- 1980.-С.42 ( Соавт. А.И. Есаков).

7. Реле для ощущений // Знание-сила:- I980.-IW.-C. 26-27.

8. Пищевая мотивация и вкусовая рецепция // Системные механизмы мотивации.-Матер. У1 семинара "Развитие общей теории функ.

систем".-1982.-Суздаль.- 1982.-С. 204-208. (Соавт. А.И.Есаков).

9. Пептида против алкоголя // Знание-сила.- 1982.-М.-С. 13.

10. Влияние холецистокинина-панкреозимина на потребление раствора сахарозы и активность вкусового рецепторного аппарата у крыс // Журн. ВВД.-198Э.-Т.ЗЗ.- №2.- С. 381-383. (Соавт. А.И. Есаков).

11. Хищническое поведение крыс при деафферентации языка // Журн. ВВД.-1984.-Т. 3.- №2.- С. 369-371. (Соавт. А.Л.Рылов).

12. Блокирование атропином тормозного влияния холецистокини-на на питье раствора сахарозы у крыс // Журн. ВЦП,.- 1984.-Т.34.-№3.- С. 584-585.

13. Влияние деафферентации языка на потребление растворов соли и сахарозы у крыс // "Эмоции и поведение".- Матер, межд. советско-америк. павловской конф. памяти П.К.Анохина.-Москва.-

1984.-С. 112-113. (Соавт. А.И.Есаков).

14. Активирующее влияние холецистокинина-панкреозимина на вкусовой рецепторный аппарат крыс // Физиол. журнал СССР.-1985,-Т. 71.- № 10.- С. 1271-1276. (Соавт. А.И.Есаков).

15. Влияние вкусовой деафферентации на предпочтение растворов сахарозы, сахарина и соли у крыс // Журн. ВВД.- 1986.- Т.36.-№ I.- С. 150-155. (Соавт. А.И.Есаков).

16. Нейрофизиологические механизмы регуляции вкусовой аффе-рентации при голоде и насыщении // Тр. I Всес. симп. - 1985.-Тбилиси,- 1985.- Тбилиси.- 1987,- С. 89-102. (Соавт. А.И.Есаков, Н.А.Соловьева).

17. Влияние холецистокинина на процессы насыщения и вкусовой аппарат крыс // Тр. Всес. конф. по нейропептидам.- Томск,- 1985.-Томск.- 1985.- С. 116. (Соавт. А.И.Есаков).

18. Холецистокинин и субстанция Р, связь с медиаторными системами // Тез. докладов 1У Всес. конф. памяти Коштоянца.-Москва.-

1985.- Москва.- 1985,- 4.1.-С.118 (Соавт. А.И.Есаков, Н.А.Соловьева) .

19. Кортикостерон, альдостерон, ангиотензин и АКТГ в плазме крови у крыс с деафферентацией языка // Бюлл. эксп. биол. и мед. -1987.- Т. 93.- №4.- С. 392-394 (Соавт. Ю.В.Полынцев).

20. Роль вкуса в механизмах подкрепления: значение сенсор-

ного вкусового дефицита // Системные мех-мы подкрепления. Тр.УН Всес. семинара "Развитие общей теории функциональных систем".-Дагомыс.- 1986.- Москва.- 1986.- С. 18-19. (Соавт. А.И.Есаков, З.В.Любимова, П.А.Ишанов).

21. Cholecystokinin in the systemic mechanisms of taste reception // Motivation in functional systems / Ed. K.V.Suda-kov. - Gordon and Breach Science Publishers. - N.Y. , L., Tokio. "|987.^301-12>(Соавт. А.И.Есаков).

22. Влияние холецистокинина на активность вкусового аппарата и процесс потребления крысами раствора сахарозы // В кн: Ней-рогуморальные основы биологических мотиваций:- Воронеж.- 1987.-Изд-во ВГУ.- 1987.- С. 122-128. (Соапт. А.И.Есаков).

23. Серотонин и субстанция Р в механизмах регуляции активности вкусового аппарата // Тез. докл. ХУ съезда всес. физиол. об-ва им. И.П.Павлова.- Кишинев.- 1987.- Ленинград,- Наука.-1987.-Т. 2.- С. 299 (Соавт. А.И.Есаков, Н.А.Соловьева).

24. Influence of substance Р on taste receptor organ and salty solution intake in rato//Heuroocienceo.- 1988. - V.14,- N 3,-P. 321-327 (Соавт. А.И.Есаков).

25. Влияние литорина и коныогата литорина с LCA на потребление раствора хлорида натрия и активность вкусового аппарата у крыс // Тез. докл. симпозиума "Физиология пептидов".- 1988,- Ленинград.- 1988.- С. 178-179. (Соавт. И.П.Ашмарин, il.5.Обухова, А.И.Есаков, З.И.Сторожева, В.П.Голубов'.гч).

26. Специфическое изменение процесса потребления хлорида натрия и активности вкусового рецепторного аппарата у крыс в условиях введения пептида литорина и его коныогата с альбумином // лурн. ВЭД.- 1989.- Т.-39.- »4.- С. С99-703. (Соавт. .У.С.Обухова, А.И.Есаков, И.П.Ашмарин, З.И.Сторожева, В.П.'Голубович).

. 27. Влияние вкусовой деафферентации на эффект потребления вкусовых растворов после предварительного предъявления их крысам // Вопросы питания.- 1969,- Т. 39.- № 2.- С. -12-44. (Соавт. П.А. Пианов).

28. Hedonic regulation of taste preference in rots: change on deafferentation // Systems Iîeserch in Physiology.2. -"Emotions and Behavior» a Systems Approach". - ed. K.V.Sudakov.

Gordon and Breaoh. -N.Y.,L., Tokio. - 1989. - P. 227-237. (Соавт. А.И.Есаков).

29« litorin and litortn-albumln conjugate as effective regulators of body temperature in rats // Biomedical Sciences.-1990. - V.1.- И 6.-P.610-612 (Соавт. А.И.Есаков, И.П.Ашмарин, М.Ф. Обухова, З.И.Сторожева, В.П.Голубович, Н.В.Кузнецова).

30. Изменение активности вкусового рецепторного аппарата и предпочтения раствора хлорида натрия у новорожденных крыс, получавших капсаицин //Билл. эксп. биол. и мед.- 1990.- Т. 109.-№ 3.- С. 215-217.

Ггыл kvauAvuu