Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Влияние мембраностабилизирующих веществ на химический канцерогенез и уровни иммунных комплексов

РОССИЙСКАЯ АКАДШЯ НШ

Томский кзупннй пентр Научно-иселедомтеяьский ипегиту? онкологии

На правах руаотасл

КЛИМОВ Игорь Александрович

ВЛИЯНИЕ МЕШ>АКХТШЯИЗЙРУЩИХ вщЕетв НА ХИМИЧЕСКИЙ КАНЦЕРОРгЯЕЗ И УРОВНИ ИМНУйНЫХ КОМПШСОВ

Ï4.00.Î4— онкология

; . ■ •• АВТОРЕФЕРАТ ... : цяссортзнии на соисканмэ ученой «епвни какдцда^а wegistнеких наук

Томск - 1992

Работа выполнена на базе Кемеровского государственного медишкского института. Новосибирского института биооргаки-ческой химии СО РАН.

Научные руководители:

доктор медидакских наук, профессор Б.М.Клячкин,

кандидат ыедиданских наук А.Н.Глушков

О ф и I я а л ь н 'н е- оппоненты:

доктор мэдипинских каук, профессор В.Д.Подопяекии

кандидат кедипииских наук, с.н.с. С.Н.Удиншв

Ведущее научное учреждение: МНИОИ ш. П.А.Гериена

Защита состоится ___Л-С СК^И_ 1992 г.

на заседании спегаализировакного ученого совета К 001.34.01 по защите кандидатских диссертаций в Институте онкологии Томского научного пентра СО РАН по адресу: 634001, г.Томск, пер. Кооперативный, 5

С -диссерташей можно ознакомиться в библиотеке Томского научного центра, института онкологии (X) РАН.

Автореферат разослан ¿УС^-р^А.^ 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета, . какглдат медишнскиг наук Н.Д.Киселева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

ГЛ' ^ ^ Актуальность проблемы

Образование сывороточных факторов, блокирующих иммунное отторжение опухоли, является важным звеном сложного и противоречивого взаимодействия "опухоль - организм" (Васильев Н.В., Плотников ii.il., 1987). Известно, что шркулирущиэ иммунные комплексы (ЦИК) играют веду:цуп роль в блокаде противоопухолевых штотокси-ческих реакций {Костржевская Е.Г., 1985).

Анализ литературных данных позволил Клячкину Б.М. с соавторами (1980, 1982) сформулировать гипотезу о механизме образования блокирующих факторов, с;ть которой состоит в следующем: дестабилизация клеточных мембран и повышение активности протео-литичзских ферментов в опухоли приводит к расщеплении противс • опухолевых антител на фрашенты и к усилению "вымывания" опухолевых антигенов, в межклеточное пространство. В циркуляции опухолевые антигены, противоопухолевые антитела, их ^патенты и анти-имыуноглобулины образуют иммунные комплексы. Взаимодействуя с ' рецепторами иммунсгиг с одной сторона и с поверхностными антигенами опухолевых клеток с другой, ВДК блокируют этап распознавания в штотоксических реакциях клеток-киллеров. Поэто!.!;' в комплексе актиблокирующей терапии нгпяду с элиминацией ЦИК путем обмена плазмы или иымуносорбпии было предложено использовать мембраностабилизируютдие вещества (МСЗ) и ингибиторы протеаз.

Последующие исследования подтвердили некоторые положения этой гипотезы. В то же время многкр вопросы остались открытыми. В частности, неизвестно, как обязуются ЦИК при химическом канцерогенезе, особенно в латентный период, влияют ли МСВ на.возникновение химически индуцируемых опухолей и изменяется ли при

г

этои динамика образования ЦИК Решение этих проблем представляется актуальным в связи с тем, что модели с индуцированиями опухолями более адекватны, чем с перевивными. Тем более, что индукторы и промоторы канцерогенеза обладают свойством дестабилизировать клеточные мембрг.гш (Банников Г.А., Любимов A.B., 1986; Турусов B.C., Енирельман А.й., 1986) и можно ожидать изменений в содержании ЦИК еще до появления клинически определяемой опухоли .

Для изучения ЦИК в г-ссперименте и клинике применяются различнее способы. Наиболее чувствительным является измерение количества иммуноглобулинов.(3g ) в составе ЦИК радиоиммунометричес-кям и 55мму5.^ферментным методами. Однако, з большинстве из них определяются только отдельные классы или подклассы Tg , в то же вреет изве-.тно. что и у живогньпе-опухоленосителей (AlcT)onaieiTL et dl, 1984) и у больных раком (Fust G.eiai, 1981) может наблюдаться превалирование или отсутствие того или иного изо-типа. Поэтому разработка универсального метода количественного иммуноаналкза в составе ПИК у'лабораторных животных - необходимый этап в решении Еопросор, связанных с изучением блокирующих факторов.

Цель и задачи исследования Целью настоящей работы явилось исследование влияния мем-браностабилизирующих веществ на процессы индукпии и развития опухолей^ а также на динамики ЦИК при химическом какиепогенезе. В связи с этим решались следующие задачи: I. Определить влияние нестероидных противовоспалительных срадс^в (кеф енаминат натрия, оксиферрискарбон, реопирин, дела-гия) на возникновение и рост опухолей, индуцированных 20-мегил-

холантреном (MX) у мышей инбредных линий: ВАЬВ/с, C57BI/6, C3H/f.

2. Разработать модификацию иммуноферментяого метода определения всех изотипов, адекватную для изучения ЩИ у экспериментальных животных.

3. Изучить с помощью данного метода динамику ЦИК при хими-

о

ческом (MX) каншрогенезе у мышей.

4. Исследовать влияние испытуемых мембраностабилизирущих веществ (МСВ) на образование ЦИК у мышей в процессе возникновения и роста опухолей, индуцированных MX.

Научная новизна

Впервые изучено влияние МСВ, из группы нестероидных противовоспалительных средств, на процесс химического канцерогенеза у мышей. Установлено, что при введении ме^енэмяната натрия, ок~ сиферрискзрбоиз, делагила и реопирина существенно удлиняется латентный период возникновения ЮС-индушрованннх сарком у мышей разных линий.

Впервые описаны изменения уровня ТИК при химическом канцерогенезе, Показано, что в латентный период i :>личес?во ЦИК достоверно увеличивается сразу после введения MX. К моменту появления опухолей уровень ЦИК понижается к вновь резко возрастает по нерв роста опухолей. После достижения опухолями максимального размера наблюдается постепенное снижение уровня ЦИК,

Практическая значимость работы

Значительное торможение появления иидушрованных опухолей под воздействием МСВ из группы нестероидных яротивовоспалитгл£г них средств имеет важное практическое значение, так тип лел;н этся экспериментальным обоснованием для использования этих лре-пагчтов в комплексе противораковых профилактических мер.

4 .

Разработана иодификапкя шауноферментногб метода определения "Ш у мышей. Предложенная модификация характеризуется простотой и экономичностью - для исследования ЦИп достаточно 50 ккя сыворотки и только один пгоявляювдй реагент - анти-КаЬ -АТ, а также уни^реальностью - измеряется количзственно иммуноглобулины всех изотипов в составе ЦИК. Это позволяет рекомендовать метод для широкого внедрения в практику экспериментальных работ.

Внедрение В процессе работы выполнено 12 рационализаторских предложений, внедренных в Кемеровском государственном медицинском институте. Разработанная моднф икация иммуноферментного метода определения 1ДЯК V мышей используется в Институте клинической иммунологии СО РАН (Р.Новосибирск).

А п р о ба и и я

Материалы диссертации докладывались на республиканских ко"ференпиях (г.Кемерово, 198Г, 1934), на межреспубликанском симпозиуме (г.Юрмала, 1983) и на совместном совещании кафедры онкологии Кемеровского мединститута МЗ Р05-СР и группы иммуно-хнмии рака Новосибирского института биоорганической химии 00 РАН (г.Кемер во, 1991).'

Объем и структура работы Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4 глаз собственных исследований, заключения и выводов. Материал излодея н'а 123 страницах машинописи, включая указатель литературы (255 публикаций), II таблиц и II рисунков.

Объем, материалы и методы исследования Эксперименты проведены на мышах: .

5 1

1. СЯН/Г(5е сфаатсрные}, самки 10-11 месяпев (институт Цитологии и Генетики СО Ш СССР, г.Новосибирск) - 75 шяей;

2. С57В1/6-Н-2^, сгшш 2-2,5 месят (ШИОИ им. П.А.Герпена МЗ Р05СР, ВОЩ АМН СССР г.Москва) - 250 кшей;

3. ВА1В/с-Н-2^, самш-2-2,5 иесяиа (питомник "Рассвет" г.Тоысх) - 265 мкпзй. ,

Количество ЦИН определено в 605 образцах сыворотки.-

Для получгчия препаратов использовали беспородных мн-ией 2-3 месяцев. Для получения антисывороток использованы 4 половозрелых кролика, массой от 2,5 до 4 кг (3 самца и I самка, животине получены из питомника "Рассвет" г.Томске}.

Фармакологические препараты: реопирин (Гедеон Рихтер А.О.), оксиферрискарбон )", аефенамино-Еая кислота

(Нрбитский хкьйармзавод), делагил (хлорокБИН -£с|у1 )•

20-кегилголантрэн вводили подкожно э область наружной поверхности правого бедра з дозе 0,5 иг в 0,1 мл персикового или абрикосового масла.

Определение 2*0 5Сй фармпрепаратов проводили по методу Бзрекса (Беленький М.Л., 1963).

Для получения и анализа «ь'ли, их фрагментов и соотвег-стеуящяг англ сывороток и иечегете антител использовали следустае ' общепринятые ЕШмунохи!.г.пзские «етодн: высаливание гаю/з-глобу-линовоЯ фраками сыворотки сульфатом аммония; ящелекие к его фрагментов с поыочьв гельфильтрапри, иснооЗузниоЯ и аффинной хроматографии; папаянозкй гидролиз Од0 ; ггаиунодаффузио и иымуноэлектрзфорез; приготовление аффинных сорбентов на оено?е брсмшаиахтивировакной сефарози; конъсгапия антител с перокск-дазо» гг^нг.; вуделениэ ЦИК из еызоротки 2,5?« ПЗГ-6000; тгердо-

фазный сввдюгчдай вариант юшуноферментиого вкажйа в равиоме-ном увимв (Иммунологические метода, ред. Х.ФримеЛь, 1987,' Ос' теркаи I.A., 1985; Pwciicai ImmUrtQ Hudson L , Hey ft tiai, 1980; рекомендации фирми 'Фаркашя-ЛКБ").

Статистическую обработку результатов проводили на "Электре ннке Д-3-28" с помощью основных критериев Спвгдента, Фишера,;

. Пирсона, Валкокеона(Венчиков А.Й.,1974).

Результаты исследования \ : Влияние ИСВ на химический канцерогенез , Изучали действие таких МСВиз группы нестероидных противовоспалительных рредств как ыефекаминат натрия, охсиферрискар? бон, реопирин и делагил. Препараты начинали вводить за несцольк? суток до введения канцерогена. Предварительно устанавливали

LD»

и .выбирали дозы 2,5-Eil от CD 50. Результаты, представленный на таблицах 1-3, показали, что у животных всех линий латентный период появления пальпируемых опухолей существенно увеличивается под действием испытуемых препаратов. Хотя'появление облысения, уплотнения и пальпируемой опухоли у животных разных линий были различными (например, средний период появления сарком у мышей тании C57BI/6 составил 33,8 + 2,9 суток, а у ВА1£/с - 39,4 + 1,9 суток). Эффект удлинения латентного периода в 1,5-2 раза под действием нспыт^мых средств четко воспроизводился-в повторных серияхэкспериментов. Удалось выявить* и доэовуи зависимость, в частности, у шавей C57BI/6 при введении °,55t от 1Д^50 мефенамината натрия латентный период удлинялся до 78,0 + + 9,5 суток, а при дозе 5,0^ o*i£)äO.- до 100,5 + 7,0 суток. По полученным данным нельзя четко сказать, какой именно препарат обладает'большей активностью. Так, у самок СЗН/f мвфенами-

Влияние МСЗ на сроки появления фаз латентного периода при индукции МХ-кандарогенеза у мышей С57В1/6 (самда)

П : груп-. Препарат пы : Доза* . ,0У •Lt>50 J2L . .К . Сроки появления фаз латентного периода (сутки) X + 1 фаза : 2 фаза ! 3 фаза

Серия tf I

I Хлористый натрия 21 6,7 +0,31 II,62 + 0,95 33,76 + 2,88

2 Мефензминат натрия 2,5 12 10,5 + 0,58 31,5 ±4,34 78,0 +9,51

3 Делагил 5.0 12 .0,8 + 0,79 25,4 +2,94 72,0 + 6,1

Критерий достоверности различий по С ттл) цен ту (tel) 1-2 1-3 Р<С-,01 .Р<0,01 1-2 Р«0,01 1-2 1-3 ?< 0,01 1-3 Р <0,05 -а Р<0,01

Серия » 2

I Хлористый натрий - 21 6,09 + 0,69 15,14 + 1,24 31,1 + o,5

Z иафенаминат натрия 5,0 9 16,44 7 1,88 43,33 + 7„12 100,5 7 7,05

3 Оксифэррискарбон 5,0' 15 15,06 7 1,43 34,3 + 3,44 73,2 7 7,и;

4 Делагил 2,5 II 17,45 + 1,72 36,9 + 4,53 82,8 +.0,75

Критерий достоверности 1-3 Р<0,01 1-3 P<SQ,ÛI 1-3 Р«г0,01

различий по Стгюденту 1-2 Р< 0,01 1-2 Р<«0,01 1-2 P<0,01

<td) 1-4 Р«с 0,01 1-4 P * 0,01 1-4 P<0,01

Продолжение' тиблида I

: : Доеа : : Сроки появления фаз латентного периода (сутки) % + Ю1

Груп- Препарат от _________________;______".

ш : , :1Д550 : - :----*""*""":----------:-----

___^________. X &аза_^ ___2 ¿аза____:___3 £аэа___

. • Серия № 3

1 Хлористый натрий - 14 - 5,71 ± 0,41 12,28 ± 0,82 31,85 + 1,29 "

2 Мефенаминат натрия 5,0 14 13,07 + 1,303 34,85 + 2,95 94,64 + 4,72

3 Оксифзррискарбон 6,0 14. 12,35 + 1,185 32,57 ^2,27 68,14+2,38

4 Деяатал 3,0 14 13,14 + 1,531 30,42 + ¿,41 80,57 + 6,32 Критерий достоверности , 1-3 . Р«0,05 1-"!з Р<0,01 1-3 Р<0,01 различий по Стадденту 1-2 Р<0,05 4 1-2 ! Р<0,01 ' 1-2 Р<0,0Г Л (Ы) - 1-4 Р<0,05 1-4 Р<0,0Г 1-4 Р<0,01 -

Влияние ЫСВ на сроки появления фаз латентного периода при индукции МХ-каниерогензза у иыавй ВАХВ'с (самцы)

т : : Доза : Сроки появления фаз латентного периода (сутки) X + ГП

со- . • Препарат

рии •пы *

: ф . Гь . I фаза * 2 фаза 3 фаза

I I Хлористой натрий - 22 5,0 + 0,5 16,4 + 2,06 39,4 + 1,9

2 Мафашшинат натрия 5,0 21 9,9 7 0,94 44,1 7 3,63 58,6 7 2,8

3 Оксиферрискарбок 5,0 ' 21 8,4 7 0С7 26,4 2 4,12 55,1 7 11,7

4 Реопирин 15 7,6 7 Х85 45,6 7 9,32 65,2 7 3,7

Крип;ряЯ дсстог-ирностн 1-3 Р<г 0,001 1-3 Р«0,05 1-; Р<0,05

ухздичйй по Сгьюцснту 1-2 Р« 0,001 г.-2 Р« 0,001 Х-2 Р-10,001

1-4 Р«0,01 1-4 Р< 0,001 1-1 Р«0,01

№ 2 I Хлористый натрий 60 5,13 + 0,24 20,12 + 0,74 42,77 + 1,19

2 Ма^еньниьа? натрия 3,0 •30 9,06 + 0,59 42,03 7 2,14 бб,ВЗ 7 2,75

3 Окси.£орряскярбон 3,0 30 8,66 7 0,66 35,35 + 1,65 59,04 7 1,19

4- Д'ЭЛЗГИЛ 3,0 30 8,6 7 0,72 39,23 + 1,42 77,56 7 2,48

Критерий досто^'орностн 1-2 Р< 0,001 1-2 Р«£ 0,001 Г-2 Р<С0,001

уяглг.чий по 1-3 0,001 1-3 Р* 0,001 1-3 Р- 0,001

(Ы) 1-4 ?< 0,001 1-4 0,001 1-4 Р-£ 0,001

Таблица 3

Влияние ИСВ но ер ю;' появления фаз латентного периода при индукции Нк-канцэрогешаа у шзей ОН/? (санки) * .

-: : Сроки появления феь да«зжг того периода (сутки) л + 1Н груп-: • Препарат : :_____> __ _ _______________________

т : ' : ^ : . и&зеа : 2 фаза „ . , : 3 фаза

1 Хлористый натрий

2 Мефекаминат натрия

3 Оксифвррискарбон

Критерий достоверности по Сгьвденгу (Ы)

20 9,3 ± 0,4 32,6 + 5,5 40,8 + 6,5

13 . 11,1 + I,« 31,5 + 8,5 43,3 + 9,9

12 13,6 + 2,3 45,1 + 2,5 . 58,7 ¿11,2

1-2 Р«00Сб 2-3. Р40.05 1-3 Р <0,05

1-3 Р<0,01 2-3 . Р<0,05

на? натр т увеличивал латентный период несущественно - до 43,3 суток (40,6 в контроле), в то же время щп введения ояскферри-скарбока наблюдалось достоверное увеличение его до 58,7 суток. А у мыяей С57В1/6 мефенаминат натрия, напротив, проявлял более выраженное действие. Эти детали, лишь подчеркивает, что имеющиеся межлинейные различия определяют не только .разную чуветьи-теяьноеть тавотных к канперо генам, но и их реактивность по от-нозеи'Ч к различным фармакологическим воздействиям. Интересно, что несмотря на столь существенное удлинение латентного периода общая продояеттельность визни кивотшпс и месса опухолей в опытных группах не отличалась" от контроля. По-видкисау, в результате воздействия испытуемыми препаратами происходит отбор наиболее злокачественных клонов трансформированных клгток, которые датя начало росту более агрессивных сарком. Поэтому после удлиненного латентного периода скорость роста опухолей увеличивается и различия по общей продолжительности жизни- и массе опухолей ■нивелируется.

Модификация иммуноферментного метода определеггия иммунных комплексов у мысей

Для определзчия динамики ВДК при канцерогенезе в условиях действия МСВ мы разработали собственную кодификапип кимунофэр-кзктного анализа 30 всех изотипов з малом объеме материала . (после осаждения ЦИК 2,5? ПЭГ-6000 на 50 шел сыворотки). Схема анализа такова (рис. I).

Нами исследованы кинетические закономерности связывания: I) анти- ГаЬ-антител с пояистирольншя платами; 2) очицэнчьгх иммуноглобулинов мыли и их КаЬ -фрагментов (антигенов) с этт: антителами; 3) меченых пероксидазой хреначзнтп-ГаЬ-антител со связавшимися антигенами - иммуноглобулинами мывк. На рис. 2

- * - фрагментов "З^а-шт; 2 - поликлональнкй

Э^б-мши; 3 - гамма-глобулиновой фракции из слив-нбй сыворотки мышей; 4 - мококлональный -мыли

■ 13 -.'-•'

предстар-еш графики калибровочных кривых с известным количеством антигена, по которым мошо определн-ь неизвестное количество антигена - в ЦИК s образцах сыворотки. Видно, что разработанная модификация с использованием в качествё стандартных антигенов и Щ}-Фрагментов »ясли характеризуется высо-- КОЯ чувствительностью (5 нр в I мл), широким рабочим интервалом (5-100 нг/мл), хорошей воспроизводимостью (коэффициент варивши не болсз 10%) и универсальностью. По всем этим.параметрам разработанная модификация нэ уступает ныне известным методам определения иммуноглобулинов. •

Кроме собственно иммунологических параметров метода у попытались оптимизировать инструментальную часть. Совместно с Институтом угля СО АН СССР на базе отечественных блоков собрана' действующая модель автоматического спектрально-вычислительного комглекса, который представляет собой спектрофотометр с вертикальным лучом для измерзния оптической плотности в 96-луночньяд платах. Использование с качестве светового фильтра дифракшон-. ной реиетки позволяет выбрать с точность» до 0,1 нм щгсну волны поглощения образе.. Светспркемнмк -5ЭУ обеспечавве? высокую чувствительность измерения, а ЭВМ "Эле кгроника-60" - обсчет денных и работу прибора в автоматическом Скорость ис-

следования одного планшета регулируется от V до 20- тану?. Сопоставление работы АСВК с Унискансм-2 (Финляндия) показало, что он нэ уступ&ег по чувствительности и воспроизводимости этому зарубежному аналогу.

Влияние !<5СВ на Ц£К при кань^рзгенмо Иммунные комплексы определяли з сыворотке мнсзЯ хжчт С57ВL/5 (табл. I, серия $ 2). Для исследопак/я забирали по 100

■ 14

мл крови из ретроорбктаяъноги венозного сплетения за 20 суток до ь^едеяия канцерогена (исходные показатели) и затем каждые 10 суток до табели животных в контрольных группах, а также в процессе введения оксиферои скарбона, мефенамината натрия и де-латала в иштных группах. Из крови получали сыворотку, которую маркировали и хранили при -40°С. Иммунные комплексы, из размороженной сыворотки, получали осавдением в 2,5^-ном ПЭГ-6000 и определяли общее количество в осадке с помощью собственно1 «одификаши. . «

На рис. 3. представлена динамика ЦИК у контрольных и подопытных животных. Исходный уровень ЦИК принят за 100%. У мышей контрольной группы облысение кожи и уплотнение ткани в месте введения канцерогена сопровождалось достоверным увеличением содержани;. иммунных комплексов почти в 3 раза, со среднем максимумом на 20 сутки. Затем наблюдалось значительнее снижение вплоть до 40 суток. Именно в этот период начинали появляться пальпируемые опухоли. Затем следовал скачкообразный резкий подъем кривой иммунных комплексов по мере роста опухолей со средним пиком на 70-80 сутки, огда опухоли достигали максимальных размеров и переставали расти. В последствии уровень иммунных комплексов значительно понижался вплоть до гибели

ЯИВОГНЫХ.

Похожую картину ыы наблюдали и у мышей С57В1/6 с перевивной карйиномой Льюис: поршение уровня ЦИК к моменту «озникно-♦

вения опухолей, затем снижение и второй пик, приходящийся, вероятно, на начало метастазирования (с 35 до 50 суток).

Для трех испытуемых препаратов - мефенамината натрия, ок-сиферриска^бона и делвгила было характерно постепенное увеличе-

■имкоо

Рис. 3. Уровни шркулируиттх иммунных комплексов у кыяей . С57ВЬ/б при ыетилхолангреновон канперогенезе и под воздействием мембраноетабнлиэирукзих ващег.тв: I - контроль, 2 - охсяферрискарбон, 3 - мефенами-на* натрия, 4 - делагил.

нив количества иммунные комплексов на протяжении вс^го эксперимента. Не отмечено ни спада на 30-40 сутки, ни пилообразного скачка к 70 суткам, ни снижения уровня по мере гибели животных. В момент наивысшего поднятия уровня ЦИК в контроле, содержание ЦИК в опытных группах à 1,5-2,5 раза меньше. Полученные данные подтверждают принципиальное положение гипотезы о взаимосвязи дестабилизации мембран с образованием блокирующих факторов. В этом убеждает явное изменение образования иммунных комплексов под действием ИСВ, а дэу.:фазный пикообраэный характер кривой гчмунных комплексов в контроле и различия между опытами группами свидетельствуют о том, что предполагаемая взаимосвязь иые- ' ет сложный, опосредованный.различными механизмами, характер.

ВЫВОДЫ

1. Мембраностабилнзирующие вещества (мефенаминат натрия; окси-фаррискарбон,- реопирин, делагил) существенно удлиняют ла-

. тентнвй период появления опухолей при метияхолантреновом • канцерогенезе. Наиболее выраженным эффектом обладает мефэ-наминат натрия,

2. Изменение уровня ЦИК при канцерогенезе характеризуется волнообразно* динамикой. На 20 сутки после введения метилхояан-трена наблюдается увеличение' количества ЦИК. К моменту го-явления опухолей на 40-50 сутки уровень ЦИК снижается.

В период интенсивного роста, к 70-80 суткам, содержание ЦИК резко,возрастает, а затем постепенно уменьшается к моменту гибели животных. '

3. При введении мембраностабкяизирующих веществ динамика образования ЦИК изменяется. Наблюдается постепенное увеличение

: количества ЦИК без снижения на 40-50 сутки и без пикообрэз--кого возрастания на 70-80 сутки.

4- Разработанная мо.дификапия иумуноферментного метода определения ЦИК характеризуется рысокой чувствительностью, экономичностью и универсальностью (используется Л4. ^ь один проявляющий реагент - анти-РйЬ -антитела). Метод может с успехом применяться в практике экспериментальных исследований.

0-,

ОЫСОК НУЬШАЩЯ, ИСПааьЗОВАНКЙ В ДИССЕРТАЦИИ

1. Профилактика рака мзтодом анткблокирующей терап.чи/Иммукологи-чзские аспекты экспериментальной терапии и профилактики рака, Материалы рабочего совещания № 2 на курсе онкологии КПК. Токск, ТГУ, 1&Э, с. 16-31. В соавт. Б.М. Клячккн; С.Т.Басар-

Г1Ш.И др.

2. ü механизме образования сывороточного блокирующего фактора (£2й) в процессе взаимоотношения опухоли и организма//Вза»шо-отнсгаонио опухоли и организма. Сборник тезисов. Наукова думка, Кийв, 1900, с. 37. В соавт. Б.МаКлячккк» С.Т.Басаргин и др.

3. Действие'мембраноактивных веществ на адгеэивность махрофагов/ Вопросы теоретической и -линичэской медицины. Тезисы докладов областной научной конференции.молодых специалистов. Кемеровское книжное издательство, Кемэроьо, 1961„ с. 34-35. В соавт. ч А,Н.Глушков} С.Т.Басаргин.

4. Анткблскирупщая имцунотерапия рака/Актуальные вопросы онкологии (выпуск 1У}о Тезисы докладов. Кемерово, 1961, с» 179-180. В <?оаат. Б. Клячккн, Т.Басаргин и др.

5» Актибяокирукхцая ккмяк, .профилактика спонтанного канцерогенеза у мшей/Таы яе0 с„ I80-I8I. В соавт. Б.М.Клячкин, С.Т.Басаргин, А.Н.Глушково

6. Анткбкокирутхцая иммунотерапия молочной железы у мышей/Там ка, с. I8I-I82. В соавт. Б.М.Клячкин, С.Т.Басаргин, А.а.Глушков.

7. Иммуно;: ;гичесь s аспекты "«агностики, профилактики и лечения рака/Профилактика, диагностика и лечение заболеваний человека. Тезисы докладов к научно-практической конференции, посвященной 25-лвтио медицинского института. Кемеровское книжное издательство. .Кемерово, 1981» с. 355-358. Б соавт. Б '(.Клячккк, С,Т, Басаргин и др.

19 -

8. Экспериментальная профилактика канцерогенеза веществами -стабилизаторами клеточных мег.к5ран/Отчет по ШР roc. per.

. Г< 8II0I678 от 19 окт. 1981 г., инв. 9 02484.0U5485. Сборник рефератов НИР и ОКР, ВНГИ "Центр", Ыосква, 1984, с. 13-14.

9. Теоретические и экспериментальное разработки актиблогшруюцей терапии рака/Не специфические стимуляторы в иммунотерапии оп> -холей. Сборник статей. Зинатнэ, Рига, 1£85, с. 30-36. В соавт.

. Б.М.Кяячкии, С.Т.Басаргин, А.Н.Глушноа к др.

10. О механизма образования блокирующих факторов и методе акти-блокирущей иммунотерапии злокачественных опухолей/Ж. Вопросы онкологии, т. XXXI, £ 2, J985, с. 78-84. В соавт. Б.М.К*яч-кин, С.Т.Басаргин, А.Н.Гяупков и др.

11. Влияние кембраностабилизирущих препаратов и ингибиторов про-теаз на блокирующую ахтизность сыворотки и рост э:<спер;::.йн-тальной опухоли/Нозыз подходи к вопросам иммунологии рака. Материалы выездного объединенного рабочего совещания ВОЩ А!.й СССР, Gi ВШЦ Al&i СССР, МЖСИ га>.. П.А.ГерцеНа, ::а*едры онкологии КГй. Тезисы.'Кемеровское кгежное издательство, Кемерово*, 1966, с. 74-75. В соавт. А.Н.Глупков.

12. Автоматизированный спектрально-вычислительный комплекс и его применение в биологии и медицине/Препринт 3 134-Б. Красноярск, 1990, с, I-I9. В соавт. А.А.Аксеков, А.К.Глуаков и др. Содержание иммунных конплексов э сыворотке крови мыле Я при введении 20~мстилхолантрена/й. сксг.еркм. онкология, 1991,

2, с. 26-28. В соавт. А.К.Гл^тлков, Б.М.Клччкин.

4. Результаты промежуточных этапов экспериментальных и гглиш!чес-ккх исследований антиблоккрущей иммунотерапии при рака/В кн.: Неспчци^ические стимуляторы противоопухолевого эксперимента. - Рига, 1983, с. 145-145, В соавт. Б. Я.Клячкин, С.Т.Басаргкн, А.Н.Глуэков и др.

СПИСОК РАВДРЕДЯОШШ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В ДИССЕРТАЦИИ

1. Рац.прад. * 792, принятое в КШ 23.04.80 г. "Клетка для разведения лабораторных мышей". В соавт. А.Н.Глушков, С.Т.Басаргин.

2. Рац. пред, » "79?, принятое в КГ2И 7.05.80 г. "Устройство для вращения культивационных пробирок". В ооавт. С.Т.Басаргин,. В. А. Котиков.

3. Рац. пред. » 835, принято© в КШ 9,09.80 г. "Способ мытья лабораторной посуды сложной геометрической конфигурации и устройство для его осуществления". В соазг. С.Т.Басаргин.

4. Рац. пред. * 843, принятое в КШ1 18.09.60 г. "Камера для . культивирования клеток"» В ~аавт. А»Н.Глушков» И.М,Окунев.

5. Рац. пред. * принятое в КГШ 22.10.81 г. "Пенал для хранения замороаенньа сывороток от иыпей". В соавт. А.Н.Глушков.

6. Рац. пред. * 933, принятое в КГШ 22.10.81 г. "Штатив для центрифугирования крови лабораторных животных". В соавт. А.Н.

' Глушков, А.А.Крашенинин.

7.Рац. пред. V 954, принято- в КГШ 23.£0.81 г. "Способ стерильного забора крови и устройство для его осуществления". В соавт. А*Н.Гяувков.

8. Рац. пред. » 965, принятое в КШ 23.10.81 г. "Штатная коробка". В соавт. А,Н.Гяушхов.

9. Рац. пред. * 1066, принятое в КГШ 8,12.82 г. "Способ метки мьшей и крас". В лэавт. А.Н.Г'лусков, А.А.Крашеннгаш.