Влияние нейропептидов производных тафтсина на динамику формирования внутримозговой гематомы и функциональное восстановление в условиях экспериментального геморрагического инсульта у крыс

Творогова, Татьяна Васильевна

Диссертации по медицине → Нервные болезни

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.13) на тему:Влияние нейропептидов производных тафтсина на динамику формирования внутримозговой гематомы и функциональное восстановление в условиях экспериментального геморрагического инсульта у крыс

ДИССЕРТАЦИЯ

Влияние нейропептидов производных тафтсина на динамику формирования внутримозговой гематомы и функциональное восстановление в условиях экспериментального геморрагического инсульта у крыс - диссертация, тема по медицине

АВТОРЕФЕРАТ

Творогова, Татьяна Васильевна Москва 2009 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.13

Автореферат диссертации по медицине на тему Влияние нейропептидов производных тафтсина на динамику формирования внутримозговой гематомы и функциональное восстановление в условиях экспериментального геморрагического инсульта у крыс

2634

На правах рукописи

ТВОРОГОВА Татьяна Васильевна

ВЛИЯНИЕ НЕЙРОПЕПТИДОВ ПРОИЗВОДНЫХ ТАФТСИНА

НА ДИНАМИКУ ФОРМИРОВАНИЯ ВНУТРИМОЗГОВОЙ ГЕМАТОМЫ И ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ВОССТАНОВЛЕНИЕ В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ГЕМОРРАГИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА У КРЫС

/</ <'

^1.4,00.13 — «Нервные болезни»

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-2009

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному

развитию»

Научный руководитель:

член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук,

профессор Скворцовя Вероника Игоревна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Румянцева Софья Алексеевна

доктор медицинских наук,

профессор Стулин Игорь Дмитриевич

Ведущая организация:

Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф,Владимирского,

Защита состоится «.........».................................20 года в часов на заседании

диссертационного совета Д 208.072.09 при ГОУ ВПО РГМУ Росздрапа по адресу: 117997, г. Москва, ул, Островитянова, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО РГМУ Росздрава по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1.

Автореферат разослан 2009 года

Ученый секретарь диссертационного совету: кандидат медицинских наук,

профессор

росс и й с «

Г О С У Д А Р С 7 » £ Н и Л Я Б И Б Л И О Т Б К А

2 010 _

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

В современном мире геморрагический инсульт (ГИ) занимает лидирующие позиции в качестве причины смертности среди всех типов инсульта, особенно у пациентов до 55 лет (В.И.Скворцова с соавт., 2006 г).

В 85% случаях ГИ представляет собой кровоизлияние по типу внутримозговой гематомы. Тактика лечения пациентов с нетравматическими внутримозговыми кровоизлияниями (ВМК) остается предметом дискуссии, так как совершенствование методик хирургического лечения, способствуя сохранению жизни больных, не решает полностью вопроса функционального восстановления пациентов. В этой связи, особую актуальность приобретает проблема защиты и стимуляции репаративных возможностей ткани мозга в условиях катастрофического действия ВМК: механического давления с формированием масс-эффекта и нарушением локальной перфузии, ранней прогрессии гематомы, токсического действия компонентов плазмы крови и продуктов распада гемоглобина. В частности, интерес представляют нейропротекторные вещества, способные оказывать комплексное действие на каскадные процессы реализации некротической гибели нейронов и глии и процессы апоптоза, прежде всего, из группы нейропептидов, эндогенных регуляторов функций центральной нервной системы,

В последние годы выявлены интересные аспекты действия регуляторных пептидов, являющихся производными тафтсина (ТЬг-Ьу$-Рго-Аг§), в частности, трипептида - макрофагально-микроглиального ингибирующего фактора (МИФ, ТЬг-ЬуБ-Рго). З.Тз5гка с соавт, (2003 г), моделируя внутримозговую гематому при помощи введения бактериальной коллагеназы в головной мозг мышей, показали влияние МИФ на функциональное восстановление животных, объем гематомы и перифокапьного отека. Экспериментальные исследования показали, что регуляторный пептид воздействует на процессы свободно-радикального окисления и реакции активации глии.

В Институте молекулярной генетики РАН был синтезирован отечественный препарат Селанк (ТИг-Ьуз-Рго-А^-Рго-Иу-Рго), также являющийся дериватом тафтсина (Л.А.Андреева, Ф.И.Ершов, А.А.Зозуля с соавт., 2000г). По результатам экспериментальных и клинических исследований, этот гептапептид обладает широким спектром действия, включающим анксиолитическое и ноотропное, а также влияние на реакции коагуляционного каскада и выработку цитокинов. Клинические испытания у здоровых добровольцев и пациентов с различной структурой тревожных расстройств показали отсутствие у препарата побочных эффектов и его хорошую переносимость даже при длительном применении.

Учитывая структурно-функциональные сходства пептидов МИФ и Селанк, представляло интерес провести сравнительное изучение их воздействия на головной мозг в условиях экспериментального ГИ.

Цель работы

Исследовать действие нейропептидов МИФ и Селанк при экспериментальном геморрагическом инсульте у крыс.

Задачи исследования:

1. Отработать модель геморрагического инсульта у крыс путем двухэтапного введения аутологичной крови в вещество головного мозга и изучить воспроизводимость модели.

2. Изучить влияние нейропептидов МИФ и Селанк при разных способах их введения на объем гематомы на основе динамического МРТ-исследования.

3. Исследовать влияние нейропептидов МИФ и Селанк при разных способах их введения на динамику неврологических проявлений у экспериментальных крыс.

Научная новизна

Впервые при исследовании действия нейропротеидов применяли

моделирование внутримозговой гематомы у крыс путем двухэтапного введения

аутологичной крови по методу \Y.Deinsberger с соавт. (1996т), позволяющее наиболее точно отразить изменения, происходящие при развитии спонтанного внутримозгового кровоизлияния у человека.

Впервые проведено изучение действия нейропептидов МИФ и Селанк на крысах с экспериментальной внутримозговой гематомой при системном и интраназальном введении препаратов.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Отработана хорошо воспроизводимая модель геморрагического инсульта путем двухэтапного введения аутологичной крови у крыс в вещество головного мозга под контролем динамического МРТ-исследования.

Показана безопасность и эффективность нейропептидов МИФ и Селанк при применении у крыс с экспериментальной внутримозговой гематомой.

Результаты исследования являются предпосылкой для дальнейшего изучения возможностей применения нейропептидов в качестве нейропротекторной терапии при ГИ, в том числе и в клинических условиях, для ускорения восстановления нарушенных неврологических функций у пациентов со спонтанным ВМК.

Получены данные, указывающие на значимость интраназального способа введения нейропептидов, легко осуществимого в клинических условиях.

Внедрение в практику

Результаты настоящего исследования применяются при обучении студентов, интернов, ординаторов и врачей на кафедре фундаментальной и клинической неврологии ГОУ ВПО «РГМУ».

Основные положения, выносимые на защиту

1. Отработана хорошо воспроизводимая модель ГИ у крыс путем двухэтапного введения аутологичной крови в область подкорковых ядер головного мозга.

2. Установлено ускорение восстановления нарушенных неврологических функций у крыс с ГИ под влиянием нейропептидов МИФ и Селанк при их внутрибрюшиниом и интраназальном введении.

3. Показано ускорение трансформации внутримозговой гематомы и регресса перифокального отека в условиях экспериментального геморрагического инсульта у крыс под влиянием нейропептида Селанк при интраназальном его введении.

4. Выявлено нормализующее влияние нейропептидов при их интраназальном введении на изменение поведенческих реакций у крыс с экспериментальным BMIC.

Апробация работы

Апробация диссертации состоялась на совместной конференции кафедры фундаментальной и клинической неврологии и нейрохирургии ГОУ ВПО РГМУ и НИИ Инсульта РГМУ (протокол №19 от 26 июня 2009 года).

Основные результаты исследования были доложены на Международной конференции II Российский конгресс "Цереброваскулярная патология и инсульт" в г.Санкт-Петербурге 18 сентября 2007 г.

Публикации: по теме диссертации опубликованы 16 печатных работ.

Структура диссертационной работы

Работа выполнена на 127 страницах машинописного текста, включает введение, 6 основных глав, заключение, выводы и библиографический указатель. Диссертация иллюстрирована 22 рисунками и 53 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Характеристика материала и методов исследования

Объектом исследования явились половозрелые самцы нелинейных крыс (N=40). Крыс содержали в стандартных условиях при свободном доступе к воде и пище. Все манипуляции с животными одобрены этическим комитетом Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования ГОУ ВПО «РГМУ».

Моделирование внутримозговой гематомы проводили путем двухэтапного введения аутологичной крови животных в подкорковые ядра головного мозга по методу W.Deinsberger с соавт, (1996 г), с модификацией (Е.И.Гусев, В.А.Стоник, М.Ю.Мартынов с соавт., 2005 г). Манипуляции проводили под общим наркозом (хлоралгидрат 300 мкг/кг внутрибрюшинно); введение аутологичной гсрови осуществляли по координатам - 2 мм кпереди и 3 мм вправо от брэгмы на глубину 5,5 мм; забор крови проводили из бедренной артерии животного. Гепарин во вводимую кровь не добавляли. Случаев летального исхода во время операции не было. Непосредственно до момента взятия крови из бедренной вены и на всем периоде формирования внутримозговой гематомы проводили мониторирование артериального давления (АД) и частоты сердечных сокращений (ЧСС) животного.

Для исследования неврологического статуса животных использовали шкапы Menzes (S.Menzes; 1992 г) и ЛПТ (limb placing test) (De Rick; 1995 г) в модификации.

Шкала Menzes основана на градации неврологических нарушений: отсутствие симптомов (0 баллов); тоническая флексия передней противоположной лапы при подъёме за хвост (1 балл); меньшее сопротивление пассивному движению, оказываемое противоположной передней лапой, при потягивании за хвост (2 балла); движение в противоположную очагу сторону при удержании крысы за хвост (3 балла); спонтанное вращение крысы на горизонтальной поверхности в противоположную очагу сторону (4 балла).

Шкала ЛПТ включает оценку двигательного ответа передних и задних конечностей. Сначала оценивают способность животного вытягивать передние конечности при подвешивании за хвост на 10 см над поверхностью стола (нормальное вытягивание - 0 баллов, аномальная флексия - 1 балл). Затем животное помещают передними конечностями к краю стола, свешивают ему передние лапы, оценивая способность животного возвращать конечности на опору. Таким же образом оценивают функции задних конечностей животного (нормальный двигательный ответ соответствует нулю баллов, возвращение лап с латентным периодом до 2 секунд или неполное возвращение конечности - 1 баллу, отсутствие реакции - 2 баллам).

Для оценки изменений поведенческих реакций использовали поведенческие тесты «Открытое поле» и «Крестообразный лабиринт».

При тестировании в «Открытом поле» визуально фиксировали: перемещения по горизонтальной плоскости (по числу радиальных перемещений с пересечением внешней и внутренней окружности), вертикальную двигательную активность, интенсивность груминга и количество дефекаций.

В тесте «Крестообразный лабиринт» регистрировали следующие показатели количество переходов через центр лабиринта, количество стоек, груминг, количество выглядываний животных из закрытых концов лабиринта и общее время их нахождения на свету.

Для проведения магнитно-резонансной томографии использовали томограф ВюЭрес 70/30 с частотой 300МГц и напряженностью магнитного поля 7 Тесла (Центр Магнитной Томографии и Спектроскопии МГУ, под руководством профессора Ю.А.Пирогова, г.Москва). Исследование животных проводили под общей анестезией (хлоралгидрат 300 мг/кг внутрибрюшинно). Общее время исследования составило около 40 минут. Использовали режимы 1-Тпр11о1-тиШ, 2-11А11Е-Т1 в аксиальной и корональной проекциях, КАКЕ-ЗхГхЬ в аксиальной проекции и М8МЕ-Т1 в аксиальной проекции. Измерение объема патологического

очага и его составляющих выполняли в программе ImageJ (USA). Измерение объемов осуществляли по изображениям Т2 ВИ, позволяющим оценивать как саму гематому, так и перифокальный отек, с четким разграничением их между собой. Объем внутримозговой гематомы вычисляли как произведение суммы ее изображений и толщины срезов. Объем перифокального отека в каждом из анализированных изображений определяли как разность площади, образованной контуром внешней его границы, и площади изображения внутримозговой гематомы. После этого объем вычисляли по той же формуле, что и в случае самой гематомы.

Для статистического анализа использовали непарамегрические критерии Крускапа-Уоллиса (непараметрический аналог дисперсионного анализа), Ньюмена-Кейлса и Данна (непараметрические аналоги множественных сравнений), а также критерий Фридмана (непараметрический аналог дисперсионного анализа повторных измерений). Для всех тестов был принят 5% уровень значимости. Для проведения анализа использовали программы BIOSTAT и пакет программ Microsoft Oftice 2003, 2007.

Исследование проводили в три этапа: на первом этапе изучены характеристики использованной модели. Для этого животные были разделены на две группы Первая группа, контрольная (п=4), представляла собой ложнооперироваины животных. Второй группе (опытной, п=б) проводили формирование внутримозговой гематомы. Всем крысам проводили МРТ-исследование головного мозга через 24 час., 72 час. и на 10-е сутки после операции. До проведения операции, через 24 час., 72 час. и на 10-е сутки проводили оценку массы тела животных и неврологическое обследование.

На втором этапе исследования проводили оценку действия нейропептидов в условиях экспериментального ГИ при системном (внутрибрюшинном) введении. Для этого животные были разделены на три группы по пять особей в каждой. Первая группа - контрольная - в ней животным вводили физиологический раствор NaCl, крысы второй группы получали МИФ, третьей - Селанк. Препараты вводил!'

животным внутрибргошинно, начиная с 2 часов после формирования внутримозговой гематомы, далее - три раза в сутки в течение 72 часов. До операции, а также через 24 час., 72 час. и на 10-е сутки всем животным проводили оценку массы тела и неврологическое обследование. Для оценки объема гематомы и перифокального отека проводили МРТ-исследование через 24 час., 72 час. и на 10-е сутки после формирования экспериментального кровоизлияния.

Третий этап исследования проводили для оценки действия нейропептидов при иптраназальном введении. Животные были разделены на три группы по пять крыс в каждой. Животные первой (контрольной) группы получали физиологический раствор ЫаС1, во второй группе животным вводили МИФ, в третьей - Селанк.

Препараты животным вводили интраназально, начиная с 2 часов после формирования внутримозговой гематомы, далее - три раза в сутки в течение 72 часов. До операции, а также через 24 час., 72 час. и на 10-е сутки всем животным проводили оценку массы тела, неврологическое обследование, а также исследование поведенческих реакций при помощи тестов «Открытое поле» и «Крестообразный лабиринт». Для оценки объема гематомы и перифокальиого отека проводили МРТ-исследование на ранних сроках после формирования внутримозговой гематомы (через 2-4 часа), далее через 72 чае., на 10-е и 21-е сутки после операции.

Результаты и их обсуждение

Первый этап исследования

На этапе отработки методики формирования ГИ в ходе исследования получено подтверждение, что использование модели двухэтапного введения аутологичной крови в подкорковые ядра головного крыс позволяет получать хорошо воспроизводимое по локализации и объему ВМК в соответствующих отделах головного мозга. Гематомы визуализировались при МРТ-исследовании уже через 24 час. после операции, а, учитывая данные третьего этапа исследования, и через 2-4 часа после их формирования, и имели высокую степень мономорфности, рис,1.

Проведение магнитно-резонансной томографии головного мозга позволило

проследить динамику экспериментального ВМК. Наибольший объем гематомы у животных опытной группы зафиксирован через 24 час. и составил 67,6±21 мкм3 (среднее значение±95%ДИ), В дальнейшем объем гематомы уменьшался, достоверное снижение параметра, по сравнению с первыми сутками наблюдения отмечено на 10-е сутки после операции (р<0,05). Объем перифокального отека через 24 часа после операции у животных опытной группы составил 70,б±23 мкм3 (среднее значение±95%ДИ). Через 72 час. после формирования внутримозговой гематомы отмечена тенденция к нарастанию перифокального отека с дальнейшим его снижением, статистически значимым на 10-е сутки наблюдения. У ложнооперированных животных на Т2 ВИ через 24 час. после операции можно было отметить узкую полосу гипоинтенсивного сигнала, отражающую ход иглы в ткани головного мозга. На 10-е сутки после операции признаков изменения ткани головного мозга не отмечено.

Образование экспериментальной гематомы сопровождалось развитием значительного локального неврологического дефекта, который оценивали при помощи специального обследования. Использование шкал Мепгей и ЛПТ позволило выявить стойкий неврологический дефект у животных опытной группы. При это? статистически достоверные различия неврологического статуса опытной контрольной групп зафиксированы на всем периоде наблюдения: по шкале Мепг« через 24 час., 72 час. и на 10-е сутки - соответственно р=0,0001, р=0,0001, р—0,0001; по шкале ЛПТ - соответственно р=0,002, р=0,002, р=0,005 (рис.2).

Неврологические нарушения у крыс опытной группы проявлялись в ослаблении двигательной активности контралатеральных конечностей, асимметрии тонуса тела и тенденции к круговому движению в сторону гематомы. В контрольной группе ложнооперированных животных наличие неврологического дефекта в виде легкого ослабления тонуса контралатеральной передней конечности обнаружено только через 24 часа после операции у двух животных.

24 чпса 72 час« 10-е сутки

Рисунок 1. Т2-взвешенные изображения головного мозга животных опытной группы

I г 12

О N 10

опыт

ь с с;

сутки после операции

СЬ ф ф

сутки после операции

10 8

б +

2 0

контроль

с; *>

5 *

сутки после операции

контроль

1 з ю

сутки после операции

Рисунок 2. Динамика показателей неврологического статуса по шкалам Мепгея и ЛПТ в опытной и контрольной группах

Представлены 25-й и 75-й процентили, максимальное и минимальное значения.

Второй этап исследования

Изучение действия нейропептидов при системном введении показало отсутствие различий у животных в группах контроль, МИФ и Селанк в динамике гематомы и перифокального отека, а также по показателям неврологического статуса через 24 час., 72 час. и на 10-е сутки наблюдения (р>0,05; табл.1).

Таблица 1. Показатели обследования животных на первом этапе

Показатель Время после операции Х±95%ДО II Р

Контроль МИФ Селанк

Оценка по шкале Mcnzes, баллы 24 час. 7,6±2,1 8±1,75 7,4±1,9 0,208 0,901

72 час. 5,8±1,7 4,25±1,3 4,4±1,18 1,768 0,413

10-суг. 5 4,25±1,3 4±i,2 2,113 0,348

Оценка по шкале LPT, баллы 24 час. 2,2±0,4 2,5±0,5 3*0,6 3,804 0,149

72 час. 2,4±0,5 1,5±0,9 2,4*0,78 2,759 0,252

10-суг. 2±0,7 1±0,7 1,8±0,7 2,824 0,244

Объем гематомы, мкл 24 час, 83,36±44,5 5б,7±17,5 111,7*49,8 3,25 0,197

72 час. 6б,84±42,7 41,95*167,5 86,2*45,1 0,447 0,788

10-сут. 30,55±19,4 26,4±73,4 50,4*29,9 1,942 0,372

Объем отека, мкл 24 час. 90,0±52,9 67,0*14,4 105,9±29,9 2,191 0,334

72 час. 118,32±60,5 91,2*29,3 183,56*25,5 4,386 0,112

10-суг. 38,9±29,0 37,95±7,2 52,8±2б,8 1,991 0,370

Примечание: Х±95%ДО - выборочное среднее±95% доверительный интервал; Н - критер» Крускалла-Уоллиса; р - вероятность справедливости нулевой гипотезы.

Максимальный объем гематомы зафиксирован у всех животных через 24 ч после операции. Изучение динамики объема гематомы в исследуемых группа позволило выявить статистически значимое (р<0,05) снижение объема гематомы п, 10-е сутки после операции у всех животных (КФ=10,0; 8,0; 10,0; я=4,472; 4,0; 4,472 для групп контроль, МИФ и Селанк соответственно). У всех животных прослеживалось нарастание перифокального отека через 72 часа после операции, но

показатель не был статистически достоверным (р>0,05). В дальнейшем выраженность перифокального отека у животных всех экспериментальных групп уменьшалась. На 10-е сутки после формирования внутримозговой гематомы в группах контроль, МИФ и Селанк зафиксировано статистически значимое сниясени'

показателя (КФ=8,4; 8,0; 10,0; q=45025 ; 4,0; 4,472 для групп контроль, МИФ и Селанк соответственно; р<0,05).

Однако при этом обнаружено, что динамика неврологического статуса у животных в группах, получавших нейропептиды МИФ и Селанк, отличалась от таковой в контрольной группе. Так, у животных, получавших МИФ, выявлено статистически достоверное улучшение неврологического статуса по шкале ЛПТ на 10-е сутки после операции (КФ=б,615, р<0,05, ц=3,250). У животных, получавших Селанк, обнаружено достоверное уменьшение баллов по шкале МепгеБ на 10-е сутки после формирования внутримозговой гематомы (КФ=8,4; р<0,05; ц=3,354). В контрольной группе у животных показано отсутствие достоверных отличий неврологического статуса по шкалам Мепгеэ и ЛПТ через 24, 72 часа и на 10-е сутки после операции (р>0,05) (табл.2).

Таблица 2. Показатели анализа динамики неврологического восстановления в экспериментальных группах при системном введении ненропептидов

Показатель Группа КФ Р qi q2 q3

Оценка по шкале Menzes Контроль 3,181 >0,05 - - -

МИФ 6,00 >0,05 - - -

Селанк 8,4 <0,05 3,354* 2,683 0,671

Оценка по шкале ЛПТ Контроль 1,5 >0,05 - - -

МИФ 6,615 <0,05 3,250* 1,625 0,625

Селанк 5,375 >0,05 - - -

Следует подчеркнуть, что полученные данные не полностью согласуются с результатами исследования J.Wang, S.E.Tsirka, которые показали, что введение МИФ в ткань мозга через два часа после формирования внутримозговой гематомы сопровождается уменьшением объема гематомы и перифокальмого отека, а также положительной динамикой неврологического восстановления животных. Полученные различия результатов могут быть, по-видимому, связаны с

использованием разных экспериментальных моделей и способов введения препарата.

С учетом труднодоступное™ в клинических условиях внутримозгового способа введения, было решено продолжить исследование действия нейропептидов при интраназальном введении. Существуют данные о наличии транспортного пути лекарственных веществ непосредственно в головной мозг через нейроны обонятельного тракта у животных в условиях экспериментального ГИ (А.Н.Макаренко с соавт., 2004 г). Это позволяет рассматривать интраназальный способ введения нейропептидов в качестве своеобразного аналога внутримозговому введению препаратов, но легко осуществимого in vivo у человека. Введение нейропептидов на слизистую оболочку носовой полости обеспечивает их быстрое всасывание с обнаруживанием в периферической крови уже через 30 секунд.

Третий этап исследования

Результаты третьего этапа исследования позволяют говорить о существенном положительном влиянии нейропептидов при интраназальном введении на процессы неврологического восстановления у животных. Так, уже через 24 час. после формирования гематомы и на всем периоде наблюдения животные, получавшие пептиды, характеризовались менее выраженным неврологическим дефектом. При этом различия между группами отмечаются при оценке по обеим шкалам. Необходимо отметить, что в группе с применением МИФ различия проявлялись преимущественно тенденциями и не достигали статистической достоверности (р>0,05). В то же время, у животных из группы с применением Селанка неврологический дефицит, оцененный по шкале Menzes, достоверно быстрее регрессировал, чем у животных контрольной группы. Различия зафиксированы уже через 24 часа и сохранялись до конца периода наблюдения (р=0,015; 0,006; 0,007 и 0,018 через 24 час., 72 час., на 10-е и 21-е сутки после операции соответственно). Кроме того, изучение динамики неврологического статуса по шкалам Menzes и ЛПТ в каждой из исследуемых групп показало достоверное улучшение показателя

(р<0,05) на 21-е сутки после формирования внутримозговой гематомы в контрольной группе, что отражало в целом меньшую выраженность неврологического дефекта после формирования гематомы у животных в группах, получавших нейропептиды МИФ и Селанк (табл.3).

Таблица 3. Показатели неврологического обследования животных при интраназальном введении нейропептидов

Показатель Время после операции "Х±95%ДО Н Р Q'l Q'2 Q'3

Контроль МИФ Селанк

Оценки по шкале IVIcnzcs 24 час. 5,6±0,5 4±1,1 2±1,9 8,441 0,015 1,620 2,891* 1,105

72 чае. 5,2±0,4 2,25±0,9 1±1,2 10,204 0,006 2,048 3,128* 0,901

10-е еут. 4,6±0,8 2,5±2 0 9,934 0,007 1,351 3,148* 1,617

21-е сут. 2,4±0,5 1,25±1,5 0 8,044 0,018 1,269 2,434* 1,404

Оценка по шкале LPT 24 час. 1,6*0,8 1,25±0,9 0,8±0,7 1,749 0,408 - - -

72 час. 0,8±0,4 0,5±0,6 0,8±0,7 0,678 0,713 - - -

10-е сут. 1±0,б 0,5±0,6 0,2±0,4 3,804 0,149 - - -

21-е сут. 0,4±0,8 0,25±0,5 0,2±0,4 0,035 0,983 - - -

Применение: Х±95%ДО - выборочное среднее±95% доверительный интервал; Н - критерий Крускалла-Уоллиса; р - вероятность справедливости нулевой гипотезы; - критерий Дайна при сравнении данных 24 час. и 10-х суток; (22 - критерий Данна при сравнении данных 24 час. и 72 ч; С)3 -критерий Данна при сравнении данных 72 час. и 10-х суток; р - вероятность справедливости нулевой гипотезы; *р <0,05.

Анализ результатов поведенческих тестов позволил выявить общую тенденцию изменения поведения животных в условиях экспериментального ГИ. Через 24 часа после формирования ВМК у животных происходило явное снижение исследовательской активности, что проявлялось в уменьшении числа пересеченных квадратов и количества переходов в центр открытого поля, снижении вертикальной активности, уменьшения количества выглядываний животных из лабиринта. Некоторое увеличение активности отмечено через 72 часа после операции, с последующей тенденцией к снижению показателей на 10-е сутки наблюдения.

Изучение динамики показателей в экспериментальных группах позволило

обнаружить у всех животных уменьшение количества пересеченных квадратов в

«Открытом поле» через 24 час. после формирования внутримозговой гематомы, по

сравнению с исследованием до операции. При этом, только в группах, получавших пептиды, это снижение было статистически значимым (КФ= 12,359; р=0,015 и КФ=10,600; р=0,031 - для групп МИФ и Селанк соответственно). Анализируя этот факт, необходимо учитывать, что при повторном проведении тестов имеет место привыкание и адаптация животных, и это отражается уменьшением исследовательской активности крыс в «Открытом поле». Поскольку неврологический дефект у животных в группах МИФ и Селанк был менее выражен, чем в контрольной группе, эти результаты могут отражать интенсивность адаптации и лучшее привыкание к новым условиям. То есть можно предположить, что на фоне иейропептидов, несмотря на формирование гематомы, животные проявляли некоторую способность к «запоминанию» окружающей обстановки. Этим же можно объяснить наблюдавшееся значительное (р<0,05) уменьшение числа стоек у животных в группе с применением Селанка на 21-е сутки наблюдения. Выявлено отсутствие достоверного уменьшения количества вертикальных стоек животных через 24 часа после моделирования гематомы в группе с применением Селанка (р>0,05), в отличие от крыс других экспериментальных групп (р<0,05), что может указывать на менее выраженное снижение исследовательской активности в указанной группе. Показано также отсутствие достоверного снижения количестве выглядываний из закрытых концов лабиринта и стоек животных в группе с применением Селанка через 24 часа после формирования внутримозговой гематомы (р>0,05). Обнаружена тенденция к разнонаправленному изменению интенсивности груминга при исследовании в «Открытом поле» на 10-е сутки экспериментального кровоизлияния в контрольной группе и у животных, получавших пептиды. Эти факты говорят о меньшей выраженности реакции тревоги у животных, получавших пептиды, в большей степени Селанк.

В целом, результаты поведенческих тестов указывают на повышение способности к адаптации и уменьшение реакции тревоги у животных, получавших пептиды, что было более выражено в группе с применением Селанка.

Результаты MPT исследования головного мозга животных выявили интересный аспект действия изучаемых пептидов. Так, из восьми животных, у которых отмечена ранняя прогрессия гематомы, только одно (13%) было из группы Селанк, 2 (25%) - в группе МИФ, а 5 (62%) - в контрольной группе. Статистический анализ, проведенный при помощи точного критерия Фишера, показал достоверное уменьшение числа животных с ранней прогрессией гематомы в группе с применением Селанка, по сравнению с контрольной группой (р<0,05). Статистический анализ объема гематомы обнаружил отсутствие достоверных различий (р>0,05) между экспериментальными группами на первые сутки, через 72 час., на 10-е и 21-е сутки после создания экспериментального ВМК (Н= 0,491; 1,465; 0,799; 2,598 соответственно) (табл.4).

Таблица 4. Показатели данных МРТ-исследования животных экспериментальных групп при интраиазальном введении нейропетидов

Показатель Время операции Х±95%ДО, ммЗ Н Р

Контроль Миф Селанк

Объем гематомы 24 час. б8,5±47,5 47,3±32,7 45,4*16,1 0,280 0,869

72 час. 82,9±52,4 62,7±49,2 41,6±18,8 1,73! 0,421

10-сут. 33,8±10,1 Зб,б±28,2 26,5±9,1 1,3 0,522

21-е сут. 20,35±7,5 37,6±22,98 17,3±5,5 3,482 0,175

Объем отека 24 час. 16б,4±50,4 168,3±43,4 234±107,8 1,071 0,585

72 час. 146,5±40,1 127,1±46,1 201,9±99,4 1,747 0,418

10-е сут. 126,7±40,1 114,2±46,4 149±55,5 1 0,607

21-е сут. 101,0±46,0 120,4±8,6 138,6±52,7 0,884 0,643

Примечание: Х±95%ДО - выборочное среднее±95% доверительный интервал; Н - критерий Крускапла-Уоллиса; р - вероятность справедливости нулевой гипотезы; 01 - критерий Данна при сравнении групп контроль и МИФ; (^2 - критерий Дайна при сравнении групп контроль и Селанк; (23 -критерий Данна при сравнении групп МИФ и Селанк; *р<0,05.

На 21-е сутки наблюдения у всех животиых выявлено достоверное уменьшение объема гематомы, по сравнению с исследованием через 72 час. после формирования экспериментальной гематомы (р<0,05). В группе с применением Селанка достоверное уменьшение объема гематомы на 21-е сутки наблюдения (р<0,05) зафиксировано также, по сравнению с первым исследованием, что может отражать более выраженное уменьшение объема гематомы за период наблюдения. Также

показано, что в группе с применением Селанка уменьшение гематомы происходило на более ранние сроки, по сравнению с двумя другими группами (достоверное снижение объема гематомы, по сравнению с первым исследованием, отмечено уже на 10-е сутки наблюдения, р<0,05) (табл.5).

Таблица 5. Показатели анализа динамики гематомы и перифокального отека в экспериментальных группах

Показатель Группа КФ Р ql ql q3 q4 q5 q6

Объем гематомы Контроль 11,1 <0,05 1,549 - 3,486* 2,711 4,260* -

МИФ 7 <0,05 - - - - 3,578 -

Селанк 11,1 <0,05 - 2,711 - 4,260* 3,486* 1,549

Объем отека Контроль 12 <0,05 - 3,098 - 4,648 3,098 -

МИФ 9 <0,05 - 2,683 - 4,025 2,683 -

Селанк 12 <0,05 1,732 3,464 1,732 5,196 3,464 1,732

Примечание: КФ - критерий Фридмана; ql - критерий Ныомена-Кейсла при сравнении данных 24 час. и 10-х суток; q2 - критерий Ныомена-Кейсла при сравнении данных 24 час. и 72 час.; q3 - критерий Ныомена-КеПсла при сравнении данных 72 час. и 10-х суток; q4 - критерий Ныомена-Кейсла при сравнении данных 24 час. и 21-х суток; q5 - критерий Ныомена-Кейсла при сравнении данных 48 час. и 21-х суток; q6 - критерий Ныомена-Кейсла при сравнении данных 10-х и 21-х суток; р - вероятность справедливости нулевой гипотезы; *р <0,05.

Статистический анализ объема отека головного мозга показал отсутствие достоверных различий между группами (р>0,05) во всех временных точках (Н=1,414; 2,388; 1,414 и 2,394 на первые сутки, через 72 час., на 10-е и 21-е сутки после операции соответственно) (табл.4). При этом максимальный объем отека зафиксирован при первом МРТ-исследовании головного мозга животных. Далее отмечено снижение объема отека до минимальных значений. На 21-е сутки наблюдения у всех животных зафиксировано достоверное (р<0,05) уменьшение перифокального отека (табл.5). Обращает на себя внимание отсутствие нарастания отека на третьи сутки наблюдения, что отличается от данных, полученных на первом этапе эксперимента. Объяснить этот факт можно тем, что на втором этапе работы первое МРТ головного мозга животным проводили через 2-4 часа после формирования гематомы, а не через 24 часа, как на первом этапе. Возможно, зафиксировано изменение ткани, окружающей гематому, обусловленное

экстравазацией белков плазмы или изменения локальной гемодинамики в первые несколько часов кровоизлияния, что согласуется с литературными данными. Достоверное уменьшение отека окружающих гематому тканей (р<0,05) показано на 21-е сутки после операции у всех животных (табл.5), У животных в группе с применением Селанка дополнительно выявлено достоверное (р<0,05) снижение выраженности перифокального отека также на 10-е сутки после операции, что указывает на ускорение процессов регресса перифокального отека в указанной группе.

Таким образом, можно отметить, что интраназалыюе введение нейропептидов МИФ и Селанк в условиях экспериментального ГИ у крыс улучшает неврологическое восстановление животных, позитивно влияет на динамику гематомы и перифокального отека, а также повышает способность животных к адаптации и уменьшает их уровень тревоги. При этом положительные свойства больше проявляются у регуляторного пептида Селанк.

Предположительно, объяснить более выраженный нейропротекторный эффект Селанка можно, исходя из его структурных особенностей - наличия в структуре гептапептида трипептида Рго-Иу-Рго. Экспериментальные работы Института молекулярной генетики РАН на модели глобальной ишемии у крыс позволяют говорить о мощных самостоятельных нейропротекторных свойствах этого трипептида, воздействии его на выработку нейротрофических цитокинов и процессы нейрогенеза. Возможно, именно действие Рго-О1у-Рго, высвобождающегося при эизиматической деградации Селанка в ткани мозга, и усиливает позитивное действие препарата.

Вышеизложенные заключения являются основанием для дальнейшего изучения действия дериватов тафтсина, в частности Селанка, при геморрагическом инсульте. Результаты исследования являются предпосылкой для рассмотрения нового иейропротекторного препарата как кандидата для лечения больных со спонтанным

ВМК, потенциально способного улучшить восстановление нарушенных неврологических функций.

ВЫВОДЫ

1. Применение модели двухэтапного введения аутологичной крови в подкорковые ядра животного у крыс позволяет воспроизвести сопоставимые по размеру и локализации внутримозговые кровоизлияния, ассоциированные с развитием локального неврологического дефекта.

2. Системное (внутрибрюшинное) введение регуляторных пептидов МИФ и Селанк в условиях экспериментального внутримозгового кровоизлияния у крыс ассоциировано с ускорением функционального восстановления крыс при отсутствии воздействия на процессы формирования гематомы и выраженность перифокального отека мозга.

3. Интраназальное введение регуляторного пептида Селанк в условиях экспериментального внутримозгового кровоизлияния у крыс связано с достоверным (р<0,05) уменьшением случаев ранней прогрессии гематомы, по сравнению с контрольной группой.

4. Применение нейропептида Селанк интраназальио ассоциировано с ускоренным уменьшением объема экспериментальной внутримозговой гематомы и перифокального отека в условиях экспериментального внутримозгового кровоизлияния у крыс.

5. Применение нейропептида Селанк интраназально в условиях экспериментального внутримозгового кровоизлияния у крыс приводит к достоверному (р<0,05) уменьшению неврологического дефицита у крыс, по сравнению с контрольной группой, причем статистически значимые различия выявляются уже через 24 часа после формирования внутримозговой гематомы и сохраняются в течение трех недель наблюдения.

6. Результаты тестирования изменения поведенческих реакций крыс в

условиях экспериментального геморрагического инсульта указывают, что

интраназалыюе введение регуляторных пептидов МИФ и Селанк у крыс приводит к

повышению способности животных к адаптации и уменьшению реакции тревоги, что более выражено при применении Селанка.

7. Данные проведенного экспериментального исследования обнаруживают отсутствие каких-либо нежелательных побочных эффектов применения нейропептидов МИФ и Селанк при экспериментальном внутримозговом кровоизлиянии у крыс,

8, Положительное воздействие нейропептидов МИФ и Селанк на динамику функционального восстановления и параметры очага поражения вещества мозга при экспериментальном геморрагическом инсульте выявляются преимущественно при интраназальном введении препаратов.

Практические рекомендации

1. С учетом наличия разрешения к клиническому использованию препарата Селанк у больных с тревожными и другими невротическими расстройствами, отсутствия у него побочных и нежелательных эффектов, хорошей его переносимости, а также на основе полученных экспериментальных данных об эффективности Селанка при экспериментальном ГИ, целесообразно спланировать проведение клинических испытаний препарата у больных со спонтанным ВМК.

2. При проведении клинических испытаний Селанка у больных с геморрагическим инсультом необходимо включить комплекс неврологических и психологических тестов, динамическое МРТ-наблюдение.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. В.И.Скворцова, Л.В.Стаховская, Т.В.Творогова, А.И.Дубина, Л.В.Губский, Д.В. Буренчев, О.В. Поварова. Действие нейропептидов производных тафцииа (MIF, Селанк) при экспериментальном геморрагическом инсульте. // Материалы международной конференции II Российский конгресс "Цереброваскулярная патология и инсульт", г.Санкт-Петербург, 17-20 сентября 2007 г.

2. В.И.Скворцова, Д.В.Буренчев, Т.В.Творогова, О.И.Гусева, A.B. Прохоров, A.M.Смирнов, Д.А.Куприянов, Ю.А.Пирогов. Оценка сопоставимости MP-семиотики острейших внутримозговых гематом при низко- и сверхвысокопольной МРТ. // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. №9,2009г, стр. 45-50.

3. В.И.Скворцова, Т.В.Творогова, А.И.Дубина, Д.В.Буренчев, Л.В.Губский, Л.В.Стаховская, О.В.Поварова Экспериментальный геморрагический инсульт: исследование нейропептидов (МИФ, Селанк) при внутрибргашинном введении. // Журнал неврологии и психиатрии им. С .С. Корсакова №12, 2009г, стр. 22-28.

4. В.И.Скворцова, Д.В.Буренчев, Т.В.Творогова, О.И.Гусева, Л.В.Губский, Д.А.Куприяиов, Ю.А.Пирогов. Изучение особенностей мр-семиотики острых внутримозговых гематом. Эксперимент. // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. №12, 2009г, стр. 63-67.

5. В.В.Ставчанский, Л.В.Дергунова, А.Ю.Боцина, Т.В.Творогова, В.И.Скворцова, С.А.Лимборская. Исследование нейропротекторных свойств препаратов Семакс и PGP в условиях экспериментальной глобальной ишемии головного мозга крыс. // Тезисы стендовых сообщений III Российского симпозиума «Белки и пептиды», Пущино, 2007, стр. 93.

6. В.В.Ставчанский, Л.В.Дергунова, А.Ю.Боцина, Т.В.Творогова, В.И.Скворцова, С.А.Лимборская. Семакс и PGP изменяют экспрессию мРНК генов нейротрофииов и их рецепторов в гиппокампе крыс при глобальной ишемии мозга.

// IV съезд Российского общества биохимиков и молекулярных биологов, 11-15 мая 2008 г., Новосибирск, № 183, стр. 117.

7. L.Dergunova, V.Stavchanskii, A.Botsina, I.PIatonova, T.Tvorogova, E.Shaykhutdinova, V.Skvortsova , S.Limborska. Analysis of BDNF expression in rats treated with Semax and PGP under the brain experimental ischemia. // The American Journal of Human Genetics, 2004, v. 75, poster NO: 1267.

8. V.V.Stavchansky, L.V.Dergunova, A.Y.Botsina, I.A.PIatonova, T.V.Tvorogova, E.F.Shaykhutdinova, E.L.Voloshenyuk., V.I.Skvortsova, S.A .Limborska. Semax increases BDNF expression in ischemized rat brain. // European Journal of Human Genetics, 2005, v. 13, p. 364.

9. I.A.PIatonova, L.V.Dergunova, E.F.Shaykhutdinova, V.V.Stavchansky, T.V.Tvorogova, A.Y.Botsina, E.L.Voloshenyuk, V.I.Skvortsova, S.A. Limborska Semax and PGP increases BDNF expression in ischemized "rats brain". // Cerebrovascular Diseases. 2005, v. 19 (supplement 2), p. 23.

10. V.G.Dmitrieva, L.V.Dergunova, A.Y.Botsina, I.A.PIatonova, T.V.Tvorogova, E.F.Shaykhutdinova, E.V.Torshina, V.I.Skvortsova, Limborska S.A. Analysis of iNOS expression in rats under brain experimental ischemia. // European Journal of Human Genetics . 2005, v. 13, p. 365.

11. V.G.Dmitrieva, E.V.Torshina, L.V.Dergunova., T.V.Tvorogova, V.I.Skvortsova, S.A.Limborska. Analysis of MOB (TMEM 23) expression in rats under brain experimental ischemia. // European Journal of Human Genetics. 2006, V.14, suppl., P. 364.

12. V.V.Stavchansky, L.V.Dergunova, V.V.Yuzhakov, T.V.Tvorogova, V.I.Skvortsova, S.A.Limborska . Semax exerts vasotropic and neuropritective effects in experimental brain ischemia. // European Journal of Human Genetics, 2007, V.15, suppl.1, P. 183.

13. V.V.Stavchansky, L.V.Dergunova, A.B.Botsina, T.V.Tvorogova,

V.I.Skvortsova, S.A.Limborska. Neurotrophins and their receptors: mRNA expression in

ischemic brain under the treatment with neuropeptides Semax and its C-terminal tripeptide

PGP. // Annual meeting of The American Society of Human Genetics, 2007, San Diego, California. Abstractbook, P. 517, abstract 2769.

14. V.V.Stavchansky, L.V.Dergunova,. A.Y.Botsina, T.V.Tvorogova, V.I.Skvortsova, S.A. Limborska. «Effect of Semax treatment on expression of the neurotrophins and their receptors in ischemic rat hippocampus». // European Journal of Human Genetics, 2008, poster NO: 105.

15. V.V.Stavchansky, L.V.Dergunova. M.Maksimov, A.Y.Botsina, T.V.Tvorogova, V.I.Skvortsova, S.A.Limborska. «Effect of Semax and PGP on expression of Vegf the in ischemic rat brain». // European Journal of Human Genetics, 2009, V 17, suppl. 2, poster NO: 11.122, P 307.

16. V.V.Stavchansky, L.V.Dergunova, A.Y.Botsina, T.V.Tvorogova, V.I.Skvortsova, S.A.Limborska. Neurotrophins and their receptors: mRNA expression in ischemic brain under the treatment with neuropeptides Semax and its C-terminal tripeptide PGP. // Annual meeting of The American Society of Human Genetics, 2007, San Diego, California. Abstractbook, P. 517, abstract 2769.

Подписано в печать: 24.11.09

Объем: 1,5 усл. печ. я. Тираж: 100 экз. Заказ № 225 Отпечатано в типографии «Реглет» 119526, г. Москва, пр-т Вернадского, 39 (495) 363-78-90 www.reglet.ru

2008175762

Оглавление диссертации Творогова, Татьяна Васильевна :: 2009 :: Москва

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Обзор данных-литературы

1.1. Патофизиологические аспекты повреждения при спонтанном внутримозговом кровоизлиянии.

1.2. Потенциальная роль нейропептидов в осуществлении цитопротекции при формировании внутримозговой гематомы.

1.3 Моделирование геморрагического инсульта.

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Объект исследования.

2.2. Методы исследования.

2.3. Протоколы эксперимента.

Глава 3. Методика формирования внутримозговой гематомы.

Глава 4. Действие нейропептидов при системном введении.

Глава 5. Действие нейропептидов при интраназальном введении.

Глава 6. Обсуждение результатов исследования.

Введение диссертации по теме "Нервные болезни", Творогова, Татьяна Васильевна, автореферат

Актуальность проблемы

Данные эпидемиологических исследований неумолимо свидетельствуют, что геморрагический инсульт начинает занимать лидирующие позиции в качестве причины смертности среди всех типов инсульта. По данным ВОЗ, в Российской Федерации данный показатель составляет 0,93 на 1000 населения в год (В.И.Скворцова с соавт., 2006г).

Особая трагичность ситуации заключается в том, что во всем мире показатель смертности от геморрагического инсульта наиболее высок среди пациентов, находящихся в возрасте наибольшей социальной активности - до 55 лет [8, 66, 10].

Средняя стандартизованная по полу и возрасту заболеваемость инсультом в РФ колеблется от 1,5 до 8,0 на 1000 населения в год [1]. В последнее десятилетие в нашей стране отмечена угрожающая тенденция к росту доли геморрагического инсульта среди всех типов острого нарушения мозгового кровообращения. Так, по данным регистра инсульта 2001 - 2003 гг., соотношение ишемического и геморрагического инсультов составило 4:1, ранее же этот показатель составлял 5:1 [8].

Цереброваскулярные заболевания в целом наносят огромный ущерб экономике, включающий расходы на лечение, медицинскую реабилитацию и потери в сфере производства. Стоимость лечения одного больного, перенёсшего инсульт, включая стационарное лечение, медико-социальную реабилитацию и вторичную профилактику, составляет в нашей стране 127 тыс. рублей в год. Непрямые расходы на инсульт, оцениваемые по потере ВВП из-за преждевременной смертности, инвалидности и временной нетрудоспособности населения, составляют в России около 304 млрд. рублей в год. По данным ВОЗ, за период 2005-2015 гг. потеря ВВП в России из-за преждевременных смертей от сосудистых причин может составить 8,2 трлн. руб [10, 1].

Наиболее часто — в 85% случаях, геморрагический инсульт представляет собой кровоизлияние по типу внутримозговой гематомы [8]. Тактика лечения пациентов с нетравматическими внутримозговыми кровоизлияниями остается предметом споров и обсуждений врачами и учеными всего мира. Совершенствование методик хирургического лечения, в частности, развитие эндоскопических технологий эвакуации гематомы, во многом способствует решению проблемы сохранения жизни больных [21, ИЗ, 105, 184]. Однако, к сожалению, это не решает полностью проблемы функционального восстановления пациентов [59]. Лишь 20% больных, перенесших геморрагический инсульт, могут вернуться к нормальной жизнедеятельности [30].

В этой связи особую актуальность приобретает проблема защиты и стимуляции репаративных возможностей вещества мозга в условиях катастрофического действия внутримозгового кровоизлияния.

Краткий обзор вопроса исследования

Разработке препаратов, обладающих нейропротекторными свойствами, способствует усовершенствование диагностических и экспериментальных возможностей современной науки, позволившее значительно расширить представление о механизмах повреждения вещества головного мозга при геморрагическом инсульте.

Среди основных повреждающих факторов при спонтанном внутримозговом кровоизлиянии можно отметить механическое воздействие массы крови в результате разрыва сосуда с формированием масс-эффекта и нарушением перфузии зоны, окружающей гематому, раннюю прогрессию гематомы, дальнейшее токсическое действие компонентов плазмы крови и процессы, обусловленные распадом гемоглобина. Действие вышеуказанных 5 факторов приводит к активации ряда взаимосвязанных реакций, приводящих к гибели нейронов и клеток глии по типу некроза или апоптоза, и одновременно к стимуляции механизмов репарации вещества мозга и функционального восстановления организма.

Реализация некротической гибели клеток мозга происходит путем активирования ряда взаимосвязанных каскадных процессов. Основными из них являются воспалительные реакции и активация макро- и микроглии, процессы свободно-радикального окисления, эксайтотоксическое повреждение нейронов и нарушение метаболизма ионов Са2+. Учитывая разнообразие повреждающих механизмов при спонтанном внутримозговом кровоизлиянии, несомненно, представляет интерес разработка нейропротекторных препаратов, обладающих комплексным, многосторонним действием на реакции вторичного повреждения вещества мозга. Кандидатными препаратами могут являться эндогенные регуляторы функций центральной нервной системы - нейропептиды.

В последние годы выявлены интересные аспекты действия регуляторных пептидов, являющихся производными тафтсина (Thr-Lys-Pro-Arg) - фрагмента тяжелой цепи иммуноглобулина человека. В частности, внимание привлек трипептид под названием макрофагально-микроглиальный ингибирующий фактор (МИФ, Thr-Lys-Pro).

S.Tsirka с соавт. в 2003 г, моделируя внутримозговую гематому при помощи введения бактериальной коллагеназы у мышей, показали влияние МИФ при введении в ткань мозга на функциональное восстановление животных, объем гематомы перифокальный отек. Исследователи утверждают, что регуляторный пептид воздействует на процессы свободно-радикального окисления и активацию глии.

В Институте молекулярной генетики РАН был синтезирован отечественный препарат Селанк (Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro), также являющийся дериватом тафтсина (Л.А.Андреева, Ф.И.Ершов, А.А.Зозуля, М.В.Мезенцева, Н.Ф.Мясоедов, С.Б.Серединин, О.Н.Учакина, П.Н.Учакин. Анксиолитическое средство и фармацевтическая композиция анксиолитического действия. // Патент РФ № 2155065, 2000г). По результатам экспериментальных и клинических исследований, этот гептапептид обладает анксиолитическими и нейропротекторными свойствами. Клинические испытания у пациентов с различной структурой тревожных расстройств показали отсутствие побочных эффектов и хорошую переносимость препарата даже при длительном применении. Экспериментальные исследования показали, что Селанк обладает широким спектром действия, в том числе оказывает влияние на выработку цитокинов и реакции коагуляционного каскада.

Учитывая структурно-функциональные сходства пептидов МИФ и Селанк, представляет интерес их воздействие в условиях экспериментального геморрагического инсульта.

Таким образом, целью диссертационной работы явилось исследовать действие нейропептидов МИФ и Селанк при экспериментальном геморрагическом инсульте у крыс.

Для достижения поставленной цели были установлены следующие исследовательские задачи:

Объектом исследования явились половозрелые самцы нелинейных крыс (N=40). Моделирование внутримозговой гематомы проводили путем двухэтапного введения аутологичной крови животных в подкорковые ядра головного мозга по методу W.Deinsberger с соавт. (1996г). Исследование включало три этапа.

На первом этапе изучали характеристики использованной модели. Для этого животные были разделены на две группы. Первая группа (п=4), контрольная, представляла собой ложнооперированных животных. Второй группе (опытной) (п=6) проводили формирование внутримозговой гематомы. Всем крысам проводили МРТ-исследование головного мозга через 24 час., 72 час. и на 10-е сутки после операции. До проведения операции, через 24 час., 72час. и на 10-е сутки проводили оценку массы тела животных и неврологическое обследование.

На втором этапе исследования проводили оценку действия нейропептидов в условиях экспериментального геморрагического инсульта при системном (внутрибрюшинном) введении. Для этого животные были разделены на три группы. Первая группа — контрольная — в ней животным вводили физиологический раствор NaCl, крысы второй группы получали МИФ, третьей - Селанк. Препараты вводили животным внутрибрюшинно, начиная с 2 часов после формирования внутримозговой гематомы, далее -три раза в сутки в течение 72 часов. До операции, а также через 24 час., 72час. и на 10-е сутки всем животным проводили оценку массы тела и неврологическое обследование. Для оценки объема гематомы и перифокального отека проводили МРТ-исследование через 24 час., 72час. и на 10-е сутки после формирования экспериментального кровоизлияния.

Третий этап исследования проводили для оценки действия нейропептидов при интраназальном введении. Животные были разделены на три группы. Животные первой (контрольной) группы получали физиологический раствор NaCl, во второй группе животным вводили МИФ, и в третьей группе — Селанк. Препараты животным вводили интраназально, начиная с 2 часов после формирования внутримозговой гематомы, далее — три раза в сутки в течение 72 часов. До операции, а также через 24 час., 72 час. и на 10-е сутки всем животным проводили оценку массы тела, неврологическое обследование, а также исследование поведенческих реакций. Для оценки объема гематомы и перифокального отека проводили МРТ-исследование на ранних сроках после формирования внутримозговой гематомы (через 2 — 4 ч), далее через 72 час., на 10-е и 21-е сутки после операции.

Статистический анализ полученных данных проводили с использованием непараметрических критериев: Крускала-Уоллиса (для оценки различий между группами), Фридмана (для оценки динамики показателей внутри групп), критерии Ньюмена-Кейсла и Данна (для проведения множественных сравнений). Для проведения качественного анализа применяли точный критерий Фишера. Для всех тестов был принят 5% уровень значимости.

Научная новизна исследования

Впервые при исследовании действия нейропротеидов применяли моделирование внутримозговой гематомы у крыс путем двухэтапного введения аутологичной крови по методу W.Deinsberger с соавт. (1996г), позволяющее наиболее точно отразить изменения, происходящие при развитии спонтанного внутримозгового кровоизлияния у человека.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Положения, выносимые на защиту

2. Установлено ускорение восстановления нарушенных неврологических функций у крыс с ГИ под влиянием нейропептидов МИФ и Селанк при их внутрибрюшинном и интраназальном введении.

4. Выявлено нормализующее влияние нейропептидов при их интраназальном введении на изменение поведенческих реакций у крыс с экспериментальным ВМК. Структура диссертационной работы Работа выполнена на 128 страницах машинописного текста, включает введение, 6 основных глав, заключение, выводы, практические рекомендации и библиографический указатель. Диссертация иллюстрирована 22 рисунками и 53 таблицами.

Заключение диссертационного исследования на тему "Влияние нейропептидов производных тафтсина на динамику формирования внутримозговой гематомы и функциональное восстановление в условиях экспериментального геморрагического инсульта у крыс"

ВЫВОДЫ

4. Применение нейропептида Селанк интраназально ассоциировано с ускоренным уменьшением объема экспериментальной внутримозговой гематомы и перифокального отека в условиях экспериментального внутримозгового кровоизлияния у крыс.

6. Результаты тестирования изменения поведенческих реакций крыс в условиях экспериментального геморрагического инсульта указывают, что интраназальное введение регуляторных пептидов МИФ и Селанк у крыс приводит к повышению способности животных к адаптации и уменьшению реакции тревоги, что более выражено при применении Селанка.

8. Положительное воздействие нейропептидов МИФ и Селанк на динамику функционального восстановления и параметры очага поражения вещества мозга при экспериментальном геморрагическом инсульте выявляются преимущественно при интраназальном введении препаратов.

Практические рекомендации

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Творогова, Татьяна Васильевна

1. Н.Ю.Айриян, Е.И.Гусев, В.В.Киликовский, В.И.Скворцова, Л.В.Стаховская. Проблема инсульта в Российской Федерации. // Инсульт №2 2006 год

2. Л.А.Андреева, Ф.И.Ершов, А.А.Зозуля, М.В.Мезенцева, Н.Ф.Мясоедов, С.Б.Серединин, О.Н.Учакина, П.Н.Учакин. Анксиолитическое средство и фармацевтическая композиция анксиолитического действия // Патент РФ № 2155065,2000г.

3. Л.А.Андреева, Ф.И.Ершов, А.А.Зозуля, М.В.Мезенцева, Н.Ф.Мясоедов, С.Б.Серединин, О.Н.Учакина, П.Н.Учакин. Способ профилактики и коррекции иммунодефицитных состояний. // Патент РФ № 127251, 2006г.

4. Л.Ю.Алфеева, Л.А.Андреева, И.П.Ашмарин, Н.Ф.Мясоедов, Л.А.Ляпина, В.Е.Пасторова. Средство с антикоагулянтной, антитромбоцитарной, фибриндеполимеризационной и фибринолитической активностями. // Патент РФ №2290195, 2006г.

5. И.П.Ашмарин, П.В.Стукалов. Нейрохимия.// М.: Изд-во Инст Биомед химии РАМН, 1996.

6. И.П.Ашмарин, П.В.Стукалов, Н.Д.Ещенко. Биохимия мозга: СПб.: Изд-во СПб. Ун-та, 1999.

7. Геморрагический инсульт. Под редакцией В.И.Скворцовой, В.В.Крылова. Москва. «ГЭОТАР-Медиа», 2005 г.

8. О.А.Гомазков. Краткая Медицинская Энциклопедия, издательство "Советская Энциклопедия", издание второе, 1989, Москва.

9. Е.И.Гусев, В.И.Скворцова, Л.В.Стаховская., В.В.Кликовский, Н.Ю.Айриян. Эпидемиология инсульта в России. // Consilium medicum, специальный выпуск 2003. 5-8.

10. Е.И.Гусев, В.А.Стоник, М.Ю.Мартынов и др. Влияние гистохрома на динамику неврологических нарушений и МРТ-картины при экспериментальном геморрагическом инсульте // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С.Корсакова, 2005. Вып. 15, прил. Инсульт. С.61-66.

11. Т.М.Ерошенко Каскадные эффекты регуляторных пептидов. Журнал науки и техники, т.46, М., 1991.

12. А.А.Каменский, К.В.Савельева. Оксид азота и поведение. 2002; 59-71

13. М.М.Козловская, Т.П.Семенова, Н.И.Медвинская и др. Восстановление с помощью гептапетида (аналог тафтсина) когнитивных функций, нарушенных антенатальной гипоксией. Бюлл. Экспл.Биол. и мед. 1998, т.125, №3. С.284-294.

14. М.М.Козловская, Т.П.Семенова, Н.И.Медвинская. Компенсация с помощью синтетического детривата тафтсина нарушений интегративной деятельности мозга, обусловленной антенатальной гипоксией у животных. In: Hypoxia Medikal. М. 1998. 6.№2.Р.62.

15. А.Н.Колтовер, Р.П.Чайковская. Об особенностях морфогенеза некоторых видов инсульта (кровоизлияния типа геморрагического пропитывания, геморрагические инфаркты, кровиозлияния в «размягченную» ткань).

16. В.В.Лебедев, В.В.Крылов Неотложная нейрохирургия: Руководство для врачей. М., 2000.

17. S.Abilleira, J.Montaner, C.Molina, J.Monasterio, J.Castillo, Alvarez-Sabin J. Matrix metalloproteinase-9 concentration after spontaneous intracerebral hemorrhage. //J Neurosurg 2003; 99: 65-70.

18. A.I.Qureshi, D.A.Wilson, D.F.Hanley, RJ.Traystman. No evidence for an ischemic penumbra in massive experimental intracerebral hemorrhage. Neurology 1999;52:266.

19. A.I.Quresh, S.Tuhrim,, J. P. Broderick, H.H. Batjer, H.Hondo, D.F.Hanley. Spontaneous Intracerebral Hemorrhage//The New England Journal of Medicine May 10, 2001; Volume 344:1450-1460, Number 19.

20. N.Andaluz, M.Zuccarello, K.R.Wagner. Experimental animal models of intracerebral hemorrhage. //Neurosurg Clin N Am. 2002 Jul;13(3):385-93.

21. T.D.Ardizzone, A.Lu, K.R.Wagner, Y.Tang, R.Ran, F.R.Sharp. Glutamate receptor blockade attenuates glucose hypermetabolism in perihematomal brain after experimental intracerebral hemorrhage in rat. //Stroke. 2004; 35: 2587-2591.

22. B.Arvin, L.F.Neville, F.C. Barone, G.Z.Feuerstein. The role of inflammation and cytokines in brain injury. Neurosci Biobehav Rev. 1996; 20:445-452.

23. C.Auriault, M.Joseph, A.Tartar, A.Capron. Characterization and synthesis of a macrophage inhibitory peptide from the second constant domain of human immunoglobulin G. //FEBS Lett., 1983. Mar 7;153(1):11-5.

24. R.Aygul, B.Demircan, F.Erdem, H.Ulvi, A.Yildirim, F.Demirbas. Plasma values of oxidants and antioxidants in acute brain hemorrhage: role of free radicals in the development of brain injury. // Biol Trace Elem Res. 2005 Winter; 108(l-3):43-52.

25. J.P.Broderick, T.G.Brott, T.Tomsick, W.Barsan, J.Spilker. Ultra-early evaluation of intracerebral hemorrhage. //J. Neurosurg 1990; 72:195-199.

26. J.P.Broderick, T.G.Brott, J.E.Duldner, T.Tomsick, G.Huster. Volume of intracerebral hemorrhage: a powerful and easy-to-use predictor of 30-day mortality. // Stroke. 1993; 24: 987-993.

27. T.Brott, J.Broderick, R.Kothari et al. Early hemorrhage growth in patients with intracerebral hemorrhage. // Stroke 1997;28:1-5.

28. R.Bullock, J.Brock-Utne, J. van Dellen, G.Blake. Intracerebral hemorrhage in a primate model: effect on regional cerebral blood flow. // Surg Neurol 1988;29:101-107.

29. J.A.Chesney, B.A.Kondoh, B.S.Conrad, W.C.Low. Collagenase-induced intrastriatal hemorrhage in rats results in long-term locomotor deficits. Stroke. 1995;26:312-317.

30. S.H.Choi, E.H.Joe, S.U.Kim, B.K.Jin. Thrombin-induced microglial activation produces degeneration of nigral dopaminergic neurons in vivo. // Neurosci. 2003 Jul 2;23(13):5877-86.

31. K.Chu, S.W.Jeong, K.H.Jung, S.Y.Han, S.T.Lee, M.Kim, J.K.Roh. Celecoxib induces functional recovery after intracerebral hemorrhage with reduction of brain edema and perihematomal cell death. // J Cereb Blood Flow Metab. 2004 Aug;24(8):926-33.

32. D.de Wied Progr Brain Res 1987; 72: 93-108.

33. W.Deinsberger, J.Vogel, W.Kuschinsky, L.M.Auer, D.K.Boker. Experimental intracerebral hemorrhage: description of a double injection model in rats. // Neurol Res. 1996; 18: 475-477.

34. M.R.Del Bigio, H.J.Yan, R.Buist, J.Peeling. Experimental intracerebral hemorrhage in rat: magnetic resonance imaging and histopathological correlates. // Stroke. 1996; 27:2312-2320.

35. M.S.Dennis, J.P.Burn, P.A.Sandercock, J.M.Bamford, D.T.Wade, C.P.Warlow. Long-term survival after first-ever stroke: the Oxfordshire Community Stroke Project. // Stroke 1993;24:796-800.

36. M.N.Dirringer, R.E.Adams, J.E.Dunford-Shore, T.O.Videen, K.D.Yundt, W.J.Powers. Cerebral blood flow is symmetrically reduced in patients with intracerebral hemorrhage. //Neurology. 1998; 50:A338.

37. R.A.Felberg, J.C.Grotta, A.L. Shirzadi, R.Strong, P.Narayana, SJ.Hill-Felberg, Aronowski J. Cell death in experimental intracerebral hemorrhage: the "black hole" model of hemorrhagic damage. // Ann Neurol. 2002 Apr; 51(4):517-24.

38. M.Fridkin, P.Gottlieb. Tuftsin, Thr-Lys-Pro-Arg. Anatomy of an immunologically active peptide. //Mol Cell Biochem. 1981 Dec 4; 41:73-97.

39. M.Fridkin, V.A.Najjar. Tuftsin: its chemistry, biology, and clinical potential. // CritRev Biochem Mol Biol. 1989; 24(1): 1-40.

40. A.J.Gearing, P.Beckett, M.Christodoulou, M.Churchill, J.Clements, A.H.Davidson, A.H.Drummond, W.A.Galloway, R.Gilbert, J.L.Gordon. //

41. Processing of tumour necrosis factor-alpha precursor by metalloproteinases. Nature. 1994; 370:555-557.

42. R.S.Ghirnikar, Y.L.Lee, L.F.Eng. Inflammation in traumatic brain injury: role of cytokines and chemokines. // Neurochem Res. 1998;23:329-340

43. M.B.Gingrich, C.E.Junge, P.Lyuboslavsky, S.F.Traynelis. Potentiation of NMDA receptor function by the serine protease thrombin. // J. Neurosci; 20:4582-4595; 2002.

44. C.Gong, N.Boulis, J.Qian, D.E.Turner, J.T.Hoff, R.F.Keep. Intracerebral hemorrhage-induced neuronal death. //Neurosurgery. 2001. Apr; 48(4):875-82

45. C.Gong, J.T.Hoff, R.F.Keep. Acute inflammatory reaction following experimental intracerebral hemorrhage in rat. // Brain Res. 2000 Jul 14; 871(l):57-65.

46. Y.Gong, H.Tian, G.Xi, R.F.Keep, J.T.Hoff, Y.Hua. Systemic zinc protoporphyrin administration reduces intracerebral hemorrhage-induced brain injury. // Acta Neurochir Suppl. 2006;96: 232-6.

47. M.Grilli, M.Pizzi, M.Memo, P.Spano. Neuroprotection by aspirin and sodium salicylate through blockade of NF-B activation. // Science. 1996; 274:1383-1385.

48. J.Guan, S.Sun, X.Cao, Z.Chen. Experimental study on the PAR-1 expression around hemotoma following intracerebral hemorrhage in rats. // J. Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 2004; 24(3):266-8.

49. GUAN Jing-xia, SUN Sheng-gang, CAO Xue-bing, CHEN Zhi-bin, TONG E-tang. Effect of thrombin on blood brain barrier permeability and its mechanism. // Chinese Medical Journal, 2004, Vol. 117 No. 11 : 1677

50. Xi Guohua, K.R.Wagner, R.F.Keep, Ya Hua, G.M. de Courten-Myers, J.P.Broderick, T.G.Brott, J.T.Hoff. Role of Blood Clot Formation on Early Edema Development After Experimental Intracerebral Hemorrhage. // Stroke. 1998; 29:2580-2586.

51. Xi Guohua, Ya Hua, R.F. Keep, J.G.Younger, J.T. Hoff. Systemic Complement Depletion Diminishes Perihematomal Brain Edema in Rats. // Stroke. 2001; 32:162-167.

52. H.M.Fernandes, B.Gregson, S.Siddique, A.D.Mendelow. Surgery in Intracerebral Hemorrhage. The Uncertainty Continues. // Stroke. 2000; 31:2511.

53. S.L.Hickebottom, J.C.Grotta, R.Strong, L.A.Denner, J.Aronowski. Nuclear factor kappaB and cell death after experimental intracerebral hemorrhage in rats. // Stroke (1999) 30: 72-77.

54. S.Holmin, T.Mathiesen. Intracerebral administration of interleukin-lbeta and induction of inflammation, apoptosis, and vasogenic edema. // J. Neurosurg. 2000 Jan; 92(1): 108-20.

55. Y.Hua, G.Xi, R.F.Keep, J.T.Hoff. Complement activation in the brain after experimental intracerebral hemorrhage. // J. Neurosurg. 2000; 92:1016-1022.

56. Y.Hua, G.Xi, R.F.Keep, J.Xiang, J.T.Hoff. Complement C9 accumulation, membrane attack complex (MAC) formation and clusterin upregulation following intracerebral hemorrhage. J. Cereb Blood Flow Metab. 1999; 19 (suppl 1):S670.

57. F.P.Huang, G.Xi, R.F.Keep, Y.Hua, A .Nemoianu, J.T.Hoff. Brain edema after experimental intracerebral hemorrhage: role of hemoglobin degradation products. //J Neurosurg. 2002 Feb; 96(2):287-93.

58. F.P.Huang, G .Xi, R.F. Keep, Y.Hua, A.Nemoianu, J.T.Hoff. Brain edema after experimental intracerebral hemorrhage: role of hemoglobin degradation products. // J. Neurosurg. 2002 Feb; 96(2):287-93.

59. J.Castillo, A.Davalos, J.Alvarez-Sabin, J.M.Pumar, R.Leira, Y.Silva, J.Montaner, C.S.Kase. Molecular signatures of brain injury after intracerebral hemorrhage. // Neurology 2002;58:624-629.

60. J.M.Gebel, T.G.Brott, C.A.Sila, T.A.Tomsick, E.Jauch, S.Salisbury, J.Khoury, R. Miller, A.Pancioli, J.E.Duldner, E.J.Topol, J.P.Broderick. Decreased Perihematomal Edema in Thrombolysis-Related Intracerebral Hemorrhage

61. Compared With Spontaneous Intracerebral Hemorrhage. // Stroke. 2000;31:596-600.

62. KJellinger. Pathology and aetiology of ICH. In: Pia HW, Langmaid C, Zierski J, eds. Spontaneous Intracerebral Hematomas: Advances in Diagnosis and Therapy. Berlin, Germany: Springer-Verlag; 1980:131-135.

63. A Jenkins, W.L.Maxwell, D.I.Graham. Experimental intracerebral haematoma in the rat: sequential light microscopic changes. // Neuropathol Appl Neurobiol. 1989;15:477-486.

64. A.Jenkins, W.L.Maxwell, D.I.Graham. Experimental intracerebral haematoma in the rat: sequential light microscopical changes. // Neuropathol Appl Neurobiol. 1989 Sep-Oct; 15(5):477-86.

65. J.S.Kim-Han, S.J.Kopp; L.L.Dugan, M.N.Diringer. Perihematomal Mitochondrial Dysfunction After Intracerebral Hemorrhage. Stroke. 2006;37:2457.

66. J.Wang, S.E.Tsirka. Tuftsin Fragment 1-3 Is Beneficial When Delivered After the Induction of Intracerebral Hemorrhage. Stroke. 2005;36:613.

67. Y.Jiang, J.Wu, R.F.Keep, Y.Hua, J.T.Hoff, G.Xi. Hypoxia-inducible factor-1 alpha accumulation in the brain after experimental intracerebral hemorrhage. J.Cereb Blood Flow Metab. 2002 Jun;22(6):689-96.

68. Jie Shao, Guohua Xi, Ya Hua, Timothy Schallert, Barbara Felt. Intracerebral Hemorrhage in the Iron-Deficient Rat. Stroke. 2005; 36:660.

69. J.Wu, Ya Hua, R.F. Keep, Takehiro Nakamura, J.T.Hoff, Guohua Xi. Iron and Iron-Handling Proteins in the Brain After Intracerebral Hemorrhage. Stroke. 2003; 34:2964.

70. J.Wu, Y.Hua, R.F.Keep, T.Nakamura, J.T.Hoff, G.Xi. Iron and Iron-Handling Proteins in the Brain After Intracerebral Hemorrhage. Stroke. 2003;34:2964.

71. K.Jung, K.Chu, S.Jeong, S.Han, S.Lee, J.Kim, et al. HMG-CoA reductase inhibitor, atorvastatin, promotes sensorimotor recovery, suppressing acute inflammatory reaction after experimental intracerebral hemorrhage. Stroke 2004; 35: 1744—9.

72. P J.Kane, P.Modha, R.D. Strachan, et al. The effect of immunosuppression on the development of cerebral oedema in an experimental model of intracerebral hemorrhage: whole body and regional irradiation. J Neurol Neurosurg Psychiatry 1992;55:781-786.

73. T.Kanno, J.Nagata, K.Nonomura et al. New approaches in the treatment of hypertensive intracerebral hemorrhage. Stroke 1993;24:Suppl:I96-I100.

74. Z.Karwacki, P.Kowianski, J.Dziewatkowski, B.Domaradzka-Pytel, B.Ludkiewcz, S.Wojcik, O.Narkiewicz, J.Morys. Apoptosis in the course of experimetal intracerebral haemorrhage in the rat. Folia Morphol (Warsz). 2005 Nov;64(4):248-52.

75. S.Kazui, H.Naritomi, H.Yamamoto, T.Sawada, T.Yamaguchi. Enlargement of spontaneous intracerebral hemorrhage: incidence and time course. Stroke 1996;27:1783-1787.

76. S.Kazui, K.Minematsu, H.Yamamoto, T.Sawada, T.Yamaguchi. Predisposing factors to enlargement of spontaneous intracerebral hematoma. Stroke 1997; 28:2370-2375.

77. K.R.Wagner, F. R.Sharp, T.D.Ardizzone, A.Lu, J.F.Clark. Heme and Iron Metabolism: Role in Cerebral Hemorrhage. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism (2003) 23, 629-652; doi: 10.1097/01.WCB.0000073905.87928.6D

78. K.R. Wagner. Modeling Intracerebal Hemorrhage. Glutamate, Nuclear Factor-B Signaling and Cytokines. Stroke. 2007; 38:753.

79. M.Kobari, F.Gotoh, M.Tomita, N.Tanahashi, T.Shinohara, Y.Terayama, B.Mihara. Bilateral hemispheric reduction of cerebral blood volume and blood flow immediately after experimental cerebral hemorrhage in cats. Stroke. 1988; 19:991996.

80. A.H.Koeppen, A.C.Dickson, J.A.McEvoy. The cellular reactions to experimental intracerebral hemorrhage. J Neurol Sci. 1995 Dec;134 Suppl:102-112.

81. Kohji Matsushita, Wei Meng, Xiaoying Wang, Minoru Asahi, Kazuko Asahi, Michael A Moskowitz, Eng H Lo. Evidence for Apoptosis After Intracerebral Hemorrhage in Rat Striatum. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism (2000) 20, 396-404

82. H.Koller, K.Thiem, M.Siebler. Tumour necrosis factor-alpha increases intracellular Ca2+ and induces a depolarization in cultured astroglial cells. Brain. 1996;119:2021-2027.

83. D.Y.Lee, Y.J.Oh, B.K.Jin. Thrombin-activated microglia contribute to death of dopaminergic neurons in rat mesencephalic cultures: dual roles of mitogen-activated protein kinase signaling pathways. Glia. 2005 Aug 1;51(2):98-110.

84. D.Y.Lee, Y.J.Oh, B.K.Jin. Thrombin-activated microglia contribute to death of dopaminergic neurons in rat mesencephalic cultures: dual roles of mitogen-activated protein kinase signaling pathways. Glia. 2005 Aug 1;51(2):98-110.

85. K.R.Lee, A.L.Betz, R.F.Keep, T.L.Chenevert, S.Kim, J.T.Hoff. Intracerebral infusion of thrombin as a cause of brain edema. J Neurosurg. 1995;83:1045-1050.

86. K.R.Lee, A.L.Betz, S.Kim, R.F.Keep, J.T.Hoff. The role of the coagulation cascade in brain edema formation after intracerebral hemorrhage. Acta Neurochir (Wien). 1996;138:396-401.

87. K.R.Lee, A.L.Betz, S.Kim, R.F.Keep, J.T.Hoff. The role of the coagulation cascade in brain edema formation after intracerebral hemorrhage. Acta Neurochir (Wien). 1996;138(4):396-400.

88. K.R.Lee, G.P.Colon, A.L.Betz, R.F.Keep, S.Kim, J.T.Hoff. Edema from intracerebral hemorrhage: the role of thrombin. J. Neurosurg 1996;84:91-96.

89. K.R.Lee, N.Kawai, S.Kim, O.Sagher, J.T.Hoff. Mechanisms of edema formation after intracerebral hemorrhage: effects of thrombin on cerebral blood flow, blood-brain barrier permeability, and cell survival in a rat model. J.Neurosurg 1997;86:272-278.

90. R.Leira, M.Castellanos, J.Alvarez-Sabin, E.Diez-Tejedor, A.Davalos, J.Castillo. Headache in cerebral hemorrhage is associated with inflammatory markers and higher residual cavity. Headache. 2005 Oct;45(9):1236-43.

91. M.Mayne, W.Ni, H.J.Yan, M.Xue, J.B Johnston, M. R.Del Bigio, J.Peeling, C.Power. Antisense Oligodeoxynucleotide Inhibition of Tumor Necrosis Factor-Expression Is Neuroprotective After Intracerebral Hemorrhage. Stroke. 2001;32:240.

92. P.J.Magistretti, L.Pellerin. Cellular mechanisms of brain energy metabolism and their relevance to functional brain imaging. Philos Trans R Soc Lond В Biol Sci. 1999 Jul 29;354(1387):1155-63.

93. M.Mallat, R.Houlgatte, P.Brachet, A.Prochiantz (1989) Lipopolysaccharide-stimulated rat brain macrophages release NGF in vitro. DevBiol 133:309-311.

94. M.R.Del Bigio, Hui-Jin Yan, R.Buist, J.Peeling. Experimental Intracerebral Hemorrhage in Rats. Magnetic Resonance Imaging and Histopathological Correlates. Stroke. 1996; 27:2312-2320.

95. Mario N. Carvi у Nievas. Why, when, and how spontaneous intracerebral hematomas should be operated. Med Sci Monit, 2005; 11(1): RA24-31.

96. T.Masada, Y.Hua, G.Xi, G.Y.Yang, J.T.Hoff, R.F.Keep. Attenuation of intracerebral hemorrhage and thrombin-induced brain edema by overexpression of interleukin-1 receptor antagonist. J Neurosurg. 2001 Qct;95(4):680-6.

97. C.Matute, E.Alberdi, M.Domercq, F.Perez-Cerda, A.Perez-Samartin, M.V.Sanchez-Gomez. The link between excitotoxic oligodendroglial death and demyelinating diseases. Trends Neurosci. 2001 Apr;24(4):224-30.

98. P.G.Matz, P.R.Weinstein, F.R.Sharp. Heme oxygenase-1 and heat shock protein 70 induction in glia and neurons throughout rat brain after experimental intracerebral hemorrhage. Neurosurgery. 1997 Jan; 40(l):152-60

99. J.M.McCord. Iron, free radicals, and oxidative injury. Semin Hematol. 1998 Jan;35(l):5-12.

100. M.B.Gingrich, E.J.Candice, P.Lyuboslavsky, S.F.Traynelis. Potentiation of NMDA Receptor Function by the Serine Protease Thrombin. The Journal of Neuroscience, June 15, 2000, 20(12):4582-4595.

101. M. B.Gingrich, C.E.Junge, P.Lyuboslavsky, S.F.Traynelis. Potentiation of NMDA Receptor Function by the Serine Protease Thrombin. The Journal of Neuroscience, June 15, 2000, 20(12):4582-4595.

102. M.Xue, M.R.Del Bigio. Intracortical Hemorrhage Injury in Rats. Relationship Between Blood Fractions and Brain Cell Death. Stroke. 2000;31:1721.

103. S.Mun-Bryce, F.O.Kroh, J.White, G.A.Rosenberg. Brain lactate and pH dissociation in edema: 1H- and 31P-NMR in collagenase-induced hemorrhage in rats. Am J Physiol. 1993 Sep;265.

104. M. A.Munoz-Fernandez, M.Fresno. The role of tumour necrosis factor, interleukin 6, interferon-gamma and inducible nitric oxide synthase in the development and pathology of the nervous system. Prog Neurobiol. 1998;56:307-340.

105. M.A.Munoz-Fernandez, M.Fresno. The role of tumour necrosis factor, interleukin 6, interferon-gamma and inducible nitric oxide synthase in the development and pathology of the nervous system. Prog Neurobiol. 1998 Oct; 56(3):307-40.

106. T.Nakamura, R.F.Keep, Y.Hua, J.T.Hoff, G.Xi. Oxidative DNA injury after experimental intracerebral hemorrhage. Brain Res. 2005 Mar 28;1039(l-2):30-6.

107. T.Nakamura, R.F.Keep, Y.Hua, S.Nagao, J.T.Hoff, G.Xi. Iron-induced oxidative brain injury after experimental intracerebral hemorrhage. Acta Neurochir Suppl. 2006;96:194-8.

108. T.Nakamura, R.F.Keep, Y.Hua, T.Schallert, J.T.Hoff, G.Xi. Deferoxamine-induced attenuation of brain edema and neurological deficits in a rat model of intracerebral hemorrhage. J.Neurosurg. 2004 Apr; 100(4):672-8.

109. F.P.Nath, A.Jenkins, A.D.Mendelow, D.I.Graham, G.M.Teasdale. Early hemodynamic changes in experimental intracerebral hemorrhage. J.Neurosurg 1986;65:697-703.

110. F.P.Nath, P.T.Kelly, A.Jenkins, A.D.Mendelow, D.I.Graham, G.M.Teasdale. Effects of experimental intracerebral hemorrhage on blood flow, capillary permeability, and histochemistry. J Neurosurg 1987;66:555-562.

111. F.P.Nath, P.T.Kelly, A Jenkins, A.D.Mendelow, D.I.Graham, G.M.Teasdale. Effects of experimental intracerebral hemorrhage on blood flow, capillary permeability, and histochemistry. J Neurosurg 1987;66:555-562.

112. F.P.Nath, P.T.Kelly, A.Jenkins, A.D.Mendelow, D.I.Graham, G.M.Teasdale. Effects of experimental intracerebral hemorrhage on blood flow, capillary permeability, and histochemistry. J Neurosurg. 1987 Apr;66(4):555-62.

113. J.D.Olson. Mechanisms of homeostasis: effect on intracerebral hemorrhage. Stroke 1993; 24:Suppl:1109-1114.

114. W.Parks, C.Wilson, Y.Lopez-Boado. Matrix metalloproteinases as modulators of inflammation and innate immunity. Nat Rev Immunol 2004; 4: 617-29.

115. P.D.Schellinger, J.B.Fiebach, K.Hoffmann, K.Becker, B.Orakcioglu, R.Kollmar, E.Jiittler, P.Schramm, S.Schwab, K.Sartor, W.Hacke. Is There a Perihemorrhagic Penumbra? Stroke MRI in Intracerebral Hemorrhage.Stroke. 2003; 34:1674.

116. C.Power, S.Henry, M.R.Del Bigio, P.H.Larsen, D.Corbett, Y.Imai, V.W.Yong, J.Peeling. Intracerebral hemorrhage induces macrophage activation and matrix metalloproteinases. Ann Neurol. 2003 Jun;53(6):731-42.

117. Z.H.Qin, Y.Wang, M.Nakai, T.N.Chase. Nuclear factor-kappa В contributes to excitotoxin-induced apoptosis in rat striatum. Mol Pharmacol. 1998;53:33-42.

118. A.I.Qureshi, Z.Ali, M.F.Suri, A.Shuaib, G.Baker, K.Todd, L.R.Guterman, L.N.Hopkins. Extracellular glutamate and other amino acids in experimental intracerebral hemorrhage: an in vivo microdialysis study. Crit Care Med. 2003; 31: 1482-1489.

119. R.F.Regan; S.S.Panter. Hemoglobin potentiates excitotoxic injury in cortical cell culture. Journal of neurotrauma, (1996 Apr) Vol. 13, No. 4, pp. 223-31.

120. R.F.Regan, S.S.Panter. Neurotoxicity of hemoglobin in cortical cell culture. Neurosci Lett. 1993 Apr 30;153(2):219-22.

121. D.S.Robbins, Y.Shirazi, B.E.Drysdale, A.Lieberman, H.S.Shin, M.L.Shin. Production of cytotoxic factor for oligodendrocytes by stimulated astrocytes. J Immunol. 1987;139:2593-2597.

122. A.D.Rogove, S.E.Tsirka. Neurotoxic responses by microglia elicited by excitotoxic injury in the mouse hippocampus. Curr Biol. 1998 Jan 1;8(1): 19-25.

123. A.H.Ropper, N.T.Zervas. Cerebral blood flow after experimental basal ganglia hemorrhage. Ann Neurol 11: 266-271 (1982).

124. A.H.Ropper, R.B.King. Intracranial pressure monitoring in comatose patients with cerebral hemorrhage. Arch Neurol. 1984; 41: 725-728.

125. A.H.Ropper, N.T.Zervas. Cerebral blood flow after experimental basal ganglia hemorrhage. Ann Neurol. 1982; 2:266-271.

126. A.D.Rosen, N.V.Frumin. Focal epileptogenesis after intracortical hemoglobin injection. Experimental Neurology. Vol. 66, Nov. 79(66): 277—284.

127. G.A.Rosenberg, S.Mun-Bryce, M.Wesley, M.Kornfeld. Collagenase-induced intracerebral hemorrhage in rats. Stroke. 1990;21:801-807.

128. G.A.Rosenberg, M.Navratil. Metalloproteinase inhibition blocks edema in intracerebral hemorrhage in the rat. Neurology 1997;48:921-926.

129. Sadrzadeh, M.H.Sayed; K. D.Anderson,; P.S.Scott; P.E.Hallaway, J.W.Eaton. Hemoglobin potentiates central nervous system damage. J Clin (1987), 79(2), 6624.

130. E.J.Sinar, A.D.Mendelow, D.I.Graham, G.M.Teasdale. Experimental intracerebral hemorrhage: effects of a temporary mass lesion. J.Neurosurg. 1987; 66:568-576.

131. D.I.Sinn, S.T.Lee, K.Chu, K.H.Jung, E.C.Song, J.M.Kim, D.K.Park, M.Kim, J.K.Roh. Combined neuroprotective effects of celecoxib and memantine in experimental intracerebral hemorrhage. Neurosci Lett. 2006 Nov 21.

132. S.Elkabes, E. M. DiCicco-Bloom, I.B.Black. Brain microglia/macrophages express neurotrophins that selectively regulate microglial proliferation and function. The Journal ofNeuroscience, April 15, 1996, 76(8):2508-252.1.

133. S.L.Hickenbottom, J.C.Grotta, R.Strong, L.A.Denner, J.Aronowski. Nuclear Factor-B and Cell Death After Experimental Intracerebral Hemorrhage in Rats. Stroke. 1999; 30:2472-2478.

134. J.Suzuki, T.Ebina. Sequential changes in tissue surrounding ICH. In: Pia HW, Longmaid C, Zierski J, eds. Spontaneous Intracerebral Hematomas: Advances in Diagnosis and Therapy. Berlin, Germany: Springer; 1980:121—128.

135. J.Suzuki, T.Ebina. Sequential changes in tissue surrounding ICH. In: Pia HW, Longmaid C, Zierski J, eds. Spontaneous Intracerebral Hematomas: Advances in Diagnosis and Therapy. Berlin, Germany: Springer; 1980:121-128.

136. A.Szklarczyk, J.Lapinska, M.Rylski, R.McKay, L.Kaczmarek. Matrix metalloproteinase-9 undergoes expression and activation during dendritic remodeling in adult hippocampus. J Neurosci 2002; 22: 920-30.

137. T.Kitaoka, Y.Hua, Guohua Xi, J.T.Hoff, R.F.Keep. Delayed Argatroban Treatment Reduces Edema in a Rat Model of Intracerebral Hemorrhage. Stroke. 2002; 33:3012.

138. Y.Tang, A.Lu, B.Aronow, K.R.Wagner, F.R.Sharp. Brain genomic responses to ischemic stroke, intracerebral hemorrhage, kainate seizures, hypoglycemia and hypoxia. Europ J Neurosci (2002) 15: 1937-1952.

139. Y.P.Tang, D.F.Cai, J.Liu. Research on acting mechanism of rhubarb on aquaporin-4 in rats with blood-brain barrier injury after acute cerebral hemorrhage. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 2006 Feb;26(2): 152-6.

140. J.L.Tchelingerian, J.Quinonero, J.Booss, C.Jacque. Localization of TNF alpha and IL-1 alpha immunoreactivities in striatal neurons after surgical injury to the hippocampus. Neuron. 1993;10:213-224

141. C.P.Turner, M.Bergeron, P.Matz, A.Zegna; L.J.Noble, S.S.Panter, F.R.Sharp, Heme oxygenase-1 is induced in glia throughout brain by subarachnoidhemoglobin. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism (1998), 18(3), 257273.

142. K.R.Wagner, G.Xi, Y.Hua, G.M.de Courten-Myers, J.P.Broderick, T.G.Brott. Clot retraction contributes to early perihematomal edema volumes following intracerebral hemorrhage. Soc Neurosci Abstr. 1997;23:1921.

143. K.R.Wagner, G.Xi, Y.Hua, et al. Lobar intracerebral hemorrhage model in pigs : rapid edema development in perihematoma white matter. Stroke 1996;27:490-497.

144. K.R.Wagner, G.Xi, Y.Hua, M.Kleinholz, G.M.de Courten-Myers, R.E.Myers. Early metabolic alterations in edematous perihematomal brain regions following experimental intracerebral hemorrhage. J Neurosurg(1998) 88: 1058-1065.

145. J. Wang, S.E.Tsirka. Neuroprotection by inhibition of matrix metalloproteinases in a mouse model of intracerebral haemorrhage. Brain. 2005 Jul; 128(Pt 7): 1622-33. Epub 2005 Mar 30.

146. R.H.Wenger. Cellular adaptation to hypoxia: 02-sensing protein hydroxylases, hypoxia-inducible transcription factors, and 02-regulated gene expression. FASEB J. 2002 Aug; 16(10):1151-62.

147. H.Wisniewski. The pathogenesis of some cases of cerebral hemorrhage: a morphological study of brain distant from the hemorrhage. Acta Med Pol. 1961; 2:379-390.

148. J.Wu, Y.Hua, R.F.Keep, T.Schallert, J.T.Hoff, G.Xi. Oxidative brain injury from extravasated erythrocytes after intracerebral hemorrhage. Brain Res. 2002 Oct 25; 953(l-2):45-52.

149. G.Xi, Y.Hua, R.F.Keep, J.G.Younger, J.T.Hoff. Systemic complement depletion diminishes perihematomal brain edema in rats. Stroke. 2001 Jan; 32(l):162-7.

150. G.Xi, R.F.Keep, J.T.Hoff. Erythrocytes and delayed brain edema formation following intracerebral hemorrhage in rats. J Neurosurg. 1998 Dec; 89(6):991 -6.

151. G.Xi, R.F.Keep, J.T.Hoff. Pathophysiology of brain edema formation. Neurosurg ClinNAm. 2002 Jul; 13(3):371-83.

152. G.Xi, K.R.Wagner, F.R.Keep et al. Role of blood clot formation on early edema development after experimental intracerebral hemorrhage. Stroke 1998; 29:25802586.

153. Xiaoying Wang, Tatsuro Mori, Toshihisa Sumii, Eng H. Lo. Hemoglobin-Induced Cytotoxicity in Rat Cerebral Cortical Neurons. Caspase Activation and Oxidative Stress. Stroke. 2002; 33:1882.

154. M. Xue, M.R.Del Bigio. Intracerebral injection of autologous whole blood in rats: time course of inflammation and cell death. Neurosci Lett. 2000 Apr 14; 283(3):230-2.

155. Ya Hua, T.Schallert, R.F. Keep, J.Wu, J.T.Hoff, G.Xi. Behavioral Tests After Intracerebral Hemorrhage in the Rat. Stroke. 2002; 33: 2478.

156. G.Y.Yang, A.L.Betz, T.L.Chenevert, J.A.Brunberg, J.T.Hoff. Experimental intracerebral hemorrhage : relationship between brain edema, blood flow, and blood-brain barrier permeability in rats. J Neurosurg 1994; 81:93—102.

157. Ye Gong, Ya Hua, R.F.Keep, J.T.Hoff, G.Xi. Intracerebral Hemorrhage. Effects of Aging on Brain Edema and Neurological Deficits. Stroke. 2004; 35:2571.

158. A.R.Zazulia, M.N.Diringer, C.P.Derdeyn, W.J.Powers. Progression of mass effect after intracerebral hemorrhage. Stroke 30: 1167—1173 (1999).

159. J.Zhang, C.A.Piantadosi. Mitochondrial oxidative stress after carbon monoxide hypoxia in the rat brain. J Clin Invest. 1992 Oct; 90(4): 1193-9.

160. Y.Zhang, J.C.Feng, J.Wu, Y.P.Ge, W.H.Zhang, L.H.Hu, W.Han. Protective effects of hirudin on acute experimental intracerebral hemorrhage. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2006 Jan; 3 l(l):69-72. , ■

161. Z.Zhang, M.Chopp. Vascular endothelial growth factor and angiopoietins in focal cerebral ischemia. Trends Cardiovasc Med. 2002 Feb; 12(2):62-6.

Оглавление диссертации Творогова, Татьяна Васильевна :: 2009 :: Москва

Введение диссертации по теме "Нервные болезни", Творогова, Татьяна Васильевна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Творогова, Татьяна Васильевна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций