Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Влияние ионизирующего излучения на образование факторов роста Т-клеток изависимую от них пролиферацию лимфоцитов

Р Г 5 ОД

На правах рукописи

Блохина Марина Ефимовна

Влияние ионизирующего излучения на образование факторов роста Т-клеток и зависимую от них пролиферацию лимфоцитов

14.00.36 — Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва, 1997

Работа выполнена на кафедре медицинской и биологической физики Российского государственного медицинского университета и в Институте иммунологии МЗ РФ.

Научный руководитель:

академик РАЕН, доктор медицинских наук,

профессор ЯРИЛИН A.A.

Научный консультант:

кандидат биологических наук ШАРЫЙ Н.И.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор ИВАНОВ A.A.

доктор медицинских наук ЧЕРНОУСОВ А.Д.

Ведущая организация:

Центральный научно-исследовательский институт вакцин и

сывороток им. И.И.Мечникова

Защита диссертации состоится "......" .................. 1997 г.

в...... часов на заседании Диссертационного Совета Д.084.1406 при

Российском государственном медицинском университете по адресу 117869 Москва, ул. Островитянова, д.1.

С диссертацией можно ознакомиться в библитотеке Российского государственного медицинского университета по адресу Москва, ул. Островитянова, д.1.

Автореферат разослан "....." ........................1997 г.

Ученый секретарь Совета,

кандидат медицинских наук, доцент (Кузнецова Т.Е.)

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. За последние годы исследования, связанные с изучением последствий воздействия ионизирующего излучения на биологические объекты, выделились в отдельные направления медико-биологических наук. Актуальность этих исследований обусловлена не только происшедшим за эти годы рядом ядерных катастроф, но и постоянным расширением использования источников ионизирующего излучения в технике, научных исследованиях, медицине.

В организме одной из наиболее чувствительных к воздействию ионизирующего излучения является иммунная система. В больших дозах ионизирующее излучение вызывает грубые нарушения в пролиферации, дифференцировке и функционировании практически всех клеток иммунной системы, приводя к сильно выраженным иммунодефицитам, которые часто невозможно восстановить ни естественным путем, ни с помощью новейших методов современной медицины. Облучение организма в более низких дозах также приводит к значительным нарушениям в функционировании иммунной системы, которые, однако, в ряде случаев подлежат частичной или полной компенсации. Для прогнозирования течения пострадиационного восстановления и разработки высокоэффективной иммунокоррегирующей терапии необходимо выявление молекулярно-клеточных механизмов действия ионизирующего излучения на клетки иммунной системы.

Повреждающие эффекты облучения на лимфоциты изучены достаточно подробно, однако существует немало аспектов этой проблемы, до последнего времени мало изученных, несмотря на их важность. К ним, в частности, относится вопрос о влиянии радиации на пролиферативную активность лимфоцитов при действии антигенов и митогенов, в реализации которых важную роль играют цитокины. Поскольку выработка цитокинов, реакция на них клеток и развивающаяся при этом пролиферация лежат в основе любых форм иммунного ответа, изучение влияния ионизирующего излучения на эти процессы является актуальным.

Актуальность данной темы связана также с необходимостью уточнения места ростовых факторов в формировании пострадиационного иммунодефицита и пострадиационного восстановления, что необходимо для повышения эффективности поиска путей коррекции этой формы иммунологической недостаточности.

Целью настоящей работы явилось изучение влияния ионизирующего излучения на образование факторов роста Т-лимфоцитов (ФРТЛ) лимфоцитами и ответа на них лимфоцитов; динамики восстановления этих функций после сублетального облучения, а также анализ некоторых механизмов действия радиации на ИЛ-2-зависимые процессы.

Для достижения поставленной цели предполагалось решить следующие задачи:

1. Отработать схемы культивирования и стимуляции лимфоцитов мышей, пригодные для оценки активности продуцируемых ими ростовых факторов и ответа на них лимфоцитов.

2. Изучить влияние облучения in vitro и in vivo на активность ФРТЛ, продуцируемых стимулированными лимфоцитами и зависимость этого эффекта от дозы облучения и временного соотношения между моментом облучения и стимуляцией клеток.

3. Изучить влияние облучения in vitro и in vivo на способность Т-лимфоцитов к пролиферативному ответу на ФРТЛ.

4. Исследовать динамику изменения активности ФРТЛ и ответа на них Т-лимфоцитов в пострадиационном периоде.

5. Проанализировать способность облучения оказывать костиму-лирующее действие на клетки при его использовании в сочетании с митогенами и другими факторами.

Научная новизна исследования. Изучена зависимость стимулирующего действия радиации от ее дозы. Показано, что облучение клеток in vitro усиливает активность ростовых факторов при дозах 12 - 24 Гр для спленоцитов и 4 -12 Гр для тимоцитов.

Определена роль временного соотношения облучения и стимуляции лимфоцитов для достижения стимулирующего эффекта радиации на

активность продуцируемых ими ФРТЛ: усиливающее действие радиации наблюдается при стимуляции спденоцитов митогеном через 24 ч после облучения.

Впервые проведено детальное изучение пострадиационной динамики восстановления лимфоцитов: проведен сравнительный анализ способности лимфоцитов селезенки и тимуса на разных этапах восстановления после сублетального облучения продуцировать факторы роста Т-лимфоцитов и отвечать на них, а также их способности к спонтанной пролиферации и к ответу на митоген.

Получены новые данные о возможности получения костимулирующего эффекта облучения при его сочетании с субмитогенными концентрациями конканавалина А, форболового эфира, ионофоров кальция; эффект регистрировался как по активации лимфоцитов, так и по усилению продукции ими ростовых факторов.

Практическая значимость работы. Исследование относится к области фундаментальной иммунологии. Полученные сведения о действии радиации на выработку ростовых факторов и ответ на них будет полезен при разработке методов иммунокоррекции пострадиационных иммуно-дефицитов и контроля за этими состояниями по уровню продукции ФРТЛ.

Хотя в задачи исследования не входило прямое внедрение в клинику, однако ряд полученных результатов используется в работе экспериментальных лабораторий Института иммунологии, НИИ медицинской радиологии РАМН. Это в первую очередь относится к исследованию по оптимизации условий продукции ФРТЛ и ее экспериментальной оценке.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, методической части, экспериментальной части (результаты и их обсуждение), заключения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 260 источников, в том числе 228 иностранных. Работа содержит 7 глав и изложена на 123 страницах, включая 34 рисунка и 11 таблиц.

Материалы и методы исследования

Экспериментальные животные. Облучение

Работа выполнена на мышах линий СВА и (СВА*С57ВЬ/6), в опытах использовали мышей в возрасте 2-3 месяца, имеющих массу 20 - 22 г.

Мышей и культуры клеток облучали гамма-квантами '"Сб на установке "Стебель" при мощности дозы излучения 0,01 Гр/с. Облучение клеточных культур производили в больших пенициллиновых флаконах в объеме 2-3 мл среды при концентрации клеток 1 ■ 106 - 2 • 106 на 1 мл.

Получение кондиционированной среды, содержащей факторы роста

Т-лимфоцитов

В качестве кондиционированной среды, содержащей факторы роста Т-лимфоцитов (ФРТЛ), использовали надосадочную жидкость (НЖ) культур лимфоцитов, активизированных митогеном. Для индукции образования ФРТЛ в культуре пул клеток селезенки или тимуса (5 — 7 мышей на одну пробу) засевали в концентрации 8 - 106 - 10 ■ 106 на 1 мл среды во флаконы Повитской в 10 мл полной питательной среды (ППС), составленной на основе бессывороточной среды ЯРМ1 1640 с добавлением Ь-глутамина (300 мкг/мл), 2-меркаптоэтанола (5 • 10'5М) и гентамицина (160 мкг/мл) и вводили Кон А (5 — 10 мкг/мл).

Культуры инкубировали при 37°С в ССЬ-инкубаторе. Через 4 часа инкубации клетки отмывали от митогена 2-х разовым центрифугированием и затем продолжали культивировать в свежей ППС без Кон А в тех же условиях. Через 24 часа инкубации клетки удаляли центрифугированием и собирали надосадочную жидкость (НЖ).

Тестирование падосадочной жидкости на активность ФРТЛ

Активность ростовых факторов, содержащихся в супернатантах, определяли двумя способами: 1) по их влиянию на пролиферативный ответ Т-лимфобластов селезенки мышей; 2) по их влиянию на пролиферативный ответ интактных тимоцитов при костимуляции их митогеном.

Клетки культивировали в 96-луночных планшетах в присутствии супернатантов, содержащих ФРТЛ, при 37°С в СОг - инкубаторе в течение 72 часов. За 4 часа до окончания инкубации в лунки добавляли 3Н-тимидин (по 40 кБк на лунку). Уровень включения 3Н-тимидина определяли с помощью бета-счетчика "Mark III".

Оценка включения 3Н-тимидина. Пролиферативный ответ лимфоцитов на ФРТЛ оценивали по абсолютной величине включения метки (в имп/мин) и по индексу стимуляции (ИС), определяемому отношением числа импульсов бета-распада в минуту в опытных культурах к числу импульсов в минуту в контрольных:

количество импульсов в минуту в культуре "опыт"

ИС = -

количество импульсов в минуту в культуре "контроль"

Для более наглядного выражения эффекта радиации использовали

индекс усиления (ИУ) — отношение включения 3Н-тимидина клетками-

мишенями в присутствии супернатантов культур облученных и

необлучешшх лимфоцитов:

имп/мин в культурах при добавлении НЖ облученных лимфоцитов

ИУ=-

имп/мин в культурах при добавлении НЖ необлученпых лимфоцитов

Статистическая обработка полученных результатов

Полученные экспериментальные данные статистически обрабатывались при использовании методов вычисления среднего арифметического значения, ошибки среднего и оценки достоверности различий между результатами с использованием Т-критерия Стыодента. При обрабтке результатов использовали пакет статистических программ "Statgraphics".

Результаты и обсуждение

Действие ионизирующего излучения на продукцию факторов роста Т-клеток лимфоцитами мышей

Облучение спленоцитов в системе in vitro (рис. 1) непосредственно перед стимуляцией митогеном (кривая 1) не оказывает влияния на активность

Т-клеточных ростовых факторов. Облучение спленоцитов за сутки до стимуляции Кон А (кривая 2) приводит к значимому усилению активности ростовых факторов при дозах облучения 12 и 24 Гр. При облучении in vivo за сутки до извлечения спленоцитов и их стимуляции митогеном (кривая 3) усиливающее действие радиации на активность ФРТЛ выражено слабее. В этом случае общее число спленоцитов существенно снижается под влиянием облучения и пересчет уровня активности ростовых факторов на селезенку (кривая 4) дает величину, не отличающуюся от контроля. По-видимому, в случае облучения in vitro регистрируется истинное усиление активности ростовых факторов, тогда как при облучении in vivo имеет значение дополнительный эффект отбора радиорезистентных клеток-продуцентов, к которым относятся, в частности, Т-хелперы 1 класса, образующие ИЛ-2 .

О 5 10 15 20 25

доза, Гр

Рис. 1. Действие ионизирующего имучения на активность ФРТЛ, продуцируемых спленоцитами мышей при облучении in vitro: непосредственно перед стимуляцией Кон А (1) и за 24 часа до стимуляции (2); in vivo за 24 часа до стимуляции (3). Кривая 4 изображает зависимость условных показателей активности ФРТЛ в пересчете на всю селезенку

При облучении тимоцитов in vitro (рис. 2) освобождение ростовой активности, особенно выраженное при дозе 8 Гр, происходит без стимуляции митогеном (кривая 2); митоген даже ингибирует выход ростовой активности в надосадок (кривая 1). Данный эффект радиации может быть связан как с выделением ростстимулирующего материала (например, продуктов распада нуклеиновых кислот, пептидов и т.п.) из гибнущих тимоцитов, так и с истинным усилением активности продуцируемых ростовых факторов.

О 5 10 15 20 25

доза, Гр

Рис. 2. Действие ионизирующего излучения на активность ФРТЛ, продуцируемых пшмоцитами, облученными in vitro: за 4 часа до стимуляции митогепом (1) и без стимуляции (2)

При облучении in vivo за 4 суток выделение ростовой активности наблюдается только при условии стимуляции клеток митогеном. Как и в случае селезеночных клеток, пересчет продукции Т-клеточных ростовых факторов на весь орган показывает, что увеличение суммарного выделения не происходит. Очевидно, среди выживших тимоцитов также увеличивается доля клеток, способных продуцировать ростовые факторы (как и в случае

облучения спленоцитов), хотя не исключена возможность истинной костимуляции облучением их выработки.

Действие ионизирующего излучения на способность Т-лимфоцитов к пролиферативному ответу на ФРТЛ

Оценка влияния облучения на ответ клеток селезенки на Т-ростовые факторы (рис. 3) однозначно свидетельствует о его подавлении. Подавление регистрируется в равной степени при облучении спленоцитов перед действием на них митогена для индукции Т-бластов (кривая 1) и при облучении самих сформированных бластов (кривая 2). Очевидно, в первом случае основной причиной подавления ответа на ростовые факторы является ослабление экспрессии рецепторов, передачи сигнала и реализации механизма деления, тогда как во втором случае (когда облучаются уже сформированные Т-бласты, несущие рецепторы для ростовых факторов) —

0.00 0.40 0.80 1.Z0 1.60 2.00

доза, Гр

Рис. 3. Влияние ионизирующего излучения на ответ спленоцитов на ФРТЛ при облучении клеток in vitro: (1) - ответ Т-бластов, полученных из клеток, облученных непосредственно после извлечения из селезенки; (2) - ответ Т-бластов, облученных после 72 час культивирования клеток в присутствии Кон А

В отдельных опытах наблюдалось усиливающее действие облучения на ответ тимоцитов на Кон А при дозах 12 и 24 Гр, а спленоцитов — при дозе 4 Гр (особенно, если ответ в отсутствие действия радиации был низок), что может быть связано с усилением продукции аутокринных ростовых факторов или иными механизмами.

Пострадиационное восстановление лимфоцитов, продуцирующих факторы роста "¡-лимфоцитов и отвечающих на них после сублетального гамма-облучения

Изучение пролиферативной активности тимоцитов и спленоцитов мышей, продукции ими ростовых факторов и ответа на эти факторы в процессе восстановления после внешнего облучения в дозе 4 Гр позволило выявить следующие закономерности.

Спонтанная пролиферация тимоцитов (рис.4, кривая 1) резко возрастает в первую неделю после облучения, что отражает усиление клеточной пролиферации, обеспечивающей экстренное восстановление тимуса. В селезенке (кривая 2) регистрируется подавление спонтанной пролиферации с постепенной нормализацией ее к концу месяца.

время после облучения, сутки

Рис.4. Восстановление способности лимфоцитов тимуса (1) и селезенки (2) к спонтанной пролиферации после сублетального облучения мышей

Индуцированная митогеном пролиферация тимоцитов вначале подавлена, но к 10 суткам значительно возрастает (очевидно, вследствие накопления в тимусе зрелых Т-клеток), затем постепенно снижается и доходит к концу месяца до субнормального уровня. В селезенке регистрируется кратковременный подъем ответа на Кон А на 8 сутки с последующим снижением и намечающимся восстановлением к концу

время после облучения, сутки

Рис. 5. Восстановление активности ФРТЛ, продуцируемых тимоцитами после сублетального облучения мышей: (1)- стимулированная митогеном продукция ФРТЛ: (2)-спонтанная продукция ФРТЛ

Активность Т-ростовых факторов, продуцируемых клетками тимуса без воздействия митогена (рис.5, кривая 2), возрастает на 4 сутки после облучения, что отражает эндогенную стимуляцию активносги ростовых цитокинов, обусловливающих развитие экстренного восстановления органа. Индуцированное митогеном увеличение активности ростовых факторов (кривая 1) наблюдается позже — на 10 — 20 сутки, когда

популяция клеток тимуса относительно обогащается зрелыми тимоцитами; в ранний период после облучения индуцированная продукция ростовых факторов, наоборот, подавлена. Главным образом, в первую неделю после облучения происходит спонтанное выделение лимфоцитами тимуса Т-клеточных ростовых факторов, обеспечивающих раннюю волну регенерации органа, тогда как позже создается готовность к их усиленной продукции, реализуемая при условии стимуляции митогенами.

У спленоцитов, в отличие от тимоцитов, не наблюдается усиление спонтанного выделения ростстимулируюшей активности под влиянием облучения. Кон А-индуцированная стимуляция выработки этих факторов спленоцитами определяется на 20 сутки после облучения.

Ответ селезеночных клеток на Т-клеточные ростовые факторы в течение месяца после облучения в дозе 4 Гр существенно не меняется. Для тимоцитов регистрируется усиление прямой реакции на ростстимулирующие надосадки (рис.6, кривая 1) на 10 сутки после облучения и ответа в реакции костимуляции (кривая 2) — на 20 сутки. Это соответствует данным о спонтанной и индуцированной продукции ростовых факторов тимоцитами.

О 5

О 10 20

время после облучения, сутки

Рис. 6. Восстановление ответа нестимудировштых (1) и стимулированных

митогепом (2) тимоцитов на ФРТЛ после сублеталыюго облучении мышей

По-видимому, в ранний период после облучения, связанный с подготовкой и осуществлением экстренной регенерации, имеет место эндогенная активация выживших клеток тимуса. Она проявляется в спонтанной продукции ростовых факторов и готовности к ответу на них. Эти условия обеспечивают осуществление аутокринной пролиферации тимоцитов, по-видимому, составляющей основу экстренного восстановления тимуса. Позже, в период вторичной атрофии, в связи с относительным обогащением популяции тимоцитов зрелыми медуллярными тимоцитами повышается готовность клеток к продуцированию ростовых факторов и ответу на них, однако для реализации этих явлений требуется действие стимулирующего фактора. Возможно, в органе при определенных условиях появляется такой стимулятор, продуцируемый дополнительными клетками тимуса. Тогда также развивается пролиферация тимоцитов, соответствующая окончательному восстановлению тимуса, она лишь отчасти может быть признана аутокринной.

В селезенке подобные автономные процессы не происходят: в ней ликвидация Т-клеп очного дефицита происходит постепенно — главным образом за счет миграции клеток из тимуса, а не за счет их размножения внутри органа.

Облучение как возможный источник костимулирующих сигналов

Как уже отмечалось, облучение способно индуцировать выработку лимфоидными клетками тимуса и селезенки ростовых факторов или усилить реакцию Т-лимфоцитов на митоген. Иными словами, облучение в определенных ситуациях может выступать как активирующий агент, что неоднократно отмечалось ранее и являлось предметом обсуждения.

Мы рассмотрели эффекты ионизирующей радиации в сочетании с митогенами и факторами, вызывающими активацию лимфоцитов в обход мембранных рецепторов. Для этой цели используют комбинацию ионофоров Са2+ и форболового эфира. Кальциевый ионофор обеспечивает приток ионов Са2+ из внеклеточной среды взамен их мобилизации из внутриклеточных депо, которая происходит при действии антигенов и

митогенов. Форболовый эфир (в частности, использованный нами ФМА) активирует протеинкиназу С.

Мы комбинировали действие облучения в различных дозах (4 и 12 Гр) с одним из этих факторов или с их комбинацией и определяли в этих условиях уровень пролиферации спленоцитов (рис. 7) и активность вырабатываемых ими ростовых факторов (рис. 8).

О 5

I С

Л О

■ - Гр Ш 12 Гр

■ ®МА+А237а

ФМА А2378

Рис. 7. Влияние облучения на пролиферацию лимфоцитов, стимулированных ФМА, иопофором кальция (А2378) или совместно обоими указанными агентами

О 5

Ю.00 -

А Гр

! КУЯЭД 12 гр

~ ФМА+АгзТ'в

ФМА А2378

Рис. 8. Влияние облучения на продукцию ФРТЛ лимфоцитами, стимулированными ФМА, иопофором кальция (А2378) или совместно обоими указанными агентами (В тексте нумерация столбцов диаграмм проведена слева направо)

Наиболее выраженным был костимулирующий эффект облучения на фоне действия кальциевого ионофора (столбцы 5 и 6), из чего можно заключить, что облучение вызывает ФМА-подобный эффект (столбец 7).

Облучение клеток, обработанных ФМА, отменяло его стимулирующее действие на пролиферацию лимфоцитов (рис. 7, столбцы 2 и 3) и в то же время повышало активность продуцируемых ими ростовых факторов (рис. 8, столбцы 2 и 3).

Исследование действия сублетальной (4 Гр) и сверхлетальной (12 Гр) дозы на фоне воздействия субмитогенной концентрации Кон А показало, что при сочетании облучения в дозе 4 Гр с действием субмитогенной дозы митогена регистрируется значимое усиление включения 3Н-тимидина. Этот эффект не проявлялся на фоне облучения в дозе 12 Гр.

Проведенные исследования показали, что облучение или заменяет действие костимуляторов или отменяет их эффект при его оценке как в тесте индукции пролиферации, так и по продукции ростовых факторов.

Практические рекомендации

Полученные сведения о действии радиации на выработку ростовых факторов и ответ на них могут быть использованы при разработке методов иммунокоррекции пострадиационных иммунодефицитов и контроля за этими состояниями по уровню продукции ИЛ-2.

Выводы

1. В результате v-облучения лимфоцитов мыши в системе in vitro, предшествующего их стимуляции конканавалином А, в надосадочной жидкости культур повышается содержание факторов роста Т-клеток. Максимальный эффект (в 4 раза) в отношении спленоцитов наблюдается при их облучении в дозах 12 - 24 Гр за 24 часа до стимуляции, в отношении тимоцитов (в 20 - 30 раз) - при облучении в дозах 4 - 12 Гр за 4 часа до стимуляции. При облучении клеток непосредственно перед действием митогена стимулирующее действие радиации на продукцию ФРТЛ тимоцитами выражено значительно слабее (в 10 раз), а для спленоцитов отсутствует.

2. При -/-облучении лимфоцитов мышеи в системе in vivo и последующем культивировании их в присутствии митогена стимулирующий эффект облучения на продукцию ростовых факторов менее выражен; при пересчете на орган он нивелируется в связи с гибелью значительной части лимфоцитов.

3. Способность Т-лимфоцитов отвечать на ростовые факторы, снижается при облучении in vitro и in vivo. В тесте костимуляции тимоцитов пролиферативная реакция подавляется полностью при дозе 4 Гр. В тесте стимуляции селезеночных Т-лимфобластов, индуцированных Кон А, подавление ответа на ростовые факторы наблюдается уже при дозе 0,5 Гр при облучении как до, так и после действия митогена на спленоциты.

4. В первую декаду пострадиационного восстановления тимоцитов (после облучения мышей в дозе 4 Гр) регистрируется усиление их спонтанной пролиферации, повышение выработки ими аутокринных ростовых факторов, а также усиление их ответа на ФРТЛ без предварительной активации митогеном. Во вторую декаду повышается выработка ростовых факторов активированными тимоцитами. У спленоцитов, наоборот, спонтанная пролиферация и выделение ростовых факторов без предварительной активации клеток, подавлены в течение 1-го месяца после облучения. Активность ростовых факторов, выделяемых стимулированными спленоцитами регистрируется с 20-х суток после облучения.

5. Облучение в дозах 4 и 12 Гр оказывает костимулирующее действие в сочетании с субмитогенными дозами Кон А или с ионофором А 2378. На фоне действия форболмиристатацетата проявляется ингибирование пролиферации клеток.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Шарый Н.И., Блохина М.Е. Сравнительная оценка активности интерлейкина-2, продуцируемого культурами интактных и гипотермиро-

ванных клеток селезенки мышей; Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума "Медиаторы иммунного ответа в эксперименте и клинике", Горький, 1983. -С. 180-181.

2. Шарый Н.И., Кузьмина Е.Г., Блохина М.Е., Игудин Л.И. Использование очищенной сыворотки крупного рогатого скота при бласттрансформации лимфоцитов; "Цитология", t.XXY №9, 1983. - С. 1097 - 1098.

3. Ярилин A.A., Кузьмина Е.Г., Шарый Н.И., Блохина М.Е. Продукция интерлейкина-2 лимфоцитами больных лимфогранулематозом и действие на нее модифицирующих агентов; Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Роль иммунной системы в патогенезе лимфопролиферативных заболеваний", Новосибирск, 1984. - С. 28 - 30.

4. Шарый Н.И., Блохина М.Е., Ковалева В.М. Длительное культивирование клеток человека в условиях гипотермии; Материалы 2 Всесоюзной конференции по проблемам теоретической и прикладной криобиологии, Харьков, 1984, т. 1, с. И 2.

5. Кузьмина Е.Г., Ярилин A.A., Шарый Н.И., Блохина М.Е., Байсоголов Т.Д. Нарушение синтеза интерлейкина-2 и ответа к нему у больных лимфогранулематозом; Материалы Всесоюзной конференции "Проблемы профилактики и лечения аутоиммунных и вторичных иммунодефицитных заболеваний", Новосибирск, 1985. - С. 46 - 48.

6. Шарый Н.И., Кузьмина Е.Г., Игудин Л.И., Блохина М.Е., Маркман Г.А. Оценка возможности использования сыворотки крупного рогатого скота, очищенного с помощью полиэтиленгликоля, в реакции бласттрансформации лимфоцитов; "Иммунология", №5, 1986. - С.22-24.

7. Ярилин A.A., Шарый Н.И., Блохина М.Е., Шичкин В.П. Анализ гуморальных и клеточных основ экстренного восстановления тимуса после облучения; Тезисы докладов IX Всесоюзной научной конференции "Восстановительные и компенсаторные процессы при лучевых поражениях". Ленинград, 1986. - С. 243 - 245.

8. Шарый Н.И., Блохина М.Е., Ярилин A.A., Кузьмина Е.Г. Зависимость продукции интерлейкина-2 от сроков облучения и митогенной активации лимфоцитов; "Радиобиология", t.XXYI, №3, 1986. - С. 334 - 337.

9. Кузьмина Е.Г., Ярилин A.A., Блохина М.Е., Шарый Н.И., Байсоголов Г.Д. Продукция интерлейкина-2 у больных лимфогранулематозом и возможности ее модификации; "Иммунология", 1986, N4, с. 47-51

10. Никонова М.Ф., Ярилин A.A., Блохина М.Е. Фенотипические и функциональные проявления дифференцировки тимоцитов под влиянием медиаторов иммунной системы; "Иммунология", №2, 1988. - С. 43-47.